Способ получения бесклеточной вакцины для иммунопрофилактики коклюша

Авторы патента:

A61P31/00 - Противоинфекционные средства, т.е. антибиотики, антисептики, химиотерапевтические средства

A61K39/10 - Brucella; Bordetella, например коклюша

Владельцы патента RU 2504399:

Федеральное государственное унитарное предприятие "Научно-производственное объединение по медицинским и иммунопрофилактическим препаратам "Микроген" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГУП "НПО "Микроген" Минздрава России) (RU)

Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использовано для получения бесклеточной вакцины для иммунопрофилактики коклюша. Для этого штаммы Bordetella pertussis выращивают на казеиново-угольном агаре с последующим смывом микробных клеток с поверхности питательной среды и устанавливают в полученной суспензии концентрацию микробных клеток 60-80 ME и рН 8,4±0,1. Комплекс антигенов Bordetella pertussis экстрагируют 0,5% раствором дезоксихолата натрия и отделяют его от микробных клеток центрифугированием. Затем проводят очистку диафильтрацией от низкомолекулярных балластных примесей. Комплекс антигенов Bordetella pertussis переводят в 0,005 М сукцинатно-боратный буферный раствор с рН 7,3±0,2, содержащий 0,09 М NaCl. Дополнительную очистку проводят с помощью хроматографии на колоннах с анионообменной смолой Whatman DE-52, уравновешенной 0,005 М сукцинатно-боратным буферным раствором с рН 7,3±0,2, содержащим 0,09 М NaCl. Очищенный комплекс антигенов Bordetella pertussis обезвреживают 0,100±0,025% формалина при температуре (33±2)°С в течение 12±2 суток. Данная технология позволяет получить препарат коклюшного антигенного комплекса со сниженным содержанием эндотоксинов с полноценной антигенной структурой. 1 пр., 2 табл.

Изобретение относится к медицине и может быть использовано при производстве высокоиммуногенных безвредных препаратов для профилактики коклюша.

Известен способ получения бесклеточных коклюшных вакцин на основе индивидуально очищенных антигенов Bordetella pertussis с последующим их объединением в готовом препарате, такие вакцины содержат в своем составе от 1 до 5 очищенных антигенов. Однако до настоящего времени остается не ясна роль отдельных антигенов Bordetella pertussis в отношении их вклада в обеспечение протективной функции иммунопрофилактического препарата. Вместе с тем в настоящий момент наблюдается тенденция повышения эффективности бесклеточных коклюшных вакцин за счет включения в их состав от 3 до 5 антигенных компонентов (Еженедельный эпидемиологический бюллетень, 2010, №40, 385-400). Таким образом, является целесообразным получение препаратов, содержащих природный комплекс антигенов Bordetella pertussis, обладающий наиболее оптимальным соотношением протективных антигенов.

Наиболее близким к предлагаемому изобретению аналогом (прототип) является способ получения бесклеточной вакцины для иммунопрофилактики коклюша (описание к патенту №2332231 на изобретение «Способ получения бесклеточной вакцины для иммунопрофилактики коклюша» МПК А61К 39/10, опубликован 10.02.2008), включающий выращивание культуры Bordetella pertussis на питательной среде КУА (казеиново-угольный агар) при (36±1)°С в течение 48 часов с последующим смывом микробных клеток с поверхности питательной среды, при этом в микробной суспензии, содержащей 70±10 ME микробных клеток, устанавливают рН 8,4±0,1, после чего в суспензию добавляют водный раствор дезоксихолата натрия до конечной концентрации 0,5% и выдерживают при температуре (3±1)°С в течение 2 часов, затем полученный комплекс антигенов Bordetella pertussis отделяют от биомассы центрифугированием, подвергают диафильтрации, ультрафильтрации, обезвреживают 0,03% формалина при рН 7,6±0,2 и температуре (36±3)°С в течение 3 суток. Обезвреженный комплекс антигенов Bordetella pertussis осаждают соляной кислотой при рН 3,5±0,3 в присутствии 0,30±0,05% гексаметафосфата натрия. Полученный осадок растворяют в 0,9%-ном растворе натрия хлорида при рН 7,1±0,3 и проводят стерилизующую фильтрацию готового продукта. Однако препарат, получаемый данным способом, является пирогенным (содержит более 100 эндотоксических единиц (ЭЕ) в одной человеческой дозе), вследствие чего не соответствует международным требованиям, предъявляемым к бесклеточным коклюшным вакцинам (European pharmocopeia 6.0 01/2008:1595).

Признаки известного технического решения, совпадающие с признаками заявленного изобретения, заключаются в выращивании штаммов Bordetella pertussis на среде КУА с последующим смывом микробных клеток с поверхности питательной среды, установлении в суспензии концентрации микробных клеток 60-80 ME при рН 8,4±0,1, экстракции комплекса антигенов Bordetella pertussis 0,5% раствором дезоксихолата натрия, отделении его от клеток центрифугированием, очистке от низкомолекулярных балластных примесей диафильтрацией.

Задачей, решаемой изобретением, является повышение качества бесклеточной коклюшной вакцины.

Технический результат, обеспечивающий решение указанной задачи, заключается в снижении уровня содержания эндотоксинов Bordetella pertussis в препарате бесклеточной коклюшной вакцины.

Технический результат достигается тем, что в известном способе получения бесклеточной вакцины для иммунопрофилактики коклюша, включающем выращивание культуры Bordetella pertussis на казеиново-угольном агаре с последующим смывом микробных клеток с поверхности питательной среды, установление в суспензии концентрации микробных клеток 60-80 ME и рН 8,4±0,1, экстракцию комплекса антигенов Bordetella pertussis 0,5% раствором дезоксихолата натрия, отделение его от микробных клеток центрифугированием и очистку диафильтрацией от низкомолекулярных балластных примесей, согласно изобретению комплекс антигенов Bordetella pertussis переводят в 0,005 М сукцинатно-боратный буферный раствор с рН 7,3±0,2, содержащий 0,09 М NaCl, а удаление эндотоксинов из комплекса антигенов Bordetella pertussis проводят с помощью хроматографии на колоннах с анионообменной смолой Whatman DE-52, уравновешенной 0,005 М сукцинатно-боратным буферным раствором с рН 7,3±0,2, содержащим 0,09 М NaCl, после чего комплекс антигенов Bordetella pertussis обезвреживают 0,100±0,025% формалина при температуре (33±2)°С в течение 12±2 суток.

Перевод комплекса антигенов Bordetella pertussis в 0,005 М сукцинатно-боратный буферный раствор с рН 7,3±0,2, содержащий 0,09 М NaCl, осуществляется для обеспечения условий хроматографии на колоннах с анионообменной смолой Whatman DE-52, уравновешенной 0,005 М сукцинатно-боратным буферным раствором с рН 7,3±0,2, содержащим 0,09 М NaCl, которую проводят для снижения уровня содержания эндотоксинов в комплексе антигенов Bordetella pertussis. Концентрация формалина 0,100±0,025% при температуре (33±2)°С в течение 12±2 суток обеспечивает полное обезвреживание токсических компонентов комплекса антигенов Bordetella pertussis.

Новыми признаками заявленного способа по отношению к прототипу являются: перевод комплекса антигенов в 0,005 М сукцинатно-боратный буферный раствор с рН 7,3±0,2, содержащий 0,09 М NaCl; удаление эндотоксинов из комплекса антигенов путем проведения хроматографии на колоннах с анионообменной смолой Whatman DE-52, уравновешенной 0,005 М сукцинатно-боратным буферным раствором с рН 7,3±0,2, содержащим 0,09 М NaCl; обезвреживание комплекса антигенов Bordetella pertussis 0,100±0,025% формалина при температуре (33±2)°С в течение 12±2 суток.

Способ получения препарата осуществляется следующим образом. Для изготовления вакцины используют 3-5 штаммов возбудителя коклюша Bordetella pertussis 1 фазы. Микробы выращивают на КУА в матрацах при (36±1)°С в течение 48 часов. По истечении указанного времени выросшую культуру в каждом матраце контролируют на бактериологическую чистоту и типичность морфологии микробных клеток путем микроскопии мазков, окрашенных по Граму. С каждого матраца с культурой Bordetella pertussis, удовлетворяющей требованиям по морфологии и чистоте, производят смыв культуры стерильным 0,9% раствором натрия хлорида (рН 7,2). Бактериальную суспензию сливают в стерильную бутыль. Производят стандартизацию суспензии по оптическому стандарту мутности, устанавливая концентрацию 60-80 ME микробных клеток в 1 мл суспензии. В стандартизованной суспензии устанавливают рН 8,4±0,1 с помощью 5% раствора натрия гидроксида. К охлажденной до (3±1)°С микробной суспензии, содержащей 60-80 ME, добавляют 10% раствор дезоксихолата натрия до конечной концентрации его в суспензии, равной 0,5%, и выдерживают при температуре (3±1)°С в течение двух часов при периодическом перемешивании. После этого комплекс антигенов Bordetella pertussis отделяют от биомассы посредством центрифугирования. Полученный раствор комплекса антигенов Bordetella pertussis подвергают осветляющей фильтрации через мембраны с диаметром пор 1-3 мкм. Затем проводят очистку целевого продукта на ультрафильтрационной установке с мембранными модулями. Вначале проводят диафильтрацию против 0,9% раствора натрия хлорида, затем переводят в 0,005 М сукцинатно-боратный буферный раствор с рН 7,3±0,2, содержащий 0,09М NaCl. По окончании диафильтрации целевой продукт концентрируют до исходного объема, устанавливают рН 7,3±0,2, подвергают микрофильтрации через мембраны с диаметром пор 0,22 мкм. Далее проводят дополнительную очистку комплекса антигенов для снижения уровня содержания эндотоксина Bordetella pertussis с помощью хроматографии на колоннах с анионообменной смолой Whatman DE-52, уравновешенной 0,005М сукцинатно-боратным буферным раствором с рН 7,3±0,2, содержащим 0,09 М NaCl. При прохождении раствора через колонну происходит адсорбция эндотоксической составляющей на смолу, а целевой продукт выходит транзитом. Элюцию комплекса антигенов Bordetella pertussis контролируют спектрофотометрически, фракцию, содержащую комплекс антигенов Bordetella pertussis, собирают в емкость, добавляют формалин до концентрации 0,100±0,025%, устанавливают рН 7,6±0,2. Затем проводят стерилизующую фильтрацию через мембранные фильтры с диаметром пор 0,22 мкм, полученный раствор выдерживают при температуре (33±2)°С в течение 12±2 суток до полного обезвреживания токсических компонентов препарата. Данная технология позволяет получить препарат коклюшного антигенного комплекса со сниженным содержанием эндотоксинов (табл.1) и с полноценной антигенной структурой, которая соответствует антигенной структуре широко применяемого в настоящее время цельноклеточного коклюшного компонента комбинированной АКДС-вакцины (табл.2).

Таблица 1
Содержание эндотоксинов Bordetella pertussis в препаратах бесклеточного коклюшного антигена по данным хромогенного ЛАЛ-теста по конечной точке
Содержание эндотоксинов в вакцинной дозе (0,5 мл)
препарат по патенту	препарат по изобретению
№ образца	ЭЕ	№ образца	ЭЕ
1	2531,00	1	4,99
2	2820,00	2	0,90
3	3060,00	3	0,63

Все результаты хромогенного ЛАЛ-теста подтверждены в испытаниях на пирогенность на кроликах.

Таблица 2
Антигенная структура коклюшных препаратов по данным ммуноферментного анализа
Препарат	КТ¹	ФГА²	ПРН³	Агг2⁴	Агг3⁵
Цельноклеточный компонент АКДС-вакцины	+	+	+	+	+
Бесклеточный препарат по изобретению	+	+	+	+	+
1. КТ - коклюшный анатоксин; 2. ФГА - филаментозный гемагглютинин; 3. ПРН -пертактин; 4. Агг 2 - фимбриальный агглютиноген типа 2; 5. Агг 3 - фимбриальный агглютиноген типа 3

Способ получения бесклеточной коклюшной вакцины для иммунопрофилактики коклюша, включающий выращивание культуры Bordetella pertussis на казеиново-угольном агаре с последующим смывом микробных клеток с поверхности питательной среды, установление в суспензии концентрации микробных клеток 60-80 ME и рН 8,4±0,1, экстракцию комплекса антигенов Bordetella pertussis 0,5% раствором дезоксихолата натрия, отделение его от микробных клеток центрифугированием и очистку диафильтрацией от низкомолекулярных балластных примесей, отличающийся тем, что комплекс антигенов Bordetella pertussis переводят в 0,005 М сукцинатно-боратный буферный раствор с рН 7,3±0,2, содержащий 0,09 М NaCl, а удаление эндотоксинов из комплекса антигенов Bordetella pertussis проводят с помощью хроматографии на колоннах с анионообменной смолой Whatman DE-52, уравновешенной 0,005М сукцинатно-боратным буферным раствором с рН 7,3±0,2, содержащим 0,09 М NaCl, после чего комплекс антигенов Bordetella pertussis обезвреживают 0,100±0,025% формалина при температуре (33±2)°С в течение 12±2 суток.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности и представляет собой композицию для лечения ран, язв, эрозий, ожогов, обморожений, рубцов, а также инфекций, вызываемых грамположительными и грамотрицательными бактериями Staphylococcus spp., Streptococcus spp., Enterococcus spp., Shigella spp., Escherichia spp., Salmonella spp., Proteus spp., Acinetobacter spp., Citrobacter spp., Pseudomonas spp., Serratia spp., Klebsiella spp., Antracoides spp., Cryptococcus spp., патогенными грибами рода Microsporum, Trichophyton, Nocardia, Aspergillus, дрожжеподобными грибами рода Candida (в т.ч.

Комбинированный антибактериальный препарат для лечения острых кишечных инфекций // 2503451

Изобретение относится к антибактериальному средству для лечения желудочно-кишечных заболеваний, преимущественно острых кишечных инфекций, в том числе неустановленной этиологии. Заявляемый препарат представляет собой смесь антибиотика и биологического компонента, где в качестве антибиотика используется хлорамфеникол, а в качестве биологического компонента комплекс иммуноглобулинов IgG(56-60):IgA(16-22):IgM(22-24) при следующем соотношении, мг/капсулу: хлорамфеникол - 300 мг, комплекс иммуноглобулинов IgG, IgA, IgM - 120 мг. Технический результат заключается в значительном сокращении сроков заболевания приматов острой кишечной инфекцией.

Комбинированный антибактериальный препарат для лечения острых кишечных инфекций // 2502509

Штамм lactobacillus paracasei subspecies paracasei, обладающий антимикробными и иммуномодулирующими свойствами, и пищевой продукт на его основе // 2501850

Изобретение относится к штамму Lactobacillus paracasei subspecies paracasei, обладающему антимикробными и иммуномодулирующими свойствами, и к продукту, содержащему указанный штамм. Штамм депонирован в CNCM под номером I-3689.

Поизводные оксазолидинона // 2501799

Изобретение относится к соединениям формулы (I), где "----" обозначает связь или отсутствует; R1 представляет собой С1-4алкоксигруппу или галоген; R1b представляет собой Н или C1-3алкил; U и V каждый независимо представляет собой СН или N; W представляет собой СН или N, или, в случае, когда "----" отсутствует, W представляет собой СН2 или NH; при условии, что по крайней мере один из U, V и W представляет собой СН или CH2; А представляет собой -CH2-СH(R2)-В-NН-* или -СH(R3)-СН2-N(R4)-[CH2]m-*, где звездочки указывают на связь, которая через СН2-группу соединяет их с оксазолидиноновым фрагментом; В представляет собой СН2 или СО; и R2 представляет собой водород, ОН или NH2; R3 и R4 оба представляют собой водород, или R3 и R4 вместе образуют метиленовый мостик; m равно целому числу 0, 1 или 2; и G представляет собой фенил, который является монозамещенным в положении 3 или 4, или дизамещенным в положениях 3 и 4, где каждый заместитель независимо выбран из группы, включающей С1-4алкил, С1-3алкоксигруппу и галоген; или G представляет собой группу, выбранную из групп G1 и G5, где М представляет собой СН или N; Q' представляет собой S или О; Z1 представляет собой N, Z2 представляет собой СН и Z3 представляет собой СН; или Z1 представляет собой СН, Z2 представляет собой N и Z3 представляет собой СН или N; или Z1 представляет собой СН, Z2 представляет собой CR5 и Z3 представляет собой СН; или Z1 представляет собой СН, Z2 представляет собой СН и Z3 представляет собой N; и R5 представляет собой водород или фтор; или его фармацевтически приемлемой соли.

Применение пентааминофуллеренов в качестве противомикробных средств и противомикробная композиция на их основе // 2501785

Изобретение относится к применению производных фуллерена общей формулы 1 в качестве противомикробных препаратов. В формуле 1 Х означает отрицательный заряд, локализованный на фуллереновом каркасе, атом хлора, присоединенный к углеродному каркасу, или атом водорода; фрагмент NR1R2 означает остаток амина, где R1 и R2 - атомы водорода, или замещенные протонированными (NH3 +) или непротонированными (NH2) аминогруппами линейные или разветвленные алкильные радикалы (CmH2m+1; n=1-20), или остаток пиперазина общей формулы Ic-1, где R, R'1, R'2 R'3 и R'4 - атомы водорода или линейные или разветвленные алкильные (CmH2m+1; n=l-20) радикалы, а также остатки алифатических спиртов -(СН2)nOH, простых эфиров -(CH2)nOR'5, тиолов -(CH2)nSH, кислот -(СН2)nCOOH, их сложных эфиров -(CH2)nCOOR'5 или амидов -(CH2)nCONR'5R'6, для которых n=0-20, R'5 и R'6 - атомы водорода или линейные алкильные (CmH2m+1; n=1-20) радикалы.

Кристаллические противогрибковые соединения // 2500679

Описываются новые кристаллические формы (1R,2R)-7-хлоро-3-[2-(2,4-дифторфенил)-2-гидрокси-1-метил-3-(1H-1,2,4-триазол-1-ил)пропил]хиназолин-4(3Н)-она: Форма I, Форма II, Форма III, Форма IV и Форма VI, каждая из которых охарактеризована данными рентгеновской порошковой дифракции (ХРПД) и данными инфракрасного спектра, и способ получения кристаллической Формы VI.

Средство для ингибирования фермента поли(адф-рибозо)полимеразы-1 человека // 2500675

Изобретение относится к средству для ингибирования фермента поли(АДФ-рибозо)полимеразы-1 человека, представляющее собой 6-ацетил-7,9-дигидрокси-8,9b-диметил-2-етилид-2,11-ен-1,9b,2,3-тетрагидро-11-N-карбоксифенилметиламино-1,3-диоксодибензофуран общей формулы (I): Данное средство оказывает специфическое ингибирующее действие на фермент поли(АДФ-рибозо)полимераза-1 человека (ПАРП-1) и, являясь дешевым и доступным, расширяет арсенал специфических ингибиторов данного фермента и может быть использовано для разработки лекарственных препаратов, применимых в клинической медицине.

Состав со стабилизированным окислительно-восстановительным потенциалом // 2499600

Заявленное изобретение относится к составу со стабилизированным окислительно-восстановительным потенциалом, который обладает противомикробной, противогрибковой, ранозаживляющей, вирулицидной и противовирусной активностью.

Способ профилактики сердечно-сосудистых осложнений у больных с синдромом эндогенной интоксикации на фоне острого гнойного пиелонефрита в периоперационном периоде // 2499568

Изобретение относится к медицине, а именно к анестезиологии, реаниматологии и урологии, и может быть использовано для профилактики сердечно-сосудистых осложнений у больных с синдромом эндогенной интоксикации на фоне острого гнойного пиелонефрита в периоперационном периоде.

Способ профилактики бруцеллеза животных // 2501567

Изобретение относится к области ветеринарии, а именно к профилактике инфекционных болезней. Способ профилактики бруцеллеза животных осуществляют следующим образом.

Полинуклеотидная последовательность, кодирующая сконструированный белок пертактин, вектор, включающий такую последовательность, и вакцинные композиции, содержащие белок пертактина или вектор // 2499046

Представленные изобретения относятся к области биомедицины и касаются полинуклеотидной последовательности, кодирующей сконструированный белок пертактин (Prn), вектора, включающего такую последовательность, и композиций, содержащих белок или вектор.

Способ профилактики колибактериоза цыплят // 2498817

Изобретение относится к области ветеринарии, в частности к птицеводству. Перорально вводят вакцинный препарат с содержанием 1,0×105-3×105 микробных клеток штамма Е.

Вакцина для защиты от haemophilus parasuis серотипа 4 у поросят // 2498816

Изобретение относится к области биотехнологии. Описано применение бактерий Haemophilus parasuis серотипа 5 для получения вакцины для введения беременной свиноматке или молодой свинье, для защиты поросят от нарушения вследствие бактерий Haemophilus parasuis серотипа 4 путем употребления ими молозива указанной свиноматки или молодой свиньи после опороса.

Вакцина для защиты от lawsonia intracellularis, mycoplasma hyopneumoniae, цирковируса свиней // 2496520

Изобретение относится к вакцине, включающей в комбинации неживые антигены Lawsonia intracellularis, Mycoplasma hyopneumoniae и цирковируса свиней и фармацевтически приемлемый носитель.

Способ изготовления вакцины ассоциированной против сальмонеллеза, эшерихиоза и вирусной геморрагической болезни кроликов // 2496518

Изобретение относится к области ветеринарной медицины и касается способа изготовления вакцины ассоциированной против сальмонеллеза, эшерихиоза и вирусной геморрагической болезни кроликов.

Способ получения эритроцитарного антительного диагностикума для реакции непрямой гемагглютинации (рнга) с целью индикации бруцелл в патматериале // 2493871

Изобретение относится к области ветеринарии, а именно к получению эритроцитарного антительного диагностикума для индикации бруцелл в патматериале. Сущность изобретения включает способ получения эритроцитарного антительного диагностикума для реакции непрямой гемагглютинации (РНГА) с целью индикации бруцелл в патматериале, посредством изготовления формалинизированных эритроцитов, с последующей сенсибилизацией позитивной бруцеллезной сывороткой, при этом для изготовления эритроцитарного антительного диагностикума позитивную бруцеллезную сыворотку для сенсибилизации формалинизированных эритроцитов разводят 1:50-1:100, инактивируют при 60°C в течение 30 минут, сенсибилизируют формалинизированные эритроциты, из расчета: осадок от 2 объемов 40%-ной взвеси эритроцитов барана, 1 объем 0,43-0,44% раствора свежеприготовленного амидола, 1,0-1,5 объем позитивной сыворотки, разведенной 1:50-1:100, и выдерживают в течение 28-32 минут при 55-56°C.

Способ профилактики бруцеллеза крупного рогатого скота // 2491091

Изобретение относится к ветеринарии, в частности к биотехнологии. .

Способ получения бруцеллезного антигена для роз-бенгал пробы (рбп) // 2488119

Изобретение относится к области биотехнологии и касается способа получения бруцеллезного антигена для роз-бенгал пробы (РБП). .

Аттенуированные бактерии bordetella pertussis, вакцина против возбудителя коклюша // 2455024

Изобретение относится к биотехнологии и медицине и касается аттенуированных бактерий В.pertussis, содержащих нокаутную мутацию в гене dnt и продуцирующих нетоксическую, иммунологически активную, токсоидную форму коклюшного токсина, их применению в качестве живой и инактивированной вакцин и вектора для поливалентной вакцины.

Презентируемый в salmonella enterica n-гликан из c. jejuni и его производные // 2507253

Настоящее изобретение относится к генетически модифицированной бактерии Salmonella enterica, которые содержат, по меньшей мере, один оперон pgl из Campylobacter jejuni или его функциональное производное и относится к презентации, по меньшей мере, одного N-гликана из Campylobacter jejuni или производного этого N-гликана на их клеточной поверхности. В бактерии один или несколько генов для биосинтеза бациллозамина инактивированы мутацией и/или частичной или полной делецией генов pglD, E, F, G. Изобретение раскрывает способ получения генетически модифицированной бактерии Salmonella enterica. Изобретение направлено на применение модифицированной бактерии в фармакологических композициях медицинского и ветеринарного назначения, а также на способы лечения и/или профилактики инфекций Campylobacter и необязательно Salmonella. Использование изобретения обеспечивает безопасность и эффективность профилактики и лечения инфекции у людей и животных, в частности домашнего скота и домашней птицы. 9 н. и 9 з.п. ф-лы, 4 ил., 1 табл., 6 пр.