Конструкции терапевтического переключения генов и биореакторы для экспрессии биотерапевтических молекул и их применение

Группа изобретений относится к способам и композициям для лечения, облегчения или профилактики заболевания, нарушения или патологического состояния у субъекта путем введения в клетки субъекта конструкции терапевтического переключения генов, контролирующей экспрессию одного или более терапевтических продуктов. Группа изобретений позволяет повысить безопасность и клиническую применимость доставки клетками биореактора терапевтического белка, возможностью выключения выработки белка или регулирования скорости, с которой происходит выработка белка. 9 н. и 15 з.п. ф-лы, 17 ил., 16 табл., 13 пр.

 

Текст описания приведен в факсимильном виде.

1. Способ лечения заболевания, нарушения или патологического состояния у субъекта, включающий:
(a) введение указанному субъекту
(1) первого полинуклеотида, кодирующего переключатель гена, где указанный переключатель гена содержит по меньшей мере одну последовательность фактора транскрипции, причем указанная по меньшей мере одна последовательность фактора транскрипции кодирует лиганд-зависимый фактор транскрипции посредством функциональной ассоциации с терапевтическим промотором переключателя, причем указанный терапевтический промотор переключателя активируется при состояниях, связанных с заболеванием, нарушением или патологическим состоянием, при условии, что указанный промотор не является промотором, индуцируемым стрессом, и
(2) второго полинуклеотида, кодирующего терапевтический полипептид или терапевтический полинуклеотид, функционально связанный с фактор-регулируемым промотором, который активируется указанным лиганд-зависимым фактором транскрипции,
причем указанные первый и второй полинуклеотиды вводят таким образом, чтобы обеспечить экспрессию указанного лиганд-зависимого фактора транскрипции; и
(b) введение лиганда указанному субъекту для индуцирования экспрессии указанного терапевтического полипептида или терапевтического полинуклеотида.

2. Способ экспрессии терапевтического полипептида или терапевтического полинуклеотида у субъекта, включающий:
(a) введение указанному субъекту
(1) первого полинуклеотида, кодирующего переключатель гена, где указанный переключатель гена содержит по меньшей мере одну последовательность фактора транскрипции, причем указанная по меньшей мере одна последовательность фактора транскрипции кодирует лиганд-зависимый фактор транскрипции посредством функциональной ассоциации с терапевтическим промотором переключателя, причем указанный терапевтический промотор переключателя активируется при состояниях, связанных с заболеванием, нарушением или патологическим состоянием, при условии, что указанный промотор не является промотором, индуцируемым стрессом, и
(2) второго полинуклеотида, кодирующего указанный терапевтический полипептид или терапевтический полинуклеотид, функционально связанный с фактор-регулируемым промотором, который активируется указанным лиганд-зависимым фактором транскрипции,
причем указанные первый и второй полинуклеотиды вводят таким образом, чтобы обеспечить экспрессию указанного лиганд-зависимого фактора транскрипции; и
(b) введение лиганда указанному субъекту для индуцирования экспрессии указанного терапевтического полипептида или терапевтического полинуклеотида.

3. Способ по п.1 или 2, отличающийся тем, что указанное заболевание, нарушение или патологическое состояние восприимчиво к указанному терапевтическому полипептиду или терапевтическому полинуклеотиду.

4. Способ по п.1 или 2, отличающийся тем, что указанный переключатель гена представляет собой переключатель гена на основе рецептора экдизона (EcR).

5. Способ по п.1 или 2, отличающийся тем, что указанный лиганд представляет собой диацилгидразин.

6. Способ по п.1 или 2, отличающийся тем, что указанный лиганд представляет собой амидокетон или оксадиазолин.

7. Способ по п.1 или 2, отличающийся тем, что указанный переключатель гена содержит первую последовательность фактора транскрипции под контролем первого терапевтического промотора переключателя и вторую последовательность фактора транскрипции под контролем второго терапевтического промотора переключателя, причем белки, кодируемые указанной первой последовательностью фактора транскрипции и указанной второй последовательностью фактора транскрипции, взаимодействуют с образованием белкового комплекса, который функционирует как комплекс лиганд-зависимого фактора транскрипции.

8. Способ по п.1 или 2, отличающийся тем, что указанные первый и второй полинуклеотиды вводят в одну или несколько модифицированных клеток указанного субъекта.

9. Способ по п.8, отличающийся тем, что указанные модифицированные клетки обработаны таким образом, что при введении указанному субъекту указанные клетки защищены от иммунной системы субъекта.

10. Способ по п.8, отличающийся тем, что модифицированные клетки представляют собой модифицированные неаутологичные клетки, в которые введены указанный первый и второй полинуклеотиды.

11. Способ экспрессии терапевтического полипептида или терапевтического полинуклеотида в одной или более модифицированных клетках, включающий:
(а) введение в клетку
(1) первого полинуклеотида, кодирующего переключатель гена, где указанный переключатель гена содержит по меньшей мере одну последовательность фактора транскрипции, причем указанная по меньшей мере одна последовательность фактора транскрипции кодирует лиганд-зависимый фактор транскрипции посредством функциональной ассоциации с терапевтическим промотором переключателя, причем указанный терапевтический промотор переключателя активируется при состояниях, связанных с заболеванием, нарушением или патологическим состоянием, при условии, что указанный промотор не является промотором, индуцируемым стрессом, и
(2) второго полинуклеотида, кодирующего терапевтический полипептид или терапевтический полинуклеотид, функционально связанный с фактор-регулируемым промотором, который активируется указанным лиганд-зависимым фактором транскрипции, с получением модифицированной клетки; и
(b) введение лиганда в указанную модифицированную клетку для индуцирования экспрессии указанного терапевтического полипептида или терапевтического полинуклеотида.

12. Нуклеиновая кислота, содержащая первый полинуклеотид, кодирующий переключатель гена, где указанный переключатель гена содержит по меньшей мере одну последовательность фактора транскрипции, причем указанная по меньшей мере одна последовательность фактора транскрипции кодирует лиганд-зависимый фактор транскрипции посредством функциональной ассоциации с терапевтическим промотором переключателя, причем указанный терапевтический промотор переключателя активируется при состояниях, связанных с заболеванием, нарушением или патологическим состоянием, при условии, что указанный промотор не является промотором, индуцируемым стрессом.

13. Нуклеиновая кислота по п.12, которая дополнительно содержит второй полинуклеотид, кодирующий терапевтический полипептид или терапевтический полинуклеотид, функциональным образом ассоциированный с указанным промотором, который активируется указанным лиганд-зависимым фактором транскрипции.

14. Нуклеиновая кислота по п.12 или 13, отличающаяся тем, что указанный переключатель гена представляет собой переключатель гена на основе EcR.

15. Нуклеиновая кислота по п.14, отличающаяся тем, что указанный лиганд связывается с лиганд-связывающим доменом EcR.

16. Нуклеиновая кислота по п.15, отличающаяся тем, что указанный лиганд представляет собой диацилгидразин.

17. Вектор, который содержит нуклеиновую кислоту по п.12 или 13.

18. Вектор по п.17, который представляет собой вирусный вектор.

19. Способ получения модифицированной клетки, включающий введение в клетку вектора по п.17 или 18.

20. Модифицированная клетка, содержащая нуклеиновую кислоту по любому из пп.12-16.

21. Применение нуклеиновой кислоты по любому из пп.12-16 для приготовления лекарственного средства для лечения заболевания, нарушения или патологического состояния, выбранного из группы, состоящей из гиперпролиферативного заболевания, гиперпролиферативного нарушения, гиперпролиферативного патологического состояния, сердечно-сосудистого заболевания, сердечно-сосудистого нарушения, сердечно-сосудистого патологического состояния, заболевания нервной системы, нарушения нервной системы, патологического состояния нервной системы, аутоиммунного заболевания, аутоиммунного нарушения, аутоиммунного патологического состояния, заболевания костей, нарушения костей, патологического состояния костей, желудочно-кишечного заболевания, желудочно-кишечного нарушения, желудочно-кишечного патологического состояния, заболевания крови, нарушения крови, патологического состояния крови, метаболического заболевания, метаболического нарушения, метаболического патологического состояния, воспалительного заболевания, воспалительного нарушения, воспалительного патологического состояния и инфекционного заболевания, инфекционного нарушения, инфекционного патологического состояния.

22. Применение вектора по п.17 или 18 для получения лекарственного средства для лечения заболевания, нарушения или патологического состояния, выбранного из группы, состоящей из гиперпролиферативного заболевания, гиперпролиферативного нарушения, гиперпролиферативного патологического состояния, сердечно-сосудистого заболевания, сердечно-сосудистого нарушения, сердечно-сосудистого патологического состояния, заболевания нервной системы, нарушения нервной системы, патологического состояния нервной системы, аутоиммунного заболевания, аутоиммунного нарушения, аутоиммунного патологического состояния, заболевания костей, нарушения костей, патологического состояния костей, желудочно-кишечного заболевания, желудочно-кишечного нарушения, желудочно-кишечного патологического состояния, заболевания крови, нарушения крови, патологического состояния крови, метаболического заболевания, метаболического нарушения, метаболического патологического состояния, воспалительного заболевания, воспалительного нарушения, воспалительного патологического состояния и инфекционного заболевания, инфекционного нарушения, инфекционного патологического состояния.

23. Применение модифицированной клетки по п.20 для приготовления лекарственного средства для лечения заболевания, нарушения или патологического состояния, выбранного из группы, состоящей из гиперпролиферативного заболевания, гиперпролиферативного нарушения, гиперпролиферативного патологического состояния, сердечно-сосудистого заболевания, сердечно-сосудистого нарушения, сердечно-сосудистого патологического состояния, заболевания нервной системы, нарушения нервной системы, патологического состояния нервной системы, аутоиммунного заболевания, аутоиммунного нарушения, аутоиммунного патологического состояния, заболевания костей, нарушения костей, патологического состояния костей, желудочно-кишечного заболевания, желудочно-кишечного нарушения, желудочно-кишечного патологического состояния, заболевания крови, нарушения крови, патологического состояния крови, метаболического заболевания, метаболического нарушения, метаболического патологического состояния, воспалительного заболевания, воспалительного нарушения, воспалительного патологического состояния и инфекционного заболевания, инфекционного нарушения, инфекционного патологического состояния.

24. Модифицированная клетка, содержащая вектор по п.17 или 18.