Новое соединение, способ его получения и применение
Изобретение относится к соединению, имеющему структуру:
. Изобретение также относится к способу получения указанного соединения путем экстракции и выделения из Limax посредством сверхкритической экстракции СО2 или экстракции растворителем. Технический результат – получено новое соединение, которое может найти применение в медицине в качестве лекарственного средства для подавления симптомов синдрома отмены у морфинзависимых животных. 3 н. и 12 з.п. ф-лы, 8 ил., 5 табл., 10 пр.
Область техники, к которой относится изобретение
Изобретение относится к области биомедицинской химии, в том числе, к новому соединению, способу его получения и его применению. Предшествующий уровень техники
Наркотики относятся к лекарственным средствам, которые используются многократно и постоянно в немедицинских целях и могут вызвать зависимость (например, привыкание). Количество наркоманов растет, и их возраст становится моложе. Только в Китае насчитывается более 14 миллионов наркоманов, а во всем мире их число составляет более 200-400 миллионов. Наркотики становятся все более и более вредными для мира, а их виды становятся все более разнообразными: от опиума и марихуаны до героина, кетамина, метамфетамина и т.д. Распространение наркотиков ставит под угрозу физическое и психическое здоровье людей, и несет огромную угрозу экономическому развитию и социальному прогрессу.
Детоксикация означает отказ наркоманов от приема и употребления инъекционных наркотиков и наркотической зависимости. Детоксикационное лечение наркоманов обычно должно включать 3 этапа: детоксикация, реабилитация и консультирование по возвращению в общество. В настоящее время существует 3 широко используемых способа детоксикации: естественная отмена, отмена с помощью лекарственных препаратов и немедикаментозная отмена. Способ естественной отмены является принудительным способом детоксикации и лишен человечности. Способ отмены помощью лекарственных препаратов, также известный как медикаментозная детоксикационная терапия, относится к способу детоксикации, в котором наркоманам предоставляется лекарство отмены для облегчения и уменьшения симптомов отмены путем замены и уменьшения дозировки и постепенного достижения детоксикации, которая является наиболее важным способом детоксикации. Общепринятые препараты для детоксикации также можно разделить на 3 категории: опиоидные химические вещества, неопиоидные химические вещества и лекарства традиционной китайской медицины. Однако ни один из этих способов детоксикации не может помочь наркоманам избавиться от наркотиков физически и психологически, и они склонны к ошибкам и рецидивам. На сегодняшний день решения данной проблемы отсутствуют. Таким образом, детоксикация и контроль наркотиков стали всемирной проблемой. По этой причине люди пытались найти безопасный препарат для детоксикации, не вызывающий зависимости.
Лекарства традиционной китайской медицины имеют долгую историю в детоксикации. По сравнению с наиболее часто используемыми в заместительной терапии веществами, такими как метадон и налтрексон (оба являются опиоидными химическими веществами), они имеют преимущества: хорошее соблюдение режима лечения, отсутствие зависимости, заметная эффективность при затяжных симптомах и высокий уровень этики (доля наркоманов, у которых после детоксикации не наблюдается рецидивов). В настоящее время лекарства традиционной китайской медицины, используемые при детоксикации, в основном представляют собой сложные препараты, разработанные на основе традиционных рецептов детоксикации. Они включают комплекс эффективных активных ингредиентов, и их механизм детоксикации невозможно точно определить. Кроме того, существует мало исследований по фармакологии и токсикологии, что ограничивает научность, стандартизацию и интернационализацию препаратов традиционной китайской медицины для детоксикации. Таким образом, исследование активных ингредиентов и механизма детоксикации одного китайского лекарства полезно для использования и разработки детоксикационных препаратов традиционной китайской медицины.
Limax - легочный моллюск, относящийся к брюхоногим моллюскам Gastropoda, Limacidae. Поскольку поверхность его тела покрыта слизью, он широко известен как «липкий червь, слизняк, улитка без панциря, улитка и сидячая улитка». С точки зрения традиционной китайской медицины, Limax «соленый и холодный; действует в меридиане легких, меридиане печени и меридиане толстой кишки». Он обладает эффектом вытеснения воздуха для облегчения судорог, а также отвода тепла и удаления токсичных веществ. Он в основном используется для лечения искривления глаза и рта из-за апоплексии, контрактуры сухожилий и сосудов, детских конвульсий, хрипов, отека глотки, боли в горле, карбункула, подкожного узелка, а также отека и боли из-за геморроя. Традиционная китайская медицина использует Limax для лечения таких заболеваний, как опухоли, астма и бронхит. Существующие исследования показали, что в Limax содержатся различные ингредиенты, такие как белки и полисахариды. Кроме того, фармакологические исследования показали, что Limax играет важную роль в борьбе с опухолями, астмой и т.п. В последние годы исследования эффективности экстракта Limax в основном были сосредоточены на борьбе с опухолями и его влиянии на респираторные заболевания. Среди прочего, исследования его противоопухолевого действия стали объектом притяжения в отечественных и зарубежных исследованиях. Исследуя народные рецепты и секретные рецепты китайской фитотерапии авторы изобретения обнаружили, что экстракт Limax обладает эффективностью при детоксикации, и подвергли его исследованию. Соответствующие активные ингредиенты были извлечены и отделены от экстракта Limax.
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Целью настоящей заявки является представление нового соединения и способа его получения, которые лежат в основе исследования и разработки детоксикационных продуктов традиционной китайской медицины.
В настоящей заявке представлены следующие технические решения:
Предлагается новое соединение, имеющее следующую структуру:
Кроме того, новое соединение раскрывает конфигурации хиральных атомов С: С3, R; С6, S; С7, S; С10, S; С11, R; С12, R; С13, R; С14, R; С15, S; С18, S; С19, S; и С22, R.
Кроме того, новое соединение характеризуется молекулярной формулой: C36H58O10; молекулярной массой: 650; температурой плавления: 228-229°С; и следующими характеристиками растворимости: белые игольчатые кристаллы, нерастворимые в воде, трудно растворимые в кислоте и щелочи, легко растворимые в этилацетате и уксусной кислоте и растворимые в метаноле, этаноле, ацетоне и хлороформе.
Кроме того, новое соединение получают путем экстракции и отделения от Limax, при этом Limax включает один или несколько из Vaginulus alte (Ferussac), Limax maximus L., L. flavus L., Agriolimax agrestis L. и Phiolomycus bilineatus.
Предложен способ получения нового соединения, как описано выше, включающий сверхкритическую экстракцию СО2 и экстракцию растворителем.
Кроме того, в способе получения нового соединения, описанном выше, сверхкритическая экстракция СО2 включает следующие стадии:
R1. сортировка Limax, удаление примесей и измельчение для получения порошка Limax;
R2. помещение порошка Limax в экстрактор для сверхкритической экстракции СО2 для получения экстракта;
R3. добавление растительного масла к экстракту, равномерное нагревание и перемешивание, охлаждение, выдерживание и фильтрование с получением осадка, промывание осадка промывающим растворителем и сушка для получения высушенного осадка; и
R4. добавление растворителя для кристаллизации к высушенному осадку, нагревание для растворения, охлаждение, выдерживание для выпадения осадка в виде белых игольчатых кристаллов и фильтрация с получением кристаллов, перекристаллизация и сушка для получения нового соединения.
Кроме того, в способе получения нового соединения, описанном выше, измельчение на этапе R1 включает измельчение в 10-30 меш.
Кроме того, в способе получения нового соединения, описанном выше, условия сверхкритической экстракции СО2 на стадии R2 включают: давление: 20-30 кПа, температуру: 60-70°С, поток: 400-500 PV и время экстракции: 3-5 ч.
Кроме того, в способе получения нового соединения, описанном выше, растительное масло на стадии R3 представляет собой масло из семян чайного дерева, масло из семян камелии, соевое масло или оливковое масло;
растительное масло добавляют в массовом соотношении «экстракт: растительное масло=2-6:1-3»;
нагревание осуществляется при температуре 60-80°С;
время выдерживания - 7-10 дней; и
промывание включает промывание н-гексаном, петролейным эфиром или бензином 120# от 3 до 5 раз, каждый раз в количестве 200-500 мл.
Кроме того, в способе получения нового соединения, описанном выше, растворитель для кристаллизации на стадии R4 представляет собой метанол, ацетон, этилацетат или хлороформ, добавленные в количестве, в 3-10 раз превышающем массу высушенного осадка; а время выдерживания - 7-10 дней.
Кроме того, в способе получения нового соединения, описанном выше, экстракция растворителем включает следующие стадии:
S1. сортировка Limax, удаление примесей и измельчение для получения порошка Limax;
S2. нагревание с обратным холодильником порошка Limax с растворителем, фильтрование, выдерживание фильтрата и удаление растворителя из фильтрата при пониженном давлении до полного удаления с получением густой пасты;
S3. добавление густой пасты в колонку для хроматографии на силикагеле, элюирование элюентом, сбор элюата и удаление элюента из элюата при пониженном давлении с получением густого вещества; и
S4. добавление растворителя для растворения густого вещества, нагревание до полного растворения, охлаждение и замораживание для осаждения белых кристаллов, фильтрация, выдерживание фильтрата, удаление растворителя из фильтрата при пониженном давлении и повторное выдерживание для выпадения осадка в виде белых игольчатых кристаллов, фильтрование и сушка для получения кристаллов, перекристаллизация и сушка для получения нового соединения.
Кроме того, в способе получения нового соединения, описанном выше, измельчение на стадии S1 включает измельчение в 10-30 меш.
Кроме того, в способе получения нового соединения, описанном выше, растворитель на стадии S2 представляет собой один или несколько, выбранных из этанола, метанола, ацетона, хлороформа, 120# бензина, н-гексана, петролейного эфира, диэтилового эфира и этилацетата; и
экстракция при нагревании с обратным холодильником включает экстракцию при нагревании с обратным холодильником от 1 до 3 раз с растворителем в количестве, в 5-15 раз превышающем вес порошка Limax для каждого раза, в течение 1-3 часов.
Кроме того, в способе получения нового соединения, описанном выше, добавление в колонку для хроматографии на силикагеле на стадии S3, в частности, включает добавление силикагеля к густой пасте в количестве, в 4-6 раз превышающем вес густой пасты, при равномерном перемешивании, и добавление в хроматографическую колонку, предварительно заполненную силикагелем, в количестве, в 2-4 раза превышающем вес густой пасты; и
элюент представляет собой метанол, ацетон или этилацетат, и количество используемого элюента составляет: объем элюирующего растворителя: общая масса силикагеля в хроматографической колонке=1,5-3: 1-2.
Кроме того, в способе получения нового соединения, описанном выше, растворитель для растворения на стадии S4 представляет собой метанол или этанол, добавленный в количестве, в 4-8 раз превышающем объем густого вещества; замораживание осуществляется при температуре 2-10°С в течение 24 часов; удаление растворителя из фильтрата при пониженном давлении включает концентрирование до 50-60% от первоначального объема; а время повторного выдерживания составляет 7-10 дней.
Кроме того, в способе получения нового соединения, описанного выше, перед элюированием элюентом на стадии S3 выполняется стадия предварительного элюирования элюентом, причем растворителем для предварительного элюирования является петролейный эфир, н-гексан или 120# бензин, и количество используемого растворителя для предварительного элюирования составляет: объем растворителя для предварительного элюирования: общая масса силикагеля в хроматографической колонке=1-3: 0,5-1,5.
Предлагается применение вышеупомянутого нового соединения при приготовлении лекарственных средств, здоровой пищи и пищевых продуктов для профилактики или лечения синдрома отмены или симптомов, подобных отмене.
Предлагается применение вышеупомянутого нового соединения при приготовлении лекарств, здоровой пищи и пищи для подавления симптомов синдрома отмены у морфинзависимых животных.
Новое соединение по настоящей заявке получают путем выделения из экстракта традиционной китайской медицины Limax (научное название: Agriolima agrestis) простым способом и после идентификации называют 3,12,13-триацетил лимаксол А с химическим названием (3R, 5aS, 7aS, 8R, 9R, 10R, 10aR, 10bS)-додекагидро-8-((S)-2-гидрокси-4-((1S, 2S, 5R)-1,4,4-триметил-3,8-диокса-бицикло[3.2.1]октан-2-ил)бутан-2-ил)-4,4,7а,10b-тетраметил-1Н-индено[5,4-b]оксепин-3,9,10-триолтриацетат.Фармакологические тесты доказали, что соединение оказывает значительное ингибирующее действие на симптомы синдрома отмены у морфинзависимых животных через 1 час после внутрижелудочного введения и демонстрирует ингибирующую тенденцию даже через 3 часа, что в свою очередь указывает на то, что соединение оказывает значительное влияние на физиологическую или психологическую детоксикацию, и имеет потенциальное прикладное значение при приготовлении лекарств, здоровой пищи и продуктов питания для детоксикации или аналогичного лечения наркотической зависимости.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
ФИГ. 1 показывает рентгеновскую кристаллическую структуру нового соединения в соответствие с настоящей заявкой.
ФИГ. 2 - ФИГ. 5 показывают данные ЯМР - спектров углерода (С) и данные ЯМР -спектров водорода (Н) нового соединения в соответствие с настоящей заявкой.
ФИГ. 6 показывает данные масс-спектрометрии (МС) нового соединения в соответствии с настоящей заявкой.
ФИГ. 7 показывает данные инфракрасной (ИК) спектроскопии нового соединения согласно настоящей заявке.
ФИГ. 8 показывает уровни ингибирования метадоном, экстрактом Limax и различными дозами 3,12,13-триацетил лимаксола А при скачкообразных симптомах синдрома отмены морфина.
где: 1: метадон 20 мг/кг (1 ч);
2: неочищенный экстракт Limax 10 г/кг (1 ч);
3: 3,12,13-триацетил лимаксол А 0,5 г/кг (1 ч);
4: 3,12,13-триацетил лимаксол А 0,25 г/кг (1 ч);
5: 3,12,13-триацетил лимаксол А 0,125 г/кг (1 ч); и
6: 3,12,13-триацетил лимаксол А 0,5 г/кг (3 ч).
ДЕТАЛЬНОЕ ОПИСАНИЕ
I. Новое соединение
Пример 1
Настоящая заявка раскрывает новое соединение, имеющее следующую структуру:
Конкретная информация о соединении заключается в следующем:
(1) Название соединения "3,12,13-триацетил лимаксол А";
(2) Конфигурации соединения с хиральными атомами С включают: С3, R; С6, S; С7, S; С10, S; С11, R; С12, R; С13, R; С14, R; С15, S; С18, S; С19, S; и С22, R с кристаллической структурой, показанной на фиг. 1;
(3) Физико-химические свойства и спектральные данные включают:
молекулярная формула: С36Н58О10; молекулярная масса 650;
состояние: белые игольчатые кристаллы;
температура плавления: 228-229°С;
растворимость: не растворим в воде, трудно растворим в кислотах и щелочах, легко растворим в этилацетате и уксусной кислоте и растворим в метаноле, этаноле, ацетоне и хлороформе;
данные спектров ЯМР углерода (С) и водорода (Н) показаны в таблице 1 и на фиг. 2 - фиг. 5;
данные масс-спектрометрии (МС) показаны на фиг. 6; и
данные инфракрасной (ИК) спектроскопии показаны на фиг. 7.
II. Способ получения нового соединения
Пример 2
Способ получения нового соединения (сверхкритическая экстракция СО2) включает следующие стадии:
R1. Limax, после сортировки и удаления примесей, измельчали в порошок размером 30 меш для дальнейшего использования;
R2. 50 кг порошка Limax помещали в сверхкритический экстрактор СО2 для экстракции в следующих условиях: давление 20 кПа, температура 60°С, поток 400-500 PV, время экстракции 3 часа, и получали 2,9 кг мазе-подобного экстракта для последующего использования;
R3. масло из семян чайного дерева добавляли к экстракту в массовом соотношении «экстракт: масло из семян чайного дерева=2:1», то есть 2,9 кг экстракта и 1,45 кг масла из семян чайного дерева помещали в емкость для смешивания; смесь нагревали до 60°С, равномерно перемешивали, охлаждали и выдерживали 7 дней до выпадения осадка, а затем фильтровали с получением 198 г осадка; осадок промывали петролейным эфиром (200 мл × 3) при нагревании, а затем сушили, получая 123 г осадка; и
R4. осадок добавляли к 800 мл метанола и растворяли при нагревании, охлаждали и выдерживали в течение 7 дней для осаждения белых игольчатых кристаллов, фильтровали с получением кристаллов; соответствующее количество этилацетата добавляли для растворения кристаллов, фильтровали и фильтрат выдерживали в течение 7 дней для осаждения белых игольчатых кристаллов, фильтровали и сушили с получением 95,4 г нового соединения, 3,12,13-триацетил лимаксола А.
Пример 3
Способ получения нового соединения (сверхкритическая экстракция СО2) включает следующие стадии:
R1. Limax, после сортировки и удаления примесей, измельчали в порошок размером 20 меш для дальнейшего использования;
R2. 50 кг порошка Limax помещали в сверхкритический экстрактор СО2 для экстракции в следующих условиях: давление 25 кПа, температура 65°С, поток 400-500 PV, время экстракции 4 часа, и получали 3,5 кг мазе-подобного экстракта для последующего использования;
R3. соевое масло добавляли к экстракту в массовом соотношении «экстракт: соевое масло=4:2», то есть 3,5 кг экстракта и 1,75 кг соевого масла помещали в емкость для смешивания; смесь нагревали до 65°С, равномерно перемешивали, охлаждали и выдерживали 8 дней, а затем фильтровали с получением 235 г осадка; осадок промывали н-гексаном (300 мл × 3), а затем сушили, получая 151 г осадка; и
R4. осадок добавляли к 500 мл этилацетата и растворяли при нагревании, охлаждали и выдерживали в течение 8 дней для осаждения белых игольчатых кристаллов, фильтровали с получением кристаллов; соответствующее количество этилацетата добавляли для растворения кристаллов, фильтровали и фильтрат выдерживали в течение 8 дней для осаждения белых игольчатых кристаллов, фильтровали и сушили с получением 116,0 г нового соединения, 3,12,13-триацетил лимаксола А.
Пример 4
Способ получения нового соединения (сверхкритическая экстракция СО2) включает следующие стадии:
R1. Limax, после сортировки и удаления примесей, измельчали в порошок размером 20 меш для дальнейшего использования;
R2. 100 кг порошка Limax помещали в сверхкритический экстрактор СО2 для экстракции в следующих условиях: давление 28 кПа, температура 68°С, поток 400-500 PV, время экстракции 4,5 часа, и получали 5,9 кг мазе-подобного экстракта для последующего использования;
R3. оливковое масло добавляли к экстракту в массовом соотношении «экстракт: оливковое масло=5:2,5», то есть 5,9 кг экстракта и 2,95 кг оливкового масла помещали в емкость для смешивания; смесь нагревали до 70°С, равномерно перемешивали, охлаждали и выдерживали 9 дней, а затем фильтровали с получением 393 г осадка; осадок промывали 120# бензином (400 мл × 4), а затем сушили, получая 255 г осадка; и
R4. осадок добавляли к 2200 мл ацетона и растворяли при нагревании, охлаждали и выдерживали в течение 9 дней для осаждения белых игольчатых кристаллов, фильтровали с получением кристаллов; соответствующее количество этилацетата добавляли для растворения кристаллов, фильтровали и фильтрат выдерживали в течение 9 дней для осаждения белых игольчатых кристаллов, фильтровали и сушили с получением 196,1 г нового соединения, 3,12,13-триацетил лимаксола А.
Пример 5
Способ получения нового соединения (сверхкритическая экстракция СО2) включает следующие стадии:
R1. Limax, после сортировки и удаления примесей, измельчали в порошок размером 10 меш для дальнейшего использования;
R2. 150 кг порошка Limax помещали в сверхкритический экстрактор СО2 для экстракции в следующих условиях: давление 30 кПа, температура 70°С, поток 400-500 PV, время экстракции 5 часов, и получали 8,7 кг мазе-подобного экстракта для последующего использования;
R3. масло из семян камелии добавляли к экстракту в массовом соотношении «экстракт: масло из семян камелии=6:3», то есть 8,7 кг экстракта и 4,36 кг масла из семян камелии помещали в емкость для смешивания; смесь нагревали до 80°С, равномерно перемешивали, охлаждали и выдерживали 10 дней, а затем фильтровали с получением 581 г осадка; осадок промывали н-гексаном (500 мл × 5), а затем сушили, получая 372 г осадка; и
R4. осадок добавляли к 5000 мл хлороформа и растворяли при нагревании, охлаждали и выдерживали в течение 10 дней для осаждения белых игольчатых кристаллов, фильтровали с получением кристаллов; соответствующее количество этилацетата добавляли для растворения кристаллов, фильтровали и фильтрат выдерживали в течение 10 дней для осаждения белых игольчатых кристаллов, фильтровали и сушили с получением 287,3 г нового соединения, 3,12,13-триацетил лимаксола А.
Пример 6
Способ получения нового соединения (экстракция растворителем) включает следующие стадии:
S1. Limax, после сортировки и удаления примесей, измельчали в порошок размером 20 меш для дальнейшего использования;
S2. 100 кг порошка Limax помещали в многофункциональную емкость для экстракции и экстрагировали при кипячении с обратным холодильником с н-гексаном 2 раза, сначала в количестве, в 10 раз превышающем массу порошка Limax, в течение 1,5 ч, а затем в количестве, в 8 раз превышающем массу порошка Limax, в течение 1,0 ч; каждый из экстрактов фильтровали, и фильтраты объединяли, и н-гексан удаляли при пониженном давлении до полного удаления с получением 8,10 кг маслянистой густой пасты;
S3. к густой пасте добавляли 40,5 кг силикагеля и равномерно перемешивали; смесь добавляли в хроматографическую колонку, предварительно заполненную 24,3 кг силикагеля и предварительно элюированную петролейным эфиром в соотношении «объем петролейного эфира: общая масса силикагеля в хроматографической колонке=2:1» (то есть 129,6 л петролейного эфира), а затем элюировали этилацетатом в соотношении «объем этилацетата: общая масса силикагеля в хроматографической колонке=2,25:1,5» (то есть 97,2 л этилацетата), этилацетатный элюат собирали и концентрировали при пониженном давлении для удаления этилацетата, получив в результате 4,3 кг густого вещества; и
S4. к густому веществу добавляли 27,0 л метанола, нагревали до полного растворения и замораживали при 6°С в течение 24 часов для осаждения белых кристаллов, фильтровали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении для удаления около 14,9 л метанола, и затем выдерживали в течение 9 дней для осаждения белых игольчатых кристаллов, фильтровали и сушили с получением 359 г кристаллов, к кристаллам добавляли 1,0 л этилацетата, нагревали до растворения, охлаждали и выдерживали в течение 9 дней для осаждения белых игольчатых кристаллов, фильтровали и сушили с получением 210,4 г нового соединения, 3,12,13-триацетил лимаксола А.
Пример 7
Способ получения нового соединения (экстракция растворителем) включает следующие стадии:
S1. Limax, после сортировки и удаления примесей, измельчали в порошок размером 30 меш для дальнейшего использования;
S2. 50 кг порошка Limax помещали в многофункциональную емкость для экстракции и экстрагировали при кипячении с обратным холодильником смесью растворителей (метанол: диэтиловый эфир: этилацетат=1:1:1) в количестве, в 15 раз превышающем массу порошка Limax, в течение 3 часов, фильтровали, и смесь растворителей удаляли из фильтрата при пониженном давлении до полного удаления с получением 3,98 кг маслянистой густой пасты;
S3. к густой пасте добавляли 23,8 кг силикагеля и равномерно перемешивали; смесь добавляли в хроматографическую колонку, предварительно заполненную 15,9 кг силикагеля и предварительно элюированную 120# бензином в соотношении «объем 120# бензина: общая масса силикагеля в хроматографической колонке=1: 0,5» (то есть 79,4 л 120# бензина), а затем элюировали метанолом в соотношении «объем метанола: общая масса силикагеля в хроматографической колонке=1,5: 1» (то есть 59,5 л этилацетата), метанольный элюат собирали и концентрировали при пониженном давлении для удаления метанола, получив в результате 2,07 кг густого вещества; и
S4. к густому веществу добавляли 13,0 л этанола, нагревали до полного растворения и замораживали при 10°С в течение 24 часов для осаждения белых кристаллов, фильтровали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении для удаления около 6,5 л этанола, и затем выдерживали в течение 7 дней для осаждения белых игольчатых кристаллов, фильтровали и сушили с получением 178,1 г кристаллов, к кристаллам добавляли 500 мл этилацетата, нагревали до растворения, охлаждали и выдерживали в течение 7 дней для осаждения белых игольчатых кристаллов, фильтровали и сушили с получением 103,8 г нового соединения, 3,12,13-триацетил лимаксола А. Пример 8
Способ получения нового соединения (экстракция растворителем) включает следующие стадии:
S1. Limax, после сортировки и удаления примесей, измельчали в порошок размером 10 меш для дальнейшего использования;
S2. 48,4 кг порошка Limax помещали в многофункциональную емкость для экстракции и экстрагировали при кипячении с обратным холодильником смесью растворителей (этанол: ацетон=1:1) 3 раза, сначала в количестве, в 12 раз превышающем массу порошка Limax, в течение 2,5 ч, затем в количестве, в 8 раз превышающем массу порошка Limax, в течение 1,5 ч, а затем в количестве, в 5 раз превышающем массу порошка Limax, в течение 1 ч; каждый из экстрактов фильтровали, и фильтраты объединяли, и смесь растворителей удаляли при пониженном давлении до полного удаления с получением 11,98 кг маслянистой густой пасты;
S3. к густой пасте добавляли 23,8 кг силикагеля и равномерно перемешивали; смесь добавляли в хроматографическую колонку, предварительно заполненную 24,3 кг силикагеля и предварительно элюированную н-гексаном в соотношении «объем н-гексана: общая масса силикагеля в хроматографической колонке=3:1,5» (то есть 146,3 л н-гексана), а затем элюировали ацетоном в соотношении «объем ацетона: общая масса силикагеля в хроматографической колонке=3:2» (то есть 110,8 л ацетона), элюат ацетона собирали и концентрировали при пониженном давлении для удаления ацетона, получив в результате 6,3 кг густого вещества; и
S4. к густому веществу добавляли 40,0 л метанола, нагревали до полного растворения и замораживали при 2°С в течение 24 часов для осаждения белых кристаллов, фильтровали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении для удаления около 24 л метанола, и затем выдерживали в течение 10 дней для осаждения белых игольчатых кристаллов, фильтровали и сушили с получением 534 г кристаллов, к кристаллам добавляли 1,5 л этилацетата, нагревали до растворения, охлаждали и выдерживали в течение 10 дней для осаждения белых игольчатых кристаллов, фильтровали и сушили с получением 311,2 г нового соединения, 3,12,13-триацетил лимаксола А.
Пример 9
Способ получения нового соединения (экстракция растворителем) включает следующие этапы:
S1. Limax, после сортировки и удаления примесей, измельчали в порошок размером 20 меш для дальнейшего использования;
S2. 70 кг порошка Limax помещали в многофункциональную емкость для экстракции и экстрагировали при кипячении с обратным холодильником смесью растворителей (хлороформ: петролейный эфир: 120# бензин: н-гексан=1:2:1:6) 2 раза, сначала в количестве, в 13 раз превышающем массу порошка Limax, в течение 2 ч, а затем в количестве, в 6 раз превышающем массу порошка Limax, в течение 1 ч; каждый из экстрактов фильтровали, и фильтраты объединяли, и смесь растворителей удаляли при пониженном давлении до полного удаления с получением 5,52 кг маслянистой густой пасты;
S3. к густой пасте добавляли 24,8 кг силикагеля и равномерно перемешивали; смесь добавляли в хроматографическую колонку, предварительно заполненную 13,8 кг силикагеля и предварительно элюированную петролейным эфиром в соотношении «объем петролейного эфира: общая масса силикагеля в хроматографической колонке=2,4:1,2» (то есть 77,2 л петролейного эфира), а затем элюировали этилацетатом в соотношении «объем этилацетата: общая масса силикагеля в хроматографической колонке=1,8:1,2» (то есть 57,9 л этилацетата), этилацетатный элюат собирали и концентрировали при пониженном давлении для удаления этилацетата, получив в результате 2,90 кг густого вещества; и
S4. к густому веществу добавляли 18,3 л этанола, нагревали до полного растворения и замораживали при 8°С в течение 24 часов для осаждения белых кристаллов, фильтровали и фильтрат концентрировали при пониженном давлении для удаления около 9,6 л этанола, и затем выдерживали в течение 8 дней для осаждения белых игольчатых кристаллов, фильтровали и сушили с получением 252,0 г кристаллов, к кристаллам добавляли 0,7 л этилацетата, нагревали до растворения, охлаждали и выдерживали в течение 8 дней для осаждения белых игольчатых кристаллов, фильтровали и сушили с получением 148,2 г нового соединения, 3,12,13-триацетил лимаксола А.
III. Фармакологические тесты
Пример 10
Эксперимент по влиянию экстракта Limax на физическую зависимость, вызванную морфином
1. Объект эксперимента
Этот эксперимент направлен на изучение влияния экстракта Limax на симптомы физической зависимости, вызванные морфином.
2. Материалы и Методы
2.1 Материалы
2.1.1 Испытываемые образцы
Экстракт Limax был предоставлен Guangxi Jiufu Biotechnology Co., Ltd., неочищенный экстракт Limax представлял собой мазеподобный экстракт, полученный сверхкритической экстракцией СО2 в R2 в примере 3 настоящей заявки, а 3,12,13-триацетил лимаксол А был образцом, приготовленным по Примеру 3 настоящей заявки; инъекция гидрохлорида морфина была коммерчески доступна на фармацевтическом заводе №1 в Шэньяне компании NORTHEAST PHARM; и метадон был коммерчески доступен от Tianjin Central Pharmaceutical Industry Co., Ltd.
2.1.2 Животные для эксперимента
Мыши Kunming, самцы, массой 18-22 г, были коммерчески доступны от Shanghai SiJie Laboratory Animal Co., Ltd.
2.2 Методы
2.2.1 Влияние на физические симптомы, вызванные морфином Животные были рандомно распределены в группу с физиологическим раствором, модельную группу, группу положительного контроля (метадон) и группы тестируемого лекарства в различных дозах. В каждой группе по меньшей мере 8 мышей. Группе, получавшей физиологический раствор, ежедневно давали физиологический раствор. Животным в модельной группе морфина, группе положительного контроля и группах испытуемого лекарства вводили морфин в возрастающих дозах 10, 20, 40, 80, 100 мг/кг подкожно дважды в день с 6-часовым интервалом между каждым введением. С 3 дня вводили 100 мг/кг морфина в течение 7 дней подряд. На 8-й день 4 мг/кг налоксона вводили внутрибрюшинно через 4 часа после введения морфина и регистрировали количество скачков в течение 30 минут. В разные моменты времени (1 час или 3 часа) до введения налоксона внутрижелудочно вводили контрольный носитель, положительный контроль и тестируемое лекарство.
2.2.2 Статистический анализ
Результаты эксперимента были представлены как Среднее±SEM, а различия между группами исследованы с помощью t-критерия. Р<0,05 показал значительную разницу.
3. Результаты
Влияние экстракта Limax на симптомы физической зависимости, вызванные морфином
Результаты эксперимента показаны в таблицах 2-4. После хронического лечения морфином для индукции реакции отмены вводили налоксон, и у животных проявлялись выраженные скачкообразные симптомы отмены. Скачкообразные симптомы отмены у животных значительно уменьшились через 1 час после введения метадона (20 мг/кг), через 3 часа после введения сырого экстракта Limax (10 г/кг) и через 1 час после введения 3,12,13-триацетила лимаксола А (0,5 г/кг). Таблица 5 показывает, что скачкообразные симптомы отмены у животных имели тенденцию к уменьшению через 3 часа после введения 3,12,13-триацетил лимаксола А (0,5 г/кг), но не было значительных отличий от модельной группы. Фиг. 8 показывает уровни ингибирования скачкообразных симптомов отмены морфина тремя лекарственными средствами в следующем порядке: сырой экстракт Limax (10 г/кг, -3 ч)>3,12,13-триацетил лимаксол А (0,5 г / кг, -1 ч.) ≈ метадон (20 мг/кг, -1 ч).
Результаты в Таблице 2 показывают, что существует значительная разница между группой морфина и контрольной группой (***Р<0,001), что указывает на то, что введение налоксона после длительного лечения морфином может вызвать значительные скачкообразные симптомы отмены. Наблюдалась значительная разница между группой морфин + метадон и группой морфина (*Р<0,05), что указывает на то, что скачкообразные симптомы отмены, вызванные введением налоксона, могут быть значительно уменьшены через 1 час после введения метадона (20 мг/кг).
Результаты в Таблице 3 показывают, что существует значительная разница между группой морфина и контрольной группой (**Р<0,01), что указывает на то, что введение налоксона после длительного лечения морфином может вызвать значительные скачкообразные симптомы отмены. Наблюдалась значительная разница между группой морфин + сырой экстракт Limax и группой морфина (*Р<0,05), что указывает на то, что скачкообразные симптомы отмены, вызванные введением налоксона, могут быть значительно уменьшены через 3 часа после введения сырого экстракта Limax (10 г/кг).
Результаты в Таблице 4 показывают, что существует значительная разница между группой морфина и контрольной группой (***р<0,001), что указывает на то, что введение налоксона после длительного лечения морфином может вызвать значительные скачкообразные симптомы отмены. Наблюдалась значительная разница между группой морфин + высокие дозы 3,12,13-триацетиллимаксола А и группой морфина (*Р<0,05), что указывает на то, что скачкообразные симптомы отмены, вызванные введением налоксона, могут быть значительно уменьшены через 1 час после введения морфина + 3,12,13-триацетил лимаксола А (0,5 г/кг).
Результаты в Таблице 5 показали, что существует значительная разница между группой морфина и контрольной группой (*** Р<0,01), что указывает на то, что введение налоксона после длительного лечения морфином может вызвать значительные скачкообразные симптомы отмены. Не было существенной разницы между группой морфин + высокие дозы 3,12,13-триацетил лимаксола А и группой морфина (Р>0,05), что указывает на то, что скачкообразные симптомы отмены, вызванные введением налоксона, имели тенденцию уменьшаться через 3 часа после введения морфин + 3,12,13-триацетил лимаксол А (0,5 г/кг), но существенной разницы не было.
4. Заключение
Неочищенный экстракт Limax (10 г/кг) оказывает значительное ингибирующее действие на скачкообразные симптомы отмены у морфинзависимых животных через 3 часа после внутрижелудочного введения, в то время как 3,12,13-триацетил лимаксол А (0,5 г/кг) оказывает значительный ингибирующий эффект на скачкообразные симптомы отмены у морфинзависимых животных через 1 час после внутрижелудочного введения и проявляет ингибирующую тенденцию через 3 часа.
1. Соединение, имеющее структуру:
2. Соединение по п. 1, где хиральные С-конфигурации соединения включают: С3, R; С6, S; С7, S; С10, S; С11, R; С12, R; С13, R; С14, R; С15, S; С18, S; С19, S; и С22, R.
3. Способ получения соединения по п. 1, включающий способ сверхкритической экстракции СО2 или способ экстракции растворителем;
где способ сверхкритической экстракции СО2 включает следующие стадии:
R1. сортировка Limax, удаление примесей и измельчение для получения порошка Limax;
R2. помещение порошка Limax в экстрактор для сверхкритической экстракции СО2 для получения экстракта;
R3. добавление растительного масла к экстракту, равномерное нагревание и перемешивание, охлаждение, выдерживание и фильтрование с получением осадка, промывание осадка промывным растворителем и сушка для получения высушенного осадка; и
R4. добавление кристаллизующего растворителя к высушенному осадку, нагревание до растворения, охлаждение, выдерживание для осаждения белых игольчатых кристаллов и фильтрация с получением кристаллов, перекристаллизация и сушка для получения соединения;
где способ экстракции растворителем включает следующие стадии:
S1. сортировка Limax, удаление примесей и измельчение для получения порошка Limax;
S2. нагревание с обратным холодильником порошка Limax с растворителем, фильтрование, выдерживание фильтрата и удаление растворителя из фильтрата при пониженном давлении до полного удаления с получением густой пасты;
S3. добавление густой пасты в колонку для хроматографии на силикагеле, элюирование элюентом, сбор элюата и удаление элюента из элюата при пониженном давлении с получением густого вещества; и
S4. добавление растворителя для растворения густого вещества, нагревание до полного растворения, охлаждение и замораживание для осаждения белых кристаллов, фильтрация, выдерживание фильтрата, удаление растворителя из фильтрата при пониженном давлении и повторное выдерживание для осаждения белых игольчатых кристаллов, фильтрование и сушка для получения кристаллов, перекристаллизация и сушка для получения соединения.
4. Способ получения соединения по п. 3, где измельчение в R1 включает измельчение до 10-30 меш.
5. Способ получения соединения по п. 3, где условия сверхкритической экстракции CO2 на стадии R2 включают: давление 20-30 кПа, температуру 60-70°С, поток 400-500 PV и время экстракции 3-5 ч.
6. Способ получения соединения по п. 3, где растительное масло в R3 представляет собой масло из семян чайного дерева, масло из семян камелии, соевое масло или оливковое масло;
растительное масло добавляют в массовом соотношении «экстракт:растительное масло = 2-6:1-3»;
нагрев осуществляется до температуры 60-80°С; время выдерживания составляет от 7 до 10 дней; и
промывка включает промывку н-гексаном, петролейным эфиром или 120# бензином 3-5 раз по 200-500 мл каждый раз.
7. Способ получения соединения по п. 3, где кристаллизующим растворителем на стадии R4 является метанол, ацетон, этилацетат или хлороформ, добавленные в количестве, в 3-10 раз превышающем массу высушенного осадка; а время выдерживания 7-10 дней.
8. Способ получения соединения по п. 3, где измельчение в S1 включает измельчение в 10-30 меш.
9. Способ получения соединения по п. 3, где растворитель в S2 представляет собой один или несколько из следующих: этанол, метанол, ацетон, хлороформ, 120# бензин, н-гексан, петролейный эфир, диэтиловый эфир и этилацетат.
10. Способ получения соединения по п. 3, отличающийся тем, что экстракция нагреванием с обратным холодильником в S2 включает экстракцию нагреванием с обратным холодильником 1-3 раза с растворителем, каждый раз в количестве, в 5-15 раз превышающем массу порошка Limax, в течение 1-3 ч.
11. Способ получения соединения по п. 3, отличающийся тем, что добавление к хроматографической колонке на силикагеле на стадии S3 включает добавление силикагеля к густой пасте в количестве, в 4-6 раз превышающем массу густой пасты, при равномерном перемешивании и добавление в хроматографическую колонку, предварительно заполненную силикагелем, в количестве, в 2-4 раза превышающем массу густой пасты.
12. Способ получения соединения по п. 3, причем растворитель для элюирования на стадии S3 представляет собой метанол, ацетон или этилацетат, и количество используемого растворителя для элюирования составляет: объем растворителя для элюирования:общая масса силикагеля в хроматографической колонке = 1,5-3:1-2.
13. Способ получения соединения по п. 3, где растворитель для растворения на стадии S4 представляет собой метанол или этанол, добавленные в количестве, в 4-8 раз превышающем объем густого вещества; замораживание осуществляется при температуре 2-10°С в течение 24 ч; удаление растворителя из фильтрата при пониженном давлении включает концентрирование до 50-60% от первоначального объема; а время повторного выдерживания от 7 до 10 дней.
14. Способ получения соединения по п. 3, включающий стадию предварительного элюирования растворителем для предварительного элюирования перед элюированием элюентом на стадии S3, где растворителем для предварительного элюирования является петролейный эфир, н-гексан или 120# бензин, а количество используемого растворителя для предварительного элюирования составляет: объем растворителя для предварительного элюирования:общая масса силикагеля в хроматографической колонке = 1-3:0,5-1,5.
15. Применение соединения по п. 1 для приготовления лекарственных средств для подавления симптомов синдрома отмены у морфинозависимых животных.
