Способ выявления -лактамазопродуцирующих оксидазопозитивных грамотрицательных диплококков, подозрительных на принадлежность к moraхella (branchamella) catarrhalis

Способ по изобретению раскрывает возможность выявления β-лактамазопродуцирующих оксидазопозитивных грамотрицательных диплококков, подозрительных на принадлежность к Moraxella (Branchamella) catarrhalis, и предусматривает посев клинического материала на кровяно-сывороточный агар секторами с одновременным накладыванием дисков с пенициллином 10 ЕД. Посев инкубируют в обычных условиях атмосферы 18-24 часа, а через 36-48 часов от момента посева осуществляют оценку наличия или отсутствия зоны задержки роста микроорганизмов, присутствующих в клиническом материале. При отсутствии зоны подавления роста микроорганизмов вокруг дисков выявляют наличие в клиническом материале β-лактамазопродуцирующих оксидазопозитивных грамотрицательных диплококков. Принадлежность выявленных диплококков к Moraxella (Branchamella) catarrhalis идентифицируют по биохимическим признакам. Реализация способа обеспечивает упрощение выделения искомых микроорганизмов из контаминированного клинического материала. 1 табл.

 

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано для бактериологической диагностики инфекций, вызванных Moraxella (Branchamella) catarrhalis.

Moraxella (Branchamella) catarrhalis впервые выделена от человека в 1896 г., до недавнего времени считалась нормальным обитателем слизистых верхних дыхательных путей, но за последние десятилетия накоплены убедительные данные об ее участии в развитии различных инфекций. М. catarrhalis вызывает гнойный отит в 10-15% случаев, играет важную роль в возникновении острых синуситов и занимает второе-третье место среди бактериальных возбудителей внебольничных пневмоний. Из числа этиологических агентов при хроническом бронхите М. catarrhalis уступает лишь Haemophilus influenzae и Streptococcus pneumoniae. У 54,6% всех больных с инфекцией, вызванной М. catarrhalis, диагностируется хроническая обструктивная болезнь легких [3]. До недавнего времени считалось, что М. catarrhalis обычно высокочувствительна к пенициллину [5]. В настоящее время до 95%, а по ряду авторов почти в 100% случаев, клинические изоляты М. catarrhalis продуцируют бета-лактамазу (тест с нитроцефином) [1, 2, 7]. Существуют определенные трудности в идентификации М. catarrhalis: 1) безпигментные "сапрофитные" нейссерии, нередко контаминирующие мокроту и в норме обитающие в носоглотке, имеют сходную морфологию с М. catarrhalis - растут в виде беспигментных круглых непрозрачных полусферических беловато-серых колоний диаметром до 2-3 мм; гемолиз не образуют, коррозию агара не вызывают, при бактериоскопии культур обнаруживаются грамотрицательные парные кокки, оксидазо- и каталазоположительные, так как относятся к одному семейству Neisseriaceae [3, 5, 6]; 2) при культуральном исследовании носоглотки или мокроты М. catarrhalis может быть не идентифицирована из-за подавления роста другими преобладающими микроорганизмами: Neisseria sp., Streptococcus viridans, Corynebacterium sp., Staphylococcus sp., Streptococcus sp. и др. в норме находящихся в носоглотке или контаминирующих мокроту. Лишь выделение оксидазопозитивных, бета- лактамазоположительных, грамотрицательных диплококков позволяет заподозрить их принадлежность к М. catarrhalis.

Поэтому важно совершенствование лабораторной диагностики воспалительных заболеваний дыхательной системы и ЛОР-органов, вызванных М. catarrhalis.

Ближайшим аналогом является определение чувствительности к пенициллину, описанное в Manual of clinical microbiology / editor in chief Patrick R. Murray. 7th ed. - ASM PRESS Washington, 1999, 1773 p. на странице 544. Согласно нему сплошным газоном засевают чистую культуру оксидазоположительного, индолнегативного, асахаралитического коккоподобной формы нефермента на поверхность кровяного агара с 5% бараньей кровью и затем незамедлительно накладывают диск с пенициллином 10 БД. и инкубируют при 35°С в обычных условиях атмосферы 18-24 часа. Любой штамм с зоной ингибиции роста вокруг диска с пенициллином интерпретируется как чувствительный для идентификационных целей.

Целью предлагаемого нами способа является облегчить выделение β-лактамазопродуцирующих оксидазопозитивных грамотрицательных диплококков подозрительных на принадлежность к Moraxella (Branchamella) catarrhalis из контаминированного клинического материала (естественно откашливаемая или индуцированная мокрота, транстрахеальный аспират) или из клинического материала в норме содержащего сапрофитные микроорганизмы (мазки из носа, зева, носоглотки).

Способ предусматривает следующее. На кровяно-сывороточный агар в чашках Петри диаметром 90 или 100 мм на 1/2 площадь чашки (первый сектор) сплошным газоном засевают клинический материал (мазки из носа, зева, носоглотки, естественно откашливаемая или индуцированная мокрота, транстрахеальный аспират), с последующим рассевом еще на два сектора для получения изолированных колоний микроорганизмов. Затем на поверхность первого сектора накладывают диск с пенициллином (10 ЕД.). Чашки инкубируют при 37°С в обычных условиях атмосферы 18-24 часа. Высокая концентрация пенициллина подавляет рост большинства других микроорганизмов, являющихся представителями нормальной микрофлоры дыхательных путей (нейссерий, стафилококков, стрептококков и др.), что позволяет получить вокруг диска с пенициллином (10 ЕД.) рост β-лактамазопродуцирующих оксидазопозитивных грамотрицательных диплококков подозрительных на принадлежность к M. catarrhalis из клинического материала. В дальнейшем производится биохимическая идентификация данной культуры.

Сущность способа:

1. На кровяно-сывороточный агар в чашках Петри диаметром 90 или 100 мм на 1/2 площадь чашки (первый сектор) сплошным газоном засеять клинический материал, с последующим рассевом еще на два сектора для получения изолированных колоний микроорганизмов.

2. Затем на поверхность первого сектора наложить диск с пенициллином (10 ЕД.).

3. Чашки инкубировать при 37°С в обычных условиях атмосферы 18-24 часа.

4. Оценить наличие или отсутствие зоны задержки роста микроорганизмов вокруг диска с пенициллином 10 ЕД.

Известны методики определения чувствительности к пенициллину у М. catarrhalis, которые используются при идентификации данного микроорганизма и для его дифференциации от других представителей рода Moraxella [6, 8]. Для данного теста необходима чистая суточная культура штамма, подозрительного на принадлежность к М. catarrhalis, то есть от момента посева клинического материала до получения результатов теста должно пройти 36-48 часов.

Общее с прототипом: 1) использование диска с пенициллином 10 ЕД.; 2) нанесение его сразу после посева; 3) инкубация посева в обычных условиях атмосферы 18-24 часа.

Отличительные признаки от прототипа: 1) наносится не чистая культура штамма микроорганизма, а непосредственно клинический материал; 2) посев производится на кровяно-сывороточный агар; 3) инкубация осуществляется при 37°С; 4) посев клинического материала делается секторами для получения также изолированных колоний микроорганизмов.

В предлагаемом нами способе заподозрить культуру на принадлежность к М. catarrhalis, продуцирующую β-лактамазу, можно уже в первые сутки после посева клинического материала. Следовательно, окончательная идентификация и выдача результата антибиотикочувствительности возможна на вторые сутки от момента посева клинического материала.

Авторы провели исследования на выявление β-лактамазопродуцирующих оксидазопозитивных грамотрицательных диплококков подозрительных на принадлежность к М. catarrhalis из клинического материала (зев, нос, мокрота) данным способом. За 2007 г. выделено 19 штаммов М. catarrhalis: 2 штамма из мокроты (у детей со следующей патологией: ХИВЗЛ, пневмония); 1 штамм выделен из зева (обострение хронического тонзиллита); 16 штаммов выделены из носа (хронический риносинусит, гайморит, этмоидит, мастоидит, субтрофический ринит). В результате: вокруг диска с пенициллином (10 ЕД.) нет зоны подавления роста у β-лактамазопродуцирующих оксидазопозитивных грамотрицательных диплококков, подозрительных на принадлежность к М. catarrhalis, которые в дальнейшем были по биохимическим признакам идентифицированы как М. catarrhalis. В отличие от идентифицированных как S. viridans, S. pneumoniae, Streptococcus pyogenes, Neisseria sp., Staphylococcus sp., которые образуют зону подавления роста вокруг диска с пенициллином (10 ЕД.), диаметром, в среднем равным 20 мм.

Так же авторами были протестированы музейные тест-штаммы, путем посева суточной культуры каждого в отдельности сплошным газоном на кровяно-сывороточный агар и наложением затем на поверхность агара диска с пенициллином (10 ЕД.). Чашки инкубировали при 37°С в обычных условиях 18-24 часа. Результаты представлены в таблице 1.

Таблица 1
Тестирование музейных тест-штаммов к пенициллину (диск 10 ЕД.)
Музейный тест-штамм Диаметр зоны подавления роста в миллиметрах
Streptococcus pneumoniae ATCC 49619 25
Staphylococcus aureus 25923, NCDC, США 30
Staphylococcus haemolyticus*, продуцирующий β-лактамазу 0
Streptococcus pyogenes* 30
Streptococcus agalactiae* 25
Neisseria meningitides* 25
Moraxella catarrhalis*, продуцирующая β-лактамазу 0
Moraxella catarrhalis*, не продуцирующая β-лактамазу 25
Corynebacterium diphtheriae mitis toxigenes 090086 33
Corynebacterium diphtheriae gravis 665 36
Corynebacterium ulcerans* 35
* - из рабочего музея - культуры, выделенные из клинического материала и используемые для контроля бактериологических питательных сред, с типичными свойствами, соответствующие микроорганизмам признанных национальных и международных коллекций [4].

Список цитируемой литературы:

1. Авдеев С.Н., Чучалин А.Г. Роль бактериальной инфекции и выбор антибиотиков при обострении хронического бронхита / С.Н.Авдеев, А.Г.Чучалин // Consilium Medicum. - 2000. - Т.2, №10. - С.5-9.

2. Зубков М.Н. Современные аспекты этиологической диагностики и антимикробной терапии внебольничных пневмоний / М.Н.Зубков // Фарматека. - 2005. - №19. - С.31-37.

3. Зубков М.Н. Moraxella (Branchamella) catarrhalis: роль в патологии человека, идентификация и антибиотикорезистентность / М.Н.Зубков // Инфекция и антимикробная терапия. - 2001. - Т.3, №4. - С.115-116.

4. МУК 4.2.2316-08 «Методы контроля бактериологических питательных сред».

5. Определитель бактерий Берджи. В 2-х т. Т.1: Пер. с англ. Под ред. Дж.Хоулта, Н.Крига, П.Снита, Дж. Стейли, С.Уильямса. - М.: Мир, 1997. - 432 с.

6. Определитель нетривиальных патогенных грамотрицательных бактерий (аэробных и факультативно анаэробных). Пер. с англ. Р.Вейант, У.Мосс, Р.Уивер, Д.Холлис, Дж.Джордан, Э.Кук, М.Дейншвар. - М.: Мир, 1999. - 791 с.

7. Страчунский Л.С., Каманин Е.И. Антибактериальная терапия инфекций в оториноларингологии / Л.С.Страчунский, Е.И.Каманин // Русский Медицинский Журнал. - 1998. - Т.6, №17. - С.684-693.

8. Manual of clinical microbiology / editor in chief Patrick R. Murray. 7th ed. - ASM PRESS Washington, 1999, 1773 p.

Способ выявления β-лактамазопродуцирующих оксидазопозитивных грамотрицательных диплококков, подозрительных на принадлежность к Moraxella (Branchamella) catarrhalis, отличающийся тем, что клинический материал высевают на кровяно-сывороточный агар секторами для получения изолированных колоний и одновременно накладывают на посев диски с пенициллином 10 ЕД., посев инкубируют в течение 18-24 часов при температуре 37°С в обычных условиях атмосферы, через 36-48 часов от момента посева оценивают наличие или отсутствие зоны задержки роста микроорганизмов, присутствующих в клиническом материале, и при отсутствии зоны подавления роста вокруг дисков выявляют наличие в клиническом материале β-лактамазопродуцирующих оксидазопозитивных грамотрицательных диплококков, а принадлежность выявленных диплококков к Moraxella (Branchamella) catarrhalis идентифицируют по биохимическим признакам.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к микробиологии, в частности к питательным средам, и может быть использовано в научно-исследовательской и практической работе для бактериологической диагностики бактерий.

Изобретение относится к устройству и способам для мониторинга микробиологической активности в технологическом потоке воды. .

Изобретение относится к способу обнаружения и подсчета жизнеспособных микроорганизмов вида Legionella pneumophila в образце. .
Изобретение относится к микробиологии и биотехнологии. .
Изобретение относится к области медицины, а именно к микробиологии, и предназначено для повышения эффективности микробиологической диагностики стафилококковых инфекций.

Изобретение относится к медицине, а именно к области фтизиатрии и бактериологии, и может быть использовано для определения лекарственной чувствительности микобактерий туберкулеза.
Изобретение относится к области медицины. .
Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано для диагностики кандидоза верхних дыхательных путей у работников агропромышленного комплекса

Изобретение относится к медицинской микробиологии, в частности к методам контроля биологических свойств штаммов пробиотических бактерий, используемых при производстве пробиотиков, и может быть использовано для оценки биологической активности лактобацилл и бифидобактерий по отношению к Vibrio cholerae с целью установления возможности применения пробиотиков для профилактики и лечения холеры

Изобретение относится к микробиологии и предназначено для обнаружения микобактерий туберкулеза в воздушной среде помещений лечебно-профилактических учреждений
Изобретение относится к медицине, а точнее к медицинской микробиологии, и может быть использовано для определения минимальной подавляющей концентрации антибактериального препарата, подавляющего рост исследуемого микроорганизма-возбудителя воспалительных заболеваний микробной этиологии и формируемых им микробных ассоциаций

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к способу определения рода возбудителей бактериемий. Изобретение может быть использовано в бактериологических лабораториях клиник для идентификации рода возбудителей бактериемии. Способ включает инкубацию пробы крови в питательной среде с последующим выявлением роста микроорганизмов в первичной гемокультуре. Проводят пробоподготовку исследуемого образца центрифугированием. Осуществляют количественный хромато-масс-спектрометрический анализ исследуемой пробы с определением маркерных молекул, в качестве которых используют молекулы свободных и замещенных высших жирных кислот из клеточных липидов микроорганизмов. Идентифицируют свободные и замещенные высшие жирные кислоты путем сравнения полученных данных с базой данных NIST хромато-масс-спектрометра. Определяют род возбудителей бактериемий с помощью таблицы. Предложенное изобретение позволяет обеспечить раннюю диагностику бактериемии. 5 ил., 1 табл., 5 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к гинекологии, и может быть использовано для индивидуального подбора препаратов, содержащих пробиотические штаммы лактобактерий, для эффективной интравагинальной терапии. Для этого от пациентки выделяют вагинальные эпителиоциты, освобождают их от сопутствующей микрофлоры. Затем готовят взвесь эпителиоцитов в среде культивирования и смешивают со взвесью отмытых термоинактивированных пробиотических штаммов лактобактерий. Далее инкубируют, получают фильтрат культуральной жидкости эпителиоцитов и добавляют его в соотношении 1:7 к взвеси тестируемых пробиотических штаммов лактобактерий. Параллельно готовят контроль из смеси среды культивирования эпителиоцитов и взвеси тестируемых пробиотических штаммов в соотношении 1:7. Опытную и контрольную пробы инкубируют, измеряют оптическую плотность, рассчитывают степень прироста биомассы в опытной пробе по отношению к контрольной. При этом для эффективной интравагинальной терапии выбирают препарат, содержащий пробиотические штаммы лактобактерий, прирост биомассы которых, под влиянием вагинальных эпителиоцитов пациентки, стимулируется наиболее выраженно. Изобретение позволяет осуществлять индивидуальный подбор препаратов, содержащих пробиотические штаммы лактобактерий для эффективной интравагинальной терапии. 1 табл., 3 пр., 2 фиг.
Изобретение относится к фармацевтической промышленности и представляет собой способ повышения биоцидного и лечебного действия крема-суспензии с линкоспектином, заключающийся в детоксикации и полимеризации 100 г линкоспектина в 300 мл воды 0,15±0,05% раствором глутарового альдегида с 0,15±0,05% алкилдиметилбензиламмония хлорида при 38-40°C в течение 2-3 суток. Изобретение обеспечивает устойчивость линкоспектина к ферментативному расщеплению микробной клетки, снижение токсичности, ускорение регенерации тканей и проявление биоцидного действия в отношении патогенных бактерий, вирусов и плесневых грибов в течение 3-х лет при хранении от 0°C до 25°C, 5 пр.

Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано для бактериологической диагностики инфекций, вызванных Moraxella catarrhalis

Наверх