Способ исследования распределения эритроцитов по плотности

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике и может быть использовано для исследования распределения эритроцитов по плотности (РЭПП). Для этого последовательно заполняют 15 гематокритных капилляров смесью фталатов и исследуемым образцом крови. Проводят центрифугирование капилляров. Затем измеряют высоты столбиков эритроцитов, находящихся над и под смесью фталатов в каждом капилляре. После чего вычисляют процентное содержание верхней фракции эритроцитов для каждого капилляра. Проводят построение интегрального распределения эритроцитов по плотности, на основании которого строят дифференциальное распределения эритроцитов по плотности. При этом дополнительно после центрифугирования капилляров проводят измерение температуры ротора контактным термометром. Определение распределения эритроцитов по плотности для каждого капилляра осуществляют с учетом температуры ротора после центрифугирования. Изобретение обеспечивает повышение достоверности и точности оценки распределения эритроцитов по плотности у пациентов. 4 ил., 18 табл., 2 пр.

 

Изобретение относится к области медицины, в частности к лабораторной диагностике и может быть использовано для исследования распределения эритроцитов по плотности (РЭПП).

Эритроциты, циркулирующие в крови, имеют различия друг от друга по объему, площади поверхности, деформируемости, содержанию и концентрации гемоглобина, морфологии и другим параметрам. В норме различия между эритроцитами определяются их возрастом. При патологии свойства популяции эритроцитов меняются. Количественную характеристику популяции эритроцитов можно получить, измеряя их распределения по свойствам - по объему, форме, осмотической резистентности, плотности и т.п. Результаты данной количественной оценки могут иметь важное значение для диагностики, оценки эффективности терапии и выявления доклинических признаков заболевания.

На сегодняшний день анализ РЭПП позволяет расширить информацию о свойствах эритроцитов при различных патологиях, что обеспечивает выявление патологии еще на доклиническом этапе и контроль эффективности терапии с учетом механизмов, ответственных за изменения свойств эритроцитов.

В норме эритроциты распределены по плотности в интервале 1,086-1,112 г/мл. Самые легкие клетки - ретикулоциты, средний объем которых на 24-35% больше среднего объема эритроцитов, а концентрация гемоглобина примерно на 17% ниже, чем в зрелом эритроците (Шурхина Е.С., Нестеренко В.М., Колодей С.В., Цветаева Н.В., Ермакова Т.А., Никулина О.Ф. и др. Распределение эритроцитов по плотности при различных видах анемий. Терапевтический архив. 2009; 81 (1): 48-51).

Известен способ исследования распределения эритроцитов по плотности путем гравитационного разделения суспензии эритроцитов с помощью маркеров плотности - несмешивающихся с водой жидкостей или частиц, обладающих известной плотностью. В данной работе использовали для разделения эритроцитов по плотности смеси диметил- и дибутилфталатов. Центрифугирование заполненных кровью капилляров осуществляли в микрогематокритной центрифуге (8-12 тыс. об/мин в течение 7-8 мин). В этих условиях эритроциты, имеющие плотность выше, чем плотность смеси фталатов, оказываются в нижней части капилляра и отделяются от более легких клеток и плазмы смесью фталатов. Высота столбика эритроцитов, находящегося над фталатом Т (верхняя фракция) и под фталатом В (нижняя фракция), измеряется с точностью 0,1 мм и находится процентное содержание верхней фракции эритроцитов для каждого гематокритного капилляра (Т%). Т%=Т/(Т+В)⋅100. Определяется процент клеток, выходящих за пределы нормы: L - легкая фракция, состоящая из ретикулоцитов и гипохромных эритроцитов (d<1,088 г/мл); D - тяжелая фракция, состоящая из дегидратированных клеток, сферо- и микросфероцитов (d>1,112 г/мл).

Затем строится интегральное распределение эритроцитов по плотности: по оси X откладывается плотность смеси фталатов, а по оси Y - Т%. Это рабочий график, который используется для получения средней плотности эритроцитов и ширины РЭПП. Для этого кривая аппроксимируется функцией Больцмана (сигмоида) и находятся: dcp - средняя плотность эритроцитов; W - ширина РЭПП - интервал плотности, в который попадает 60% эритроцитов (исключаются 20% самых легких и 20% самых тяжелых клеток).

Для получения дифференциального распределения эритроцитов по плотности, которое в дальнейшем называется просто РЭПП, по оси X откладывается плотность [(n+1)-n]/2, а по оси Y - объемный процент эритроцитов, попадающий в интервал плотности [(n+1)-n]. Объемный % эритроцитов = Тn+1%-Тn%, где Тn и Тn+1 - фракции эритроцитов, оказывающиеся после центрифугирования над смесью фталатов с плотностями dn и dn+1 г/мл соответственно.

Imax - максимум на кривой РЭПП - максимальное количество эритроцитов, выраженное в процентах, попадающих в интервал плотности [(n+1)-n] г/мл (Шурхина Е.С., Нестеренко В.М., Цветаева Н.В., Никулина О.Ф., Атауллаханов Ф.И. Метод исследования распределения эритроцитов по плотности. Практические рекомендации. Клиническая лабораторная диагностика, 2014, №6, с. 41-46). Количество клеток, прошедших через слой фталата, зависит помимо других составляющих от времени центрифугирования, скорости вращения ротора центрифуги и его температуры, которая не учитывается в процессе исследования, что непосредственно оказывает влияние на точность исследовании. Данный источник информации рассмотрен в качестве ближайшего аналога.

Технический результат заявленного способа заключается в повышении достоверности и точности исследования.

Технический результат достигается тем, что исследование распределения эритроцитов по плотности проводят путем последовательного заполнения гематокритных капилляров смесью фталатов с известной плотностью и исследуемым образцом крови, центрифугирования капилляров, измерения высоты столбиков эритроцитов, находящихся над и под смесью фталатов в каждом капилляре с последующим вычислением процентного содержания верхней фракции эритроцитов для каждого капилляра, построения интегрального распределения эритроцитов по плотности, а затем на основании интегрального распределения эритроцитов по плотности построение дифференциального распределения эритроцитов по плотности, причем дополнительно после центрифугирования капилляров проводят измерение температуры ротора контактным термометром, а определение распределения эритроцитов по плотности для каждого капилляра осуществляют с учетом температуры ротора после центрифугирования, при этом рассчитывают плотности смесей фталатов (ρn1…15 г/мл) по формуле: ρn1…15 г/мл = ρn20°C-0,0008*(t-20°С), где: n1…15 - порядковый номер смеси фталатов от 1 до 15; ρn20°С, г/мл - плотность каждой смеси фталатов при температуре среды 20°С; t - температура ротора центрифуги после центрифугирования, для каждого капилляра определяют процентное содержание верхней фракции эритроцитов (Т%) по формуле Т%=Т/(Т+В)*100, где: Т, мм - верхняя фракция эритроцитов, находящаяся над смесью фталатов; В, мм - нижняя фракция эритроцитов, находящаяся под смесью фталатов, затем строят интегральное распределение эритроцитов по плотности, откладывая на оси X плотность смеси фталатов (ρn1…15), а на оси Y - процентное содержание верхней фракции эритроцитов, находящейся над смесью фталатов (Т%) и на основании интегрального распределения эритроцитов по плотности строят дифференциальное распределение эритроцитов по плотности.

Способ осуществляется следующим образом.

Алгоритм выполнения распределения эритроцитов по плотности (РЭПП).

Подготовка пробы.

Кровь берут из локтевой вены в пробирку с антикоагулянтом без геля (натриевая или литиевая соль гепарина в концентрации 15-20 ME на 1 мл крови). Минимальный объем крови, необходимый для исследования, составляет 4 мл. После забора крови пробирку медленно переворачивают 8-10 раз для равномерного смешивания крови и антикоагулянта.

Транспортировку осуществляют в специальном контейнере, защищенном от прямого солнечного света. Пробирки устанавливают в штатив для предотвращения встряхивания и опрокидывания. При температуре окружающей среды более 25°С транспортировку осуществляют в термоконтейнере с 1 хладагентом, менее 25°С - в термоконтейнере без хладагента. Срок хранения крови в стерильной пробирке при комнатной температуре (от 20 до 25°С) составляет 6 часов максимально. Более длительное хранение не рекомендуется из-за возможного искажения результатов, но при необходимости допускается помещать кровь в термостат с 37°С не более чем на 24 часа. В таком случае при получении результатов необходимо учесть срок хранения образца.

Далее проводят прием и регистрацию биологического материала.

Надевают нестерильные перчатки и извлекают пробирки из специального контейнера для транспортировки в штатив. Проверяют правильность оформления направления: в бланке-направлении должны быть указаны данные обследуемого (ФИО, возраст, № истории болезни или амбулаторной карты, отделение, диагноз, проведенная терапия) и маркировку пробирок с образцами крови (фамилия больного в бланке направления и фамилия, указанная на пробирке с материалом исследования, должны соответствовать). Присваивают порядковый номер каждой пробирке с образцом крови для исследования.

Для проведения анализа необходимы штатив для капилляров, спиртовка, зажигалка, линейка и лупа.

Проводят заполнение 15 капилляров с порядковыми номерами от 1 до 15 смесями фталатов в вытяжном шкафу. При этом пробирку с образцом крови пациента предварительно вынимают из штатива, осторожно переворачивают 5-6 раз для перемешивания крови. Затем последовательно заполняют капилляры с фталатами кровью пациента из пробирки до 50 мм и помещают их в соответствующие ячейки штатива. В качестве реактивов используют официнальный дибутиловый эфир фталевой кислоты (дибутилфталат) и официнальный диметиловый эфир о-фталевой кислоты (диметилфталат). Смеси с плотностями от 1,068 г/мл до 1,138 г/мл с инкрементом 0,004 г/мл готовят заранее и хранят в закрытых стеклянных флаконах при комнатной температуре не дольше 1 месяца.

После заполнения кровью кончик каждого капилляра обтирают марлевой салфеткой. Далее осуществляют запаивание капилляров и их центрифугирование. Запаивание капилляров производят над пламенем спиртовки, постепенно вращая капилляр вокруг своей оси, до полной герметизации свободного от крови конца капилляра. Запаянный капилляр помещают в ячейку микрогематокритной центрифуги. Включают центрифугу, выбирают программу с охлаждением ротора до 23°С, со скоростью 12000 оборотов/минуту и временем центрифугирования 8 минут. Затем дожидаются охлаждения ротора и сигнала о готовности к работе. Закрывают крышку ротора и измеряют температуру ротора контактным термометром, зафиксировав ее в журнале исследования, и нажимают кнопку «Start». По окончании центрифугирования открывают крышку центрифуги ротора, измеряют температуру ротора контактным термометром, достают капилляры и помещают их в соответствующие номерам ячейки штатива. С помощью линейки под увеличением лупы последовательно измеряют высоту столбиков эритроцитов, находящихся над и под смесью фталатов с точностью до десятых долей миллиметра. Погрешность измерения учитывается в расчетах.

Определение распределения эритроцитов по плотности для каждого капилляра осуществляют с учетом температуры ротора после центрифугирования, при этом рассчитывают плотности смесей фталатов (ρn1…15 г/мл) по формуле: ρn1…15 г/мл = pn20°C-0,0008*(t-20°С), где: n1…15 - порядковый номер смеси фталатов от 1 до 15; ρn20°С, г/мл - плотность каждой смеси фталатов при температуре среды 20°С; t - температура ротора центрифуги после центрифугирования, для каждого капилляра определяют процентное содержание верхней фракции эритроцитов (Т%) по формуле Т%=Т/(Т+В)*100, где: Т, мм - верхняя фракция эритроцитов, находящаяся над смесью фталатов; В, мм - нижняя фракция эритроцитов, находящаяся под смесью фталатов и строят интегральное распределение эритроцитов по плотности, откладывая на оси X плотность смеси фталатов (ρn1…15), а на оси Y - процентное содержание верхней фракции эритроцитов, находящейся над смесью фталатов (Т%).

На основании интегрального распределения эритроцитов по плотности строят дифференциальное распределение. По графику дифференциального распределения находят параметры распределения эритроцитов по плотности: dcp, г/мл - средняя плотность эритроцитов, W, г/мл - ширина распределения эритроцитов по плотности, Imax, % - максимум эритроцитов на кривой распределения, попадающих в интервал [ρn+1; ρn], L, % - процент эритроцитов с плотностью менее 1,088 г/мл, D, % - процент эритроцитов с плотностью более 1,112 г/мл.

Пример 1.

Пациентка: Ш., 26 лет. Диагноз: Наследственная гемолитическая анемия (β-талассемия). Гемолитический криз. Анемия тяжелой степени. Тяжелая посттрансфузионная перегрузка железом. Общий анализ крови (OAК) от 10.04.2017: гемоглобин - 37 г/л, эритроциты - 1,6×10¹² л, средний объем эритроцита (MCV) - 76 фл, среднее содержание гемоглобина в эритроците (МСН) - 23 пг, средняя концентрация гемоглобина в эритроците (МСНС) - 319 г/дл, гематокрит - 0,12%, ретикулоциты - 1,0%, лейкоциты - 3,0×10⁹/л, тромбоциты 91×10⁹/л. Выраженный анизо- и пойкилоцитоз эритроцитов, мишеневидные эритроциты, тельца Жолли. Электрофорез гемоглобина от 30.03.2017: HbA - 34.1%, HbA2 - 2,8%, HbF - 63,1%. Распределение эритроцитов по плотности от 10.04.2017: исследование проведено при температуре 24°С. Результаты указаны в таблице 1.

Расчет плотности смеси фталатов с поправкой на температуру ротора (24°С) по формуле: ρ_n=ρ_n20°_C-0,0008*(t-20°С), где: n - номер смеси фталатов; ρ_n, г/мл - плотность смеси фталатов для данной температуры; ρ_n20°_C, г/мл - плотность смеси фталатов для температуры 20°С; t, °С - температура ротора центрифуги после центрифугирования представлены в таблица 2.

Расчет процентного содержания верхней фракции эритроцитов в каждом капилляре по формуле: Т%=Т/(Т+В)*100, где Т% - процентное содержание верхней фракции эритроцитов; Т, мм - верхняя фракция эритроцитов, находящаяся над смесью фталатов, В, мм - нижняя фракция эритроцитов, находящаяся под смесью фталатов представлены в таблица 3.

Построение интегрального распределения эритроцитов по плотности. На оси X - плотности смесей фталатов (ρ_n), на оси Y - процентное содержание верхней фракции эритроцитов, находящейся над смесью фталатов (Т%) (см. фиг. 1).

По параметрам дифференциального распределения, представленным в таблице 4, находили параметры распределения эритроцитов по плотности: dcp, г/мл - средняя плотность эритроцитов, W, г/мл - ширина распределения эритроцитов по плотности, Imax, % - максимум эритроцитов на кривой распределения, попадающих в интервал [ρ_n+1; ρ_n], L, % - процент эритроцитов с плотностью менее 1,088 г/мл, D, % - процент эритроцитов с плотностью более 1,112 г/мл.

Расчет параметров распределения эритроцитов по плотности:

d_cp=g(50%), где: d_cp, г/мл - средняя плотность эритроцитов:

d_cp=(50-2380,95)/2544,76

d_cp=1,090

L=f(low), где: L, % - легкая фракция эритроцитов, low - нижняя граница нормальной плотности эритроцитов в зависимости от температуры (при 24-26°С - 1,083 г/мл, при 35-38°С - 1,079 г/мл):

L=2272,73*1,083+2433,64

L=27,73

D=100-f(high), где: D, % - тяжелая фракция эритроцитов, high - верхняя граница плотности эритроцитов в зависимости от температуры (при 24-26°С - 1,107 г/мл, при 35-38°С - 1,103 г/мл):

D=100-(1190,48*1,107+1220,00)

D=2,14

I_max, % - максимальное количество эритроцитов, выраженное в процентах, попадающих в интервал плотности 0,004 г/мл, определяемый как максимум на кривой распределения эритроцитов по плотности по данным дифференциального распределения эритроцитов по плотности:

Максимальное значение Об% эритроцитов = 15,8

W=g(80%)-g(20%), где: W, г/мл - ширина распределения эритроцитов по плотности, представляющий собой интервал плотности, в который попадает 60% эритроцитов, исключая по 20% самых легких и самых тяжелых эритроцитов:

W=(80-2425,63)/2281,75-(20-1136,00)/1205,45

W=0,020

Результаты расчетов представлены в таблице 5

Заключение: Выявляется уменьшение средней плотности эритроцитов, увеличение легкой и тяжелой фракций эритроцитов, снижение максимума на кривой РЭПП и увеличение ширины распределения эритроцитов по плотности.

Данные полученные при выполнении расчетов без учета фактической температуры ротора Измерение нижней и верхней фракции эритроцитов для каждого капилляра указаны в таблице 6.

Расчет плотности смеси фталатов с поправкой на температуру ротора не производился.

Расчет процентного содержания верхней фракции эритроцитов в каждом капилляре по формуле: Т%=Т/(Т+В)*100, где Т% - процентное содержание верхней фракции эритроцитов; Т, мм - верхняя фракция эритроцитов, находящаяся над смесью фталатов, В, мм - нижняя фракция эритроцитов, находящаяся под смесью фталатов указаны в таблице 7

Построение интегрального распределения эритроцитов по плотности ппредставлено на фиг. 2. На оси X - плотности смесей фталатов (ρ_n), на оси Y - процентное содержание верхней фракции эритроцитов, находящейся над смесью фталатов (Т%).

Построение дифференциального распределения эритроцитов по плотности осуществляли на основании интегрального распределения эритроцитов по плотности. На оси X - плотность смеси фталатов по формуле: (ρ_n+1+ρ_n)/2, где: ρ_n+1 г/мл - плотность каждой последующей смеси фталатов, а ρ_n, г/мл - плотность каждой предыдущей смеси фталатов. На оси Y - объемный процент эритроцитов (Об% эритроцитов), попадающий в интервал плотности смеси фталатов [ρ_n+1; ρ_n], который вычисляли по формуле: Об% эритроцитов = T_n+1%-Т_n%, где T_n+1% и Т_n% - верхние фракции эритроцитов, расположенные над смесью фталатов с плотностями ρ_n и ρ_n+1 г/мл соответственно.

По точкам интегрального распределения эритроцитов по плотности определяли параметры кусочно-линейной функции

где: х, г/мл - плотность эритроцитов, f(x), % - объемный процент верхней фракции эритроцитов, k₀, k₁, …, k_n, b₀, b₁, …, b_n - коэффициенты уравнений прямых, проходящих через каждые две соседние точки интегрального распределения, а для каждой линейной функции f_n(x)=k_nx+b_n определяется обратная функция g_n(y)=(y-b_n)/k_n, где: у, % - объемный процент верхней фракции эритроцитов, g_n(y), г/мл - плотность эритроцитов. Результаты указаны в таблице 8.

Расчет параметров распределения эритроцитов по плотности:

d_cp=g(50%), где: d_cp, г/мл - средняя плотность эритроцитов:

d_cp=(50-2552,38)/2380,95

d_cp=1,093

L=f(low), где: L, % - легкая фракция эритроцитов, low - нижняя граница нормальной плотности эритроцитов в зависимости от температуры (при 24-26°С - 1,083 г/мл, при 35-38°С - 1,079 г/мл):

L=1136,36*1,083+1209,09

L=21,59

D=100-f(high), где: D, % - тяжелая фракция эритроцитов, high - верхняя граница плотности эритроцитов в зависимости от температуры (при 24-26°С - 1,107 г/мл, при 35-38°С - 1,103 г/мл):

D=100-(2281,75*1,107+2432,94)

D=7,04

Imax, % - максимальное количество эритроцитов, выраженное в процентах, попадающих в интервал плотности 0,004 г/мл, определяемый как максимум на кривой распределения эритроцитов по плотности по данным дифференциального распределения эритроцитов по плотности:

Максимальное значение Об% эритроцитов = 15,8

W=g(80%)-g(20%), где: W, г/мл - ширина распределения эритроцитов по плотности, представляющий собой интервал плотности, в который попадает 60% эритроцитов, исключая по 20% самых легких и самых тяжелых эритроцитов:

W=(80-2432,94)/2281,75-(20-1209,09)/1136,36

W=0,020

Результаты расчетов представлены в таблице 9

Заключение: Выявляется нормальный показатель средней плотности эритроцитов, увеличение легкой и тяжелой фракций эритроцитов, снижение максимума на кривой РЭПП и увеличение ширины распределения эритроцитов по плотности.

Из приведенных вариантов расчета видно, что при учете фактической температуры ротора было выявлено снижение средней плотности эритроцитов. В расчетах, где не был произведен учет фактической температуры ротора, снижения средней плотности эритроцитов выявлено не было.

Таким образом, исследование, проведенное с учетом фактической температуры ротора, является более объективным и точным.

Пример 2.

Пациентка: В., 25 лет.

Диагноз: Наследственная гемолитическая анемия (микросфероцитоз?). Состояние после спленэктомии от 06.04.2017. OAК от 17.04.2017: гемоглобин - 96 г/л, эритроциты - 3,1×10¹²/л, MCV - 100 фл, МСН - 31 пг, МСНС - 305 г/дл, гематокрит - 0,32%, ретикулоциты - 1,8%, лейкоциты - 6,3×10⁹/л, тромбоциты 1144×10⁹/л. Анизоцитоз.

Распределение эритроцитов по плотности от 17.04.2017:

Исследование проведено при температуре 24°С. Измерение нижней и верхней фракции эритроцитов для каждого капилляра показано в таблице 10.

Расчет плотности смеси фталатов с поправкой на температуру ротора (24°С) по формуле:

ρ_n=ρ_n20°_C-0,0008*(t-20°С), где: n - номер смеси фталатов; ρ_n, г/мл - плотность смеси фталатов для данной температуры; ρ_n=ρ_n20°_C, г/мл - плотность смеси фталатов для температуры 20°С; t, °С - температура ротора центрифуги после центрифугирования. Результаты расчета представлены в таблице 11.

Расчет процентного содержания верхней фракции эритроцитов в каждом капилляре по формуле: Т%=Т/(Т+В)*100, где Т% - процентное содержание верхней фракции эритроцитов; Т, мм - верхняя фракция эритроцитов, находящаяся над смесью фталатов, В, мм - нижняя фракция эритроцитов, находящаяся под смесью фталатов. Результаты указаны в таблице 12.

Построение интегрального распределения эритроцитов по плотности показаны на фиг. 3. На оси X - плотности смесей фталатов (ρ_n), на оси Y - процентное содержание верхней фракции эритроцитов, находящейся над смесью фталатов (Т%).

Построение дифференциального распределения эритроцитов по плотности осуществляли на основании интегрального распределения эритроцитов по плотности. На оси X - плотность смеси фталатов по формуле: (ρ_n+1+ρ_n)/2, где: ρ_n+1 г/мл - плотность каждой последующей смеси фталатов, а ρ_n, г/мл - плотность каждой предыдущей смеси фталатов. На оси Y - объемный процент эритроцитов (Oб% эритроцитов), попадающий в интервал плотности смеси фталатов [ρ_n+1, ρ_n], который вычисляли по формуле: Об% эритроцитов = T_n+1%-Т_n%, где T_n+1% и Т_n% - верхние фракции эритроцитов, расположенные над смесью фталатов с плотностями ρ_n и ρ_n+1 г/мл соответственно.

По точкам интегрального распределения эритроцитов по плотности определяли параметры кусочно-линейной функции

где: х, г/мл - плотность эритроцитов, f(x), % - объемный процент верхней фракции эритроцитов, k₀, k₁, …, k_n, b₀, b₁, …, b_n - коэффициенты уравнений прямых, проходящих через каждые две соседние точки интегрального распределения, а для каждой линейной функции f_n(x)=k_nx+b_n определяется обратная функция g_n(y)=(у-b_n)/k_n, где: y, % - объемный процент верхней фракции эритроцитов, g_n(y), г/мл - плотность эритроцитов. Результаты представлены в таблице 13

Расчет параметров распределения эритроцитов по плотности:

d_cp=g(50%), где: d_cp, г/мл - средняя плотность эритроцитов:

d_cp=(50-6065,59)/5634,24=1,085

L=f(low), где: L, % - легкая фракция эритроцитов, low - нижняя граница нормальной плотности эритроцитов в зависимости от температуры (при 24-26°С - 1,083 г/мл, при 35-38°С - 1,079 г/мл):

L=8966,30*1,083+9680,21

L=30,29

D=100-f(high), где: D, % - тяжелая фракция эритроцитов, high - верхняя граница плотности эритроцитов в зависимости от температуры (при 24-26°С - 1,107 г/мл, при 35-38°С - 1,103 г/мл):

D=100-(543,48*1,107+500,43)

D=0,0

(-1,2 - отрицательное значение, следовательно процент тяжелой фракции равен 0)

I_max, % - максимальное количество эритроцитов, выраженное в процентах, попадающих в интервал плотности 0,004 г/мл, определяемый как максимум на кривой распределения эритроцитов по плотности по данным дифференциального распределения эритроцитов по плотности:

Максимальное значение Об% эритроцитов = 35,87

W=g(80%)-g(20%), где: W, г/мл - ширина распределения эритроцитов по плотности, представляющий собой интервал плотности, в который попадает 60% эритроцитов, исключая по 20% самых легких и самых тяжелых эритроцитов:

W=(80-1826,01)/1752,65-(20-9680,21)/8966,30

W=0,006

Результаты расчетов представлены в таблице 14.

Заключение: Выявляется уменьшение средней плотности эритроцитов, увеличение легкой фракции эритроцитов, нормальное значение тяжелой фракции эритроцитов, снижение максимума на кривой РЭПП и нормальная ширина распределения эритроцитов по плотности.

В случае выполнения расчетов без учета фактической температуры ротора результаты исследования выглядели следующим образом: Результаты измерение нижней и верхней фракции эритроцитов для каждого капилляра показаны в таблице 15.

Расчет плотности смеси фталатов с поправкой на температуру ротора не производили.

Расчет процентного содержания верхней фракции эритроцитов в каждом капилляре по формуле: Т%=Т/(Т+В)*100, где Т% - процентное содержание верхней фракции эритроцитов; Т, мм - верхняя фракция эритроцитов, находящаяся над смесью фталатов, В, мм - нижняя фракция эритроцитов, находящаяся под смесью фталатов представлено в таблице 16.

Осуществляли построение интегрального распределения эритроцитов по плотности, что показано на фиг. 4. На оси X - плотности смесей фталатов (ρ_n), на оси Y - процентное содержание верхней фракции эритроцитов, находящейся над смесью фталатов (Т%).

Далее осуществляли построение дифференциального распределения эритроцитов по плотности на основании интегрального распределения эритроцитов по плотности. На оси X - плотность смеси фталатов по формуле: (ρ_n+1+ρ_n)/2, где: ρ_n+1 г/мл - плотность каждой последующей смеси фталатов, а ρ_n) г/мл - плотность каждой предыдущей смеси фталатов. На оси Y - объемный процент эритроцитов (Об% эритроцитов), попадающий в интервал плотности смеси фталатов [ρ_n+1; ρ_n], который вычисляют по формуле: Об% эритроцитов = T_n+1%-Т_n%, где T_n+1% и Т_n% - верхние фракции эритроцитов, расположенные над смесью фталатов с плотностями ρ_n и ρ_n+1 г/мл соответственно.

По точкам интегрального распределения эритроцитов по плотности определяли параметры кусочно-линейной функции

где: х, г/мл - плотность эритроцитов, f(x), % - объемный процент верхней фракции эритроцитов, k₀, k₁, …, k_n, b₀, b₁, …, b_n - коэффициенты уравнений прямых, проходящих через каждые две соседние точки интегрального распределения, а для каждой линейной функции f_n(x)=k_nx+b_n определяется обратная функция g_n(y)=(y-b_n)/k_n, где: у, % - объемный процент верхней фракции эритроцитов, g_n(y), г/мл - плотность эритроцитов. Результаты представлены в таблице 17.

Расчет параметров распределения эритроцитов по плотности:

d_cp=g(50%), где: d_cp, г/мл - средняя плотность эритроцитов:

d_cp=(50-6083,62)/5634,24

d_cp=1,089

L=f(low), где: L, % - легкая фракция эритроцитов, low - нижняя граница нормальной плотности эритроцитов в зависимости от температуры (при 24-26°С - 1,083 г/мл, при 35-38°С - 1,079 г/мл):

L=855,13*1,083+916,40

L=9,71

D=100-f(high), где: D, % - тяжелая фракция эритроцитов, high - верхняя граница плотности эритроцитов в зависимости от температуры (при 24-26°С - 1,107 г/мл, при 35-38°С - 1,103 г/мл):

D=100-(543,48*1,107+502,17)

D=0,54

I_max, % - максимальное количество эритроцитов, выраженное в процентах, попадающих в интервал плотности 0,004 г/мл, определяемый как максимум на кривой распределения эритроцитов по плотности по данным дифференциального распределения эритроцитов по плотности:

Максимальное значение Об% эритроцитов = 35,87

W=g(80%)-g(20%), где: W, г/мл - ширина распределения эритроцитов по плотности, представляющий собой интервал плотности, в который попадает 60% эритроцитов, исключая по 20% самых легких и самых тяжелых эритроцитов:

W=(80-5478,45)/5080,05-(20-9708,90)/8966,30

W=0,009

Результаты расчетов представлены в таблице 18.

Заключение: Выявляется снижение средней плотности эритроцитов, увеличение легкой фракции эритроцитов, нормальное содержание тяжелой фракции эритроцитов, снижение максимума на кривой РЭПП, нормальная ширина распределения эритроцитов по плотности.

Из приведенных вариантов расчета видно, что при учете фактической температуры ротора было выявлено значительное увеличение легкой фракции эритроцитов. В расчетах, где не был произведен учет фактической температуры ротора, увеличение легкой фракции эритроцитов было не таким значительным.

Таким образом, исследование, проведенное с учетом фактической температуры ротора, является более объективным, достоверным и точным.

Способ исследования распределения эритроцитов по плотности, включающий последовательное заполнение 15 гематокритных капилляров смесью фталатов, состоящей из дибутилового эфира фталевой кислоты и диметилового эфира о-фталевой кислоты с плотностью от 1,068 г/мл до 1,138 г/мл и исследуемым образцом крови, центрифугирование капилляров, измерение высоты столбиков эритроцитов, находящихся над и под смесью фталатов в каждом капилляре с последующим вычислением процентного содержания верхней фракции эритроцитов для каждого капилляра, построение интегрального распределения эритроцитов по плотности, а затем на основании интегрального распределения эритроцитов по плотности построение дифференциального распределения эритроцитов по плотности, отличающийся тем, что дополнительно после центрифугирования капилляров проводят измерение температуры ротора контактным термометром, а определение распределения эритроцитов по плотности для каждого капилляра осуществляют с учетом температуры ротора после центрифугирования, при этом рассчитывают плотности смесей фталатов (ρ_n1…15 г/мл) по формуле: ρ_n1…15 г/мл = ρ_n20°_C - 0,0008*(t - 20°С), где: n_1…15 - порядковый номер смеси фталатов от 1 до 15; ρ_n20°_C, г/мл - плотность каждой смеси фталатов при температуре среды 20°С; t°C - температура ротора центрифуги после центрифугирования, для каждого капилляра определяют процентное содержание верхней фракции эритроцитов (Т%) по формуле Т%=Т/(Т+В)*100, где: Т, мм - верхняя фракция эритроцитов, находящаяся над смесью фталатов; В, мм - нижняя фракция эритроцитов, находящаяся под смесью фталатов и строят интегральное распределение эритроцитов по плотности, откладывая на оси X плотность смеси фталатов (ρ_n1…15), а на оси Y - процентное содержание верхней фракции эритроцитов, находящейся над смесью фталатов (Т%) и на основании интегрального распределения эритроцитов по плотности строят дифференциальное распределение эритроцитов по плотности.