Состав, обладающий антиретровирусной активностью, фармацевтическая композиция и лекарственное средство

Настоящее изобретение относится к составу для лечения ВИЧ, включающему 3'-азидо-3'-дезокситимидин-5'-фосфонат натрия (фосфазид) и 3'-(3'-азидо-3'-дезокситимидина-5'-фосфонат-3-ил)-3'-дезокситимидина-5'-фосфонат натрия в количестве от 0,05 до 0,95 мас. %. Также настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции для лечения ВИЧ и к лекарственному средству для лечения ВИЧ в виде таблеток. Техническим результатом настоящего изобретения является повышение стабильности (времени хранения) состава по сравнению с фосфазидом и снижение гигроскопичности состава по сравнению с фосфазидом. 3 н. и 2 з.п. ф-лы, 1 ил., 4 табл., 7 пр.

 

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ

Изобретение относится к области медицины, фармакологии и химико-фармацевтической промышленности, а именно к новому составу, содержащему 3'-азидо-3'-дезокситимидин-5'-фосфонат натрия (фосфазид) и 3'-(3'-азидо-3'-дезокситимидина-5'-фосфонат-3-ил)-3'-дезокситимидина-5'-фосфонат натрия, фармацевтической композиции на основе упомянутого состава и лекарственному средству на основе упомянутой фармацевтической композиции.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

3'-азидо-3'-дезокситимидин-5'-фосфонат натрия (фосфазид, или 5'-Н-Фосфонат азидотимидина, или 5НР) является модифицированным аналогом природного нуклеозида тимидина (патент РФ № 2187509 С1) и избирательным ингибитором обратной транскриптазы вируса иммунодефицита человека 1-го и 2-го типа (патент РФ № 2106353 С1). При попадании в инфицированную клетку он последовательно метаболизируется внутриклеточными киназами до 5'-трифосфата-азидотимидина-ТФ, который является субстратом для обратной транскриптазы ВИЧ и конкурентным ингибитором этого фермента. Противовирусная активность препарата обусловлена преимущественно включением его монофосфатной формы в цепь вирусной ДНК, в результате чего происходит разрыв цепи и остановка воспроизведения вирусных частиц, причем азидотимидина-ТФ обладает значительно меньшим сродством к ДНК-полимеразам человеческих клеток (патент РФ № 2322450 С2).

Синтез фосфазида описан в А.С. СССР № 1548182.

Фосфазид обладает высокой биофармацевтической растворимостью и низкой кишечной проницаемостью, благодаря чему его токсическое влияние на организм человека снижено, несмотря на высокую эффективность в отношении ВИЧ.

Фосфазид применяется в клинической практике в качестве антиретровирусного препарата с 1999 года. Широкий спектр применения и малая токсичность фосфазида позволяет использовать его в схемах антиретровирусной терапии для пациентов, ранее не получавших антиретровирусную терапию (схемах первого ряда), а также как приоритетный препарат альтернативных схем лечения при невозможности назначения зидовудина, абакавира, тенофовира, ставудина и диданозина. Кроме того, накоплен обширный опыт применения фосфазида для профилактики перинатального инфицирования ВИЧ, а также при лечении ВИЧ у детей. Высокая эффективность фосфазида позволяет применять его для профилактики заражения ВИЧ в случае риска инфицирования как в бытовых условиях при незащищенных контактах с возможным носителем, так и для экстренной профилактики в случае риска профессионального инфицирования при попадании биологических жидкостей пациентов на слизистые оболочки и повреждении кожных покровов (уколах, порезах).

Фосфазид показан для особых категорий пациентов, таких как пациенты с анемией, эритропенией или гранулоцитопенией легкой степени тяжести, пациенты старше 50 лет или имеющие нарушения липидного и углеводного обмена, больные с риском сердечно-сосудистой патологии, пациенты с нарушениями познавательной деятельности (когнитивными расстройствами), пациенты с сочетанными инфекциями ВИЧ и туберкулеза, ВИЧ и гепатитов В и С, пациенты с тяжелым иммунодефицитом.

3'-азидо-3'-дезокситимидин-5'-фосфонат натрия (фосфазид)

Авторы настоящего изобретения неожиданно обнаружили, что новый состав, включающий фосфазид и примесь 3'-(3'-азидо-3'-дезокситимидина-5'-фосфонат-3-ил)-3'-дезокси-тимидина-5'-фосфоната натрия, имеет лучшие свойства, по сравнению с чистым фосфазидом.

3'-(3'-азидо-3'-дезокситимидина-5'-фосфонат-3-ил)-3'-дезокситимидина-5'-фосфонат натрия, AZT-1512.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Ниже приведены определения терминов, которые используются в описании настоящего изобретения.

«Лекарственное начало» (лекарственная субстанция, лекарственное вещество, активный ингредиент) означает физиологически активное вещество синтетического или иного (биотехнологического, растительного, животного, микробного и прочего) происхождения, обладающее фармакологической активностью и являющееся активным началом фармацевтической композиции, используемой для производства и изготовления лекарственного препарата (средства).

«Лекарственное средство (препарат)» - вещество (или смесь веществ в виде фармацевтической композиции) в виде таблеток, капсул, инъекций, мазей и др. готовых форм, предназначенное для восстановления, исправления или изменения физиологических функций у человека и животных, а также для лечения и профилактики болезней, диагностики, анестезии, контрацепции, косметологии и прочего.

«Стабильность» - способность лекарственного средства сохранять химические, физические, микробиологические, биофармацевтические и фармакологические свойства в определенных границах в течение установленного срока годности.

«Стабильная фармацевтическая субстанция» - фармацевтическая субстанция считается стабильной, если соответствует требованиям спецификации при хранении при температуре 25°С и относительной влажности 60% в течение двух лет.

«Срок годности» - период времени, в течение которого лекарственное средство должно полностью соответствовать спецификации на срок годности при надлежащем хранении в условиях, указанных в фармакопейной статье или нормативной документации и на упаковке.

«Фармацевтическая композиция» обозначает композицию, включающую в себя новый состав 3'-азидо-3'-дезокситимидин-5'-фосфоната натрия и, по крайней мере, один из компонентов, выбранных из группы, состоящей из фармацевтически приемлемых и фармакологически совместимых наполнителей, растворителей, разбавителей, носителей, вспомогательных, распределяющих средств, средств доставки, таких как консерванты, стабилизаторы, наполнители, измельчители, увлажнители, эмульгаторы, суспендирующие агенты, загустители, подсластители, отдушки, ароматизаторы, антибактериальные агенты, фунгициды, лубриканты, регуляторы пролонгированной доставки, выбор и соотношение которых зависит от их природы, способа введения композиции и дозировки. Примерами суспендирующих агентов являются этоксилированный изостеариловый спирт, полиоксиэтилен, сорбитол и сорбитовый эфир, микрокристаллическая целлюлоза, метагидроксид алюминия, бентонит, агар-агар и трагакант, а также смеси этих веществ. Защита от действия микроорганизмов может быть обеспечена с помощью разнообразных антибактериальных и противогрибковых агентов, например, таких как парабены, хлорбутанол, сорбиновая кислота и подобные им соединения.

Композиция может включать также изотонические агенты, например, сахара, хлористый натрий и им подобные. Пролонгированное действие композиции может быть обеспечено с помощью агентов, замедляющих абсорбцию активного начала, например, моностеарат алюминия, гипромеллоза и желатин. Примерами подходящих носителей, растворителей, разбавителей и средств доставки являются вода, этанол, полиспирты, а также их смеси, растительные масла (такие, как оливковое масло) и инъекционные органические сложные эфиры (такие, как этилолеат). Примерами наполнителей являются лактоза, молочный сахар, цитрат натрия, карбонат кальция, микрокристаллическая целлюлоза, фосфат кальция и им подобные. Примерами измельчителей и распределяющих средств являются крахмал, натрия крахмала гликолят, альгиновая кислота и ее соли, силикаты. Примерами лубрикантов являются стеарат магния, лаурилсульфат натрия, тальк, а также полиэтиленгликоль с высоким молекулярным весом. Фармацевтическая композиция для перорального, сублингвального, трансдермального, внутримышечного, внутривенного, подкожного, местного или ректального введения активного начала, одного или в комбинации с другим активным началом, может быть введена животным и людям в стандартной форме введения, в виде смеси с традиционными фармацевтическими носителями.

Пригодные стандартные формы введения включают пероральные формы, такие как таблетки, покрытые и непокрытые оболочкой, таблетки с модифицированным или пролонгированным высвобождением, желатиновые капсулы, пилюли, порошки, гранулы, жевательные резинки и пероральные растворы или суспензии, сублингвальные и трансбуккальные формы введения, аэрозоли, имплантаты, местные, трансдермальные, подкожные, внутримышечные, внутривенные, интраназальные или внутриглазные формы введения и ректальные формы введения.

«Фармацевтически приемлемая соль» означает относительно нетоксичные органические и неорганические соли кислот и оснований, предложенных в настоящем изобретении. Эти соли могут быть получены in situ в процессе синтеза, выделения или очистки соединений или приготовлены специально. В частности, соли оснований могут быть получены специально, исходя из очищенного свободного основания предложенного соединения и подходящей органической или неорганической кислоты. Примерами полученных таким образом солей являются гидрохлориды, гидробромиды, сульфаты, бисульфаты, фосфаты, нитраты, ацетаты, оксалаты, валериаты, олеаты, пальмитаты, стеараты, лаураты, бораты, бензоаты, лактаты, тозилаты, цитраты, малеаты, фумараты, сукцинаты, тартраты, мезилаты, малонаты, салицилаты, пропионаты, этансульфонаты, бензолсульфонаты, сульфаматы и им подобные. Соли предложенных кислот также могут быть специально получены реакцией очищенной кислоты с подходящим основанием, при этом могут быть синтезированы соли металлов и аминов. К металлическим относятся соли натрия, калия, кальция, бария, цинка, магния, лития и алюминия, наиболее желательными из которых являются соли натрия и калия. Подходящими неорганическими основаниями, из которых могут быть получены соли металлов, являются гидроксид, карбонат, бикарбонат и гидрид натрия, гидроксид и бикарбонат калия, поташ, гидроксид лития, гидроксид кальция, гидроксид магния, гидроксид цинка. В качестве органических оснований, из которых могут быть получены соли предложенных кислот, выбраны амины и аминокислоты, обладающие достаточной основностью, чтобы образовать устойчивую соль, и пригодные для использования в медицинских целях (в частности, они должны обладать низкой токсичностью). К таким аминам относятся аммиак, метиламин, диметиламин, триметиламин, этиламин, диэтиламин, триэтиламин, бензиламин, дибензиламин, дициклогексиламин, пиперазин, этилпиперидин, трис(гидроксиметил)аминометан и подобные им. Кроме того, для солеобразования могут быть использованы гидроокиси тетраалкиламмония, например, такие как холин, тетраметиламмоний, тетраэтиламмоний и им подобные. В качестве аминокислот могут быть использованы основные аминокислоты - лизин, орнитин, тимин, урацил, аргинин и другие.

Задачей настоящего изобретения является разработка стабильного при хранении, негигроскопичного, экономически целесообразного, промышленно реализуемого, препаративного состава фосфазида (3'-азидо-3'-дезокситимидин-5'-фосфоната натрия).

Стабильность в твердом состоянии и срок хранения активных компонентов являются очень важными факторами. Лекарственное соединение и композиции, включающие его, должны обладать способностью храниться в течение значительных периодов времени, не проявляя значительного изменения физико-химических свойств активного компонента (например, его химического состава, плотности, гигроскопичности).

Таким образом, авторы изобретения неожиданно обнаружили, что присутствие небольшого количества AZT-1512 в субстанции фосфазида улучшает некоторые свойства субстанции фосфазида.

Технические результаты настоящего изобретения:

- повышение стабильности (времени хранения) состава по сравнению с фосфазидом;

- снижение гигроскопичности состава по сравнению с фосфазидом.

Поставленная задача решается, а технический результат достигается получением нового состава, который включает 3'-азидо-3'-дезокситимидин-5'-фосфонат натрия (фосфазид) и 3'-(3'-азидо-3'-дезокситимидина-5'-фосфонат-3-ил)-3'-дезокситимидина-5'-фосфонат натрия, отличающийся тем, что упомянутый состав содержит 3'-(3'-азидо-3'-дезокситимидина-5'-фосфонат-3-ил)-3'-дезокситимидина-5'-фосфонат натрия в количестве не более 0,95% мас.

Более предпочтительным является состав, включающий 3'-(3'-азидо-3'-дезокситимидина-5'-фосфонат-3-ил)-3'-дезокситимидина-5'-фосфонат натрия в количестве от 0,05 до 0,95% мас.

Еще более предпочтительным является состав, включающий 3'-(3'-азидо-3'-дезокситимидина-5'-фосфонат-3-ил)-3'-дезокситимидина-5'-фосфонат натрия в количестве 0,15-0,65% мас.

Еще более предпочтительным является состав, включающий 3'-(3'-азидо-3'-дезокситимидина-5'-фосфонат-3-ил)-3'-дезокситимидина-5'-фосфонат натрия в количестве 0,15-0,30% мас.

Также в предпочтительном варианте осуществления изобретения состав содержит фосфазид в количестве более 96,0% мас. и индивидуальные сопроводительные идентифицированные и не идентифицированные примеси в суммарном количестве менее 4,00% мас., более предпочтительно, менее 3% мас., еще более предпочтительно, менее 2% мас., еще более предпочтительно, менее 0,1% мас.

Еще одним объектом данного изобретения является новая фармацевтическая композиция, обладающая антиретровирусной активностью, которая содержит терапевтически эффективное количество упомянутого состава, включающего фосфазид и 3'-(3'-азидо-3'-дезокситимидина-5'-фосфонат-3-ил)-3'-дезокситимидина-5'-фосфонат натрия и, по меньшей мере, один фармацевтически приемлемый носитель.

Еще одним объектом данного изобретения является лекарственное средство, обладающее антиретровирусной активностью в виде таблеток, таблеток покрытых оболочкой, таблеток с модифицированным или пролонгированным высвобождением, капсул или инъекций, помещенных в фармацевтически приемлемую упаковку, содержащее упомянутую фармацевтическую композицию, которая содержит терапевтически эффективное количество упомянутого состава, включающего фосфазид и 3'-(3'-азидо-3'-дезокситимидина-5'-фосфонат-3-ил)-3'-дезокситимидина-5'-фосфонат натрия и, по меньшей мере, один фармацевтически приемлемый носитель.

Фармацевтические композиции могут включать фармацевтически приемлемые эксципиенты. Под фармацевтически приемлемым эксципиентами подразумеваются применяемые в сфере фармацевтики разбавители, вспомогательные агенты и/или носители. Фармацевтическая композиция наряду с составом, включающим фосфазид и 3'-(3'-азидо-3'-дезокситимидина-5'-фосфонат-3-ил)-3'-дезокситимидина-5'-фосфонат натрия, по настоящему изобретению может включать и другие активные субстанции, в том числе обладающие активностью, при условии, что они не вызывают нежелательных эффектов.

При необходимости использования фармацевтической композиции по настоящему изобретению в клинической практике она может смешиваться с традиционными фармацевтическими носителями.

Носители, используемые в фармацевтических композициях по настоящему изобретению, представляют собой носители, которые применяются в сфере фармацевтики для получения распространенных форм, в частности, в пероральных формах используются связующие вещества, смазывающие агенты, дезинтегранты, растворители, разбавители, стабилизаторы, суспендирующие агенты, корригенты вкуса; в формах для инъекций используются антисептические агенты, солюбилизаторы, стабилизаторы; в местных формах используются основы, разбавители, смазывающие агенты, антисептические агенты.

Предметом данного изобретения также является лекарственное средство, обладающее антиретровирусной активностью, в виде таблеток, таблеток покрытых оболочкой, таблеток с модифицированным или пролонгированным высвобождением, капсул или инъекций, помещенных в фармацевтически приемлемую упаковку, содержащее в терапевтически эффективном количестве состав, включающий фосфазид и 3'-(3'-азидо-3'-дезокситимидина-5'-фосфонат-3-ил)-3'-дезокситимидина-5'-фосфонат натрия в количестве от 0,05% до 0,95% мас., или фармацевтическую композицию по настоящему изобретению.

Лекарственные средства могут вводиться перорально или парентерально (например, внутривенно, подкожно, внутрибрюшинно или местно). Клиническая дозировка средства, содержащего новый состав фосфазида по настоящему изобретению, у пациентов может корректироваться в зависимости от терапевтической эффективности и биодоступности активных ингредиентов в организме, скорости их обмена и выведения из организма, а также в зависимости от возраста, пола и стадии заболевания пациента, при этом суточная доза у взрослых обычно составляет 200-1200 мг, предпочтительно 600-800 мг. Поэтому во время приготовления из фармацевтической композиции лекарственного средства по настоящему изобретению в виде единиц дозировки необходимо учитывать вышеназванную эффективную дозировку, при этом каждая единица дозировки препарата должна содержать 200 – 400 мг нового состава фосфазида.

В соответствии с указаниями врача данные препараты могут приниматься несколько раз в течение определенных промежутков времени (предпочтительно - от одного до шести раз).

Представленные ниже примеры осуществления изобретений иллюстрируют, но не ограничивают предложенную группу изобретений.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ФИГУРЫ

На фиг.1 представлен график зависимости гигроскопичности от содержания AZT-1512.

ОСУЩЕСТВЛЕНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

ПРИМЕР 1

Синтез фосфазида

Загружают в реактор Р-9 предварительно отмеренные 11,6 л треххлористого фосфора. Барботируют азот для удаления кислорода.

В метальный бак МБ-9 загружают 7 8 л хлористого метилена и добавляют 1,7 л очищенного триэтилфосфата. Барботируют азот для удаления кислорода.

В метальный бак МБ-10 при перемешивании загружают 23,23 кг 3'-азидо-3'-дезокситимидина. Перемешивают до растворения. Барботируют азот для удаления кислорода.

Предварительно загружают в мерник М-8 12,5 л дистиллированной воды. Обескислороживают воду азотом.

Загружают в мерник М-10 94,7 л 20% водного раствора гидроксида натрия. Барботируют азот для удаления кислорода.

В эмалированный реактор Р-7 объемом 500 л с эмалированной мешалкой загружают хлористый метилен до общего объема 200 л. Включают мешалку. Барботируют азот для удаления кислорода и при перемешивании охлаждают до -15°С. Загружают в реактор Р-7 раствор АЗТ из МБ-9 так, чтобы температура не превышала -15°С, при этом непрерывно перемешивая и барботируя азотом раствор в мешальном баке и реакционную массу в реакторе.

По окончании загрузки раствора АЗТ подают воду из мерника М-8 в реактор Р-7 так, чтобы температура в Р-7 не поднималась выше -15°С, перемешивая и барботируя азотом воду в мернике М-8 и реакционную массу в реакторе Р-7.

По окончании загрузки воды в реактор Р-7 из М-10 подают 113,6 кг 20% водного раствора гидроксида натрия так, чтобы температура в реакторе не поднималась выше -15°С, перемешивая и барботируя азотом воду в мернике М-10 и реакционную массу в Р-7, до достижения реакционной массой значения рН 8,4-8,7.

По окончании процесса нейтрализации охлаждение отключают.

Выключают мешалку на реакторе Р-7 и перегружают реакционную массу в 400-литровый реактор Р-2, где реакционная смесь в течении 3-4 часов разделяется на два слоя.

Нижний водный слой перегружают из Р-2 в Р-7.

Органический слой из Р-2 экстрагируют 4 л дистиллированной воды. Перемешивают 10 минут. Полученному раствору дают отстоятся. Нижний органический слой удаляют, а водный слой из Р-7 перегружают обратно в Р-2.

Доводят рН в Р-2 до 7,8±0,1 добавлением 20% раствора NaOH или концентрированной соляной кислотой при перемешивании.

Выдерживают водный раствор в Р-2 3-4 ч; проверяют рН. При необходимости проводят дополнительную регулировку рН как описано выше.

Получают примерно 145 л водного раствора 5НР.

Перегружают водный раствор 5НР из Р-2 в выпарной аппарат ВА-63.

Включают мешалку на выпарном аппарате ВА-63 и отгоняют примерно 73 л растворителя при температуре 70-75°С под вакуумом 20-30 мм. рт.ст.

К остатку добавляют 75 л ДМФА и кипятят с дефлегматором до содержания воды в кубовом остатке 2%.

Кубовой остаток центрифугируют, фугат фильтруют и промывают 2 л ДМФА.

Фильтрат помещают в центрифугу, высаживают и промывают продукт примерно 50-60 мин при 5000 об/мин медленным непрерывным добавлением ацетона (в общем количестве около 3000 л) и удалением фугата до содержания ДМФА в продукте ниже 0,06%.

Продукт сушат под вакуумом не менее 50 мбар 16-2 4 ч при 85°С до содержания ацетона менее 0,25%.

Продукт измельчают и просеивают через сито.

ПРИМЕР 2

Синтез AZT-1512

В стеклянный реактор вместимостью 2 л (Р-1), оснащенный рубашкой, термометром, барботером, мешалкой и насосом-дозатором, загружают 0,6 л ацетонитрила, и 50 мл ДМФА. Полученную реакционную массу охлаждают до -25°С. Затем в реактор добавляют 17,8 мл оксихлорида фосфора.

В химический стакан вместимостью 0,5 л (Сб-2) добавляют 100,0 г 3'-азидо-3'-дезокситимидина и 360 мл триэтилфосфата. Перемешивают смесь до полного растворения АЗТ.

В реактор Р-1 при перемешивании и охлаждении загружают раствор АЗТ из химического стакана (Сб-2) со скоростью 1-2 мл/минуту, следя, чтобы температура реакционной массы не поднималась выше -25°С.

В стеклянный реактор (Р-1) при перемешивании и охлаждении загружают 100 мл дистиллированной воды со скоростью 0,5-2 мл/минуту так, чтобы температура реакционной массы не поднималась выше -25°С. Затем в реактор Р-1 при перемешивании и охлаждении загружают 470 мл раствора гидроксида натрия со скоростью 0,5-5 мл/минуту. Добавление щелочи останавливают при достижении рН выше 8,0. Затем к реакционной массе добавляют 500 мл хлористого метилена, перемешивают полученную эмульсию в течение 10 минут и перегружают ее в делительные воронки вместимостью 2 л (ДВ-1). Водный слой выгружают в химический стакан (Сб-3) и доводят рН водного раствора 10% водным раствором гидроксида натрия до значения 8,5.

Водный раствор из химического стакана (Сб-3) перегружают в роторный испаритель (РИ-1) и отгоняют воду под вакуумом при температуре не выше 45°С. По окончании отгонки воды добавляют 200 мл метанола и тщательно перемешивают осадок. Затем добавляют 200 мл изопропанола и выпаривают досуха под вакуумом при температуре не выше 45°С. Повторяют растворение в метаноле и выпаривание с изопропиловым спиртом еще два раза. Полученный осадок растворяют в 500 мл ДМФА. Выдерживают полученный раствор в течение суток при комнатной температуре.

Полученный раствор фильтруют на нутч-фильтре (НФ-1) для отделения солей. Фильтрат высаживают в 7,0 л ацетона при перемешивании в емкость (Сб-4), после чего фильтруют на нутч-фильтре.

Полученный осадок промывают 0,5 л ацетона и сушат на роторном испарителе (РИ-1) под вакуумом при температуре не выше 45°С в течение 2 суток. По окончании сушки продукт измельчают в мельнице (М-1). Выход продукта составляет 0,016 кг.

Структуру полученного вещества подтвердили посредством MALDI-TOF масс-спектрометрии и ЯМР-спектроскопии.

ПРИМЕР 3

Получение образцов фосфазида с разным содержанием AZT-1512

К чистому фосфазиду, полученному в примере 1 добавляли расчетное количество AZT-1512 и тщательно перемешивали. Получали образцы с следующим содержанием AZT-1512:

1) образец серии 011217Э с содержанием AZT-1512 менее 0,05 мас. %,

2) образец серии 021217Э с содержанием AZT-1512 0,13 мас. %,

3) образец серии 031217Э с содержанием AZT-1512 0,24 мас. %,

4) образец серии 041217Э с содержанием AZT-1512 0,65 мас. %,

5) образец серии 051217Э с содержанием AZT-1512 0,95 мас. %.

ПРИМЕР 4

Определение содержания AZT-1512 в образцах

Определение проводят методом ВЭЖХ.

Используемые реактивы: ацетат аммония, метанол для хроматографии, вода для хроматографии.

Используемые стандартные образцы: стандартный образец фосфазида (ГСО Никавир® ООО «АЗТ ΦΑΡΜΑ К.В., Россия»); стандартный образец СО «Никавир® (фосфазид) смесь для идентификации примесей» производства ООО «АЗТ ΦΑΡΜΑ К.В.», Россия (содержит фосфазид, примесь В, примесь Т, примесь Y, примесь М, примесь Z, AZT-1512, примесь W, примесь R).

3,85 г ацетата аммония помещают в мерную колбу вместимостью 1000 мл, растворяют в 900 мл воды, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают. Срок годности раствора 7 суток.

Подвижная фаза А. Смешивают полученный 0,05 Μ раствор ацетата аммония и метанол в соотношении 95:5, фильтруют через мембранный полимерный фильтр с диаметром пор 0,45 мкм и дегазируют любым подходящим способом. Срок годности раствора 7 суток.

Подвижная фаза В. В качестве подвижной фазы В используют метанол для хроматографии.

Холостой раствор. В качестве холостого раствора используют воду для хроматографии.

Испытуемый раствор (около 0,2 мг/мл субстанции). Около 10,0 мг (точная навеска) субстанции помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, прибавляют около 25 мл воды, обрабатывают ультразвуком в течение 5 минут, не допуская нагревания. Доводят объем полученного раствора водой до метки, перемешивают и фильтруют через мембранный целлюлозный фильтр с размером пор 0,45 мкм, отбрасывая несколько первых миллилитров фильтрата. Раствор используют свежеприготовленным.

Стандартный раствор фосфазида для количественного определения (около 0,2 мг/мл фосфазида). Около 25,0 мг (точная навеска) стандартного образца фосфазида помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, прибавляют около 10-15 мл воды, обрабатывают ультразвуком в течение 5 минут, не допуская нагревания. Доводят объем полученного раствора водой до метки, перемешивают и фильтруют через мембранный целлюлозный фильтр с размером пор 0,45 мкм, отбрасывая несколько первых миллилитров фильтрата. 2,0 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 10 мл, доводят объем полученного раствора водой до метки и перемешивают.

Стандартный раствор фосфазида для определения примесей (около 0,0002 мг/мл фосфазида). Около 25,0 мг (точная навеска) стандартного образца фосфазида помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, прибавляют около 10-15 мл воды, обрабатывают ультразвуком в течение 5 минут, не допуская нагревания. Доводят объем полученного раствора водой до метки, перемешивают и фильтруют через мембранный целлюлозный фильтр с размером пор 0,45 мкм, отбрасывая несколько первых миллилитров фильтрата. 2,0 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объем полученного раствора водой до метки и перемешивают 1,0 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают. Раствор используют свежеприготовленным.

Раствор для проверки пригодности хроматографической системы (ППХС) (около 0,2 мг/мл фосфазида). Около 22,0 мг стандартного образца СО Никавир® (фосфазид) смесь для идентификации примесей помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в 50 мл воды. Доводят объем полученного раствора водой до метки, перемешивают и фильтруют через мембранный целлюлозный фильтр с размером пор 0,45 мкм, отбрасывая несколько первых миллилитров фильтрата. Раствор используют свежеприготовленным.

Раствор для проверки чувствительности хроматографической системы (ПЧХС) (около 0,0001 мг/мл фосфазида). 5,0 мл стандартного раствора фосфазида для определения примесей помещают в мерную колбу вместимостью 10 мл, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают. Раствор используют свежеприготовленным.

Хроматографические условия

Программа градиента

Время удерживания фосфазида составляет около 10,0 мин.

Идентификацию примесей проводят по хроматограмме раствора для проверки пригодности хроматографической системы и по относительным временам удерживания.

Проверка пригодности хроматографической системы. Регистрируют хроматограмму холостого раствора. Хроматографическая система считается пригодной, если на хроматограмме холостого раствора отсутствуют пики по времени удерживания, совпадающие с определяемыми компонентами. Регистрируют хроматограмму раствора для проверки чувствительности хроматографической системы. Хроматографическая система считается пригодной, если соотношение «сигнал/шум», определенное по пику фосфазида, составляет не менее 10. Регистрируют хроматограмму раствора для проверки пригодности хроматографической системы. Хроматографическая система считается пригодной, если разрешение между пиками примеси Υ и примеси Μ составляет не менее 1,5. Регистрируют последовательно не менее 3 хроматограмм стандартного раствора фосфазида для определения примесей.

Хроматографическая система считается пригодной, если:

- относительное стандартное отклонение площади пика фосфазида - не более 2,0%;

- фактор асимметрии пика фосфазида - не более 1,5;

- эффективность хроматографической колонки, рассчитанная по пику фосфазида - не менее 5000 теоретических тарелок.

Методика.

Регистрируют не менее 3 хроматограмм испытуемого раствора, не менее 3 хроматограмм стандартного раствора фосфазида для определения примесей и не менее 3 хроматограмм стандартного раствора фосфазида для количественного определения.

Содержание каждой примеси в процентах (Χ_i) рассчитывают по формуле:

где S_i - площадь пика соответствующей примеси на хроматограмме испытуемого раствора;

S₀ - средняя площадь пика фосфазида на хроматограммах стандартного раствора фосфазида для определения примесей;

а - навеска исследуемой субстанции, мг;

а ₀ - навеска стандартного образца фосфазида, мг;

RRF - относительный фактор отклика соответствующей примеси (для неидентифицированных примесей RRF=1);

Ρ - чистота стандартного образца фосфазида, %.

Суммарное содержание примесей в процентах (X) рассчитывают по формуле:

где X_i - содержание единичных примесей, %.

На хроматограмме испытуемого раствора не учитывают пики, соответствующие пикам на хроматограмме холостого раствора и пики неидентифицированной примеси с площадью менее площади пика фосфазида на хроматограмме раствора ПЧХС (0,05%).

Содержание фосфазида в пересчете на безводное и свободное от органических растворителей вещество в процентах (X), рассчитывают по формуле:

где S - площадь пика фосфазида на хроматограммах испытуемого раствора;

S₀ - средняя площадь пика фосфазида на хроматограммах стандартного раствора фосфазида для количественного определения;

а - навеска исследуемой субстанции, мг;

а ₀ - навеска стандартного образца фосфазида, мг;

Ρ - чистота стандартного образца фосфазида, %;

W - содержание воды¹ (¹Определение воды).

Для определения используют около 1 г (точная навеска) субстанции; метод К. Фишера (метод 1), методика Б (ГОСУДАРСТВЕННОЙ ФАРМАКОПЕИ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ, ОФС.1.2.3.0002.15, «Определение воды»). При необходимости навеску субстанции взбалтывают с растворителем перед титрованием в течение 5 минут.) и остаточных органических растворителей² (²Остаточные органические растворители).

Ацетон - не более 0,25%; Ν,N-диметилформамид - не более 0,081%; Диацетоновый спирт - не более 0,025%.) в субстанции, %.

Количество органических растворителей определяют методом ГЖХ.

В качестве холостого раствора используют воду для хроматографии.

Исходный раствор стандартного образца ацетона. В мерную колбу вместимостью 250 мл, содержащую около 50 мл воды помещают около 300 мг (точная навеска) ацетона. Доводят объем раствора водой до метки и перемешивают. Раствор используют свежеприготовленным.

Исходный раствор стандартного образца Ν,N-диметилформамида. В мерную колбу вместимостью 250 мл, содержащую около 50 мл воды помещают около 300 мг (точная навеска) N,N-диметилформамида. Доводят объем раствора водой до метки и перемешивают. Раствор используют свежеприготовленным.

Исходный раствор стандартного образца диацетонового спирта. В мерную колбу вместимостью 250 мл, содержащую около 50 мл воды помещают около 300 мг (точная навеска) диацетонового спирта. Доводят объем раствора водой до метки и перемешивают. Раствор используют свежеприготовленным.

Стандартный раствор. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 10,0 мл исходного раствора стандартного образца ацетона, 3,0 мл исходного раствора стандартного образца Ν,Ν-диметилформамида и 1,0 мл исходного раствора стандартного образца диацетонового спирта, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают. Раствор используют свежеприготовленным.

Раствор для проверки чувствительности хроматографической системы. 0,5 мл исходного раствора стандартного образца диацетонового спирта помещают в мерную колбу объемом 100 мл, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают. Раствор используют свежеприготовленным.

Испытуемый раствор. Около 0,5 г (точная навеска) субстанции помещают в мерную колбу объемом 10 мл, добавляют 8 мл воды, обрабатывают ультразвуком в течение 5 минут, не допуская нагревания. Доводят объем раствора водой до метки и перемешивают. Раствор используют свежеприготовленным.

Условия хроматографирования

Порядок выхода растворителей: ацетон, Ν,N-диметилформамид, диацетоновый спирт.

Проверка пригодности хроматографической системы. Регистрируют хроматограмму холостого раствора.

Хроматографическая система считается пригодной, если отсутствуют пики в диапазоне времени удерживания ацетона, Ν,Ν-диметилформамида и диацетонового спирта. Регистрируют последовательно не менее 5 хроматограмм стандартного раствора.

Хроматографическая система считается пригодной, если:

- относительное стандартное отклонение площади пика ацетона, пика Ν,N-диметилформамида и пика диацетонового спирта - не более 5,0%;

- разрешение между пиками ацетона и N,N-диметилформамида - не менее 1,5;

- разрешение между пиками N,N-диметилформамида и диацетонового спирта - не менее 1,5;

- фактор асимметрии пика ацетона, пика N,N-диметилформамида и пика диацетонового спирта - не более 2,0;

- эффективность хроматографической колонки, рассчитанная для пика ацетона, пика N,N-диметилформамида и пика диацетонового спирта - не менее 10000 теоретических тарелок.

Методика определения. Хроматографируют испытуемый раствор не менее 3 раз.

Содержание ацетона в процентах (X) вычисляют по формуле:

где S - площадь пика ацетона на хроматограмме испытуемого раствора;

S₀ - средняя площадь пика ацетона на хроматограммах стандартного раствора;

а - навеска субстанции в испытуемом растворе, мг;

а ₀ - навеска ацетона в стандартном растворе, мг;

Ρ - чистота стандартного образца ацетона, %.

Содержание Ν,N-диметилформамида в процентах (X) вычисляют по формуле:

где S - площадь пика Ν,N-диметилформамида на хроматограмме испытуемого раствора;

S₀ - средняя площадь пика N,N-диметилформамида на хроматограммах стандартного раствора;

а - навеска субстанции в испытуемом растворе, мг;

а ₀ - навеска N,N-диметилформамида в стандартном растворе, мг;

Ρ - чистота стандартного образца Ν,N-диметилформамида, %.

Содержание диацетонового спирта в процентах (X) вычисляют по формуле:

где S - площадь пика диацетонового спирта на хроматограмме испытуемого раствора;

S₀ - средняя площадь пика диацетонового спирта на хроматограммах стандартного раствора;

а - навеска субстанции в испытуемом растворе, мг;

а ₀ - навеска диацетонового спирта в стандартном растворе, мг;

Ρ - чистота стандартного образца диацетонового спирта, %.

ПРИМЕР 5

Определение гигроскопичности составов

Исследование гигроскопичности лекарственных средств по отношению к воздействию водяных паров из воздуха основано на экспериментальном хранении их в атмосфере с повышенным парциальным давлением водяного пара.

Создание фиксированного парциального давления водяных паров или фиксированной относительной влажности воздуха возможно за счет использования климатических камер, а также за счет применения растворов веществ с известным значением парциального давления водяного пара при определенной температуре.

Фосфазид имеет аморфную структуру и является высоко гигроскопичным веществом и требует особых условий работы с ним, а также упаковки и условий хранения, предъявляемым к такому классу веществ.

Гигроскопичность составов по изобретению оценивали согласно проекту общей фармакопейной статьи «Определение гигроскопичности» (https://static-2.rosminzdrav.ru/system/attachments/attaches/000/044/046/origina1/ОФС_Определение гигроскопичности_08.04.19.docx?1554903274 и Раздел 2.3.6.0. https://docs.eaeunion.org/docs/ru-ru/01426917/err_13082020_100) в климатической камере при температуре (25±1)°С и относительной влажности (80±2)%.

В качестве веществ для изучения гигроскопичности использовали фосфазид (серия 080317Э), а также экспериментальные серии фосфазида, содержащие AZT-1512, полученные в примере 3.

Анализ образцов проводили в соответствии с проектом ОФС «Определение гигроскопичности».

Для проведения эксперимента в климатической камере устанавливали температуру (25±1)°С и относительную влажность (80±2)%.

Навеску анализируемого состава массой около 1 г помещали в предварительно взвешенный стеклянный бюкс (m₁) высотой 30 мм и внешним диаметром 50 мм. Закрывали бюкс крышкой и взвешивали (m₂).

Затем пробу помещали в климатическую камеру, снимали крышку с бюкса и выдерживали пробу в течение 24 ч. По истечении времени бюкс закрывали крышкой, доставали из климатической камеры и взвешивали (m₃).

Рассчитывали увеличение массы исследуемого вещества в процентах (X) по формуле:

где: m₁ - масса пустого стеклянного бюкса, г,

m₂ - масса стеклянного бюкса с испытуемым образцом до экспозиции во влажной среде, г,

m₃ - масса стеклянного бюкса с испытуемым образцом после экспозиции во влажной среде, г.

Проводили по три повтора для каждого из образцов.

По полученным результатам интерпретировали степень гигроскопичность, применяя следующие термины:

- «расплывается на воздухе», если поглощает достаточное количество водяных паров с образованием жидкости;

- «очень гигроскопичен», если увеличение в массе составляет 15% и более;

- «гигроскопичен», если увеличение в массе составляет 2% и более, но менее 15%;

- «слегка гигроскопичен», если увеличение в массе составляет 0,2% и более, но менее 2%.

Результаты эксперимента приведены в Таблицах 1-2.

График зависимости гигроскопичности фосфазида от % содержания AZT-1512 представлен на фиг.1.

Данные о гигроскопичности следует учитывать при изучении стабильности лекарственного средства, при установлении его срока годности, при декларировании условий хранения, для указаний по маркировке и для других рекомендаций, связанных с хранением, упаковкой, маркировкой и транспортированием лекарственного средства. Степень гигроскопичности вещества определяет такие физико-химические характеристики, как сыпучесть, слеживаемость, способность к разложению и т.п., что влечет определенные особенности технологического процесса получения лекарственных препаратов.

Полученные данные свидетельствуют, что композиции, содержащие 3'-(3'-азидо-3'-дезокситимидина-5'-фосфонат-3-ил)-3'-дезокситимидина-5'-фосфонат натрия по сравнению с чистым фосфазидом, не значительно, но все же имеют более низкую степень гигроскопичности. На основании полученных данных провести изучение стабильности экспериментальных серий фосфазида в упаковке, соответствующей промышленной.

ПРИМЕР 6

Изучение стабильности при хранении нового состава

Стабильность экспериментальных серий, описанных в примерах выше, изучалась согласно ОФС «Сроки годности лекарственных средств» ГОСУДАРСТВЕННОЙ ФАРМАКОПЕИ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ при хранении в естественных условиях на протяжении 2-х лет и 6 месяцев при температуре (25±2)°С и относительной влажности (60±5)% в упаковке, соответствующей промышленно выпускаемым сериям субстанции фосфазида. Содержание фосфазида и AZT-1512, родственных примесей и воды контролировали согласно методикам в примерах выше.

Примечание: AZT-1512 контролируется как родственная примесь под литерой О в сериях 011217Э, 021217Э, 031217Э.

Таблицы 3.1.-3.3 ниже относятся к изучению стабильности сравнительного состава фосфазида, не содержащего AZT-1512.

Таблицы 4.1-4.3 ниже относятся к изучению составов фосфазида по изобретению, содержащих различное количество AZT-1512.

Изучение стабильности серий фосфазида, содержащих AZT-1512:

1) 011217Э (около 0,05% AZT-1512);

2) 021217Э (0,13% AZT-1512);

3) 031217Э (0,24% AZT-1512).

Данные исследования показали, что новый состав фосфазида, содержащий около 0,05%, 0,15%, 0,25% AZT-1512, обладает статистически достоверно увеличенной стабильностью (2 года 6 месяцев против двух лет для фосфазида) и меньшей гигроскопичностью, что приводит к замедлению процесса деградации фосфазида в процессе хранения, который, выражается ростом примеси Ζ и снижением содержания фосфазида в субстанции.

ПРИМЕР 7

Получение лекарственного средства в форме таблеток

Для изготовления таблеток использовали фармацевтическую композицию следующего состава:

Активный ингредиент и просеянную микрокристаллическую целлюлозу загружают в емкость смесителя, перемешивают, затем добавляют просеянный кремния диоксид коллоидный (аэросил) и перемешивают.

Затем добавляют просеянный кальция карбонат осажденный и перемешивают.

По окончании загружают просеянный кальция стеарат и перемешивают.

Полученную смесь гранулируют и загружают в емкость смесителя, добавляют просеянный кальция стеарат и перемешивают, получая массу, которую таблетируют на роторном таблеточном прессе.

Таблетки фасуют в контурную ячейковую упаковку из фольги алюминиевой и пленки ПВХ/ПВДХ производится на блистерной машине по 10 таблеток.

1. Состав для лечения ВИЧ, включающий 3'-азидо-3'-дезокситимидин-5'-фосфонат натрия (фосфазид) и 3'-(3'-азидо-3'-дезокситимидина-5'-фосфонат-3-ил)-3'-дезокситимидина-5'-фосфонат натрия в количестве от 0,05 до 0,95 мас. %.

2. Состав по п. 1, характеризующийся тем, что он содержит 3'-(3'-азидо-3'-дезокситимидина-5'-фосфонат-3-ил)-3'-дезокситимидина-5'-фосфонат натрия в количестве от 0,15 до 0,65 мас. %.

3. Состав по п. 2, характеризующийся тем, что он содержит 3'-(3'-азидо-3'-дезокситимидина-5'-фосфонат-3-ил)-3'-дезокситимидина-5'-фосфонат натрия в количестве от 0,15 до 0,30 мас. %.

4. Фармацевтическая композиция для лечения ВИЧ, характеризующаяся тем, что упомянутая композиция содержит состав по пп. 1-3 в терапевтически эффективном количестве 200-1200 мг и, по меньшей мере, один фармацевтически приемлемый эксципиент.

5. Лекарственное средство для лечения ВИЧ в виде таблеток, характеризующееся тем, что содержит фармацевтическую композицию по п. 4.