Способ оценки содержания андростендиона в синцитиотрофобласте плаценты при обострении цитомегаловирусной инфекции на третьем триместре гестации

Авторы патента:

G01N33/48 - биологических материалов, например крови, мочи (G01N 33/02-G01N 33/14,G01N 33/26,G01N 33/44,G01N 33/46 имеют преимущество; определение всхожести семян A01C 1/02); приборы для подсчета и измерения клеток крови (гемоцитометры) (подсчет клеток крови, распределенных по поверхности, путем сканирования этой поверхности G06M 11/02)

Владельцы патента RU 2592243:

Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Дальневосточный научный центр физиологии и патологии дыхания" (RU)

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и может быть использовано для оценки содержания андростендиона в синцитиотрофобласте плаценты беременных при обострении цитомегаловирусной инфекции на третьем триместре гестации. Для этого в периферической крови измеряют титр антител к цитомегаловирусу, выполняют гистохимическую реакцию на активность андростендиондегидрогеназы. При титре антител класса G к цитомегаловирусу 1:1600 и снижении активности реакции на андростендиондегидрогеназу до 32,1±2,88 усл. ед. выявляют уменьшение содержания андростендиона в плаценте, отрицательно влияющее на развитие и созревание органов плода в период гестации. Способ позволяет оценить содержание андростендиона в плаценте при его простоте исполнения. 2 ил.

1. Цель изобретения - оценить характер влияния цитомегаловирусной инфекции на третьем триместре гестации на содержание андростендиона в синцитиотрофобласте ворсинок плаценты, приводящей к нарушению развития и созревания органов плода в период гестации.

2. Изобретение относится к медицине, а именно к разработке гистохимического способа определения снижения содержания андростендиона в синцитиотрофобласте ворсинок плаценты при обострении цитомегаловирусной инфекции в третьем триместре беременности.

3. Раскрытие изобретения

Во время гестации большое количество эстрогенов продуцируется из холестерина через образование ряда андрогенов - дегидроэпиандростерона и андростендиона. В плаценте основное количество андростендиона превращается в эстрон и далее в 17β-эстрадиол [7]. Поэтому уменьшение количества андростендиона приведет к нарушению формирования эстрона и эстрадиола в фетоплацентарной системе.

В третьем триместре беременности эстрогены необходимы для функционального созревания плаценты и плода. Они влияют на выработку других стероидных и белковых гормонов, контролируют экспрессию липопротеидов низкой плотности, стимулируют трансплацентарное окисление материнского кортизола, что приводит к созреванию у плода оси гипоталамус - гипофиз - надпочечник в конце беременности [5]. Эстрогены регулируют развитие легких, почек, печени, костной ткани и яичника плода [2, 5]. Снижение активности формирования эстрогеновых гормонов окажет влияние на развитие и созревание органов плода.

4. Новая техническая задача

Определить уровень содержания андростендиона в синцитиотрофобласте ворсинок при обострении цитомегаловирусной инфекции на третьем триместре гестации с целью оценки характера состояния фетоплацентарного барьера во время беременности, от чего зависит нормальное развитие и созревание органов плода.

5. В доступной литературе имеются упоминания об исследовании обмена андростендиона радиометрическим методом в плаценте при гипертензии у беременных [4], при токсемии беременности [6], при экспериментальной стрептококковой инфекции радиоиммунологическим методом [3]. Недостатком вышеупомянутых методов является необходимость дорогостоящей регистрирующей аппаратуры и реактивов: радиоактивных веществ, имеющих короткий срок хранения; соблюдение усиленных мер по технике безопасности, связанных с радиационным риском для персонала и окружающей среды. Биохимические методы не дают представления о месте локализации вещества.

В отличие от вышеприведенных прототипов в данной работе имеются существенные отличия: 1) анализ содержания андростендиона проводится с помощью гистохимической реакции, в качестве субстрата для которой используется андростендион; 2) изменения содержания андростендиона происходят под влиянием обострения цитомегаловирусной инфекции во время беременности. Метод прост в исполнении, не требует дорогостоящих реактивов, обладает хорошей разрешающей способностью и может быть рекомендован в проведении научно-исследовательских работ и лабораторной диагностики.

6. Осуществление изобретения

6.1. Обследованы 38 беременных женщин 18-25 лет с обострением хронической цитомегаловирусной инфекции в третьем триместре гестации, контрольную группу составили 30 беременных женщин с хронической цитомегаловирусной инфекцией в латентной стадии. У беременных женщин симптоматически цитомегаловирусная инфекция проявлялась в виде острого респираторного заболевания, сопровождающегося ринофарингитом. Клинический диагноз (обострение хронической цитомегаловирусной инфекции) устанавливается по результатам комплексного исследования периферической крови на наличие ДНК цитомегаловируса (ЦМВ), JgM или увеличение титра антител JgG в парных сыворотках (в 4 раза и более) в динамике через 10 суток, а также индекса авидности (более 65%). Исследования проводят с учетом требований Хельсинской декларации Всемирной медицинской ассоциации «Этические принципы проведения научных исследований с участием человека» с поправками 2008 г. и правилами клинической практики в РФ, утвержденными приказом Министерства РФ №266 от 19.06.2003 г.

6.2. Верификацию ЦМВ, определение типоспецифических антител, индекса авидности осуществляют методами ИФА на спектрофотометре «Stat Fax-2100» с использованием тест-систем ЗАО «Вектор-Бест» (Новосибирск), ДНК ЦМВ выявляют методами ПНР на аппарате ДТ-96 с использованием наборов НПО «ДНК-технология» (Москва).

6.3. Активность андростендиондегидрогеназы гистохимически определяют на криостатных срезах свежезамороженной нефиксированной ткани плаценты следующим методом. Метод основан на восстановлении соли тетразолия в формазан электронами, акцептируемыми от субстрата через кофермент НАДФ [1]. Субстратом служит 2 мМ раствор андростендиона «Sigma» (США). Для его приготовления 6 мг 4-андростен-3,17-диона растворяют в 10 мл Ν,Ν-диметилформамида Инкубационный раствор готовится на основе 0,1 M фосфатного буфера рН 7,2-7,4 с добавлением нитросинего тетразолия фирмы «ICN Biomedicals)) (США) в конечной концентрации 5 ммоль, НАДФ⁺ фирмы «Applichem» (Германия) - 1 ммоль.

Состав инкубационной среды:

0,1 M фосфатный буфер рН 7,2-7,4 - 1 мл;

нитросиний тетразолий - 1 мг;

НАДФ⁺ - 1 мг;

2 мМ раствор андростендиона - 0,1 мл.

6.4. В 1 мл инкубационного раствора помещают свежеприготовленные срезы ткани. Инкубацию проводят при 37°С в течение 30 минут. По окончании инкубации срезы промывают дистиллированной водой, фиксируют в 10%-ном нейтральном формалине при комнатной температуре, вновь промывают дистиллированной водой, подсушивают и заключают в глицерин-желатин. Контрольные срезы инкубировали в среде, содержащей вместо раствора андростендиона адекватное количество фосфатного буфера. Полученные гистологические препараты изучают цитофотометрическим компьютерным методом с помощью программы Scion (США) на цифровом микроскопе MEIJI (Япония).

6.5. Статистический анализ и обработка данных проводится с использованием пакета прикладных программ «Statistica 6.0». Характеристика вариационных рядов: средняя арифметическая (М), стандартная ошибка (m), коэффициент вариации 95%, доверительный интервал для средних значений M±m, где t определялось по таблице граничных значений критерия Стьюдента при доверительном уровне 95% и числе степеней свободы F=n₁+n₂-2. Для определения достоверности различий используется непарный параметрический критерий Стьюдента. Принимаются во внимание р<0,05; 0,01; 0,001. Для определения достоверности различий в случае негауссовых распределений - непараметрические критерии Колмогорова-Смирнова и Манна-Уитни.

7. Полученные данные

В процессе исследования получены следующие результаты. На гистохимических препаратах плаценты беременных, перенесших обострение хронической цитомегаловирусной инфекции в третьем триместре гестации, при регистрации роста титра антител класса G к цитомегаловирусу до 1:1600 отмечается снижение активности реакции, отражающей содержание андростендиона до 32,1±2,88 усл. ед. (фигура 1); (контроль - 54,2±4,31 усл. ед.) (фигура 2), что создает угрозу на развитие и созревание органов плода в период гестации.

Литература

1. Лойда З., Госсрау Р., Шиблер Т. Гистохимия ферментов. Лабораторные методы: пер. с англ. М.: Мир, 1982. 272 с.

2. Albrecht E.D., Pepe G.J. Central integrative role of oestrogen in modulating the communication between the placenta and fetus that results in primate fetal-placental development // Placenta. 1999. Vol.20, Is. 2. P. 129-139.

3. Gravett M.G., Haluska G.J., Cook M.J., Novy M.J. Fetal and maternal endocrine responses to experimental intrauterine infection in rhesus monkeys // Am. J. Obstet. Gynecol. 1996. Vol. 174, №6. P. 1725-1731.

4. Flannel M.E., Martin J.D., Michael C.A., Hahnel R. Metabolism of androstenedione by placental microsomes in pregnancy hypertension // Clin. Chim. Acta. 1989. Vol. 81, №1. P. 103-108.

5. Pepe G.J., Albrecht E.D. Central integrative role of oestrogen in the regulation of placental steroidogenic maturation and the development of the fetal pituitary-adrenocortical axis in the baboon // Hum. Reprod. Update. 1998. Vol.4, №4. P. 406-419.

6. Rahman S.A., Hingorani V., Laumas K. R. Biosynthesis of oestrogens and their inter-conversion in human placentae from normal and toxaemic pregnancies // Clin. Endocrinol. (Oxf). 1975. Vol.4, №4. P.333-341.

7. Strauss J.F., Martinez F., Kiriakidou M. Placental steroid hormone synthesis: unique features and unanswered questions // Biol. Reprod. 1996 Vol.54, №2. P. 303-311.

Способ оценки содержания андростендиона в синцитиотрофобласте плаценты беременных при обострении цитомегаловирусной инфекции на третьем триместре гестации, включающий определение в периферической крови титра антител к цитомегаловирусу, выполнение гистохимической реакции на андростендиондегидрогеназу, и при титре антител класса G к цитомегаловирусу 1:1600, снижении активности реакции на андростендиондегидрогеназу до 32,1±2,88 усл. ед. выявляют уменьшение содержания андростендиона в плаценте, отрицательно влияющее на развитие и созревание органов плода в период гестации.

Изобретение относится к области медицины, а именно лабораторной диагностике, и может быть использовано для оценки развития угрозы гемической анемии беременных. Для этого определяют количество ненасыщенных жирных кислот в эритроцитах периферической крови с последующей оценкой их функционального состояния.

Способ дифференциальной диагностики овариальной и адреналовой гиперандрогении у девочек пубертатного возраста // 2592235

Изобретение относится к медицине, а именно гинекологии и эндокринологии, и может быть использовано для дифференциальной диагностики овариальной и адреналовой гиперандрогении у девочек пубертатного возраста.

Способ определения содержания кадмия в печени крупного рогатого скота // 2591825

Изобретение относится к областям ветеринарии и может быть использовано для оценки степени аккумуляции кадмия в печени крупного рогатого скота. Для этого определяют концентрацию Μn в биосубстрате методом атомно-эмиссионной спектрометрии с индуктивно связанной плазмой.

Способ оценки эффективности и безопасности терапии при проведении клинических исследований // 2590989

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для оценки эффективности и безопасности терапии при проведении клинических исследований. Проводят анализ клинических или клинико-лабораторных показателей для каждого пациента из исследуемой группы.

Способ определения общих и полициклических ароматических углеводородов в компонентах экосистемы // 2589897

Изобретение относится к области экологической аналитической химии. Способ включает отбор проб массой 2-4 г, их сушку, измельчение и двухкратную экстракцию целевых компонентов дихлорметаном при воздействии на пробу ультразвуковых колебаний, фильтрование объединенного экстракта и упаривание досуха при давлении не выше 0,1 мм рт.ст.

Способ прогнозирования развития острого повреждения почек // 2589838

Изобретение относится к области медицины, конкретно к онкологии, и может быть использовано для раннего выявления острого повреждения почек и своевременного назначения соответствующей терапии.

Способ оценки энтеральной недостаточности при остром перитоните в эксперименте // 2589690

Изобретение относится к области медицины, а именно к экспериментальной хирургии, и может быть использовано для оценки энтеральной недостаточности при остром перитоните.

Неинвазивное обнаружение генетической аномалии плода // 2589681

Предложенная группа изобретений относится к области медицины. Предложены способ, машиночитаемый носитель и система для определения генетической аномалии плода, которая представляет собой анеуплоидию.

Способ окраски тромбоцитов после ультразвукового воздействия // 2589680

Изобретение относится к ветеринарии и медицине и может использоваться при неинвазивном исследовании крови животных с помощью ультразвуковых волн. Способ окраски тромбоцитов после ультразвукового воздействия включает обработку образцов крови ультразвуком от 30 с до 45 с, интенсивностью 0,4 Вт/см2, частотой 880 кГц, бегущей ультразвуковой волной, режим непрерывный, с последующим приготовлением мазков крови и их окраской дифференциальными красителями.

Способ прогноза риска развития гестационного сахарного диабета // 2589663

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству, и может быть использовано для прогноза риска развития гестационного сахарного диабета. При постановке на учет до срока 24 недели беременности оценивают: возраст, прегестационный индекс массы тела, количество беременностей и родов, наличие регрессирующей беременности, уровень гликемии венозной плазмы, наличие рождения крупных плодов.

Способ оценки индуцирующего действия цитомегаловирусной инфекции на активность липоевой кислоты в синцитиотрофобласте плаценты на третьем триместре гестации // 2592244

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и может быть использовано для оценки индуцирующего действия цитомегаловирусной инфекции на активность липоевой кислоты в синцитиотрофобласте плаценты на третьем триместре гестации. Для этого в периферической крови определяют титр антител к цитомегаловирусу и выполняют гистохимическую реакцию на выявление липоевой кислоты. При титре антител к ЦМВ до 1:1600 и снижении активности липоиддегидрогеназы до 23,50±0,95 усл. ед. развивается угроза функционирования плаценты и развития плода. Способ позволяет оценить индуцирующее действие цитомегаловирусной инфекции на активность липоевой кислоты в синцитиотрофобласте плаценты. 2 ил.

Способ дифференциальной диагностики заболеваний онкологического и не онкологического генеза // 2593015

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу дифференциальной диагностики заболеваний онкологического и не онкологического генеза. Сущность способа состоит в том, что исследуют электрофоретическую подвижность эритроцитов и при снижении электрофоретической подвижности эритроцитов менее чем на 49% от физиологической нормы диагностируют заболевание не онкологического генеза. При снижении электрофоретической подвижности эритроцитов более чем на 50% от физиологической нормы диагностируют заболевание онкологического генеза, при физиологической норме, равной 1,75±0,04 мкм·см/В·с. Использование заявленного изобретения позволяет повысить эффективность дифференциальной диагностики заболеваний онкологического и не онкологического генеза. 2 ил., 1 табл., 4 пр.

Способ выявления следов рук // 2593334

Изобретение относится к области судебной и криминалистической медицины и может быть использовано для выявления следов, имеющих органическое происхождение, а именно следов пальцев и ладоней. Для этого обрабатывают исследуемую поверхность направленным потоком реагента для выявления видимых окрашенных следов. Обработку проводят аэрозольным составом, содержащим 0,1-10% нингидрина, 1,0-30,0% метилэтилкетона или ацетона, 1,0-20,0% диэтилового эфира, 0,1-10% уксусной кислоты и этиловый или изопропиловый спирт в качестве растворителя нингидрина. В качестве пропеллента используют фреоны различных марок, пропан-бутановую смесь или азот. Изобретение позволяет выявлять отпечатки рук на различных гидрофобных и гидрофильных поверхностях. 1 з.п. ф-лы, 5 пр.

Способ биохимической оценки метаболических нарушений в желчи при литогенезе // 2593340

Изобретение относится к медицине и представляет собой способ оценки литогенности желчи, включающий определение в желчи у обследуемого (i) показателей холестерина (ХС, ммоль/л) в сравнении со средними значениями, принятыми за норму (k), отличающийся тем, что в желчи определяют комплекс общих липидов (ОЛ, г/л), суммарную антиокислительную активность (АОА) электрохимическим методом (в нА·с), максимум вспышки хемилюминесценции (МВХЛ, в усл. ед.) и площадь хемилюминесценции (ПХЛ, в усл. ед. площади), далее вычисляют интегральный показатель литогенности желчи (ИПЛi) по формуле: где Ki и Kk - коэффициент разведения - кратность разведения пробы желчи обследуемого и пробы желчи, принятой за норму, с ИПЛ не более 1,1 единиц литогенности - соответственно при определении АОА, и чем выше значение ИПЛi, тем более высокая степень литогенности желчи с риском развития холелитиаза. Способ позволяет оптимизировать выбор метода декомпрессии желчевыводящих путей, направленных на предупреждение ранней инкрустации эндопротезов, что позволяет повысить эффективность лечебных мероприятий. 6 пр.

Способ комбинированного лечения немелкоклеточного рака легкого 1в-111 стадии с персонификацией адъювантной химиотерапии // 2593342

Изобретение относится к медицине, а именно, к онкологии, и может быть использованго для комбинированного лечения немелкоклеточного рака легкого (НМРЛ) IB - III стадии. Способ включает проведение неоадъювантной химиотерапии, до ее начала проводят забор биопсийного материала опухоли, из которого выделяют тотальную РНК и определяют уровень экспрессии генов монорезистентности RRM1, TYMS, АВСС5, ERCC1, TOP1, ТОР2а, TUBB3 в ткани опухоли. На втором этапе проводят курсы неоадъювантной химиотерапии, на третьем этапе комбинированного лечения выполняют радикальную операцию в объеме пневмонэктемии или лобэктомии, во время которой производят забор образцов опухолевой ткани и визуально неизмененной ткани легкого/бронха, в которых проводят повторное определение уровней экспрессии генов монорезистентности, далее, в послеоперационном периоде на 15 сутки проводят адъювантную химиотерапию карбоплатином в дозе по AUC6 во 2-й день цикла, при уровне экспрессии гена монорезистентности ERCC1 менее 0,5, в комбинации с одним из цитостатиков, выбор которого зависит от уровня экспрессии исследуемых генов монорезистентности. Использование изобретения позволяет повысить эффективность лечения НМРЛ IB - III стадии. 1 ил., 4 пр.

Способ прогнозирования развития сердечно-сосудистых осложнений после перенесенного острого инфаркта миокарда с подъемом сегмента st у больных без тревожно-депрессивных расстройств // 2593792

Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии, и касается способа прогнозирования развития сердечно-сосудистых осложнений после острого инфаркта миокарда с подъемом сегмента ST без тревожно-депрессивных расстройств. Для этого с помощью биолюминесцентного метода в тромбоцитах определяют активность анаэробной реакции лактатдегидрогеназы (НАДН-ЛДГ), НАДН-зависимой реакции малат-дегидрогеназы (НАДН-МДГ) и НАД-зависимой изоцитратдегидрогеназы (НАДИЦДГ). Затем вычисляют коэффициент глико-лимонного отношения (КГЛО), представляющий собой отношение произведения НАДН-ЛДГ и НАДН-МДГ к активности НАДИЦДГ, то есть КГЛО = (НАДН - ЛДГ × НАДН - МДГ)/НАДИЦДГ. При значении КГЛО ниже 25,0 прогнозируют развитие сердечно-сосудистых осложнений у больных без тревожно-депрессивных расстройств. При значении, равном или выше 25,0, прогнозируют отсутствие сердечно-сосудистых осложнений. Способ обеспечивает раннее и достоверное прогнозирование возможного развития сердечно-сосудистых осложнений у данной группы больных. 2 пр. .

Блок датчиков // 2593797

Изобретение относится к области измерений для диагностических целей. Блок датчиков для проведения диагностических измерений, размещенных на поверхности тела, включает основание, содержащее выемку, в которой закреплен пьезоэлемент датчика давления. Блок также включает гибкую мембрану, установленную на основании и перекрывающую упомянутую выемку. К мембране с наружной стороны прикреплены первый и второй электроды. Первый электрод установлен напротив выемки с возможностью перемещения вместе с мембраной. Вокруг первого электрода выполнен второй неподвижный электрод. Между первым электродом и пьезоэлементом установлена центральная опора. Первый и второй электроды установлены с возможностью контакта с кожной поверхностью тела, причем к первому и второму электродам подсоединены электрические выводы датчика для измерения импеданса. Обеспечивается уменьшение габаритов блока датчиков. При этом повышается стабильность работы датчиков при увеличении их чувствительности. 10 з.п. ф-лы, 7 ил.

Способ взятия крови у шиншилл // 2593811

Изобретение относится к ветеринарии и предназначено для взятия крови у шиншилл. Шиншиллу фиксируют на животе с запрокинутой назад головой. Оттягивают кожные складки шеи на затылок. Удаляют волосы в области начала грудной клетки. Прокол внешней яремной вены осуществляют промытой раствором гепарина иглой 26-27G. Иглу вводят по направлению к основанию уха под углом 30-45 градусов, а лапы животного отводят в сторону специалиста, осуществляющего пункцию. Способ позволяет получить максимальное количество крови с минимальным травматическим воздействием. 1 пр.

Способ индивидуального прогнозирования антенатальной гибели плода с последующим выбором акушерской тактики // 2593981

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и гинекологии, и может быть использовано для индивидуального прогнозирования антенатальной гибели плода у беременных и выбора рациональной акушерской тактики в зависимости от результатов прогноза. У беременных на 32 неделе гестации выявляют наличие факторов, оказывающих влияние на течение и исход беременности: социально-биологические факторы, общий и акушерско-гинекологический анамнез, экстрагенитальные заболевания, особенности и осложнения настоящей беременности, состояние плода, результаты клинико-лабораторно-инструментального обследования беременных, ятрогенные дефекты при ведении настоящей беременности. Определяют в баллах в соответствии с прогностической таблицей антенатальной гибели плода их прогностические коэффициенты, обозначаемые знаком "+" в случае агрессивного характера фактора и знаком "-" в случае его протективного характера. Полученные прогностические коэффициенты суммируют. При сумме баллов "+13 или больше" прогнозируют антенатальную гибель плода. При таком прогнозе ежедневно проводят мониторинг состояния плода с помощью кардиотокографии с оценкой по шкале W. Fisher и дважды в неделю оценивают биофизический профиль плода по шкале A.M. Vintzeleos. При нормальном и удовлетворительном состоянии плода беременность пролонгируют, продолжая исследовать состояние плода в том же режиме. При сомнительном и неудовлетворительном состоянии плода пациентку родоразрешают путем операции кесарева сечения в течение 1-3 часов. При сумме баллов, равной "-13 или меньше", прогнозируют отсутствие антенатальной гибели плода, а беременность пролонгируют. При сумме баллов "больше -13 и меньше +13" прогноз считают неопределенным. При этом два раза в неделю проводят мониторинг состояния плода с помощью кардиотокографии и один раз в неделю оценивают биофизический профиль плода. При нормальном и удовлетворительном состоянии плода беременность пролонгируют, продолжая исследовать состояние плода в том же режиме. При сомнительном и неудовлетворительном состоянии плода пациентку родоразрешают путем операции кесарева сечения в плановом порядке. Способ позволяет точно, объективно и эффективно провести индивидуальное прогнозирование гибели плода во время беременности, оптимизировать акушерскую тактику за счет комплексной оценки и учета наиболее прогностически значимых факторов, а также оптимального режима мониторинга плода. 1 ил., 1 табл., 4 пр.

Способ прогнозирования течения апластической анемии после спленэктомии по индексу соотношения масс cd4+/cd8+ т-лимфоцитов селезенки // 2594119

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу прогнозирования течения апластической анемии после спленэктомии по индексу соотношения масс CD4+ и CD8+Т-лимфоцитов. Сущность способа состоит в том, что после спленэктомии определяют массу селезенки, морфометрически в гистологических срезах селезенки подсчитывают количество CD4+ и CD8+Т-лимфоцитов, вычисляют индекс соотношения масс CD4+/CD8+Т-лимфоцитам (ИСМ) по формулам. При значениях ИСМ селезенки >1,0 прогнозируют благоприятное течение апластической анемии, а при ≤1,0 - неблагоприятное течение заболевания. Использование заявленного способа позволяет повысить эффективность прогнозирования течения апластической анемии после спленэктомии. 3 пр.