Способ вакцинотерапии герпетической инфекции
Владельцы патента RU 2514034:
Федеральное государственное бюджетное учреждение "Российский онкологический научный центр имени Н.Н. Блохина" Российской академии медицинских наук (ФГБУ "РОНЦ им. Н.Н. Блохина" РАМН) (RU)
Изобретение относится к области медицины, а именно к способам вакцинотерапии герпетической инфекции. Для этого антиген-презентирующие дендритные клетки (ДК), полученные из крови пациента, «нагружают» вирусными антигенами, источником которых является стандартная антигерпетическая вакцина, представляющая собой взвесь вирусов простого герпеса I и II типов, убитых формалином. Затем полученную вакцину вводят пациенту внутрикожно в 4-6 точек по ходу лимфатических коллекторов. Курс вакцинотерапии состоит из 3-4 инъекций. Интервалы между введениями вакцины составляют от 2 до 4 недель. Первоначальная доза вакцины составляет 1×106-2×106 ДК, при втором введении дозу увеличивают в 2 раза, при третьем введении дозу увеличивают в 4 раза по сравнению с первым введением. Изобретение позволяет проводить вакцинацию и в острый период, и в период ремиссии. А также увеличить продолжительность ремиссии в 3 раза за счет снижения частоты рецидивов. 1 пр., 2 табл.
Изобретение относится к области медицины, а именно к способам вакцинотерапии герпетической инфекции.
Лабиальная форма герпетической инфекции (ГИ), вызываемая вирусом простого герпеса I типа (ВПГ I), является наиболее распространенной среди населения, инфицированность которой составляет свыше 90%. Инфицированность взрослого населения генитальной формой ГИ, вызываемой вирусом простого герпеса II типа (ВПГ II), достигает 40-60% (Pamela Chayavichitsilp et al.: Herpes Simplex. Pediatrics in Review., Apr 2009; 30:119).
В лечении герпетической инфекции используются препараты, обладающие неспецифическим воздействием на иммунную систему (цитокины, интерфероны, активаторы иммунитета - тактивин, полиоксидоний), и препараты специфического действия на иммунный ответ (антигерпетические вакцины).
Эффективность лечения больных ГИ остается неудовлетворительной: известные способы вакцинотерапии купируют острые проявления инфекции, но не предотвращают рецидивов заболевания,
Известен способ вакцинотерапии ГИ с использованием вакцины, созданной на основе одного из поверхностных белков ВПГ (David I. et al.: Safety and immunogenicity of glycoprotein D-adjuvant genital herpes vaccine. Clinical Infectious Diseases, 2005, Volume 40, Issue 9,1271).
Недостатки данного способа: вакцинотерапия предназначена для профилактики только ВПГ II типа и эффективна только у женщин.
Наиболее близким к заявляемому способу является способ вакцинотерапии ГИ с использованием вакцины, созданной на основе убитых формалином вирусов простого герпеса I и II типов (Семенова Т.Б.: Принципы лечения простого герпеса. Русский Медицинский Журнал, 2002 г., том 10, №20, с.924). Вакцинотерапию проводят в период ремиссии, продолжительность которой составляет не менее 2 месяцев, не ранее чем через 5 дней после полного исчезновения клинических проявлений ГИ. Препарат вводят в дозе 0,2 мл внутрикожно ежедневно в область внутренней поверхности предплечья. Курс вакцинации состоит из 5 инъекций с интервалом в 7 дней, а при осложненной ГИ - с интервалом в 10 дней. Повторный курс вакцинации осуществляют через 6 месяцев. Данный способ принят за прототип.
Недостатками данного способа вакцинотерапии являются: недостаточно высокая эффективность и возможность использования вакцины только в периоде ремиссии ГИ, продолжительность которой составляет не менее 2 месяцев (Марданлы С.Г., Кирпичникова Г.И., В.А.Неверов. Герпетическая инфекция (простой герпес). 2007).
Задачей заявляемого изобретения является создание нового эффективного способа вакцинотерапии ГИ.
Задача решается тем, что вакцинотерапию осуществляют вакциной, созданной на основе антиген-презентирующих дендритных клеток (ДК) в сочетании с вирусными белками. ДК являются наиболее мощными антиген-презентирующими клетками, с помощью которых можно получить направленный иммунный ответ.
Для генерации антигерпетического иммунного ответа ДК должны быть «нагружены» белками вируса простого герпеса. Источником вирусных антигенов служит антигерпетическая вакцина, представляющая собою взвесь убитых вирусов простого герпеса I и II типов.
Заявляемый способ вакцинотерапии герпетической инфекции осуществляют следующим образом: у пациента с подтвержденной ГИ производят забор 50 мл крови, из которой выделяют популяцию клеток, обогащенную моноцитами. Из моноцитов в присутствии интерлейкина 4 (ИЛ-4) и гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора (ГМ-КСФ) культивируют «незрелые» ДК. На 4-5 сутки культивирования производят «нагрузку» ДК вирусами простого герпеса I и II типов, которые содержатся в стандартной антигерпетической вакцине. Далее добавляют индукторы дифференцировки клеток - фактор некроза опухоли альфа (ФНОα) и простагландин E2 (ПГЕ2). Через 48 часов «зрелые» и «нагруженные» вирусными антигенами ДК собирают, отмывают от культуральной среды, определяют их общее количество, разделяют на дозы и подвергают криоконсервации.
ДК, «нагруженные» вирусными белками, вводят пациенту в дозах от 1×106 до 8×106 клеток на введение, внутрикожно, в 4-6 точек по ходу указанных лимфатических коллекторов (наружной поверхности плеча, околопупочной области, паховой области, лопаточной области). Вакцинотерапию проводят, начиная с дозы 1×106-2×106 ДК, при втором введении дозу увеличивают в 2 раза, при третьем введении дозу увеличивают в 4 раза по сравнению с первым введением. Курс вакцинотерапии состоит из 3-4 инъекций с интервалом от 2 до 4 недель.
Изобретение иллюстрируется следующими примерами.
Пример 1. Пациентке С., И.б. №16090, 1970 г.р. Диагноз: ГИ, лабиальная форма, непрерывно-рецидивирующее течение (рецидивы ГИ 1 раз в месяц). Вакцинотерапию проводили по заявляемому способу. Первое введение вакцины проводили в дозе 1,2×106 ДК, второе - в дозе 2,4×106 ДК, третье - в дозе 4,8×106 ДК. Интервал между введениями составил 2 и 4 недели соответственно. После второго введения вакцины наблюдали озноб, повышение температуры до 37,2-37,4, небольшой кожный зуд в области верхней губы в течение 2 дней. В зоне введения вакцины отмечали развитие реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ), что выражалось в гиперемии и зуде. В течение последующих 6 месяцев рецидивы ГИ у пациентки не наблюдали.
В таблице 1 представлены показатели иммуннологической реактивности пациентки С. до проведения вакцинотерапии и через 2 недели после окончания курса вакцинотерапии. У пациентки выявлена активация клеточного иммунитета: увеличение доли лимфоцитов, содержащих перфорин в популяции CD8 лимфоцитов, до 73,5% по сравнению с этим показателем до начала вакцинотерапии - 58,9%.
Пример 2. Пациент К., И.б. №20479, 1971 г.р. Диагноз: ГИ, генитальная форма, непрерывно-рецидивирующее течение (рецидивы ГИ 1 раз в месяц). Вакцинотерапию проводили по заявляемому способу. Первое введение вакцины проводили в дозе 1,7×106 ДК, второе - в дозе 3,4×106 ДК, третье - в дозе 6,8×106 ДК. В зоне введения вакцины наблюдали гиперемию и зуд. Рецидивов ГИ в течение последующих 5 месяцев не отмечено.
В таблице 2 представлены показатели клеточного иммунитета пациента К. до начала введения вакцины и через 2 недели после окончания курса вакцинотерапии.
В результате вакцинотерапии выявлена активация иммунологической реактивности пациента: в крови отмечено увеличение содержания CD8 лимфоцитов, экспрессирующих перфорин, в популяции лимфоцитов (до вакцинотерапии - 15,4% и после - 23,2%) и доли лимфоцитов, содержащих перфорин в популяции CD8 лимфоцитов (до вакцинотерапии - 35,7%, после - 63,4%).
Вакцинотерапия способствовала активации клеточного иммунного ответа, что подтверждается реакцией ГЗТ в области введения ДК и характерными изменениями иммуннологической реактивности пациентов.
По заявляемому способу вакцинотерапия проведена 30 пациентам с ГИ I и/или II типов непрерывно-рецидивирующим течением. У всех пациентов в области введения вакцины отмечена реакция ГЗТ. У трех пациентов во время вакцинотерапии наблюдался гриппоподобный синдром. У всех пациентов зарегистрировано увеличение продолжительности ремиссии. Средняя продолжительность ремиссии увеличилась в 3 раза по сравнению с прототипом. Кроме того, при повторных рецидивах ГИ наблюдалось купирование кожных проявлений ГИ в течение первых суток, до применения вакцинотерапии проявления ГИ были купированы к 5-7 дню. Кроме того, площадь поражения при рецидиве заболевания была меньше, чем до начала вакцинотерапии.
Технический результат заявляемого способа вакцинотерапии ГИ состоит в увеличении продолжительности ремиссии в 3 раза за счет снижения частоты рецидивов и быстром купировании проявлений герпетической инфекции. Способ может быть использован в целях профилактики и лечения герпетической инфекции простого герпеса I и II типов. Важным преимуществом предлагаемого способа вакцинотерапии является то, что вакцинацию заявляемым способом можно проводить как в ремиссии, так и при рецидиве заболевания.
| Таблица 1 | ||
| Показатель | До начала вакцинации (%) | Через 2 недели после 3 вакцинации (%) |
| CD3 | 56,5 | 63,3 |
| CD4 | 40,5 | 46,2 |
| CD8 | 35,8 | 27,9 |
| ИРИ (CD4/CD8) | 1,1 | 1,7 |
| CD16 | 31,5 | 23,9 |
| CD3+CD4+ | 38,5 | 46,1 |
| CD3+CD8+ | 21,8 | 14,8 |
| CD3-CD8+ | 14,0 | 13,3 |
| CD8+CD16+ | 17,3 | 17,4 |
| CD3+CD16+ | 4,9 | 1,2 |
| Перфорин | 35,9 | 34,9 |
| CD8+Перфорин* | 21,1 | 20,5 |
| Доля CD8 лимфоцитов с перфорином во всей популяции CD8 лимфоцитов | 58,9 | 73,5 |
| Таблица 2 | ||
| Показатель | До начала вакцинации (%) | Через 2 недели после 3 вакцинации (%) |
| CD3 | 73,6 | 62,1 |
| CD4 | 36,5 | 34,7 |
| CD8 | 43,1 | 36,6 |
| ИРИ (CD4/CD8) | 0,8 | 0,9 |
| CD16 | 24,2 | 28,5 |
| CD3+CD4+ | 36,1 | 34,7 |
| CD3+CD8+ | 36,1 | 28,2 |
| CD3+CD8+ | 7,0 | 8,4 |
| CD8+CD16+ | 10,4 | 8,2 |
| CD3+CD16+ | 3,3 | 2,5 |
| Перфорин | 28,9 | 46,5 |
| CD8+Перфорин+ | 15,4 | 23,2 |
| Доля CD8 лимфоцитов с перфорином во всей популяции CD8 лимфоцитов | 35,7 | 63,4 |
Способ вакцинотерапии герпетической инфекции, заключающийся в том, что используют стандартную антигерпетическую вакцину, представляющую собой взвесь вирусов простого герпеса I и II типов, убитых формалином, отличающуюся тем, что дендритные клетки (ДК), полученные из крови пациента in vitro, «нагружают» вирусными антигенами, источником которых является данная вакцина; полученную вакцину вводят внутрикожно в 4-6 точек по ходу лимфатических коллекторов, курс вакцинотерапии состоит из 3-4 инъекций, интервалы между введениями вакцины составляют от 2 до 4 недель, первоначальная доза вакцины составляет 1×106-2×106 ДК, при втором введении дозу увеличивают в 2 раза, при третьем введении дозу увеличивают в 4 раза по сравнению с первым введением.
