4,10-ди(этоксиацетил)-2,6,8,12-тетраацетил-2,4,6,8,10,12-гексаазатетрацикло [5,5,0,0 3,11,05,9] додекан в качестве анальгетического средства и способ его получения

Изобретение относится к соединению - 4,10-ди(2-этоксиацетил)-2,6,8,12-тетраацетил-2,4,6,8,10,12-гексаазатетрацикло[5,5,0,0^3,11,0^5,9]додекану. Изобретение также относится к способу его получения, заключающемуся в ацилировании 2,6,8,12-тетраацетил-2,4,6,8,10,12-гексаазатетрацикло[5,5,0,0^3,11,0^5,9]додекана хлорангидридом 2-этоксиуксусной кислоты. Технический результат - получено новое соединение формулы (I), обладающее анальгетической активностью, которое может найти свое применение в медицине. 2 н.п. ф-лы, 4 табл., 2 пр.

 

Изобретение относится к фармацевтической химии и фармакологии, а именно к новому химическому веществу - 4,10-ди(этоксиацетил)-2,6,8,12-тетраацетил-2,4,6,8,10,12-гексаазатетрацикло[5,5,0,0^3,11,0^5,9]додекану, обладающему анальгетической активностью:

В соответствии с формулировками международной ассоциации по изучению боли (IASP), боль представляет собой неприятное сенсорное ощущение и эмоциональное переживание, связанное с истинным или потенциальным повреждением ткани или описываемое в терминах такого повреждения [Бондаренко Д.А., Дьяченко И.А., Скобцов Д.И., Мурашев А.Н. In vivo модели для изучения анальгетической активности. Биомедицина. 2011, 2: 84-94; Машковский М.Д. Лекарственные средства: 15-е изд. М.: ОО «Издательство Новая Волна». 2008, 1206; Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. Под ред. Миронова А.Н., Бунатян Н.Д. и др. М., ЗАО «Гриф и К». 2012]. Боль как интегративная функция организма является отрицательной биологической потребностью, ответственной за формирование функциональной системы сохранения гомеостаза. В зависимости от ведущего патогенетического фактора развития все болевые синдромы были разделены на три основные группы: ноцицептивные, неврогенные и психогенные. Многие острые и хронические заболевания, травмы и медицинские вмешательства сопряжены с болью, требующей применения анальгетических средств. Согласно определению IASP (1994) боль подразделяют на острую и хроническую. Выбор средств обезболивания соответствующего анальгетического потенциала определяется рядом факторов, к которым относятся этиология, интенсивность, тип боли, индивидуальные особенности пациента. В настоящее время для терапии боли различного генеза в стационарных и амбулаторных условиях используются в основном следующие группы анальгетиков: неопиоидные анальгетики и опиаты, различные их комбинации в схемах мультимодальной терапии, анальгетики из класса каннабиоидов [Машковский М.Д. Лекарственные средства: 15-е изд. М.: ОО «Издательство Новая Волна». 2008, 1206; Михайлова А.С. Анальгетический арсенал клинициста. Фарматека. 2018, (3): 50-56; Соснов А.В., Садовников С.В., Семченко Ф.М., Руфанов К.А., Тохмахчи В.Н., Соснова А.А., Тюрин И.А. Сильнодействующие ненаркотические анальгетики как направление развития фармацевтики. Разработка и регистрация лекарственных средств. 2016, 14 (1): 196-206; Cawich S.O., Deonarine U., Harding H.E., Dan D., Naraynsingh V., Cannabis and Postoperative Analgesia. Handbook of Cannabis and Related Pathologies. Biology, Pharmacology, Diagnosis, and Treatment. 2017, 450-458]. Неопиодные анальгетики, являющиеся ненаркотическими препаратами и отпускающиеся без рецепта, используются для лечения острой боли и хронических болевых синдромов слабой интенсивности [Михайлова А.С. Анальгетический арсенал клинициста. Фарматека. 2018, (3): 50-56]. Неопиоидные анальгетики включают препараты пяти фармакологических групп: НПВП, селективные ингибиторы циклооксигеназы-2 (ЦОГ-2), производные пиразолона, производные параацетаминофенола и флупиртина. Показаниями к назначению опиоидных анальгетиков является острая и хроническая боль средней и высокой интенсивности, не устраняемая неопиоидными анальгетиками.

Существуют противопоказания и ограничения к назначению большинства анальгетиков [Машковский М.Д. Лекарственные средства: 15-е изд. М.: ОО «Издательство Новая Волна». 2008, 1206; Михайлова А.С. Анальгетический арсенал клинициста. Фарматека. 2018, (3): 50-56; Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. Под ред. Миронова А.Н., Бунатян Н.Д. и др. М., ЗАО «Гриф и К». 2012.; Соснов А.В., Садовников СВ., Семченко Ф.М., Руфанов К.А., Тохмахчи В.Н., Соснова А.А., Тюрин И.А. Сильнодействующие ненаркотические анальгетики как направление развития фармацевтики. Разработка и регистрация лекарственных средств. 2016, 14 (1): 196-206; Cawich S.O., Deonarine U., Harding H.E., Dan D., Naraynsingh V., Cannabis and Postoperative Analgesia. Handbook of Cannabis and Related Pathologies. Biology, Pharmacology, Diagnosis, and Treatment 2017, 450-458].

Одним из наиболее часто используемых и наиболее близким по техническому результату к предлагаемому средству является Трамадол - анальгетик смешанного механизма действия, включающего в себя опиоидный и неопиоидный компоненты, который выбран в качестве препарата сравнения [Машковский М.Д. Лекарственные средства: 15-е изд. М.: ОО «Издательство Новая Волна». 2008, 1206; Михайлова А.С. Анальгетический арсенал клинициста. Фарматека. 2018, (3): 50-56].

Нами впервые выявлена выраженная анальгетическая активность 4,10-ди(этоксиацетил)-2,6,8,12-тетраацетил-2,4,6,8,10,12-гексаазатетрацикло[5,5,0,0^3,11,0^5,9] додекана, относящегося к 3 классу опасности «малотоксичные средства».

Задачей, решаемой настоящим изобретением, является расширение арсенала анальгетических средств с помощью впервые синтезированного вещества.

Поставленная задача достигается применением впервые синтезированного вещества 4,10-ди(этоксиацетил)-2,6,8,12-тетраацетил-2,4,6,8,10,12-гексаазатетрацикло[5,5,0,0^3,11,0^5,9]додекана в качестве анальгетического средства. Техническим результатом предлагаемого изобретения является вещество, способ его получения и выявление анальгетического действия нового нетоксичного анальгетического средства.

Предлагаемое в качестве изобретения анальгетическое средство 4,10-ди(этоксиацетил)-2,6,8,12-тетраацетил-2,4,6,8,10,12-гексаазатетрацикло [5,5,0,0^3,11,0^5,9] додекан впервые синтезировано в Институте проблем химико-энергетических технологий (г. Бийск).

В ФГБУ «НИИ фармакологии имени Е.Д. Гольдберга» СО РАМН (г. Томск) при проведении экспериментальных исследований выявлена выраженная анальгетическая активность данного вещества.

Новое свойство, предлагаемого в качестве изобретения средства, явным образом не вытекает из уровня техники в данной области и неочевидно для специалиста.

Предлагаемое изобретение может быть использовано в медицине. Идентичной совокупности признаков не обнаружено при исследовании уровня техники по патентной и научно-медицинской литературе [Толстикова Т.Г., Морозова Е.А., Сысолятин С.В., Калашников А.И., Жукова Ю.И., Сурмачев В.Н. Синтез и биологическая активность производных 2,4,6,8,10,12-гексаазатетрацикло[5,5,0,0^3,11,0^5,9]додекана. Химия в интересах устойчивого развития. 2010, 18: 511-516; Sergey V. Sysolyatin, Alexander I. Kalashnikov, Valeriy V. Malykhin, Irina A. Surmacheva, Gennady V. Sakovich. Reductive Debenzelation of 2,4,6,8,10,12 - Hexaazaisowurtzitane/ International Journal of Energetic Materials and Chemical Propulsion. 2010, 9 (4): 365].

Исходя из вышеизложенного следует считать заявляемое техническое решение соответствующим критериям: «Новизна», «Изобретательский уровень», «Промышленная применимость».

Возможность осуществления заявляемого изобретения подтверждается примером конкретного выполнения способа получения заявленного средства.

Пример 1

Получение 4,10-ди(этоксиацетил)-2,6,8,12-тетраацетил-2,4,6,8,10,12-гексааза-тетрацикло[5,5,0,0^3,11,0^5,9]додекана

14,71 г (0,12 моль) хлорангидрида 2-этоксиуксусной кислоты растворили в 100 мл сухого ацетонитрила и перенесли в колбу с мешалкой и обратным холодильником. Затем добавили 10,00 г (0,03 моль) 2,6,8,12-тетраацетил-2,4,6,8,10,12-гексаазатетрацикло[5,5,0,0^3,11,0^5,9]додекана. Суспензию кипятили при перемешивании в течение 5 часов, отфильтровали и охладили до комнатной температуры. Ацетонитрил отогнали под вакуумом, остаток промыли 3×30 мл метанола. Получили 13,47 г продукта с содержанием основного вещества (ВЭЖХ) 96,7%. Полученный продукт (13,47 г) растворили при нагревании в смеси 135 мл этилового спирта и 36 мл ацеонитрила. Полученный раствор охладили до комнатной температуры. Выпавший продукт отфильтровали, промыли 3×30 мл воды. Сушили на воздухе.

Получили 11,94 г (78%) 4,10-ди(этоксиацетил)-2,6,8,12-тетраацетил-2,4,6,8,10,12-гексаазатетрацикло[5,5,0,0^3,11,0^5,9]додекана в виде бесцветного кристаллического продукта с содержанием основного вещества 99,99% (методом ВЭЖХ) и температурой плавления 230,5-231,5°C.

C₂₂H₃₂N₆O₈ Найдено (%): С 51,89; Н 6,31; N 16,49. Вычислено (%): С 51,96; Н 6,34; N 16,53; О 25,17.

ИК-спектр, v/см^-1: 3045, 2985, 2931, 2889, 1678, 1665, 1651, 1412, 1360, 1285, 1169, 1135, 979,715, 702, 620.

Спектр ЯМР ¹Н (ДМСО-d6, δ, м.д.): 1.09-1.17 (т, 6Н, СН₃), 1.97-2.07 (м, 12Н, СН₃СО), 3.35 (с, 4Н, СН₂), 3,38-3,52 (кв, 4Н, СН₂), 4,25-4,65 (м, 2Н, СН), 6,30-6,94 (м, 4Н, СН).

Спектр ЯМР ¹³С (ДМСО-d6, δ, м.д.): 15.38 (С, СН₃, EtO), 21.29, 22.42 (С, СН₃, СН₃СО); 40.40, 62.33, 63.75 (С, СН), 66.04 (С, СН₂, EtO), 68.10, 69.24 (С, СН₂), 69.60, 71.89, 73.91, 167.72, 168.26, 169.29 (С, СО, СН₃СО).

Возможность осуществления заявляемого изобретения подтверждается примером конкретного выполнения исследования анальгетической активности 4,10-ди(этоксиацетил)-2,6,8,12-тетраацетил-2,4,6,8,10,12-гексаазатетрацикло [5,5,0,03,11,05,9] додекана в сравнении с референс-препаратом Трамадолом, доказывающего, что новые признаки решают поставленную задачу.

Пример 2

Эксперименты были выполнены на 62 аутбредных мышах CD-I обоего пола, 50 мышах-самцах линии СВА (7-8 недель, масса 22-27 г) первой категории конвенциональных, полученных из отдела экспериментального биомоделирования НИИФиРМ им. Е.Д. Гольдберга Томского НИМЦ (сертификат здоровья животных, ветеринарное удостоверение 270 №0008633). Содержание животных и дизайн экспериментов были одобрены Биоэтическим комитетом НИИФиРМ им. Е.Д. Гольдберга и соответствовали директиве 2010/63/EU Европейского парламента и Совета Европейского союза по охране животных, используемых в научных целях [Директива 2010/63/EU Европейского парламента и Совета Европейского союза по охране животных, используемых в научных целях (пер. с англ.). СП. 2012, 48]; Приказу МЗ РФ от 1 августа 2016N 199н.

Каждому животному внутри группы присваивали индивидуальный номер от 1 до 10, помечаемый с помощью меток фукорцином. Мышей распределяли на группы рандомизированно, используя в качестве критерия массу тела, так, чтобы индивидуальное значение массы не отклонялось от среднего значения в пределах одного пола более чем на ±10%. Данные (вес и номер) отобранных животных ранжировали в порядке убывания веса, используя для этого компьютерную программу Excel, имеющую команду SORT.

Статистическая обработка полученных результатов проведена методами вариационной статистики с использованием программного обеспечения Statistica 6.0. Для всех данных подсчитаны среднее значение (X) и стандартная ошибка среднего (m), которые вместе со значением n (количество вариант в группе) представлены в итоговых таблицах. Различие сравниваемых величин считали достоверным в том случае, если вероятность их тождества была меньше 5% (Р<0,05). Используя выборочные коэффициенты асимметрии и эксцесса, оценивали степень приближения закона распределения исследуемого признака к нормальному. В случаях нормального распределения признаков для статистической оценки применяли параметрический t-критерий Стьюдента. При отклонениях распределений признака от нормального вида для независимых выборок использовали непараметрический критерий U-критерий Уилкоксона-Манна-Уитни. Для выявления достоверности различий качественных показателей использовали критерий углового преобразования Фишера [Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. Под ред. Миронова А.Н., Бунатян Н.Д. и др. М., ЗАО «Гриф и К». 2012].

Определение острой токсичности 4,10-ди(этоксиацетил)-2,6,8,12-тетраацетил-2,4,6,8,10,12-гексаазатетрацикло [5,5,0,0^3,11,0^5,9]додекана (I).

При определении острой токсичности вещество (I) вводили 6 аутбредным мышам-самкам и 6 аутбредным мышам-самцам CD-I однократно внутрижелудочно в максимальной дозе 2000 мг/кг (в связи с плохой растворимостью в воде 6,25 г/л) в 0,5 мл воды очищенной. В течение 2 недель наблюдения гибели животных не наблюдалось, мыши не имели отклонений в состоянии здоровья и поведении. В связи с невозможностью определения LD₅₀ исследуемое вещество (I) отнесено к 3 классу опасности - «малотоксичные средства» в соответствии с ГОСТ 12.1007-76 «Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности» и «Руководством по проведению доклинических исследований лекарственных средств, 2012» [Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. Под ред. Миронова А.Н., Бунатян Н.Д. и др. М., ЗАО «Гриф и К». 2012].

Для скрининговой оценки влияния тестируемого вещества на развитие болевой реакции (I) в условиях модели «Уксусные корчи» и тесте «Механической компрессии лапы» [Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. Под ред. Миронова А.Н., Бунатян Н.Д. и др. М., ЗАО «Гриф и К». 2012; Barrot М. Tests and models of nociception and pain in rodents. Neuroscience. 2012,211: 39-50] вводили мышам через зонд в диапазоне доз 25, 50, 100 и 200 мг/кг однократно ежесуточно в течение 3 дней. Используемая суточная доза референс-препарата Трамадола для мышей (10 мг/кг) соответствовала среднесуточной дозе для человека (согласно инструкции для применения Трамадола). Животные группы негативного контроля получали растворитель (вода очищенная) в аналогичном пути введения. Значения массы тела животных использовали для расчета доз тестируемых веществ. Отбор определенного количества тестируемого средства производили в рабочей комнате с бактерицидным рециркулятором, который обеспечивает безопасность процедур и чистоту приготовления тестируемых веществ для введения. Необходимое количество веществ для введений готовилось ответственным за провизорскую работу сотрудником лаборатории. Приготовление доз основывалось на значениях доз и указанном объеме введения.

Исследование анальгетической активности 4,10-ди(этоксиацетил)-2,6,8,12-тетраацетил-2,4,6,8,10,12-гексаазатетрацикло [5,5,0,0^3,11,0^5,9]додекана (I) в сравнении с референс-препаратом Трамадолом в тесте «Уксусные корчи» (Abdominal constriction test).

Тест «Уксусные корчи» (Abdominal constriction test) направлен на исследование острой висцеральной и соматически глубокой боли [Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. Под ред. Миронова А.Н., Бунатян Н.Д. и др. М., ЗАО «Гриф и К». 2012; Barrot М. Tests and models of nociception and pain in rodents. Neuroscience. 2012, 211: 39-50]. Специфическую болевую реакцию - «корчи» (характерные движения животных, включающие сокращения брюшных мышц, чередующиеся с их расслаблением, вытягиванием задних конечностей и прогибанием спины) - вызывали внутрибрюшинным введением 0,75% раствора уксусной кислоты (ГОСТ 61-75) мышам в дозе 0,1 мл/10 г массы тела. Анальгезирующий эффект оценивали по способности потенциального лекарственного средства (в течение 20 мин после инъекции) уменьшать (в %) количество «корчей» по сравнению с контрольной группой животных (критерий эффективности - снижение болевой реакции не менее чем на 50%) и латентному времени наступления болевой реакции. Эвтаназию животных по окончании экспериментов осуществляли кранио-цервикальной дислокацией.

В данной серии экспериментов использовали следующие группы аутбредных мышей-самцов CD-I:

1. Негативный контроль - мышам вводили воду очищенную в объеме 0,5 мл/мышь ежедневно внутрижелудочно через зонд в течение трех дней, в последний день введение осуществляли за 1 ч до инъекции 0,75% р-ра уксусной кислоты (n=10);

2. Позитивный контроль - мышам вводили Трамадол в дозе 10 мг/кг в объеме растворителя 0,5 мл/мышь ежедневно внутрижелудочно через зонд в течение трех дней, в последний день введение осуществляли за 1 ч до инъекции 0,75% р-ра уксусной кислоты (n=8);

3. Анальгетик - мышам вводили (I) в дозе 25 мг/кг в объеме растворителя 0,5 мл/мышь ежедневно внутрижелудочно через зонд в течение трех дней, в последний день введение осуществляли за 1 ч до инъекции 0,75% р-ра уксусной кислоты (n=8);

4. Анальгетик - мышам вводили (I) в дозе 50 мг/кг в объеме 0,5 растворителя мл/мышь ежедневно внутрижелудочно через зонд в течение трех дней, в последний день введение осуществляли за 1 ч до инъекции 0,75% р-ра уксусной кислоты (n=8);

5. Анальгетик - мышам вводили (I) в дозе 100 мг/кг в объеме 0,5 растворителя мл/мышь ежедневно внутрижелудочно через зонд в течение трех дней, в последний день введение осуществляли за 1 ч до инъекции 0,75% р-ра уксусной кислоты (n=8);

6. Анальгетик - мышам вводили (I) в дозе 200 мг/кг в объеме 0,5 растворителя мл/мышь ежедневно внутрижелудочно через зонд в течение трех дней, в последний день введение осуществляли за 1 ч до инъекции 0,75% р-ра уксусной кислоты (n=8).

Количество уксусных «корчей» 27,11±4,85 и латентное время их наступления 337±75 с свидетельствуют о развитии полноценной болевой реакции у животных группы негативного контроля после введения химического раздражителя (таблица 1). Курсовое трехдневное введение мышам Трамадола в терапевтической дозе 10 мг/кг привело к снижению уровня болевой реакции на 39,1%, поскольку количество «корчей» в этой группе статистически достоверно уменьшилось в 1,6 раза по сравнению с соответствующим показателем группы негативного контроля. Латентное время развития болевой реакции не имело статистически значимых различий относительно показателя группы негативного контроля. Полученные результаты референс-контроля соответствуют данным литературы.

Применение вещества (I) в дозе 25 мг/кг способствовало снижению выраженности болевой реакции на 44,7% в результате уменьшения количества уксусных «корчей» в 1,8 раза (Р<0,05) относительно аналогичного показателя у животных, получавших воду очищенную (таблица 1).

В случае введения (I) в дозе 50 мг/кг отмечалось его максимально выраженное обезболивающее действие по сравнению со всеми экспериментальными группами, поскольку значение угнетения болевой реакции оказалось 86,6% (таблица 1). Кроме того фиксировалось самое продолжительное время развития болевой реакции 622±143 относительно соответствующих показателей всех экспериментальных групп, (таблица 1).

Дальнейшее увеличение дозы потенциального анальгетика приводило к постепенному снижению эффекта. Если в результате введения (I) в дозе 100 мг/кг обезболивающее действие составило 48,4% (Р<0,05), то увеличение дозы до 200 мг/кг способствовало снижению эффективности до 37,3 (Р>0,05).

Таким образом, тестируемое вещество 4,10-ди(этоксиацетил)-2,6,8,12-тетраацетил-2,4,6,8,10,12-гексаазатетрацикло [5,5,0,0^3,11,0^5,9]додекан (I) в тесте «Уксусные корчи» (Abdominal constriction test) проявляет выраженную анальгетическую активность в дозах 25, 50 и 100 мг/кг. В группах животных, получавших новое вещество, выявлено отсутствие корчей у 25% (50 мг/кг) и 12,5% (200 мг/кг) животных, что не наблюдалось в группе применения Трамадола. Вещество (I) в дозе 50 мг/кг обладает преимущественной активностью (Р<0,05) по сравнению с референс-препаратом Трамадолом (угнетение болевой реакции составило 86,6% против 39,1% соответственно).

Исследование анальгетической активности 4,10-ди(этоксиацетил)-2,6,8,12-тетраацетил-2,4,6,8,10,12-гексаазатетрацикло [5,5,0,0^3,11,0^5,9]додекана (I) в сравнении с референс-препаратом Трамадолом в тесте «Механической компрессии лапы» (Randall-Selitto test).

При исследовании анальгетической активности новой молекулы (I) в тесте «Механической компрессии лапы» используется анальгезиметр («Ugo Basile», Италия), который разработан для выполнения точного тестирования анальгетиков на нормальной и воспаленной лапе крыс и мышей по методу Рэндалл-Селитто [Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. Под ред. Миронова А.Н., Бунатян Н.Д. и др. М., ЗАО «Гриф и К». 2012; Barrot М. Tests and models of nociception and pain in rodents. Neuroscience. 2012, 211: 39-50]. При увеличении давления на конечность последовательно наблюдали: спинальный рефлекс отдергивания конечности, комплекс супраспинальных двигательных реакций животного, направленных на освобождение конечности, и вокализацию. Регистрировали порог возникновения вокализации (вес в граммах), латентное время болевой реакции, число животных без болевой реакции. Этот тип механического раздражения имеет определенные недостатки: 1) иногда трудно точно измерить интенсивность раздражителя; 2) повторное механическое раздражение может приводить к снижению или увеличению чувствительности; 3) слабая чувствительность метода требует использования воздействия высокой интенсивности.

Критерием анальгетического эффекта считали достоверное уменьшение интенсивности болевых реакций, оцененной в г по силе воздействия на здоровую лапу, латентному времени болевой реакции, числу животных без болевой реакции в динамике (через 1, 2 ч после введения препаратов) после однократного и курсового трехдневного введения. Эвтаназию животных по окончании экспериментов осуществляли кранио-цервикальной дислокацией.

В данной серии экспериментов использовали следующие группы мышей-самцов линии СВА:

1. Негативный контроль - мышам вводили воду очищенную в объеме 0,5 мл/мышь ежедневно внутрижелудочно через зонд в течение трех дней, в первый и последний день эксперимента введение осуществляли за 1 ч до фиксации вокализации, латентного времени болевой реакции, числа животных без болевой реакции (n=10);

2. Позитивный контроль - мышам вводили Трамадол в дозе 10 мг/кг в объеме растворителя 0,5 мл/мышь ежедневно внутрижелудочно через зонд в течение трех дней, в первый и последний день эксперимента введение осуществляли за 1 ч до фиксации вокализации, латентного времени болевой реакции, числа животных без болевой реакции (n=8);

3. Анальгетик - мышам вводили (I) в дозе 25 мг/кг в объеме растворителя 0,5 мл/мышь ежедневно внутрижелудочно через зонд в течение трех дней, в первый и последний день эксперимента введение осуществляли за 1 ч до фиксации вокализации, латентного времени болевой реакции, числа животных без болевой реакции (n=8);

4. Анальгетик - мышам вводили (I) в дозе 50 мг/кг в объеме 0,5 растворителя мл/мышь ежедневно внутрижелудочно через зонд в течение трех дней, в первый и последний день эксперимента введение осуществляли за 1 ч до фиксации вокализации, латентного времени болевой реакции, числа животных без болевой реакции (n=8);

5. Анальгетик - мышам вводили (I) в дозе 100 мг/кг в объеме 0,5 растворителя мл/мышь ежедневно внутрижелудочно через зонд в течение трех дней, в первый и последний день эксперимента введение осуществляли за 1 ч до фиксации вокализации, латентного времени болевой реакции, числа животных без болевой реакции (n=8);

6. Анальгетик - мышам вводили (I) в дозе 200 мг/кг в объеме 0,5 растворителя мл/мышь ежедневно внутрижелудочно через зонд в течение трех дней, в первый и последний день эксперимента введение осуществляли за 1 ч до фиксации вокализации, латентного времени болевой реакции, числа животных без болевой реакции (n=8).

На модели механической гиперальгезии по Рэндалл-Селитто величина болевого порога (г) составляла в первые (367,6±77,4; 406,1±59,1) и (370,4±68,6; 326,3±62,2) третьи сутки наблюдения у животных группы негативного контроля (таблица 2, 3).

Референс-препарат Трамадол статистически достоверно увеличивал порог болевой чувствительности через 1 ч после введения при однократном применении, через 2 ч (Р<0,05) после введения при курсовом применении (таблица 2, 3).

У животных, получавших вещество (I) в дозах 25, 50 и 200 мг/кг при однократном применении, отмечалась тенденция к увеличению порога болевой чувствительности через 1 ч после введения в 1,6; 1,4 и 1,6 раза относительно контроля соответственно. Максимальная обезболивающая активность отмечалась в группе применения дозы 100 мг/кг (Р<0,05). Отсутствовала статистически значимая разница между вышепредставленными данными и показателем группы Трамадола. Сходная направленность эффектов отмечалась через 2 ч после введения тестируемого вещества (I) в этот период наблюдения, причем потенциальный анальгетик проявил выраженную анальгетическую активность в дозах 25 мг/кг (Р<0,05) и 100 мг/кг (Р<0,05) (таблица 2, 3). Отсутствие статистически значимых результатов через 1 ч (25, 50 и 200 мг/кг) и 2 ч (50 и 200 мг/кг) после введения вещества (I), обусловлено большим разбросом данных внутри экспериментальных групп, что может быть обусловлено индивидуальной чувствительностью животных.

Статистически значимое увеличение порога болевой чувствительности в ответ на действие нарастающего механического стимула, точечно приложенного к задней лапке мыши, выявлено в группе животных, получавших вещество (I) в дозе 100 мг/кг через 1 ч после введения в результате его курсового применения (таблица 3). В остальных группах применения вещества отмечалась тенденция к увеличению порога болевой чувствительности. Референс-препарат Трамадол проявил сходную активность (Р>0,05).

В последний период наблюдения (через 2 ч после введения при курсовом применении) статистически значимое увеличение порога болевой чувствительности фиксировалась в отношении следующих групп: Трамадола и вещества (I) в дозах 100 и 200 мг/кг (таблица 3). Следует отметить сопоставимость эффектов референс-препарата и тестируемого вещества.

По совокупности полученных результатов показателей порога болевой чувствительности можно сделать вывод о преимущественной активности вещества (I), которое продемонстрировало статистически значимую активность во все сроки наблюдения, главным образом, в дозе 100 мг/кг в отличие от Трамадола.

Важным показателем анальгетической активности новых лекарственных средств является латентное время развития болевой реакции (таблица 2, 3). Через 1 и 2 ч после однократного введения Трамадола выявлена тенденция к увеличению латентного времени (разброс данных внутри группы). У животных, получавших вещество (I) в дозах 25, 50 и 200 мг/кг, также отмечалась тенденция к увеличению данного показателя в первый час наблюдения при однократном применении, что вполне может быть обусловлено индивидуальной чувствительностью животных. Выраженная анальгетическая активность тестируемого анальгетика (I) в дозе 100 мг/кг, судя по статистически значимому повышению латентного времени (1,8 раза) относительно показателя негативного контроля, выявлена через 1 ч после его введения в данный период наблюдения. Через 2 ч после введения максимальное значение латентного времени развития болевого ответа оказалось в группе применения вещества (I) в дозах 25 и 100 и мг/кг относительно соответствующих значений группы негативного контроля (таблица 2). Следует отметить отсутствие статистически значимого различия с Трамадолом.

Курсовое применение как Трамадола, так и вещества (I) способствовало увеличению их эффективности через 1 и 2 ч наблюдения. Так, в группе введения опиоидного анальгетика выявлено статистически значимое увеличение времени развития болевой реакции (таблица 3) в динамике этого этапа наблюдения. В случае применения вещества (I) в дозах 25 мг/кг, 100 мг/кг и 200 мг/кг фиксировалось значительное повышение показателя 1 ч (Р<0,05) и 2 ч (Р<0,05); 1 ч (Р<0,05) и 2 ч (Р<0,01); 2 ч (Р<0,05) соответственно (таблица 3).

Таким образом, анализ показателей латентного времени развития болевой реакции позволяет сделать вывод о преимущественной активности вещества (I), которое продемонстрировало статистически значимую активность во все сроки наблюдения, главным образом, в дозе 100 мг/кг в отличие от Трамадола.

Одним из критериев, характеризующих анальгетическую активность исследуемого вещества, может быть количество животных с максимальным проявлением обезболивающего эффекта - экспозиция в течение 15 с на приборе (таблица 4).

На первом этапе наблюдения (при однократном применении) среди животных всех исследуемых групп статистически достоверное количество мышей с максимальным анальгетическим действием (15 с период экспозиции на приборе) отмечалось при использовании (I) в дозе 100 мг/кг (2 ч; 62,5%; Р<0,05). Курсовое применение тестируемых веществ привело к статистически значимому увеличению количества животных без проявления признаков боли во всех исследуемых группах в первый час наблюдения (таблица 4). Через 2 ч наблюдения максимальное значение 50% мышей без проявления признаков боли отмечено в группе применения вещества (I) в дозе 100 мг/кг, тогда как в других группах отмечалась тенденция. Следует отметить, что исследуемый показатель болевого синдрома (I) в дозе 100 мг/кг оказался статистически значимым не только относительно соответствующего значения негативного контроля, но и Трамадола.

Таким образом, в результате исследования анальгетической активности вещества (I) в тесте «Механической компрессии лапы» (Randall-Selitto test) у мышей-самцов линии СВА при однократном и трехдневном применении в динамике (1, 2 ч после введения), продемонстрирована выраженная антиноцицептивная активность в диапазоне доз 25-200 мг/кг. Следует отметить, что максимальный эффект, преимущественный по сравнению с Трамадолом, выявлен после введения вещества (I) в дозе 100 мг/кг.

Анализ полученных результатов исследования анальгетической активности 4,10-д и(этоксиацетил)-2,6,8,12-тетраацетил-2,4,6,8,10,12-гексаазатетрацикло[5,5,0,0^3,11,0^5,9]додекана (I) в сравнении с референс-препаратом Трамадолом в тестах «Уксусные корчи» (Abdominal constriction test) и «Механической компрессии лапы» (Randall-Selitto test) позволяет заключить, что вновь полученное вещества (I) обладает выраженным обезболивающим действием в диапазоне доз 25-200 мг/кг, превосходящим по ряду показателей активность референс-препарата Трамадола.

Полученные данные о выраженном обезболивающем действии малотоксичного 4,10-ди(этоксиацетил)-2,6,8,12-тетраацетил-2,4,6,8,10,12-гексаазатетрацикло[5,5,0,0^3,11,0^5,9]додекана (I) позволяют сделать вывод о перспективности изучения выбранного соединения в качестве анальгетического средства для купирования средней и высокой интенсивности болей различного генеза и, в определенной мере, прогнозировать характер его обезболивающего действия у человека.

1. 4,10-ди(2-этоксиацетил)-2,6,8,12-тетраацетил-2,4,6,8,10,12-гексаазатетрацикло[5,5,0,0^3,11,0^5,9]додекан (I), обладающий анальгетической активностью.

2. Способ получения 4,10-ди(этоксиацетил)-2,6,8,12-тетраацетил-2,4,6,8,10,12-гексаазатетрацикло[5,5,0,0^3,11,0^5,9]додекана (I) по п. 1, заключающийся в ацилировании 2,6,8,12-тетраацетил-2,4,6,8,10,12-гексаазатетрацикло[5,5,0,0^3,11,0^5,9]додекана хлорангидридом 2-этоксиуксусной кислоты.