Способ получения средства, обладающего стресспротективной и антиоксидантной активностью
Владельцы патента RU 2619856:
Николаев Сергей Матвеевич (RU)
Николаева Галина Григорьевна (RU)
Разуваева Янина Геннадьевна (RU)
Свиридов Иван Владимирович (RU)
Николаева Ирина Геннадьевна (RU)
Торопова Анюта Алексеевна (RU)
Шантанова Лариса Николаевна (RU)
Цыбиктарова Лилия Пурбуевна (RU)
Изобретение относится к фармацевтической промышленности и касается способа получения средства, обладающего стресспротективной и антиоксидантной активностью. Способ заключается в том, что траву серпухи васильковой, измельченную до размера 1,0-2,0 мм, экстрагируют трехкратно при температуре 60°C при соотношении сырья в мас.ч. и экстрагента в об.ч. 1:12. Первый контакт фаз - 70%-ным спиртом этиловым в течение 90 мин, второй контакт фаз - 40%-ным спиртом этиловым в течение 60 мин и третий контакт фаз - 20%-ным спиртом этиловым в течение 60 мин. Объединенные водно-спиртовые извлечения фильтруют, упаривают, очищают сепарированием, доупаривают, затем высушивают в вакуум-сушильном аппарате. Вышеописанный способ позволяет расширить ассортимент лекарственных средств растительного происхождения со стресспротективной и антиоксидантной активностью. 15 табл., 1 пр.
Изобретение относится к области фармации, и касается способа получения средства, обладающего антиоксидантной и стресспротективной активностью, на основе травы серпухи васильковой в виде экстракта сухого.
Одним из перспективным растительным источником адаптогенных средств является серпуха васильковая (Serratula centauroides L.) сем. Астровые (Asteraceae) [1, 2]. Известно, что серпуха васильковая содержит комплекс биологически активных веществ, среди которых выделяют экдистероиды [3, 4]. Экдистероиды - вещества, способные стимулировать синтез белка. В практической медицине средства, содержащие экдистероиды, применяют с целью повышения резистентности организма к действию агрессивных факторов, используются они для поддержания иммунного статуса человека, а также при трансплантации органов и тканей [1, 5]. Наличие экдистероидов характерно для папоротников, грибов, мхов, водорослей, голосеменных растений и насекомых. Из официнальных средств экдистероиды содержатся в препаратах левзеи сафлоровидной (Rhaponticum carthamoides (Wild) Iljin) семейства Астровые (Asteraceae), к ним относятся левзеи жидкий экстракт и препарат «Экдистен» [6]. Экстракт левзеи сафлоровидной жидкий обладает тонизирующим, актопротекторным, адаптогенным действиями, способствует усилению биосинтеза белка в организме, существенным недостатком которого является низкое содержание 20-гидроксиэкдистерона (массовая доля в среднем составляет 0,1%), что обусловливает менее выраженные антиоксидантное и стресспротективное действие по сравнению с заявленным средством [7].
Технический результат изобретения - расширение ассортимента лекарственных средств растительного происхождения, обладающих стресспротективной и антиоксидантной активностью, за счет использования широко распространенного растительного сырья травы серпухи васильковой (Serratula centauroides L.), имеющей надежную и обеспеченную сырьевую базу, а также повышение стресспротективной и антиоксидантной активности за счет увеличения выхода биологически активных веществ (экдистероидов) в заявленном средстве.
В качестве прототипа данного изобретения принят - экстракт левзеи сафлоровидной жидкий, который изготовлен из корневищ с корнями левзеи сафлоровидной в соотношении сырье и экстрагент 1:1 на 70% этаноле [6].
Недостатками указанного средства являются слабо выраженные стресспротективная и антиоксидантная активности по сравнению со средством, полученным по предлагаемому способу, а также низкое содержание экдистерона в экстракте жидком.
Для получения экстракта сухого растительный материал, состоящий из измельченной травы серпухи васильковой, экстрагируют трехкратно при соотношении сырья в мас.ч. и экстрагента в об.ч. 1:12. При первом контакте фаз используется экстрагент 70% спирт этиловый, экстракцию выполняют в течение 90 минут, при втором - 40% этиловый спирт в течение 60 минут и при третьем контакте фаз - 20% спирт этиловый в течение 60 минут. Экстракцию выполняют при температуре 60°C при всех контактах фаз. Спиртовое извлечение после экстракций упаривают до 1/3 от первоначального объема. Объединенные кубовые остатки от трех извлечений сепарируют. Полученный продукт доупаривают до 1/5 и высушивают в вакуум-сушильном шкафу. Выход готового продукта составляет 37,28% от массы растительного материала. Экстракт сухой, представляет собой аморфный порошок коричневого цвета со специфическим запахом, потеря в массе при высушивании не более 5%. Гигроскопичен. Данный способ получения достаточно прост, не требует сложной схемы очистки, позволяет получить продукт постоянного состава. Технология может быть внедрена на предприятиях по выпуску лекарственных препаратов.
В обеспечении антиоксидантного эффекта полученного средства важное значение придается флавоноидам, одним из ключевых свойств которых является их антиоксидантная активность. Флавоноиды способствуют подавлению процессов свободнорадикального окисления липидов, белков, нуклеиновых кислот и других соединений, а также торможению пероксидации [8, 9, 10].
Изучены факторы, которые оказывают влияние на процесс экстрагирования растительного материала - природа экстрагента, степень измельчения, соотношение сырье:экстрагент, температурный режим и продолжительность экстракции.
Количественная оценка велась по выходу экстрактивных веществ [11], экдистерона и суммы флавоноидов в пересчете на лютеолин-7-гликозид. Результаты исследования представлены в таблице 1.
Количественное содержание экдистерона проводили хроматоспектрофотометрическим методом. Для этого аналитическую пробу сырья измельчали до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 1 мм.
Около 1 г (точная навеска) измельченного сырья помещают в колбу со шлифом вместимостью 250 мл, прибавляют 50 мл 70% спирта. Колбу присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на кипящей водяной бане в течение 45 минут. Извлечение охлаждают до комнатной температуры и фильтруют через бумажный складчатый фильтр «красная лента», отбрасывая первые 10 мл фильтрата (раствор А).
1 мл раствора A помещают в стеклянную колонку высотой 250 мм и диаметром 20 мм с 12 г алюминия оксида для хроматографии II степени активности (по Брокману) и элюируют 95% спиртом в мерную колбу вместимостью 25 мл, доводят объем раствора 95% спиртом до метки и перемешивают (раствор Б).
Измеряют оптическую плотность раствора Б на спектрофотометре при длине волны 242±2 нм с толщиной слоя кюветы 10 мм. В качестве раствора сравнения используют 95% спирт. Параллельно в тех же условиях измеряют оптическую плотность раствора стандартного образца (СО) экдистерона (раствор В).
Содержание экдистерона на абсолютно сухое сырье в процентах (X) вычисляют по формуле:
где D - оптическая плотность испытуемого раствора;
D0 - оптическая плотность СО экдистерона;
m - масса сырья, г;
m0 - масса СО экдистерона, г;
W - влажность сырья, %.
Приготовление СО экдистерона:
Около 0,01 г (точная навеска) СО экдистерона растворяют в небольшом количестве 95% спирта в мерной колбе вместимостью 25 мл и доводят объем раствора до метки 95% спиртом.
1 мл раствора СО экдистерона помещают в стеклянную колонку высотой 250 мм и диаметром 20 мм с 12 г алюминия оксида для хроматографии II степени активности (по Брокману) и элюируют 95% спиртом в мерную колбу вместимостью 25 мл, доводят объем раствора 95% спиртом до метки и перемешивают (раствор В).
Количественное содержание флавоноидов проводили спектрофотометрическим методом с добавлением комплексообразующего реактива - 3% спиртового раствора алюминия хлорида.
Аналитическую пробу сырья измельчают до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 1 мм.
Около 1 г (точная навеска) измельченного сырья помещают в колбу со шлифом вместимостью 250 мл, прибавляют 100 мл 40% спирта этилового. Колбу взвешивают с погрешностью ±0,01 г, присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на кипящей водяной бане в течение 45 минут. После охлаждения до комнатной температуры, колбу вновь взвешивают и доводят объем до первоначальной массы 40% спиртом. Извлечение фильтруют через бумажный складчатый фильтр «красная лента», отбрасывая первые 10 мл фильтрата (раствор А).
1 мл раствора A помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, прибавляют 2 мл 3% спиртовой раствор алюминия хлорида и доводят объем раствора 40% спиртом до метки и перемешивают (раствор Б). В качестве раствора сравнения используют раствор, состоящий из 1 мл раствора A, доведенного 40% спиртом до метки в мерной колбе вместимостью 25 мл.
Через 45 мин измеряют оптическую плотность раствора Б на спектрофотометре при длине волны 400±5 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. Параллельно в тех же условиях измеряют оптическую плотность раствора СО лютеолин-7-гликозид.
Содержание суммы флавоноидов в пересчете на лютеолин-7-гликозид и абсолютно сухое сырье в процентах (X) вычисляют по формуле:
где D - оптическая плотность испытуемого раствора;
D0 - оптическая плотность СО лютеолин-7-гликозида;
m - масса сырья, г;
m0 - масса СО лютеолин-7-гликозида, г;
W - влажность сырья, %.
Приготовление СО лютеолин-7-гликозида:
Около 0,05 г (точная навеска) СО лютеолин-7-гликозида, предварительно высушенного при температуре 100-105°C в течение 2 часов, растворяют в небольшом количестве 70% спирта в мерной колбе на 25 мл и доводят объем раствора до метки 70% спиртом (раствор А). 1 мл раствора А помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, приливают 2 мл 3% спиртового раствора алюминия хлорида и доводят объем раствора до метки 70% спиртом (раствор Б).
Результаты проведенных исследований представлены в таблицах 1-5. Из данных таблицы 1 следует, что 70% этанол обеспечивает максимальный выход экдистерона, 40% этанол - флавоноидов, а 20% этанол и горячая вода - сумму экстрактивных веществ.
Нами предлагается использовать три экстрагента для полного истощения сырья - 70% этанол в первой экстракции, 40% этанол - во второй и 20% этанол - в третьей экстракции, которые позволят увеличить выход биологически активных веществ из сырья.
На процесс экстракции, качество вытяжки и полноту выхода биологически активных веществ большое влияние оказывает характер измельчения растительного сырья. Сырье подвергалось измельчению до размера частиц 0,5; 1,0; 2,0; 3,0 и 5,0 мм. Данные анализа представлены в таблице 2.
Наиболее оптимальным измельчением растительного сырья является степень измельчения 1,0-2,0 мм. Дальнейшее измельчение растительного материала нецелесообразно из-за затруднения экстрагирования (очень мелкий порошок образует с растворителем тестообразную массу, что затрудняет процесс фильтрации), а более крупное измельчение не рационально, так как в сырье замедляется процесс экстракции биологически активных веществ.
Изучена зависимость выхода суммы экстрагируемых веществ в различных соотношениях к количеству сырья. Экспериментальные данные свидетельствуют о том, что оптимальным соотношением сырья и экстрагента является 1:12 для однократного залива сырья. Дальнейшее увеличение соотношения нецелесообразно ввиду незначительного повышения выхода действующих веществ, а также в связи с увеличением расхода экстрагента (таблица 3).
Изучено влияние температурного режима на выход экстрактивных и биологически активных веществ. Из данных таблицы 4 видно, что повышение температуры увеличивает выход веществ. Для получения экстракта сухого выбрана температура 60°C, которая обеспечивает оптимальное извлечение биологически активных веществ. Большее повышение температуры с одной стороны может привести к разрушению термолабильных веществ, ухудшению растворения или испарению некоторых веществ (например, эфирных масел), переходу в извлечение большого количества балластных веществ, с другой стороны - увеличивает энергозатратность производства готового продукта (таблица 4).
Для определения продолжительности экстракции изучено время наступления равновесной концентрации в системе сырье-экстрагент при трехкратной экстракции разными типами экстрагента. Для этого массу навески сырья экстрагировали последовательно спиртом 70%, 40% и 20% в соотношении 1:12 на водяной бане при температуре 60°C при постоянном перемешивании с обратным холодильником. После первого контакта фаз 70%-ым этанолом через заданные промежутки времени (15, 30, 45, 60, 75, 90 мин.) извлечения фильтровали, определяли содержание суммы экстрактивных веществ, экдистерона и флавоноидов. Затем проводили две последующие экстракции отжатого сырья при тех же промежутках времени, заливая во 2-ом контакте фаз - 40% спирт, а в 3-ем контакте - 20% спирт в количестве, равном объему предыдущих слитых извлечений. Извлечения также анализировали на содержание суммы экстрактивных веществ, экдистерона и флавоноидов (таблица 5).
По результатам данных таблицы 5 видно, что равновесное состояние наступает при 1-ом контакте фаз через 90 мин, при 2-ом и 3-ем контакте фаз через 60 мин.
Пример способа получения экстракта сухого: 1 кг травы серпухи васильковой измельчают на мельнице до размера частиц диаметром 1,0-2,0 мм. Измельченное сырье загружают в экстракционный аппарат с мешалкой и внешним паровым обогревом. Заливают 12 л 70%-ным спиртом этиловым в соотношении сырье:экстрагент 1:12. Первую экстракцию выполняют при температуре 60°C в течение 90 мин при постоянном перемешивании. Извлечение фильтруют через серошинельное сукно в сборник. Вторую экстракцию выполняют в течение 60 мин при температуре 60°C, подавая в экстрактор 10 л 40%-ного спирта этилового. Третью экстракцию выполняют 20%-ным спиртом этиловым в течение 60 мин при той же температуре, объем экстрагента 10,1 л. В результате экстракции получаем извлечения в количестве 10,0 л (1-ый слив); 10,1 л (2-ой слив); 10,1 л (3-ий слив). Водно-спиртовое извлечение после первого контакта фаз последовательно порциями упаривают примерно до 1/3 первоначального объема. Извлечения после второго и третьего контакта фаз также упаривают до 1/3 объема. Объединенные кубовые остатки от трех извлечений подвергают очистке сепарированием. Очищенный экстракт доупаривают до 1/5 первоначального объема и сушат на нержавеющих противнях в вакуумной сушилке при 65-70°C 8 ч. Получают 372,8 г экстракта сухого.
Экстракт сухой, представляет собой аморфный порошок коричневого цвета со специфическим запахом, потеря в массе при высушивании не более 5%. Гигроскопичен.
Качественно экдистероиды обнаруживали в водно-спиртовом растворе экстракта методом восходящей тонкослойной хроматографией в сравнении с достоверным образцом экдистерона в системе растворителей хлороформ - 95% спирт этиловый (4:1). Хроматограммы высушивали на воздухе, обрабатывали ванилин-серным реактивом и нагревали в сушильном шкафу при температуре 100-105°C в течение 10 минут и наблюдали пятно желто-зеленого цвета на белом фоне пластинки на уровне пятна СО экдистерона (Rf≈0.39).
Проведен сравнительный анализ количественного содержания экдистерона в экстракте жидком левзеи сафлоровидной [6] и в экстракте сухом из травы серпухи васильковой.
Методика.
Около 0,3 г (точная навеска) экстракта сухого растворяют в мерной колбе вместимостью 50 мл в небольшом количестве 70% спирта при нагревании, после растворения охлаждают и доводят объем колбы до метки и тщательно перемешивают. Извлечение фильтруют через бумажный складчатый фильтр «красная лента», отбрасывая первые 10 мл фильтрата (раствор А).
1 мл раствора А (или 1 мл экстракта жидкого) помещают в стеклянную колонку высотой 250 мм и диаметром 20 мм с 12 г алюминия оксида для хроматографии II степени активности (по Брокману) и элюируют 95% спиртом в мерную колбу вместимостью 25 мл, доводят объем раствора 95% спиртом до метки и перемешивают (раствор Б).
Измеряют оптическую плотность раствора Б на спектрофотометре при длине волны 242±2 нм с толщиной слоя кюветы 10 мм. В качестве раствора сравнения используют 95% спирт. Параллельно в тех же условиях измеряют оптическую плотность раствора СО экдистерона (раствор В) (см. выше).
Содержание экдистерона в экстракте сухом в процентах (X) вычисляют по формуле:
где D - оптическая плотность испытуемого раствора;
D0 - оптическая плотность РСО экдистерона;
m - масса экстракта сухого или 1 мл экстракта жидкого, г;
m0 - масса PCO экдистерона, г;
W - влажность сырья, %.
Приготовление РСО экдистерона и измерение его оптической плотности см. выше. Содержание экдистерона в экстракте жидком в процентах (X) вычисляют по формуле:
Влияние экстракта сухого серпухи васильковой на устойчивость к психоэмоциональному стрессу
Эксперименты проведены на крысах линии Wistar обоего пола массой 180-200 г. Модель стресса воспроизводили в бассейне путем погружения животных в воду (25 С) по мечевидный отросток на 4 часа [12]. Крысы были свободно заключены в пластиковые пеналы (длина - 16,5 см, внутренний диаметр - 5,5 см), где животные могли изменять положение тела. Животным опытной группы 1 внутрижелудочно вводили водный раствор экстракта сухого серпухи васильковой (СЭСВ) в дозе 100 мг/кг в течение 7 дней до стрессорного воздействия (1 раз в день за 30 минут до кормления). Животные контрольной группы получали эквиобъемное количество дистиллированной воды по аналогичной схеме. В качестве препарата сравнения использовали деалкоголизированный экстракт жидкий левзеи сафлоровидной в дозе 5 мл/кг. На 7 сутки эксперимента животных опытных групп и контроля подвергали психо-эмоциональному стрессу. После эксперимента животных декапитировали под легким эфирным наркозом.
Интенсивность процессов свободнорадикального окисления биомакромолекул определяли по содержанию малонового диальдегида (МДА) в сыворотке крови [13]. О состоянии антиоксидантной системы судили по активности каталазы в сыворотке крови [14] и содержанию восстановленного глутатиона (ВГ) в цельной крови [15]. Содержание адренокортикотропного гормона (АКТГ) в плазме крови, альдостерона и кортизола в сыворотке крови определяли методом твердофазного иммуноферментного анализа на анализаторе "DSX" (США) с применением наборов: «Стероид ИФА-кортизол-01», «Aldosterone ELISA», «DRG АСТН ELISA». Полученные данные представлены в таблицах 7-8.
Установлено, что курсовое введение животным СЭСВ в дозе 100,0 мг/кг оказывало выраженное антистрессорное действие на фоне 4-часового эмоционального стресса, о чем свидетельствует достоверное уменьшение выраженности признаков «триады Селье» (табл. 7-8). У животных, получавших испытуемый экстракт, наблюдалось уменьшение выраженности признаков «триады Селье»: масса надпочечников у крыс этой группы была на 37% меньше, чем в контроле, а масса тимуса и селезенки была соответственно на 37 и 27% больше аналогичных показателей у крыс контрольной группы и практически оставалась на уровне физиологической нормы. Эффективность испытуемого экстракта по показателям инволюции иммунокомпетентных органов была выше, чем у препарата сравнения; а по показателю влияния на массу надпочечников эффективность экстракта левзеи одноцветковой была аналогичной таковой у препарата сравнения.
Наряду с этим, превентивное введение экстракта серпухи васильковой оказывало выраженное гастропротективное действие, задерживая развитие глубоких деструкций слизистой оболочки желудка белых крыс (табл. 8).
Вместе с тем, курсовое введение испытуемого средства сопровождается снижением активности гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой системы (табл. 9), о чем свидетельствует уменьшение концентрации АКТГ и кортизола в среднем на 34% по сравнению с данными животных контрольной группы. Кроме того, в крови животных опытной группы отмечается снижение уровня альдостерона на 36% по сравнению с контролем, что указывает на ограничение активности ренин-ангиотензин-альдостероновой системы под влиянием испытуемого средства. Активность испытуемого средства сопоставима с таковой у препарата сравнения - экстракта жидкого левзеи сафлоровидной.
В предупреждении и коррекции стрессорных повреждений важную роль играет антиоксидантная стресс-лимитирующая система организма белых крыс. При исследовании влияния СЭСВ на интенсивность процессов свободнорадикального окисления биомакромолекул при эмоциональном стрессе установлено, что под его влиянием концентрация МДА снижается в 1,5 раза, а содержание восстановленного глутатиона повышается в 2,2 раза; активность каталазы увеличивается на 34% по сравнению с аналогичными показателями крыс контрольной группы. При этом стресс-протективная и антиоксидантная активность испытуемого средства была сопоставима с таковой у препарата сравнения - экстракта жидкого левзеи сафлоровидной (табл.10).
Таким образом, СЭСВ в дозе 100 мг/кг обладает выраженным стресс-протективным действием, в значительной степени ограничивая активацию центральных стресс-реализующих систем: симпатоадреналовой и гипоталамо-гипофизарно-адреналовой, а также повышает активность эндогенной антиоксидантной системы.
Антиоксидантная активность экстракта сухого серпухи васильковой в условиях in vitro
Антиоксидантную активность в модельных системах in vitro оценивали по способности СЭСВ связывать свободные радикалы: супероксидный анион-радикал (), радикал оксида азота (NO), 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (2,2-дифенил-1-пикрилгидразил) - радикал (DPPH) и ингибировать Fe2+ - индуцированный процесс перекисного окисления липидов.
Связывание - анион-радикала определяли по методу A.-S. Chen и соавт. [16], в неэнзиматической системе феназин метосульфат - НАДФ с последующей спектрофотометрической регистрацией количества окисленного тетразолия нитросинего. Антирадикальное действие по отношению к NO определяли по методу R. Govindarajan и соавт. [17], заключающегося в связывании веществом (препаратом) NO нитропруссида натрия с последующей спектрофотометрической регистрацией остаточного содержания NO реактивом Грисса. Связывание DPPH-радикала проводили спектрофотометрическим методом по методу A. Seyoum и соавт. [18] со спиртовым раствором радикала DPPH при длине волны 520 нм. В присутствии донора водорода 2,2-дифенил-1-пикрилгидразил восстанавливается с утратой специфической окраски. Антиокислительную активность в условиях in vitro оценивали по ингибированию Fe2+-индуцированного процесса перекисного окисления липидов в суспензии желточных липопротеидов [19].
В качестве препарата сравнения был взят деалкоголизированный экстракт жидкий левзеи сафлоровидной (ООО НПП Камелия, Россия). Результаты экспериментов подвергали логарифмированию по концентрационной шкале с последующим регрессионным анализом и определением величины 50% связывания радикала (IC50).
Полученные данные приведены в таблицах 11-14.
Как следует из таблицы 11, концентрация 50% ингибирования супероксидного анион-радикала для сухого экстракта серпухи васильковой составляет 77,3 мкг/мл (IC50=77,3 мкг/мл). Таким образом, СЭСВ проявляет более выраженную активность в отношении связывания супероксидного анион-радикала в условиях in vitro, превосходящую таковую препарата сравнения - жидкого экстракта левзеи сафлоровидной (IC50=150,3 мкг/мл).
Из таблицы 12 видно, что испытуемое фитосредство обладает NO-связывающей активностью, превосходящей таковую препарата сравнения. Так, концентрация 50% связывания молекул NO для сухого экстракта серпухи васильковой составила 557,8 мкг/мл (IC50=557,8 мкг/мл), а для препарата сравнения - жидкого экстракта левзеи сафлоровидной 610,5 мкг/мл (IC50=610,5 мкг/мл).
Установлено, что СЭСВ проявляет выраженную антирадикальную активность в отношении связывания DPPH-радикала (IC50=51,9 мкг/мл). При этом антирадикальная активность исследуемого сухого экстракта превосходит таковую активность препарата сравнения (IC50=60,2 мкг/мл).
Как следует из данных, приведенных в таблице 14, внесение СЭСВ в инкубационную среду способствует снижению интенсивности Fe2+-индуцированного процесса перекисного окисления липидов. При этом антиокислительная активность испытуемого фитосредства (IC50=166,7 мкг/мл) значительно превосходит таковую активность препарата сравнения - жидкого экстракта левзеи сафлоровидной (IC50=258,5 мкг/мл).
Исследуемый сухой экстракт серпухи васильковой в условиях in vitro обладает умеренно-выраженной антиокислительной активностью.
Таким образом, сухой экстракт серпухи васильковой в дозе 100 мг/кг обладает выраженным стресс-протективным действием, в значительной степени ограничивая активацию центральных стресс-реализующих систем: симпатоадреналовой и гипоталамо-гипофизарно-адреналовой, а также повышает активность эндогенной антиоксидантной системы. В условиях in vitro испытуемое фитосредство проявляет антиоксидантную активность, инактивируя свободные радикалы (, NO, DPPH-радикал), а также ингибируя Fe2+-индуцированный процесс перекисного окисления липидов.
Литература
1. Николаева Г.Г., Шантанова Л.Н., Николаева И.Г., Раднаева Л.Д., Гармаева Л.Л., Цыбиктарова Л.П. Левзея одноцветковая и серпуха васильковая перспективные экдистероидсодержащие растения // Бюллетень ВСНЦ СО РАМН. - 2014. - №3 (97). - С. 91-96.
2. Фитоэкдистероиды / под ред. В.В. Володина. - Санкт-Петербург: Наука, 2003. - С. 293.
3. Буданцев, А.Л. Растительные ресурсы России: Дикорастущие цветковые растения, их компонентный состав и биологическая активность: Том 5. Семейство Asteraceae / А.Л. Буданцев - СПб.; М.: Товарищество научных изданий КМК, 2013. - 312 с.
4. A.N. Vorob'eva, V.G. Rybin, E.V. Zarembo, and E.V. Boltenkov, Chem. of Natur. Comp., No. 1, 105 (2005).
5. Пунегова Н.В. Фармакологические свойства препарата экдистероидов серпухи венценосной / Н.В. Пунегова // Сборник научных работ студентов и молодых ученых ЯГМА. - Ярославль, 2004. - С. 78.
6. Машковский М.Д. Лекарственные средства. - 16-е изд., перераб., испр. и доп. - М.: Новая волна, 2012. - 1216 с.
7. Патент РФ №2321420 от 20.07.2006
8. Корулькин Д.Ю., Абилов Ж.А., Музычкина Р.А., Толстиков Г.А. Природные флавоноиды. - Новосибирск: Академическое издательство «Гео», 2007. - 232 с.;
9. Макарова М.Н., Макаров В.Г. Молекулярная биология флавоноидов (химия, биохимия, фармакология): руководство для врачей. - СПб., 2010. - 428 с.;
10. Муравьева Д.А., Самылина И.А., Яковлев Г.П. Фармакогнозия: учебник. - М.: Медицина, 2002. - 656 с.
11. Государственная фармакопея СССР XI издание. Т. 1.- Москва, 1987. - С. 295 - 13 изд
12. Overmier, J. The ulcerogenic effect of a rest period after exposure to water-restraint stress / J. Overmier, R. Murison, H. Ursin // Behav. Neural. Biol. - 1986. - Vol. 46. - P. 372-386
13. Темирбулатов P.А. Метод определения интенсивности свободнорадикального окисления липид-содержащих компонентов крови и его диагностическое значение / Р.А. Темирбулатов, Е.И. Селезнев // Лабор. дело. - 1981. - №4. - С. 209-211
14. Королюк М.А. Методы определения активности каталазы / М.А. Королюк, Л.И. Иванова, И.Г. Майорова и др. // Лабор. дело. - 1988. - №1. - С. 16-19
15. Anderson R.L. Nonoleguric acute renal failure / R.L. Anderson, S.L. Linas, A.S. Berns et al. // N. Engl. J. Med. - 1977. - Vol. 236. - P. 1134
16. Chen A.-S. Antioxidant activities of chitibiose and chititriose / A.-S. Chen, T. Taguchi, K. Sakai, K. Kikuchi, M.-W. Wang, I. Miwa // Biological & Pharmaceutical Bulletin. - 2003. - V. 26. - P. 1326-1330
17. Govindarajan R. Studies on the antioxidant activities of Desmodium gagenticum / R. Govindarajan, S. Rastogi, M. Vijayakumar // Biological & Pharmaceutical Bulletin. - 2003. - V. 26. - P. 1424-1427
18. Seyoum A. Structure-radical scavenging relationships of flavonoids / A. Seyoum, K. Asres, F.K. El-Fiky // Phytochemistry. - 2006. - Vol. 67. - N 18. - P. 2058-2070
19. Lee Sang-Myung, Na Min-Kyun, An Ren-Bo, Min Byung-Sun, Lee Hyeong-Kyu Antioxidant Activity of Two Phloroglucinol Derivatives from Dryopteris crassirhizoma // Biol. Pharm. Bull. - 2003. - Vol. 26, N 9. - P. 1354-1356
Способ получения средства, обладающего стресспротективной и антиоксидантной активностью, в котором растительный материал травы серпухи васильковой, измельченный до размеров 1,0-2,0 мм, экстрагируют трехкратно при температуре 60°C при соотношении сырья в мас.ч. и экстрагента в об.ч. 1:12, при этом первый контакт фаз - 70%-ным спиртом этиловым в течение 90 мин, второй контакт фаз - 40%-ным спиртом этиловым в течение 60 мин и третий контакт фаз - 20%-ным спиртом этиловым в течение 60 мин, далее объединенные водно-спиртовые извлечения фильтруют, упаривают, очищают сепарированием, доупаривают, затем высушивают в вакуум-сушильном аппарате.