Промоторы для усиления экспрессии в поксвирусах

Группа изобретений относится к биотехнологии, в частности к промоторам экспрессии белка Brachyury в поксвирусах. Предложены экспрессионная кассета для экспрессии кодирующей последовательности Brachyury в векторе, поксвирусный вектор, содержащий ее, и способ экспрессии последовательности, кодирующей антиген Brachyury, в векторе. Экспрессионная кассета содержит (а) последовательность нуклеиновой кислоты, содержащую промотор, активный в качестве промотора поксвируса и содержащий последовательность SEQ ID NO: 9 или подпоследовательность SEQ ID NO: 9, которая содержит любую из SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 8, и (b) гетерологичную последовательность, кодирующую антиген Brachyury, функционально связанную с промотором, причем экспрессия кодирующей последовательности контролируется промотором. Изобретения позволяют усилить экспрессию антигена Brachyury, используемого в иммунотерапии. 3 н. и 15 з.п. ф-лы, 6 ил., 1 табл., 4 пр.

 

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ

Настоящее изобретение относится к одному или более новым промоторам экспрессии белка в поксвирусах, особенно к авипоксвирусам, таким как вирус оспы кур и канарипокс. Изобретение также относится к полинуклеотидам, содержащим указанный промотор, в частности, полинуклеотидам, содержащим указанный промотор и нуклеиновую кислоту, которая должна быть экспрессирована; векторам, содержащим их; клеткам-хозяевам, содержащим вышеуказанные конструкции; и композициям, содержащим любое из вышеуказанного. Кроме того, изобретение относится к одному или более новым полипептидам, функционально связанным с одним или более промоторами. Более конкретно, один или более новых полипептидов относятся к белку Brachyury.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Рекомбинантные поксвирусы использовали в качестве вакцин для возбудителей инфекции, а в последнее время - для опухолей. Mastrangelo et al. J Clin Invest. 2000; 105(8):1031-1034. Было показано, что две из этих групп поксвирусов, авипоксвирус и ортопоксвирус, эффективны при борьбе с опухолями и связаны с потенциальными методами лечения рака. Id.

Было показано, что один иллюстративный вид авипоксвируса, вирус оспы кур является безопасным средством для введения человеку, поскольку вирус оспы кур проникает в клетки млекопитающих и экспрессирует белки, но реплицирует прерывисто. Skinner et al.Expert Rev Vaccines. 2005 Feb;4(1):63-76. Кроме того, применение вируса оспы кур в качестве носителя для экспрессии исследовали в многочисленных клинических испытаниях вакцин против рака, малярии, туберкулеза, СПИДа и Эбола.

Рекомбинантные поксвирусы, такие как вирус оспы кур, были использованы для экспрессии широкого круга вставленных генов, включая несколько генов, связанных с инфекционными заболеваниями и опухолью, таких как p97, HER-2/neu, p53 и ETA (Paoletti, et al., 1993). Одним из примеров опухолевого антигена, который изучается в последнее время, является Brachyury (также известный как «T»).

Brachyury был идентифицирован у мышей как доминантный короткохвостый мутант, который также является рецессивной леталью; гомозиготные эмбрионы T/T умирают в середине созревания из-за нарушения образования задней мезодермы (Chesley, J. Exp. Zool., 70: 429-459, 1935). Мышиный ген Brachyury был клонирован (Herrmann et al., Nature (Lond.), 343: 617-622, 1990), также, как и гомологи у других видов, таких как люди. Экспрессия человеческого гомолога мышиного Brachyury была обнаружена при помощи ОТ-ПЦР в остатке нотохорды, пульпозном ядре, выкидышах человека на 14-15 неделе беременности (Edwards et al., Genome Res., 6: 226-233, 1996).

В целом, Brachyury оказался ценным маркером для распознавания мезодермальной дифференциации (Herrmann et al., Trends Genet., 10: 280-286, 1994). Например, помимо экспрессии у самих эмбрионов, сообщалось, что Brachyury активируется во время дифференцировки определенных EC (эмбриональной карциномы) и ES (эмбриональных стволовых клеток) клеточных линиях мыши, дифференцируя их по мезодермальным линиям in vitro (см., например, Bain et al., Biochem. Biophys. Res. Commun., 223: 691-694, 1996). Было показано, что у людей Brachyury экспрессируется в тератокарциномах (Gokhele et al., Cell Growth and Differentiation 11:157-62, 2000), хордомах (Vujovic et al., J. Pathol. 2: 157-65, 2006) и гемангиобластомах (Glasker et al., Cancer Res. 66: 4167-4172, 2006).

Совсем недавно было описано, что поксвирусы, экспрессирующие Brachyury, могут быть эффективными в виде активного иммунотерапевтического средства против опухолей (см. WO 2014/043535).

Очевидно, что существует значительная неудовлетворенная медицинская потребность в усовершенствовании методов лечения инфекционных заболеваний и рака, включая активные иммунотерапии и вакцины. Исходя из вышесказанного, существует потребность в улучшении экспрессии антигенов, таких как Brachyury, используемых в активных иммунотерапиях. Настоящее изобретение удовлетворяет эту потребность.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение относится к одному или более промоторам, нуклеиновым кислотам, экспрессионным кассетам, рекомбинантным пептидам и рекомбинантным поксвирусам, связанным с улучшениями экспрессии кодирующих последовательностей и антигенов, включенных в виде части поксвирусов.

В одном аспекте настоящее изобретение относится к экспрессионной кассете, содержащей:

a. промотор, содержащий последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую по меньшей мере 70% идентичность с любой из SEQ ID NO: 1-10, и 77; и

b. кодирующую последовательность, функционально связанную с промотором;

причем экспрессия кодирующей последовательности контролируется промотором.

В других аспектах настоящего изобретения экспрессионная кассета может быть включена как часть вектора, такого как вирус или плазмида, для усиления экспрессии кодирующей последовательности в ней. Предпочтительно экспрессионная кассета является частью поксвируса, такого как, но не ограничиваясь этим, ортопоксвируса и авипоксвируса. Более предпочтительно экспрессионная кассета представляет собой авипоксвирус, такой как вирус оспы кур. В еще одном аспекте экспрессионная кассета не является экспрессионной кассетой, естественно встречающейся в геноме поксвируса.

В дополнительных аспектах изобретение относится к одному или более промоторов, содержащих или состоящих из: а) последовательности нуклеиновой кислоты, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-10, b) подпоследовательности любой из SEQ ID NO: 1-10 и 77 или с) производной последовательности любой из SEQ ID NO: 1-10 и 77, причем производная последовательность имеет одну или более замен, делеций и/или вставок и при этом производная последовательность активна в качестве промотора поксвируса и/или активна в инфицированной поксвирусом клетке.

В еще дополнительных аспектах настоящее изобретение включает одну или более последовательностей нуклеиновых кислот, кодирующих один или более новых белков Brachyury, выбранных из группы, состоящей из: SEQ ID NO: 18-19, 22-23, 26-27, 30-31, 34-35, 38-39, 42-43, 46-47, 50-51, 54-55, 58-59, 62-63, 66-67, 70, и 71. В еще одном дополнительном аспекте настоящее изобретение включает еще одну новую последовательность нуклеиновой кислоты, выбранную из группы, состоящей из: 16-17, 20-21, 24-25, 28-29, 32-33, 36-37, 40-41, 44-45, 48-49, 52-53, 56-57, 60-61, 64-65, 68, и 69.

В еще одном аспекте настоящее изобретение включает экспрессионную кассету экспрессии, содержащую:

a. промотор, содержащий последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую по меньшей мере 70% идентичность с любой из SEQ ID NO: 1-10, и 77; и

b. кодирующую последовательность, функционально связанную с промотором, причем кодирующие последовательности содержат или i) нуклеиновую кислоту, кодирующую белок Brachyury, выбранную из группы, состоящей из: SEQ ID NO: 11, 13, 18-19, 22-23, 26-27, 30-31, 34-35, 38-39, 42-43, 46-47, 50-51, 54-55, 58-59, 62-63, 66-67, 70 и 71 или ii) содержат или состоят из нуклеиновой кислоты, имеющей по меньшей мере 70% идентичность с любой из нуклеиновых кислот, выбранных из группы, состоящей из: SEQ ID NO: 12, 14-17, 20-21, 24-25, 28-29, 32-33, 36-37, 40-41, 44-45, 48-49, 52-53, 56-57, 60-61, 64-65, 68, и 69;

причем экспрессия кодирующей последовательности контролируется промотором.

Дополнительные цели и преимущества настоящего изобретения будут изложены частично в описании, которое следует ниже, и частично будут очевидны из описания, или могут быть изучены посредством осуществления настоящего изобретения на практике. Цели и преимущества настоящего изобретения будут реализованы и достигнуты посредством элементов и комбинаций, в особенности, указанных в прилагаемой формуле изобретения.

Следует понимать, что как вышеизложенное общее описание, так и последующее подробное описание настоящего изобретения являются только иллюстративными и пояснительными, и не предназначаются для ограничения настоящего изобретения, которое заявлено в формуле изобретения.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ГРАФИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛОВ

На фиг. 1 показана экспрессия белка Brachyury в дендритных клетках (DC) человека, инфицированных нерекомбинантным вирусом FPV-ДТ (FPV-WT -вирус оспы кур дикого типа), или рекомбинантных вирусов FPV-mBN343A, FPV-mBN344A или FPV-mBN345A. Вестерн-блоттинг проводили с использованием кроличьего моноклонального антитела против Brachyury, как описано в примере 1.

На фиг. 2 показана экспрессия белка Brachyury в дендритных клетках (DC) человека, инфицированных нерекомбинантными вирусами MVA-ДТ (MVA-модифицированный вирус осповакцины Анкара) или FPV-ДТ, или рекомбинантными вирусами MVA-Brachyury-TRICOM (TRiCOM - три костимулирующие молекулы), FPV-mBN249B, клон 32 FPV-mBN281A, клон 35 FPV-mBN281A, FPV-mBN343A, FPV-mBN344A, FPV-mBN345A, FPV-mBN354A или FPV-mBN355A. Вестерн-блоттинг проводили с использованием кроличьего моноклонального антитела против Brachyury, как описано в примере 2.

На фиг. 3 показана относительная экспрессия белка Brachyury по сравнению с GAPDH (глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназа) из вестерн-блоттинга дендритных клеток (DC) человека, инфицированных нерекомбинантными вирусами MVA-ДТ или FPV-ДТ, или рекомбинантными вирусами MVA-Brachyury-TRICOM, FPV-mBN249B, клон 32 FPV-mBN281A, клон 35 FPV-mBN281A, FPV-mBN343A, FPV-mBN344A, FPV-mBN345A, FPV-mBN354A или FPV-mBN355A, как описано в примере 2.

На фиг. 4 показана экспрессия белков Brachyury и TRICOM в клетках CMMT (клеточная линия опухолей молочной железы макаки резуса), инфицированных рекомбинантными вирусами MVA-Brachyury-TRICOM, FPV-mBN249B, FPV-mBN343A или FPV-mBN345A, которые оценивали при помощи проточной цитометрии с использованием флуоресцентно-меченных антител, специфичных для каждого белка, как описано в примере 3.

На фиг. 5 показаны средние уровни экспрессии белка Brachyury в клетках CMMT (клеточная линия опухолей молочной железы макаки резуса), инфицированных рекомбинантными вирусами MVA-Brachyury-TRICOM, FPV-mBN249B, FPV-mBN343A или FPV-mBN345A, которые оценивали при помощи проточной цитометрии, как описано в примере 3.

На фиг. 6 показана экспрессия белков Brachyury и TRICOM в клетках CMMT (линия клеток опухолей молочной железы макаки резуса), инфицированных рекомбинантным вирусом FPV-mBN345B, которую оценивали при помощи проточной цитометрии, как описано в примере 4.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение основано на неожиданном определении того, что промоторные последовательности, представленные в SEQ ID NO: 1-10 и 77, усиливают экспрессию опухолевого антигена Brachyury. Показанная на фиг. 1-6 и описанная более подробно в данном документе экспрессия антигена Brachyury усиливается при использовании промоторов согласно данному изобретению. Экспрессия дополнительно усиливается, если промоторы и антиген Brachyury используются как часть рекомбинантного поксвируса.

По меньшей мере в одном аспекте различные варианты осуществления настоящего изобретения были созданы в результате недостаточного уровня экспрессии белка Brachyury с использованием известных промоторов вируса осповакцины, таких как PrS и 40k вируса осповакцины (VV-40K). При попытке повысить уровни экспрессии Brachyury авторы настоящего изобретения проанализировали различные промоторы вируса осповакцины и связанные с ними белки (например, VV-40k, I3 и т. д.) и любые возможные гомологи в FPV. Изобретатели поняли, что некоторые гомологичные последовательности FPV были обнаружены ранее. См., например, Zantinge, J Gen Virol. 1996 Apr;77 (Pt 4):603-14 и ген FPV 088 в эталонной последовательности базы данных NCBI: NP_039051.1, Afonso, C.L et al., J. Virol. 74 (8), 3815-3831 (2000).

В первоначальной попытке усилить экспрессию Brachyury возможную промоторную область гена FPV 088 в эталонной последовательности базы данных NCBI: NP_039051.1 сконструировали с использованием Brachyury изобретателями и протестировали с получением нежелательных результатов для промотора (см., например, фиг. 1 и 2 для mBN344A). Авторы изобретения создали следующий промотор с добавлением нуклеотидов из ОРС (открытой рамки считывания) гена FPV 088, что также привело к нежелательным результатам (см., например, фиг. 1 и 2 для mBN354A). Другие конструкции были созданы авторами настоящего изобретения с использованием еще дополнительных нуклеотидов из ОРС гена FPV 088, которые, как описано и проиллюстрировано в данном документе, усиливают экспрессию опухолевого антигена Brachyury.

Таким образом, в различных вариантах осуществления настоящее изобретение относится к одной или более последовательностям нуклеиновых кислот, одному или более промоторам, содержащим последовательности нуклеиновых кислот, одной или более экспрессионных кассет, содержащих нуклеиновые кислоты, одному или более пептидам и/или пептидным последовательностям для усиления/экспрессии кодирующих последовательностей и/или нуклеиновых кислот в экспрессионных векторах, таких как, но не ограничиваясь ими, плазмиды, рекомбинантный вирус и так далее. В других вариантах осуществления настоящее изобретение относится к одному или более рекомбинантным поксвирусам, содержащим одну или более последовательностей нуклеиновых кислот, промоторов, экспрессионных кассет и/или пептидов и/или пептидных последовательностей, описанных в данном документе.

Кроме того, в различных вариантах осуществления изобретения имеется одна или более последовательностей нуклеиновых кислот, кодирующих полипептиды Brachyury. В одном варианте осуществления изобретения одна или более нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид Brachyury, выбирают из группы, состоящей из: SEQ ID NO: 11, 13, 18-19, 22-23, 26-27, 30-31, 34-35, 38-39, 42-43, 46-47, 50-51, 54-55, 58-59, 62-63, 66-67, 70, и 71. Нуклеотидные последовательности, кодирующие полипептиды Brachyury в соответствии с настоящим изобретением, выбирают из группы, состоящей из: SEQ ID NO: 12, 14-17, 20-21, 24-25, 28-29, 32-33, 36-37, 40-41, 44-45, 48-49, 52-53, 56-57, 60-61, 64-65, 68, и 69.

Определения

В рамках изобретения формы единственного числа включают ссылки на множественное число, если из контекста явно не следует иное. Так, например, ссылка на «эпитоп» включает один или более эпитопов, а ссылка на «способ» включает обозначение на эквивалентные этапы и способы, известные специалистам в данной области техники, которые могут быть модифицированы или заменены описанными способами в данном документе.

Если не указано иное, термин «по меньшей мере», предшествующий ряду элементов, следует рассматривать как относящийся к каждому элементу в ряду. Специалисты в данной области техники поймут или смогут определить множество эквивалентов конкретных вариантов осуществления изобретения, описанных в данном документе, с применением не более чем стандартных экспериментов. Такие эквиваленты охватываются настоящим изобретением.

В настоящем описании и формуле изобретения, если контекст не требует иного, слово «содержит» и его вариации, такие как «содержат» и «содержащий», следует понимать, как включающее указанное целое значение или стадию, или группу целых значений или стадий, но не исключающее любое другое целое значение или стадию, или группу целых значений или стадий. В настоящем описании термин «содержащий» может быть заменен термином «который содержит» или «включающий» или иногда используемым в настоящем описании термином «имеющий». Любой из указанных выше терминов (содержащий, который содержит, включающий, имеющий) во всех случаях при использовании в контексте аспекта или варианта осуществления настоящего изобретения может быть заменен термином «состоящий из». В рамках изобретения термин «состоящий из» исключает любой элемент, этап или ингредиент не указанный в элементе формулы изобретения. В рамках изобретения термин «состоящий по существу из» не исключает материалы или этапы, которые не оказывают существенного влияния на основные и новые характеристики заявленного изобретения.

В рамках изобретения связывающий термин «и/или» между несколькими перечисленными элементами расценивается как охватывающий индивидуальные и комбинированные варианты. Например, когда два элемента соединяются с помощью «и/или», первый вариант относится к применимости первого элемента без второго. Второй вариант относится к применимости второго элемента без первого. Третий вариант относится к применимости первого и второго элементов вместе. Подразумевается, что любой из этих вариантов подходит по смыслу, и, следовательно, соответствует требованию термина «и/или», используемого в настоящем описании. Также подразумевается, что параллельная применимость более чем одного из вариантов подходит по смыслу, и, следовательно, соответствует требованию термина «и/или».

Используемый в рамках изобретения термин «промотор» обозначает регуляторную область нуклеиновой кислоты, обычно ДНК, расположенную против хода транскрипции последовательности экспрессируемой нуклеиновой кислоты, которая содержит определенные элементы последовательности ДНК, которые распознаются и связаны, например, белковыми транскрипционными факторами и полимеразами, ответственными за синтез РНК из кодирующей области гена. Поскольку промоторы обычно непосредственно примыкают к рассматриваемому гену, положения в промоторе обозначают относительно места начала транскрипции, причем транскрипция ДНК начинается для определенного гена (т.е. положения против хода транскрипции являются отрицательными числами, отсчитываемыми от -1, например -100 - позиция 100 пар оснований против хода транскрипции). Таким образом, промоторная последовательность может содержать нуклеотиды до положения -1. Однако нуклеотиды из положения +1 не являются частью промотора, то есть в этом отношении следует отметить, что кодон инициации трансляции (ATG или AUG) не является частью промотора. Таким образом, SEQ ID NO: 1-10 и 77 представляют собой полинуклеотиды, содержащие промоторы согласно данному изобретению.

Используемый в рамках изобретения термин «усиление» или «усиленный» при использовании в отношении уровней экспрессии кодирующей последовательности, нуклеиновой кислоты, белка и/или антигена относится к увеличению экспрессии кодирующей последовательности, нуклеиновой кислоты, белка, и/или антигена, если они связаны с и/или как часть одного или более промоторов, экспрессионных кассет, нуклеиновых кислот, белков и/или векторов согласно данному изобретению относительно уровней экспрессии кодирующей последовательности, нуклеиновых кислот, белка, и/или антигена, если они связаны с и/или являются частью одного или более промоторов, известных в данной области техники, таких как PrS или VV-40k.

В рамках изобретения, нуклеотидная последовательность, имеющая «по существу те же характеристики экспрессии», что и нуклеотидная последовательность, представленная в SEQ ID NO: 1-10 и 77, будет проявлять по меньшей мере 70%, предпочтительно по меньшей мере 80%, еще более предпочтительно по меньшей мере 90% активность промотора SEQ ID NO: 1-10 и 77, как измерено количеством продуцируемого рекомбинантного белка. Специалисту в данной области техники с использованием способов, изложенных в примерах 1-4 данной заявки, можно будет легко определить имеет ли указанная промоторная последовательность «по существу те же характеристики экспрессии», что и любая из SEQ ID NO: 1-10 и 77. Промоторы в соответствии с настоящим изобретением предпочтительно активны в качестве промоторов поксвируса, предпочтительно авипоксвируса или активны в качестве промоторов в инфицированных поксвирусом клетках, предпочтительно в клетках, инфицированных авипоксвирусом. Авипоксвирус предпочтительно является вирусом оспы кур. «Активен как промотор поксвируса» означает, что промотор способен направлять экспрессию гена, с которым он функционально связан в вирусе оспы, после инфицирования клеток указанным вирусом. Клетки предпочтительно представляют собой клетки, которые допускают позднюю и/или раннюю, и/или раннюю/позднюю экспрессию поксвируса. «Промотор, активный в клетках, инфицированных поксвирусом», включает также случай, в котором промотор не является частью генома поксвируса, например, частью плазмиды или линейного полинуклеотида или вирусного генома не поксвируса; в таком случае промотор в соответствии с настоящим изобретением активен, если клетка, содержащая промотор, также содержит геном поксвируса, например, если клетка инфицирована поксвирусом. В этих условиях вирусная РНК-полимераза распознает промотор в соответствии с настоящим изобретением и активирует экспрессию гена/кодирующей последовательности, которая связана с промотором.

Используемый в рамках изобретения термин «производный от нуклеиновой кислоты, представленной в SEQ ID NO: 1-10 и 77», означает, что нуклеотидная последовательность SEQ ID NO: 1-10 и 77 взята за основу для осуществления указанных нуклеотидных модификаций, например, по меньшей мере добавления, делеции, замены и/или инверсии одного нуклеотида. Термин «производный» включает возможность, например, фактического изменения физической последовательности, соответствующей SEQ ID NO: 1-10 и 77, при помощи известных методов, например, ПЦР пониженной точности. Термин «производный» дополнительно включает возможность выполнения модификаций последовательности SEQ ID NO: 1-10 и 77 in silico, с последующим синтезом установленной таким образом последовательности как физической нуклеиновой кислоты. Например, термин «производный» включает возможность использования любой известной компьютерной программы для анализа последовательностей нуклеиновых кислот в отношении, например, стабильности гибридизации и возможности любой вторичной структуры нуклеиновой кислоты в модификации исходной последовательности SEQ ID NOs: 1-10, и 77. Предпочтительно, не более 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2 или 1 нуклеотидов были добавлены, удалены, заменены и/или инвертированы из нуклеиновых кислот SEQ ID NO: 1-10, и 77. Кроме того, добавление, инсерция или делеция по меньшей мере одного нуклеотида не должна приводить к тому, что инициирующий кодон нуклеиновой кислоты должен быть экспрессирован.

Используемый в рамках изобретения термин «экспрессированный», «экспрессировать», «экспрессия» и тому подобное обозначает только транскрипцию, а также как транскрипцию, так и трансляцию последовательности, представляющей интерес. Таким образом, в отношении экспрессии нуклеиновой кислоты, присутствующей в форме ДНК, продукт, полученный в результате этой экспрессии, может представлять собой или РНК (в результате только транскрипции экспрессируемой последовательности), или полипептидную последовательность (в результате как транскрипции, так и трансляции экспрессируемой последовательности). Таким образом, термин «экспрессия» также включает возможность того, что как РНК, так и полипептидный продукт являются результатом указанной экспрессии и остаются вместе в одной и той же общей среде. Например, в том случае, когда мРНК сохраняется после ее трансляции в полипептидный продукт.

Используемый в рамках изобретения термин «экспрессионная кассета» определяется как часть вектора или рекомбинантного вируса, обычно используемого для клонирования и/или трансформации. Экспрессионная кассета обычно состоит из: a) одной или более кодирующих последовательностей (например, открытой рамки считывания (ОРС), генов, нуклеиновых кислот, кодирующих белок и/или антиген) и b) последовательностей, контролирующих экспрессию одной или более кодирующих последовательностей. Кроме того, экспрессионная кассета может содержать 3'-нетранслируемую область, которая у эукариот обычно содержит сайт полиаденилирования.

Термин «рекомбинантный» означает полинуклеотид или полипептид полусинтетического или синтетического происхождения, который или не встречается в природе, или связан с другим полинуклеотидом в композиции, не обнаруженной в природе.

Один аспект настоящего изобретения включает промоторы с нуклеиновыми кислотами, имеющими по меньшей мере 70%, предпочтительно 75%, 80%, 85%, 90% или 95% идентичность с SEQ ID NO: 1-10 и 77, и имеющие по существу те же характеристики экспрессии, что и SEQ ID NO: 1-10, и 77.

«Процент (%) гомологии или идентичности последовательностей» в отношении последовательностей нуклеиновых кислот, описанных в рамках изобретения, определяется как процентное содержание нуклеотидов в последовательности-кандидате, которые идентичны нуклеотидам в эталонной последовательности (то есть последовательность нуклеиновой кислоты, из которой она получена), после выравнивания последовательностей и введения разрывов, если необходимо, для достижения максимальной процентной идентичности последовательности и без учета каких-либо консервативных замен как части идентичности последовательности. Выравнивание для целей определения процента идентичности или гомологии нуклеотидных последовательностей можно осуществить различными способами, известными специалистам в данной области техники, например, с использованием общедоступного компьютерного программного обеспечения, такого как программное обеспечение BLAST, ALIGN или Megalign (DNASTAR). Специалисты в данной области могут определить соответствующие параметры для измерения степени выравнивания, включая любые алгоритмы, необходимые для достижения максимального выравнивания по всей длине сравниваемых последовательностей.

Программа BESTFIT использует алгоритм локальной гомологии Смита и Ватермана (Smith и Waterman) (1981) для поиска сегмента с самой высокой степенью сходства между двумя последовательностями, Advances in Applied Mathematics 2:482- 489. Этот алгоритм может быть применен к аминокислотным последовательностям с применением матрицы подсчета баллов, разработанной Dayhoff, Atlas of Protein Sequences and Structure, M. O. Dayhoff ed., 5 suppl. 3:353-358, National Biomedical Research Foundation, Washington, D.C., USA, и нормированной Gribskov (1986), Nucl. Acids Res. 14(6):6745-6763. Типичная реализация этого алгоритма для определения процента идентичности последовательностей представлена Genetics Computer Group (Мэдисон, штат Висконсин) в приложении «BestFit». Параметры по умолчанию для этого метода описаны в Висконсинском руководстве к пакету программ для анализа последовательностей, версия 8 (1995) (доступно в Genetics Computer Group, Мэдисон, штат Висконсин). Предпочтительным способом определения процента идентичности в контексте настоящего изобретения является применение пакета программ MPSRCH, защищенного авторским правом Университета Эдинбурга, который разработан John F. Collins and Shane S. Sturrok, и распространяемые IntelliGenetics, Inc. (Маунтин-Вью, Калифорния). Из этого набора пакетов можно применять алгоритм Smith-Waterman, в котором параметры по умолчанию используются для таблицы подсчета баллов (например, штраф на внесение делеции в размере 12, штраф на продолжение делеции в размере один и делеция в размере шесть). Среди полученных данных значение «Match» отображает «идентичность последовательностей» Другие подходящие программы для вычисления процента идентичности или сходства между последовательностями в общем известны из уровня техники, например, другой программой выравнивания является BLAST, применяемая с параметрами по умолчанию. Например, BLASTN и BLASTP могут использоваться с использованием следующих параметров по умолчанию: genetic code=standard; filter=none; strand=both; cutoff=60; expect=10; Matrix=BLOSUM62; Descriptions=50 sequences; sort by=HIGH SCORE; Databases=non- redundant, GenBank+EMBL+DDBJ+PDB+ GenBank CDS translations+Swiss protein+Spupdate+PIR. Более подробную информацию по этим программам можно найти по следующему интернет-адресу: http:// http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/.

Промоторы и последовательности нуклеиновой кислоты

В одном варианте осуществления настоящее раскрытие включает последовательность нуклеиновой кислоты, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-10, и 77.

В другом варианте осуществления настоящее раскрытие включает последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую по меньшей мере 70% идентичность с нуклеиновой кислотой, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-10 и 77, и имеющую по существу те же характеристики экспрессии, что и последовательность нуклеиновой кислоты, выбранная из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-10, и 77. В дополнительных вариантах осуществления изобретения предложена последовательность нуклеиновой кислоты, имеющая по меньшей мере 75%, 80%, 85%, 90% или 95% идентичность с нуклеиновой кислотой, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-10 и 77, и имеющая по существу те же характеристики экспрессии, что и последовательность нуклеиновой кислоты, выбранная из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-10, и 77.

Еще в дополнительном варианте осуществления изобретение относится к нуклеиновой кислоте, имеющей нуклеотидную последовательность, полученную из нуклеиновой кислоты, представленной в SEQ ID NO: 1-10 и 77, содержащую по меньшей мере добавление, делецию, замену и/или инверсию одного нуклеотида по сравнению с нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: 1-10 и 77 и имеющую по существу те же характеристики экспрессии, что и нуклеиновая кислота SEQ ID NO: 1-10, и 77.

Еще в дополнительном варианте осуществления изобретение относится к нуклеиновой кислоте, имеющей нуклеотидную последовательность, способную к гибридизации с последовательностью нуклеиновой кислоты, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-10 и 77, и имеющую по существу те же характеристики экспрессии, что и последовательность нуклеиновой кислоты, выбранная из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-10, и 77.

В одном аспекте изобретение относится к промотору для усиления экспрессии кодирующей последовательности и/или нуклеотидной последовательности гена, выбранному из группы, состоящей из:

a) последовательности нуклеиновой кислоты, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-10 и 77 или их подпоследовательности;

b) нуклеиновой кислоты, имеющей нуклеотидную последовательность, полученную из нуклеиновой кислоты, указанной в (а), содержащей по меньшей мере добавление, делецию, замену и/или инверсию одного нуклеотида по сравнению с нуклеотидной последовательностью (а), и имеющей по существу те же характеристики экспрессии, что и нуклеиновая кислота (а);

c) последовательности нуклеиновой кислоты, имеющей по меньшей мере 70% идентичность с нуклеиновой кислотой (а) и имеющей по существу те же характеристики экспрессии, что и нуклеиновая кислота (а); и

d) нуклеиновой кислоты, способной к гибридизации с последовательностью нуклеиновой кислоты (а), (b) или (с), и имеющей по существу те же характеристики экспрессии, что и нуклеиновая кислота (а).

e) последовательности нуклеиновой кислоты, содержащей SEQ ID NO: 3, 4, 5, 6, 7, 8 или 9, причем последовательность нуклеиновой кислоты содержит до 245 нуклеотидов.

Еще один аспект изобретения относится к нуклеиновой кислоте, способной к гибридизации с последовательностью нуклеиновой кислоты (а), (b) или (с) и имеющей по существу те же характеристики экспрессии, что и нуклеиновая кислота (а). Термин «способный к гибридизации» означает гибридизацию в условиях, когда любая часть нуклеиновой кислоты (a), (b) или (c) может подвергаться гибридизации с другой последовательностью ДНК, чтобы обеспечить обнаружение и выделение любой последовательности ДНК, имеющей по существу те же характеристики экспрессии, что и нуклеиновая кислота (а). Гибридизация проводится в жестких условиях; чем более жесткие условия, тем более вероятно, что частично комплементарные последовательности должны быть разделены друг от друга, то есть более высокая жесткость снижает вероятность гибридизации. На практике термин «жесткие условия» означает условия гибридизации с высокой температурой (например, 65°С) и/или низкой концентрацией соли (например, 0,1×SSC). Повышение температуры и/или уменьшение концентрации соли увеличивает жесткость. В жестких условиях гибридизация будет происходить только в том случае, если существует по меньшей мере 70% или предпочтительно по меньшей мере 75, 80, 85, 90 или 95% идентичность между последовательностями. Гибридизацию можно проводить, как указано в Ausubel et al. (2002) Short Protocols in Molecular Biology Vol. 1 5th ed. Canada.

Предпочтительно промотор и/или нуклеиновая кислота согласно настоящему изобретению имеют длину до 245 или 242 нуклеотидов включительно. Также, промотор и/или нуклеиновая кислота согласно настоящему изобретению имеют длину до 232 или 215 нуклеотидов включительно. Более предпочтительно промотор согласно настоящему изобретению имеет длину до 212, 200 включительно или длину до 195 нуклеотидов включительно или длину до 183 включительно или длину до 170 или 167 нуклеотидов включительно. В одном варианте осуществления изобретения нуклеиновая кислота (b), (c) или (d), как указано выше, содержит около 50-250 нуклеотидов, около 60-220 нуклеотидов, около 70-200 нуклеотидов, около 80-190 нуклеотидов, или около 90-180 нуклеотидов.

Альтернативно, объем настоящего изобретения охватывает применение производного этих промоторов, который может быть подпоследовательностью последовательностей, определенных в любом из SEQ ID NO: 1-10, и 77. Термин «подпоследовательность последовательностей любой из SEQ ID NO: 1-10 и 77» относится к более коротким фрагментам любой из SEQ ID NO: 1-10 и 77, которые все еще активны в качестве промотора, в частности в качестве промотора в ортопоксвирусе, таком как FPV, или в ортопоксвирусе, таких как инфицированных FPV клетках.

В различных вариантах осуществления изобретения примерные подпоследовательности SEQ ID NO: 9 выбраны из SEQ ID NO: 2-8. В одном аспекте SEQ ID NO: 4 или 5 являются предпочтительной подпоследовательностью SEQ ID NO: 9. В других аспектах подпоследовательности SEQ ID NO: 8 включают SEQ ID NO: 2-7, последовательности SEQ ID NO: 7 включают SEQ ID NO: 2-6, подпоследовательности SEQ ID NO: 6 включают SEQ ID NO: 2-5, подпоследовательности SEQ ID NO: 5 включают SEQ ID NO: 2-4 подпоследовательности SEQ ID NO: 6 включают SEQ ID NO: 2-5, подпоследовательности SEQ ID NO: 5 включают SEQ ID NO: 2-4, подпоследовательности SEQ ID NO: 4 включают SEQ ID NO: 2-3 и подпоследовательности SEQ ID NO: 3 включают SEQ ID NO: 2.

Производные промотора, содержащие или состоящие из нуклеотидной последовательности любой из SEQ ID NO: 1-10 и 77 или их подпоследовательностей, также может быть последовательностью, которая имеет одну или более нуклеотидных замен, делеций и/или вставок по отношению к любой из последовательностей SEQ ID NO: 1-10, и 77. Производные согласно настоящему изобретению по-прежнему активны в качестве промотора, в частности в качестве ортопоксивируса и/или промотора авипоксвируса в клетках, инфицированных ортопоксвирусом и/или вирусом авипоксвируса, более предпочтительно в качестве промотора авипоксвируса в инфицированных авипоксвирусом клетках. В производных согласно настоящему изобретению делеции, замены и вставки могут быть объединены в одну последовательность.

Предпочтительно производное имеет гомологию по меньшей мере 40%, более предпочтительно по меньшей мере 60%, еще более предпочтительно по меньшей мере 80%, наиболее предпочтительно по меньшей мере 90% по сравнению с любой из последовательностей SEQ ID NO: 1-10 и 77 или их подпоследовательностей, как описано в рамках изобретения.

Белки Brachyury

В нескольких аспектах настоящего изобретения авторы изобретения определили, что в результате синтеза различных промоторов, описанных в рамках изобретения, изобретатели создали один или более рекомбинантных белков Brachyury. В частности, один или более рекомбинантных белков Brachyury представляют собой слитые белки, полученные в результате комбинации одного или более промоторов согласно настоящему изобретению и белка Brachyury. Предполагается, что один или более рекомбинантных белков Brachyury могут быть полезны в составе вакцины, фармацевтической или другой терапевтической композиции.

Таким образом, в различных аспектах изобретение включает один или более синтетических и новых рекомбинантных белков Brachyury и/или синтетических и новых нуклеиновых кислот, кодирующих рекомбинантные белки Brachyury.

В одном варианте осуществления изобретение относится к одной или более последовательностей нуклеиновых кислот, имеющих по меньшей мере 70% идентичность с нуклеиновой кислотой, кодирующей белок Brachyury, причем белок Brachyury выбран из группы, состоящей из: SEQ ID NO: 18-19, 22-23, 26-27, 30-31, 34-35, 38-39, 42-43, 46-47, 50-51, 54-55, 58-59, 62-63, 66-67, 70, и 71. В дополнительных вариантах осуществления изобретение относится к одной или более нуклеиновых кислот, имеющих по меньшей мере 75%, 80%, 85%, 90% или 95% идентичность с нуклеиновой кислотой, кодирующей белок Brachyury, причем белок Brachyury выбран из группы, состоящей из: SEQ ID NO: 18-19, 22-23, 26-27, 30-31, 34-35, 38-39, 42-43, 46-47, 50-51, 54-55, 58-59, 62-63, 66-67, 70, и 71.

В различных других вариантах осуществления изобретение относится к одному или более белков Brachyury, выбранных из группы, состоящей из: SEQ ID NO: 18-19, 22-23, 26-27, 30-31, 34-35, 38-39, 42-43, 46-47, 50-51, 54-55, 58-59, 62-63, 66-67, 70, и 71. В дополнительных вариантах осуществления изобретение относится к одному или более белков Brachyury, имеющих по меньшей мере 70% идентичность с пептидом, выбранным из группы, состоящей из: SEQ ID NO: 18-19, 22-23, 26-27, 30-31, 34-35, 38-39, 42-43, 46-47, 50-51, 54-55, 58-59, 62-63, 66-67, 70, и 71. В еще дополнительных вариантах осуществления изобретение относится к пептиду, имеющему по меньшей мере 75%, 80%, 85%, 90% или 95% идентичность с пептидом, выбранным из группы, состоящей из SEQ ID NO: 18-19, 22-23, 26-27, 30-31, 34-35, 38-39, 42-43, 46-47, 50-51, 54-55, 58-59, 62-63, 66-67, 70, и 71.

В другом варианте осуществления изобретение относится к одной или более последовательностей нуклеиновых кислот, кодирующих белок Brachyury, при этом последовательность нуклеиновой кислоты выбрана из группы, состоящей из: SEQ ID NO: 16-17, 20-21, 24-25, 28-29, 32-33, 36-37, 40-41, 44-45, 48-49, 52-53, 56-57, 60-61, 64-65, 68, и 69.

В других вариантах осуществления изобретение относится к одной или более последовательностей нуклеиновых кислот, имеющих по меньшей мере 70% идентичность с нуклеиновой кислотой, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 16-17, 20-21, 24-25, 28-29, 32-33, 36-37, 40-41, 44-45, 48-49, 52-53, 56-57, 60-61, 64-65, 68 и 69 и имеющих по существу те же характеристики экспрессии, что и последовательность нуклеиновой кислоты, выбранная из группы, состоящей из SEQ ID NO: 16-17, 20-21, 24-25, 28-29, 32-33, 36-37, 40-41, 44-45, 48-49, 52-53, 56-57, 60-61, 64-65, 68, и 69. В дополнительных вариантах осуществления изобретение относится к последовательности нуклеиновой кислоты, имеющей по меньшей мере 75%, 80%, 85%, 90% или 95% идентичность с нуклеиновой кислотой, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 16-17, 20-21, 24-25, 28-29, 32-33, 36-37, 40-41, 44-45, 48-49, 52-53, 56-57, 60-61, 64-65, 68 и 69 и имеющих по существу те же характеристики экспрессии, что и последовательность нуклеиновой кислоты, выбранная из группы, состоящей из SEQ ID NO: 16-17, 20-21, 24-25, 28-29, 32-33, 36-37, 40-41, 44-45, 48-49, 52-53, 56-57, 60-61, 64-65, 68, и 69.

В предпочтительном варианте осуществления изобретение относится к одной или более последовательностей нуклеиновых кислот, выбранных из группы, состоящей из SEQ ID NO: 16-17, 20-21, 24-25, 28-29, 32-33, 36-37, 40-41, 44-45, 48-49, 52-53, 56-57, 60-61, 64-65, 68, и 69.

Экспрессионные кассеты

В соответствии с дополнительным вариантом осуществления настоящее изобретение относится к экспрессионной кассете, содержащей один или более промоторов и/или рекомбинантных белков Brachyury, и/или нуклеиновых кислот в соответствии с настоящим изобретением.

В одном варианте осуществления изобретение относится к экспрессионной кассете, содержащей промотор, имеющий по меньшей мере 70% идентичность с нуклеиновой кислотой, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-10 и нуклеиновой кислоты, кодирующей пептид Brachyury, выбранный из группы, состоящей из: SEQ ID NO: 11, 13, 18-19, 22-23, 26-27, 30-31, 34-35, 38-39, 42-43, 46-47, 50-51, 54-55, 58-59, 62-63, 66-67, 70, и 71. В другом варианте осуществления изобретение относится к экспрессионной кассете, содержащей промотор, выбранный из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-10 и 77, и/или нуклеиновой кислоты, кодирующей пептид Brachyury, причем нуклеиновая кислота выбрана из группы, состоящей из: SEQ ID NO: 12, 14-17, 20-21, 24-25, 28-29, 32-33, 36-37, 40-41, 44-45, 48-49, 52-53, 56-57, 60-61, 64-65, 68, и 69.

В предпочтительном варианте осуществления изобретение относится к экспрессионной кассете, содержащей последовательность нуклеиновой кислоты по меньшей мере на 70% гомологичную последовательности нуклеиновой кислоты, выбранной из группы, состоящей из: SEQ ID NO: 72-76. В дополнительных вариантах осуществления изобретение относится к экспрессионной кассете, содержащей последовательность нуклеиновой кислоты, имеющую по меньшей мере 75%, 80%, 85%, 90% или 95% идентичность с нуклеиновой кислотой, выбранной из группы, состоящей из SEQ ID NO: 72-76.

В более предпочтительном варианте осуществления изобретение относится к экспрессионной кассете, содержащей SEQ ID NO: 72.

В более предпочтительном варианте осуществления изобретение относится к экспрессионной кассете, содержащей SEQ ID NO: 73.

В более предпочтительном варианте осуществления изобретение относится к экспрессионной кассете, содержащей SEQ ID NO: 74.

Рекомбинантные поксвирусы

В соответствии с дополнительным вариантом осуществления изобретения нуклеиновые кислоты, промоторы, рекомбинантные белки и/или экспрессионные кассеты согласно настоящему изобретению могут быть частью вектора. Термин «вектор» относится к любым векторам, известным специалисту в данной области техники. Вектор может представлять собой плазмидный вектор, такой как pBR322 или вектор серии pUC. Более предпочтительно вектор представляет собой рекомбинантный вирус. В контексте настоящего изобретения термин «вирус» или «рекомбинантный вирус» относится к инфекционному вирусу, содержащему вирусный геном. В этом случае нуклеиновые кислоты, промоторы, рекомбинантные белки и/или экспрессионные кассеты согласно настоящему изобретению являются частью вирусного генома соответствующего рекомбинантного вируса. Рекомбинантный вирусный геном упаковывают, и полученные рекомбинантные вирусы могут быть использованы для инфицирования клеток и клеточных линий, в частности для инфицирования живых животных, включая людей. Типичными рекомбинантными вирусами, которые могут быть использованы в соответствии с настоящим изобретением, являются аденовирусные векторы, ретровирусные векторы или векторы на основе аденоассоциированного вируса 2 (AAV2). Наиболее предпочтительными являются поксвирусные векторы.

В различных вариантах осуществления изобретения нуклеиновые кислоты, промоторы, полипептиды и экспрессионные кассеты в соответствии с настоящим изобретением предпочтительно активны в качестве поксвирусных промоторов или активны в качестве промоторов в инфицированных поксвирусом клетках. Поксвирус предпочтительно представляет собой авипоксивирус или ортопоксвирус. Более предпочтительно, поксвирус представляет собой авипоксвирус.

Термин «авипоксвирус» относится к любому авипоксвирусу, такому как вирус оспы кур, вирус оспы канареек, вирус оспы юнко, вирус оспы скворцов, вирус оспы голубей, вирус оспы попугаев, вирус оспы перепелов, вирус оспы фазанов, вирус оспы пингвинов, вирус оспы воробьев, вирус оспы скворцов и вирус оспы индеек. Предпочтительными авипоксвирусами являются вирус оспы канареек и вирус оспы кур.

Примером вируса оспы канареек является штамм Rentschler. Выделенный из бляшки и очищенный штамм вируса оспа канареек, обозначенный как ALVAC (патент США № 5766598) был депонирован в соответствии с условиями Будапештского договора в Американской коллекции типовых культур (ATCC) под номером доступа VR-2547. Другой штамм вируса оспы канареек, представляющий собой штамм коммерчески доступной вакцины канарипокса, обозначенный как LF2 CEP 524 24 10 75, доступен от Institute Merieux, Inc.

Примерами вируса оспы кур (Fowlpox) являются штаммы FP-1, FP-5, TROVAC (патент США № 5766598), и POXVAC-TC (патент США 7410644). FP-1 представляет собой штамм Duvette, модифицированный для использования в качестве вакцины у однодневных цыплят. Этот штамм, представляющий собой штамм коммерчески доступной вакцины вируса оспы кур, был обозначен как O DCEP 25/CEP67/2309, октябрь 1980 г., и доступен от Institute Merieux, Inc. FP-5 представляет собой штамм коммерчески доступной вакцины вируса оспы кур, полученной из эмбриона цыпленка, доступный от Американских научных лабораторий (отдел компании Schering Corp.) Мэдисон, Висконсин, Ветеринарная лицензия США № 165, серийный № 30321.

В некоторых вариантах осуществления изобретения рекомбинантный FPV содержит последовательность нуклеиновой кислоты, выбранную из группы, состоящей из: SEQ ID NO: 1-10, и 77. В различных дополнительных вариантах осуществления изобретения рекомбинантный FPV содержит экспрессионную кассету, содержащую последовательность нуклеиновой кислоты, выбранную из SEQ ID NO: 72-76. В более предпочтительном варианте осуществления изобретения рекомбинантный FPV содержит экспрессионную кассету, содержащую последовательность нуклеиновой кислоты, выбранную из SEQ ID NO: 72, 73 и 74

В других вариантах осуществления изобретения рекомбинантный FPV содержит нуклеиновую кислоту, кодирующую антиген Brachyury, выбранный из группы, состоящей из: SEQ ID NO: 11, 13, 18-19, 22-23, 26-27, 30-31, 34-35, 38-39, 42-43, 46-47, 50-51, 54-55, 58-59, 62-63, 66-67, 70, и 71. В других вариантах осуществления изобретения рекомбинантный FPV содержит пептид Brachyury, выбранный из группы, состоящей из: SEQ ID NO: 11, 13, 18-19, 22-23, 26-27, 30-31, 34-35, 38-39, 42-43, 46-47, 50-51, 54-55, 58-59, 62-63, 66-67, 70, и 71. В других вариантах осуществления изобретения рекомбинантный FPV содержит нуклеиновую кислоту, выбранную из группы, состоящей из: SEQ ID NO: 12, 14-17, 20-21, 24-25, 28-29, 32-33, 36-37, 40-41, 44-45, 48-49, 52-53, 56-57, 60-61, 64-65, 68, и 69. В более предпочтительных вариантах осуществления изобретения рекомбинантный FPV содержит пептид Brachyury, выбранный из группы, состоящей из: SEQ ID NO: 18-19, 22-23, 26-27, 30-31, 34-35, 38-39, 42-43, 46-47, 50-51, 54-55, 58-59, 62-63, 66-67, 70 и 71, и/или нуклеиновую кислоту, выбранную из группы, состоящей из: SEQ ID NO: 16-17, 20-21, 24-25, 28-29, 32-33, 36-37, 40-41, 44-45, 48-49, 52-53, 56-57, 60-61, 64-65, 68, и 69.

В различных других вариантах осуществления изобретения рекомбинантный поксвирус представляет собой ортопоксвирус, такой как, но не ограничиваясь ими, вирус осповакцины, модифицированный вирус осповакцины Анкара (Анкара) (MVA) или MVA-BN.

Примеры штаммов вируса осповакцины представляют собой штаммы Temple of Heaven, Copenhagen, Paris, Budapest, Dairen, Gam, MRIVP, Per, Tashkent, TBK, Tom, Bern, Patwadangar, BIEM, B-15, Lister, EM-63, New York City Board of Health, Elstree, Ikeda и WR. Предпочтительным штаммом вируса осповакцины (VV) является штамм Wyeth (DRYVAX) (патент США 7410644) Другим предпочтительным штаммом VV является MVA (Sutter, G. et al. [1994], Vaccine 12: 1032-40). Другим предпочтительным штаммом VV является MVA-BN.

Примерами штаммов вируса MVA, применяемых при осуществлении на практике настоящего изобретения и депонированных в соответствии с требованиями Будапештского договора, являются штаммы MVA 572, депонированные в Европейской коллекции культур клеток животных (ECACC), Лаборатории исследования и производства вакцин, Лабораторной службе общественного здравоохранения, Центре прикладной микробиологии и исследований в Porton Down, Salisbury, Wiltshire SP4 0JG, United Kingdom (Великобритания) под номером депозита ECACC 94012707 от 27 января 1994 г. и MVA 575, депонированный под номером ECACC 00120707 7 декабря 2000 г. Дополнительными иллюстративными штаммами являются MVA-BN, депонированный 30 августа 2000 г в Европейской коллекции культур клеток (ECACC) под номером V00083008, и его производные.

Хотя MVA-BN является предпочтительным благодаря более высокой безопасности (менее способен к репликации), для настоящего изобретения пригодны все штаммы MVA. В соответствии с вариантом осуществления изобретения штамм MVA представляет собой MVA-BN и его производные. Определение MVA-BN и его производных приведено в публикации PCT/EP01/13628, которая включена в настоящий документ путем ссылки.

В одном варианте осуществления настоящее изобретение охватывает применение рекомбинантных ортопоксвирусов, предпочтительно вируса осповакцины (VV), штамма Wyeth, ACAM 1000, ACAM 2000, MVA или MVA-BN для терапии рака. Рекомбинантные ортопоксвирусы генерируются путем вставки в ортопоксвирус гетерологичных последовательностей.

В некоторых вариантах осуществления изобретения MVA представляет собой MVA-BN, депонированный 30 августа 2000 г в Европейской коллекции культур клеток (ECACC) под номером V00083008, и описанный в международной публикации PCT WO2002042480 (см. также, например, патент США № 6761893 и 6913752), которые включены в данный документ посредством ссылки.

В некоторых вариантах осуществления изобретения рекомбинантный MVA является производным MVA-BN. Такие «производные» включают вирусы, проявляющие по существу те же самые репликационные характеристики, что и депонированный штамм (ECACC № V00083008), но имеющие отличия в одной или более частей своего генома. Вирусы, имеющие те же «репликационные характеристики», что и депонированный вирус, представляют собой вирусы, которые реплицируются со сходными амплификационными отношениями, что и депонированный штамм, в клетках CEF и клеточных линиях HeLa, HaCat и 143B, и которые проявляют подобные репликационные характеристики in vivo при определении, например, на модели трансгенной мыши AGR129.

В некоторых вариантах осуществления изобретения рекомбинантный ортопоксвирус содержит нуклеиновую кислоту, выбранную из группы, состоящей из: SEQ ID NO: 1-10, и 77. В различных дополнительных вариантах осуществления изобретения рекомбинантный ортопоксвирус содержит экспрессионную кассету, содержащую последовательность нуклеиновой кислоты, выбранную из SEQ ID NO: 72-76. В более предпочтительном варианте осуществления изобретения рекомбинантный ортопоксвирус содержит экспрессионную кассету, содержащую последовательность нуклеиновой кислоты, выбранную из SEQ ID NO: 72, 73 и 74

В других вариантах осуществления изобретения рекомбинантный ортопоксвирус содержит нуклеиновую кислоту, кодирующую антиген Brachyury, выбранный из группы, состоящей из: SEQ ID NO: 11, 13, 18-19, 22-23, 26-27, 30-31, 34-35, 38-39, 42-43, 46-47, 50-51, 54-55, 58-59, 62-63, 66-67, 70, и 71. В дополнительных вариантах осуществления изобретения рекомбинантный ортопоксвирус содержит нуклеиновую кислоту, выбранную из группы, состоящей из: SEQ ID NO: 12, 14-17, 20-21, 24-25, 28-29, 32-33, 36-37, 40-41, 44-45, 48-49, 52-53, 56-57, 60-61, 64-65, 68, и 69. В более предпочтительных вариантах осуществления изобретения рекомбинантный ортопоксвирус содержит пептид Brachyury, выбранный из группы, состоящей из: SEQ ID NO: 18-19, 22-23, 26-27, 30-31, 34-35, 38-39, 42-43, 46-47, 50-51, 54-55, 58-59, 62-63, 66-67, 70 и 71, и/или нуклеиновую кислоту, выбранную из группы, состоящей из: SEQ ID NO: 16-17, 20-21, 24-25, 28-29, 32-33, 36-37, 40-41, 44-45, 48-49, 52-53, 56-57, 60-61, 64-65, 68, и 69.

Специалистам в данной области техники известны способы вставки экспрессионной кассеты или промотора в соответствии с настоящим изобретением в вирусный геном, в частности, в геном поксвируса, наиболее предпочтительно в геном ортопоксвируса и/или FPV. Например, экспрессионная кассета или ее промотор, или производное в соответствии с настоящим изобретением могут быть вставлены в геном поксвируса при помощи гомологичной рекомбинации. С этой целью нуклеиновая кислота трансфицируется в линию пермиссивных клеток, такую как клетки CEF или BHK, причем нуклеиновая кислота содержит экспрессионную кассету или промотор, или их производное в соответствии с настоящим изобретением, фланкированные нуклеотидными участками, которые гомологичны области поксвирусного генома, в который должна быть вставлена экспрессионная кассета или промотор, или их производное в соответствии с настоящим изобретением. Клетки инфицированы поксвирусом, а в инфицированных клетках происходит гомологичная рекомбинация между нуклеиновой кислотой и вирусным геномом. Альтернативно, также возможно сначала инфицировать клетки поксвирусом, а затем трансфицировать нуклеиновую кислоту в инфицированные клетки. И в этом случае рекомбинация происходит в клетках. Затем рекомбинантный поксвирус выбирают способами, известными в существующем уровне техники. Конструкция рекомбинантного поксвируса не ограничивается этим конкретным способом. В качестве альтернативы для этого может быть использован любой подходящий способ, известный специалисту в данной области техники.

Экспрессионная кассета или промотор в соответствии с настоящим изобретением могут быть введены в любую подходящую часть вируса или вирусного вектора, в частности, в вирусный геном. В случае ортопоксвируса и авипоксвируса вставка может быть выполнена в не относящимся к незаменимым частям вирусного генома или в межгенную область вирусного генома. Термин «межгенная область» предпочтительно относится к тем частям вирусного генома, которые расположены между двумя соседними генами, которые не содержат кодирующих последовательностей. Если вирус является ортопоксвирусом и авипоксвирусом, вставка также может быть выполнена в сайт делеции вирусного генома. Термин «сайт делеции» относится к тем частям вирусного генома, которые удаляются по отношению к геному встречающегося в природе ортопоксвируса или авипоксвируса. Однако сайты вставки не ограничены этими предпочтительными сайтами для вставки в геном ортопоксвируса и авипоксвируса, поскольку в объем настоящего изобретения входит экспрессионная кассета, которая может быть вставлена в любом месте вирусного генома до тех пор, пока можно получить рекомбинанты, которые могут быть амплифицированы и размножены по меньшей мере в одной системе клеточной культуры, такой как фибробласты куриных эмбрионов (клетки CEF).

Промотор в соответствии с настоящим изобретением может быть использован для экспрессии гена, который уже является частью вектора, например, геном ортопоксвируса и/или авипоксвируса. Такой ген может представлять собой ген, который, естественно, является частью вирусного генома или чужеродного гена, который уже был вставлен в вектор. В этих случаях промотор согласно настоящему изобретению вводится в 3'-5' направлении от гена в векторе, экспрессия которого должна контролироваться промотором.

Вакцины и/или композиции

В соответствии с еще одним вариантом осуществления настоящее изобретение относится к вектору в соответствии с настоящим изобретением в качестве вакцины или лекарственного средства. В более общем плане настоящее изобретение относится к вакцине или фармацевтической композиции, содержащей экспрессионную кассету, ДНК или вектор в соответствии с настоящим изобретением. Специалистам в данной области техники известны способы введения вакцины или фармацевтической композиции животному или человеческому организму. В случае ДНК и рекомбинантных плазмидных векторов ДНК и вектор можно просто вводить путем инъекции. Если вакцина или композиция представляют собой рекомбинантный вирус, такой как ортопоксвирус или авипоксвирус, в частности рекомбинантный MVA или рекомбинантный FPV, то ее также можно вводить животному или человеческому организму в соответствии со знаниями специалиста в данной области техники, например, при помощи внутривенного, внутримышечного, интраназального, внутрикожного или подкожного введения. Более подробная информация о количестве вводимого вируса приведена ниже.

В дополнение к промотору, экспрессионной кассете или вектору в соответствии с настоящим изобретением фармацевтическая композиция или вакцина обычно могут содержать один или более фармацевтически приемлемых и/или одобренных носителей, добавок, антибиотиков, консервантов, адъювантов, разбавителей и/или стабилизаторов. Кроме того, в таких основах могут присутствовать вспомогательные вещества, такие как увлажняющие или эмульгирующие агенты, буферные вещества для коррекции рН и т.п. Подходящие носители обычно представляют собой большие, медленно метаболизируемые молекулы, такие как белки, полисахариды, полимолочные кислоты, полигликолевые кислоты, полимерные аминокислоты, сополимеры аминокислот, липидные агрегаты или тому подобное.

Для получения фармацевтических композиций или вакцин ДНК, экспрессионная кассета или вектор в соответствии с настоящим изобретением, в частности рекомбинантный ортопоксвирус или авипоксвирус, такой как рекомбинантный MVA или рекомбинантный FPV, превращают в физиологически приемлемую форму. Для MVA и FPV это можно сделать на основе опыта изготовления поксвирусных вакцин, применяемых для вакцинации против оспы, как описано H. et al. [1974] Dtsch. med. Wschr. 99, 2386-2392). Например, очищенный вирус с титром 5×10⁸ TCID50/мл в составе композиции 10 ммоль/л Трис, 140 ммоль/л NaCl, pH 7,4 хранят при -80°C. Для получения вакцин для инъекций, например, 10¹-10⁹ частиц рекомбинантного вируса в соответствии с настоящим изобретением подвергают лиофилизации в фосфатно-буферном растворе (PBS) в присутствии 2% пептона и 1% альбумина человека в ампуле, предпочтительно в стеклянной ампуле. В качестве альтернативы, дозы вакцины могут быть получены путем ступенчатой сублимационной сушки вируса в препарате. Такая композиция может содержать дополнительные добавки, такие как маннит, декстран, сахар, глицин, лактоза или поливинилпирролидон, или другие вспомогательные вещества, такие как антиоксиданты или инертный газ, стабилизаторы или рекомбинантные белки (например, сывороточный альбумин человека), подходящие для введения in vivo. Типичный препарат, содержащий вирус, подходящий для сублимационной сушки, содержит 10 ммоль/л Трис-буфер, 140 ммоль/л NaCl, 18,9 г/л декстрана (MW 36000-40000), 45 г/л сахарозы, 0,108 г/л монокалиевой соли L-глутаминовой кислоты моногидрат pH 7,4. Затем стеклянную ампулу герметизируют и ее можно хранить в диапазоне от 4°C до комнатной температуры в течение нескольких месяцев. Однако до тех пор, пока нет необходимости в обратном, ампулу предпочтительно хранить при температуре ниже -20°C.

Для вакцинации или терапии лиофилизат или лиофилизированный продукт может быть растворен в 0,1-0,5 мл водного раствора, предпочтительно воды, физиологического раствора или Трис-буфера, и вводиться системно или местно, т.е., парентерально, подкожно, внутримышечно, или любым другим способом введения, известным квалифицированному специалисту. Фактическое фармацевтически эффективное количество или терапевтическая доза будут, конечно, зависеть от факторов, известных специалистам в данной области техники, таких как возраст и вес пациента, способа введения и степени тяжести заболевания.

В одном или более вариантах осуществления настоящее изобретение дополнительно относится к способу введения кодирующей последовательности в целевую клетку, такую как клетка человека для терапевтических целей, включающему введение нуклеиновых кислот, промоторов, рекомбинантных белков и/или экспрессионных кассет в соответствии с настоящим изобретением в целевую клетку. Иллюстративные человеческие целевые клетки могут включать антигенпрезентирующие клетки (APC), такие как дендритные клетки, макрофаги и другие не-APC, такие как фибробласты, опухолевые клетки и так далее.

Настоящее изобретение также относится к способу получения пептида, белка и/или вируса, включающему инфицирование клетки-хозяина рекомбинантным вирусом в соответствии с настоящим изобретением, с последующим культивированием инфицированной клетки-хозяина в подходящих условиях и далее с последующим выделением и/или обогащением пептида и/или белка и/или вирусов, продуцируемых указанной клеткой-хозяином. Клетка должна быть клеткой, в которой вирус способен реплицироваться, если она предназначена для продуцирования, то есть амплификации вируса в соответствии с настоящим изобретением. Для поксвирусов, в частности MVA, подходящими клетками являются клетки CEF (фибробласты куриных эмбрионов) или BHK (почки новорожденного хомяка). Для авипоксвирусов, таких как вирус оспы кур, подходящие клетки включают клетки CEF или CED (дермальные фибробласты куриных эмбрионов). Если предполагается получение пептида/белка, кодируемого рекомбинантным вирусом в соответствии с настоящим изобретением, клеткой может быть любая клетка, которая может быть инфицирована рекомбинантным вирусным вектором и которая позволяет экспрессировать кодируемые вирусом белки/пептиды.

Настоящее изобретение также относится к способу получения пептида, белка и/или вируса, включающему трансфекцию клетки с помощью экспрессионной кассеты, нуклеиновой кислоты, промотора, рекомбинантного белка и/или ДНК экспрессионной кассеты ДНК в соответствии с настоящим изобретением с последующим инфицированием клетки поксвирусом. Инфицированную клетку-хозяина культивируют в подходящих условиях. Следующая стадия включает выделение и/или обогащение пептида и/или белка и/или вирусов, продуцируемых указанной клеткой-хозяином. Стадию инфицирования клеток поксвирусом можно выполнить до или после стадии трансфекции клеток.

Настоящее изобретение также относится к клеткам, содержащим нуклеиновую кислоту, промотор, рекомбинантный белок и/или экспрессионную кассету в соответствии с настоящим изобретением. В частности, настоящее изобретение относится к клеткам, инфицированным рекомбинантным вирусом в соответствии с настоящим изобретением.

Примеры

Следующие примеры дополнительно иллюстрируют настоящее изобретение. Специалисту в данной области техники будет понятно, что приведенные примеры никоим образом не могут быть истолкованы как ограничивающие применимость технологии.

Пример 1: Экспрессия Brachyury в человеческих DC, инфицированных рекомбинантными вирусами оспы кур

Для идентификации экспрессии белка Brachyury человеческие дендритные клетки (DC) инфицировали положительным контрольным вирусом, рекомбинантным MVA, содержащим Brachyury и TRICOM, при множественности заражения (MOI) 2,5. DC человека также были инфицированы отрицательным контрольным нерекомбинантным вирусом оспы кур (FPV-ДТ) или рекомбинантными штаммами вируса оспы кур, содержащими экспрессионную кассету Brachyury и TRICOM в соответствии с настоящим изобретением. Каждый штамм FPV (приведенные более подробно в таблице 1), включая FPV-ДТ, FPV-mBN343A, FPV-mBN344A и FPV-mBN345A, использовали для инфицирования DC с MOI 20. Экспрессию Brachyury FPV выявляли с помощью вестерн-блоттинга, выполненного с использованием кроличьего моноклонального антитела против Brachyury. Белок ʺдомашнего хозяйстваʺ глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназу (GAPDH) также выявляли с помощью вестерн-блоттинга в качестве контроля для нанесения.

Таблица 1. Рекомбинантные штаммы вируса оспы кур, содержащие экспрессионную кассету Brachyury и TRICOM

Рекомбинантный штамм FPV	Экспрессионная кассета
FPV-mBN343A	SEQ ID NO: 74
FPV-mBN344A	SEQ ID NO: 75
FPV-mBN345A	SEQ ID NO: 72
FPV-mBN354A	SEQ ID NO: 76
FPV-mBN355A	SEQ ID NO: 73

Результаты показаны на фиг. 1. Экспрессию Brachyury выявляли с использованием рекомбинантных FPV FPV-mBN343A и FPVmBN345, но не выявляли с использованием рекомбинантного FPV FPV-mBN344A. Экспрессию Brachyury также выявляли с помощью MVA-Brachyury-TRICOM. Аналогичный контроль (образец) был продемонстрирован при помощи экспрессии GAPDH.

Пример 2: Экспрессия Brachyury в человеческих DC, инфицированных рекомбинантными вирусами оспы кур

Уровни экспрессии белка Brachyury также сравнивали между дополнительными рекомбинантными штаммами FPV, экспрессирующими Brachyury с различными промоторами. Дендритные клетки человека (DC) инфицировали с MOI равной 5 положительным контрольным рекомбинантным MVA, содержащим Brachyury и TRICOM, и отрицательным контрольным нерекомбинантным штаммом MVA-ДТ. DC человека также инфицировали рекомбинантными FPV, содержащими экспрессионную кассету Brachyury и TRICOM в соответствии с настоящим описанием (например, FPV-mBN343A, FPV-mBN344A, FPV-mBN345A, FPV-mBN354A, FPV-mBN355A, см. таблицу 1). DC человека дополнительно инфицировали рекомбинантным вирусом оспы кур (FPV), содержащим экспрессионную кассету Brachyury, имеющую или промотор вируса осповакцины (VV) -40k, или промотор PrS. Нерекомбинантный штамм FPV-ДТ служил в качестве отрицательного контроля. Все FPV использовали при MOI равной 40. Экспрессию Brachyury выявляли с помощью вестерн-блоттинга, выполненного с использованием кроличьего моноклонального антитела против Brachyury. GAPDH также определяли, как контроль для нанесения.

Результаты показаны на фиг. 2. Экспрессию Brachyury выявляли с использованием рекомбинантных FPV FPV-mBN343A и FPV-mBN345A, но не выявляли с использованием рекомбинантного FPV FPV-mBN344A и FPV-mBN354A. Более конкретно, экспрессия Brachyury была обнаружена при более низких уровнях для рекомбинантных FPV, имеющих промоторы VV-40k или PrS, которые управляют Brachyury (то есть FVP-mBN281A, FVP-mBN249B). В отрицательных контролях (неинфицированных DC, MVA-ДТ или FPV-ДТ) не была выявлена экспрессия Brachyury. Аналогичный контроль (образец) была продемонстрирован при помощи экспрессии GAPDH.

Уровни экспрессии Brachyury из вестерн-блоттинга, показанного в примере 2, были нормированы относительно экспрессии гена «домашнего хозяйства» GAPDH, который, как ожидается, будет экспрессирован на эквивалентных уровнях между клетками. Была измерена интенсивность каждой полосы Brachyury и GAPDH, и было рассчитано соотношение между интенсивностью полос Brachyury и GAPDH в пределах одного и того же образца.

Результаты показаны на фиг. 3. Среди конструктов FPV наивысшая экспрессия Brachyury относительно GAPDH была обнаружена у DC, инфицированных FPV-mBN355A. Умеренная относительная экспрессия Brachyury была обнаружена у DC, инфицированных FPV-mBN343A или FPV-mBN345A. Наименьшая относительная экспрессия Brachyury была обнаружена для рекомбинантных FPV, имеющих промоторы VV-40k или PrS, управляющие Brachyury (то есть FVP-mBN281A, FVP-mBN249B). Наибольшую относительную экспрессию Brachyury наблюдали для инфицированных положительным контрольным вирусом MVA-Brachyury-TRICOM; в образцах отрицательного контроля не была выявлена экспрессия Brachyury. Поэтому среди рекомбинантных штаммов FPV превосходную экспрессию Brachyury индуцировали векторы, управляющие экспрессией Brachyury, с промоторами FPV-mBN355, FPV-mBN345 или FPV-mBN344.

Пример 3: Экспрессия Brachyury и TRICOM в клетках CMMT, инфицированных рекомбинантными вирусами оспы кур

Экспрессию белков Brachyury и TRICOM также оценивали при помощи проточной цитометрии с использованием флуоресцентно-меченных антител, специфичных для каждого белка. Клетки CMMT (линия клеток опухолей молочной железы макаки резуса) были инфицированы положительным контрольным рекомбинантным MVA, содержащим Brachyury и TRICOM, или рекомбинантными FPV, содержащими экспресссионную кассету Brachyury и TRICOM в соответствии с настоящим изобретением (например, FPV-mBN343A, FPV-mBN345A), или рекомбинантным FPV, имеющим промотор PrS, управляющий Brachyury (FVP-mBN249B). Клетки инфицировали с MOI ниже 1, так что анализировали смесь неинфицированных и инфицированных клеток. Неинфицированные клетки CMMT служили в качестве отрицательного контроля.

Образцы FACS приобретали в компании BDLSRII или Fortessa и анализированы с использованием программного обеспечения BDFACSDIVA (BDBioscience, Сан-Хосе, Калифорния) или FlowJo (TreeStarInc., Ашленд, Орегон).

Результаты показаны на фиг. 4. Гистограммы сигналов, обнаруженных для белков Brachyury и трех TRICOM (CD80, CD54 и CD58), были нанесены на график, и были выведены ворота, где был обнаружен положительный сигнал (черные линии). Среди конструкций FPV самая высокая экспрессия Brachyury (показанное самым большим сдвигом сигнала вдоль оси x) была обнаружена в клетках CMMT, инфицированных FPV-mBN343A или FPV-mBN345A. Самая низкая экспрессия Brachyury была обнаружена для рекомбинантного FPV с промотором PrS, управляющим Brachyury (то есть FVP-mBN281A, FVP-mBN249B). Аналогичные уровни экспрессии белков TRICOM были обнаружены среди конструкций FPV. Экспрессию Brachyury и белков TRICOM наблюдали также при инфицировании положительным контрольным вирусом MVA-Brachyury-TRICOM.

Для количественного определения уровня экспрессии Brachyury в инфицированных клетках была рассчитана средняя интенсивность флуоресценции (СИФ) для клеток, содержащих Brachyury, которые показаны на фиг. 4.

Результаты показаны на фиг. 5. Среди конструкций FPV была обнаружена самая высокая СИФ Brachyury в клетках CMMT, инфицированных FPV-mBN343A или FPV-mBN345A. Самая низкая СИФ Brachyury была обнаружена для рекомбинантного FPV с промотором PrS, управляющим Brachyury (FVP-mBN249B). Самая высокая СИФ Brachyury всех тестируемых конструкций была в клетках, инфицированных положительным контрольным вирусом MVA-Brachyury-TRICOM. Таким образом, средний уровень экспрессии Brachyury в инфицированных клетках CMMT был выше по сравнению с векторами, управляющими экспрессией Brachyury, с промоторами FPV-mBN345 или FPV-mBN344, чем с промотором PrS.

Пример 4: Экспрессия Brachyury из FPV-mBN345B

Кассету для отбора клеток по чувствительности к лекарственному препарату, используемую для первоначального генерирования рекомбинантного штамма FPV-mBN345A, удаляли для получения рекомбинантного вектора, подходящего для клинического исследования. Это было достигнуто путем пассирования вируса на фибробластах куриных эмбрионов (CEF) без отбора по чувствительности к лекарственному препарату, очистки отдельных клонов с помощью метода бляшкообразования, и идентификации клонов, лишенных кассеты для отбора по чувствительности к лекарственному препарату с помощью ПЦР и секвенирования ДНК. Это привело к генерации FPV-mBN345B, который содержит экспрессионную кассету Brachyury, управляемую промотором I3+15aa и TRICOM, но не содержит кассету для отбора по чувствительности к лекарственному препарату.

Экспрессия белков Brachyury и TRICOM из FPV-mBN345B была подтверждена в клетках CMMT, путем их инфицирования FPV-BN345B при MOI равном 0,625 для инфицирования подмножества клеток или равном 40 для инфицирования всех клеток.

Результаты показаны на фиг. 6. Гистограммы сигналов, обнаруженных для белков Brachyury и трех TRICOM (CD80, CD54 и CD58), были нанесены с использованием красных линий для образцов, инфицированных с MOI равном 0,625, и синих линий для образцов, инфицированных с MOI равном 40. Неинфицированные клетки служили в качестве отрицательного контроля (черные линии). При MOI равном 0,625 экспрессия белков Brachyury и трех TRICOM была обнаружена в виде пика, сдвинутого справа от более высокого пика из неинфицированных клеток. При MOI равном 40 экспрессия Brachyury и TRICOM была обнаружена во всех клетках в виде пика, сдвинутого справа от неинфицированных клеток.

Другие варианты осуществления изобретения понятны специалистам в данной области техники из рассмотрения данного описания и практического осуществления изобретения, описанного в рамках изобретения. Предполагается, что описание и примеры следует рассматривать только как иллюстративные, причем истинный объем и сущность настоящего изобретения указаны в следующей формуле изобретения.

--->

СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> BAVARIAN NORDIC A/S

<120> ПРОМОТОРЫ ДЛЯ УСИЛЕНИЯ ЭКСПРЕССИИ В ПОКСВИРУСАХ

<130> BNIT0010PCT

<140> 62/199681

<141> 2015-07-31

<160> 77

<170> PatentIn версии 3.5

<210> 1

<211> 167

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Промоторная последовательность с нуклеотидами 5' гена FPV 088

<400> 1

tatccgtaca ggtttgtttc tgaaattcac tttgtaagat acataattaa caaattcagg 60

gggaaaaatc tttacaaaat tagtatagaa gctatagata tatcaaaagg tagacaacaa 120

ataatcagaa cctaattttt ttatcaaaaa attaaaatat aaataaa 167

<210> 2

<211> 170

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Промоторная последовательность с нуклеотидами 5' гена FPV 088 +  последовательность atc

<400> 2

tatccgtaca ggtttgtttc tgaaattcac tttgtaagat acataattaa caaattcagg 60

gggaaaaatc tttacaaaat tagtatagaa gctatagata tatcaaaagg tagacaacaa 120

ataatcagaa cctaattttt ttatcaaaaa attaaaatat aaataaaatc 170

<210> 3

<211> 183

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Промоторная последовательность с нуклеотидами 5' гена FPV 088 с добавлением 16 нуклеотидов FPV 088

<400> 3

tatccgtaca ggtttgtttc tgaaattcac tttgtaagat acataattaa caaattcagg 60

gggaaaaatc tttacaaaat tagtatagaa gctatagata tatcaaaagg tagacaacaa 120

ataatcagaa cctaattttt ttatcaaaaa attaaaatat aaataaaatg aaaaataact 180

tgt 183

<210> 4

<211> 194

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Промоторная последовательность с областью из гена FPV 088 плюс добавление 27 нуклеотидов

<400> 4

tatccgtaca ggtttgtttc tgaaattcac tttgtaagat acataattaa caaattcagg 60

gggaaaaatc tttacaaaat tagtatagaa gctatagata tatcaaaagg tagacaacaa 120

ataatcagaa cctaattttt ttatcaaaaa attaaaatat aaataaaatg aaaaataact 180

tgtatgaaga aaaa 194

<210> 5

<211> 200

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Промоторная последовательность с областью из гена FPV 088 плюс добавление 33 нуклеотида

<400> 5

tatccgtaca ggtttgtttc tgaaattcac tttgtaagat acataattaa caaattcagg 60

gggaaaaatc tttacaaaat tagtatagaa gctatagata tatcaaaagg tagacaacaa 120

ataatcagaa cctaattttt ttatcaaaaa attaaaatat aaataaaatg aaaaataact 180

tgtatgaaga aaaaatgaac 200

<210> 6

<211> 212

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Промоторная последовательность с областью из гена FPV 088 плюс добавление 45 нуклеотидов

<400> 6

tatccgtaca ggtttgtttc tgaaattcac tttgtaagat acataattaa caaattcagg 60

gggaaaaatc tttacaaaat tagtatagaa gctatagata tatcaaaagg tagacaacaa 120

ataatcagaa cctaattttt ttatcaaaaa attaaaatat aaataaaatg aaaaataact 180

tgtatgaaga aaaaatgaac atgagtaaga aa 212

<210> 7

<211> 232

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Промоторная последовательность с областью из гена FPV 088 плюс добавление  65 нуклеотидов

<400> 7

tatccgtaca ggtttgtttc tgaaattcac tttgtaagat acataattaa caaattcagg 60

gggaaaaatc tttacaaaat tagtatagaa gctatagata tatcaaaagg tagacaacaa 120

ataatcagaa cctaattttt ttatcaaaaa attaaaatat aaataaaatg aaaaataact 180

tgtatgaaga aaaaatgaac atgagtaaga aacaagtaaa aactcaaagt aa 232

<210> 8

<211> 242

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Промоторная последовательность с областью из гена FPV 088 плюс добавление 75 нуклеотидов

<400> 8

tatccgtaca ggtttgtttc tgaaattcac tttgtaagat acataattaa caaattcagg 60

gggaaaaatc tttacaaaat tagtatagaa gctatagata tatcaaaagg tagacaacaa 120

ataatcagaa cctaattttt ttatcaaaaa attaaaatat aaataaaatg aaaaataact 180

tgtatgaaga aaaaatgaac atgagtaaga aacaagtaaa aactcaaagt aaatgtaata 240

at 242

<210> 9

<211> 245

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Промоторная последовательность с областью из гена FPV 088 плюс добавление 78 нуклеотидов

<400> 9

tatccgtaca ggtttgtttc tgaaattcac tttgtaagat acataattaa caaattcagg 60

gggaaaaatc tttacaaaat tagtatagaa gctatagata tatcaaaagg tagacaacaa 120

ataatcagaa cctaattttt ttatcaaaaa attaaaatat aaataaaatg aaaaataact 180

tgtatgaaga aaaaatgaac atgagtaaga aacaagtaaa aactcaaagt aaatgtaata 240

atatc 245

<210> 10

<211> 119

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Промоторная последовательность с нуклеотидами 5' гена FPV L2R

<400> 10

ttaatgtata gaactaattt ataataaaca tagtaaatat gggtaacttc ttaatagcca 60

taattaaaat tgaaaaaaaa atatcattat aaaacgtaaa cgaacaaaaa acattaatt 119

<210> 11

<211> 435

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Изоформа 1 белка Brachyury с № доступа GenBank O15178.1

<400> 11

Met Ser Ser Pro Gly Thr Glu Ser Ala Gly Lys Ser Leu Gln Tyr Arg

1 5 10 15

Val Asp His Leu Leu Ser Ala Val Glu Asn Glu Leu Gln Ala Gly Ser

20 25 30

Glu Lys Gly Asp Pro Thr Glu Arg Glu Leu Arg Val Gly Leu Glu Glu

35 40 45

Ser Glu Leu Trp Leu Arg Phe Lys Glu Leu Thr Asn Glu Met Ile Val

50 55 60

Thr Lys Asn Gly Arg Arg Met Phe Pro Val Leu Lys Val Asn Val Ser

65 70 75 80

Gly Leu Asp Pro Asn Ala Met Tyr Ser Phe Leu Leu Asp Phe Val Ala

85 90 95

Ala Asp Asn His Arg Trp Lys Tyr Val Asn Gly Glu Trp Val Pro Gly

100 105 110

Gly Lys Pro Glu Pro Gln Ala Pro Ser Cys Val Tyr Ile His Pro Asp

115 120 125

Ser Pro Asn Phe Gly Ala His Trp Met Lys Ala Pro Val Ser Phe Ser

130 135 140

Lys Val Lys Leu Thr Asn Lys Leu Asn Gly Gly Gly Gln Ile Met Leu

145 150 155 160

Asn Ser Leu His Lys Tyr Glu Pro Arg Ile His Ile Val Arg Val Gly

165 170 175

Gly Pro Gln Arg Met Ile Thr Ser His Cys Phe Pro Glu Thr Gln Phe

180 185 190

Ile Ala Val Thr Ala Tyr Gln Asn Glu Glu Ile Thr Ala Leu Lys Ile

195 200 205

Lys Tyr Asn Pro Phe Ala Lys Ala Phe Leu Asp Ala Lys Glu Arg Ser

210 215 220

Asp His Lys Glu Met Met Glu Glu Pro Gly Asp Ser Gln Gln Pro Gly

225 230 235 240

Tyr Ser Gln Trp Gly Trp Leu Leu Pro Gly Thr Ser Thr Leu Cys Pro

245 250 255

Pro Ala Asn Pro His Pro Gln Phe Gly Gly Ala Leu Ser Leu Pro Ser

260 265 270

Thr His Ser Cys Asp Arg Tyr Pro Thr Leu Arg Ser His Arg Ser Ser

275 280 285

Pro Tyr Pro Ser Pro Tyr Ala His Arg Asn Asn Ser Pro Thr Tyr Ser

290 295 300

Asp Asn Ser Pro Ala Cys Leu Ser Met Leu Gln Ser His Asp Asn Trp

305 310 315 320

Ser Ser Leu Gly Met Pro Ala His Pro Ser Met Leu Pro Val Ser His

325 330 335

Asn Ala Ser Pro Pro Thr Ser Ser Ser Gln Tyr Pro Ser Leu Trp Ser

340 345 350

Val Ser Asn Gly Ala Val Thr Pro Gly Ser Gln Ala Ala Ala Val Ser

355 360 365

Asn Gly Leu Gly Ala Gln Phe Phe Arg Gly Ser Pro Ala His Tyr Thr

370 375 380

Pro Leu Thr His Pro Val Ser Ala Pro Ser Ser Ser Gly Ser Pro Leu

385 390 395 400

Tyr Glu Gly Ala Ala Ala Ala Thr Asp Ile Val Asp Ser Gln Tyr Asp

405 410 415

Ala Ala Ala Gln Gly Arg Leu Ile Ala Ser Trp Thr Pro Val Ser Pro

420 425 430

Pro Ser Met

435

<210> 12

<211> 1308

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Кодирующая последовательность для изоформы 1 белка Brachyury с № доступа в GenBank O15178.1

<400> 12

atgagctccc ctggcaccga gagcgcggga aagagcctgc agtaccgagt ggaccacctg 60

ctgagcgccg tggagaatga gctgcaggcg ggcagcgaga agggcgaccc cacagagcgc 120

gaactgcgcg tgggcctgga ggagagcgag ctgtggctgc gcttcaagga gctcaccaat 180

gagatgatcg tgaccaagaa cggcaggagg atgtttccgg tgctgaaggt gaacgtgtct 240

ggcctggacc ccaacgccat gtactccttc ctgctggact tcgtggcggc ggacaaccac 300

cgctggaagt acgtgaacgg ggaatgggtg ccggggggca agccggagcc gcaggcgccc 360

agctgcgtct acatccaccc cgactcgccc aacttcgggg cccactggat gaaggctccc 420

gtctccttca gcaaagtcaa gctcaccaac aagctcaacg gagggggcca gatcatgctg 480

aactccttgc ataagtatga gcctcgaatc cacatagtga gagttggggg tccacagcgc 540

atgatcacca gccactgctt ccctgagacc cagttcatag cggtgactgc ttatcagaac 600

gaggagatca cagctcttaa aattaagtac aatccatttg caaaagcttt ccttgatgca 660

aaggaaagaa gtgatcacaa agagatgatg gaggaacccg gagacagcca gcaacctggg 720

tactcccaat gggggtggct tcttcctgga accagcaccc tgtgtccacc tgcaaatcct 780

catcctcagt ttggaggtgc cctctccctc ccctccacgc acagctgtga caggtaccca 840

accctgagga gccaccggtc ctcaccctac cccagcccct atgctcatcg gaacaattct 900

ccaacctatt ctgacaactc acctgcatgt ttatccatgc tgcaatccca tgacaattgg 960

tccagccttg gaatgcctgc ccatcccagc atgctccccg tgagccacaa tgccagccca 1020

cctaccagct ccagtcagta ccccagcctg tggtctgtga gcaacggcgc cgtcaccccg 1080

ggctcccagg cagcagccgt gtccaacggg ctgggggccc agttcttccg gggctccccc 1140

gcgcactaca cacccctcac ccatccggtc tcggcgccct cttcctcggg atccccactg 1200

tacgaagggg cggccgcggc cacagacatc gtggacagcc agtacgacgc cgcagcccaa 1260

ggccgcctca tagcctcatg gacacctgtg tcgccacctt ccatgtga 1308

<210> 13

<211> 435

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Изоформа 1 белка Brachyury (L254V)

<400> 13

Met Ser Ser Pro Gly Thr Glu Ser Ala Gly Lys Ser Leu Gln Tyr Arg

1 5 10 15

Val Asp His Leu Leu Ser Ala Val Glu Asn Glu Leu Gln Ala Gly Ser

20 25 30

Glu Lys Gly Asp Pro Thr Glu Arg Glu Leu Arg Val Gly Leu Glu Glu

35 40 45

Ser Glu Leu Trp Leu Arg Phe Lys Glu Leu Thr Asn Glu Met Ile Val

50 55 60

Thr Lys Asn Gly Arg Arg Met Phe Pro Val Leu Lys Val Asn Val Ser

65 70 75 80

Gly Leu Asp Pro Asn Ala Met Tyr Ser Phe Leu Leu Asp Phe Val Ala

85 90 95

Ala Asp Asn His Arg Trp Lys Tyr Val Asn Gly Glu Trp Val Pro Gly

100 105 110

Gly Lys Pro Glu Pro Gln Ala Pro Ser Cys Val Tyr Ile His Pro Asp

115 120 125

Ser Pro Asn Phe Gly Ala His Trp Met Lys Ala Pro Val Ser Phe Ser

130 135 140

Lys Val Lys Leu Thr Asn Lys Leu Asn Gly Gly Gly Gln Ile Met Leu

145 150 155 160

Asn Ser Leu His Lys Tyr Glu Pro Arg Ile His Ile Val Arg Val Gly

165 170 175

Gly Pro Gln Arg Met Ile Thr Ser His Cys Phe Pro Glu Thr Gln Phe

180 185 190

Ile Ala Val Thr Ala Tyr Gln Asn Glu Glu Ile Thr Ala Leu Lys Ile

195 200 205

Lys Tyr Asn Pro Phe Ala Lys Ala Phe Leu Asp Ala Lys Glu Arg Ser

210 215 220

Asp His Lys Glu Met Met Glu Glu Pro Gly Asp Ser Gln Gln Pro Gly

225 230 235 240

Tyr Ser Gln Trp Gly Trp Leu Leu Pro Gly Thr Ser Thr Val Cys Pro

245 250 255

Pro Ala Asn Pro His Pro Gln Phe Gly Gly Ala Leu Ser Leu Pro Ser

260 265 270

Thr His Ser Cys Asp Arg Tyr Pro Thr Leu Arg Ser His Arg Ser Ser

275 280 285

Pro Tyr Pro Ser Pro Tyr Ala His Arg Asn Asn Ser Pro Thr Tyr Ser

290 295 300

Asp Asn Ser Pro Ala Cys Leu Ser Met Leu Gln Ser His Asp Asn Trp

305 310 315 320

Ser Ser Leu Gly Met Pro Ala His Pro Ser Met Leu Pro Val Ser His

325 330 335

Asn Ala Ser Pro Pro Thr Ser Ser Ser Gln Tyr Pro Ser Leu Trp Ser

340 345 350

Val Ser Asn Gly Ala Val Thr Pro Gly Ser Gln Ala Ala Ala Val Ser

355 360 365

Asn Gly Leu Gly Ala Gln Phe Phe Arg Gly Ser Pro Ala His Tyr Thr

370 375 380

Pro Leu Thr His Pro Val Ser Ala Pro Ser Ser Ser Gly Ser Pro Leu

385 390 395 400

Tyr Glu Gly Ala Ala Ala Ala Thr Asp Ile Val Asp Ser Gln Tyr Asp

405 410 415

Ala Ala Ala Gln Gly Arg Leu Ile Ala Ser Trp Thr Pro Val Ser Pro

420 425 430

Pro Ser Met

435

<210> 14

<211> 1308

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Кодирующая последовательность, кодирующая изоформу 1 белка Brachyury с L254V

<400> 14

atgagctccc ctggcaccga gagcgcggga aagagcctgc agtaccgagt ggaccacctg 60

ctgagcgccg tggagaatga gctgcaggcg ggcagcgaga agggcgaccc cacagagcgc 120

gaactgcgcg tgggcctgga ggagagcgag ctgtggctgc gcttcaagga gctcaccaat 180

gagatgatcg tgaccaagaa cggcaggagg atgtttccgg tgctgaaggt gaacgtgtct 240

ggcctggacc ccaacgccat gtactccttc ctgctggact tcgtggcggc ggacaaccac 300

cgctggaagt acgtgaacgg ggaatgggtg ccggggggca agccggagcc gcaggcgccc 360

agctgcgtct acatccaccc cgactcgccc aacttcgggg cccactggat gaaggctccc 420

gtctccttca gcaaagtcaa gctcaccaac aagctcaacg gagggggcca gatcatgctg 480

aactccttgc ataagtatga gcctcgaatc cacatagtga gagttggggg tccacagcgc 540

atgatcacca gccactgctt ccctgagacc cagttcatag cggtgactgc ttatcagaac 600

gaggagatca cagctcttaa aattaagtac aatccatttg caaaggcttt ccttgatgca 660

aaggaaagaa gtgatcacaa agagatgatg gaggaacccg gagacagcca gcaacctggg 720

tactcccaat gggggtggct tcttcctgga accagcaccg tttgtccacc tgcaaatcct 780

catcctcagt ttggaggtgc cctctccctc ccctccacgc acagctgtga caggtaccca 840

accctgagga gccaccggtc ctcaccctac cccagcccct atgctcatcg gaacaattct 900

ccaacctatt ctgacaactc acctgcatgt ttatccatgc tgcaatccca tgacaattgg 960

tccagccttg gaatgcctgc ccatcccagc atgctccccg tgagccacaa tgccagccca 1020

cctaccagct ccagtcagta ccccagcctg tggtctgtga gcaacggcgc cgtcaccccg 1080

ggctcccagg cagcagccgt gtccaacggg ctgggggccc agttcttccg gggctccccc 1140

gcgcactaca cacccctcac ccatccggtc tcggcgccct cttcctcggg atccccactg 1200

tacgaagggg cggccgcggc cacagacatc gtggacagcc agtacgacgc cgcagcccaa 1260

ggccgcctca tagcctcatg gacacctgtg tcgccacctt ccatgtga 1308

<210> 15

<211> 1305

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Кодирующая последовательность, кодирующая изоформу 1 белка Brachyury с L254V без последовательности 5' atg

<400> 15

agctcccctg gcaccgagag cgcgggaaag agcctgcagt accgagtgga ccacctgctg 60

agcgccgtgg agaatgagct gcaggcgggc agcgagaagg gcgaccccac agagcgcgaa 120

ctgcgcgtgg gcctggagga gagcgagctg tggctgcgct tcaaggagct caccaatgag 180

atgatcgtga ccaagaacgg caggaggatg tttccggtgc tgaaggtgaa cgtgtctggc 240

ctggacccca acgccatgta ctccttcctg ctggacttcg tggcggcgga caaccaccgc 300

tggaagtacg tgaacgggga atgggtgccg gggggcaagc cggagccgca ggcgcccagc 360

tgcgtctaca tccaccccga ctcgcccaac ttcggggccc actggatgaa ggctcccgtc 420

tccttcagca aagtcaagct caccaacaag ctcaacggag ggggccagat catgctgaac 480

tccttgcata agtatgagcc tcgaatccac atagtgagag ttgggggtcc acagcgcatg 540

atcaccagcc actgcttccc tgagacccag ttcatagcgg tgactgctta tcagaacgag 600

gagatcacag ctcttaaaat taagtacaat ccatttgcaa aggctttcct tgatgcaaag 660

gaaagaagtg atcacaaaga gatgatggag gaacccggag acagccagca acctgggtac 720

tcccaatggg ggtggcttct tcctggaacc agcaccgttt gtccacctgc aaatcctcat 780

cctcagtttg gaggtgccct ctccctcccc tccacgcaca gctgtgacag gtacccaacc 840

ctgaggagcc accggtcctc accctacccc agcccctatg ctcatcggaa caattctcca 900

acctattctg acaactcacc tgcatgttta tccatgctgc aatcccatga caattggtcc 960

agccttggaa tgcctgccca tcccagcatg ctccccgtga gccacaatgc cagcccacct 1020

accagctcca gtcagtaccc cagcctgtgg tctgtgagca acggcgccgt caccccgggc 1080

tcccaggcag cagccgtgtc caacgggctg ggggcccagt tcttccgggg ctcccccgcg 1140

cactacacac ccctcaccca tccggtctcg gcgccctctt cctcgggatc cccactgtac 1200

gaaggggcgg ccgcggccac agacatcgtg gacagccagt acgacgccgc agcccaaggc 1260

cgcctcatag cctcatggac acctgtgtcg ccaccttcca tgtga 1305

<210> 16

<211> 1323

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Кодирующая последовательность, кодирующая слитый белок, содержащий белок Brachyury (L254V), плюс добавление 15 нуклеотидов из гена FPV 088

<400> 16

atgaaaaata acttgatgag ctcccctggc accgagagcg cgggaaagag cctgcagtac 60

cgagtggacc acctgctgag cgccgtggag aatgagctgc aggcgggcag cgagaagggc 120

gaccccacag agcgcgaact gcgcgtgggc ctggaggaga gcgagctgtg gctgcgcttc 180

aaggagctca ccaatgagat gatcgtgacc aagaacggca ggaggatgtt tccggtgctg 240

aaggtgaacg tgtctggcct ggaccccaac gccatgtact ccttcctgct ggacttcgtg 300

gcggcggaca accaccgctg gaagtacgtg aacggggaat gggtgccggg gggcaagccg 360

gagccgcagg cgcccagctg cgtctacatc caccccgact cgcccaactt cggggcccac 420

tggatgaagg ctcccgtctc cttcagcaaa gtcaagctca ccaacaagct caacggaggg 480

ggccagatca tgctgaactc cttgcataag tatgagcctc gaatccacat agtgagagtt 540

gggggtccac agcgcatgat caccagccac tgcttccctg agacccagtt catagcggtg 600

actgcttatc agaacgagga gatcacagct cttaaaatta agtacaatcc atttgcaaag 660

gctttccttg atgcaaagga aagaagtgat cacaaagaga tgatggagga acccggagac 720

agccagcaac ctgggtactc ccaatggggg tggcttcttc ctggaaccag caccgtttgt 780

ccacctgcaa atcctcatcc tcagtttgga ggtgccctct ccctcccctc cacgcacagc 840

tgtgacaggt acccaaccct gaggagccac cggtcctcac cctaccccag cccctatgct 900

catcggaaca attctccaac ctattctgac aactcacctg catgtttatc catgctgcaa 960

tcccatgaca attggtccag ccttggaatg cctgcccatc ccagcatgct ccccgtgagc 1020

cacaatgcca gcccacctac cagctccagt cagtacccca gcctgtggtc tgtgagcaac 1080

ggcgccgtca ccccgggctc ccaggcagca gccgtgtcca acgggctggg ggcccagttc 1140

ttccggggct cccccgcgca ctacacaccc ctcacccatc cggtctcggc gccctcttcc 1200

tcgggatccc cactgtacga aggggcggcc gcggccacag acatcgtgga cagccagtac 1260

gacgccgcag cccaaggccg cctcatagcc tcatggacac ctgtgtcgcc accttccatg 1320

tga 1323

<210> 17

<211> 1320

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Кодирующая последовательность, кодирующая слитый белок, содержащий белок Brachyury (L254V), плюс добавление 15 нуклеотидов из гена FPV 088, без инициирующего кодона atg белка Brachyury

<400> 17

atgaaaaata acttgagctc ccctggcacc gagagcgcgg gaaagagcct gcagtaccga 60

gtggaccacc tgctgagcgc cgtggagaat gagctgcagg cgggcagcga gaagggcgac 120

cccacagagc gcgaactgcg cgtgggcctg gaggagagcg agctgtggct gcgcttcaag 180

gagctcacca atgagatgat cgtgaccaag aacggcagga ggatgtttcc ggtgctgaag 240

gtgaacgtgt ctggcctgga ccccaacgcc atgtactcct tcctgctgga cttcgtggcg 300

gcggacaacc accgctggaa gtacgtgaac ggggaatggg tgccgggggg caagccggag 360

ccgcaggcgc ccagctgcgt ctacatccac cccgactcgc ccaacttcgg ggcccactgg 420

atgaaggctc ccgtctcctt cagcaaagtc aagctcacca acaagctcaa cggagggggc 480

cagatcatgc tgaactcctt gcataagtat gagcctcgaa tccacatagt gagagttggg 540

ggtccacagc gcatgatcac cagccactgc ttccctgaga cccagttcat agcggtgact 600

gcttatcaga acgaggagat cacagctctt aaaattaagt acaatccatt tgcaaaggct 660

ttccttgatg caaaggaaag aagtgatcac aaagagatga tggaggaacc cggagacagc 720

cagcaacctg ggtactccca atgggggtgg cttcttcctg gaaccagcac cgtttgtcca 780

cctgcaaatc ctcatcctca gtttggaggt gccctctccc tcccctccac gcacagctgt 840

gacaggtacc caaccctgag gagccaccgg tcctcaccct accccagccc ctatgctcat 900

cggaacaatt ctccaaccta ttctgacaac tcacctgcat gtttatccat gctgcaatcc 960

catgacaatt ggtccagcct tggaatgcct gcccatccca gcatgctccc cgtgagccac 1020

aatgccagcc cacctaccag ctccagtcag taccccagcc tgtggtctgt gagcaacggc 1080

gccgtcaccc cgggctccca ggcagcagcc gtgtccaacg ggctgggggc ccagttcttc 1140

cggggctccc ccgcgcacta cacacccctc acccatccgg tctcggcgcc ctcttcctcg 1200

ggatccccac tgtacgaagg ggcggccgcg gccacagaca tcgtggacag ccagtacgac 1260

gccgcagccc aaggccgcct catagcctca tggacacctg tgtcgccacc ttccatgtga 1320

<210> 18

<211> 440

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Слитый белок, содержащий белок Brachyury (L254V), кодируемый

SEQ ID NO:16

<400> 18

Met Lys Asn Asn Leu Met Ser Ser Pro Gly Thr Glu Ser Ala Gly Lys

1 5 10 15

Ser Leu Gln Tyr Arg Val Asp His Leu Leu Ser Ala Val Glu Asn Glu

20 25 30

Leu Gln Ala Gly Ser Glu Lys Gly Asp Pro Thr Glu Arg Glu Leu Arg

35 40 45

Val Gly Leu Glu Glu Ser Glu Leu Trp Leu Arg Phe Lys Glu Leu Thr

50 55 60

Asn Glu Met Ile Val Thr Lys Asn Gly Arg Arg Met Phe Pro Val Leu

65 70 75 80

Lys Val Asn Val Ser Gly Leu Asp Pro Asn Ala Met Tyr Ser Phe Leu

85 90 95

Leu Asp Phe Val Ala Ala Asp Asn His Arg Trp Lys Tyr Val Asn Gly

100 105 110

Glu Trp Val Pro Gly Gly Lys Pro Glu Pro Gln Ala Pro Ser Cys Val

115 120 125

Tyr Ile His Pro Asp Ser Pro Asn Phe Gly Ala His Trp Met Lys Ala

130 135 140

Pro Val Ser Phe Ser Lys Val Lys Leu Thr Asn Lys Leu Asn Gly Gly

145 150 155 160

Gly Gln Ile Met Leu Asn Ser Leu His Lys Tyr Glu Pro Arg Ile His

165 170 175

Ile Val Arg Val Gly Gly Pro Gln Arg Met Ile Thr Ser His Cys Phe

180 185 190

Pro Glu Thr Gln Phe Ile Ala Val Thr Ala Tyr Gln Asn Glu Glu Ile

195 200 205

Thr Ala Leu Lys Ile Lys Tyr Asn Pro Phe Ala Lys Ala Phe Leu Asp

210 215 220

Ala Lys Glu Arg Ser Asp His Lys Glu Met Met Glu Glu Pro Gly Asp

225 230 235 240

Ser Gln Gln Pro Gly Tyr Ser Gln Trp Gly Trp Leu Leu Pro Gly Thr

245 250 255

Ser Thr Val Cys Pro Pro Ala Asn Pro His Pro Gln Phe Gly Gly Ala

260 265 270

Leu Ser Leu Pro Ser Thr His Ser Cys Asp Arg Tyr Pro Thr Leu Arg

275 280 285

Ser His Arg Ser Ser Pro Tyr Pro Ser Pro Tyr Ala His Arg Asn Asn

290 295 300

Ser Pro Thr Tyr Ser Asp Asn Ser Pro Ala Cys Leu Ser Met Leu Gln

305 310 315 320

Ser His Asp Asn Trp Ser Ser Leu Gly Met Pro Ala His Pro Ser Met

325 330 335

Leu Pro Val Ser His Asn Ala Ser Pro Pro Thr Ser Ser Ser Gln Tyr

340 345 350

Pro Ser Leu Trp Ser Val Ser Asn Gly Ala Val Thr Pro Gly Ser Gln

355 360 365

Ala Ala Ala Val Ser Asn Gly Leu Gly Ala Gln Phe Phe Arg Gly Ser

370 375 380

Pro Ala His Tyr Thr Pro Leu Thr His Pro Val Ser Ala Pro Ser Ser

385 390 395 400

Ser Gly Ser Pro Leu Tyr Glu Gly Ala Ala Ala Ala Thr Asp Ile Val

405 410 415

Asp Ser Gln Tyr Asp Ala Ala Ala Gln Gly Arg Leu Ile Ala Ser Trp

420 425 430

Thr Pro Val Ser Pro Pro Ser Met

435 440

<210> 19

<211> 439

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Слитый белок, содержащий белок Brachyury (L254V), кодируемый

       SEQ ID NO: 17 плюс добавление 15 нуклеотидов из гена FPV 088

       без инициирующего кодона atg белка Brachyury.

<400> 19

Met Lys Asn Asn Leu Ser Ser Pro Gly Thr Glu Ser Ala Gly Lys Ser

1 5 10 15

Leu Gln Tyr Arg Val Asp His Leu Leu Ser Ala Val Glu Asn Glu Leu

20 25 30

Gln Ala Gly Ser Glu Lys Gly Asp Pro Thr Glu Arg Glu Leu Arg Val

35 40 45

Gly Leu Glu Glu Ser Glu Leu Trp Leu Arg Phe Lys Glu Leu Thr Asn

50 55 60

Glu Met Ile Val Thr Lys Asn Gly Arg Arg Met Phe Pro Val Leu Lys

65 70 75 80

Val Asn Val Ser Gly Leu Asp Pro Asn Ala Met Tyr Ser Phe Leu Leu

85 90 95

Asp Phe Val Ala Ala Asp Asn His Arg Trp Lys Tyr Val Asn Gly Glu

100 105 110

Trp Val Pro Gly Gly Lys Pro Glu Pro Gln Ala Pro Ser Cys Val Tyr

115 120 125

Ile His Pro Asp Ser Pro Asn Phe Gly Ala His Trp Met Lys Ala Pro

130 135 140

Val Ser Phe Ser Lys Val Lys Leu Thr Asn Lys Leu Asn Gly Gly Gly

145 150 155 160

Gln Ile Met Leu Asn Ser Leu His Lys Tyr Glu Pro Arg Ile His Ile

165 170 175

Val Arg Val Gly Gly Pro Gln Arg Met Ile Thr Ser His Cys Phe Pro

180 185 190

Glu Thr Gln Phe Ile Ala Val Thr Ala Tyr Gln Asn Glu Glu Ile Thr

195 200 205

Ala Leu Lys Ile Lys Tyr Asn Pro Phe Ala Lys Ala Phe Leu Asp Ala

210 215 220

Lys Glu Arg Ser Asp His Lys Glu Met Met Glu Glu Pro Gly Asp Ser

225 230 235 240

Gln Gln Pro Gly Tyr Ser Gln Trp Gly Trp Leu Leu Pro Gly Thr Ser

245 250 255

Thr Val Cys Pro Pro Ala Asn Pro His Pro Gln Phe Gly Gly Ala Leu

260 265 270

Ser Leu Pro Ser Thr His Ser Cys Asp Arg Tyr Pro Thr Leu Arg Ser

275 280 285

His Arg Ser Ser Pro Tyr Pro Ser Pro Tyr Ala His Arg Asn Asn Ser

290 295 300

Pro Thr Tyr Ser Asp Asn Ser Pro Ala Cys Leu Ser Met Leu Gln Ser

305 310 315 320

His Asp Asn Trp Ser Ser Leu Gly Met Pro Ala His Pro Ser Met Leu

325 330 335

Pro Val Ser His Asn Ala Ser Pro Pro Thr Ser Ser Ser Gln Tyr Pro

340 345 350

Ser Leu Trp Ser Val Ser Asn Gly Ala Val Thr Pro Gly Ser Gln Ala

355 360 365

Ala Ala Val Ser Asn Gly Leu Gly Ala Gln Phe Phe Arg Gly Ser Pro

370 375 380

Ala His Tyr Thr Pro Leu Thr His Pro Val Ser Ala Pro Ser Ser Ser

385 390 395 400

Gly Ser Pro Leu Tyr Glu Gly Ala Ala Ala Ala Thr Asp Ile Val Asp

405 410 415

Ser Gln Tyr Asp Ala Ala Ala Gln Gly Arg Leu Ile Ala Ser Trp Thr

420 425 430

Pro Val Ser Pro Pro Ser Met

435

<210> 20

<211> 1353

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Кодирующая последовательность, кодирующая слитый белок, содержащий белок Brachyury (L254V), плюс добавление 45 нуклеотидов из гена FPV088

<400> 20

atgaaaaata acttgtatga agaaaaaatg aacatgagta agaaaatgag ctcccctggc 60

accgagagcg cgggaaagag cctgcagtac cgagtggacc acctgctgag cgccgtggag 120

aatgagctgc aggcgggcag cgagaagggc gaccccacag agcgcgaact gcgcgtgggc 180

ctggaggaga gcgagctgtg gctgcgcttc aaggagctca ccaatgagat gatcgtgacc 240

aagaacggca ggaggatgtt tccggtgctg aaggtgaacg tgtctggcct ggaccccaac 300

gccatgtact ccttcctgct ggacttcgtg gcggcggaca accaccgctg gaagtacgtg 360

aacggggaat gggtgccggg gggcaagccg gagccgcagg cgcccagctg cgtctacatc 420

caccccgact cgcccaactt cggggcccac tggatgaagg ctcccgtctc cttcagcaaa 480

gtcaagctca ccaacaagct caacggaggg ggccagatca tgctgaactc cttgcataag 540

tatgagcctc gaatccacat agtgagagtt gggggtccac agcgcatgat caccagccac 600

tgcttccctg agacccagtt catagcggtg actgcttatc agaacgagga gatcacagct 660

cttaaaatta agtacaatcc atttgcaaag gctttccttg atgcaaagga aagaagtgat 720

cacaaagaga tgatggagga acccggagac agccagcaac ctgggtactc ccaatggggg 780

tggcttcttc ctggaaccag caccgtttgt ccacctgcaa atcctcatcc tcagtttgga 840

ggtgccctct ccctcccctc cacgcacagc tgtgacaggt acccaaccct gaggagccac 900

cggtcctcac cctaccccag cccctatgct catcggaaca attctccaac ctattctgac 960

aactcacctg catgtttatc catgctgcaa tcccatgaca attggtccag ccttggaatg 1020

cctgcccatc ccagcatgct ccccgtgagc cacaatgcca gcccacctac cagctccagt 1080

cagtacccca gcctgtggtc tgtgagcaac ggcgccgtca ccccgggctc ccaggcagca 1140

gccgtgtcca acgggctggg ggcccagttc ttccggggct cccccgcgca ctacacaccc 1200

ctcacccatc cggtctcggc gccctcttcc tcgggatccc cactgtacga aggggcggcc 1260

gcggccacag acatcgtgga cagccagtac gacgccgcag cccaaggccg cctcatagcc 1320

tcatggacac ctgtgtcgcc accttccatg tga 1353

<210> 21

<211> 1350

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Кодирующая последовательность, кодирующая слитый белок, содержащий белок Brachyury (L254V), плюс добавление 45 нуклеотидов из гена FPV 088 без atg Brachyury

<400> 21

atgaaaaata acttgtatga agaaaaaatg aacatgagta agaaaagctc ccctggcacc 60

gagagcgcgg gaaagagcct gcagtaccga gtggaccacc tgctgagcgc cgtggagaat 120

gagctgcagg cgggcagcga gaagggcgac cccacagagc gcgaactgcg cgtgggcctg 180

gaggagagcg agctgtggct gcgcttcaag gagctcacca atgagatgat cgtgaccaag 240

aacggcagga ggatgtttcc ggtgctgaag gtgaacgtgt ctggcctgga ccccaacgcc 300

atgtactcct tcctgctgga cttcgtggcg gcggacaacc accgctggaa gtacgtgaac 360

ggggaatggg tgccgggggg caagccggag ccgcaggcgc ccagctgcgt ctacatccac 420

cccgactcgc ccaacttcgg ggcccactgg atgaaggctc ccgtctcctt cagcaaagtc 480

aagctcacca acaagctcaa cggagggggc cagatcatgc tgaactcctt gcataagtat 540

gagcctcgaa tccacatagt gagagttggg ggtccacagc gcatgatcac cagccactgc 600

ttccctgaga cccagttcat agcggtgact gcttatcaga acgaggagat cacagctctt 660

aaaattaagt acaatccatt tgcaaaggct ttccttgatg caaaggaaag aagtgatcac 720

aaagagatga tggaggaacc cggagacagc cagcaacctg ggtactccca atgggggtgg 780

cttcttcctg gaaccagcac cgtttgtcca cctgcaaatc ctcatcctca gtttggaggt 840

gccctctccc tcccctccac gcacagctgt gacaggtacc caaccctgag gagccaccgg 900

tcctcaccct accccagccc ctatgctcat cggaacaatt ctccaaccta ttctgacaac 960

tcacctgcat gtttatccat gctgcaatcc catgacaatt ggtccagcct tggaatgcct 1020

gcccatccca gcatgctccc cgtgagccac aatgccagcc cacctaccag ctccagtcag 1080

taccccagcc tgtggtctgt gagcaacggc gccgtcaccc cgggctccca ggcagcagcc 1140

gtgtccaacg ggctgggggc ccagttcttc cggggctccc ccgcgcacta cacacccctc 1200

acccatccgg tctcggcgcc ctcttcctcg ggatccccac tgtacgaagg ggcggccgcg 1260

gccacagaca tcgtggacag ccagtacgac gccgcagccc aaggccgcct catagcctca 1320

tggacacctg tgtcgccacc ttccatgtga 1350

<210> 22

<211> 450

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Слитый белок, содержащий белок Brachyury (L254V), кодируемый SEQ ID NO:20

<400> 22

Met Lys Asn Asn Leu Tyr Glu Glu Lys Met Asn Met Ser Lys Lys Met

1 5 10 15

Ser Ser Pro Gly Thr Glu Ser Ala Gly Lys Ser Leu Gln Tyr Arg Val

20 25 30

Asp His Leu Leu Ser Ala Val Glu Asn Glu Leu Gln Ala Gly Ser Glu

35 40 45

Lys Gly Asp Pro Thr Glu Arg Glu Leu Arg Val Gly Leu Glu Glu Ser

50 55 60

Glu Leu Trp Leu Arg Phe Lys Glu Leu Thr Asn Glu Met Ile Val Thr

65 70 75 80

Lys Asn Gly Arg Arg Met Phe Pro Val Leu Lys Val Asn Val Ser Gly

85 90 95

Leu Asp Pro Asn Ala Met Tyr Ser Phe Leu Leu Asp Phe Val Ala Ala

100 105 110

Asp Asn His Arg Trp Lys Tyr Val Asn Gly Glu Trp Val Pro Gly Gly

115 120 125

Lys Pro Glu Pro Gln Ala Pro Ser Cys Val Tyr Ile His Pro Asp Ser

130 135 140

Pro Asn Phe Gly Ala His Trp Met Lys Ala Pro Val Ser Phe Ser Lys

145 150 155 160

Val Lys Leu Thr Asn Lys Leu Asn Gly Gly Gly Gln Ile Met Leu Asn

165 170 175

Ser Leu His Lys Tyr Glu Pro Arg Ile His Ile Val Arg Val Gly Gly

180 185 190

Pro Gln Arg Met Ile Thr Ser His Cys Phe Pro Glu Thr Gln Phe Ile

195 200 205

Ala Val Thr Ala Tyr Gln Asn Glu Glu Ile Thr Ala Leu Lys Ile Lys

210 215 220

Tyr Asn Pro Phe Ala Lys Ala Phe Leu Asp Ala Lys Glu Arg Ser Asp

225 230 235 240

His Lys Glu Met Met Glu Glu Pro Gly Asp Ser Gln Gln Pro Gly Tyr

245 250 255

Ser Gln Trp Gly Trp Leu Leu Pro Gly Thr Ser Thr Val Cys Pro Pro

260 265 270

Ala Asn Pro His Pro Gln Phe Gly Gly Ala Leu Ser Leu Pro Ser Thr

275 280 285

His Ser Cys Asp Arg Tyr Pro Thr Leu Arg Ser His Arg Ser Ser Pro

290 295 300

Tyr Pro Ser Pro Tyr Ala His Arg Asn Asn Ser Pro Thr Tyr Ser Asp

305 310 315 320

Asn Ser Pro Ala Cys Leu Ser Met Leu Gln Ser His Asp Asn Trp Ser

325 330 335

Ser Leu Gly Met Pro Ala His Pro Ser Met Leu Pro Val Ser His Asn

340 345 350

Ala Ser Pro Pro Thr Ser Ser Ser Gln Tyr Pro Ser Leu Trp Ser Val

355 360 365

Ser Asn Gly Ala Val Thr Pro Gly Ser Gln Ala Ala Ala Val Ser Asn

370 375 380

Gly Leu Gly Ala Gln Phe Phe Arg Gly Ser Pro Ala His Tyr Thr Pro

385 390 395 400

Leu Thr His Pro Val Ser Ala Pro Ser Ser Ser Gly Ser Pro Leu Tyr

405 410 415

Glu Gly Ala Ala Ala Ala Thr Asp Ile Val Asp Ser Gln Tyr Asp Ala

420 425 430

Ala Ala Gln Gly Arg Leu Ile Ala Ser Trp Thr Pro Val Ser Pro Pro

435 440 445

Ser Met

450

<210> 23

<211> 449

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Слитый белок, содержащий белок Brachyury (L254V), кодируемый

SEQ ID NO:21

<400> 23

Met Lys Asn Asn Leu Tyr Glu Glu Lys Met Asn Met Ser Lys Lys Ser

1 5 10 15

Ser Pro Gly Thr Glu Ser Ala Gly Lys Ser Leu Gln Tyr Arg Val Asp

20 25 30

His Leu Leu Ser Ala Val Glu Asn Glu Leu Gln Ala Gly Ser Glu Lys

35 40 45

Gly Asp Pro Thr Glu Arg Glu Leu Arg Val Gly Leu Glu Glu Ser Glu

50 55 60

Leu Trp Leu Arg Phe Lys Glu Leu Thr Asn Glu Met Ile Val Thr Lys

65 70 75 80

Asn Gly Arg Arg Met Phe Pro Val Leu Lys Val Asn Val Ser Gly Leu

85 90 95

Asp Pro Asn Ala Met Tyr Ser Phe Leu Leu Asp Phe Val Ala Ala Asp

100 105 110

Asn His Arg Trp Lys Tyr Val Asn Gly Glu Trp Val Pro Gly Gly Lys

115 120 125

Pro Glu Pro Gln Ala Pro Ser Cys Val Tyr Ile His Pro Asp Ser Pro

130 135 140

Asn Phe Gly Ala His Trp Met Lys Ala Pro Val Ser Phe Ser Lys Val

145 150 155 160

Lys Leu Thr Asn Lys Leu Asn Gly Gly Gly Gln Ile Met Leu Asn Ser

165 170 175

Leu His Lys Tyr Glu Pro Arg Ile His Ile Val Arg Val Gly Gly Pro

180 185 190

Gln Arg Met Ile Thr Ser His Cys Phe Pro Glu Thr Gln Phe Ile Ala

195 200 205

Val Thr Ala Tyr Gln Asn Glu Glu Ile Thr Ala Leu Lys Ile Lys Tyr

210 215 220

Asn Pro Phe Ala Lys Ala Phe Leu Asp Ala Lys Glu Arg Ser Asp His

225 230 235 240

Lys Glu Met Met Glu Glu Pro Gly Asp Ser Gln Gln Pro Gly Tyr Ser

245 250 255

Gln Trp Gly Trp Leu Leu Pro Gly Thr Ser Thr Val Cys Pro Pro Ala

260 265 270

Asn Pro His Pro Gln Phe Gly Gly Ala Leu Ser Leu Pro Ser Thr His

275 280 285

Ser Cys Asp Arg Tyr Pro Thr Leu Arg Ser His Arg Ser Ser Pro Tyr

290 295 300

Pro Ser Pro Tyr Ala His Arg Asn Asn Ser Pro Thr Tyr Ser Asp Asn

305 310 315 320

Ser Pro Ala Cys Leu Ser Met Leu Gln Ser His Asp Asn Trp Ser Ser

325 330 335

Leu Gly Met Pro Ala His Pro Ser Met Leu Pro Val Ser His Asn Ala

340 345 350

Ser Pro Pro Thr Ser Ser Ser Gln Tyr Pro Ser Leu Trp Ser Val Ser

355 360 365

Asn Gly Ala Val Thr Pro Gly Ser Gln Ala Ala Ala Val Ser Asn Gly

370 375 380

Leu Gly Ala Gln Phe Phe Arg Gly Ser Pro Ala His Tyr Thr Pro Leu

385 390 395 400

Thr His Pro Val Ser Ala Pro Ser Ser Ser Gly Ser Pro Leu Tyr Glu

405 410 415

Gly Ala Ala Ala Ala Thr Asp Ile Val Asp Ser Gln Tyr Asp Ala Ala

420 425 430

Ala Gln Gly Arg Leu Ile Ala Ser Trp Thr Pro Val Ser Pro Pro Ser

435 440 445

Met

<210> 24

<211> 1326

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Кодирующая последовательность, кодирующая слитый белок, содержащий белок Brachyury (L254V), плюс добавление 18 нуклеотидов из гена FPV 088

<400> 24

atgaacatga gtaagaaaat gagctcccct ggcaccgaga gcgcgggaaa gagcctgcag 60

taccgagtgg accacctgct gagcgccgtg gagaatgagc tgcaggcggg cagcgagaag 120

ggcgacccca cagagcgcga actgcgcgtg ggcctggagg agagcgagct gtggctgcgc 180

ttcaaggagc tcaccaatga gatgatcgtg accaagaacg gcaggaggat gtttccggtg 240

ctgaaggtga acgtgtctgg cctggacccc aacgccatgt actccttcct gctggacttc 300

gtggcggcgg acaaccaccg ctggaagtac gtgaacgggg aatgggtgcc ggggggcaag 360

ccggagccgc aggcgcccag ctgcgtctac atccaccccg actcgcccaa cttcggggcc 420

cactggatga aggctcccgt ctccttcagc aaagtcaagc tcaccaacaa gctcaacgga 480

gggggccaga tcatgctgaa ctccttgcat aagtatgagc ctcgaatcca catagtgaga 540

gttgggggtc cacagcgcat gatcaccagc cactgcttcc ctgagaccca gttcatagcg 600

gtgactgctt atcagaacga ggagatcaca gctcttaaaa ttaagtacaa tccatttgca 660

aaggctttcc ttgatgcaaa ggaaagaagt gatcacaaag agatgatgga ggaacccgga 720

gacagccagc aacctgggta ctcccaatgg gggtggcttc ttcctggaac cagcaccgtt 780

tgtccacctg caaatcctca tcctcagttt ggaggtgccc tctccctccc ctccacgcac 840

agctgtgaca ggtacccaac cctgaggagc caccggtcct caccctaccc cagcccctat 900

gctcatcgga acaattctcc aacctattct gacaactcac ctgcatgttt atccatgctg 960

caatcccatg acaattggtc cagccttgga atgcctgccc atcccagcat gctccccgtg 1020

agccacaatg ccagcccacc taccagctcc agtcagtacc ccagcctgtg gtctgtgagc 1080

aacggcgccg tcaccccggg ctcccaggca gcagccgtgt ccaacgggct gggggcccag 1140

ttcttccggg gctcccccgc gcactacaca cccctcaccc atccggtctc ggcgccctct 1200

tcctcgggat ccccactgta cgaaggggcg gccgcggcca cagacatcgt ggacagccag 1260

tacgacgccg cagcccaagg ccgcctcata gcctcatgga cacctgtgtc gccaccttcc 1320

atgtga 1326

<210> 25

<211> 1323

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Кодирующая последовательность, кодирующая слитый белок, содержащий белок Brachyury (L254V), плюс добавление 18 нуклеотидов из гена FPV 088 без atg Brachyury

<400> 25

atgaacatga gtaagaaaag ctcccctggc accgagagcg cgggaaagag cctgcagtac 60

cgagtggacc acctgctgag cgccgtggag aatgagctgc aggcgggcag cgagaagggc 120

gaccccacag agcgcgaact gcgcgtgggc ctggaggaga gcgagctgtg gctgcgcttc 180

aaggagctca ccaatgagat gatcgtgacc aagaacggca ggaggatgtt tccggtgctg 240

aaggtgaacg tgtctggcct ggaccccaac gccatgtact ccttcctgct ggacttcgtg 300

gcggcggaca accaccgctg gaagtacgtg aacggggaat gggtgccggg gggcaagccg 360

gagccgcagg cgcccagctg cgtctacatc caccccgact cgcccaactt cggggcccac 420

tggatgaagg ctcccgtctc cttcagcaaa gtcaagctca ccaacaagct caacggaggg 480

ggccagatca tgctgaactc cttgcataag tatgagcctc gaatccacat agtgagagtt 540

gggggtccac agcgcatgat caccagccac tgcttccctg agacccagtt catagcggtg 600

actgcttatc agaacgagga gatcacagct cttaaaatta agtacaatcc atttgcaaag 660

gctttccttg atgcaaagga aagaagtgat cacaaagaga tgatggagga acccggagac 720

agccagcaac ctgggtactc ccaatggggg tggcttcttc ctggaaccag caccgtttgt 780

ccacctgcaa atcctcatcc tcagtttgga ggtgccctct ccctcccctc cacgcacagc 840

tgtgacaggt acccaaccct gaggagccac cggtcctcac cctaccccag cccctatgct 900

catcggaaca attctccaac ctattctgac aactcacctg catgtttatc catgctgcaa 960

tcccatgaca attggtccag ccttggaatg cctgcccatc ccagcatgct ccccgtgagc 1020

cacaatgcca gcccacctac cagctccagt cagtacccca gcctgtggtc tgtgagcaac 1080

ggcgccgtca ccccgggctc ccaggcagca gccgtgtcca acgggctggg ggcccagttc 1140

ttccggggct cccccgcgca ctacacaccc ctcacccatc cggtctcggc gccctcttcc 1200

tcgggatccc cactgtacga aggggcggcc gcggccacag acatcgtgga cagccagtac 1260

gacgccgcag cccaaggccg cctcatagcc tcatggacac ctgtgtcgcc accttccatg 1320

tga 1323

<210> 26

<211> 441

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Слитый белок, содержащий белок Brachyury (L254V), кодируемый

SEQ ID NO:24

<400> 26

Met Asn Met Ser Lys Lys Met Ser Ser Pro Gly Thr Glu Ser Ala Gly

1 5 10 15

Lys Ser Leu Gln Tyr Arg Val Asp His Leu Leu Ser Ala Val Glu Asn

20 25 30

Glu Leu Gln Ala Gly Ser Glu Lys Gly Asp Pro Thr Glu Arg Glu Leu

35 40 45

Arg Val Gly Leu Glu Glu Ser Glu Leu Trp Leu Arg Phe Lys Glu Leu

50 55 60

Thr Asn Glu Met Ile Val Thr Lys Asn Gly Arg Arg Met Phe Pro Val

65 70 75 80

Leu Lys Val Asn Val Ser Gly Leu Asp Pro Asn Ala Met Tyr Ser Phe

85 90 95

Leu Leu Asp Phe Val Ala Ala Asp Asn His Arg Trp Lys Tyr Val Asn

100 105 110

Gly Glu Trp Val Pro Gly Gly Lys Pro Glu Pro Gln Ala Pro Ser Cys

115 120 125

Val Tyr Ile His Pro Asp Ser Pro Asn Phe Gly Ala His Trp Met Lys

130 135 140

Ala Pro Val Ser Phe Ser Lys Val Lys Leu Thr Asn Lys Leu Asn Gly

145 150 155 160

Gly Gly Gln Ile Met Leu Asn Ser Leu His Lys Tyr Glu Pro Arg Ile

165 170 175

His Ile Val Arg Val Gly Gly Pro Gln Arg Met Ile Thr Ser His Cys

180 185 190

Phe Pro Glu Thr Gln Phe Ile Ala Val Thr Ala Tyr Gln Asn Glu Glu

195 200 205

Ile Thr Ala Leu Lys Ile Lys Tyr Asn Pro Phe Ala Lys Ala Phe Leu

210 215 220

Asp Ala Lys Glu Arg Ser Asp His Lys Glu Met Met Glu Glu Pro Gly

225 230 235 240

Asp Ser Gln Gln Pro Gly Tyr Ser Gln Trp Gly Trp Leu Leu Pro Gly

245 250 255

Thr Ser Thr Val Cys Pro Pro Ala Asn Pro His Pro Gln Phe Gly Gly

260 265 270

Ala Leu Ser Leu Pro Ser Thr His Ser Cys Asp Arg Tyr Pro Thr Leu

275 280 285

Arg Ser His Arg Ser Ser Pro Tyr Pro Ser Pro Tyr Ala His Arg Asn

290 295 300

Asn Ser Pro Thr Tyr Ser Asp Asn Ser Pro Ala Cys Leu Ser Met Leu

305 310 315 320

Gln Ser His Asp Asn Trp Ser Ser Leu Gly Met Pro Ala His Pro Ser

325 330 335

Met Leu Pro Val Ser His Asn Ala Ser Pro Pro Thr Ser Ser Ser Gln

340 345 350

Tyr Pro Ser Leu Trp Ser Val Ser Asn Gly Ala Val Thr Pro Gly Ser

355 360 365

Gln Ala Ala Ala Val Ser Asn Gly Leu Gly Ala Gln Phe Phe Arg Gly

370 375 380

Ser Pro Ala His Tyr Thr Pro Leu Thr His Pro Val Ser Ala Pro Ser

385 390 395 400

Ser Ser Gly Ser Pro Leu Tyr Glu Gly Ala Ala Ala Ala Thr Asp Ile

405 410 415

Val Asp Ser Gln Tyr Asp Ala Ala Ala Gln Gly Arg Leu Ile Ala Ser

420 425 430

Trp Thr Pro Val Ser Pro Pro Ser Met

435 440

<210> 27

<211> 440

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Слитый белок, содержащий белок Brachyury (L254V), кодируемый

SEQ ID NO:25

<400> 27

Met Asn Met Ser Lys Lys Ser Ser Pro Gly Thr Glu Ser Ala Gly Lys

1 5 10 15

Ser Leu Gln Tyr Arg Val Asp His Leu Leu Ser Ala Val Glu Asn Glu

20 25 30

Leu Gln Ala Gly Ser Glu Lys Gly Asp Pro Thr Glu Arg Glu Leu Arg

35 40 45

Val Gly Leu Glu Glu Ser Glu Leu Trp Leu Arg Phe Lys Glu Leu Thr

50 55 60

Asn Glu Met Ile Val Thr Lys Asn Gly Arg Arg Met Phe Pro Val Leu

65 70 75 80

Lys Val Asn Val Ser Gly Leu Asp Pro Asn Ala Met Tyr Ser Phe Leu

85 90 95

Leu Asp Phe Val Ala Ala Asp Asn His Arg Trp Lys Tyr Val Asn Gly

100 105 110

Glu Trp Val Pro Gly Gly Lys Pro Glu Pro Gln Ala Pro Ser Cys Val

115 120 125

Tyr Ile His Pro Asp Ser Pro Asn Phe Gly Ala His Trp Met Lys Ala

130 135 140

Pro Val Ser Phe Ser Lys Val Lys Leu Thr Asn Lys Leu Asn Gly Gly

145 150 155 160

Gly Gln Ile Met Leu Asn Ser Leu His Lys Tyr Glu Pro Arg Ile His

165 170 175

Ile Val Arg Val Gly Gly Pro Gln Arg Met Ile Thr Ser His Cys Phe

180 185 190

Pro Glu Thr Gln Phe Ile Ala Val Thr Ala Tyr Gln Asn Glu Glu Ile

195 200 205

Thr Ala Leu Lys Ile Lys Tyr Asn Pro Phe Ala Lys Ala Phe Leu Asp

210 215 220

Ala Lys Glu Arg Ser Asp His Lys Glu Met Met Glu Glu Pro Gly Asp

225 230 235 240

Ser Gln Gln Pro Gly Tyr Ser Gln Trp Gly Trp Leu Leu Pro Gly Thr

245 250 255

Ser Thr Val Cys Pro Pro Ala Asn Pro His Pro Gln Phe Gly Gly Ala

260 265 270

Leu Ser Leu Pro Ser Thr His Ser Cys Asp Arg Tyr Pro Thr Leu Arg

275 280 285

Ser His Arg Ser Ser Pro Tyr Pro Ser Pro Tyr Ala His Arg Asn Asn

290 295 300

Ser Pro Thr Tyr Ser Asp Asn Ser Pro Ala Cys Leu Ser Met Leu Gln

305 310 315 320

Ser His Asp Asn Trp Ser Ser Leu Gly Met Pro Ala His Pro Ser Met

325 330 335

Leu Pro Val Ser His Asn Ala Ser Pro Pro Thr Ser Ser Ser Gln Tyr

340 345 350

Pro Ser Leu Trp Ser Val Ser Asn Gly Ala Val Thr Pro Gly Ser Gln

355 360 365

Ala Ala Ala Val Ser Asn Gly Leu Gly Ala Gln Phe Phe Arg Gly Ser

370 375 380

Pro Ala His Tyr Thr Pro Leu Thr His Pro Val Ser Ala Pro Ser Ser

385 390 395 400

Ser Gly Ser Pro Leu Tyr Glu Gly Ala Ala Ala Ala Thr Asp Ile Val

405 410 415

Asp Ser Gln Tyr Asp Ala Ala Ala Gln Gly Arg Leu Ile Ala Ser Trp

420 425 430

Thr Pro Val Ser Pro Pro Ser Met

435 440

<210> 28

<211> 1320

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Кодирующая последовательность, кодирующая слитый белок, содержащий белок Brachyury (L254V), плюс добавление 12 нуклеотидов из гена FPV 088

<400> 28

atgagtaaga aaatgagctc ccctggcacc gagagcgcgg gaaagagcct gcagtaccga 60

gtggaccacc tgctgagcgc cgtggagaat gagctgcagg cgggcagcga gaagggcgac 120

cccacagagc gcgaactgcg cgtgggcctg gaggagagcg agctgtggct gcgcttcaag 180

gagctcacca atgagatgat cgtgaccaag aacggcagga ggatgtttcc ggtgctgaag 240

gtgaacgtgt ctggcctgga ccccaacgcc atgtactcct tcctgctgga cttcgtggcg 300

gcggacaacc accgctggaa gtacgtgaac ggggaatggg tgccgggggg caagccggag 360

ccgcaggcgc ccagctgcgt ctacatccac cccgactcgc ccaacttcgg ggcccactgg 420

atgaaggctc ccgtctcctt cagcaaagtc aagctcacca acaagctcaa cggagggggc 480

cagatcatgc tgaactcctt gcataagtat gagcctcgaa tccacatagt gagagttggg 540

ggtccacagc gcatgatcac cagccactgc ttccctgaga cccagttcat agcggtgact 600

gcttatcaga acgaggagat cacagctctt aaaattaagt acaatccatt tgcaaaggct 660

ttccttgatg caaaggaaag aagtgatcac aaagagatga tggaggaacc cggagacagc 720

cagcaacctg ggtactccca atgggggtgg cttcttcctg gaaccagcac cgtttgtcca 780

cctgcaaatc ctcatcctca gtttggaggt gccctctccc tcccctccac gcacagctgt 840

gacaggtacc caaccctgag gagccaccgg tcctcaccct accccagccc ctatgctcat 900

cggaacaatt ctccaaccta ttctgacaac tcacctgcat gtttatccat gctgcaatcc 960

catgacaatt ggtccagcct tggaatgcct gcccatccca gcatgctccc cgtgagccac 1020

aatgccagcc cacctaccag ctccagtcag taccccagcc tgtggtctgt gagcaacggc 1080

gccgtcaccc cgggctccca ggcagcagcc gtgtccaacg ggctgggggc ccagttcttc 1140

cggggctccc ccgcgcacta cacacccctc acccatccgg tctcggcgcc ctcttcctcg 1200

ggatccccac tgtacgaagg ggcggccgcg gccacagaca tcgtggacag ccagtacgac 1260

gccgcagccc aaggccgcct catagcctca tggacacctg tgtcgccacc ttccatgtga 1320

<210> 29

<211> 1317

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Кодирующая последовательность, кодирующая слитый белок, содержащий белок Brachyury (L254V), плюс добавление 12 нуклеотидов из гена FPV 088 без инициирующего кодона atg Brachyury

<400> 29

atgagtaaga aaagctcccc tggcaccgag agcgcgggaa agagcctgca gtaccgagtg 60

gaccacctgc tgagcgccgt ggagaatgag ctgcaggcgg gcagcgagaa gggcgacccc 120

acagagcgcg aactgcgcgt gggcctggag gagagcgagc tgtggctgcg cttcaaggag 180

ctcaccaatg agatgatcgt gaccaagaac ggcaggagga tgtttccggt gctgaaggtg 240

aacgtgtctg gcctggaccc caacgccatg tactccttcc tgctggactt cgtggcggcg 300

gacaaccacc gctggaagta cgtgaacggg gaatgggtgc cggggggcaa gccggagccg 360

caggcgccca gctgcgtcta catccacccc gactcgccca acttcggggc ccactggatg 420

aaggctcccg tctccttcag caaagtcaag ctcaccaaca agctcaacgg agggggccag 480

atcatgctga actccttgca taagtatgag cctcgaatcc acatagtgag agttgggggt 540

ccacagcgca tgatcaccag ccactgcttc cctgagaccc agttcatagc ggtgactgct 600

tatcagaacg aggagatcac agctcttaaa attaagtaca atccatttgc aaaggctttc 660

cttgatgcaa aggaaagaag tgatcacaaa gagatgatgg aggaacccgg agacagccag 720

caacctgggt actcccaatg ggggtggctt cttcctggaa ccagcaccgt ttgtccacct 780

gcaaatcctc atcctcagtt tggaggtgcc ctctccctcc cctccacgca cagctgtgac 840

aggtacccaa ccctgaggag ccaccggtcc tcaccctacc ccagccccta tgctcatcgg 900

aacaattctc caacctattc tgacaactca cctgcatgtt tatccatgct gcaatcccat 960

gacaattggt ccagccttgg aatgcctgcc catcccagca tgctccccgt gagccacaat 1020

gccagcccac ctaccagctc cagtcagtac cccagcctgt ggtctgtgag caacggcgcc 1080

gtcaccccgg gctcccaggc agcagccgtg tccaacgggc tgggggccca gttcttccgg 1140

ggctcccccg cgcactacac acccctcacc catccggtct cggcgccctc ttcctcggga 1200

tccccactgt acgaaggggc ggccgcggcc acagacatcg tggacagcca gtacgacgcc 1260

gcagcccaag gccgcctcat agcctcatgg acacctgtgt cgccaccttc catgtga 1317

<210> 30

<211> 439

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Слитый белок, содержащий белок Brachyury (L254V), кодируемый

SEQ ID NO:28

<400> 30

Met Ser Lys Lys Met Ser Ser Pro Gly Thr Glu Ser Ala Gly Lys Ser

1 5 10 15

Leu Gln Tyr Arg Val Asp His Leu Leu Ser Ala Val Glu Asn Glu Leu

20 25 30

Gln Ala Gly Ser Glu Lys Gly Asp Pro Thr Glu Arg Glu Leu Arg Val

35 40 45

Gly Leu Glu Glu Ser Glu Leu Trp Leu Arg Phe Lys Glu Leu Thr Asn

50 55 60

Glu Met Ile Val Thr Lys Asn Gly Arg Arg Met Phe Pro Val Leu Lys

65 70 75 80

Val Asn Val Ser Gly Leu Asp Pro Asn Ala Met Tyr Ser Phe Leu Leu

85 90 95

Asp Phe Val Ala Ala Asp Asn His Arg Trp Lys Tyr Val Asn Gly Glu

100 105 110

Trp Val Pro Gly Gly Lys Pro Glu Pro Gln Ala Pro Ser Cys Val Tyr

115 120 125

Ile His Pro Asp Ser Pro Asn Phe Gly Ala His Trp Met Lys Ala Pro

130 135 140

Val Ser Phe Ser Lys Val Lys Leu Thr Asn Lys Leu Asn Gly Gly Gly

145 150 155 160

Gln Ile Met Leu Asn Ser Leu His Lys Tyr Glu Pro Arg Ile His Ile

165 170 175

Val Arg Val Gly Gly Pro Gln Arg Met Ile Thr Ser His Cys Phe Pro

180 185 190

Glu Thr Gln Phe Ile Ala Val Thr Ala Tyr Gln Asn Glu Glu Ile Thr

195 200 205

Ala Leu Lys Ile Lys Tyr Asn Pro Phe Ala Lys Ala Phe Leu Asp Ala

210 215 220

Lys Glu Arg Ser Asp His Lys Glu Met Met Glu Glu Pro Gly Asp Ser

225 230 235 240

Gln Gln Pro Gly Tyr Ser Gln Trp Gly Trp Leu Leu Pro Gly Thr Ser

245 250 255

Thr Val Cys Pro Pro Ala Asn Pro His Pro Gln Phe Gly Gly Ala Leu

260 265 270

Ser Leu Pro Ser Thr His Ser Cys Asp Arg Tyr Pro Thr Leu Arg Ser

275 280 285

His Arg Ser Ser Pro Tyr Pro Ser Pro Tyr Ala His Arg Asn Asn Ser

290 295 300

Pro Thr Tyr Ser Asp Asn Ser Pro Ala Cys Leu Ser Met Leu Gln Ser

305 310 315 320

His Asp Asn Trp Ser Ser Leu Gly Met Pro Ala His Pro Ser Met Leu

325 330 335

Pro Val Ser His Asn Ala Ser Pro Pro Thr Ser Ser Ser Gln Tyr Pro

340 345 350

Ser Leu Trp Ser Val Ser Asn Gly Ala Val Thr Pro Gly Ser Gln Ala

355 360 365

Ala Ala Val Ser Asn Gly Leu Gly Ala Gln Phe Phe Arg Gly Ser Pro

370 375 380

Ala His Tyr Thr Pro Leu Thr His Pro Val Ser Ala Pro Ser Ser Ser

385 390 395 400

Gly Ser Pro Leu Tyr Glu Gly Ala Ala Ala Ala Thr Asp Ile Val Asp

405 410 415

Ser Gln Tyr Asp Ala Ala Ala Gln Gly Arg Leu Ile Ala Ser Trp Thr

420 425 430

Pro Val Ser Pro Pro Ser Met

435

<210> 31

<211> 438

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Слитый белок, содержащий белок Brachyury (L254V), кодируемый

SEQ ID NO:29

<400> 31

Met Ser Lys Lys Ser Ser Pro Gly Thr Glu Ser Ala Gly Lys Ser Leu

1 5 10 15

Gln Tyr Arg Val Asp His Leu Leu Ser Ala Val Glu Asn Glu Leu Gln

20 25 30

Ala Gly Ser Glu Lys Gly Asp Pro Thr Glu Arg Glu Leu Arg Val Gly

35 40 45

Leu Glu Glu Ser Glu Leu Trp Leu Arg Phe Lys Glu Leu Thr Asn Glu

50 55 60

Met Ile Val Thr Lys Asn Gly Arg Arg Met Phe Pro Val Leu Lys Val

65 70 75 80

Asn Val Ser Gly Leu Asp Pro Asn Ala Met Tyr Ser Phe Leu Leu Asp

85 90 95

Phe Val Ala Ala Asp Asn His Arg Trp Lys Tyr Val Asn Gly Glu Trp

100 105 110

Val Pro Gly Gly Lys Pro Glu Pro Gln Ala Pro Ser Cys Val Tyr Ile

115 120 125

His Pro Asp Ser Pro Asn Phe Gly Ala His Trp Met Lys Ala Pro Val

130 135 140

Ser Phe Ser Lys Val Lys Leu Thr Asn Lys Leu Asn Gly Gly Gly Gln

145 150 155 160

Ile Met Leu Asn Ser Leu His Lys Tyr Glu Pro Arg Ile His Ile Val

165 170 175

Arg Val Gly Gly Pro Gln Arg Met Ile Thr Ser His Cys Phe Pro Glu

180 185 190

Thr Gln Phe Ile Ala Val Thr Ala Tyr Gln Asn Glu Glu Ile Thr Ala

195 200 205

Leu Lys Ile Lys Tyr Asn Pro Phe Ala Lys Ala Phe Leu Asp Ala Lys

210 215 220

Glu Arg Ser Asp His Lys Glu Met Met Glu Glu Pro Gly Asp Ser Gln

225 230 235 240

Gln Pro Gly Tyr Ser Gln Trp Gly Trp Leu Leu Pro Gly Thr Ser Thr

245 250 255

Val Cys Pro Pro Ala Asn Pro His Pro Gln Phe Gly Gly Ala Leu Ser

260 265 270

Leu Pro Ser Thr His Ser Cys Asp Arg Tyr Pro Thr Leu Arg Ser His

275 280 285

Arg Ser Ser Pro Tyr Pro Ser Pro Tyr Ala His Arg Asn Asn Ser Pro

290 295 300

Thr Tyr Ser Asp Asn Ser Pro Ala Cys Leu Ser Met Leu Gln Ser His

305 310 315 320

Asp Asn Trp Ser Ser Leu Gly Met Pro Ala His Pro Ser Met Leu Pro

325 330 335

Val Ser His Asn Ala Ser Pro Pro Thr Ser Ser Ser Gln Tyr Pro Ser

340 345 350

Leu Trp Ser Val Ser Asn Gly Ala Val Thr Pro Gly Ser Gln Ala Ala

355 360 365

Ala Val Ser Asn Gly Leu Gly Ala Gln Phe Phe Arg Gly Ser Pro Ala

370 375 380

His Tyr Thr Pro Leu Thr His Pro Val Ser Ala Pro Ser Ser Ser Gly

385 390 395 400

Ser Pro Leu Tyr Glu Gly Ala Ala Ala Ala Thr Asp Ile Val Asp Ser

405 410 415

Gln Tyr Asp Ala Ala Ala Gln Gly Arg Leu Ile Ala Ser Trp Thr Pro

420 425 430

Val Ser Pro Pro Ser Met

435

<210> 32

<211> 1386

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Кодирующая последовательность, кодирующая слитый белок, содержащий белок Brachyury (L254V), плюс добавление 75 нуклеотидов из гена FPV 088 и atc

<400> 32

atgaaaaata acttgtatga agaaaaaatg aacatgagta agaaacaagt aaaaactcaa 60

agtaaatgta ataatatcat gagctcccct ggcaccgaga gcgcgggaaa gagcctgcag 120

taccgagtgg accacctgct gagcgccgtg gagaatgagc tgcaggcggg cagcgagaag 180

ggcgacccca cagagcgcga actgcgcgtg ggcctggagg agagcgagct gtggctgcgc 240

ttcaaggagc tcaccaatga gatgatcgtg accaagaacg gcaggaggat gtttccggtg 300

ctgaaggtga acgtgtctgg cctggacccc aacgccatgt actccttcct gctggacttc 360

gtggcggcgg acaaccaccg ctggaagtac gtgaacgggg aatgggtgcc ggggggcaag 420

ccggagccgc aggcgcccag ctgcgtctac atccaccccg actcgcccaa cttcggggcc 480

cactggatga aggctcccgt ctccttcagc aaagtcaagc tcaccaacaa gctcaacgga 540

gggggccaga tcatgctgaa ctccttgcat aagtatgagc ctcgaatcca catagtgaga 600

gttgggggtc cacagcgcat gatcaccagc cactgcttcc ctgagaccca gttcatagcg 660

gtgactgctt atcagaacga ggagatcaca gctcttaaaa ttaagtacaa tccatttgca 720

aaggctttcc ttgatgcaaa ggaaagaagt gatcacaaag agatgatgga ggaacccgga 780

gacagccagc aacctgggta ctcccaatgg gggtggcttc ttcctggaac cagcaccgtt 840

tgtccacctg caaatcctca tcctcagttt ggaggtgccc tctccctccc ctccacgcac 900

agctgtgaca ggtacccaac cctgaggagc caccggtcct caccctaccc cagcccctat 960

gctcatcgga acaattctcc aacctattct gacaactcac ctgcatgttt atccatgctg 1020

caatcccatg acaattggtc cagccttgga atgcctgccc atcccagcat gctccccgtg 1080

agccacaatg ccagcccacc taccagctcc agtcagtacc ccagcctgtg gtctgtgagc 1140

aacggcgccg tcaccccggg ctcccaggca gcagccgtgt ccaacgggct gggggcccag 1200

ttcttccggg gctcccccgc gcactacaca cccctcaccc atccggtctc ggcgccctct 1260

tcctcgggat ccccactgta cgaaggggcg gccgcggcca cagacatcgt ggacagccag 1320

tacgacgccg cagcccaagg ccgcctcata gcctcatgga cacctgtgtc gccaccttcc 1380

atgtga 1386

<210> 33

<211> 1383

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Кодирующая последовательность, кодирующая слитый белок, содержащий белок Brachyury (L254V), плюс добавление 75 нуклеотидов из гена FPV 088  и atc, без инициирующего кодона atg Brachyury

<400> 33

atgaaaaata acttgtatga agaaaaaatg aacatgagta agaaacaagt aaaaactcaa 60

agtaaatgta ataatatcag ctcccctggc accgagagcg cgggaaagag cctgcagtac 120

cgagtggacc acctgctgag cgccgtggag aatgagctgc aggcgggcag cgagaagggc 180

gaccccacag agcgcgaact gcgcgtgggc ctggaggaga gcgagctgtg gctgcgcttc 240

aaggagctca ccaatgagat gatcgtgacc aagaacggca ggaggatgtt tccggtgctg 300

aaggtgaacg tgtctggcct ggaccccaac gccatgtact ccttcctgct ggacttcgtg 360

gcggcggaca accaccgctg gaagtacgtg aacggggaat gggtgccggg gggcaagccg 420

gagccgcagg cgcccagctg cgtctacatc caccccgact cgcccaactt cggggcccac 480

tggatgaagg ctcccgtctc cttcagcaaa gtcaagctca ccaacaagct caacggaggg 540

ggccagatca tgctgaactc cttgcataag tatgagcctc gaatccacat agtgagagtt 600

gggggtccac agcgcatgat caccagccac tgcttccctg agacccagtt catagcggtg 660

actgcttatc agaacgagga gatcacagct cttaaaatta agtacaatcc atttgcaaag 720

gctttccttg atgcaaagga aagaagtgat cacaaagaga tgatggagga acccggagac 780

agccagcaac ctgggtactc ccaatggggg tggcttcttc ctggaaccag caccgtttgt 840

ccacctgcaa atcctcatcc tcagtttgga ggtgccctct ccctcccctc cacgcacagc 900

tgtgacaggt acccaaccct gaggagccac cggtcctcac cctaccccag cccctatgct 960

catcggaaca attctccaac ctattctgac aactcacctg catgtttatc catgctgcaa 1020

tcccatgaca attggtccag ccttggaatg cctgcccatc ccagcatgct ccccgtgagc 1080

cacaatgcca gcccacctac cagctccagt cagtacccca gcctgtggtc tgtgagcaac 1140

ggcgccgtca ccccgggctc ccaggcagca gccgtgtcca acgggctggg ggcccagttc 1200

ttccggggct cccccgcgca ctacacaccc ctcacccatc cggtctcggc gccctcttcc 1260

tcgggatccc cactgtacga aggggcggcc gcggccacag acatcgtgga cagccagtac 1320

gacgccgcag cccaaggccg cctcatagcc tcatggacac ctgtgtcgcc accttccatg 1380

tga 1383

<210> 34

<211> 461

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Слитый белок, содержащий белок Brachyury (L254V), кодируемый

SEQ ID NO: 32

<400> 34

Met Lys Asn Asn Leu Tyr Glu Glu Lys Met Asn Met Ser Lys Lys Gln

1 5 10 15

Val Lys Thr Gln Ser Lys Cys Asn Asn Ile Met Ser Ser Pro Gly Thr

20 25 30

Glu Ser Ala Gly Lys Ser Leu Gln Tyr Arg Val Asp His Leu Leu Ser

35 40 45

Ala Val Glu Asn Glu Leu Gln Ala Gly Ser Glu Lys Gly Asp Pro Thr

50 55 60

Glu Arg Glu Leu Arg Val Gly Leu Glu Glu Ser Glu Leu Trp Leu Arg

65 70 75 80

Phe Lys Glu Leu Thr Asn Glu Met Ile Val Thr Lys Asn Gly Arg Arg

85 90 95

Met Phe Pro Val Leu Lys Val Asn Val Ser Gly Leu Asp Pro Asn Ala

100 105 110

Met Tyr Ser Phe Leu Leu Asp Phe Val Ala Ala Asp Asn His Arg Trp

115 120 125

Lys Tyr Val Asn Gly Glu Trp Val Pro Gly Gly Lys Pro Glu Pro Gln

130 135 140

Ala Pro Ser Cys Val Tyr Ile His Pro Asp Ser Pro Asn Phe Gly Ala

145 150 155 160

His Trp Met Lys Ala Pro Val Ser Phe Ser Lys Val Lys Leu Thr Asn

165 170 175

Lys Leu Asn Gly Gly Gly Gln Ile Met Leu Asn Ser Leu His Lys Tyr

180 185 190

Glu Pro Arg Ile His Ile Val Arg Val Gly Gly Pro Gln Arg Met Ile

195 200 205

Thr Ser His Cys Phe Pro Glu Thr Gln Phe Ile Ala Val Thr Ala Tyr

210 215 220

Gln Asn Glu Glu Ile Thr Ala Leu Lys Ile Lys Tyr Asn Pro Phe Ala

225 230 235 240

Lys Ala Phe Leu Asp Ala Lys Glu Arg Ser Asp His Lys Glu Met Met

245 250 255

Glu Glu Pro Gly Asp Ser Gln Gln Pro Gly Tyr Ser Gln Trp Gly Trp

260 265 270

Leu Leu Pro Gly Thr Ser Thr Val Cys Pro Pro Ala Asn Pro His Pro

275 280 285

Gln Phe Gly Gly Ala Leu Ser Leu Pro Ser Thr His Ser Cys Asp Arg

290 295 300

Tyr Pro Thr Leu Arg Ser His Arg Ser Ser Pro Tyr Pro Ser Pro Tyr

305 310 315 320

Ala His Arg Asn Asn Ser Pro Thr Tyr Ser Asp Asn Ser Pro Ala Cys

325 330 335

Leu Ser Met Leu Gln Ser His Asp Asn Trp Ser Ser Leu Gly Met Pro

340 345 350

Ala His Pro Ser Met Leu Pro Val Ser His Asn Ala Ser Pro Pro Thr

355 360 365

Ser Ser Ser Gln Tyr Pro Ser Leu Trp Ser Val Ser Asn Gly Ala Val

370 375 380

Thr Pro Gly Ser Gln Ala Ala Ala Val Ser Asn Gly Leu Gly Ala Gln

385 390 395 400

Phe Phe Arg Gly Ser Pro Ala His Tyr Thr Pro Leu Thr His Pro Val

405 410 415

Ser Ala Pro Ser Ser Ser Gly Ser Pro Leu Tyr Glu Gly Ala Ala Ala

420 425 430

Ala Thr Asp Ile Val Asp Ser Gln Tyr Asp Ala Ala Ala Gln Gly Arg

435 440 445

Leu Ile Ala Ser Trp Thr Pro Val Ser Pro Pro Ser Met

450 455 460

<210> 35

<211> 460

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Слитый белок, содержащий белок Brachyury (L254V), кодируемый

SEQ ID NO: 33

<400> 35

Met Lys Asn Asn Leu Tyr Glu Glu Lys Met Asn Met Ser Lys Lys Gln

1 5 10 15

Val Lys Thr Gln Ser Lys Cys Asn Asn Ile Ser Ser Pro Gly Thr Glu

20 25 30

Ser Ala Gly Lys Ser Leu Gln Tyr Arg Val Asp His Leu Leu Ser Ala

35 40 45

Val Glu Asn Glu Leu Gln Ala Gly Ser Glu Lys Gly Asp Pro Thr Glu

50 55 60

Arg Glu Leu Arg Val Gly Leu Glu Glu Ser Glu Leu Trp Leu Arg Phe

65 70 75 80

Lys Glu Leu Thr Asn Glu Met Ile Val Thr Lys Asn Gly Arg Arg Met

85 90 95

Phe Pro Val Leu Lys Val Asn Val Ser Gly Leu Asp Pro Asn Ala Met

100 105 110

Tyr Ser Phe Leu Leu Asp Phe Val Ala Ala Asp Asn His Arg Trp Lys

115 120 125

Tyr Val Asn Gly Glu Trp Val Pro Gly Gly Lys Pro Glu Pro Gln Ala

130 135 140

Pro Ser Cys Val Tyr Ile His Pro Asp Ser Pro Asn Phe Gly Ala His

145 150 155 160

Trp Met Lys Ala Pro Val Ser Phe Ser Lys Val Lys Leu Thr Asn Lys

165 170 175

Leu Asn Gly Gly Gly Gln Ile Met Leu Asn Ser Leu His Lys Tyr Glu

180 185 190

Pro Arg Ile His Ile Val Arg Val Gly Gly Pro Gln Arg Met Ile Thr

195 200 205

Ser His Cys Phe Pro Glu Thr Gln Phe Ile Ala Val Thr Ala Tyr Gln

210 215 220

Asn Glu Glu Ile Thr Ala Leu Lys Ile Lys Tyr Asn Pro Phe Ala Lys

225 230 235 240

Ala Phe Leu Asp Ala Lys Glu Arg Ser Asp His Lys Glu Met Met Glu

245 250 255

Glu Pro Gly Asp Ser Gln Gln Pro Gly Tyr Ser Gln Trp Gly Trp Leu

260 265 270

Leu Pro Gly Thr Ser Thr Val Cys Pro Pro Ala Asn Pro His Pro Gln

275 280 285

Phe Gly Gly Ala Leu Ser Leu Pro Ser Thr His Ser Cys Asp Arg Tyr

290 295 300

Pro Thr Leu Arg Ser His Arg Ser Ser Pro Tyr Pro Ser Pro Tyr Ala

305 310 315 320

His Arg Asn Asn Ser Pro Thr Tyr Ser Asp Asn Ser Pro Ala Cys Leu

325 330 335

Ser Met Leu Gln Ser His Asp Asn Trp Ser Ser Leu Gly Met Pro Ala

340 345 350

His Pro Ser Met Leu Pro Val Ser His Asn Ala Ser Pro Pro Thr Ser

355 360 365

Ser Ser Gln Tyr Pro Ser Leu Trp Ser Val Ser Asn Gly Ala Val Thr

370 375 380

Pro Gly Ser Gln Ala Ala Ala Val Ser Asn Gly Leu Gly Ala Gln Phe

385 390 395 400

Phe Arg Gly Ser Pro Ala His Tyr Thr Pro Leu Thr His Pro Val Ser

405 410 415

Ala Pro Ser Ser Ser Gly Ser Pro Leu Tyr Glu Gly Ala Ala Ala Ala

420 425 430

Thr Asp Ile Val Asp Ser Gln Tyr Asp Ala Ala Ala Gln Gly Arg Leu

435 440 445

Ile Ala Ser Trp Thr Pro Val Ser Pro Pro Ser Met

450 455 460

<210> 36

<211> 1359

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Кодирующая последовательность, кодирующая слитый белок, содержащий белок Brachyury (L254V), плюс добавление 48 нуклеотидов из гена FPV088 и atc

<400> 36

atgaacatga gtaagaaaca agtaaaaact caaagtaaat gtaataatat catgagctcc 60

cctggcaccg agagcgcggg aaagagcctg cagtaccgag tggaccacct gctgagcgcc 120

gtggagaatg agctgcaggc gggcagcgag aagggcgacc ccacagagcg cgaactgcgc 180

gtgggcctgg aggagagcga gctgtggctg cgcttcaagg agctcaccaa tgagatgatc 240

gtgaccaaga acggcaggag gatgtttccg gtgctgaagg tgaacgtgtc tggcctggac 300

cccaacgcca tgtactcctt cctgctggac ttcgtggcgg cggacaacca ccgctggaag 360

tacgtgaacg gggaatgggt gccggggggc aagccggagc cgcaggcgcc cagctgcgtc 420

tacatccacc ccgactcgcc caacttcggg gcccactgga tgaaggctcc cgtctccttc 480

agcaaagtca agctcaccaa caagctcaac ggagggggcc agatcatgct gaactccttg 540

cataagtatg agcctcgaat ccacatagtg agagttgggg gtccacagcg catgatcacc 600

agccactgct tccctgagac ccagttcata gcggtgactg cttatcagaa cgaggagatc 660

acagctctta aaattaagta caatccattt gcaaaggctt tccttgatgc aaaggaaaga 720

agtgatcaca aagagatgat ggaggaaccc ggagacagcc agcaacctgg gtactcccaa 780

tgggggtggc ttcttcctgg aaccagcacc gtttgtccac ctgcaaatcc tcatcctcag 840

tttggaggtg ccctctccct cccctccacg cacagctgtg acaggtaccc aaccctgagg 900

agccaccggt cctcacccta ccccagcccc tatgctcatc ggaacaattc tccaacctat 960

tctgacaact cacctgcatg tttatccatg ctgcaatccc atgacaattg gtccagcctt 1020

ggaatgcctg cccatcccag catgctcccc gtgagccaca atgccagccc acctaccagc 1080

tccagtcagt accccagcct gtggtctgtg agcaacggcg ccgtcacccc gggctcccag 1140

gcagcagccg tgtccaacgg gctgggggcc cagttcttcc ggggctcccc cgcgcactac 1200

acacccctca cccatccggt ctcggcgccc tcttcctcgg gatccccact gtacgaaggg 1260

gcggccgcgg ccacagacat cgtggacagc cagtacgacg ccgcagccca aggccgcctc 1320

atagcctcat ggacacctgt gtcgccacct tccatgtga 1359

<210> 37

<211> 1356

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Кодирующая последовательность, кодирующая слитый белок, содержащий белок Brachyury (L254V), плюс добавление 48 нуклеотидов из гена FPV 088 и atc, без инициирующего кодона atg Brachyury

<400> 37

atgaacatga gtaagaaaca agtaaaaact caaagtaaat gtaataatat cagctcccct 60

ggcaccgaga gcgcgggaaa gagcctgcag taccgagtgg accacctgct gagcgccgtg 120

gagaatgagc tgcaggcggg cagcgagaag ggcgacccca cagagcgcga actgcgcgtg 180

ggcctggagg agagcgagct gtggctgcgc ttcaaggagc tcaccaatga gatgatcgtg 240

accaagaacg gcaggaggat gtttccggtg ctgaaggtga acgtgtctgg cctggacccc 300

aacgccatgt actccttcct gctggacttc gtggcggcgg acaaccaccg ctggaagtac 360

gtgaacgggg aatgggtgcc ggggggcaag ccggagccgc aggcgcccag ctgcgtctac 420

atccaccccg actcgcccaa cttcggggcc cactggatga aggctcccgt ctccttcagc 480

aaagtcaagc tcaccaacaa gctcaacgga gggggccaga tcatgctgaa ctccttgcat 540

aagtatgagc ctcgaatcca catagtgaga gttgggggtc cacagcgcat gatcaccagc 600

cactgcttcc ctgagaccca gttcatagcg gtgactgctt atcagaacga ggagatcaca 660

gctcttaaaa ttaagtacaa tccatttgca aaggctttcc ttgatgcaaa ggaaagaagt 720

gatcacaaag agatgatgga ggaacccgga gacagccagc aacctgggta ctcccaatgg 780

gggtggcttc ttcctggaac cagcaccgtt tgtccacctg caaatcctca tcctcagttt 840

ggaggtgccc tctccctccc ctccacgcac agctgtgaca ggtacccaac cctgaggagc 900

caccggtcct caccctaccc cagcccctat gctcatcgga acaattctcc aacctattct 960

gacaactcac ctgcatgttt atccatgctg caatcccatg acaattggtc cagccttgga 1020

atgcctgccc atcccagcat gctccccgtg agccacaatg ccagcccacc taccagctcc 1080

agtcagtacc ccagcctgtg gtctgtgagc aacggcgccg tcaccccggg ctcccaggca 1140

gcagccgtgt ccaacgggct gggggcccag ttcttccggg gctcccccgc gcactacaca 1200

cccctcaccc atccggtctc ggcgccctct tcctcgggat ccccactgta cgaaggggcg 1260

gccgcggcca cagacatcgt ggacagccag tacgacgccg cagcccaagg ccgcctcata 1320

gcctcatgga cacctgtgtc gccaccttcc atgtga 1356

<210> 38

<211> 452

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Слитый белок, содержащий белок Brachyury (L254V), кодируемый

SEQ ID NO:36

<400> 38

Met Asn Met Ser Lys Lys Gln Val Lys Thr Gln Ser Lys Cys Asn Asn

1 5 10 15

Ile Met Ser Ser Pro Gly Thr Glu Ser Ala Gly Lys Ser Leu Gln Tyr

20 25 30

Arg Val Asp His Leu Leu Ser Ala Val Glu Asn Glu Leu Gln Ala Gly

35 40 45

Ser Glu Lys Gly Asp Pro Thr Glu Arg Glu Leu Arg Val Gly Leu Glu

50 55 60

Glu Ser Glu Leu Trp Leu Arg Phe Lys Glu Leu Thr Asn Glu Met Ile

65 70 75 80

Val Thr Lys Asn Gly Arg Arg Met Phe Pro Val Leu Lys Val Asn Val

85 90 95

Ser Gly Leu Asp Pro Asn Ala Met Tyr Ser Phe Leu Leu Asp Phe Val

100 105 110

Ala Ala Asp Asn His Arg Trp Lys Tyr Val Asn Gly Glu Trp Val Pro

115 120 125

Gly Gly Lys Pro Glu Pro Gln Ala Pro Ser Cys Val Tyr Ile His Pro

130 135 140

Asp Ser Pro Asn Phe Gly Ala His Trp Met Lys Ala Pro Val Ser Phe

145 150 155 160

Ser Lys Val Lys Leu Thr Asn Lys Leu Asn Gly Gly Gly Gln Ile Met

165 170 175

Leu Asn Ser Leu His Lys Tyr Glu Pro Arg Ile His Ile Val Arg Val

180 185 190

Gly Gly Pro Gln Arg Met Ile Thr Ser His Cys Phe Pro Glu Thr Gln

195 200 205

Phe Ile Ala Val Thr Ala Tyr Gln Asn Glu Glu Ile Thr Ala Leu Lys

210 215 220

Ile Lys Tyr Asn Pro Phe Ala Lys Ala Phe Leu Asp Ala Lys Glu Arg

225 230 235 240

Ser Asp His Lys Glu Met Met Glu Glu Pro Gly Asp Ser Gln Gln Pro

245 250 255

Gly Tyr Ser Gln Trp Gly Trp Leu Leu Pro Gly Thr Ser Thr Val Cys

260 265 270

Pro Pro Ala Asn Pro His Pro Gln Phe Gly Gly Ala Leu Ser Leu Pro

275 280 285

Ser Thr His Ser Cys Asp Arg Tyr Pro Thr Leu Arg Ser His Arg Ser

290 295 300

Ser Pro Tyr Pro Ser Pro Tyr Ala His Arg Asn Asn Ser Pro Thr Tyr

305 310 315 320

Ser Asp Asn Ser Pro Ala Cys Leu Ser Met Leu Gln Ser His Asp Asn

325 330 335

Trp Ser Ser Leu Gly Met Pro Ala His Pro Ser Met Leu Pro Val Ser

340 345 350

His Asn Ala Ser Pro Pro Thr Ser Ser Ser Gln Tyr Pro Ser Leu Trp

355 360 365

Ser Val Ser Asn Gly Ala Val Thr Pro Gly Ser Gln Ala Ala Ala Val

370 375 380

Ser Asn Gly Leu Gly Ala Gln Phe Phe Arg Gly Ser Pro Ala His Tyr

385 390 395 400

Thr Pro Leu Thr His Pro Val Ser Ala Pro Ser Ser Ser Gly Ser Pro

405 410 415

Leu Tyr Glu Gly Ala Ala Ala Ala Thr Asp Ile Val Asp Ser Gln Tyr

420 425 430

Asp Ala Ala Ala Gln Gly Arg Leu Ile Ala Ser Trp Thr Pro Val Ser

435 440 445

Pro Pro Ser Met

450

<210> 39

<211> 451

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Слитый белок, содержащий белок Brachyury (L254V), кодируемый

SEQ ID NO:37

<400> 39

Met Asn Met Ser Lys Lys Gln Val Lys Thr Gln Ser Lys Cys Asn Asn

1 5 10 15

Ile Ser Ser Pro Gly Thr Glu Ser Ala Gly Lys Ser Leu Gln Tyr Arg

20 25 30

Val Asp His Leu Leu Ser Ala Val Glu Asn Glu Leu Gln Ala Gly Ser

35 40 45

Glu Lys Gly Asp Pro Thr Glu Arg Glu Leu Arg Val Gly Leu Glu Glu

50 55 60

Ser Glu Leu Trp Leu Arg Phe Lys Glu Leu Thr Asn Glu Met Ile Val

65 70 75 80

Thr Lys Asn Gly Arg Arg Met Phe Pro Val Leu Lys Val Asn Val Ser

85 90 95

Gly Leu Asp Pro Asn Ala Met Tyr Ser Phe Leu Leu Asp Phe Val Ala

100 105 110

Ala Asp Asn His Arg Trp Lys Tyr Val Asn Gly Glu Trp Val Pro Gly

115 120 125

Gly Lys Pro Glu Pro Gln Ala Pro Ser Cys Val Tyr Ile His Pro Asp

130 135 140

Ser Pro Asn Phe Gly Ala His Trp Met Lys Ala Pro Val Ser Phe Ser

145 150 155 160

Lys Val Lys Leu Thr Asn Lys Leu Asn Gly Gly Gly Gln Ile Met Leu

165 170 175

Asn Ser Leu His Lys Tyr Glu Pro Arg Ile His Ile Val Arg Val Gly

180 185 190

Gly Pro Gln Arg Met Ile Thr Ser His Cys Phe Pro Glu Thr Gln Phe

195 200 205

Ile Ala Val Thr Ala Tyr Gln Asn Glu Glu Ile Thr Ala Leu Lys Ile

210 215 220

Lys Tyr Asn Pro Phe Ala Lys Ala Phe Leu Asp Ala Lys Glu Arg Ser

225 230 235 240

Asp His Lys Glu Met Met Glu Glu Pro Gly Asp Ser Gln Gln Pro Gly

245 250 255

Tyr Ser Gln Trp Gly Trp Leu Leu Pro Gly Thr Ser Thr Val Cys Pro

260 265 270

Pro Ala Asn Pro His Pro Gln Phe Gly Gly Ala Leu Ser Leu Pro Ser

275 280 285

Thr His Ser Cys Asp Arg Tyr Pro Thr Leu Arg Ser His Arg Ser Ser

290 295 300

Pro Tyr Pro Ser Pro Tyr Ala His Arg Asn Asn Ser Pro Thr Tyr Ser

305 310 315 320

Asp Asn Ser Pro Ala Cys Leu Ser Met Leu Gln Ser His Asp Asn Trp

325 330 335

Ser Ser Leu Gly Met Pro Ala His Pro Ser Met Leu Pro Val Ser His

340 345 350

Asn Ala Ser Pro Pro Thr Ser Ser Ser Gln Tyr Pro Ser Leu Trp Ser

355 360 365

Val Ser Asn Gly Ala Val Thr Pro Gly Ser Gln Ala Ala Ala Val Ser

370 375 380

Asn Gly Leu Gly Ala Gln Phe Phe Arg Gly Ser Pro Ala His Tyr Thr

385 390 395 400

Pro Leu Thr His Pro Val Ser Ala Pro Ser Ser Ser Gly Ser Pro Leu

405 410 415

Tyr Glu Gly Ala Ala Ala Ala Thr Asp Ile Val Asp Ser Gln Tyr Asp

420 425 430

Ala Ala Ala Gln Gly Arg Leu Ile Ala Ser Trp Thr Pro Val Ser Pro

435 440 445

Pro Ser Met

450

<210> 40

<211> 1353

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Кодирующая последовательность, кодирующая слитый белок, содержащий белок Brachyury (L254V), плюс добавление 42 нуклеотидов из гена FPV 088 и atc

<400> 40

atgagtaaga aacaagtaaa aactcaaagt aaatgtaata atatcatgag ctcccctggc 60

accgagagcg cgggaaagag cctgcagtac cgagtggacc acctgctgag cgccgtggag 120

aatgagctgc aggcgggcag cgagaagggc gaccccacag agcgcgaact gcgcgtgggc 180

ctggaggaga gcgagctgtg gctgcgcttc aaggagctca ccaatgagat gatcgtgacc 240

aagaacggca ggaggatgtt tccggtgctg aaggtgaacg tgtctggcct ggaccccaac 300

gccatgtact ccttcctgct ggacttcgtg gcggcggaca accaccgctg gaagtacgtg 360

aacggggaat gggtgccggg gggcaagccg gagccgcagg cgcccagctg cgtctacatc 420

caccccgact cgcccaactt cggggcccac tggatgaagg ctcccgtctc cttcagcaaa 480

gtcaagctca ccaacaagct caacggaggg ggccagatca tgctgaactc cttgcataag 540

tatgagcctc gaatccacat agtgagagtt gggggtccac agcgcatgat caccagccac 600

tgcttccctg agacccagtt catagcggtg actgcttatc agaacgagga gatcacagct 660

cttaaaatta agtacaatcc atttgcaaag gctttccttg atgcaaagga aagaagtgat 720

cacaaagaga tgatggagga acccggagac agccagcaac ctgggtactc ccaatggggg 780

tggcttcttc ctggaaccag caccgtttgt ccacctgcaa atcctcatcc tcagtttgga 840

ggtgccctct ccctcccctc cacgcacagc tgtgacaggt acccaaccct gaggagccac 900

cggtcctcac cctaccccag cccctatgct catcggaaca attctccaac ctattctgac 960

aactcacctg catgtttatc catgctgcaa tcccatgaca attggtccag ccttggaatg 1020

cctgcccatc ccagcatgct ccccgtgagc cacaatgcca gcccacctac cagctccagt 1080

cagtacccca gcctgtggtc tgtgagcaac ggcgccgtca ccccgggctc ccaggcagca 1140

gccgtgtcca acgggctggg ggcccagttc ttccggggct cccccgcgca ctacacaccc 1200

ctcacccatc cggtctcggc gccctcttcc tcgggatccc cactgtacga aggggcggcc 1260

gcggccacag acatcgtgga cagccagtac gacgccgcag cccaaggccg cctcatagcc 1320

tcatggacac ctgtgtcgcc accttccatg tga 1353

<210> 41

<211> 1350

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Кодирующая последовательность, кодирующая слитый белок, содержащий белок Brachyury (L254V), плюс добавление 42 нуклеотидов из гена FPV 088 и atc, без инициирующего кодона atg Brachyury

<400> 41

atgagtaaga aacaagtaaa aactcaaagt aaatgtaata atatcagctc ccctggcacc 60

gagagcgcgg gaaagagcct gcagtaccga gtggaccacc tgctgagcgc cgtggagaat 120

gagctgcagg cgggcagcga gaagggcgac cccacagagc gcgaactgcg cgtgggcctg 180

gaggagagcg agctgtggct gcgcttcaag gagctcacca atgagatgat cgtgaccaag 240

aacggcagga ggatgtttcc ggtgctgaag gtgaacgtgt ctggcctgga ccccaacgcc 300

atgtactcct tcctgctgga cttcgtggcg gcggacaacc accgctggaa gtacgtgaac 360

ggggaatggg tgccgggggg caagccggag ccgcaggcgc ccagctgcgt ctacatccac 420

cccgactcgc ccaacttcgg ggcccactgg atgaaggctc ccgtctcctt cagcaaagtc 480

aagctcacca acaagctcaa cggagggggc cagatcatgc tgaactcctt gcataagtat 540

gagcctcgaa tccacatagt gagagttggg ggtccacagc gcatgatcac cagccactgc 600

ttccctgaga cccagttcat agcggtgact gcttatcaga acgaggagat cacagctctt 660

aaaattaagt acaatccatt tgcaaaggct ttccttgatg caaaggaaag aagtgatcac 720

aaagagatga tggaggaacc cggagacagc cagcaacctg ggtactccca atgggggtgg 780

cttcttcctg gaaccagcac cgtttgtcca cctgcaaatc ctcatcctca gtttggaggt 840

gccctctccc tcccctccac gcacagctgt gacaggtacc caaccctgag gagccaccgg 900

tcctcaccct accccagccc ctatgctcat cggaacaatt ctccaaccta ttctgacaac 960

tcacctgcat gtttatccat gctgcaatcc catgacaatt ggtccagcct tggaatgcct 1020

gcccatccca gcatgctccc cgtgagccac aatgccagcc cacctaccag ctccagtcag 1080

taccccagcc tgtggtctgt gagcaacggc gccgtcaccc cgggctccca ggcagcagcc 1140

gtgtccaacg ggctgggggc ccagttcttc cggggctccc ccgcgcacta cacacccctc 1200

acccatccgg tctcggcgcc ctcttcctcg ggatccccac tgtacgaagg ggcggccgcg 1260

gccacagaca tcgtggacag ccagtacgac gccgcagccc aaggccgcct catagcctca 1320

tggacacctg tgtcgccacc ttccatgtga 1350

<210> 42

<211> 450

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Слитый белок, содержащий белок Brachyury (L254V), кодируемый

SEQ ID NO:40

<400> 42

Met Ser Lys Lys Gln Val Lys Thr Gln Ser Lys Cys Asn Asn Ile Met

1 5 10 15

Ser Ser Pro Gly Thr Glu Ser Ala Gly Lys Ser Leu Gln Tyr Arg Val

20 25 30

Asp His Leu Leu Ser Ala Val Glu Asn Glu Leu Gln Ala Gly Ser Glu

35 40 45

Lys Gly Asp Pro Thr Glu Arg Glu Leu Arg Val Gly Leu Glu Glu Ser

50 55 60

Glu Leu Trp Leu Arg Phe Lys Glu Leu Thr Asn Glu Met Ile Val Thr

65 70 75 80

Lys Asn Gly Arg Arg Met Phe Pro Val Leu Lys Val Asn Val Ser Gly

85 90 95

Leu Asp Pro Asn Ala Met Tyr Ser Phe Leu Leu Asp Phe Val Ala Ala

100 105 110

Asp Asn His Arg Trp Lys Tyr Val Asn Gly Glu Trp Val Pro Gly Gly

115 120 125

Lys Pro Glu Pro Gln Ala Pro Ser Cys Val Tyr Ile His Pro Asp Ser

130 135 140

Pro Asn Phe Gly Ala His Trp Met Lys Ala Pro Val Ser Phe Ser Lys

145 150 155 160

Val Lys Leu Thr Asn Lys Leu Asn Gly Gly Gly Gln Ile Met Leu Asn

165 170 175

Ser Leu His Lys Tyr Glu Pro Arg Ile His Ile Val Arg Val Gly Gly

180 185 190

Pro Gln Arg Met Ile Thr Ser His Cys Phe Pro Glu Thr Gln Phe Ile

195 200 205

Ala Val Thr Ala Tyr Gln Asn Glu Glu Ile Thr Ala Leu Lys Ile Lys

210 215 220

Tyr Asn Pro Phe Ala Lys Ala Phe Leu Asp Ala Lys Glu Arg Ser Asp

225 230 235 240

His Lys Glu Met Met Glu Glu Pro Gly Asp Ser Gln Gln Pro Gly Tyr

245 250 255

Ser Gln Trp Gly Trp Leu Leu Pro Gly Thr Ser Thr Val Cys Pro Pro

260 265 270

Ala Asn Pro His Pro Gln Phe Gly Gly Ala Leu Ser Leu Pro Ser Thr

275 280 285

His Ser Cys Asp Arg Tyr Pro Thr Leu Arg Ser His Arg Ser Ser Pro

290 295 300

Tyr Pro Ser Pro Tyr Ala His Arg Asn Asn Ser Pro Thr Tyr Ser Asp

305 310 315 320

Asn Ser Pro Ala Cys Leu Ser Met Leu Gln Ser His Asp Asn Trp Ser

325 330 335

Ser Leu Gly Met Pro Ala His Pro Ser Met Leu Pro Val Ser His Asn

340 345 350

Ala Ser Pro Pro Thr Ser Ser Ser Gln Tyr Pro Ser Leu Trp Ser Val

355 360 365

Ser Asn Gly Ala Val Thr Pro Gly Ser Gln Ala Ala Ala Val Ser Asn

370 375 380

Gly Leu Gly Ala Gln Phe Phe Arg Gly Ser Pro Ala His Tyr Thr Pro

385 390 395 400

Leu Thr His Pro Val Ser Ala Pro Ser Ser Ser Gly Ser Pro Leu Tyr

405 410 415

Glu Gly Ala Ala Ala Ala Thr Asp Ile Val Asp Ser Gln Tyr Asp Ala

420 425 430

Ala Ala Gln Gly Arg Leu Ile Ala Ser Trp Thr Pro Val Ser Pro Pro

435 440 445

Ser Met

450

<210> 43

<211> 449

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Слитый белок, содержащий белок Brachyury (L254V), кодируемый

SEQ ID NO:41

<400> 43

Met Ser Lys Lys Gln Val Lys Thr Gln Ser Lys Cys Asn Asn Ile Ser

1 5 10 15

Ser Pro Gly Thr Glu Ser Ala Gly Lys Ser Leu Gln Tyr Arg Val Asp

20 25 30

His Leu Leu Ser Ala Val Glu Asn Glu Leu Gln Ala Gly Ser Glu Lys

35 40 45

Gly Asp Pro Thr Glu Arg Glu Leu Arg Val Gly Leu Glu Glu Ser Glu

50 55 60

Leu Trp Leu Arg Phe Lys Glu Leu Thr Asn Glu Met Ile Val Thr Lys

65 70 75 80

Asn Gly Arg Arg Met Phe Pro Val Leu Lys Val Asn Val Ser Gly Leu

85 90 95

Asp Pro Asn Ala Met Tyr Ser Phe Leu Leu Asp Phe Val Ala Ala Asp

100 105 110

Asn His Arg Trp Lys Tyr Val Asn Gly Glu Trp Val Pro Gly Gly Lys

115 120 125

Pro Glu Pro Gln Ala Pro Ser Cys Val Tyr Ile His Pro Asp Ser Pro

130 135 140

Asn Phe Gly Ala His Trp Met Lys Ala Pro Val Ser Phe Ser Lys Val

145 150 155 160

Lys Leu Thr Asn Lys Leu Asn Gly Gly Gly Gln Ile Met Leu Asn Ser

165 170 175

Leu His Lys Tyr Glu Pro Arg Ile His Ile Val Arg Val Gly Gly Pro

180 185 190

Gln Arg Met Ile Thr Ser His Cys Phe Pro Glu Thr Gln Phe Ile Ala

195 200 205

Val Thr Ala Tyr Gln Asn Glu Glu Ile Thr Ala Leu Lys Ile Lys Tyr

210 215 220

Asn Pro Phe Ala Lys Ala Phe Leu Asp Ala Lys Glu Arg Ser Asp His

225 230 235 240

Lys Glu Met Met Glu Glu Pro Gly Asp Ser Gln Gln Pro Gly Tyr Ser

245 250 255

Gln Trp Gly Trp Leu Leu Pro Gly Thr Ser Thr Val Cys Pro Pro Ala

260 265 270

Asn Pro His Pro Gln Phe Gly Gly Ala Leu Ser Leu Pro Ser Thr His

275 280 285

Ser Cys Asp Arg Tyr Pro Thr Leu Arg Ser His Arg Ser Ser Pro Tyr

290 295 300

Pro Ser Pro Tyr Ala His Arg Asn Asn Ser Pro Thr Tyr Ser Asp Asn

305 310 315 320

Ser Pro Ala Cys Leu Ser Met Leu Gln Ser His Asp Asn Trp Ser Ser

325 330 335

Leu Gly Met Pro Ala His Pro Ser Met Leu Pro Val Ser His Asn Ala

340 345 350

Ser Pro Pro Thr Ser Ser Ser Gln Tyr Pro Ser Leu Trp Ser Val Ser

355 360 365

Asn Gly Ala Val Thr Pro Gly Ser Gln Ala Ala Ala Val Ser Asn Gly

370 375 380

Leu Gly Ala Gln Phe Phe Arg Gly Ser Pro Ala His Tyr Thr Pro Leu

385 390 395 400

Thr His Pro Val Ser Ala Pro Ser Ser Ser Gly Ser Pro Leu Tyr Glu

405 410 415

Gly Ala Ala Ala Ala Thr Asp Ile Val Asp Ser Gln Tyr Asp Ala Ala

420 425 430

Ala Gln Gly Arg Leu Ile Ala Ser Trp Thr Pro Val Ser Pro Pro Ser

435 440 445

Met

<210> 44

<211> 1323

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Кодирующая последовательность, кодирующая слитый белок, содержащий изоформу 1 белка Brachyury, плюс добавление 15 нуклеотидов из гена FPV 088

<400> 44

atgaaaaata acttgatgag ctcccctggc accgagagcg cgggaaagag cctgcagtac 60

cgagtggacc acctgctgag cgccgtggag aatgagctgc aggcgggcag cgagaagggc 120

gaccccacag agcgcgaact gcgcgtgggc ctggaggaga gcgagctgtg gctgcgcttc 180

aaggagctca ccaatgagat gatcgtgacc aagaacggca ggaggatgtt tccggtgctg 240

aaggtgaacg tgtctggcct ggaccccaac gccatgtact ccttcctgct ggacttcgtg 300

gcggcggaca accaccgctg gaagtacgtg aacggggaat gggtgccggg gggcaagccg 360

gagccgcagg cgcccagctg cgtctacatc caccccgact cgcccaactt cggggcccac 420

tggatgaagg ctcccgtctc cttcagcaaa gtcaagctca ccaacaagct caacggaggg 480

ggccagatca tgctgaactc cttgcataag tatgagcctc gaatccacat agtgagagtt 540

gggggtccac agcgcatgat caccagccac tgcttccctg agacccagtt catagcggtg 600

actgcttatc agaacgagga gatcacagct cttaaaatta agtacaatcc atttgcaaaa 660

gctttccttg atgcaaagga aagaagtgat cacaaagaga tgatggagga acccggagac 720

agccagcaac ctgggtactc ccaatggggg tggcttcttc ctggaaccag caccgtttgt 780

ccacctgcaa atcctcatcc tcagtttgga ggtgccctct ccctcccctc cacgcacagc 840

tgtgacaggt acccaaccct gaggagccac cggtcctcac cctaccccag cccctatgct 900

catcggaaca attctccaac ctattctgac aactcacctg catgtttatc catgctgcaa 960

tcccatgaca attggtccag ccttggaatg cctgcccatc ccagcatgct ccccgtgagc 1020

cacaatgcca gcccacctac cagctccagt cagtacccca gcctgtggtc tgtgagcaac 1080

ggcgccgtca ccccgggctc ccaggcagca gccgtgtcca acgggctggg ggcccagttc 1140

ttccggggct cccccgcgca ctacacaccc ctcacccatc cggtctcggc gccctcttcc 1200

tcgggatccc cactgtacga aggggcggcc gcggccacag acatcgtgga cagccagtac 1260

gacgccgcag cccaaggccg cctcatagcc tcatggacac ctgtgtcgcc accttccatg 1320

tga 1323

<210> 45

<211> 1320

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Кодирующая последовательность, кодирующая слитый белок, содержащий изоформу 1 белка Brachyury, плюс добавление 15 нуклеотидов из гена FPV 088 без инициирующего кодона atg Brachyury

<400> 45

atgaaaaata acttgagctc ccctggcacc gagagcgcgg gaaagagcct gcagtaccga 60

gtggaccacc tgctgagcgc cgtggagaat gagctgcagg cgggcagcga gaagggcgac 120

cccacagagc gcgaactgcg cgtgggcctg gaggagagcg agctgtggct gcgcttcaag 180

gagctcacca atgagatgat cgtgaccaag aacggcagga ggatgtttcc ggtgctgaag 240

gtgaacgtgt ctggcctgga ccccaacgcc atgtactcct tcctgctgga cttcgtggcg 300

gcggacaacc accgctggaa gtacgtgaac ggggaatggg tgccgggggg caagccggag 360

ccgcaggcgc ccagctgcgt ctacatccac cccgactcgc ccaacttcgg ggcccactgg 420

atgaaggctc ccgtctcctt cagcaaagtc aagctcacca acaagctcaa cggagggggc 480

cagatcatgc tgaactcctt gcataagtat gagcctcgaa tccacatagt gagagttggg 540

ggtccacagc gcatgatcac cagccactgc ttccctgaga cccagttcat agcggtgact 600

gcttatcaga acgaggagat cacagctctt aaaattaagt acaatccatt tgcaaaagct 660

ttccttgatg caaaggaaag aagtgatcac aaagagatga tggaggaacc cggagacagc 720

cagcaacctg ggtactccca atgggggtgg cttcttcctg gaaccagcac cgtttgtcca 780

cctgcaaatc ctcatcctca gtttggaggt gccctctccc tcccctccac gcacagctgt 840

gacaggtacc caaccctgag gagccaccgg tcctcaccct accccagccc ctatgctcat 900

cggaacaatt ctccaaccta ttctgacaac tcacctgcat gtttatccat gctgcaatcc 960

catgacaatt ggtccagcct tggaatgcct gcccatccca gcatgctccc cgtgagccac 1020

aatgccagcc cacctaccag ctccagtcag taccccagcc tgtggtctgt gagcaacggc 1080

gccgtcaccc cgggctccca ggcagcagcc gtgtccaacg ggctgggggc ccagttcttc 1140

cggggctccc ccgcgcacta cacacccctc acccatccgg tctcggcgcc ctcttcctcg 1200

ggatccccac tgtacgaagg ggcggccgcg gccacagaca tcgtggacag ccagtacgac 1260

gccgcagccc aaggccgcct catagcctca tggacacctg tgtcgccacc ttccatgtga 1320

<210> 46

<211> 440

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Слитый белок, содержащий изоформу 1 белка Brachyury, кодируемый

SEQ ID NO:44

<400> 46

Met Lys Asn Asn Leu Met Ser Ser Pro Gly Thr Glu Ser Ala Gly Lys

1 5 10 15

Ser Leu Gln Tyr Arg Val Asp His Leu Leu Ser Ala Val Glu Asn Glu

20 25 30

Leu Gln Ala Gly Ser Glu Lys Gly Asp Pro Thr Glu Arg Glu Leu Arg

35 40 45

Val Gly Leu Glu Glu Ser Glu Leu Trp Leu Arg Phe Lys Glu Leu Thr

50 55 60

Asn Glu Met Ile Val Thr Lys Asn Gly Arg Arg Met Phe Pro Val Leu

65 70 75 80

Lys Val Asn Val Ser Gly Leu Asp Pro Asn Ala Met Tyr Ser Phe Leu

85 90 95

Leu Asp Phe Val Ala Ala Asp Asn His Arg Trp Lys Tyr Val Asn Gly

100 105 110

Glu Trp Val Pro Gly Gly Lys Pro Glu Pro Gln Ala Pro Ser Cys Val

115 120 125

Tyr Ile His Pro Asp Ser Pro Asn Phe Gly Ala His Trp Met Lys Ala

130 135 140

Pro Val Ser Phe Ser Lys Val Lys Leu Thr Asn Lys Leu Asn Gly Gly

145 150 155 160

Gly Gln Ile Met Leu Asn Ser Leu His Lys Tyr Glu Pro Arg Ile His

165 170 175

Ile Val Arg Val Gly Gly Pro Gln Arg Met Ile Thr Ser His Cys Phe

180 185 190

Pro Glu Thr Gln Phe Ile Ala Val Thr Ala Tyr Gln Asn Glu Glu Ile

195 200 205

Thr Ala Leu Lys Ile Lys Tyr Asn Pro Phe Ala Lys Ala Phe Leu Asp

210 215 220

Ala Lys Glu Arg Ser Asp His Lys Glu Met Met Glu Glu Pro Gly Asp

225 230 235 240

Ser Gln Gln Pro Gly Tyr Ser Gln Trp Gly Trp Leu Leu Pro Gly Thr

245 250 255

Ser Thr Leu Cys Pro Pro Ala Asn Pro His Pro Gln Phe Gly Gly Ala

260 265 270

Leu Ser Leu Pro Ser Thr His Ser Cys Asp Arg Tyr Pro Thr Leu Arg

275 280 285

Ser His Arg Ser Ser Pro Tyr Pro Ser Pro Tyr Ala His Arg Asn Asn

290 295 300

Ser Pro Thr Tyr Ser Asp Asn Ser Pro Ala Cys Leu Ser Met Leu Gln

305 310 315 320

Ser His Asp Asn Trp Ser Ser Leu Gly Met Pro Ala His Pro Ser Met

325 330 335

Leu Pro Val Ser His Asn Ala Ser Pro Pro Thr Ser Ser Ser Gln Tyr

340 345 350

Pro Ser Leu Trp Ser Val Ser Asn Gly Ala Val Thr Pro Gly Ser Gln

355 360 365

Ala Ala Ala Val Ser Asn Gly Leu Gly Ala Gln Phe Phe Arg Gly Ser

370 375 380

Pro Ala His Tyr Thr Pro Leu Thr His Pro Val Ser Ala Pro Ser Ser

385 390 395 400

Ser Gly Ser Pro Leu Tyr Glu Gly Ala Ala Ala Ala Thr Asp Ile Val

405 410 415

Asp Ser Gln Tyr Asp Ala Ala Ala Gln Gly Arg Leu Ile Ala Ser Trp

420 425 430

Thr Pro Val Ser Pro Pro Ser Met

435 440

<210> 47

<211> 439

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Слитый белок, содержащий изоформу 1 белка Brachyury, кодируемый

SEQ ID NO:45

<400> 47

Met Lys Asn Asn Leu Ser Ser Pro Gly Thr Glu Ser Ala Gly Lys Ser

1 5 10 15

Leu Gln Tyr Arg Val Asp His Leu Leu Ser Ala Val Glu Asn Glu Leu

20 25 30

Gln Ala Gly Ser Glu Lys Gly Asp Pro Thr Glu Arg Glu Leu Arg Val

35 40 45

Gly Leu Glu Glu Ser Glu Leu Trp Leu Arg Phe Lys Glu Leu Thr Asn

50 55 60

Glu Met Ile Val Thr Lys Asn Gly Arg Arg Met Phe Pro Val Leu Lys

65 70 75 80

Val Asn Val Ser Gly Leu Asp Pro Asn Ala Met Tyr Ser Phe Leu Leu

85 90 95

Asp Phe Val Ala Ala Asp Asn His Arg Trp Lys Tyr Val Asn Gly Glu

100 105 110

Trp Val Pro Gly Gly Lys Pro Glu Pro Gln Ala Pro Ser Cys Val Tyr

115 120 125

Ile His Pro Asp Ser Pro Asn Phe Gly Ala His Trp Met Lys Ala Pro

130 135 140

Val Ser Phe Ser Lys Val Lys Leu Thr Asn Lys Leu Asn Gly Gly Gly

145 150 155 160

Gln Ile Met Leu Asn Ser Leu His Lys Tyr Glu Pro Arg Ile His Ile

165 170 175

Val Arg Val Gly Gly Pro Gln Arg Met Ile Thr Ser His Cys Phe Pro

180 185 190

Glu Thr Gln Phe Ile Ala Val Thr Ala Tyr Gln Asn Glu Glu Ile Thr

195 200 205

Ala Leu Lys Ile Lys Tyr Asn Pro Phe Ala Lys Ala Phe Leu Asp Ala

210 215 220

Lys Glu Arg Ser Asp His Lys Glu Met Met Glu Glu Pro Gly Asp Ser

225 230 235 240

Gln Gln Pro Gly Tyr Ser Gln Trp Gly Trp Leu Leu Pro Gly Thr Ser

245 250 255

Thr Leu Cys Pro Pro Ala Asn Pro His Pro Gln Phe Gly Gly Ala Leu

260 265 270

Ser Leu Pro Ser Thr His Ser Cys Asp Arg Tyr Pro Thr Leu Arg Ser

275 280 285

His Arg Ser Ser Pro Tyr Pro Ser Pro Tyr Ala His Arg Asn Asn Ser

290 295 300

Pro Thr Tyr Ser Asp Asn Ser Pro Ala Cys Leu Ser Met Leu Gln Ser

305 310 315 320

His Asp Asn Trp Ser Ser Leu Gly Met Pro Ala His Pro Ser Met Leu

325 330 335

Pro Val Ser His Asn Ala Ser Pro Pro Thr Ser Ser Ser Gln Tyr Pro

340 345 350

Ser Leu Trp Ser Val Ser Asn Gly Ala Val Thr Pro Gly Ser Gln Ala

355 360 365

Ala Ala Val Ser Asn Gly Leu Gly Ala Gln Phe Phe Arg Gly Ser Pro

370 375 380

Ala His Tyr Thr Pro Leu Thr His Pro Val Ser Ala Pro Ser Ser Ser

385 390 395 400

Gly Ser Pro Leu Tyr Glu Gly Ala Ala Ala Ala Thr Asp Ile Val Asp

405 410 415

Ser Gln Tyr Asp Ala Ala Ala Gln Gly Arg Leu Ile Ala Ser Trp Thr

420 425 430

Pro Val Ser Pro Pro Ser Met

435

<210> 48

<211> 1353

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Кодирующая последовательность, кодирующая слитый белок, содержащий изоформу 1 белка Brachyury, плюс добавление 45 нуклеотидов из гена FPV   088

<400> 48

atgaaaaata acttgtatga agaaaaaatg aacatgagta agaaaatgag ctcccctggc 60

accgagagcg cgggaaagag cctgcagtac cgagtggacc acctgctgag cgccgtggag 120

aatgagctgc aggcgggcag cgagaagggc gaccccacag agcgcgaact gcgcgtgggc 180

ctggaggaga gcgagctgtg gctgcgcttc aaggagctca ccaatgagat gatcgtgacc 240

aagaacggca ggaggatgtt tccggtgctg aaggtgaacg tgtctggcct ggaccccaac 300

gccatgtact ccttcctgct ggacttcgtg gcggcggaca accaccgctg gaagtacgtg 360

aacggggaat gggtgccggg gggcaagccg gagccgcagg cgcccagctg cgtctacatc 420

caccccgact cgcccaactt cggggcccac tggatgaagg ctcccgtctc cttcagcaaa 480

gtcaagctca ccaacaagct caacggaggg ggccagatca tgctgaactc cttgcataag 540

tatgagcctc gaatccacat agtgagagtt gggggtccac agcgcatgat caccagccac 600

tgcttccctg agacccagtt catagcggtg actgcttatc agaacgagga gatcacagct 660

cttaaaatta agtacaatcc atttgcaaag gctttccttg atgcaaagga aagaagtgat 720

cacaaagaga tgatggagga acccggagac agccagcaac ctgggtactc ccaatggggg 780

tggcttcttc ctggaaccag caccgtttgt ccacctgcaa atcctcatcc tcagtttgga 840

ggtgccctct ccctcccctc cacgcacagc tgtgacaggt acccaaccct gaggagccac 900

cggtcctcac cctaccccag cccctatgct catcggaaca attctccaac ctattctgac 960

aactcacctg catgtttatc catgctgcaa tcccatgaca attggtccag ccttggaatg 1020

cctgcccatc ccagcatgct ccccgtgagc cacaatgcca gcccacctac cagctccagt 1080

cagtacccca gcctgtggtc tgtgagcaac ggcgccgtca ccccgggctc ccaggcagca 1140

gccgtgtcca acgggctggg ggcccagttc ttccggggct cccccgcgca ctacacaccc 1200

ctcacccatc cggtctcggc gccctcttcc tcgggatccc cactgtacga aggggcggcc 1260

gcggccacag acatcgtgga cagccagtac gacgccgcag cccaaggccg cctcatagcc 1320

tcatggacac ctgtgtcgcc accttccatg tga 1353

<210> 49

<211> 1350

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Кодирующая последовательность, кодирующая слитый белок, содержащий изоформу 1 белка Brachyury, плюс добавление 45 нуклеотидов из гена FPV 088 без atg Brachyury

<400> 49

atgaaaaata acttgtatga agaaaaaatg aacatgagta agaaaagctc ccctggcacc 60

gagagcgcgg gaaagagcct gcagtaccga gtggaccacc tgctgagcgc cgtggagaat 120

gagctgcagg cgggcagcga gaagggcgac cccacagagc gcgaactgcg cgtgggcctg 180

gaggagagcg agctgtggct gcgcttcaag gagctcacca atgagatgat cgtgaccaag 240

aacggcagga ggatgtttcc ggtgctgaag gtgaacgtgt ctggcctgga ccccaacgcc 300

atgtactcct tcctgctgga cttcgtggcg gcggacaacc accgctggaa gtacgtgaac 360

ggggaatggg tgccgggggg caagccggag ccgcaggcgc ccagctgcgt ctacatccac 420

cccgactcgc ccaacttcgg ggcccactgg atgaaggctc ccgtctcctt cagcaaagtc 480

aagctcacca acaagctcaa cggagggggc cagatcatgc tgaactcctt gcataagtat 540

gagcctcgaa tccacatagt gagagttggg ggtccacagc gcatgatcac cagccactgc 600

ttccctgaga cccagttcat agcggtgact gcttatcaga acgaggagat cacagctctt 660

aaaattaagt acaatccatt tgcaaaagct ttccttgatg caaaggaaag aagtgatcac 720

aaagagatga tggaggaacc cggagacagc cagcaacctg ggtactccca atgggggtgg 780

cttcttcctg gaaccagcac cgtttgtcca cctgcaaatc ctcatcctca gtttggaggt 840

gccctctccc tcccctccac gcacagctgt gacaggtacc caaccctgag gagccaccgg 900

tcctcaccct accccagccc ctatgctcat cggaacaatt ctccaaccta ttctgacaac 960

tcacctgcat gtttatccat gctgcaatcc catgacaatt ggtccagcct tggaatgcct 1020

gcccatccca gcatgctccc cgtgagccac aatgccagcc cacctaccag ctccagtcag 1080

taccccagcc tgtggtctgt gagcaacggc gccgtcaccc cgggctccca ggcagcagcc 1140

gtgtccaacg ggctgggggc ccagttcttc cggggctccc ccgcgcacta cacacccctc 1200

acccatccgg tctcggcgcc ctcttcctcg ggatccccac tgtacgaagg ggcggccgcg 1260

gccacagaca tcgtggacag ccagtacgac gccgcagccc aaggccgcct catagcctca 1320

tggacacctg tgtcgccacc ttccatgtga 1350

<210> 50

<211> 450

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Слитый белок, содержащий изоформу 1 белка Brachyury, кодируемый

SEQ ID NO:48

<400> 50

Met Lys Asn Asn Leu Tyr Glu Glu Lys Met Asn Met Ser Lys Lys Met

1 5 10 15

Ser Ser Pro Gly Thr Glu Ser Ala Gly Lys Ser Leu Gln Tyr Arg Val

20 25 30

Asp His Leu Leu Ser Ala Val Glu Asn Glu Leu Gln Ala Gly Ser Glu

35 40 45

Lys Gly Asp Pro Thr Glu Arg Glu Leu Arg Val Gly Leu Glu Glu Ser

50 55 60

Glu Leu Trp Leu Arg Phe Lys Glu Leu Thr Asn Glu Met Ile Val Thr

65 70 75 80

Lys Asn Gly Arg Arg Met Phe Pro Val Leu Lys Val Asn Val Ser Gly

85 90 95

Leu Asp Pro Asn Ala Met Tyr Ser Phe Leu Leu Asp Phe Val Ala Ala

100 105 110

Asp Asn His Arg Trp Lys Tyr Val Asn Gly Glu Trp Val Pro Gly Gly

115 120 125

Lys Pro Glu Pro Gln Ala Pro Ser Cys Val Tyr Ile His Pro Asp Ser

130 135 140

Pro Asn Phe Gly Ala His Trp Met Lys Ala Pro Val Ser Phe Ser Lys

145 150 155 160

Val Lys Leu Thr Asn Lys Leu Asn Gly Gly Gly Gln Ile Met Leu Asn

165 170 175

Ser Leu His Lys Tyr Glu Pro Arg Ile His Ile Val Arg Val Gly Gly

180 185 190

Pro Gln Arg Met Ile Thr Ser His Cys Phe Pro Glu Thr Gln Phe Ile

195 200 205

Ala Val Thr Ala Tyr Gln Asn Glu Glu Ile Thr Ala Leu Lys Ile Lys

210 215 220

Tyr Asn Pro Phe Ala Lys Ala Phe Leu Asp Ala Lys Glu Arg Ser Asp

225 230 235 240

His Lys Glu Met Met Glu Glu Pro Gly Asp Ser Gln Gln Pro Gly Tyr

245 250 255

Ser Gln Trp Gly Trp Leu Leu Pro Gly Thr Ser Thr Leu Cys Pro Pro

260 265 270

Ala Asn Pro His Pro Gln Phe Gly Gly Ala Leu Ser Leu Pro Ser Thr

275 280 285

His Ser Cys Asp Arg Tyr Pro Thr Leu Arg Ser His Arg Ser Ser Pro

290 295 300

Tyr Pro Ser Pro Tyr Ala His Arg Asn Asn Ser Pro Thr Tyr Ser Asp

305 310 315 320

Asn Ser Pro Ala Cys Leu Ser Met Leu Gln Ser His Asp Asn Trp Ser

325 330 335

Ser Leu Gly Met Pro Ala His Pro Ser Met Leu Pro Val Ser His Asn

340 345 350

Ala Ser Pro Pro Thr Ser Ser Ser Gln Tyr Pro Ser Leu Trp Ser Val

355 360 365

Ser Asn Gly Ala Val Thr Pro Gly Ser Gln Ala Ala Ala Val Ser Asn

370 375 380

Gly Leu Gly Ala Gln Phe Phe Arg Gly Ser Pro Ala His Tyr Thr Pro

385 390 395 400

Leu Thr His Pro Val Ser Ala Pro Ser Ser Ser Gly Ser Pro Leu Tyr

405 410 415

Glu Gly Ala Ala Ala Ala Thr Asp Ile Val Asp Ser Gln Tyr Asp Ala

420 425 430

Ala Ala Gln Gly Arg Leu Ile Ala Ser Trp Thr Pro Val Ser Pro Pro

435 440 445

Ser Met

450

<210> 51

<211> 449

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Слитый белок, содержащий изоформу 1 белка Brachyury, кодируемый

SEQ ID NO:49

<400> 51

Met Lys Asn Asn Leu Tyr Glu Glu Lys Met Asn Met Ser Lys Lys Ser

1 5 10 15

Ser Pro Gly Thr Glu Ser Ala Gly Lys Ser Leu Gln Tyr Arg Val Asp

20 25 30

His Leu Leu Ser Ala Val Glu Asn Glu Leu Gln Ala Gly Ser Glu Lys

35 40 45

Gly Asp Pro Thr Glu Arg Glu Leu Arg Val Gly Leu Glu Glu Ser Glu

50 55 60

Leu Trp Leu Arg Phe Lys Glu Leu Thr Asn Glu Met Ile Val Thr Lys

65 70 75 80

Asn Gly Arg Arg Met Phe Pro Val Leu Lys Val Asn Val Ser Gly Leu

85 90 95

Asp Pro Asn Ala Met Tyr Ser Phe Leu Leu Asp Phe Val Ala Ala Asp

100 105 110

Asn His Arg Trp Lys Tyr Val Asn Gly Glu Trp Val Pro Gly Gly Lys

115 120 125

Pro Glu Pro Gln Ala Pro Ser Cys Val Tyr Ile His Pro Asp Ser Pro

130 135 140

Asn Phe Gly Ala His Trp Met Lys Ala Pro Val Ser Phe Ser Lys Val

145 150 155 160

Lys Leu Thr Asn Lys Leu Asn Gly Gly Gly Gln Ile Met Leu Asn Ser

165 170 175

Leu His Lys Tyr Glu Pro Arg Ile His Ile Val Arg Val Gly Gly Pro

180 185 190

Gln Arg Met Ile Thr Ser His Cys Phe Pro Glu Thr Gln Phe Ile Ala

195 200 205

Val Thr Ala Tyr Gln Asn Glu Glu Ile Thr Ala Leu Lys Ile Lys Tyr

210 215 220

Asn Pro Phe Ala Lys Ala Phe Leu Asp Ala Lys Glu Arg Ser Asp His

225 230 235 240

Lys Glu Met Met Glu Glu Pro Gly Asp Ser Gln Gln Pro Gly Tyr Ser

245 250 255

Gln Trp Gly Trp Leu Leu Pro Gly Thr Ser Thr Leu Cys Pro Pro Ala

260 265 270

Asn Pro His Pro Gln Phe Gly Gly Ala Leu Ser Leu Pro Ser Thr His

275 280 285

Ser Cys Asp Arg Tyr Pro Thr Leu Arg Ser His Arg Ser Ser Pro Tyr

290 295 300

Pro Ser Pro Tyr Ala His Arg Asn Asn Ser Pro Thr Tyr Ser Asp Asn

305 310 315 320

Ser Pro Ala Cys Leu Ser Met Leu Gln Ser His Asp Asn Trp Ser Ser

325 330 335

Leu Gly Met Pro Ala His Pro Ser Met Leu Pro Val Ser His Asn Ala

340 345 350

Ser Pro Pro Thr Ser Ser Ser Gln Tyr Pro Ser Leu Trp Ser Val Ser

355 360 365

Asn Gly Ala Val Thr Pro Gly Ser Gln Ala Ala Ala Val Ser Asn Gly

370 375 380

Leu Gly Ala Gln Phe Phe Arg Gly Ser Pro Ala His Tyr Thr Pro Leu

385 390 395 400

Thr His Pro Val Ser Ala Pro Ser Ser Ser Gly Ser Pro Leu Tyr Glu

405 410 415

Gly Ala Ala Ala Ala Thr Asp Ile Val Asp Ser Gln Tyr Asp Ala Ala

420 425 430

Ala Gln Gly Arg Leu Ile Ala Ser Trp Thr Pro Val Ser Pro Pro Ser

435 440 445

Met

<210> 52

<211> 1326

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Кодирующая последовательность, кодирующая слитый белок, содержащий изоформу 1 белка Brachyury,плюс добавление 18 нуклеотидов из гена FPV  088

<400> 52

atgaacatga gtaagaaaat gagctcccct ggcaccgaga gcgcgggaaa gagcctgcag 60

taccgagtgg accacctgct gagcgccgtg gagaatgagc tgcaggcggg cagcgagaag 120

ggcgacccca cagagcgcga actgcgcgtg ggcctggagg agagcgagct gtggctgcgc 180

ttcaaggagc tcaccaatga gatgatcgtg accaagaacg gcaggaggat gtttccggtg 240

ctgaaggtga acgtgtctgg cctggacccc aacgccatgt actccttcct gctggacttc 300

gtggcggcgg acaaccaccg ctggaagtac gtgaacgggg aatgggtgcc ggggggcaag 360

ccggagccgc aggcgcccag ctgcgtctac atccaccccg actcgcccaa cttcggggcc 420

cactggatga aggctcccgt ctccttcagc aaagtcaagc tcaccaacaa gctcaacgga 480

gggggccaga tcatgctgaa ctccttgcat aagtatgagc ctcgaatcca catagtgaga 540

gttgggggtc cacagcgcat gatcaccagc cactgcttcc ctgagaccca gttcatagcg 600

gtgactgctt atcagaacga ggagatcaca gctcttaaaa ttaagtacaa tccatttgca 660

aaggctttcc ttgatgcaaa ggaaagaagt gatcacaaag agatgatgga ggaacccgga 720

gacagccagc aacctgggta ctcccaatgg gggtggcttc ttcctggaac cagcaccgtt 780

tgtccacctg caaatcctca tcctcagttt ggaggtgccc tctccctccc ctccacgcac 840

agctgtgaca ggtacccaac cctgaggagc caccggtcct caccctaccc cagcccctat 900

gctcatcgga acaattctcc aacctattct gacaactcac ctgcatgttt atccatgctg 960

caatcccatg acaattggtc cagccttgga atgcctgccc atcccagcat gctccccgtg 1020

agccacaatg ccagcccacc taccagctcc agtcagtacc ccagcctgtg gtctgtgagc 1080

aacggcgccg tcaccccggg ctcccaggca gcagccgtgt ccaacgggct gggggcccag 1140

ttcttccggg gctcccccgc gcactacaca cccctcaccc atccggtctc ggcgccctct 1200

tcctcgggat ccccactgta cgaaggggcg gccgcggcca cagacatcgt ggacagccag 1260

tacgacgccg cagcccaagg ccgcctcata gcctcatgga cacctgtgtc gccaccttcc 1320

atgtga 1326

<210> 53

<211> 1323

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Кодирующая последовательность, кодирующая слитый белок, содержащий изоформу 1 белка Brachyury, плюс добавление 18 нуклеотидов из гена FPV 088 без atg Brachyury

<400> 53

atgaacatga gtaagaaaag ctcccctggc accgagagcg cgggaaagag cctgcagtac 60

cgagtggacc acctgctgag cgccgtggag aatgagctgc aggcgggcag cgagaagggc 120

gaccccacag agcgcgaact gcgcgtgggc ctggaggaga gcgagctgtg gctgcgcttc 180

aaggagctca ccaatgagat gatcgtgacc aagaacggca ggaggatgtt tccggtgctg 240

aaggtgaacg tgtctggcct ggaccccaac gccatgtact ccttcctgct ggacttcgtg 300

gcggcggaca accaccgctg gaagtacgtg aacggggaat gggtgccggg gggcaagccg 360

gagccgcagg cgcccagctg cgtctacatc caccccgact cgcccaactt cggggcccac 420

tggatgaagg ctcccgtctc cttcagcaaa gtcaagctca ccaacaagct caacggaggg 480

ggccagatca tgctgaactc cttgcataag tatgagcctc gaatccacat agtgagagtt 540

gggggtccac agcgcatgat caccagccac tgcttccctg agacccagtt catagcggtg 600

actgcttatc agaacgagga gatcacagct cttaaaatta agtacaatcc atttgcaaaa 660

gctttccttg atgcaaagga aagaagtgat cacaaagaga tgatggagga acccggagac 720

agccagcaac ctgggtactc ccaatggggg tggcttcttc ctggaaccag caccgtttgt 780

ccacctgcaa atcctcatcc tcagtttgga ggtgccctct ccctcccctc cacgcacagc 840

tgtgacaggt acccaaccct gaggagccac cggtcctcac cctaccccag cccctatgct 900

catcggaaca attctccaac ctattctgac aactcacctg catgtttatc catgctgcaa 960

tcccatgaca attggtccag ccttggaatg cctgcccatc ccagcatgct ccccgtgagc 1020

cacaatgcca gcccacctac cagctccagt cagtacccca gcctgtggtc tgtgagcaac 1080

ggcgccgtca ccccgggctc ccaggcagca gccgtgtcca acgggctggg ggcccagttc 1140

ttccggggct cccccgcgca ctacacaccc ctcacccatc cggtctcggc gccctcttcc 1200

tcgggatccc cactgtacga aggggcggcc gcggccacag acatcgtgga cagccagtac 1260

gacgccgcag cccaaggccg cctcatagcc tcatggacac ctgtgtcgcc accttccatg 1320

tga 1323

<210> 54

<211> 441

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Слитый белок, содержащий изоформу 1 белка Brachyury, кодируемый

SEQ ID NO:52

<400> 54

Met Asn Met Ser Lys Lys Met Ser Ser Pro Gly Thr Glu Ser Ala Gly

1 5 10 15

Lys Ser Leu Gln Tyr Arg Val Asp His Leu Leu Ser Ala Val Glu Asn

20 25 30

Glu Leu Gln Ala Gly Ser Glu Lys Gly Asp Pro Thr Glu Arg Glu Leu

35 40 45

Arg Val Gly Leu Glu Glu Ser Glu Leu Trp Leu Arg Phe Lys Glu Leu

50 55 60

Thr Asn Glu Met Ile Val Thr Lys Asn Gly Arg Arg Met Phe Pro Val

65 70 75 80

Leu Lys Val Asn Val Ser Gly Leu Asp Pro Asn Ala Met Tyr Ser Phe

85 90 95

Leu Leu Asp Phe Val Ala Ala Asp Asn His Arg Trp Lys Tyr Val Asn

100 105 110

Gly Glu Trp Val Pro Gly Gly Lys Pro Glu Pro Gln Ala Pro Ser Cys

115 120 125

Val Tyr Ile His Pro Asp Ser Pro Asn Phe Gly Ala His Trp Met Lys

130 135 140

Ala Pro Val Ser Phe Ser Lys Val Lys Leu Thr Asn Lys Leu Asn Gly

145 150 155 160

Gly Gly Gln Ile Met Leu Asn Ser Leu His Lys Tyr Glu Pro Arg Ile

165 170 175

His Ile Val Arg Val Gly Gly Pro Gln Arg Met Ile Thr Ser His Cys

180 185 190

Phe Pro Glu Thr Gln Phe Ile Ala Val Thr Ala Tyr Gln Asn Glu Glu

195 200 205

Ile Thr Ala Leu Lys Ile Lys Tyr Asn Pro Phe Ala Lys Ala Phe Leu

210 215 220

Asp Ala Lys Glu Arg Ser Asp His Lys Glu Met Met Glu Glu Pro Gly

225 230 235 240

Asp Ser Gln Gln Pro Gly Tyr Ser Gln Trp Gly Trp Leu Leu Pro Gly

245 250 255

Thr Ser Thr Leu Cys Pro Pro Ala Asn Pro His Pro Gln Phe Gly Gly

260 265 270

Ala Leu Ser Leu Pro Ser Thr His Ser Cys Asp Arg Tyr Pro Thr Leu

275 280 285

Arg Ser His Arg Ser Ser Pro Tyr Pro Ser Pro Tyr Ala His Arg Asn

290 295 300

Asn Ser Pro Thr Tyr Ser Asp Asn Ser Pro Ala Cys Leu Ser Met Leu

305 310 315 320

Gln Ser His Asp Asn Trp Ser Ser Leu Gly Met Pro Ala His Pro Ser

325 330 335

Met Leu Pro Val Ser His Asn Ala Ser Pro Pro Thr Ser Ser Ser Gln

340 345 350

Tyr Pro Ser Leu Trp Ser Val Ser Asn Gly Ala Val Thr Pro Gly Ser

355 360 365

Gln Ala Ala Ala Val Ser Asn Gly Leu Gly Ala Gln Phe Phe Arg Gly

370 375 380

Ser Pro Ala His Tyr Thr Pro Leu Thr His Pro Val Ser Ala Pro Ser

385 390 395 400

Ser Ser Gly Ser Pro Leu Tyr Glu Gly Ala Ala Ala Ala Thr Asp Ile

405 410 415

Val Asp Ser Gln Tyr Asp Ala Ala Ala Gln Gly Arg Leu Ile Ala Ser

420 425 430

Trp Thr Pro Val Ser Pro Pro Ser Met

435 440

<210> 55

<211> 440

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Слитый белок, содержащий изоформу 1 белка Brachyury, кодируемый

SEQ ID NO:53

<400> 55

Met Asn Met Ser Lys Lys Ser Ser Pro Gly Thr Glu Ser Ala Gly Lys

1 5 10 15

Ser Leu Gln Tyr Arg Val Asp His Leu Leu Ser Ala Val Glu Asn Glu

20 25 30

Leu Gln Ala Gly Ser Glu Lys Gly Asp Pro Thr Glu Arg Glu Leu Arg

35 40 45

Val Gly Leu Glu Glu Ser Glu Leu Trp Leu Arg Phe Lys Glu Leu Thr

50 55 60

Asn Glu Met Ile Val Thr Lys Asn Gly Arg Arg Met Phe Pro Val Leu

65 70 75 80

Lys Val Asn Val Ser Gly Leu Asp Pro Asn Ala Met Tyr Ser Phe Leu

85 90 95

Leu Asp Phe Val Ala Ala Asp Asn His Arg Trp Lys Tyr Val Asn Gly

100 105 110

Glu Trp Val Pro Gly Gly Lys Pro Glu Pro Gln Ala Pro Ser Cys Val

115 120 125

Tyr Ile His Pro Asp Ser Pro Asn Phe Gly Ala His Trp Met Lys Ala

130 135 140

Pro Val Ser Phe Ser Lys Val Lys Leu Thr Asn Lys Leu Asn Gly Gly

145 150 155 160

Gly Gln Ile Met Leu Asn Ser Leu His Lys Tyr Glu Pro Arg Ile His

165 170 175

Ile Val Arg Val Gly Gly Pro Gln Arg Met Ile Thr Ser His Cys Phe

180 185 190

Pro Glu Thr Gln Phe Ile Ala Val Thr Ala Tyr Gln Asn Glu Glu Ile

195 200 205

Thr Ala Leu Lys Ile Lys Tyr Asn Pro Phe Ala Lys Ala Phe Leu Asp

210 215 220

Ala Lys Glu Arg Ser Asp His Lys Glu Met Met Glu Glu Pro Gly Asp

225 230 235 240

Ser Gln Gln Pro Gly Tyr Ser Gln Trp Gly Trp Leu Leu Pro Gly Thr

245 250 255

Ser Thr Leu Cys Pro Pro Ala Asn Pro His Pro Gln Phe Gly Gly Ala

260 265 270

Leu Ser Leu Pro Ser Thr His Ser Cys Asp Arg Tyr Pro Thr Leu Arg

275 280 285

Ser His Arg Ser Ser Pro Tyr Pro Ser Pro Tyr Ala His Arg Asn Asn

290 295 300

Ser Pro Thr Tyr Ser Asp Asn Ser Pro Ala Cys Leu Ser Met Leu Gln

305 310 315 320

Ser His Asp Asn Trp Ser Ser Leu Gly Met Pro Ala His Pro Ser Met

325 330 335

Leu Pro Val Ser His Asn Ala Ser Pro Pro Thr Ser Ser Ser Gln Tyr

340 345 350

Pro Ser Leu Trp Ser Val Ser Asn Gly Ala Val Thr Pro Gly Ser Gln

355 360 365

Ala Ala Ala Val Ser Asn Gly Leu Gly Ala Gln Phe Phe Arg Gly Ser

370 375 380

Pro Ala His Tyr Thr Pro Leu Thr His Pro Val Ser Ala Pro Ser Ser

385 390 395 400

Ser Gly Ser Pro Leu Tyr Glu Gly Ala Ala Ala Ala Thr Asp Ile Val

405 410 415

Asp Ser Gln Tyr Asp Ala Ala Ala Gln Gly Arg Leu Ile Ala Ser Trp

420 425 430

Thr Pro Val Ser Pro Pro Ser Met

435 440

<210> 56

<211> 1320

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Кодирующая последовательность, кодирующая слитый белок, содержащий изоформу 1 белка Brachyury, плюс добавление 12 нуклеотидов из гена FPV 088

<400> 56

atgagtaaga aaatgagctc ccctggcacc gagagcgcgg gaaagagcct gcagtaccga 60

gtggaccacc tgctgagcgc cgtggagaat gagctgcagg cgggcagcga gaagggcgac 120

cccacagagc gcgaactgcg cgtgggcctg gaggagagcg agctgtggct gcgcttcaag 180

gagctcacca atgagatgat cgtgaccaag aacggcagga ggatgtttcc ggtgctgaag 240

gtgaacgtgt ctggcctgga ccccaacgcc atgtactcct tcctgctgga cttcgtggcg 300

gcggacaacc accgctggaa gtacgtgaac ggggaatggg tgccgggggg caagccggag 360

ccgcaggcgc ccagctgcgt ctacatccac cccgactcgc ccaacttcgg ggcccactgg 420

atgaaggctc ccgtctcctt cagcaaagtc aagctcacca acaagctcaa cggagggggc 480

cagatcatgc tgaactcctt gcataagtat gagcctcgaa tccacatagt gagagttggg 540

ggtccacagc gcatgatcac cagccactgc ttccctgaga cccagttcat agcggtgact 600

gcttatcaga acgaggagat cacagctctt aaaattaagt acaatccatt tgcaaaagct 660

ttccttgatg caaaggaaag aagtgatcac aaagagatga tggaggaacc cggagacagc 720

cagcaacctg ggtactccca atgggggtgg cttcttcctg gaaccagcac cgtttgtcca 780

cctgcaaatc ctcatcctca gtttggaggt gccctctccc tcccctccac gcacagctgt 840

gacaggtacc caaccctgag gagccaccgg tcctcaccct accccagccc ctatgctcat 900

cggaacaatt ctccaaccta ttctgacaac tcacctgcat gtttatccat gctgcaatcc 960

catgacaatt ggtccagcct tggaatgcct gcccatccca gcatgctccc cgtgagccac 1020

aatgccagcc cacctaccag ctccagtcag taccccagcc tgtggtctgt gagcaacggc 1080

gccgtcaccc cgggctccca ggcagcagcc gtgtccaacg ggctgggggc ccagttcttc 1140

cggggctccc ccgcgcacta cacacccctc acccatccgg tctcggcgcc ctcttcctcg 1200

ggatccccac tgtacgaagg ggcggccgcg gccacagaca tcgtggacag ccagtacgac 1260

gccgcagccc aaggccgcct catagcctca tggacacctg tgtcgccacc ttccatgtga 1320

<210> 57

<211> 1317

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Кодирующая последовательность, кодирующая слитый белок, содержащий изоформу 1 белка Brachyury, плюс добавление 12 нуклеотидов из гена FPV 088 без инициирующего кодона atg Brachyury

<400> 57

atgagtaaga aaagctcccc tggcaccgag agcgcgggaa agagcctgca gtaccgagtg 60

gaccacctgc tgagcgccgt ggagaatgag ctgcaggcgg gcagcgagaa gggcgacccc 120

acagagcgcg aactgcgcgt gggcctggag gagagcgagc tgtggctgcg cttcaaggag 180

ctcaccaatg agatgatcgt gaccaagaac ggcaggagga tgtttccggt gctgaaggtg 240

aacgtgtctg gcctggaccc caacgccatg tactccttcc tgctggactt cgtggcggcg 300

gacaaccacc gctggaagta cgtgaacggg gaatgggtgc cggggggcaa gccggagccg 360

caggcgccca gctgcgtcta catccacccc gactcgccca acttcggggc ccactggatg 420

aaggctcccg tctccttcag caaagtcaag ctcaccaaca agctcaacgg agggggccag 480

atcatgctga actccttgca taagtatgag cctcgaatcc acatagtgag agttgggggt 540

ccacagcgca tgatcaccag ccactgcttc cctgagaccc agttcatagc ggtgactgct 600

tatcagaacg aggagatcac agctcttaaa attaagtaca atccatttgc aaaagctttc 660

cttgatgcaa aggaaagaag tgatcacaaa gagatgatgg aggaacccgg agacagccag 720

caacctgggt actcccaatg ggggtggctt cttcctggaa ccagcaccgt ttgtccacct 780

gcaaatcctc atcctcagtt tggaggtgcc ctctccctcc cctccacgca cagctgtgac 840

aggtacccaa ccctgaggag ccaccggtcc tcaccctacc ccagccccta tgctcatcgg 900

aacaattctc caacctattc tgacaactca cctgcatgtt tatccatgct gcaatcccat 960

gacaattggt ccagccttgg aatgcctgcc catcccagca tgctccccgt gagccacaat 1020

gccagcccac ctaccagctc cagtcagtac cccagcctgt ggtctgtgag caacggcgcc 1080

gtcaccccgg gctcccaggc agcagccgtg tccaacgggc tgggggccca gttcttccgg 1140

ggctcccccg cgcactacac acccctcacc catccggtct cggcgccctc ttcctcggga 1200

tccccactgt acgaaggggc ggccgcggcc acagacatcg tggacagcca gtacgacgcc 1260

gcagcccaag gccgcctcat agcctcatgg acacctgtgt cgccaccttc catgtga 1317

<210> 58

<211> 439

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Слитый белок, содержащий изоформу 1 белка Brachyury, кодируемый

SEQ ID NO: 56

<400> 58

Met Ser Lys Lys Met Ser Ser Pro Gly Thr Glu Ser Ala Gly Lys Ser

1 5 10 15

Leu Gln Tyr Arg Val Asp His Leu Leu Ser Ala Val Glu Asn Glu Leu

20 25 30

Gln Ala Gly Ser Glu Lys Gly Asp Pro Thr Glu Arg Glu Leu Arg Val

35 40 45

Gly Leu Glu Glu Ser Glu Leu Trp Leu Arg Phe Lys Glu Leu Thr Asn

50 55 60

Glu Met Ile Val Thr Lys Asn Gly Arg Arg Met Phe Pro Val Leu Lys

65 70 75 80

Val Asn Val Ser Gly Leu Asp Pro Asn Ala Met Tyr Ser Phe Leu Leu

85 90 95

Asp Phe Val Ala Ala Asp Asn His Arg Trp Lys Tyr Val Asn Gly Glu

100 105 110

Trp Val Pro Gly Gly Lys Pro Glu Pro Gln Ala Pro Ser Cys Val Tyr

115 120 125

Ile His Pro Asp Ser Pro Asn Phe Gly Ala His Trp Met Lys Ala Pro

130 135 140

Val Ser Phe Ser Lys Val Lys Leu Thr Asn Lys Leu Asn Gly Gly Gly

145 150 155 160

Gln Ile Met Leu Asn Ser Leu His Lys Tyr Glu Pro Arg Ile His Ile

165 170 175

Val Arg Val Gly Gly Pro Gln Arg Met Ile Thr Ser His Cys Phe Pro

180 185 190

Glu Thr Gln Phe Ile Ala Val Thr Ala Tyr Gln Asn Glu Glu Ile Thr

195 200 205

Ala Leu Lys Ile Lys Tyr Asn Pro Phe Ala Lys Ala Phe Leu Asp Ala

210 215 220

Lys Glu Arg Ser Asp His Lys Glu Met Met Glu Glu Pro Gly Asp Ser

225 230 235 240

Gln Gln Pro Gly Tyr Ser Gln Trp Gly Trp Leu Leu Pro Gly Thr Ser

245 250 255

Thr Leu Cys Pro Pro Ala Asn Pro His Pro Gln Phe Gly Gly Ala Leu

260 265 270

Ser Leu Pro Ser Thr His Ser Cys Asp Arg Tyr Pro Thr Leu Arg Ser

275 280 285

His Arg Ser Ser Pro Tyr Pro Ser Pro Tyr Ala His Arg Asn Asn Ser

290 295 300

Pro Thr Tyr Ser Asp Asn Ser Pro Ala Cys Leu Ser Met Leu Gln Ser

305 310 315 320

His Asp Asn Trp Ser Ser Leu Gly Met Pro Ala His Pro Ser Met Leu

325 330 335

Pro Val Ser His Asn Ala Ser Pro Pro Thr Ser Ser Ser Gln Tyr Pro

340 345 350

Ser Leu Trp Ser Val Ser Asn Gly Ala Val Thr Pro Gly Ser Gln Ala

355 360 365

Ala Ala Val Ser Asn Gly Leu Gly Ala Gln Phe Phe Arg Gly Ser Pro

370 375 380

Ala His Tyr Thr Pro Leu Thr His Pro Val Ser Ala Pro Ser Ser Ser

385 390 395 400

Gly Ser Pro Leu Tyr Glu Gly Ala Ala Ala Ala Thr Asp Ile Val Asp

405 410 415

Ser Gln Tyr Asp Ala Ala Ala Gln Gly Arg Leu Ile Ala Ser Trp Thr

420 425 430

Pro Val Ser Pro Pro Ser Met

435

<210> 59

<211> 438

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Слитый белок, содержащий изоформу 1 белка Brachyury, кодируемый

SEQ ID NO:57

<400> 59

Met Ser Lys Lys Ser Ser Pro Gly Thr Glu Ser Ala Gly Lys Ser Leu

1 5 10 15

Gln Tyr Arg Val Asp His Leu Leu Ser Ala Val Glu Asn Glu Leu Gln

20 25 30

Ala Gly Ser Glu Lys Gly Asp Pro Thr Glu Arg Glu Leu Arg Val Gly

35 40 45

Leu Glu Glu Ser Glu Leu Trp Leu Arg Phe Lys Glu Leu Thr Asn Glu

50 55 60

Met Ile Val Thr Lys Asn Gly Arg Arg Met Phe Pro Val Leu Lys Val

65 70 75 80

Asn Val Ser Gly Leu Asp Pro Asn Ala Met Tyr Ser Phe Leu Leu Asp

85 90 95

Phe Val Ala Ala Asp Asn His Arg Trp Lys Tyr Val Asn Gly Glu Trp

100 105 110

Val Pro Gly Gly Lys Pro Glu Pro Gln Ala Pro Ser Cys Val Tyr Ile

115 120 125

His Pro Asp Ser Pro Asn Phe Gly Ala His Trp Met Lys Ala Pro Val

130 135 140

Ser Phe Ser Lys Val Lys Leu Thr Asn Lys Leu Asn Gly Gly Gly Gln

145 150 155 160

Ile Met Leu Asn Ser Leu His Lys Tyr Glu Pro Arg Ile His Ile Val

165 170 175

Arg Val Gly Gly Pro Gln Arg Met Ile Thr Ser His Cys Phe Pro Glu

180 185 190

Thr Gln Phe Ile Ala Val Thr Ala Tyr Gln Asn Glu Glu Ile Thr Ala

195 200 205

Leu Lys Ile Lys Tyr Asn Pro Phe Ala Lys Ala Phe Leu Asp Ala Lys

210 215 220

Glu Arg Ser Asp His Lys Glu Met Met Glu Glu Pro Gly Asp Ser Gln

225 230 235 240

Gln Pro Gly Tyr Ser Gln Trp Gly Trp Leu Leu Pro Gly Thr Ser Thr

245 250 255

Leu Cys Pro Pro Ala Asn Pro His Pro Gln Phe Gly Gly Ala Leu Ser

260 265 270

Leu Pro Ser Thr His Ser Cys Asp Arg Tyr Pro Thr Leu Arg Ser His

275 280 285

Arg Ser Ser Pro Tyr Pro Ser Pro Tyr Ala His Arg Asn Asn Ser Pro

290 295 300

Thr Tyr Ser Asp Asn Ser Pro Ala Cys Leu Ser Met Leu Gln Ser His

305 310 315 320

Asp Asn Trp Ser Ser Leu Gly Met Pro Ala His Pro Ser Met Leu Pro

325 330 335

Val Ser His Asn Ala Ser Pro Pro Thr Ser Ser Ser Gln Tyr Pro Ser

340 345 350

Leu Trp Ser Val Ser Asn Gly Ala Val Thr Pro Gly Ser Gln Ala Ala

355 360 365

Ala Val Ser Asn Gly Leu Gly Ala Gln Phe Phe Arg Gly Ser Pro Ala

370 375 380

His Tyr Thr Pro Leu Thr His Pro Val Ser Ala Pro Ser Ser Ser Gly

385 390 395 400

Ser Pro Leu Tyr Glu Gly Ala Ala Ala Ala Thr Asp Ile Val Asp Ser

405 410 415

Gln Tyr Asp Ala Ala Ala Gln Gly Arg Leu Ile Ala Ser Trp Thr Pro

420 425 430

Val Ser Pro Pro Ser Met

435

<210> 60

<211> 1386

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Кодирующая последовательность, кодирующая слитый белок, содержащий изоформу 1 белка Brachyury, плюс добавление 75 нуклеотидов из гена FPV 088 и atc

<400> 60

atgaaaaata acttgtatga agaaaaaatg aacatgagta agaaacaagt aaaaactcaa 60

agtaaatgta ataatatcat gagctcccct ggcaccgaga gcgcgggaaa gagcctgcag 120

taccgagtgg accacctgct gagcgccgtg gagaatgagc tgcaggcggg cagcgagaag 180

ggcgacccca cagagcgcga actgcgcgtg ggcctggagg agagcgagct gtggctgcgc 240

ttcaaggagc tcaccaatga gatgatcgtg accaagaacg gcaggaggat gtttccggtg 300

ctgaaggtga acgtgtctgg cctggacccc aacgccatgt actccttcct gctggacttc 360

gtggcggcgg acaaccaccg ctggaagtac gtgaacgggg aatgggtgcc ggggggcaag 420

ccggagccgc aggcgcccag ctgcgtctac atccaccccg actcgcccaa cttcggggcc 480

cactggatga aggctcccgt ctccttcagc aaagtcaagc tcaccaacaa gctcaacgga 540

gggggccaga tcatgctgaa ctccttgcat aagtatgagc ctcgaatcca catagtgaga 600

gttgggggtc cacagcgcat gatcaccagc cactgcttcc ctgagaccca gttcatagcg 660

gtgactgctt atcagaacga ggagatcaca gctcttaaaa ttaagtacaa tccatttgca 720

aaagctttcc ttgatgcaaa ggaaagaagt gatcacaaag agatgatgga ggaacccgga 780

gacagccagc aacctgggta ctcccaatgg gggtggcttc ttcctggaac cagcaccgtt 840

tgtccacctg caaatcctca tcctcagttt ggaggtgccc tctccctccc ctccacgcac 900

agctgtgaca ggtacccaac cctgaggagc caccggtcct caccctaccc cagcccctat 960

gctcatcgga acaattctcc aacctattct gacaactcac ctgcatgttt atccatgctg 1020

caatcccatg acaattggtc cagccttgga atgcctgccc atcccagcat gctccccgtg 1080

agccacaatg ccagcccacc taccagctcc agtcagtacc ccagcctgtg gtctgtgagc 1140

aacggcgccg tcaccccggg ctcccaggca gcagccgtgt ccaacgggct gggggcccag 1200

ttcttccggg gctcccccgc gcactacaca cccctcaccc atccggtctc ggcgccctct 1260

tcctcgggat ccccactgta cgaaggggcg gccgcggcca cagacatcgt ggacagccag 1320

tacgacgccg cagcccaagg ccgcctcata gcctcatgga cacctgtgtc gccaccttcc 1380

atgtga 1386

<210> 61

<211> 1383

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Кодирующая последовательность, кодирующая слитый белок, содержащий изоформу 1 белка Brachyury, плюс добавление 75 нуклеотидов из гена FPV 088 и atc, без инициирующего кодона atg Brachyury

<400> 61

atgaaaaata acttgtatga agaaaaaatg aacatgagta agaaacaagt aaaaactcaa 60

agtaaatgta ataatatcag ctcccctggc accgagagcg cgggaaagag cctgcagtac 120

cgagtggacc acctgctgag cgccgtggag aatgagctgc aggcgggcag cgagaagggc 180

gaccccacag agcgcgaact gcgcgtgggc ctggaggaga gcgagctgtg gctgcgcttc 240

aaggagctca ccaatgagat gatcgtgacc aagaacggca ggaggatgtt tccggtgctg 300

aaggtgaacg tgtctggcct ggaccccaac gccatgtact ccttcctgct ggacttcgtg 360

gcggcggaca accaccgctg gaagtacgtg aacggggaat gggtgccggg gggcaagccg 420

gagccgcagg cgcccagctg cgtctacatc caccccgact cgcccaactt cggggcccac 480

tggatgaagg ctcccgtctc cttcagcaaa gtcaagctca ccaacaagct caacggaggg 540

ggccagatca tgctgaactc cttgcataag tatgagcctc gaatccacat agtgagagtt 600

gggggtccac agcgcatgat caccagccac tgcttccctg agacccagtt catagcggtg 660

actgcttatc agaacgagga gatcacagct cttaaaatta agtacaatcc atttgcaaaa 720

gctttccttg atgcaaagga aagaagtgat cacaaagaga tgatggagga acccggagac 780

agccagcaac ctgggtactc ccaatggggg tggcttcttc ctggaaccag caccgtttgt 840

ccacctgcaa atcctcatcc tcagtttgga ggtgccctct ccctcccctc cacgcacagc 900

tgtgacaggt acccaaccct gaggagccac cggtcctcac cctaccccag cccctatgct 960

catcggaaca attctccaac ctattctgac aactcacctg catgtttatc catgctgcaa 1020

tcccatgaca attggtccag ccttggaatg cctgcccatc ccagcatgct ccccgtgagc 1080

cacaatgcca gcccacctac cagctccagt cagtacccca gcctgtggtc tgtgagcaac 1140

ggcgccgtca ccccgggctc ccaggcagca gccgtgtcca acgggctggg ggcccagttc 1200

ttccggggct cccccgcgca ctacacaccc ctcacccatc cggtctcggc gccctcttcc 1260

tcgggatccc cactgtacga aggggcggcc gcggccacag acatcgtgga cagccagtac 1320

gacgccgcag cccaaggccg cctcatagcc tcatggacac ctgtgtcgcc accttccatg 1380

tga 1383

<210> 62

<211> 461

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Слитый белок, содержащий изоформу 1 белка Brachyury, кодируемый

SEQ ID NO:60

<400> 62

Met Lys Asn Asn Leu Tyr Glu Glu Lys Met Asn Met Ser Lys Lys Gln

1 5 10 15

Val Lys Thr Gln Ser Lys Cys Asn Asn Ile Met Ser Ser Pro Gly Thr

20 25 30

Glu Ser Ala Gly Lys Ser Leu Gln Tyr Arg Val Asp His Leu Leu Ser

35 40 45

Ala Val Glu Asn Glu Leu Gln Ala Gly Ser Glu Lys Gly Asp Pro Thr

50 55 60

Glu Arg Glu Leu Arg Val Gly Leu Glu Glu Ser Glu Leu Trp Leu Arg

65 70 75 80

Phe Lys Glu Leu Thr Asn Glu Met Ile Val Thr Lys Asn Gly Arg Arg

85 90 95

Met Phe Pro Val Leu Lys Val Asn Val Ser Gly Leu Asp Pro Asn Ala

100 105 110

Met Tyr Ser Phe Leu Leu Asp Phe Val Ala Ala Asp Asn His Arg Trp

115 120 125

Lys Tyr Val Asn Gly Glu Trp Val Pro Gly Gly Lys Pro Glu Pro Gln

130 135 140

Ala Pro Ser Cys Val Tyr Ile His Pro Asp Ser Pro Asn Phe Gly Ala

145 150 155 160

His Trp Met Lys Ala Pro Val Ser Phe Ser Lys Val Lys Leu Thr Asn

165 170 175

Lys Leu Asn Gly Gly Gly Gln Ile Met Leu Asn Ser Leu His Lys Tyr

180 185 190

Glu Pro Arg Ile His Ile Val Arg Val Gly Gly Pro Gln Arg Met Ile

195 200 205

Thr Ser His Cys Phe Pro Glu Thr Gln Phe Ile Ala Val Thr Ala Tyr

210 215 220

Gln Asn Glu Glu Ile Thr Ala Leu Lys Ile Lys Tyr Asn Pro Phe Ala

225 230 235 240

Lys Ala Phe Leu Asp Ala Lys Glu Arg Ser Asp His Lys Glu Met Met

245 250 255

Glu Glu Pro Gly Asp Ser Gln Gln Pro Gly Tyr Ser Gln Trp Gly Trp

260 265 270

Leu Leu Pro Gly Thr Ser Thr Leu Cys Pro Pro Ala Asn Pro His Pro

275 280 285

Gln Phe Gly Gly Ala Leu Ser Leu Pro Ser Thr His Ser Cys Asp Arg

290 295 300

Tyr Pro Thr Leu Arg Ser His Arg Ser Ser Pro Tyr Pro Ser Pro Tyr

305 310 315 320

Ala His Arg Asn Asn Ser Pro Thr Tyr Ser Asp Asn Ser Pro Ala Cys

325 330 335

Leu Ser Met Leu Gln Ser His Asp Asn Trp Ser Ser Leu Gly Met Pro

340 345 350

Ala His Pro Ser Met Leu Pro Val Ser His Asn Ala Ser Pro Pro Thr

355 360 365

Ser Ser Ser Gln Tyr Pro Ser Leu Trp Ser Val Ser Asn Gly Ala Val

370 375 380

Thr Pro Gly Ser Gln Ala Ala Ala Val Ser Asn Gly Leu Gly Ala Gln

385 390 395 400

Phe Phe Arg Gly Ser Pro Ala His Tyr Thr Pro Leu Thr His Pro Val

405 410 415

Ser Ala Pro Ser Ser Ser Gly Ser Pro Leu Tyr Glu Gly Ala Ala Ala

420 425 430

Ala Thr Asp Ile Val Asp Ser Gln Tyr Asp Ala Ala Ala Gln Gly Arg

435 440 445

Leu Ile Ala Ser Trp Thr Pro Val Ser Pro Pro Ser Met

450 455 460

<210> 63

<211> 460

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Слитый белок, содержащий изоформу 1 белка Brachyury, кодируемый

       SEQ ID NO: 61

<400> 63

Met Lys Asn Asn Leu Tyr Glu Glu Lys Met Asn Met Ser Lys Lys Gln

1 5 10 15

Val Lys Thr Gln Ser Lys Cys Asn Asn Ile Ser Ser Pro Gly Thr Glu

20 25 30

Ser Ala Gly Lys Ser Leu Gln Tyr Arg Val Asp His Leu Leu Ser Ala

35 40 45

Val Glu Asn Glu Leu Gln Ala Gly Ser Glu Lys Gly Asp Pro Thr Glu

50 55 60

Arg Glu Leu Arg Val Gly Leu Glu Glu Ser Glu Leu Trp Leu Arg Phe

65 70 75 80

Lys Glu Leu Thr Asn Glu Met Ile Val Thr Lys Asn Gly Arg Arg Met

85 90 95

Phe Pro Val Leu Lys Val Asn Val Ser Gly Leu Asp Pro Asn Ala Met

100 105 110

Tyr Ser Phe Leu Leu Asp Phe Val Ala Ala Asp Asn His Arg Trp Lys

115 120 125

Tyr Val Asn Gly Glu Trp Val Pro Gly Gly Lys Pro Glu Pro Gln Ala

130 135 140

Pro Ser Cys Val Tyr Ile His Pro Asp Ser Pro Asn Phe Gly Ala His

145 150 155 160

Trp Met Lys Ala Pro Val Ser Phe Ser Lys Val Lys Leu Thr Asn Lys

165 170 175

Leu Asn Gly Gly Gly Gln Ile Met Leu Asn Ser Leu His Lys Tyr Glu

180 185 190

Pro Arg Ile His Ile Val Arg Val Gly Gly Pro Gln Arg Met Ile Thr

195 200 205

Ser His Cys Phe Pro Glu Thr Gln Phe Ile Ala Val Thr Ala Tyr Gln

210 215 220

Asn Glu Glu Ile Thr Ala Leu Lys Ile Lys Tyr Asn Pro Phe Ala Lys

225 230 235 240

Ala Phe Leu Asp Ala Lys Glu Arg Ser Asp His Lys Glu Met Met Glu

245 250 255

Glu Pro Gly Asp Ser Gln Gln Pro Gly Tyr Ser Gln Trp Gly Trp Leu

260 265 270

Leu Pro Gly Thr Ser Thr Leu Cys Pro Pro Ala Asn Pro His Pro Gln

275 280 285

Phe Gly Gly Ala Leu Ser Leu Pro Ser Thr His Ser Cys Asp Arg Tyr

290 295 300

Pro Thr Leu Arg Ser His Arg Ser Ser Pro Tyr Pro Ser Pro Tyr Ala

305 310 315 320

His Arg Asn Asn Ser Pro Thr Tyr Ser Asp Asn Ser Pro Ala Cys Leu

325 330 335

Ser Met Leu Gln Ser His Asp Asn Trp Ser Ser Leu Gly Met Pro Ala

340 345 350

His Pro Ser Met Leu Pro Val Ser His Asn Ala Ser Pro Pro Thr Ser

355 360 365

Ser Ser Gln Tyr Pro Ser Leu Trp Ser Val Ser Asn Gly Ala Val Thr

370 375 380

Pro Gly Ser Gln Ala Ala Ala Val Ser Asn Gly Leu Gly Ala Gln Phe

385 390 395 400

Phe Arg Gly Ser Pro Ala His Tyr Thr Pro Leu Thr His Pro Val Ser

405 410 415

Ala Pro Ser Ser Ser Gly Ser Pro Leu Tyr Glu Gly Ala Ala Ala Ala

420 425 430

Thr Asp Ile Val Asp Ser Gln Tyr Asp Ala Ala Ala Gln Gly Arg Leu

435 440 445

Ile Ala Ser Trp Thr Pro Val Ser Pro Pro Ser Met

450 455 460

<210> 64

<211> 1359

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Кодирующая последовательность, кодирующая слитый белок, содержащий изоформу 1 белка Brachyury, плюс добавление 48 нуклеотидов из гена FPV 088 и atc

<400> 64

atgaacatga gtaagaaaca agtaaaaact caaagtaaat gtaataatat catgagctcc 60

cctggcaccg agagcgcggg aaagagcctg cagtaccgag tggaccacct gctgagcgcc 120

gtggagaatg agctgcaggc gggcagcgag aagggcgacc ccacagagcg cgaactgcgc 180

gtgggcctgg aggagagcga gctgtggctg cgcttcaagg agctcaccaa tgagatgatc 240

gtgaccaaga acggcaggag gatgtttccg gtgctgaagg tgaacgtgtc tggcctggac 300

cccaacgcca tgtactcctt cctgctggac ttcgtggcgg cggacaacca ccgctggaag 360

tacgtgaacg gggaatgggt gccggggggc aagccggagc cgcaggcgcc cagctgcgtc 420

tacatccacc ccgactcgcc caacttcggg gcccactgga tgaaggctcc cgtctccttc 480

agcaaagtca agctcaccaa caagctcaac ggagggggcc agatcatgct gaactccttg 540

cataagtatg agcctcgaat ccacatagtg agagttgggg gtccacagcg catgatcacc 600

agccactgct tccctgagac ccagttcata gcggtgactg cttatcagaa cgaggagatc 660

acagctctta aaattaagta caatccattt gcaaaagctt tccttgatgc aaaggaaaga 720

agtgatcaca aagagatgat ggaggaaccc ggagacagcc agcaacctgg gtactcccaa 780

tgggggtggc ttcttcctgg aaccagcacc gtttgtccac ctgcaaatcc tcatcctcag 840

tttggaggtg ccctctccct cccctccacg cacagctgtg acaggtaccc aaccctgagg 900

agccaccggt cctcacccta ccccagcccc tatgctcatc ggaacaattc tccaacctat 960

tctgacaact cacctgcatg tttatccatg ctgcaatccc atgacaattg gtccagcctt 1020

ggaatgcctg cccatcccag catgctcccc gtgagccaca atgccagccc acctaccagc 1080

tccagtcagt accccagcct gtggtctgtg agcaacggcg ccgtcacccc gggctcccag 1140

gcagcagccg tgtccaacgg gctgggggcc cagttcttcc ggggctcccc cgcgcactac 1200

acacccctca cccatccggt ctcggcgccc tcttcctcgg gatccccact gtacgaaggg 1260

gcggccgcgg ccacagacat cgtggacagc cagtacgacg ccgcagccca aggccgcctc 1320

atagcctcat ggacacctgt gtcgccacct tccatgtga 1359

<210> 65

<211> 1356

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Кодирующая последовательность, кодирующая слитый белок, содержащий изоформу 1 белка Brachyury, плюс добавление 48 нуклеотидов из гена FPV 088 и atc, без инициирующего кодона atg

<400> 65

atgaacatga gtaagaaaca agtaaaaact caaagtaaat gtaataatat cagctcccct 60

ggcaccgaga gcgcgggaaa gagcctgcag taccgagtgg accacctgct gagcgccgtg 120

gagaatgagc tgcaggcggg cagcgagaag ggcgacccca cagagcgcga actgcgcgtg 180

ggcctggagg agagcgagct gtggctgcgc ttcaaggagc tcaccaatga gatgatcgtg 240

accaagaacg gcaggaggat gtttccggtg ctgaaggtga acgtgtctgg cctggacccc 300

aacgccatgt actccttcct gctggacttc gtggcggcgg acaaccaccg ctggaagtac 360

gtgaacgggg aatgggtgcc ggggggcaag ccggagccgc aggcgcccag ctgcgtctac 420

atccaccccg actcgcccaa cttcggggcc cactggatga aggctcccgt ctccttcagc 480

aaagtcaagc tcaccaacaa gctcaacgga gggggccaga tcatgctgaa ctccttgcat 540

aagtatgagc ctcgaatcca catagtgaga gttgggggtc cacagcgcat gatcaccagc 600

cactgcttcc ctgagaccca gttcatagcg gtgactgctt atcagaacga ggagatcaca 660

gctcttaaaa ttaagtacaa tccatttgca aaagctttcc ttgatgcaaa ggaaagaagt 720

gatcacaaag agatgatgga ggaacccgga gacagccagc aacctgggta ctcccaatgg 780

gggtggcttc ttcctggaac cagcaccgtt tgtccacctg caaatcctca tcctcagttt 840

ggaggtgccc tctccctccc ctccacgcac agctgtgaca ggtacccaac cctgaggagc 900

caccggtcct caccctaccc cagcccctat gctcatcgga acaattctcc aacctattct 960

gacaactcac ctgcatgttt atccatgctg caatcccatg acaattggtc cagccttgga 1020

atgcctgccc atcccagcat gctccccgtg agccacaatg ccagcccacc taccagctcc 1080

agtcagtacc ccagcctgtg gtctgtgagc aacggcgccg tcaccccggg ctcccaggca 1140

gcagccgtgt ccaacgggct gggggcccag ttcttccggg gctcccccgc gcactacaca 1200

cccctcaccc atccggtctc ggcgccctct tcctcgggat ccccactgta cgaaggggcg 1260

gccgcggcca cagacatcgt ggacagccag tacgacgccg cagcccaagg ccgcctcata 1320

gcctcatgga cacctgtgtc gccaccttcc atgtga 1356

<210> 66

<211> 452

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Слитый белок, содержащий изоформу 1 белка Brachyury, кодируемый

SEQ ID NO:64

<400> 66

Met Asn Met Ser Lys Lys Gln Val Lys Thr Gln Ser Lys Cys Asn Asn

1 5 10 15

Ile Met Ser Ser Pro Gly Thr Glu Ser Ala Gly Lys Ser Leu Gln Tyr

20 25 30

Arg Val Asp His Leu Leu Ser Ala Val Glu Asn Glu Leu Gln Ala Gly

35 40 45

Ser Glu Lys Gly Asp Pro Thr Glu Arg Glu Leu Arg Val Gly Leu Glu

50 55 60

Glu Ser Glu Leu Trp Leu Arg Phe Lys Glu Leu Thr Asn Glu Met Ile

65 70 75 80

Val Thr Lys Asn Gly Arg Arg Met Phe Pro Val Leu Lys Val Asn Val

85 90 95

Ser Gly Leu Asp Pro Asn Ala Met Tyr Ser Phe Leu Leu Asp Phe Val

100 105 110

Ala Ala Asp Asn His Arg Trp Lys Tyr Val Asn Gly Glu Trp Val Pro

115 120 125

Gly Gly Lys Pro Glu Pro Gln Ala Pro Ser Cys Val Tyr Ile His Pro

130 135 140

Asp Ser Pro Asn Phe Gly Ala His Trp Met Lys Ala Pro Val Ser Phe

145 150 155 160

Ser Lys Val Lys Leu Thr Asn Lys Leu Asn Gly Gly Gly Gln Ile Met

165 170 175

Leu Asn Ser Leu His Lys Tyr Glu Pro Arg Ile His Ile Val Arg Val

180 185 190

Gly Gly Pro Gln Arg Met Ile Thr Ser His Cys Phe Pro Glu Thr Gln

195 200 205

Phe Ile Ala Val Thr Ala Tyr Gln Asn Glu Glu Ile Thr Ala Leu Lys

210 215 220

Ile Lys Tyr Asn Pro Phe Ala Lys Ala Phe Leu Asp Ala Lys Glu Arg

225 230 235 240

Ser Asp His Lys Glu Met Met Glu Glu Pro Gly Asp Ser Gln Gln Pro

245 250 255

Gly Tyr Ser Gln Trp Gly Trp Leu Leu Pro Gly Thr Ser Thr Leu Cys

260 265 270

Pro Pro Ala Asn Pro His Pro Gln Phe Gly Gly Ala Leu Ser Leu Pro

275 280 285

Ser Thr His Ser Cys Asp Arg Tyr Pro Thr Leu Arg Ser His Arg Ser

290 295 300

Ser Pro Tyr Pro Ser Pro Tyr Ala His Arg Asn Asn Ser Pro Thr Tyr

305 310 315 320

Ser Asp Asn Ser Pro Ala Cys Leu Ser Met Leu Gln Ser His Asp Asn

325 330 335

Trp Ser Ser Leu Gly Met Pro Ala His Pro Ser Met Leu Pro Val Ser

340 345 350

His Asn Ala Ser Pro Pro Thr Ser Ser Ser Gln Tyr Pro Ser Leu Trp

355 360 365

Ser Val Ser Asn Gly Ala Val Thr Pro Gly Ser Gln Ala Ala Ala Val

370 375 380

Ser Asn Gly Leu Gly Ala Gln Phe Phe Arg Gly Ser Pro Ala His Tyr

385 390 395 400

Thr Pro Leu Thr His Pro Val Ser Ala Pro Ser Ser Ser Gly Ser Pro

405 410 415

Leu Tyr Glu Gly Ala Ala Ala Ala Thr Asp Ile Val Asp Ser Gln Tyr

420 425 430

Asp Ala Ala Ala Gln Gly Arg Leu Ile Ala Ser Trp Thr Pro Val Ser

435 440 445

Pro Pro Ser Met

450

<210> 67

<211> 451

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Слитый белок, содержащий изоформу 1 белка Brachyury, кодируемый

SEQ ID NO:65

<400> 67

Met Asn Met Ser Lys Lys Gln Val Lys Thr Gln Ser Lys Cys Asn Asn

1 5 10 15

Ile Ser Ser Pro Gly Thr Glu Ser Ala Gly Lys Ser Leu Gln Tyr Arg

20 25 30

Val Asp His Leu Leu Ser Ala Val Glu Asn Glu Leu Gln Ala Gly Ser

35 40 45

Glu Lys Gly Asp Pro Thr Glu Arg Glu Leu Arg Val Gly Leu Glu Glu

50 55 60

Ser Glu Leu Trp Leu Arg Phe Lys Glu Leu Thr Asn Glu Met Ile Val

65 70 75 80

Thr Lys Asn Gly Arg Arg Met Phe Pro Val Leu Lys Val Asn Val Ser

85 90 95

Gly Leu Asp Pro Asn Ala Met Tyr Ser Phe Leu Leu Asp Phe Val Ala

100 105 110

Ala Asp Asn His Arg Trp Lys Tyr Val Asn Gly Glu Trp Val Pro Gly

115 120 125

Gly Lys Pro Glu Pro Gln Ala Pro Ser Cys Val Tyr Ile His Pro Asp

130 135 140

Ser Pro Asn Phe Gly Ala His Trp Met Lys Ala Pro Val Ser Phe Ser

145 150 155 160

Lys Val Lys Leu Thr Asn Lys Leu Asn Gly Gly Gly Gln Ile Met Leu

165 170 175

Asn Ser Leu His Lys Tyr Glu Pro Arg Ile His Ile Val Arg Val Gly

180 185 190

Gly Pro Gln Arg Met Ile Thr Ser His Cys Phe Pro Glu Thr Gln Phe

195 200 205

Ile Ala Val Thr Ala Tyr Gln Asn Glu Glu Ile Thr Ala Leu Lys Ile

210 215 220

Lys Tyr Asn Pro Phe Ala Lys Ala Phe Leu Asp Ala Lys Glu Arg Ser

225 230 235 240

Asp His Lys Glu Met Met Glu Glu Pro Gly Asp Ser Gln Gln Pro Gly

245 250 255

Tyr Ser Gln Trp Gly Trp Leu Leu Pro Gly Thr Ser Thr Leu Cys Pro

260 265 270

Pro Ala Asn Pro His Pro Gln Phe Gly Gly Ala Leu Ser Leu Pro Ser

275 280 285

Thr His Ser Cys Asp Arg Tyr Pro Thr Leu Arg Ser His Arg Ser Ser

290 295 300

Pro Tyr Pro Ser Pro Tyr Ala His Arg Asn Asn Ser Pro Thr Tyr Ser

305 310 315 320

Asp Asn Ser Pro Ala Cys Leu Ser Met Leu Gln Ser His Asp Asn Trp

325 330 335

Ser Ser Leu Gly Met Pro Ala His Pro Ser Met Leu Pro Val Ser His

340 345 350

Asn Ala Ser Pro Pro Thr Ser Ser Ser Gln Tyr Pro Ser Leu Trp Ser

355 360 365

Val Ser Asn Gly Ala Val Thr Pro Gly Ser Gln Ala Ala Ala Val Ser

370 375 380

Asn Gly Leu Gly Ala Gln Phe Phe Arg Gly Ser Pro Ala His Tyr Thr

385 390 395 400

Pro Leu Thr His Pro Val Ser Ala Pro Ser Ser Ser Gly Ser Pro Leu

405 410 415

Tyr Glu Gly Ala Ala Ala Ala Thr Asp Ile Val Asp Ser Gln Tyr Asp

420 425 430

Ala Ala Ala Gln Gly Arg Leu Ile Ala Ser Trp Thr Pro Val Ser Pro

435 440 445

Pro Ser Met

450

<210> 68

<211> 1353

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Кодирующая последовательность, кодирующая слитый белок, содержащий изоформу 1 белка Brachyury, плюс добавление 42 нуклеотидов из гена FPV  088 и atc

<400> 68

atgagtaaga aacaagtaaa aactcaaagt aaatgtaata atatcatgag ctcccctggc 60

accgagagcg cgggaaagag cctgcagtac cgagtggacc acctgctgag cgccgtggag 120

aatgagctgc aggcgggcag cgagaagggc gaccccacag agcgcgaact gcgcgtgggc 180

ctggaggaga gcgagctgtg gctgcgcttc aaggagctca ccaatgagat gatcgtgacc 240

aagaacggca ggaggatgtt tccggtgctg aaggtgaacg tgtctggcct ggaccccaac 300

gccatgtact ccttcctgct ggacttcgtg gcggcggaca accaccgctg gaagtacgtg 360

aacggggaat gggtgccggg gggcaagccg gagccgcagg cgcccagctg cgtctacatc 420

caccccgact cgcccaactt cggggcccac tggatgaagg ctcccgtctc cttcagcaaa 480

gtcaagctca ccaacaagct caacggaggg ggccagatca tgctgaactc cttgcataag 540

tatgagcctc gaatccacat agtgagagtt gggggtccac agcgcatgat caccagccac 600

tgcttccctg agacccagtt catagcggtg actgcttatc agaacgagga gatcacagct 660

cttaaaatta agtacaatcc atttgcaaaa gctttccttg atgcaaagga aagaagtgat 720

cacaaagaga tgatggagga acccggagac agccagcaac ctgggtactc ccaatggggg 780

tggcttcttc ctggaaccag caccgtttgt ccacctgcaa atcctcatcc tcagtttgga 840

ggtgccctct ccctcccctc cacgcacagc tgtgacaggt acccaaccct gaggagccac 900

cggtcctcac cctaccccag cccctatgct catcggaaca attctccaac ctattctgac 960

aactcacctg catgtttatc catgctgcaa tcccatgaca attggtccag ccttggaatg 1020

cctgcccatc ccagcatgct ccccgtgagc cacaatgcca gcccacctac cagctccagt 1080

cagtacccca gcctgtggtc tgtgagcaac ggcgccgtca ccccgggctc ccaggcagca 1140

gccgtgtcca acgggctggg ggcccagttc ttccggggct cccccgcgca ctacacaccc 1200

ctcacccatc cggtctcggc gccctcttcc tcgggatccc cactgtacga aggggcggcc 1260

gcggccacag acatcgtgga cagccagtac gacgccgcag cccaaggccg cctcatagcc 1320

tcatggacac ctgtgtcgcc accttccatg tga 1353

<210> 69

<211> 1350

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Кодирующая последовательность, кодирующая слитый белок, содержащий изоформу 1 белка Brachyury, плюс добавление 42 нуклеотидов из гена FPV 088 и atc, без инициирующего кодона atg Brachyury

<400> 69

atgagtaaga aacaagtaaa aactcaaagt aaatgtaata atatcagctc ccctggcacc 60

gagagcgcgg gaaagagcct gcagtaccga gtggaccacc tgctgagcgc cgtggagaat 120

gagctgcagg cgggcagcga gaagggcgac cccacagagc gcgaactgcg cgtgggcctg 180

gaggagagcg agctgtggct gcgcttcaag gagctcacca atgagatgat cgtgaccaag 240

aacggcagga ggatgtttcc ggtgctgaag gtgaacgtgt ctggcctgga ccccaacgcc 300

atgtactcct tcctgctgga cttcgtggcg gcggacaacc accgctggaa gtacgtgaac 360

ggggaatggg tgccgggggg caagccggag ccgcaggcgc ccagctgcgt ctacatccac 420

cccgactcgc ccaacttcgg ggcccactgg atgaaggctc ccgtctcctt cagcaaagtc 480

aagctcacca acaagctcaa cggagggggc cagatcatgc tgaactcctt gcataagtat 540

gagcctcgaa tccacatagt gagagttggg ggtccacagc gcatgatcac cagccactgc 600

ttccctgaga cccagttcat agcggtgact gcttatcaga acgaggagat cacagctctt 660

aaaattaagt acaatccatt tgcaaaagct ttccttgatg caaaggaaag aagtgatcac 720

aaagagatga tggaggaacc cggagacagc cagcaacctg ggtactccca atgggggtgg 780

cttcttcctg gaaccagcac cgtttgtcca cctgcaaatc ctcatcctca gtttggaggt 840

gccctctccc tcccctccac gcacagctgt gacaggtacc caaccctgag gagccaccgg 900

tcctcaccct accccagccc ctatgctcat cggaacaatt ctccaaccta ttctgacaac 960

tcacctgcat gtttatccat gctgcaatcc catgacaatt ggtccagcct tggaatgcct 1020

gcccatccca gcatgctccc cgtgagccac aatgccagcc cacctaccag ctccagtcag 1080

taccccagcc tgtggtctgt gagcaacggc gccgtcaccc cgggctccca ggcagcagcc 1140

gtgtccaacg ggctgggggc ccagttcttc cggggctccc ccgcgcacta cacacccctc 1200

acccatccgg tctcggcgcc ctcttcctcg ggatccccac tgtacgaagg ggcggccgcg 1260

gccacagaca tcgtggacag ccagtacgac gccgcagccc aaggccgcct catagcctca 1320

tggacacctg tgtcgccacc ttccatgtga 1350

<210> 70

<211> 450

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Слитый белок, содержащий изоформу 1 белка Brachyury, кодируемый SEQ ID NO:68

<400> 70

Met Ser Lys Lys Gln Val Lys Thr Gln Ser Lys Cys Asn Asn Ile Met

1 5 10 15

Ser Ser Pro Gly Thr Glu Ser Ala Gly Lys Ser Leu Gln Tyr Arg Val

20 25 30

Asp His Leu Leu Ser Ala Val Glu Asn Glu Leu Gln Ala Gly Ser Glu

35 40 45

Lys Gly Asp Pro Thr Glu Arg Glu Leu Arg Val Gly Leu Glu Glu Ser

50 55 60

Glu Leu Trp Leu Arg Phe Lys Glu Leu Thr Asn Glu Met Ile Val Thr

65 70 75 80

Lys Asn Gly Arg Arg Met Phe Pro Val Leu Lys Val Asn Val Ser Gly

85 90 95

Leu Asp Pro Asn Ala Met Tyr Ser Phe Leu Leu Asp Phe Val Ala Ala

100 105 110

Asp Asn His Arg Trp Lys Tyr Val Asn Gly Glu Trp Val Pro Gly Gly

115 120 125

Lys Pro Glu Pro Gln Ala Pro Ser Cys Val Tyr Ile His Pro Asp Ser

130 135 140

Pro Asn Phe Gly Ala His Trp Met Lys Ala Pro Val Ser Phe Ser Lys

145 150 155 160

Val Lys Leu Thr Asn Lys Leu Asn Gly Gly Gly Gln Ile Met Leu Asn

165 170 175

Ser Leu His Lys Tyr Glu Pro Arg Ile His Ile Val Arg Val Gly Gly

180 185 190

Pro Gln Arg Met Ile Thr Ser His Cys Phe Pro Glu Thr Gln Phe Ile

195 200 205

Ala Val Thr Ala Tyr Gln Asn Glu Glu Ile Thr Ala Leu Lys Ile Lys

210 215 220

Tyr Asn Pro Phe Ala Lys Ala Phe Leu Asp Ala Lys Glu Arg Ser Asp

225 230 235 240

His Lys Glu Met Met Glu Glu Pro Gly Asp Ser Gln Gln Pro Gly Tyr

245 250 255

Ser Gln Trp Gly Trp Leu Leu Pro Gly Thr Ser Thr Leu Cys Pro Pro

260 265 270

Ala Asn Pro His Pro Gln Phe Gly Gly Ala Leu Ser Leu Pro Ser Thr

275 280 285

His Ser Cys Asp Arg Tyr Pro Thr Leu Arg Ser His Arg Ser Ser Pro

290 295 300

Tyr Pro Ser Pro Tyr Ala His Arg Asn Asn Ser Pro Thr Tyr Ser Asp

305 310 315 320

Asn Ser Pro Ala Cys Leu Ser Met Leu Gln Ser His Asp Asn Trp Ser

325 330 335

Ser Leu Gly Met Pro Ala His Pro Ser Met Leu Pro Val Ser His Asn

340 345 350

Ala Ser Pro Pro Thr Ser Ser Ser Gln Tyr Pro Ser Leu Trp Ser Val

355 360 365

Ser Asn Gly Ala Val Thr Pro Gly Ser Gln Ala Ala Ala Val Ser Asn

370 375 380

Gly Leu Gly Ala Gln Phe Phe Arg Gly Ser Pro Ala His Tyr Thr Pro

385 390 395 400

Leu Thr His Pro Val Ser Ala Pro Ser Ser Ser Gly Ser Pro Leu Tyr

405 410 415

Glu Gly Ala Ala Ala Ala Thr Asp Ile Val Asp Ser Gln Tyr Asp Ala

420 425 430

Ala Ala Gln Gly Arg Leu Ile Ala Ser Trp Thr Pro Val Ser Pro Pro

435 440 445

Ser Met

450

<210> 71

<211> 449

<212> Белок

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Слитый белок, содержащий изоформу 1 белка Brachyury, кодируемый

SEQ ID NO:69

<400> 71

Met Ser Lys Lys Gln Val Lys Thr Gln Ser Lys Cys Asn Asn Ile Ser

1 5 10 15

Ser Pro Gly Thr Glu Ser Ala Gly Lys Ser Leu Gln Tyr Arg Val Asp

20 25 30

His Leu Leu Ser Ala Val Glu Asn Glu Leu Gln Ala Gly Ser Glu Lys

35 40 45

Gly Asp Pro Thr Glu Arg Glu Leu Arg Val Gly Leu Glu Glu Ser Glu

50 55 60

Leu Trp Leu Arg Phe Lys Glu Leu Thr Asn Glu Met Ile Val Thr Lys

65 70 75 80

Asn Gly Arg Arg Met Phe Pro Val Leu Lys Val Asn Val Ser Gly Leu

85 90 95

Asp Pro Asn Ala Met Tyr Ser Phe Leu Leu Asp Phe Val Ala Ala Asp

100 105 110

Asn His Arg Trp Lys Tyr Val Asn Gly Glu Trp Val Pro Gly Gly Lys

115 120 125

Pro Glu Pro Gln Ala Pro Ser Cys Val Tyr Ile His Pro Asp Ser Pro

130 135 140

Asn Phe Gly Ala His Trp Met Lys Ala Pro Val Ser Phe Ser Lys Val

145 150 155 160

Lys Leu Thr Asn Lys Leu Asn Gly Gly Gly Gln Ile Met Leu Asn Ser

165 170 175

Leu His Lys Tyr Glu Pro Arg Ile His Ile Val Arg Val Gly Gly Pro

180 185 190

Gln Arg Met Ile Thr Ser His Cys Phe Pro Glu Thr Gln Phe Ile Ala

195 200 205

Val Thr Ala Tyr Gln Asn Glu Glu Ile Thr Ala Leu Lys Ile Lys Tyr

210 215 220

Asn Pro Phe Ala Lys Ala Phe Leu Asp Ala Lys Glu Arg Ser Asp His

225 230 235 240

Lys Glu Met Met Glu Glu Pro Gly Asp Ser Gln Gln Pro Gly Tyr Ser

245 250 255

Gln Trp Gly Trp Leu Leu Pro Gly Thr Ser Thr Leu Cys Pro Pro Ala

260 265 270

Asn Pro His Pro Gln Phe Gly Gly Ala Leu Ser Leu Pro Ser Thr His

275 280 285

Ser Cys Asp Arg Tyr Pro Thr Leu Arg Ser His Arg Ser Ser Pro Tyr

290 295 300

Pro Ser Pro Tyr Ala His Arg Asn Asn Ser Pro Thr Tyr Ser Asp Asn

305 310 315 320

Ser Pro Ala Cys Leu Ser Met Leu Gln Ser His Asp Asn Trp Ser Ser

325 330 335

Leu Gly Met Pro Ala His Pro Ser Met Leu Pro Val Ser His Asn Ala

340 345 350

Ser Pro Pro Thr Ser Ser Ser Gln Tyr Pro Ser Leu Trp Ser Val Ser

355 360 365

Asn Gly Ala Val Thr Pro Gly Ser Gln Ala Ala Ala Val Ser Asn Gly

370 375 380

Leu Gly Ala Gln Phe Phe Arg Gly Ser Pro Ala His Tyr Thr Pro Leu

385 390 395 400

Thr His Pro Val Ser Ala Pro Ser Ser Ser Gly Ser Pro Leu Tyr Glu

405 410 415

Gly Ala Ala Ala Ala Thr Asp Ile Val Asp Ser Gln Tyr Asp Ala Ala

420 425 430

Ala Gln Gly Arg Leu Ile Ala Ser Trp Thr Pro Val Ser Pro Pro Ser

435 440 445

Met

<210> 72

<211> 1516

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Экспрессионная кассета, обнаруженная в mBN345 -промотор + кДНК, кодирующая

       слитый белок, содержащий белок Brachyury (L254V)

<400> 72

atccgtacag gtttgtttct gaaattcact ttgtaagata cataattaac aaattcaggg 60

ggaaaaatct ttacaaaatt agtatagaag ctatagatat atcaaaaggt agacaacaaa 120

taatcagaac ctaatttttt tatcaaaaaa ttaaaatata aataaaatga aaaataactt 180

gtatgaagaa aaaatgaaca tgagtaagaa aagctcccct ggcaccgaga gcgcgggaaa 240

gagcctgcag taccgagtgg accacctgct gagcgccgtg gagaatgagc tgcaggcggg 300

cagcgagaag ggcgacccca cagagcgcga actgcgcgtg ggcctggagg agagcgagct 360

gtggctgcgc ttcaaggagc tcaccaatga gatgatcgtg accaagaacg gcaggaggat 420

gtttccggtg ctgaaggtga acgtgtctgg cctggacccc aacgccatgt actccttcct 480

gctggacttc gtggcggcgg acaaccaccg ctggaagtac gtgaacgggg aatgggtgcc 540

ggggggcaag ccggagccgc aggcgcccag ctgcgtctac atccaccccg actcgcccaa 600

cttcggggcc cactggatga aggctcccgt ctccttcagc aaagtcaagc tcaccaacaa 660

gctcaacgga gggggccaga tcatgctgaa ctccttgcat aagtatgagc ctcgaatcca 720

catagtgaga gttgggggtc cacagcgcat gatcaccagc cactgcttcc ctgagaccca 780

gttcatagcg gtgactgctt atcagaacga ggagatcaca gctcttaaaa ttaagtacaa 840

tccatttgca aaggctttcc ttgatgcaaa ggaaagaagt gatcacaaag agatgatgga 900

ggaacccgga gacagccagc aacctgggta ctcccaatgg gggtggcttc ttcctggaac 960

cagcaccgtt tgtccacctg caaatcctca tcctcagttt ggaggtgccc tctccctccc 1020

ctccacgcac agctgtgaca ggtacccaac cctgaggagc caccggtcct caccctaccc 1080

cagcccctat gctcatcgga acaattctcc aacctattct gacaactcac ctgcatgttt 1140

atccatgctg caatcccatg acaattggtc cagccttgga atgcctgccc atcccagcat 1200

gctccccgtg agccacaatg ccagcccacc taccagctcc agtcagtacc ccagcctgtg 1260

gtctgtgagc aacggcgccg tcaccccggg ctcccaggca gcagccgtgt ccaacgggct 1320

gggggcccag ttcttccggg gctcccccgc gcactacaca cccctcaccc atccggtctc 1380

ggcgccctct tcctcgggat ccccactgta cgaaggggcg gccgcggcca cagacatcgt 1440

ggacagccag tacgacgccg cagcccaagg ccgcctcata gcctcatgga cacctgtgtc 1500

gccaccttcc atgtga 1516

<210> 73

<211> 1552

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Экспрессионная кассета, обнаруженная в mBN355 - промотор+ кДНК, кодирующая слитый белок, содержащий белок Brachyury (L254V)

<400> 73

atccgtacag gtttgtttct gaaattcact ttgtaagata cataattaac aaattcaggg 60

ggaaaaatct ttacaaaatt agtatagaag ctatagatat atcaaaaggt agacaacaaa 120

taatcagaac ctaatttttt tatcaaaaaa ttaaaatata aataaaatga aaaataactt 180

gtatgaagaa aaaatgaaca tgagtaagaa acaagtaaaa actcaaagta aatgtaataa 240

tatcatgagc tcccctggca ccgagagcgc gggaaagagc ctgcagtacc gagtggacca 300

cctgctgagc gccgtggaga atgagctgca ggcgggcagc gagaagggcg accccacaga 360

gcgcgaactg cgcgtgggcc tggaggagag cgagctgtgg ctgcgcttca aggagctcac 420

caatgagatg atcgtgacca agaacggcag gaggatgttt ccggtgctga aggtgaacgt 480

gtctggcctg gaccccaacg ccatgtactc cttcctgctg gacttcgtgg cggcggacaa 540

ccaccgctgg aagtacgtga acggggaatg ggtgccgggg ggcaagccgg agccgcaggc 600

gcccagctgc gtctacatcc accccgactc gcccaacttc ggggcccact ggatgaaggc 660

tcccgtctcc ttcagcaaag tcaagctcac caacaagctc aacggagggg gccagatcat 720

gctgaactcc ttgcataagt atgagcctcg aatccacata gtgagagttg ggggtccaca 780

gcgcatgatc accagccact gcttccctga gacccagttc atagcggtga ctgcttatca 840

gaacgaggag atcacagctc ttaaaattaa gtacaatcca tttgcaaagg ctttccttga 900

tgcaaaggaa agaagtgatc acaaagagat gatggaggaa cccggagaca gccagcaacc 960

tgggtactcc caatgggggt ggcttcttcc tggaaccagc accgtttgtc cacctgcaaa 1020

tcctcatcct cagtttggag gtgccctctc cctcccctcc acgcacagct gtgacaggta 1080

cccaaccctg aggagccacc ggtcctcacc ctaccccagc ccctatgctc atcggaacaa 1140

ttctccaacc tattctgaca actcacctgc atgtttatcc atgctgcaat cccatgacaa 1200

ttggtccagc cttggaatgc ctgcccatcc cagcatgctc cccgtgagcc acaatgccag 1260

cccacctacc agctccagtc agtaccccag cctgtggtct gtgagcaacg gcgccgtcac 1320

cccgggctcc caggcagcag ccgtgtccaa cgggctgggg gcccagttct tccggggctc 1380

ccccgcgcac tacacacccc tcacccatcc ggtctcggcg ccctcttcct cgggatcccc 1440

actgtacgaa ggggcggccg cggccacaga catcgtggac agccagtacg acgccgcagc 1500

ccaaggccgc ctcatagcct catggacacc tgtgtcgcca ccttccatgt ga 1552

<210> 74

<211> 1464

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Экспрессионная кассета, обнаруженная в mBN343 - промотор + кДНК, кодирующая слитый белок, содержащий белок Brachyury (L254V)

<400> 74

taatgtatag aactaattta taataaacat agtaaatatg ggtaacttct taatagccat 60

aattaaaatt gaaaaaaaaa tatcattata aaacgtaaac gaacaaaaaa cattaattga 120

tcccccccct gtctcccccc tccagattga gcaatcatga gctcccctgg caccgagagc 180

gcgggaaaga gcctgcagta ccgagtggac cacctgctga gcgccgtgga gaatgagctg 240

caggcgggca gcgagaaggg cgaccccaca gagcgcgaac tgcgcgtggg cctggaggag 300

agcgagctgt ggctgcgctt caaggagctc accaatgaga tgatcgtgac caagaacggc 360

aggaggatgt ttccggtgct gaaggtgaac gtgtctggcc tggaccccaa cgccatgtac 420

tccttcctgc tggacttcgt ggcggcggac aaccaccgct ggaagtacgt gaacggggaa 480

tgggtgccgg ggggcaagcc ggagccgcag gcgcccagct gcgtctacat ccaccccgac 540

tcgcccaact tcggggccca ctggatgaag gctcccgtct ccttcagcaa agtcaagctc 600

accaacaagc tcaacggagg gggccagatc atgctgaact ccttgcataa gtatgagcct 660

cgaatccaca tagtgagagt tgggggtcca cagcgcatga tcaccagcca ctgcttccct 720

gagacccagt tcatagcggt gactgcttat cagaacgagg agatcacagc tcttaaaatt 780

aagtacaatc catttgcaaa ggctttcctt gatgcaaagg aaagaagtga tcacaaagag 840

atgatggagg aacccggaga cagccagcaa cctgggtact cccaatgggg gtggcttctt 900

cctggaacca gcaccgtttg tccacctgca aatcctcatc ctcagtttgg aggtgccctc 960

tccctcccct ccacgcacag ctgtgacagg tacccaaccc tgaggagcca ccggtcctca 1020

ccctacccca gcccctatgc tcatcggaac aattctccaa cctattctga caactcacct 1080

gcatgtttat ccatgctgca atcccatgac aattggtcca gccttggaat gcctgcccat 1140

cccagcatgc tccccgtgag ccacaatgcc agcccaccta ccagctccag tcagtacccc 1200

agcctgtggt ctgtgagcaa cggcgccgtc accccgggct cccaggcagc agccgtgtcc 1260

aacgggctgg gggcccagtt cttccggggc tcccccgcgc actacacacc cctcacccat 1320

ccggtctcgg cgccctcttc ctcgggatcc ccactgtacg aaggggcggc cgcggccaca 1380

gacatcgtgg acagccagta cgacgccgca gcccaaggcc gcctcatagc ctcatggaca 1440

cctgtgtcgc caccttccat gtga 1464

<210> 75

<211> 1478

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Экспрессионная кассета, обнаруженная в mBN343 - промотор + кДНК,

кодирующая слитый белок, содержащий белок Brachyury (L254V)

<400> 75

tatccgtaca ggtttgtttc tgaaattcac tttgtaagat acataattaa caaattcagg 60

gggaaaaatc tttacaaaat tagtatagaa gctatagata tatcaaaagg tagacaacaa 120

ataatcagaa cctaattttt ttatcaaaaa attaaaatat aaataaaatc atgagctccc 180

ctggcaccga gagcgcggga aagagcctgc agtaccgagt ggaccacctg ctgagcgccg 240

tggagaatga gctgcaggcg ggcagcgaga agggcgaccc cacagagcgc gaactgcgcg 300

tgggcctgga ggagagcgag ctgtggctgc gcttcaagga gctcaccaat gagatgatcg 360

tgaccaagaa cggcaggagg atgtttccgg tgctgaaggt gaacgtgtct ggcctggacc 420

ccaacgccat gtactccttc ctgctggact tcgtggcggc ggacaaccac cgctggaagt 480

acgtgaacgg ggaatgggtg ccggggggca agccggagcc gcaggcgccc agctgcgtct 540

acatccaccc cgactcgccc aacttcgggg cccactggat gaaggctccc gtctccttca 600

gcaaagtcaa gctcaccaac aagctcaacg gagggggcca gatcatgctg aactccttgc 660

ataagtatga gcctcgaatc cacatagtga gagttggggg tccacagcgc atgatcacca 720

gccactgctt ccctgagacc cagttcatag cggtgactgc ttatcagaac gaggagatca 780

cagctcttaa aattaagtac aatccatttg caaaggcttt ccttgatgca aaggaaagaa 840

gtgatcacaa agagatgatg gaggaacccg gagacagcca gcaacctggg tactcccaat 900

gggggtggct tcttcctgga accagcaccg tttgtccacc tgcaaatcct catcctcagt 960

ttggaggtgc cctctccctc ccctccacgc acagctgtga caggtaccca accctgagga 1020

gccaccggtc ctcaccctac cccagcccct atgctcatcg gaacaattct ccaacctatt 1080

ctgacaactc acctgcatgt ttatccatgc tgcaatccca tgacaattgg tccagccttg 1140

gaatgcctgc ccatcccagc atgctccccg tgagccacaa tgccagccca cctaccagct 1200

ccagtcagta ccccagcctg tggtctgtga gcaacggcgc cgtcaccccg ggctcccagg 1260

cagcagccgt gtccaacggg ctgggggccc agttcttccg gggctccccc gcgcactaca 1320

cacccctcac ccatccggtc tcggcgccct cttcctcggg atccccactg tacgaagggg 1380

cggccgcggc cacagacatc gtggacagcc agtacgacgc cgcagcccaa ggccgcctca 1440

tagcctcatg gacacctgtg tcgccacctt ccatgtga 1478

<210> 76

<211> 1486

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Экспрессионная кассета, обнаруженная в mBN343 - промотор + кДНК,

кодирующая слитый белок, содержащий белок Brachyury (L254V)

<400> 76

atccgtacag gtttgtttct gaaattcact ttgtaagata cataattaac aaattcaggg 60

ggaaaaatct ttacaaaatt agtatagaag ctatagatat atcaaaaggt agacaacaaa 120

taatcagaac ctaatttttt tatcaaaaaa ttaaaatata aataaaatga aaaataactt 180

gagctcccct ggcaccgaga gcgcgggaaa gagcctgcag taccgagtgg accacctgct 240

gagcgccgtg gagaatgagc tgcaggcggg cagcgagaag ggcgacccca cagagcgcga 300

actgcgcgtg ggcctggagg agagcgagct gtggctgcgc ttcaaggagc tcaccaatga 360

gatgatcgtg accaagaacg gcaggaggat gtttccggtg ctgaaggtga acgtgtctgg 420

cctggacccc aacgccatgt actccttcct gctggacttc gtggcggcgg acaaccaccg 480

ctggaagtac gtgaacgggg aatgggtgcc ggggggcaag ccggagccgc aggcgcccag 540

ctgcgtctac atccaccccg actcgcccaa cttcggggcc cactggatga aggctcccgt 600

ctccttcagc aaagtcaagc tcaccaacaa gctcaacgga gggggccaga tcatgctgaa 660

ctccttgcat aagtatgagc ctcgaatcca catagtgaga gttgggggtc cacagcgcat 720

gatcaccagc cactgcttcc ctgagaccca gttcatagcg gtgactgctt atcagaacga 780

ggagatcaca gctcttaaaa ttaagtacaa tccatttgca aaggctttcc ttgatgcaaa 840

ggaaagaagt gatcacaaag agatgatgga ggaacccgga gacagccagc aacctgggta 900

ctcccaatgg gggtggcttc ttcctggaac cagcaccgtt tgtccacctg caaatcctca 960

tcctcagttt ggaggtgccc tctccctccc ctccacgcac agctgtgaca ggtacccaac 1020

cctgaggagc caccggtcct caccctaccc cagcccctat gctcatcgga acaattctcc 1080

aacctattct gacaactcac ctgcatgttt atccatgctg caatcccatg acaattggtc 1140

cagccttgga atgcctgccc atcccagcat gctccccgtg agccacaatg ccagcccacc 1200

taccagctcc agtcagtacc ccagcctgtg gtctgtgagc aacggcgccg tcaccccggg 1260

ctcccaggca gcagccgtgt ccaacgggct gggggcccag ttcttccggg gctcccccgc 1320

gcactacaca cccctcaccc atccggtctc ggcgccctct tcctcgggat ccccactgta 1380

cgaaggggcg gccgcggcca cagacatcgt ggacagccag tacgacgccg cagcccaagg 1440

ccgcctcata gcctcatgga cacctgtgtc gccaccttcc atgtga 1486

<210> 77

<211> 182

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Промоторная последовательность с нуклеотидами 5' гена FPV 088 + 15

нуклеотидов

<400> 77

tatccgtaca ggtttgtttc tgaaattcac tttgtaagat acataattaa caaattcagg 60

gggaaaaatc tttacaaaat tagtatagaa gctatagata tatcaaaagg tagacaacaa 120

ataatcagaa cctaattttt ttatcaaaaa attaaaatat aaataaaatg aaaaataact 180

tg 182

<---

1. Экспрессионная кассета для экспрессии кодирующей последовательности Brachyury в векторе, где экспрессионная кассета содержит:

(а) последовательность нуклеиновой кислоты, содержащую промотор, активный в качестве промотора поксвируса и содержащий последовательность, представленную в SEQ ID NO: 9, или содержащий подпоследовательность SEQ ID NO: 9, которая содержит любую из SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7 и SEQ ID NO: 8, и

(b) гетерологичную кодирующую последовательность, которая кодирует антиген Brachyury, функционально связанную с промотором для кодирования слитого белка, содержащего антиген Brachyury, причем экспрессия кодирующей последовательности контролируется промотором.

2. Экспрессионная кассета по п.1, в которой подпоследовательность SEQ ID NO: 9 содержит SEQ ID NO: 4.

3. Экспрессионная кассета по п.1, в которой подпоследовательность SEQ ID NO: 9 содержит SEQ ID NO: 5.

4. Экспрессионная кассета по п.1, в которой подпоследовательность SEQ ID NO: 9 содержит SEQ ID NO: 6.

5. Экспрессионная кассета по п.1, в которой антиген Brachyury содержит мутацию L254V.

6. Экспрессионная кассета по п.1, в которой кодирующая последовательность кодирует антиген Brachyury, имеющий последовательность, представленную в SEQ ID NO: 11 или SEQ ID NO:13.

7. Экспрессионная кассета по п.1, в которой кодирующая последовательность кодирует антиген Brachyury, содержащий последовательность, представленную в SEQ ID NO: 18.

8. Экспрессионная кассета по п.1, в которой кодирующая последовательность кодирует антиген Brachyury, содержащий последовательность, представленную в SEQ ID NO: 19.

9. Экспрессионная кассета по п.1, в которой кодирующая последовательность кодирует антиген Brachyury, содержащий последовательность, представленную в любой из: SEQ ID NO: 11, 13, 18-19, 22-23, 26-27, 30-31, 34-35, 38-39, 42-43, 46-47, 50-51, 54-55, 58-59, 62-63, 66-67, 70 или 71.

10. Экспрессионная кассета по п.1, содержащая нуклеиновую кислоту, имеющую по меньшей мере 90% идентичности последовательности с любой SEQ ID NO:72 или SEQ ID NO: 73.

11. Поксвирусный вектор для экспрессии кодирующей последовательности Brachyury, содержащий экспрессионную кассету по п.1.

12. Поксвирусный вектор по п.11, где поксвирус представляет собой авипоксвирус.

13. Поксвирусный вектор по п.12, где авипоксвирус представляет собой вирус оспы кур.

14. Способ экспрессии последовательности, кодирующей антиген Brachyury, в векторе, включающий:

a) получение промотора, активного в качестве промотора поксвируса и содержащего последовательность нуклеиновой кислоты, представленную в SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:5 или SEQ ID NO:4;

b) функциональное связывание промотора с гетерологичной кодирующей последовательностью, которая кодирует антиген Brachyury, для кодирования слитого белка, содержащего антиген Brachyury; и

c) введение промотора и кодирующей последовательности в вектор.

15. Способ по п.14, в котором промотор поксвируса содержит последовательность нуклеиновой кислоты, представленную в SEQ ID NO: 9.

16. Способ по п.15, в котором промотор поксвируса содержит последовательность нуклеиновой кислоты, представленную в SEQ ID NO: 4.

17. Способ по п.14, в котором вектор представляет собой вирусный вектор, выбранный из ортопоксвируса и авипоксвируса.

18. Способ по п.17, в котором вектор представляет собой авипоксвирус, который представляет собой вирус оспы кур.