Способ синтеза белка в культуре бактериальных клеток

Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к способу синтеза белка в культурах бактериальных клеток. Способ включает модификацию поверхности клеток методом послойной адсорбции противоположно заряжённых полимеров и последующее термостатирование культуры клеток. Культуру клеток используют в количествах 106 – 1020 КОЕ/мл. Перед нанесением и после нанесения полимеров клетки промывают растворами с ионной силой в диапазоне 0–0,155 моль/л. В качестве положительно заряженного полимера используют полилизин, протамин сульфат, полиаллиламин гидрохлорид, полиэтиленимин, полидиаллилдиметиламмоний хлорид или хитозан. В качестве отрицательно заряженного полимера используют альгинат, гиалуроновую кислоту, полиакриловую кислоту, полистиролсульфонат натрия, полимолочную кислоту, полиглутаминовую кислоту или сульфат целлюлозы. Концентрации полимеров выбирают в диапазоне 0,1 мг/мл – 10 мг/мл. Клетки инкубируют в растворе полимеров в течение 4–15 мин. В случае использования центрифугирования реакционный объем смеси выбирают в диапазоне 0,5 мл – 1 л и центрифугируют в диапазоне 700–10000 g в течение 30 с – 5 мин. В случае фильтрования реакционный объем смеси выбирают в диапазоне 1 л – 50 л и используют фильтрующие материалы с размером пор не менее 0,45 мкм. Изобретение позволяет увеличить количество синтезируемого белка в различных видах культур бактериальных клеток без снижения выживаемости клеток. 1 з.п. ф-лы, 4 ил., 4 пр.

 

Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к выращиванию бактерий на питательной среде с целью увеличения количества белковых компонентов в клеточных культурах.

Известен способ промышленного культивирования штаммов E.coli, полученных на основе штамма bl21(de3), несущего ген t7 rna полимеразы под контролем lacuv5 промотора, с повышенным синтезом биомассы и выходом целевого белка в тельцах включения (см. патент на изобретение RU 2473683, МПК C12N 1/21). Способ предусматривает выращивание инокулята на основе штамма BL21(DE3) E.coli, несущего ген Т7 RNA полимеразы под контролем lacUV5 промотора, до середины логарифмической фазы роста на питательной среде с использованием в качестве источника углерода глюкозы в концентрации 10 г/л при температуре 38°С, перемешивании 200 об/мин в течение 3 ч, засев ферментера инокулятом с посевной дозой 10%, культивирование микроорганизмов при 38°С, концентрации растворенного кислорода 80% при максимальной скорости перемешивания 1200 об/мин, максимальном уровне аэрации 1 объем воздуха/мин: 1,2 объема культуральной жидкости, рН 7,00; окончание ферментации на 12-13 ч культивирования; осаждение клеток штамма-продуцента E.coli. Вначале культивирования добавляют 50%-ный (мас. %) раствор глюкозы, в середине логарифмической фазы роста производят порционную добавку 80%-го (мас. %) раствора глицерина и с конца логарифмической фазы роста культуры осуществляют дробные добавки 25%-ного (мас. %) раствора лактозы. После культивирования содержащую рекомбинантные целевые белки в виде нерастворимых тел включения биомассу осаждают. Изобретение позволяет повысить выход биомассы и целевого белка с единицы объема культуральной среды.

Наиболее близким к заявляемому является способ увеличения производства белка (см. заявку на изобретение WO 8606410, МПК С12Р 21/02). Способ обеспечивает увеличение количества получаемого белка путем культивирования кишечной палочки, имеющей выраженный вектор, который содержит структурный ген белка. Способ включает в себя выращивание кишечной палочки на среде, содержащей источник ионов железа, марганца или их смеси, и источник азота природного происхождения для увеличения количества белка свободного от метионина, соответствующего поступательному стартовому ко дону ATG. Где этот белок, свободный от метионинового остатка, может быть получен в увеличенном количестве и соответствует инициирующему кодону ATG.

Однако существенным недостатком данных способов является использование геномодифицированных организмов для увеличения количества синтезируемого белка на селективных питательных средах.

Техническая проблема настоящего изобретения заключается в разработке способа синтеза белка без внедрения генетических векторов, обеспечивая расширение арсенала способов синтеза белка в биотехнологии.

Технический результат заявляемого изобретения заключается в увеличении количества синтезируемого белка в различных видах культур бактериальных клеток за счет покрытия поверхности бактериальных клеток полимерными слоями и последующим выращиванием клеток на питательной среде.

Технический результат достигается тем, что в способе синтеза белка в культуре бактериальных клеток, включающем выращивание клеток на питательной среде, согласно решению, на поверхность выращенных клеток наносят положительно заряженный слой полимера путем инкубирования в растворе положительно заряженного полимера, центрифугируют или фильтруют, промывают, затем на поверхность клеток наносят отрицательно заряженный слой полимера путем инкубирования в растворе отрицательно заряженного полимера, центрифугируют или фильтруют, промывают; нанесение слоев повторяют до получения необходимого их количества и заданного размера клеточных агрегатов; после чего клетки, покрытые полимерными слоями, помещают на питательную среду, выращивают и отделяют полученный продукт, при этом культуру используют в количествах 106-1020 кое/мл, клетки промывают перед нанесением полимеров и после их нанесения растворами с ионной силой в диапазоне 0-0.155 моль/л, концентрации полимеров выбирают в диапазоне 0.1 мг/мл-10 мг/мл, клетки инкубируют в растворе полимеров в течение 4-15 минут.

В качестве положительно заряженного полиэлеткролита используют полилизин, или протамин сульфат или полиаллиламин гидрохлорид или полиэтиленимин или полидиаллилдиметиламмоний хлорид или хитозан.

В качестве отрицательно заряженного полимера используют альгинат или гиалуроновую кислоту или полиакриловую кислоту или полистиролсульфонат натрия или полимолочную кислоту, или полиглутаминовую кислоту или сульфат целлюлозы.

Оптимальную температуру для покрытия выбирают в диапазоне от 2 до 46°С.

В случае использования центрифугирования реакционный объем смеси выбирают в диапазоне 0.5 мл - 1 л и центрифугируют в диапазоне 700-10000g в течение 30 сек - 5 минут, в случае использования метода фильтрования, выбирают в диапазоне 1 л - 50 л и используют фильтрующие материалы с размером пор не менее 0.45 микрон.

Размер клеточных агрегатов варьируют от 5 до 200 микрон. Изобретение поясняется чертежами

На фиг. 1 - представлена относительная интенсивность зеленого флуоресцирующего белка в клетках, покрытых полимерными оболочками и контрольных клетках (E.coli Тор 10) при наблюдении на конфокальном микроскопе: а) флуоресценция контрольных клеток, которая находятся на уровне 40-50 относительных единиц, б) флуоресценция клеток с увеличенным содержанием, которая достигает значения в 255 относительных единиц.

На фиг. 2 и фиг. 3 - представлены образцы клеток с увеличенным содержанием белка (наиболее яркие при увеличенном размере) и контрольных клеток.

На фиг. 4 - представлено спектрофотометрическое измерение флуоресценции популяции покрытых полимерными оболочками и контрольных клеток в питательной среде. Значения флуоресценции белка покрытых клеток составляли 103027±11659 в стационарной фазе роста, значения флуоресценции белка контрольных клеток 51492±2980, т.е. увеличение содержания белка составляло порядка 2 раз. Измерения проводились с целью дополнительного подтверждения увеличения количества синтезируемого белка в клетках с модифицированным покрытием, по сравнению с контрольными клетками.

Способ представляет собой процедуру нанесения полимерных слоев на поверхность клеток с целью увеличения количества синтезируемых белковых компонентов клеток. Способ включает в себя модификацию поверхности клеток методом послойной адсорбции противоположно заряженных полимеров и последующим термостатированием культуры до температуры оптимальной для роста. Нанесение слоев продолжается до достижения заданных технологических параметров, в частности, количества синтезируемого белка, количества и заданного размера клеточных агрегатов. Необходимо отметить, что нанесение большего числа слоев приводит к увеличению содержания белка в клетках, но в тоже время увеличивает продолжительность и трудоемкость проведения операций.

Способ увеличения синтеза белка в культурах бактериальных клеток заключается в следующем.

Выращенную культуру в количестве 10-10 кое/мл промывают растворами с ионной силой в диапазоне 0-0.155 моль/л. Для инкапсуляции бактерий, основанной на электростатическом взаимодействии поверхности клетки с полимером, используют пары противоположно заряженных полимеров. В качестве положительно заряженных полиэлеткролитов используют полилизин, или протамин сульфат, или полиаллиламин гидрохлорид, или полиэтиленимин, или полидиаллилдиметиламмоний хлорид или хитозан.

А в качестве отрицательно заряженных полимеров используют альгинат или гиалуроновую кислоту или полиакриловую кислоту или полистиролсульфонат натрия или полимолочную кислоту, или полиглутаминовую кислоту или сульфат целлюлозы. Полимеры растворяют в деионизованной воде в диапазоне концентраций 0.1 мг/мл-10 мг/мл и при необходимости доводят до оптимального значения рН для бактериальной культуры. Раствор положительно заряженного полимера добавляют к приготовленной культуре в объемном соотношении 1:1, где реакционный объем находится в интервале 0.5 мл - 1 л (в случае центрифугирования) и инкубируют в течение 4-15 минут в диапазоне температур 2-46°С. Инкубированный образец центрифугируют в диапазоне 900-10000g в течение 30 сек - 5 минут. Данный способ может быть также осуществлен методом фильтрования, реакционный объем которого находится в диапазоне 1 л - 50 л, и где используют фильтрующие материалы с размером пор не менее 0.45 микрон.

Затем к полученному раствору добавляют отрицательно заряженный полимер в объемном соотношении 1:1 и инкубируют в течение 4-15 минут и промывают. Отличие промывки в случае отрицательного полимера заключается лишь в разнице для скорости и времени центрифугирования, которые используются в заданных диапазонах (900-10000 g в течение 30 сек - 5 минут), данный шаг также возможно заменить методом фильтрации. Эту процедуру повторяют до достижения желаемого числа слоев. Полученную биомассу помещают на питательную среду при оптимальной температуре для роста. Размер клеточных агрегатов, полученных в ходе данного способа, с увеличенным содержанием белков может варьироваться от 5 до 200 микрон. Выживаемость культуры подтверждают с использованием методов конфокальной микроскопии и спектрофотометрических измерений.

Примеры практической реализации способа. Пример 1.

Приготовление полимеров.

Для данного примера инкапсуляции использовали пары противоположно заряженных полимеров полиэтиленимин и полистиролсульфонат натрия, которые разбавляют в деионизованной воде в конечной концентрации 2.5 мг/мл. Полученные растворы помещают в ультразвуковую ванну на 15 мин. В дальнейшем полимеры титруют до значения рН=7.

Инкапсуляция.

Изначально, раствор полиэтиленимина добавляют к промытым клеткам, в количестве 1012 кое/мл в объемном соотношении 1:1 (реакционной объем смеси 2 мл) и инкубируют в течение 5 минут при комнатной температуре (25°С). После чего клетки центрифугируют при 700 g в течение 2 мин. Осажденную на поверхности культуру промывают 2 раза в растворе хлорида натрия (0.155 моль/л) и ресуспензируют клетки в объеме раствора путем промывки. После покрытия первым полимером, клетки инкубируют в растворе полистиролсульфоната натрия в объемном соотношении 1:1, используя те же условия. Промывку производят аналогичным образом кроме времени и силы центрифугирования, которые были 3 мин и 1500 g соответственно для формирования достаточно плотного слоя клеток. Эту процедуру повторяют до достижения 6 слоев. Пример 2.

Приготовление полимеров.

В данном примере использовали пары противоположно заряженных полимеров полиаллиламин гидрохлорид и полиакриловая кислота, которые разбавляют в деионизованной воде в конечной концентрации 10 мг/мл. Полученные растворы помещают в ультразвуковую ванну на 15 мин. В дальнейшем полимеры титруют до значения рН=7.

Инкапсуляция.

Изначально, раствор полиаллиламин гидрохлорида добавляют к промытым клеткам, в количестве 1020 кое/мл в объемном соотношении 1:1 (реакционной объем смеси 500 мл) и инкубируют в течение 15 минут при температуре 46°С. После чего клетки центрифугируют при 6000 g в течение 5 мин. Осажденную на поверхности культуру промывают 2 раза в растворе хлорида натрия (0.0775 моль/л) и ресуспензируют клетки в объеме раствора путем промывки. После покрытия первым полимером, клетки инкубируют в растворе полиакриловой кислоты в объемном соотношении 1:1, используя те же условия. Промывку производят аналогичным образом кроме времени и силы центрифугирования, которые были 5 мин и 10000 g соответственно для формирования достаточно плотного слоя клеток. Эту процедуру повторяют до достижения 4 слоев. Пример 3.

Приготовление полимеров.

Для данного примера использовали пары противоположно заряженных полимеров хитозан и полиглутаминовая кислота, которые разбавляют в деионизованной воде в конечной концентрации 0,1 мг/мл. Полученные растворы помещают в ультразвуковую ванну на 15 мин. В дальнейшем полимеры титруют до значения рН=7.

Инкапсуляция.

Изначально, раствор хитозана добавляют к промытым клеткам, в количестве 106 кое/мл в объемном соотношении 1:1 (реакционной объем смеси 1 мл) и инкубируют в течение 10 минут при температуре (2°С). После чего клетки центрифугируют при 2000 g в течение 4 мин. Осажденную на поверхности культуру промывают 2 раза в деионизованной воде и ресуспензируют клетки в объеме раствора путем промывки. После покрытия первым полимером, клетки инкубируют в растворе полиглутаминовой кислоты в объемном соотношении 1:1, используя те же условия. Промывку производят аналогичным образом кроме времени и силы центрифугирования, которые были 6 мин и 4000 g соответственно для формирования достаточно плотного слоя клеток. Эту процедуру повторяют до достижения 8 слоев.

Пример 4.

Приготовление полимеров.

В данном примере использовали пары противоположно заряженных полимеров полилизин и полимолочной кислоты, которые разбавляют в деионизованной воде в конечной концентрации 3 мг/мл. Полученные растворы помещают в ультразвуковую ванну на 15 мин. В дальнейшем полимеры титруют до значения рН=7.

Инкапсуляция.

Изначально, раствор полилизина добавляют к промытым клеткам, в количестве 1010 кое/мл в объемном соотношении 1:1 (реакционной объем смеси 1 л) и инкубируют в течение 10 минут при температуре (15°С). Культуру промывают методом фильтрования в растворе хлорида натрия (0.03975 моль/л) и ресуспензируют клетки в объеме раствора путем промывки. После покрытия первым полимером, клетки инкубируют в растворе полимолочной кислоты в объемном соотношении 1:1, используя те же условия. Промывку производят аналогичным образом с использованием фильтрующего материала с размером пор 0.45 микрон. Эту процедуру повторяют до достижения 10 слоев.

Увеличение количества синтезируемого белка.

Приготовление культуры.

В качестве примера увеличения количества синтезируемого белка была выбрана культура Escherichia coli top 10 как модельный организм поведения бактериальных клеток. Из этого следует, что данный способ может быть применен к другим штаммам бактериальных клеток (Neidhardt F.С, Ingraham J.L., Schaechter M. Physiology of the bacterial cell: a molecular approach. - Sunderland: Sinauer, 1990. - T. 20, Ankeny R.A., Leonelli S. What's so special about model organisms? //Studies in History and Philosophy of Science Part A. - 2011. - T. 42. - №. 2. - C. 313-323.;

http://study.com/academy/lesson/escherichia-coli-e-coli-as-a-model-organism-or-host-cell.html; https://www.emlab.com/s/sampling/env-report-03-2010.html; Lee P.S., Lee K.H. Escherichia coli-a model system that benefits from and contributes to the evolution of proteomics //Biotechnology and bioengineering. - 2003. - T. 84. - №. 7. - C. 801-814.), Культура была преобразована с pRSET-emGFP плазмидом путем электропорации с использованием стандартных протоколов. Необходимо отметить, что введение плазмида pRSET-emGFP использовалось лишь для проверки данной гипотезы. Данную культуру культивировали на питательном бульоне (объем 100 мл, Nutrient Broth №2) с добавлением ампициллина с концентрацией 100 мг/мл. Эта смесь была помещена на роторный шейкер для выращивания около 3 часов при температуре 37°С до достижения оптической плотности равной 0.2. В дальнейшем, 50 мл полученной культуры концентрировали методом центрифугирования при 5000 g в течение 6 мин. Затем бактериальную культуру промывали от остатков питательной среды в 0.09% раствора хлорида натрия 3 раза и центрифугировали при 3000 g в течение 3 мин.

Подготовленные клетки после процедуры нанесения (см. Пример 1) были помещены в объеме 4 мкл на предметное стекло, содержащее питательную агарную среду, и накрыты покровным стеклом. Для наблюдения был использован конфокальный микроскоп Leica TCS SP8X, оснащенный боксом с возможностью нагрева до 37°С. Образец был помещен в камеру, где термостатировался до заданной температуры в течение всего времени эксперимента с использованием 100х увеличивающего объектива (НСХ PL АРО 100х/1.44 OIL) (фиг. 1-4). Предварительные эксперименты с использованием других культур P.stutzeri, S. aureus, В. subtilis и различных штаммов E.coli также показали положительный эффект использования данного способа с целью увеличения количества синтезируемого белка.

Заявляемое изобретение может быть осуществлено не только в вариантах, которые представлены в настоящем описании для иллюстрации, а в различных комбинациях параметров, которые ограничиваются только формулой в настоящем изобретении.

Кроме того, следует понимать, что различные признаки, аспекты и функциональные возможности, описанные в одном или нескольких отдельных примерах, не ограничены в отношении их применимости к различным вариантам осуществления данного биотехнологического процесса, и вместо этого могут применяться, отдельно или в различных комбинациях, к одному или нескольким способам реализации изобретения.

Необходимо отметить, что возможность нанесения полимеров на поверхность бактериальных клеток была показана в следующих работах: см. WO 200845806, МПК A61K-009/48; A61K-035/00; A61K-035/12; B01J-013/22 и др., см. Franz В. et al. Layer by Layer Nano Encapsulation of Microbes: Controlled Cell Surface Modification and Investigation of Substrate Uptake in Bacteria //Macromolecular bioscience. - 2010. - T. 10. - №. 2. - C. 164-172., см. см. Balkundi S.S. et al. Encapsulation of bacterial spores in nanoorganized polyelectrolyte shells //Langmuir. - 2009. - T. 25. - №. 24. - C. 14011-14016, однако, данные методы не использовались для увеличения количества синтезируемого белка и эффектов, аналогичных предложенному в патенте, не наблюдалось.

Данный способ позволяет расширить арсенал средств для синтезирования белка и может быть также применен в сочетании с методами генной инженерии.

1. Способ синтеза белка в культуре бактериальных клеток, включающий выращивание клеток на питательной среде, отличающийся тем, что на поверхность выращенных клеток наносят положительно заряженный слой полимера путем инкубирования в растворе положительно заряженного полимера, центрифугируют или фильтруют, промывают, затем на поверхность клеток наносят отрицательно заряженный слой полимера путем инкубирования в растворе отрицательно заряженного полимера, центрифугируют или фильтруют, промывают; нанесение слоев повторяют до получения необходимого их количества и заданного размера клеточных агрегатов; после чего клетки, покрытые полимерными слоями, помещают на питательную среду, выращивают и отделяют полученный продукт, при этом культуру используют в количествах 106 - 1020 КОЕ/мл, клетки промывают перед нанесением полимеров и после их нанесения растворами с ионной силой в диапазоне 0–0,155 моль/л, в качестве положительно заряженного полимера используют полилизин или протамин сульфат, или полиаллиламин гидрохлорид, или полиэтиленимин, или полидиаллилдиметиламмоний хлорид, или хитозан, в качестве отрицательно заряженного полимера используют альгинат или гиалуроновую кислоту, или полиакриловую кислоту, или полистиролсульфонат натрия, или полимолочную кислоту, или полиглутаминовую кислоту, или сульфат целлюлозы, концентрации полимеров выбирают в диапазоне 0,1 мг/мл – 10 мг/мл, клетки инкубируют в растворе полимеров в течение 4–15 мин, в случае использования центрифугирования реакционный объем смеси выбирают в диапазоне 0,5 мл – 1 л и центрифугируют в диапазоне 700–10000 g в течение 30 с – 5 мин, в случае использования метода фильтрования – выбирают в диапазоне 1 л – 50 л и используют фильтрующие материалы с размером пор не менее 0,45 мкм.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что оптимальную температуру для покрытия и инкубирования выбирают в диапазоне от 2 до 46°C.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для получения микробной белковой массы для кормления животных. Штамм гетеротрофных бактерий Klebsiella pneumonia 1-17, способный использовать продукты соокисления гомологов метана, присутствующих в природном газе, депонирован в Государственной коллекции патогенных микроорганизмов и клеточных культур «ГКПМ - ОБОЛЕНСК» под регистрационным номером В-8465.
Изобретение относится к микробиологической промышленности. Штамм гетеротрофных бактерий Stenotrophomonas acidaminiphila GBS-15-2 обладает способностью использовать продукты соокисления гомологов метана, присутствующие в природном газе.
Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для получения микробной белковой массы для кормления животных. Штамм гетеротрофных бактерий Cupriavidus gilardii GBS-15-1, способный использовать продукты соокисления гомологов метана, присутствующих в природном газе, депонирован во Всероссийской коллекции микроорганизмов Института биохимии и физиологии микроорганизмов Г.К.Скрябина РАН под регистрационным номером VKM B-3265D.

Группа изобретений относится к биотехнологии, а именно к способам использования композиции сред клеточной культуры для выращивания клеток и/или белкового производства.

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой рекомбинантную плазмидную ДНК pPA-OPRF-ATOX-OPRI, которая содержит слитые гены, кодирующие белки F и I наружной мембраны Pseudomonas aeruginosa, а также атоксический вариант экзотоксина A Pseudomonas aeruginosa.

Группа изобретений относится к области биотехнологии. Предложен способ контроля паттерна гликозилирования рекомбинантного гликопротеина, включающий культивирование микроорганизма, содержащего полинуклеотид, кодирующий рекомбинантный гликопротеин, в культуральной среде, содержащей инсулин.

Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к комбикормовой и перерабатывающей промышленности при переработке возобновляемых растительных отходов.

Группа изобретений относится к области биохимии. Предложен способ и устройство для экстракции биомолекул.

Группа изобретений относится к области биохимии. Предложен высокочистый нейротоксический компонент токсина Clostridium botulinum с содержанием одноцепочечной формы менее 2,00% по весу для лечения, связанного с гиперактивной холинергической иннервацией мышц или экзокринных желез заболевания или состояния, способ получения вышеуказанного высокочистого нейротоксического компонента ботулотоксина и фармацевтическая композиция для лечения, связанного с гиперактивной холинергической иннервацией мышц или экзокринных желез заболевания или состояния.

Изобретение относится к биотехнологии и иммунологии. Предложен способ получения белка OmpT для моделирования противохолерного иммунитета у экспериментальных животных.
Изобретение относится к биотехнологии и микробиологии. Плотная питательная среда для культивирования возбудителя бруцеллеза содержит мясную воду двойной концентрации, пептон сухой ферментативный, сыворотку крови лошади нормальную для культивирования микоплазм на питательных средах жидкую, натрий хлористый, глюкозу, глицерин, натрия метабисульфит и агар микробиологический при заданном содержании компонентов.

Изобретение относится к биотехнологии и микробиологии. Предложен способ определения бактерицидных свойств веществ.

Изобретение относится к биоизмерительным технологиям. Предложен способ определения антибиотических свойств материалов.

Изобретение относится к биоизмерительным технологиям. Предложен способ оценки про- и антимикробных свойств проб.

Изобретение относится к биотехнологии и ветеринарии. Полифункциональная подкормка для медоносных пчел содержит сукцинат хитозана со степенью замещения 70-80%, хитозан с молекулярной массой 10-40 кДа, сухой гидролизат безлактозной молочной сыворотки с содержанием белка 85-90%, сухую биомассу бактерий штамма Bacillus subtilis BKM B-2716D с концентрацией не менее 1×108 КОЕ/г живых микробных клеток, сухую биомассу бактерий штамма Bacillus licheniformis ВКМ B-2717D с концентрацией не менее 1×108 КОЕ/г живых микробных клеток и глюкозу при заданном соотношении компонентов.
Изобретение относится к биотехнологии. Штамм лактобактерий Enterococcus hirae Т-6 (15-2018), обладающий способностью продуцировать молочную кислоту и обладающий антагонистической активностью в отношении условно-патогенной и патогенной микрофлоры, депонирован во Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов под регистрационным номером ВКПМ В-13054.

Изобретение относится к области биотехнологии. Предложен способ получения биомассы бруцелл вакцинных штаммов.
Изобретение относится к биотехнологии и микробиологии. Плотная питательная среда для культивирования возбудителя инфекционного эпидидимита баранов содержит мясную воду, печеночный отвар, пептон сухой ферментативный, натрий хлористый, 10%-ный раствор натрия углекислого кислого, глюкозу, глицерин, метабисульфит натрия, сыворотку крови крупного рогатого скота, агар микробиологический и питьевую воду при заданном содержании компонентов.

Изобретение относится к микробиологии. Штамм бактерий Microbacterium paraoxydans ELA-10 м, обладающий способностью осуществлять деградацию нефти и нефтепродуктов в широком диапазоне температур от +8 до +37°C, депонирован под регистрационным номером ВКМ Ac-2619D.

Изобретение относится к микробиологии. Штамм бактерий Stenotrophomonas sp.
Изобретение относится к биотехнологии и медицине. Предложен способ иммобилизации фермента субтилизиноподобная протеиназа, продуцируемого штаммом бактерии рода Bacillus вида Bacillus sp.

Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к способу синтеза белка в культурах бактериальных клеток. Способ включает модификацию поверхности клеток методом послойной адсорбции противоположно заряжённых полимеров и последующее термостатирование культуры клеток. Культуру клеток используют в количествах 106 – 1020 КОЕмл. Перед нанесением и после нанесения полимеров клетки промывают растворами с ионной силой в диапазоне 0–0,155 мольл. В качестве положительно заряженного полимера используют полилизин, протамин сульфат, полиаллиламин гидрохлорид, полиэтиленимин, полидиаллилдиметиламмоний хлорид или хитозан. В качестве отрицательно заряженного полимера используют альгинат, гиалуроновую кислоту, полиакриловую кислоту, полистиролсульфонат натрия, полимолочную кислоту, полиглутаминовую кислоту или сульфат целлюлозы. Концентрации полимеров выбирают в диапазоне 0,1 мгмл – 10 мгмл. Клетки инкубируют в растворе полимеров в течение 4–15 мин. В случае использования центрифугирования реакционный объем смеси выбирают в диапазоне 0,5 мл – 1 л и центрифугируют в диапазоне 700–10000 g в течение 30 с – 5 мин. В случае фильтрования реакционный объем смеси выбирают в диапазоне 1 л – 50 л и используют фильтрующие материалы с размером пор не менее 0,45 мкм. Изобретение позволяет увеличить количество синтезируемого белка в различных видах культур бактериальных клеток без снижения выживаемости клеток. 1 з.п. ф-лы, 4 ил., 4 пр.

Наверх