Способ ранней диагностики хронического тубулоинтерстициального повреждения почек у пациентов с анкилозирующим спондилитом

Авторы патента:

Симонова Ольга Викторовна (RU)

Попова Светлана Валентиновна (RU)

Розинова Виктория Александровна (RU)

Пленкина Лидия Владимировна (RU)

G01N33/53 - иммунологический анализ, анализ биоспецифического связывания, материалы для этого (препараты для терапевтических целей, содержащие антигены или антитела,A61K; гептены вообще, см. соответствующие рубрики в классе C07; пептиды, например протеины, вообще C07K)

G01N33/00 - Исследование или анализ материалов особыми способами, не отнесенными к предыдущим группам

Владельцы патента RU 2725850:

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Кировский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО Кировский ГМУ Минздрава России) (RU)

Изобретение относится к области ревматологии, нефрологии, а именно к области диагностики хронического повреждения тубулоинтерстициальной ткани почек у пациентов с анкилозирующим спондилитом. Способ ранней диагностики хронического тубулоинтерстициального повреждения почек у пациентов с анкилозирующим спондилитом заключается в том, что в предварительно собранной разовой порции мочи методом иммуноферментного анализа производят измерение FABP-1, полученные значения приводят к уровню креатинина, измеренного в той же порции мочи методом Поппера, основанном на реакции Яффе, затем сопоставляют результат с референтным интервалом, при уровне FABP-1 более 0,12 нг/ммоль креатинина выносится решение о наличии у пациента повреждения почек. Изобретение обеспечивает повышение эффективности диагностики хронического тубулоинтерстициального повреждения почек у пациентов с анкилозирующим спондилитом на ранних стадиях. 2 табл.

Известно, что при анкилозирующем спондилите ранняя инвалидизация, значительное снижение качества жизни обусловлено не только поражением суставов, но и повреждением почек, которое по разным литературным данным встречается в 5-30% случаев и является независимым фактором риска сердечно-сосудистых осложнений. (Национальные рекомендации. Хроническая болезнь почек: основные принципы скрининга, диагностики, профилактики и подходы к лечению. Нефрология. 2012. Т. 16. №1: 89-115).

Традиционно мониторинг пациентов на предмет повреждения почек основывается на клинических и лабораторных показателях: появлении артериальной гипертензии, отеков, мочевого синдрома, повышении уровня креатинина и мочевины сыворотке крове, снижении скорости клубочковой фильтрации (СКФ). Недостатками данных способов являются отсутствие специфичности для тубулоинтерстициального повреждения, частые ложно положительные или ложно отрицательные результаты, которые приводят к поздней диагностике. Так, нарастание креатинина происходит только после потери более 50% почечной паренхимы (Wu I., Parikh C.R. Screening for kidney diseases: older measures versus novel biomarkers. Clin J Am Soc Nephrol. 2008 Nov; 3(6): 1895-901. DOI: 10.2215/CJN.02030408), его уровень зависит от пола, возраста, мышечной массы и веса пациентов. Азотемия может повышаться без структурного повреждения почек при таких состояниях как усиленный катаболизм белка, застойная сердечная недостаточность, гиповолемия, рабдомиолиз Применение альтернативного маркера цистатина С при анкилозирующем спондилите ограничено в связи с частой необходимостью терапии глюкокортикоидами, которые влияют на его концентрацию в сыворотке крови (Risch L, Herklotz R, Blumberg A, Huber AR. Effects of glucocorticoid immunosuppression on serum cystatin С concentrations in renal transplant patients. Clin Chem. 2001;47(11):2055-2059. СКФ описывает объем плазмы, который очищается от креатинина за единицу времени. При клиренсовом методе расчета СКФ, пробе Реберга-Тареева, высока вероятность ошибки, связанной с неправильным сбором мочи или неточным измерением ее объема, а также изменением канальцевой секреции креатинина при почечной недостаточности. Использование расчетных формул некорректно во многих ситуациях: нестандартные размеры тела (пациенты с ампутацией конечностей, бодибилдеры), выраженные истощение и ожирение (ИМТ40 кг/м2), беременность, заболевания скелетной мускулатуры (миодистрофии), параплегия и квадриплегия; вегетарианская диета, быстрое снижение функции почек, необходимость назначения токсичных препаратов, выводимых почками, у больные с почечным трансплантатом (Национальные рекомендации. Хроническая болезнь почек: основные принципы скрининга, диагностики, профилактики и подходы к лечению. Нефрология. 2012. Т. 16. №1: 89-115). Наиболее близким по технической сущности к предлагаемому способу является определение в моче бета2-микроглобулина. Его недостаток обусловлен физико-химической нестабильностью данного маркера в моче, в частности разрушением при комнатной температуре и рН мочи менее 6,0, а также ложно положительными результатами при лимфоидных опухолях.

Поэтому существует потребность в новых биомаркерах, лишенных описанных недостатков, которые могли бы идентифицировать лиц с повышенным риском развития клинически развернутой болезни почек, что позволит вовремя предпринимать лечебные и профилактические меры.

Техническим результатом предлагаемого изобретения является ранняя доклиническая диагностика хронического тубулоинтерстициального повреждения почек у пациентов с анкилозирующим спондилитом.

Поставленный технический результат достигается тем, что в предварительно собранной разовой порции мочи методом иммуноферментного анализа производят измерение FABP-1, полученные значения приводят к уровню креатинина, измеренного в той же порции мочи методом Поппера, основанном на реакции Яффе, затем сопоставляют результат с референтным интервалом, при уровне FABP-1 более 0,12 нг/ммоль креатинина выносится решение о наличии у пациента повреждения почек.

FABP-1 экспрессируется в проксимальных канальцах почки в ответ на ее повреждение, оказывая антиоксидантное действие и уменьшая тубулоинтерстициальный фиброз (Moore Е, Bellomo R, Nichol A. Biomarkers of acute kidney injury in anesthesia, intensive care and major surgery: from the bench to clinical research to clinical practice. Minerva Anestesiol. 2010 Jun; 76(6): 425-440).

Исследованы образцы мочи 66 пациентов (мужчины/женщины=52/14) в возрасте не моложе 18 лет с достоверным диагнозом анкилозирующего спондилоартрита, соответствующим модифицированным Нью-Йоркским критериям 1984 г. и критериям ASAS 2009 (The Assessment of SpondyloArthritiinternational Society 2009) для аксиального спондилита, не имеющих хронической болезни почек. Хроническая болезнь почек (ХБП) констатировалась на основании выявления любых клинических маркеров повреждения почек, подтвержденных на протяжении периода длительностью не менее 3 месяцев, наличия маркеров необратимых структурных изменений органа, выявленных однократно при прижизненном морфологическом исследовании органа или его визуализации, снижения СКФ<60 мл/мин/1,73 м², сохраняющегося в течение трех и более месяцев, вне зависимости от наличия других признаков повреждения почек (Национальные рекомендации. Хроническая болезнь почек: основные принципы скрининга, диагностики, профилактики и подходы к лечению. Нефрология. 2012. Т.16. №1: 89-115).

Уровень FABP-1 определялся в разовой порции мочи. Микропробы хранились при температуре минус 25°С до проведения исследования. Уровень маркеров измеряли с помощью иммуноферментного анализа, используя наборы ELISA для человеческого FABP-1 (Cloude-Clone Corp., USA). Полученные значения, приводились к мочевой экскреции креатинина, измеренного в тех же порциях мочи по методу Поппера, основанному на реакции Яффе.

Общая характеристика пациентов представлена в таблице 1.

Группа контроля состояла из 36 практически здоровых добровольцев, сопоставимых с основной группой по полу (мужчины/женщины 27/9, р=0,7) и возрасту (Me 39 [32; 48] лет, p=0,5).

Лабораторные показатели основной и контрольной групп представлены в таблице 2.

Диапазон значений FABP-1 у пациентов с анкилозирующим спондилоартритом был от 0,00 до 0,29 нг/ммоль креатинина. Уровень FABP-1 не зависел от пола (р=0,6) и не коррелировал с возрастом (р>0,05).

На основании полученных значений FABP-1 в группе контроля рассчитан референтный интервал: [0;0,12] нг/ммоль креатинина.

Таким образом, уровень FABP-1 выше 0,12нг/ммоль креатинина у пациентов с анкилозирующим спондилитом без диагностированной ХБП свидетельствует о наличии у них повреждения почек, а именно эпителия проксимальных канальцев.

Предлагаемый способ является не инвазивным, отсутствует зависимость от пола и возраста пациентов, FABP-1 внепочечного происхождения не влияет на результат, так как здоровыми почками полностью реабсорбируется (Tsigou Е, Psallida V, Demponeras С, Boutzouka Е, Baltopoulos G. Role of new biomarkers: functional and structural damage. Crit Care Res Pract. 2013: 361078. doi: 10.1155/2013/361078.), позволяет определить наличие хронического тубулоинтерстициального повреждения почек на доклинической стадии

Повышение эффективности диагностики тубулоинтерстициального повреждения почек у пациентов с анкилозирующим спондилитом является достоинством и преимуществом предлагаемого способа по сравнению с аналогами.

Способ ранней диагностики хронического тубулоинтерстициального повреждения почек у пациентов с анкилозирующим спондилитом, отличиющийся тем, что в предварительно собранной разовой порции мочи методом иммуноферментного анализа производят измерение FABP-1, полученные значения приводят к уровню креатинина, измеренного в той же порции мочи методом Поппера, основанном на реакции Яффе, затем сопоставляют результат с референтным интервалом, при уровне FABP-1 более 0,12 нг/ммоль креатинина выносится решение о наличии у пациента повреждения почек.

Изобретение относится к медицине, а именно к способу окрашивания антигенов при помощи флуоресцентных антител на свежезамороженных срезах опухоли и метастазов. Способ окрашивания антигенов при помощи флуоресцентных антител на свежезамороженных срезах опухоли и метастазов, заключающийся в том, что используют свежезамороженные срезы, переносят их на стекла с адгезивным покрытием, подвергают процессу инкубации в 2%-ном растворе формалина, сушат на воздухе при температуре 20-26°С в течение часа; на этапе регидратации стекла с фиксированными срезами помещают в ёмкость с солевым фосфатным буфером PBS на 15 минут, после чего производят отмывку в солевом фосфатном буфере два раза по 5 минут; следом на этапе демаскировки инкубируют препараты поочередно в 1%-ном додецилсульфате натрия и в солевом фосфатном буфере в течение 15 минут, далее промывают в солевом фосфатном буфере 3 раза по 5 минут; далее на этапе блокировки на мокрые срезы наносят 1%-ный раствор бычьего сывороточного альбумина, проводят блокировку в течение 30 минут и отмывают один раз 5 минут в солевом фосфатном буфере с добавлением детергента; следом проводят этап инкубации с первичными антителами, во влажной камере при температуре 20-26°С в течение 1 часа, далее промывают срезы в фосфатном буфере 3 раза по 5 минут; далее следует этап инкубации с вторичными антителами во влажной камере в течение 1 часа, после проводят отмывку 3 раза по 5 минут; далее происходит окрашивание ядер: на стекло наносят реагент Prolong DAPI, закрывают покровным стеклом, закрепляют прозрачным лаком.

Платформа для обнаружения и анализа терапевтических агентов // 2724998

Изобретение относится к биотехнологии. Описан способ идентификации потенциальных агентов, включающий: (a) предоставление библиотеки потенциальных агентов, в которой каждый потенциальный агент присоединен к уникальному маркеру-нуклеиновой кислоте, имеющей последовательность маркера, где потенциальные агенты выбраны из группы, состоящей из белков, нуклеиновых кислот, клеток и небольших молекул, где небольшие молекулы выбраны из группы, состоящей из потенциальных ингибиторов ферментов, потенциальных антибиотиков, потенциальных противовирусных агентов, потенциальных пестицидов, потенциальных гормонов, потенциальных активаторов клеточной сигнализации, потенциальных ингибиторов клеточной сигнализации и потенциальных активаторов ферментов; (b) присоединение библиотеки потенциальных агентов к твердой подложке, включающей праймеры нуклеиновых кислот, посредством гибридизации маркеров-нуклеиновых кислот с праймерами нуклеиновых кислот с образованием массива потенциальных агентов; (c) приведение массива потенциальных агентов в контакт с агентом для скрининга, при котором один или более из потенциальных агентов массива реагирует с агентом для скрининга, где агент для скрининга реагирует с одним или более потенциальными агентами посредством связывания с одним или более потенциальными агентами или блокировки связывания между потенциальным агентом и аналитом, имеющим сродство к потенциальному агенту; (d) исследование массива во время или после контакта массива с агентом для скрининга для установления того, что по меньшей мере один потенциальный агент, находящийся в массиве, реагирует с агентом для скрининга, где исследование массива включает обнаружение агента для скрининга, который связан с одним или более потенциальными агентами, где агент для скрининга является люминесцентным, а обнаружение представляет собой обнаружение люминесценции от массива; (e) секвенирование маркеров-нуклеиновых кислот в массиве для определения последовательности маркера, который присоединен к каждому из потенциальных агентов; и (f) идентификацию по меньшей мере одного потенциального агента в массиве, который реагирует с агентом для скрининга, на основании определенной последовательности маркера.

Способ оценки имплантационной состоятельности эндометрия при пролиферативно-воспалительных нарушениях в эндометрии при эндометриозе, ассоциированном с эндометриальным фактором бесплодия // 2724384

Изобретение относится к медицине, а именно к патоморфологии, гинекологии и репродуктологии, и может быть использовано для оценки имплантационной состоятельности эндометрия при пролиферативно-воспалительных нарушениях в эндометрии при эндометриозе, ассоциированном с эндометриальным фактором бесплодия.

Способ оценки рецептивности эндометрия при эндометриоз-ассоциированном бесплодии // 2724381

Изобретение относится к медицине, а именно к патоморфологии, гинекологии и репродуктологии, и может быть использовано для оценки рецептивности эндометрия при эндометриоз-ассоциированном бесплодии.

Способы диагностики неоплазий женских репродуктивных органов // 2723531

Группа изобретений относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использована для анализа наличия неоплазии женских репродуктивных органов или озлокачествления неоплазии женских репродуктивных органов с учетом гиперметилирования одного или нескольких маркерных генов.

Способ прогнозирования возникновения неонатальных судорог у новорожденных из группы высокого перинатального риска // 2722022

Изобретение относится к медицине, а именно к детской неврологии, и может быть использовано для прогнозирования возникновения судорог у доношенных новорожденных в позднем неонатальном периоде.

Способ прогнозирования почечного ответа на противомиеломную терапию у пациентов с миеломной каст-нефропатией, острым почечным повреждением и потребностью в диализе // 2721947

Изобретение относится к области медицины, в частности к гематологии, а именно к прогнозированию почечного ответа на противомиеломную терапию при миеломной каст-нефропатии с острым почечным повреждением с потребностью в диализе.

Устройство экспресс-диагностирования сердечной деятельности // 2721726

Настоящее изобретение относится к иммуноанализу для выявления кардиомаркеров на ранних стадиях кардиального события, такого как инфаркт миокарда. Изобретение касается устройства для обнаружения маркеров острого инфаркта миокарда (ОИМ) в образце крови человека, включающего иммобилизованную в полосе иммуноанализа смесь по меньшей мере двух антител или конъюгатов антител, одновременно вступающую в реакцию по меньшей мере с сердечным тропонином (СТ) и с сердечной формой белка, связывающего жирные кислоты (HFBP), объединенные реакции обеспечивают визуальный сигнал, если концентрация каждого из указанных маркеров превышает определенное заданное пороговое значение, составляющее 0,5 нг/мл для СТ и 5 нг/мл для HFBP, указанный визуальный сигнал быстро и достоверно указывает на событие ОИМ в критический период от 1 до 4 часов с момента его возникновения.

Способ оценки риска развития атеросклероза на основании определения сывороточного уровня интерлейкина-33 // 2721689

Изобретение относится к области медицины, в частности кардиологии, лучевой диагностике, и может быть применено для прогнозирования риска развития атеросклеротических изменений сосудов.

Способ прогнозирования возможных тромбогенных осложнений при липидемии атерогенного генеза и клиническом диагнозе стенокардия напряжения разных функциональных классов // 2721687

Изобретение относится к медицине и может быть использовано в кардиологии и терапии для прогнозирования возможных тромбогенных осложнений. Способ прогнозирования возможных тромбогенных осложнений при липидемии атерогенного генеза и клиническом диагнозе стенокардия напряжения разных функциональных классов включает анализ липидов крови с последующим расчетом коэффициента атерогенности по формуле (ОХС+ТАГ)/ХС ЛПВП и активированного частичного тромбопластинового времени.

Антитела и методы анализа для обнаружения рецептора фолиевой кислоты 1 // 2725825

Данная группа изобретений относится к иммунологии. Предложены варианты антитела и антигенсвязывающих фрагментов антитела, которые специфически связываются с эпитопом рецептора фолиевой кислоты 1 (FOLR1).