Способ прогнозирования раннего рецидива у больных гемобластозами после аутологичной трансплантации стволовых кроветворных клеток

Авторы патента:

G01N33/533 - с флуоресцентными метками

Владельцы патента RU 2498312:

Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научно-исследовательский институт клинической иммунологии" Сибирского отделения Российской академии медицинских наук (ФГБУ "НИИКИ" СО РАМН) (RU)

Изобретение относится к медицине, а именно к онкогематологии, и может быть использовано у больных гемобластозами для прогноза развития рецидива заболевания после проведения аутологичной трансплантации стволовых кроветворных клеток (АТСКК). Для этого определяют относительное содержание CD4⁺FOXP3⁺Т-клеток в периферической крови больных гемобластозами после проведения АТСКК в период восстановления лимфоцитов до уровня >500 клеток/мкл. При увеличении количества CD4⁺FOXP3⁺T-клеток более 9,1% прогнозируют развитие раннего рецидива в посттрансплантационном периоде. Использование данного способа позволяет выделить больных гемобластозами в группу высокого риска развития раннего рецидива основного заболевания после АТСКК и при необходимости проводить дополнительные курсы лучевой и/или химиотерапии с целью повышения эффективности АТСКК. 4 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к онкогематологии, и может быть использовано для прогноза развития раннего рецидива у больных гемобластозами после проведения аутологичной трансплантации стволовых кроветворных клеток.

Каждый год в мире делается более 30000 аутологичных трансплантаций стволовых кроветворных клеток (АТСКК), из них до 84% - при онкогематологических заболеваниях [1, 2]. АТСКК, являясь наиболее радикальным способом лечения гемобластозов, тем не менее, не всегда приводит к излечению, и уже в течение первого года после АТСКК в 22-40% случаев возникает, так называемый, «ранний» рецидив заболевания [3, 4]. В связи с этим продолжается поиск и разработка эффективных методов прогноза течения заболевания и эффективности АТСКК.

С целью прогнозирования агрессивности течения, эффективности терапии больных лимфомами отдельными авторами предлагается использовать определение различных морфологических или иммунологических параметров, или цитогенетических нарушений в малигнизированных клетках. Общим недостатком этих методов является низкая прогностическая ценность, что во многом обусловлено проводимой высокодозной полихимиотерапией (ПХТ), которая может определенным образом искажать исследуемые цитогенетические или иммунологические параметры в каждом конкретном случае.

Для прогноза развития рецидивов и характера течения агрессивных неходжкинских лимфом (НХЛ) предложено использовать Международный прогностический индекс (International Prognostic Index, IPI), который является суммой независимых друг от друга факторов: возраст больного, стадия болезни, число экстранодальных локализаций, общее состояние больного по ВОЗ, сывороточный уровень ЛДГ, размер опухоли. При этом показано, что при значениях IPI=0-1 (низкий риск) 5-летняя выживаемость составляет 73%, тогда как при IPI=4-5 (высокий риск) - 26% [5, 6].

С целью прогноза рецидивирования лимфом низкой степени злокачественности предлагается использовать иную комбинацию факторов (Follicular Lymphoma International Prognostic Index, FLIPI): возраст пациента, стадия заболевания, число нодальных областей поражения, сывороточный уровень ЛДГ, уровень гемоглобина [7].

Предложенные подходы имеют следующие недостатки: с одной стороны, заявленные способы хорошо работают только у пациентов с III-IV стадиями заболевания, и менее эффективны в отношении раннего прогноза на начальных стадиях болезни. С другой стороны, эффективность прогноза с использованием предложенных индексов во многом зависит от характера проводимого лечения. Высокодозная ПХТ, в том числе в комбинации с АТСКК, оказывает влияние на обще-клинические и лабораторные характеристики опухоли, что неизбежно приводит к снижению точности прогноза. Как следствие, предложенные подходы характеризуются недостаточно высокой чувствительностью и специфичностью. Таким образом, данные подходы не могут быть использованы для прогноза развития раннего рецидива у больных злокачественными лимфомами после АТСКК в связи со значительным изменением течения болезни после высокодозной ПХТ.

Наиболее близким к заявленному изобретению является способ прогноза развития раннего рецидива основного заболевания у больных гемобластозами после АТСКК, описанный в патенте №2337712 РФ [8]. Способ основан на оценке комплекса показателей иммунного статуса у больных гемобластозами в период предшествующий АТСКК, по следующим показателям: иммунологический регуляторный индекс (ИРИ, CD4/CD8), относительное количество CD4⁺- и CD8⁺T-клеток в S, G₂/M фазах клеточного цикла, относительное количество CD4⁺- и CD8⁺T-клеток в стадии апоптоза, относительное количество CD4⁺- и CD8⁺T-клеток памяти, абсолютное количество CD16⁺NK-клеток, реакция ГЗТ, уровень экспрессии HLA-DR молекул на моноцитах и содержание IgM в сыворотке крови.

Прогноз строится с помощью последовательной процедуры Вальда с учетом диагностической информативности (значений диагностических коэффициентов, ДК) анализируемых показателей. При суммарной величине положительных ДК>=+13,0 прогнозируют развитие раннего рецидива, а при суммарной величине отрицательных ДК<=-17,0 - прогнозируют благоприятный исход АТСКК.

Предложенный авторами способ-прототип имеет ряд существенных недостатков. Во-первых, у очень большого числа больных (в 47,5% случаев) прогноз оказывается неопределенным, поскольку суммарная величина как положительных, так и отрицательных диагностических коэффициентов не достигает заданных пороговых значений (ДКпор=+13 или ДКпор=-17). Во-вторых, для осуществления метода требуется проведение анализа достаточно большого количества показателей иммунного статуса (относительного содержания 6 субпопуляций клеток, концентрации IgM в сыворотке крови, реакции ГЗТ), что усложняет и удорожает методику. В-третьих, поскольку обследование больных и, соответственно, прогноз развития рецидива проводятся до процедуры трансплантации, то различные варианты проводимой высокодозной ПХТ могут существенным образом влиять на характер изменений иммунологических параметров, что неизбежно приводит к снижению точности прогноза.

Задачей изобретения является повышение эффективности и упрощение способа прогнозирования развития раннего рецидива у больных гемобластозами после АТСКК.

Технический результат состоит в разработке технически менее сложного и более экономичного способа, позволяющего прогнозировать ранний рецидив после АТСКК с высокой чувствительностью и специфичностью, при этом получать прогностическое заключение у всех обследованных больных.

Поставленная задача решается за счет того, что в качестве прогностического маркера исследуется относительное содержание CD4⁺FOXP3⁺ Т-клеток, которые оцениваются в периферической крови больных гемобластозами в период восстановления лимфоцитов до уровня >500 после АТСКК, и при содержании CD4⁺FOXP3⁺ Т-клеток более 9,1% прогнозируют развитие раннего рецидива в посттрансплантационном периоде.

Способ осуществляют следующим образом:

После проведения процедуры АТСКК у больного в период восстановления лимфоцитов до уровня >500 клеток/мкл забирают 10 мл венозной крови в пробирки BD VACUTAINER® с Li-гепарином. Мононуклеарные клетки (МНК) выделяют из периферической крови путем центрифугирования в градиенте плотности фиколла-верографина (p=1,078) в течение 20 мин при 3000 об/мин с последующей двукратной отмывкой в физиологическом растворе и среде RPMI-1640 (Sigma, США), дополненной 0,3 мг/мл L-глутамина, 5 мМ HEPES-буфера, 100 мкг/мл гентамицина. Приготовление проб для определения относительного содержания CD4⁺FOXP3⁺ клеток проводят в соответствии с методикой Becton Dickinson. Для этого, МНК (50 мкл, 0,5×10⁶ клеток/пробу) ресуспендируют в растворе «А» (5% желатиноля, 0,1% азида натрия, 0,02% ЭДТА, 10% сыворотки доноров АВ (IV) группы в фосфат-забуференном физиологическом растворе - ЗФР). К суспензии клеток добавляют по 5 мкл анти-CD4 моноклональных антител, меченных FITC («Сорбент», Россия) и инкубируют 30 мин при 4°C. Затем клетки однократно отмывают в растворе «А», после чего последовательно инкубируют по 15 мин при комнатной температуре в темноте в 1 мл 1% раствора парафармальдегида (Sigma-Aldrich, Germany) (для фиксации) и в 1 мл 0,2% раствора Tween-20 (Ferak, Germany) (для пермеабилизации). После очередной отмывки к суспензии клеток добавляют 10 мкл анти-FOXP3 моноклональных антител (Becton Dickinson, США), инкубируют 30 мин при 4°C, после чего отмывают от антител, ресуспендируют в 50 мкл раствора «А» и заливают 0,5 мл лизирующего раствора (FACSLyse, Becton Dickinson, США). Подготовленные таким образом пробы исследуют на проточном цитометре FACSCalibur (Becton Dickinson, США) с использованием программы CellQuest (Becton Dickinson, США). Цитометрию проводят с использованием параметров прямого и бокового светорассеяния для определения лимфоцитарного гейта, из которого строят график каналов флюоресценции FL-1 (FITC) против FL-2 (РЕ). Определяют относительное содержание CD4⁺FOXP3⁺ Т-клеток.

Заявляемый способ разработан на основании обследования 50 больных, включая 31 мужчину и 19 женщин в возрасте от 18 до 55 лет (медиана 35,5 лет), которым в период с августа 2009 по сентябрь 2011 г проводилась АТСКК на базе отделения гематологии клиники иммунопатологии НИИ клинической иммунологии СО РАМН. Неходжкинская лимфома (НХЛ) диагностировалась у 17, лимфома Ходжкина (ЛХ) - у 20 - и множественная миелома (MM) - у 13 больных. Мобилизацию периферических СКК проводили с использованием различных режимов химиотерапии (XT) с последующим введением гранулоцитарного колоние-стимулирующего фактора (Г-КСФ, 5-10 мкг/кг/день). 27 пациентов получали высокодозную XT циклофосфамидом (4 г/м²), 19 - другие режимы XT (6 - DexaBEAM, 5 - ICE, 4 - ESHAP, 2 - DHAP, по 1 - CAV, DCEP). Все пациенты с лимфомами (n=37) получали режим кондиционирования BEAM, 13 больных MM - высокодозный мелфалан. Процедуру афереза проводили на сепараторах клеток крови AS TEC 204 (Fresenius) и Spectra LRS 07 (COBE) после достижения в периферической крови концентрации СКК 1×10⁴ CD34⁺ клеток/мл и продолжали до получения ≥2,0×10⁶ CD34⁺ клеток/кг.

Относительное количество в периферической крови CD4⁺FOXP3⁺T-клеток оценивали после АТСКК на момент выхода больного из лейкопении в период восстановления лимфоцитов до уровня >500 клеток/мкл.

Анализ данных катамнеза 37 пациентов, находящихся под наблюдением более 12 мес, показал, что рецидив заболевания в течение первого года после АТСКК наблюдался у 11 из 37 пациентов (4 - с ММ, 2-е НХЛ, 5 - с ЛХ). Среди них рецидивы в первые 6 мес произошли у 8 пациентов (2-е ММ, 1-е НХЛ, 5 - ЛХ). Сравнение количества CD4⁺FOXP3⁺T-клеток на момент выхода из лимфопении у больных с оппозитными исходами выявил, что пациенты с рецидивом/прогрессией заболевания в течение первых 6 мес (n=8) отличались более высоким относительным содержанием CD4⁺FOXP3⁺ клеток (11,7±1,9 против 7,0%, p_U=0,7%; p_U=0,039) по сравнению с пациентами (n=29), сохранившими полную и частичную ремиссию. Схожие различие обнаруживались при сравнении больных (n=11), у которых рецидив развился в течение 12 мес после АТСКК. В этом случае, относительное количество CD4⁺РОХР3⁺Т-клеток на момент выхода из лимфопении было достоверно выше, чем у больных с благоприятным исходом АТСКК (10,7±1,5% против 6,9±0,7%, p_U=0,024).

Для определения диагностической значимости CD4⁺FOXP3⁺ Т-клеток, которые оцениваются в периферической крови больных гемобластозами после АТСКК в период восстановления лимфоцитов до уровня >500 клеток/мкл, в прогнозе развития раннего (через 6 и 12 мес) рецидива был проведен ROC-анализ. Построение характеристических кривых (receiver-operator curve, ROC) выявило высокую информативность данного прогностического маркера. Так, площадь под кривой (AUC) теста оценки относительного содержания CD4⁺FOXP3⁺ Т-клеток в прогнозе 6- и 12-мес рецидива составила соответственно 0,80 (p=0,0087) и 0,75 (p=0,018). Относительное содержание CD4⁺FOXP3⁺Т-клеток более 9,1% позволяло прогнозировать развитие рецидива через 6 мес после АТСКК со специфичностью 77,4% и чувствительностью 87,5%; и на период 12 мес после АТСКК - со специфичностью 77,8% и чувствительностью 72,7%.

Для лучшего понимания сущности заявленного изобретения, а также для подтверждения соответствия решения условию промышленной применимости, приводим примеры конкретной реализации.

Пример №1. Больной К., 47 лет, поступил в 2010 г. в клинику иммунопатологии ИКИ СО РАМН с диагнозом: множественная миелома, II ст., первая полная ремиссия после 5 курсов химиотерапии. Пациент был госпитализирован для проведения курса высокодозной ПХТ с аутотрансплантацией СКК. Процедура АТСКК была выполнена в августе 2010 г. Лейкопения с дня +4, продолжительность 10 дней, восстановление лимфоцитов (более 500 кл/мкл) на день +15. Была проведена оценка относительного количества CD4⁺FOXP3⁺ клеток в периферической крови. Содержание CD4⁺FOXP3⁺ клеток составило 12%, превысив установленный пороговый уровень (9,1%). Таким образом, был определен прогноз высокого риска развития рецидива заболевания после проведенной АТСКК. По данным катамнеза в апреле 2011 г. (через 8 мес после АТСКК) у него был диагностирован рецидив основного заболевания.

Пример №2. Больной Ч., 27 лет, поступил в 2010 г. в клинику иммунопатологии ИКИ СО РАМН с диагнозом: лимфома Ходжкина, популярный склероз, II ст., вторая частичная ремиссия после 7 курсов химиотерапии I линии, 5 курсов химиотерапии II линии. Пациент был госпитализирован для проведения курса высокодозной ПХТ с аутотрансплантацией СКК. Процедура АТСКК была выполнена в августе 2010 г. Лейкопения с дня +3, продолжительность 10 дней, восстановление лимфоцитов (более 500 кл/мкл) на день +13. Была проведена оценка относительного количества CD4⁺FOXP3⁺ клеток в периферической крови. Содержание CD4⁺FOXP3⁺ клеток составило 10,33%, превысив установленный пороговый уровень (9,1%). Таким образом, был определен прогноз высокого риска развития рецидива заболевания после проведенной АТСКК. По данным катамнеза в декабре 2010 г. (через 4 мес после АТСКК) у него был диагностирован рецидив основного заболевания.

Пример №3. Больная 3., 51 год, поступила в 2010 г. в клинику иммунопатологии ИКИ СО РАМН с диагнозом: множественная миелома, II ст., первая полная ремиссия после 3 курсов химиотерапии. Пациентка была госпитализирована для проведения курса высокодозной ПХТ с аутотрансплантацией СКК. Процедура АТСКК была выполнена в августе 2010 г. Лейкопения с дня +3, продолжительность 14 дней, восстановление лимфоцитов (более 500 кл/мкл) на день +18. Была проведена оценка относительного количества CD4⁺FOXP3⁺ клеток в периферической крови. Содержание CD4⁺FOXP3⁺ клеток составило 3,13%, что было ниже установленного порогового уровня (9,1%). Таким образом, прогнозировался маловероятный риск развития рецидива. По данным катамнеза в динамике последующего клинического наблюдения в течение 1,5 лет после АТСКК у пациентки сохраняется полная ремиссия основного заболевания.

Пример №4. Больной Зл., 29 лет, поступил в 2010 г. в клинику иммунопатологии ИКИ СО РАМН с диагнозом: лимфома Ходжкина, смешанно-клеточный вариант, III ст., вторая частичная ремиссия после 18 курсов химиотерапии I линии, 5 курсов химиотерапии II линии. Пациент был госпитализирован для проведения курса высокодозной ПХТ с аутотрансплантацией СКК. Процедура АТСКК была выполнена в декабре 2010 г. Лейкопения с дня +2, продолжительность 8 дней, восстановление лимфоцитов (более 500 кл/мкл) на день +10. Была проведена оценка относительного количества CD4⁺FOXP3⁺ клеток в периферической крови. Содержание CD4⁺FOXP3⁺ клеток составило 1%, что было ниже установленного порогового уровня (9,1%). Таким образом, прогнозировался маловероятный риск развития рецидива. По данным катамнеза в динамике последующего клинического наблюдения в течение 1,3 лет после АТСКК у пациента сохраняется частичная ремиссия основного заболевания.

Таким образом, от способа-прототипа предлагаемый метод отличает:

- Техническое упрощение и экономичность прогноза, за счет сокращения количества анализируемых параметров

- Возможность применения после АТСКК в период выхода из лейкопении и восстановления лимфоцитов до уровня >500 клеток/мкл и, соответственно, отсутствие зависимости от предшествующей и/или проводимой полихимиотерапии

- Более высокая чувствительность и специфичность прогноза рецидива заболевания в течение 6-12 мес после АТСКК

- Возможность получить прогностическое заключение у всех обследованных больных

Поскольку способ позволяет повысить эффективность прогноза характера течения посттрансплантационного периода, данный подход может быть использован для выделения больных гемобластозами в группу высокого риска развития раннего рецидива основного заболевания после АТСКК. Такие больные нуждаются в более тщательном наблюдении, и проведении при необходимости дополнительных курсов лучевой и/или химиотерапии с целью повышения эффективности аутологичной трансплантации стволовых кроветворных клеток.

Литература

1. Pasquini MC, Wang Z. Current use and outcome of hematopoietic stem cell transplantation: CIBMTR summary slides, 2010. http://www.cibmtr.orp

2. Baldomero H. Global overview on HSCT 2006/07/08. WBMT, Hanoi 2011. http://www.wbmt.org

3. Cortelazzo S., Rossi A., Bellavita P., et al. Clinical outcome after autologous transplantation in non-Hodgkin,s lymphoma patients with high international prognostic index (IPI) // Annals of Oncology. - 1999. - Vol.10. - P.427-432.

4. Crump M. Management of Hodgkin Lymphoma in Relapse after Autologous Stem Cell Transplant. Hematology Am Soc Hematol Educ Program. - 2008. - P.326-333.

5. Shipp M.A., Harrington D.P., Andersen J. et al. International Non-Hodgkin's lymphoma prognostic factors project. A predictive model for aggressive non-Hodgkin's lymphoma // N. Engl. J. Mod. - 1993. - №329. - P.987-94.

6. Поддубная И.В. Клиническая онкогематология // Под ред. М.А. Волковой. - M.: «Медицина», 2001 г., с.345.

7. Solay-Celigny P., Roy P., Colombat P. et al. Follicular lymphoma international prognostic index // Blood. - 2004. - Vol.104. - №5. - P.1258-1265.

8. Пат. РФ 2337712. Способ прогноза развития раннего рецидива основного заболевания после аутологичной трансплантации периферических стволовых кроветворных клеток у больных гемобластозами / Пронкина Н.В., Кожевников B.C., Лисуков И.А. и др. - №2007114233/14; заявл. 16.04.2007; опубл. 10.11.2008, Бюл. №31

Способ прогноза раннего рецидива у больных гемобластозами после аутологичной трансплантации стволовых кроветворных клеток, включающий оценку показателей крови, отличающийся тем, что обследование больных проводят после процедуры трансплантации в период восстановления лимфоцитов до уровня >500 клеток/мкл, при этом определяют относительное количество циркулирующих CD4⁺FOXP3⁺Т-клеток, и при содержании CD4⁺FOXP3⁺Т-клеток более 9,1% прогнозируют развитие раннего рецидива в посттрансплантационном периоде.

Изобретение относится к медицине, а именно к детской гастроэнтерологии, и может быть использовано для прогноза эффективности интерферонотерапии гепатита С. .

Способ оценки эффективности антибактериальной терапии chlamydophila pneumoniae и mycoplasma pneumoniae у детей раннего возраста, больных острыми респираторными заболеваниями с бронхообструктивным синдромом // 2486525

Изобретение относится к медицине, в частности к педиатрии, иммунологии, и может быть использовано для оценки эффективности антибактериальной терапии С. .

Способ определения летального фактора сибирской язвы на основе иммунодетекции, сопряженной с полимеразной цепной реакцией // 2486524

Изобретение относится к биотехнологии, конкретно - к областям диагностической медицинской микробиологии, медицинской биохимии, прикладной иммунохимии и разработки диагностических тест-систем, касается разработки нового способа для высокочувствительного определения белка летального фактора сибирской язвы (LF) в инфицированных образцах биологического происхождения и окружающей среде.

Способ диагностики гнойно-септических заболеваний у новорожденных детей // 2484479

Изобретение относится к области медицины, а именно к педиатрии, и может быть использовано для диагностики гнойно-септических заболеваний у новорожденных детей. .

Способ прогнозирования замедленной консолидации костной ткани при внеочаговом остеосинтезе // 2480767

Изобретение относится к медицине, а именно к травматологии и ортопедии, и может быть использовано для прогнозирования замедленной консолидации костной ткани при внеочаговом остеосинтезе.

Способ иммунофлуоресцентного определения протективного антигена возбудителя сибирской язвы // 2478970

Изобретение относится к иммунологии и биотехнологии, конкретно к областям диагностической медицинской микробиологии, прикладной иммунохимии и разработки диагностических тест-систем для иммунофлуоресцентного определения протективного антигена (ПА) возбудителя сибирской язвы в образцах биологического происхождения.

Активирующий люминесценцию белка гидридный комплекс // 2475493

Изобретение относится к области биосенсорики и может быть использовано для изучения белков методом люминесценции. .

Анализ иммунодетекции комплекса mycobacterium tuberculosis // 2473095

Способ прогнозирования течения аденовирусного кератоконъюнктивита // 2470591

Изобретение относится к области медицины, а именно к офтальмологии. .

Способ определения специфического клеточного иммунного ответа к антигенам вируса кори и краснухи // 2464571

Изобретение относится к медицинской иммунологии, а именно к способам определения специфического клеточного иммунного ответа. .

Способ прогнозирования туберкулеза легких с множественной лекарственной устойчивостью // 2504787

Изобретение относится к области медицины, а именно к фтизиатрии, и может быть использовано для прогнозирования туберкулеза легких с множественной лекарственной устойчивостью у впервые выявленных больных туберкулезом легких (ТБ). Для этого до назначения противотуберкулезной химиотерапии в крови пациента определяют количество CD45R0+ Т-клеток памяти, CD3+CD4+CD25+hi и CD4+CD25+Foxp3- регуляторных Т-клеток, CD3+CD4+CD25- Т-хелперов. Вычисляют значения линейных классификационных функций по уравнениям: d1=-14,0015-0,0626×x1+0,5181×x2+2,4285×x3+0,2255×x4 и d2=-22,6954-0,1710×x1+0,6689×x2+3,1202×x3+0,3229×x4, где x1, x2, x3, x4 - количество субпопуляций CD45R0+ Т-клеток памяти, CD3+CD4+CD25+hi и CD4+CD25+Foxp3- регуляторных Т-клеток, CD3+CD4+CD25- Т-хелперов, соответственно. При d1<d2 прогнозируют туберкулез с множественной лекарственной устойчивостью возбудителя. Использование данного способа позволяет прогнозировать вариант течения ТБ с вероятностью 83,3% и позволяет применять меры коррекции лечебного воздействия. 5 ил., 2 табл., 2 пр.

Способ определения протеолитической модификации клеточных рецепторов на модели выделенных лимфоцитов периферической крови // 2510026

Изобретение относится к области медицины, а именно к биохимии, и может быть использовано для определения протеолитической модификации клеточных рецепторов на модели выделенных лимфоцитов периферической крови. Для этого проводят инкубацию выделенных лимфоцитов в присутствии фермента в инкубационной среде с последующей отмывкой клеток от фермента. Окрашивают моноклональными антителами, содержащими флуоресцентную метку, к соответствующим поверхностным детерминантам клеточных рецепторов и сравнивают с контролем, где клетки инкубируются в среде без содержания ферментов или в присутствии ингибиторов протеолитических ферментов. Экспрессию рецепторов на лимфоцитах определяют методом проточной цитометрии. Использование данного способа позволяет определять чувствительные к протеолизу рецепторы и количественно оценить активность ферментов и их ингибиторов. 3 пр., 1 табл.

Способ количественного определения фиксированного вируса бешенства штамма "москва 3253" // 2511440

Изобретение относится к области биотехнологии и касается способа количественного определения фиксированного вируса бешенства штамма «Москва 3253». Способ предусматривает обеззараживание и выделение РНК из вируссодержащего материала, постановку реакции обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции с гибридизационно-флуоресцентным учетом результатов в режиме «реального времени» с использованием специфичных праймеров RV5-5'-GTTGGGCACTGAAACTGCTA-3', RV6-5'-GAATCTCCGGGTTCAAGAGT-3' и зонда RV7-5'-ROX-AATCCTCCTTGAACTCCATGCGACAGA-BHQ2. Количественную оценку вируса определяют на основании регистрации сигнала флуоресценции исследуемого образца и сравнения его с сигналом флуоресценции ПЦР-стандартов, содержащих различные количества ДНК-мишеней. Предложенный способ позволяет определить количественное содержание вируса в рабическом антигене органо-тканевого и культурального происхождения. Использование изобретения способствует стандартизации этапа приготовления рабического антигена в производстве гетерологичного антирабического иммуноглобулина. 2 табл., 3 ил., 2 пр.

Способ количественного определения клеток-предшественников (cd34+) в кроветворной ткани // 2513511

Изобретение относится к области медицины, а именно к иммунологии, и может быть использовано для количественного определения клеток-предшественников в кроветворной ткани. Для этого проводят окраску клеточного субстрата одновременно моноклональными антителами к антигену CD34 и нуклеотропным (ядерным) красителем Syto16, при этом подсчет клеток-предшественников (CD34+) осуществляют в пределах Syto16+ клеток. Использование данного способа позволяет количественно учесть всю популяцию CD34+CD45 клеток в пределах ядросодержащих Syto16+ без предварительного ограничения области анализа на основании экспрессии антигена CD45 и избежать занижения процента CD34+ клеток-предшественников. 1 пр., 2 ил.

Способ дифференциальной диагностики доброкачественных и злокачественных беспигментных новообразований кожи // 2518350

Изобретение относится к медицине. При осуществлении способа через 3 ч после перорального введения препарата «Аласенс» в дозе 15 мг/кг массы тела получают трехканальное RGB флуоресцентное изображение зоны интереса. Оценивают долю участия красного канала в изображении опухоли. Оценивают значение Rcut=(R/(R+G+B))·100%, где Rcut - доля участия красного канала в изображении здоровой кожи, R, G и В - яркости красного, зеленого и синего каналов изображения здоровой кожи. Из полученного трехканального RGB флуоресцентного изображения формируют изображение в оттенках серого I(x,y). Для каждой точки изображения I(x,y) вычисляют отношение , где R(x,y), G(x,y), В(x,y) - яркости красного, зеленого и синего каналов RGB флуоресцентного изображения с координатами x, y. Выполняют действие I(x,y)=0 для точек, в которых значение меньше 10%. При отображении опухоли на полученном результирующем изображении I(x,y) диагностируется злокачественная опухоль, а при исчезновении опухоли - доброкачественная. Способ позволяет повысить информационную способность за счет более точного отображения границ недоброкачественной опухоли. 1 прим.

Способ прогнозирования развития инфекционного синдрома у больных острым лейкозом // 2521372

Изобретение относится к медицине, а именно к гематологии и иммунологии, и может быть использовано для прогнозирования развития инфекционного синдрома у больных острым лейкозом. Для этого проводят определение содержания CD16+ нейтрофилов в костном мозге больного. При содержании CD16+ нейтрофилов в костном мозге менее 50% прогнозируют развитие инфекционного синдрома с клиническими проявлениями. Использования данного способа позволяет прогнозировать развитие инфекционного синдрома при манифестации острого лейкоза до проведения химиотерапии. 2 пр.

Способ прогнозирования эффективности противовирусной терапии у взрослых больных хроническим гепатитом с с генотипом 1b // 2522500

Изобретение относится к области медицины, а именно к гепатологии, и может использоваться для прогнозирования эффективности противовирусной терапии у взрослых больных хроническим гепатитом C с генотипом 1b. Для этого определяют относительные количества содержания субпопуляций лимфоцитов крови и рассчитывают прогностический показатель, при этом подсчет процента субпопуляций лимфоцитов осуществляют методом проточной цитофлуориметрии. При значении показателя ПП<350 прогнозируют достижение быстрого вирусологического ответа на противовирусную терапию ХГС, при значении показателя ПП>350 прогнозируют отсутствие быстрого вирусологического ответа на противовирусную терапию хронического гепатита C с генотипом вируса 1b. Использование данного способа позволяет получить точный прогноз быстрого вирусологического ответа у больных хроническим гепатитом C с генотипом вируса 1b на противовирусную терапию 2 пр., 1 ил.

Комплексный способ определения циркулирующих опухолевых клеток в крови больных раком молочной железы // 2522923

Изобретение относится к диагностическим методам в медицине и может быть использовано в онкологии при адъювантной терапии опухолей, а также при длительном наблюдении за пациентами после оперативного удаления опухолей. Способ описывает определение циркулирующих раковых клеток, чувствительных к адъювантной гормональной терапии, в крови больных раком молочной железы, включает выделение и обогащение циркулирующих опухолевых клеток с использованием антител с магнитными метками, получение лизатов циркулирующих опухолевых клеток, извлечение мРНК из лизатов циркулирующих опухолевых клеток, получение кДНК, получение амплифицированной ДНК, определение экспрессии маркерных генов, при этом в случае наличия одного из маркеров GA733-2, MUC-1, HER2 делается заключение о наличии циркулирующих опухолевых клеток, и при обнаружении маркеров ESR1, PGR делается заключение о наличии циркулирующих опухолевых клеток, чувствительных к гормональной терапии. Способ позволяет значительно увеличить вероятность обнаружения циркулирующих опухолевых клеток, чувствительных к адъювантной гормональной терапии, повысить точность измерений и увеличить число анализируемых характеристик циркулирующих опухолевых клеток, повысить чувствительность методов анализа и эффективность диагностики при работе с больными раком молочной железы для оценки прогноза и эффективности терапии, улучшить эффективность лечения и выживаемость онкологических больных. 5 ил., 1 пр.

Технология получения костного мозга от доноров-трупов с бьющимся и не бьющимся сердцем // 2523563

Группа изобретений относится к области медицины и может быть использована для получения костного мозга (КМ) от доноров-трупов. Для этого пунктируют крылья подвздошных костей в передней и задней трети крыльев, устанавливая в каждое по два троакара. Сбор КМ выполняют методом простой аспирации, аспирации-промыванием или их комбинированием при разряжении 0,6 Атм при помощи устройства. Устройство для заготовки КМ включает одноразовую многоканальную закрытую систему, модуль аспирации-накопления и модуль перфузии. Группа изобретений также относится к способу оценки заготовленного костного мозга. Использование данного способа получения костного мозга (КМ) обеспечивает заготовку стерильного богатого жизнеспособными мультипотентными мезенхимальными стромальными и гемопоэтическими прогенеторными клетками КМ, при этом результат достигается за счет автоматизации миелоаспирации, путем заготовки биоматериала специальным разработанным устройством для сбора КМ. 3 н. и 4 з.п. ф-лы, 1 пр., 1 ил., 1табл.

Способ прогнозирования течения бактериальных гнойных менингитов у детей // 2526177

Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии, и может быть использовано для прогнозирования течения и исходов бактериальных гнойных менингитов (БГМ) различной этиологии у детей. Для этого определяют в цереброспинальной жидкости иммуноцитохимическим методом наличие CD31 и S100 позитивных клеток в 1-2 день заболевания. При содержании CD31 более 0,5% и наличии S100 позитивных клеток прогнозируют неблагоприятное течение БГМ. При содержании CD31 менее 0,5% и отсутствии S100 позитивных клеток прогнозируют благоприятное течение заболевания. Применение предложенного способа ликворо-цитологического прогноза течения БГМ у детей позволяет прогнозировать на ранних сроках болезни благоприятное и неблагоприятное течение заболевания, проводить мониторинг состояния сосудов микроциркуляторного русла головного мозга в ходе заболевания и корректировать терапию. 1 табл., 2 ил., 3 пр.