Пиримидиновое соединение

Изобретение относится к гетероциклическому соединению формулы (1) или его фармацевтически приемлемой соли, где X представляет собой метилен; R¹ и R² независимо представляют собой замещенную или незамещенную алкильную группу, содержащую от 1 до 6 атомов углерода, при условии, что когда алкильная группа является замещенной, она замещена гидрокси-группой; R³ представляет собой алкильную группу, содержащую от 1 до 6 атомов углерода; R⁴ представляет собой атом водорода, или алкокси-группу, содержащую от 1 до 6 атомов углерода; Y¹ представляет собой простую связь или -(CR⁹R¹⁰)_p-, где R⁹ и R¹⁰ независимо представляют собой атом водорода; Y² представляет собой простую связь или -C(O)-; L представляет собой незамещенный линейный алкилен, содержащий от 2 до 6 атомов углерода; R⁵ и R⁶ независимо представляют собой атом водорода или незамещенную алкильную группу, содержащую от 1 до 6 атомов углерода, или R⁵ и R⁶ объединены с атомом азота, с которым они соединяются, с образованием 6-членного азотсодержащего насыщенного гетероцикла; m равен 1; p представляет собой целое число 1 и представляет собой двойную связь. Также изобретение относится к фармацевтической композиции на основе соединения формулы (1), применению соединения формулы (1) или композиции на его основе и набору на его основе. Технический результат: получены новые гетероциклические соединения, обладающие свойствами усиления антиген-специфической иммунной реакции и улучшения способности к иммунному ответу. 9 н. и 8 з.п. ф-лы, 5 ил., 7 пр.

 

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение касается соединения, которое может применяться в качестве адъюванта вакцины, способа его получения, содержащей его композиции, и его применения в качестве адъюванта вакцины.

Предшествующий уровень техники

Вакцины, содержащие белок или частичный пептид, которые получены из белков или частичных пептидов, вырабатываемых микроорганизмами, можно производить с использованием химического синтеза или технологии генетической рекомбинации, и они обладают преимуществами в безопасности и процессе производства. С другой стороны, однако, субъединичные вакцины, содержащие частичный пептид (эпитоп) склонны иметь более низкую иммуностимулирующую способность, чем у живых вакцин и инактивированных вакцин. Поэтому, для усиления иммуногенности эпитопа и повышения иммуностимулирующей активности вакцины, ее исследовали на предмет профилактических или терапевтических методов с применением адъюванта и антигена в комбинации.

Адъюванты представляют собой добавки для усиления гуморального и/или клеточного ответа на антигены, и квасцы, сапонин и т.д. применялись в качестве адъювантов в вакцине.

Недавно было обнаружено, что толл-подобный рецептор (TLR) играет важную роль в активации естественного иммунитета, являющегося защитным механизмом у живых организмов против микроорганизмов, и что монофосфориллипид А (MPL), CPG ODN и т.д. оказывают иммуностимулирующий эффект через TLR.

Из тринадцати известных TLR, идентифицированных у человека, пять TLR (TLR 1, 2, 4, 5 и 6) участвуют в распознавании бактериальных компонентов, и четыре TLR (TLR 3, 7, 8 и 9) локализованы в цитоплазматическом компартменте и участвуют в распознавании вирусной РНК (TLR 3, 7, 8) и неметилированной ДНК (TLR 9) (см. непатентный документ 1).

В качестве агониста (активатора) TLR7 и TLR8 были известны малые молекулы, являющиеся миметиками одноцепочечной РНК вируса, которая представляет собой природный лиганд. Например, сообщалось о синтетических соединениях, таких как пиримидиновые соединения (патентные документы 1 и 2) и имидазохинолиновые соединения (патентный документ 3).

Активация TLR7 и/или TLR8 их агонистом индуцирует Th1 клетки и активирует дендритные клетки (ДК) по TLR/MyD88-зависимому сигнальному пути. В результате усиливается выработка костимулирующих T-клетки молекул (CD80, CD86, CD40), и вырабатываются воспалительные цитокины, включая интерферон I типа (в особенности IFNα), TNFα, IL-6 или IL-12.

В дополнение к активации ДК, известно, что TLR7 и/или TLR8 агонист (активатор) активирует В-клетки и дополнительно стимулирует NK клетки, вызывая выработку IFNγ, и поэтому ожидается, что он обладает активностью адъюванта вакцины. Действительно, сообщалось об адъювантной активности TLR7/TLR8 агонистов, таких как Резиквимод и Имиквимод (непатентный документ 2).

Суммируя вышесказанное, есть потребность в разработке новой адъювантной вакцины, активирующей TLR7 и/или TLR8.

С другой стороны, сквален представляет собой маслянистое вещество, применяющееся в качестве масляного компонента в эмульсионных препаратах типа масло-в-воде и вода-в-масле, и сквален-содержащий адъювант, такой как MF59, применялся в качестве адъюванта для вакцины от гриппа (непатентные документы 3, 4 и 5).

Что касается конъюгатов TLR7/8 агонистов и других веществ, были известны адъюванты вакцины, где имидазохинолиновое соединение ковалентно связано с жирной кислотой (патентные документы 4, 5, 6 и непатентный документ 6), конъюгаты имидазохинолинового соединения и глицерида жирной кислоты (патентный документ 7), конъюгаты аденинового соединения и глицерида жирной кислоты (патентный документ 8), и конъюгаты аденинового соединения и фосфолипида (патентный документ 9). Также были известны конъюгаты, в которых адениновое соединение конъюгировано с глицеридом жирной кислоты через полиэтиленгликоль (патентный документ 10).

Однако конъюгат TLR7/8 агониста и сквалена не был известен.

Документы из предшествующего уровня техники

Патентные документы

[Патентный документ 1] WO00/12487

[Патентный документ 2] WO2009/067081

[Патентный документ 3] Заявка на Патент США № 4689338

[Патентный документ 4] WO2005/001022

[Патентный документ 5] WO2005/018555

[Патентный документ 6] WO2012/024284

[Патентный документ 7] WO2010/048520

[Патентный документ 8] WO2011/017611

[Патентный документ 9] WO2011/139348

[Патентный документ 10] WO2010/093436

[Непатентные документы]

[Непатентный документ 1] Iwasaki, A., Nat. Immunol. 2004, 5, 987

[Непатентный документ 2] Vaccine 2011, 29, 3341•M. A. Tomai et al, Exp. Rev. Vaccine, 6, 835

[Непатентный документ 3] G. Ott et al. Methods in Molecular Medicine, 2000, 42, 211-228

[Непатентный документ 4] D. T. O’Hagan et al. Vaccine 2012, 4341-4348

[Непатентный документ 5] C.B. Fox, molecules 2009, 14, 3286

[Непатентный документ 6] Vaccine 2011, 29, 5434

Краткое описание изобретения

Проблема, на решение которой направлено изобретение

В настоящем изобретении описано соединение, которое можно применять в качестве адъюванта вакцины, способ его получения, и содержащая его композиция.

Решение проблемы

В результате проведенных исследований, авторы настоящего изобретения обнаружили, что конъюгированное соединение, в котором пиримидиновое соединение, усиливающее физиологическую активность (функцию) Toll-подобного рецептора 7 (TLR7), химически конъюгировано с маслянистым веществом через спейсер, имеет адъювантную активность выше, чем у пиримидинового соединения или маслянистого вещества в отдельности, и пришли к настоящему изобретению на основе данного открытия.

Настоящее изобретение охватывает описанное ниже.

[1] Соединение, имеющее формулу (1), или его фармацевтически приемлемая соль:

,

где

X представляет собой метилен, атом кислорода, атом серы, SO, SO₂ или NR⁷, где R⁷ представляет собой атом водорода или алкильную группу, содержащую от 1 до 3 атомов углерода;

R¹ и R² независимо представляют собой атом водорода или замещенную или незамещенную алкильную группу, содержащую от 1 до 6 атомов углерода, при условии что когда алкильная группа является замещенной, она замещена 1-4 одинаковыми или разными заместителями, выбранными из группы, состоящей из гидрокси-группы, атома галогена и алкокси-группы, содержащей от 1 до 6 атомов углерода;

R³ представляет собой алкильную группу, содержащую от 1 до 6 атомов углерода, алкокси-группу, содержащую от 1 до 6 атомов углерода, или алкилтио-группу, содержащую от 1 до 6 атомов углерода;

R⁴ представляет собой атом водорода, атом галогена, гидрокси-группу, алкильную группу, содержащую от 1 до 6 атомов углерода, алкокси-группу, содержащую от 1 до 6 атомов углерода или циано-группу;

Y¹ представляет собой простую связь, -(CR⁹R¹⁰)_p-, -CH=CH-(CR⁹R¹⁰)_q-, -C≡C-(CR⁹R¹⁰)_q'- или -(CR⁹R¹⁰)_r-O-(CR^9'R^10')_r'-, где R⁹, R¹⁰, R^9' и R^10' независимо представляют собой атом водорода или алкильную группу, содержащую от 1 до 4 атомов углерода;

Y² представляет собой простую связь или -C(O)-;

L представляет собой замещенный или незамещенный линейный алкилен, содержащий от 2 до 6 атомов углерода, или двухвалентную группу, образованную из 4-8-членного циклоалкана, при условии, что когда линейный алкилен или циклоалкан является замещенным, он замещен 1-4 одинаковыми или разными заместителями, выбранными из группы, состоящей из алкильной группы, содержащей от 1 до 5 атомов углерода, гидрокси-группы и атома галогена, и любая из метиленовых групп в линейном алкилене L необязательно заменена на карбонильную группу;

R⁵ и R⁶ независимо представляют собой атом водорода или замещенную или незамещенную алкильную группу, содержащую от 1 до 6 атомов углерода, или R⁵ или R⁶ связан с любым атомом углерода в L с образованием 4-8-членного азотсодержащего насыщенного гетероцикла, или R⁵ и R⁶ объединены с образованием замещенного или незамещенного 5-8-членного азотсодержащего насыщенного гетероцикла; при условии что когда алкильная группа является замещенной, она замещена одинаковыми или разными 1-4 заместителями, выбранными из группы, состоящей из гидрокси-группы и атома галогена; когда 4-8-членный азотсодержащий насыщенный гетероцикл или 5-8-членный азотсодержащий насыщенный гетероцикл является замещенным, он замещен одинаковыми или разными 1-4 заместителями, выбранными из группы, состоящей из метильной группы, этильной группы, пропильной группы, гидроксиметильной группы, гидроксиэтильной группы, карбонильной группы, гидрокси-группы и атома галогена;

m равен 0 или 1;

p представляет собой целое число от 1 до 6;

q и q' независимо равны целым числам от 0 до 4;

r представляет собой целое число от 0 до 5, и r' представляет собой целое число от 1 до 5, при условии что r' представляет собой целое число, равное 2 или больше, когда сумма r и r' равна 5 или меньше, и Y² представляет собой простую связь; и

независимо представляет собой простую или двойную связь.

[2] Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по [1], где X представляет собой метилен, атом кислорода или NR⁷, где R⁷ представляет собой атом водорода или алкильную группу, содержащую от 1 до 3 атомов углерода; R¹ и R² независимо представляют собой атом водорода или замещенную или незамещенную алкильную группу, содержащую от 1 до 6 атомов углерода, при условии что когда алкильная группа является замещенной, она замещена 1-4 одинаковыми или разными заместителями, выбранными из группы, состоящей из гидрокси-группы и атома галогена; R³ представляет собой алкильную группу, содержащую от 1 до 6 атомов углерода; и R⁴ представляет собой атом водорода, атом галогена, гидрокси-группу, алкильную группу, содержащую от 1 до 3 атомов углерода, или алкокси-группу, содержащую от 1 до 3 атомов углерода.

[3] Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по [1] или [2], где все представляют собой простые связи или двойные связи.

[4] Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по любому из [1] - [3], где Y¹ представляет собой простую связь или -(CR⁹R¹⁰)_p-, где R⁹ и R¹⁰ независимо представляют собой атом водорода или алкильную группу, содержащую от 1 до 4 атомов углерода; и Y² представляет собой простую связь или -C(O)-.

[5] Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по [4], где Y¹ представляет собой простую связь; и Y² представляет собой -C(O)-.

[6] Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по [4], где Y¹ представляет собой -(CR⁹R¹⁰)_p-, где R⁹ и R¹⁰ независимо представляют собой атом водорода или алкильную группу, содержащую от 1 до 4 атомов углерода; p представляет собой целое число от 1 до 3; и Y² представляет собой простую связь.

[7] Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по [3], где Y¹ представляет собой -(CR⁹R¹⁰)_r-O-(CR^9'R^10')_r'-, где R⁹, R¹⁰, R^9' и R^10' независимо представляют собой атом водорода или алкильную группу, содержащую от 1 до 4 атомов углерода; и r и r' независимо равны 0, 1 или 2.

[8] Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по любому из [1] - [7], где L представляет собой линейный алкилен, содержащий 2 или 3 атомов углерода.

[9] Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по [1],

где

X представляет собой метилен;

R¹ представляет собой атом водорода или алкильную группу, содержащую от 1 до 3 атомов углерода, необязательно замещенную гидроксильной группой;

R² представляет собой атом водорода или алкильную группу, содержащую от 1 до 6 атомов углерода;

R³ представляет собой алкильную группу, содержащую от 1 до 3 атомов углерода;

R⁴ представляет собой атом водорода, атом галогена, гидрокси-группу, алкильную группу, содержащую от 1 до 3 атомов углерода, или алкокси-группу, содержащую от 1 до 3 атомов углерода;

Y¹ представляет собой простую связь или метилен;

Y² представляет собой простую связь или -C(O)-;

L представляет собой линейный алкилен, содержащий 2 или 3 атомов углерода;

R⁵ и R⁶ независимо представляют собой атом водорода или алкильную группу, содержащую от 1 до 3 атомов углерода, или R⁵ и R⁶ объединены с образованием замещенного или незамещенного 5-8-членного азотсодержащего насыщенного гетероцикла, при условии, что когда указанный 5-8-членный азотсодержащий насыщенный гетероцикл является замещенным, он замещен одинаковыми или разными 1-4 заместителями, выбранными из группы, состоящей из гидрокси-группы и атома галогена;

m равен 0 или 1; и

все представляют собой двойные связи.

[10] Фармацевтическая композиция, содержащая соединение или его фармацевтически приемлемую соль по любому из [1] - [9].

[11] Фармацевтическая композиция по [10], дополнительно содержащая антиген.

[12] Фармацевтическая композиция по [11] где антиген представляет собой патогенный антиген или опухолевый антиген.

[13] Фармацевтическая композиция по [11] или [12], где антиген представляет собой пептид или белок.

[14] Адъювант вакцины, содержащий соединение или его фармацевтически приемлемую соль по любому из [1] - [9].

[15] Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по любому из [1] - [9] для применения в качестве адъюванта вакцины.

[16] Способ усиления антиген-специфичной иммунной реакции у млекопитающего, включающий введение млекопитающему соединения или его фармацевтически приемлемой соли по любому из [1] - [9].

[17] Способ повышения способности к иммунному ответу у млекопитающего, включающий введение млекопитающему соединения или его фармацевтически приемлемой соли по любому из [1] - [9].

[18] Применение соединения или его фармацевтически приемлемой соли по любому из [1] - [9] для изготовления адъюванта вакцины.

[19] Соединение, имеющее формулу (2), или его фармацевтически приемлемая соль:

,

где

X представляет собой метилен, атом кислорода, атом серы, SO, SO₂ или NR⁷, где R⁷ представляет собой атом водорода или алкильную группу, содержащую от 1 до 3 атомов углерода;

R¹ и R² независимо представляют собой атом водорода или замещенную или незамещенную алкильную группу, содержащую от 1 до 6 атомов углерода, при условии что когда алкильная группа является замещенной, она замещена 1-4 одинаковыми или разными заместителями, выбранными из группы, состоящей из гидрокси-группы, атома галогена и алкокси-группы, содержащей от 1 до 6 атомов углерода;

R³ представляет собой алкильную группу, содержащую от 1 до 6 атомов углерода, алкокси-группу, содержащую от 1 до 6 атомов углерода, или алкилтио-группу, содержащую от 1 до 6 атомов углерода;

R⁴ представляет собой атом водорода, атом галогена, гидрокси-группу, алкильную группу, содержащую от 1 до 6 атомов углерода, алкокси-группу, содержащую от 1 до 6 атомов углерода, или циано-группу;

Y¹ представляет собой простую связь, -(CR⁹R¹⁰)_p-, -CH=CH-(CR⁹R¹⁰)_q-, -C≡C-(CR⁹R¹⁰)_q'- или -(CR⁹R¹⁰)_r-O-(CR^9'R^10')_r'-, где R⁹, R¹⁰, R^9' и R^10' независимо представляют собой атом водорода или алкильную группу, содержащую от 1 до 4 атомов углерода;

Y² представляет собой простую связь или -C(O)-;

L представляет собой замещенный или незамещенный линейный алкилен, содержащий от 2 до 6 атомов углерода, или двухвалентную группу, образованную из 4-8-членного циклоалкана, при условии, что когда линейный алкилен или циклоалкан является замещенным, он замещен 1-4 одинаковыми или разными заместителями, выбранными из группы, состоящей из алкильной группы, содержащей от 1 до 5 атомов углерода, гидрокси-группы и атома галогена, и любая из метиленовых групп в линейном алкилене L необязательно заменена на карбонильную группу;

R⁵ и R⁶ независимо представляют собой атом водорода или замещенную или незамещенную алкильную группу, содержащую от 1 до 6 атомов углерода, или R⁵ или R⁶ связан с любым атомом углерода в L с образованием 4-8-членного азотсодержащего насыщенного гетероцикла, или R⁵ и R⁶ объединены с образованием замещенного или незамещенного 5-8-членного азотсодержащего насыщенного гетероцикла; при условии, что когда алкильная группа является замещенной, она замещена одинаковыми или разными 1-4 группами, выбранными из группы, состоящей из гидрокси-группы и атома галогена; когда 4-8-членный азотсодержащий насыщенный гетероцикл или 5-8-членный азотсодержащий насыщенный гетероцикл является замещенным, он замещен одинаковыми или разными 1-4 группами, выбранными из группы, состоящей из метильной группы, этильной группы, пропильной группы, гидроксиметильной группы, гидроксиэтильной группы, карбонильной группы, гидрокси-группы и атома галогена;

p представляет собой целое число от 1 до 6;

q и q' независимо равны целым числам от 0 до 4;

r представляет собой целое число от 0 до 5, и r' представляет собой целое число от 1 до 5, при условии что r' представляет собой целое число, равное 2 или больше, когда сумма r и r' равна 5 или меньше, и Y² представляет собой простую связь; и

R⁸ представляет собой атом водорода или амино-защитную группу.

[20] Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по [19],

где

X представляет собой метилен;

R¹ представляет собой атом водорода или алкильную группу, содержащую от 1 до 3 атомов углерода, необязательно замещенную гидрокси-группой;

R² представляет собой атом водорода или алкильную группу, содержащую от 1 до 6 атомов углерода;

R³ представляет собой алкильную группу, содержащую от 1 до 3 атомов углерода;

R⁴ представляет собой атом водорода, атом галогена, гидрокси-группу, алкильную группу, содержащую от 1 до 3 атомов углерода, или алкокси-группу, содержащую от 1 до 3 атомов углерода;

Y¹ представляет собой простую связь или метилен;

Y² представляет собой простую связь или -C(O)-;

L представляет собой линейный алкилен, содержащий 2 или 3 атомов углерода;

R⁵ и R⁶ независимо представляют собой атом водорода или алкильную группу, содержащую от 1 до 3 атомов углерода, или R⁵ и R⁶ объединены с образованием замещенного или незамещенного 5-8-членного азотсодержащего насыщенного гетероцикла; при условии что когда указанный 5-8-членный азотсодержащий насыщенный гетероцикл является замещенным, он замещен одинаковыми или разными 1-4 группами, выбранными из группы, состоящей из гидрокси-группы и атома галогена.

Эффект изобретения

Настоящее изобретение позволяет получить адъювант, усиливающий специфическую иммунную реакцию на антиген, который можно применять в качестве вакцины.

Краткое описание чертежей

На фиг. 1 показано количество OVA-специфичного IgG, вырабатывающегося после иммунизации с применением OVA у мышей, которым внутримышечно вводили соединения из примеров 1 - 5.

На фиг. 2 показаны результаты исследования методом ELISA для OVA-специфичного IgG1 и IgG2c в плазме иммунизированных мышей, которым внутримышечно вводили соединения из примера 1 и примера 4. На вертикальной оси приведено соотношение OVA-специфичного IgG2c/IgG1 в плазме крови.

На фиг. 3 показан процент OVA-специфичных мультифункциональных CD4-положительных T-лимфоцитов в клетках селезенки у мышей, которым внутримышечно вводили соединения из примера 1 и примера 4.

На фиг. 4 показан процент рестриктированных по антигенам главного комплекса гистосовместимости OVA-специфичных CD8-положительных T-лимфоцитов в клетках селезенки у мышей, которым внутримышечно вводили соединения из примера 1 и примера 4.

На фиг. 5 показан процент CD8-положительных эффекторных T-лимфоцитов памяти в клетках селезенки у мышей, которым внутримышечно вводили соединения из примера 1 и примера 4.

Описание вариантов осуществления

В случае, когда соединение, имеющее представленную выше формулу (I), существует в оптически активных или рацемических формах вследствие наличия одного или больше асимметричных атомов углерода, настоящее изобретение включает в свой объем любую такую оптически активную или рацемическую форму, обладающую физиологической активностью, описанной ниже в настоящем тексте. Синтез таких оптически активных форм можно проводить стандартными методами органической химии, хорошо известными в данной области, например посредством синтеза из оптически активных исходных веществ или путем расщепления рацемической смеси. Физиологическую активность можно определить стандартными лабораторными методами, описанными ниже в настоящем тексте.

Соединение, имеющее формулу (I), может существовать в несольватированной или сольватированной форме, такой как гидрат.

Также, соединение, имеющее формулу (1), может быть в дейтерированной форме, в которой один или больше атомов ¹H заменены на ²H(D).

Соединение, имеющее формулу (1), может иметь (но не ограничивается только ими) аморфную форму или кристаллическую форму. Кристаллический полиморфизм может иметь место у кристаллического соединения, имеющего формулу (1), или его фармацевтически приемлемой соли, и, таким образом, соединение по настоящему изобретению включает любую кристаллическую форму.

Термин "атом галогена" при использовании в настоящем тексте включает атом фтора, атом хлора, атом брома и атом иода, и предпочтительно – атом фтора или атом хлора.

Термин "линейный алкилен" при использовании в настоящем тексте включает линейный алкилен, содержащий 1-6 атомов углерода. Частные примеры линейного алкилена включают (но не ограничиваются только ими) метилен, этилен, н-пропилен и н-бутилен.

Термин "алкильная группа" при использовании в настоящем тексте включает линейную или разветвленную алкильную группу, содержащую от 1 до 6 атомов углерода. Частные примеры алкильных групп включают (но не ограничиваются только ими) метил, этил, пропил, изопропил, бутил, изобутил и трет-бутил.

Термин "циклоалкан" при использовании в настоящем тексте включает 4-8-членные циклоалканы, конкретнее – циклобутан, циклопентан, циклогексан, циклогептан и циклооктан, и предпочтительно – циклопентан, циклогексан или циклогептан.

Термин "двухвалентная группа, образованная из циклоалкана" включает (но не ограничивается только ей) двухвалентную группу, способную к связыванию с соседними атомами по различным атомам углерода в циклоалкане.

Термин "алкокси-группа" при использовании в настоящем тексте включает линейную или разветвленную алкокси-группу, содержащую от 1 до 6 атомов углерода. Частные примеры алкокси-групп включают (но не ограничиваются только ими) метокси-группу, этокси-группу, пропокси-группу, изопропокси-группу, бутокси-группу, изобутокси-группу, трет-бутокси-группу, пентокси-группу и изопентокси-группу.

Термин "4-8-членный азотсодержащий насыщенный гетероцикл" включает 4-8-членный азотсодержащий насыщенный гетероцикл, содержащий 1-3 гетероатомов, выбранных из 2 или 3 атомов азота, 0 или 1 атома кислорода, и 0 или 1 атома серы, где по меньшей мере два атома азота содержатся в цикле. Частные примеры включают азетидин, пирролидин, пиперидин, пергидроазепин, имидазолидин, пиперазин, морфолин, тиоморфолин и пергидро-1,4-диазепин.

"5-8-членный азотсодержащий насыщенный гетероцикл" может представлять собой 5-8-членные варианты описанного выше "4-8-членного азотсодержащего насыщенного гетероцикла".

Примеры группы-заместителя для азотсодержащего насыщенного гетероцикла включают, предпочтительно, метильную группу, этильную группу, пропильную группу, гидроксиметильную группу, гидроксиэтильную группу, карбонильную группу, гидрокси-группу и атом галогена, и более предпочтительно – гидрокси-группу и атом галогена. Азотсодержащий насыщенный гетероцикл может быть замещен одинаковыми или разными 1-4 указанными группами-заместителями.

В формуле (1), X представляет собой метилен, атом кислорода, атом серы, SO, SO₂ или NR⁷, где R⁷ представляет собой атом водорода или алкильную группу, содержащую от 1 до 3 атомов углерода. R⁷ предпочтительно представляет собой атом водорода или метильную группу. X предпочтительно представляет собой метилен.

В формуле (1), R¹ предпочтительно представляет собой атом водорода или алкильную группу, содержащую от 1 до 4 атомов углерода. Частные примеры R¹ включают метильную группу, этильную группу, пропильную группу и бутильную группу.

В формуле (1), R² представляет собой атом водорода или замещенную или незамещенную алкильную группу, содержащую от 1 до 4 атомов углерода. Когда алкильная группа является замещенной, частные примеры группы-заместителя включают гидрокси-группу. Частные примеры R² включают атом водорода, метильную группу, этильную группу, пропильную группу, гидроксиметильную группу и гидроксиэтильную группу.

В формуле (1), R³ предпочтительно представляет собой алкильную группу, содержащую от 1 до 4 атомов углерода, алкокси-группу, содержащую от 1 до 4 атомов углерода, или алкилтио-группу, содержащую от 1 до 4 атомов углерода, более предпочтительно – алкильную группу, содержащую от 1 до 3 атомов углерода, или алкокси-группу, содержащую от 1 до 3 атомов углерода. Частные примеры R³ включают метильную группу, этильную группу, пропильную группу или бутильную группу, и более предпочтительно – метильную группу.

В формуле (1), примеры R⁴ включают предпочтительно атом водорода, алкильную группу, содержащую от 1 до 3 атомов углерода, алкокси-группу, содержащую от 1 до 3 атомов углерода, гидрокси-группу или атом галогена, и более предпочтительно – атом водорода и метокси-группу.

В формуле (1), Y¹ предпочтительно представляет собой простую связь, -(CR⁹R¹⁰)_p- или -(CR⁹R¹⁰)_r-O-(CR^9'R^10')_r'-, где R⁹, R¹⁰, R^9' и R^10' независимо представляют собой атом водорода или алкильную группу, содержащую от 1 до 4 атомов углерода. R⁹, R¹⁰, R^9' и R^10' предпочтительно независимо представляют собой атом водорода или метильную группу, более предпочтительно атом водорода. Более предпочтительно, Y¹ представляет собой простую связь или -(CR⁹R¹⁰)_p-.

В формуле (1), когда Y¹ представляет собой -(CR⁹R¹⁰)_p-, p предпочтительно представляет собой целое число от 1 до 4, более предпочтительно 1, 2 или 3.

В формуле (1), когда Y¹ представляет собой -CH=CH-(CR⁹R¹⁰)_q- или -C≡C-(CR⁹R¹⁰)_q'-, q и q' предпочтительно независимо представляют собой целое число от 0 до 3, более предпочтительно 0 или 1.

В формуле (1), когда Y¹ представляет собой -(CR⁹R¹⁰)_r-O-(CR^9'R^10')_r'-, предпочтительно представляет собой целое число от 0 до 3, r' предпочтительно равен 1-4. Сумма r и r' равна 5 или меньше, более предпочтительно r равен 0 или 1, и r' равен 1 или 2.

В формуле (1), когда Y¹ представляет собой простую связь или -(CR⁹R¹⁰)_p-, Y² представляет собой простую связь или -C(O)-(карбонил ).

В предпочтительном варианте осуществления, Y¹ представляет собой простую связь, и Y² представляет собой -C(O)-.

В предпочтительном варианте осуществления, Y¹ представляет собой -(CR⁹R¹⁰)_p-, и Y² представляет собой простую связь, где R⁹ и R¹⁰ предпочтительно независимо представляют собой атом водорода или метильную группу, более предпочтительно атом водорода, и p предпочтительно представляет собой целое число от 1 до 4, более предпочтительно 1, 2 или 3.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения, L в формуле (1) представляет собой линейный алкилен, содержащий 2-4 атома углерода, предпочтительно линейный алкилен, содержащий 2 или 3 атома углерода, и более предпочтительно – этилен.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения, L в формуле (1) представляет собой двухвалентную группу, образованную из 4-8-членного циклоалкана, более предпочтительно – двухвалентную группу, образованную из 5- или 6-членного циклоалкана. Частные примеры двухвалентной группы включают следующие двухвалентные группы.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения, R⁵ и R⁶ в формуле (1) представляет собой атом водорода или замещенную или незамещенную алкильную группу, содержащую от 1 до 3 атомов углерода, предпочтительно – независимо атом водорода или алкильную группу, содержащую от 1 до 3 атомов углерода, более предпочтительно – независимо атом водорода или метильную группу, и еще более предпочтительно – атом водорода. Когда алкильная группа является замещенной, она замещена 1-4 одинаковыми или разными заместителями, выбранными из гидрокси-группы или атома галогена.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения, R⁵ или R⁶ в формуле (1) может быть связан с любым атомом углерода в L с образованием 4-8-членного азотсодержащего насыщенного гетероцикла, предпочтительно 4-6-членного азотсодержащего насыщенного гетероцикла. Частные примеры 4-8-членного азотсодержащего насыщенного гетероцикла, образованного R⁵ в комбинации с любым атомом углерода в L, включают следующие.

,

где R⁶ представляет собой атом водорода или замещенную или незамещенную алкильную группу, содержащую от 1 до 6 атомов углерода.

Частные примеры 4-8-членного азотсодержащего насыщенного гетероцикла, образованного R⁶ в комбинации с любым атомом углерода в L, включают следующие.

,

где R⁵ представляет собой атом водорода или замещенную или незамещенную алкильную группу, содержащую от 1 до 6 атомов углерода.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения, R⁵ и R⁶ в формуле (1) могут быть объединены с образованием замещенного или незамещенного 5-8-членного азотсодержащего насыщенного гетероцикла, предпочтительно 5- или 6-членного азотсодержащего насыщенного гетероцикла. Частные примеры такого насыщенного азотсодержащего гетероцикла включают азотсодержащие насыщенные гетероциклы, имеющие приведенные ниже формулы:

,

где R⁵ или R⁶ соединен с любым атомом углерода в L с образованием замещенного 4-8-членного азотсодержащего насыщенного гетероцикла, или, когда R⁵ и R⁶ объединены с образованием замещенного 5-8-членного азотсодержащего насыщенного гетероцикла, то группы-заместители предпочтительно представляют собой одинаковые или разные 1-4 заместителя, выбранные из гидрокси-группы или атома галогена.

В формуле (1), m предпочтительно представляет собой 1.

В формуле (1), связи, изображенные как , независимо представляют собой простую связь или двойную связь, предпочтительно все представляют собой простые связи или все представляют собой двойные связи, более предпочтительно все представляют собой двойные связи.

В предпочтительном варианте осуществления, соединение, имеющее формулу (1), представляет собой соединение, в котором

X представляет собой метилен,

R¹ представляет собой алкильную группу, содержащую от 1 до 4 атомов углерода,

R² представляет собой атом водорода, алкильную группу, содержащую от 1 до 3 атомов углерода, или алкильную группу, содержащую от 1 до 3 атомов углерода, замещенную гидрокси-группой,

R³ представляет собой алкильную группу, содержащую от 1 до 3 атомов углерода, или алкокси-группу, содержащую от 1 до 3 атомов углерода,

R⁴ представляет собой атом водорода, атом галогена, гидрокси-группу, алкильную группу, содержащую от 1 до 6 атомов углерода, или алкокси-группу, содержащую от 1 до 6 атомов углерода,

Y¹ представляет собой простую связь или -(CR⁹R¹⁰) _p-,

Y² представляет собой -C(O)-,

L представляет собой линейный алкилен, содержащий 2-6 атомов углерода,

R⁵ и R⁶ независимо представляют собой атом водорода или алкильную группу, содержащую от 1 до 3 атомов углерода, или R⁵ или R⁶ соединен с любым атомом углерода в L с образованием 4-8-членного азотсодержащего насыщенного гетероцикла, или R⁵ и R⁶ объединены с образованием замещенного или незамещенного 4-8-членного азотсодержащего насыщенного гетероцикла,

m представляет собой 0 или 1, предпочтительно 1,

все представляют собой простые связи или все представляют собой двойные связи,

или его фармацевтически приемлемую соль.

В предпочтительном варианте осуществления, соединение, имеющее формулу (1), представляет собой соединение, в котором

X представляет собой метилен,

R¹ представляет собой алкильную группу, содержащую от 1 до 4 атомов углерода,

R² представляет собой атом водорода, алкильную группу, содержащую от 1 до 3 атомов углерода, или алкильную группу, содержащую от 1 до 3 атомов углерода, замещенную гидрокси-группой,

R³ представляет собой алкильную группу, содержащую от 1 до 3 атомов углерода, или алкокси-группу, содержащую от 1 до 3 атомов углерода,

R⁴ представляет собой атом водорода, атом галогена, гидрокси-группу, алкильную группу, содержащую от 1 до 6 атомов углерода, или алкокси-группу, содержащую от 1 до 6 атомов углерода,

Y¹ представляет собой -(CR⁹R¹⁰)_p-,

Y² представляет собой простую связь,

L представляет собой линейный алкилен, содержащий 2-6 атомов углерода,

R⁵ и R⁶ независимо представляют собой атом водорода или алкильную группу, содержащую от 1 до 3 атомов углерода, или R⁵ или R⁶ соединен с любым атомом углерода в L с образованием 4-8-членного азотсодержащего насыщенного гетероцикла, или R⁵ и R⁶ объединены с образованием замещенного или незамещенного 4-8-членного азотсодержащего насыщенного гетероцикла,

m представляет собой 0 или 1, предпочтительно 1,

все представляют собой простые связи или все представляют собой двойные связи,

или его фармацевтически приемлемую соль.

В предпочтительном варианте осуществления, соединение, имеющее формулу (1), представляет собой соединение, в котором

X представляет собой метилен,

R¹ представляет собой алкильную группу, содержащую от 1 до 4 атомов углерода,

R² представляет собой атом водорода, алкильную группу, содержащую от 1 до 3 атомов углерода, или алкильную группу, содержащую от 1 до 3 атомов углерода, замещенную гидрокси-группой,

R³ представляет собой алкильную группу, содержащую от 1 до 3 атомов углерода, или алкокси-группу, содержащую от 1 до 3 атомов углерода,

R⁴ представляет собой атом водорода, атом галогена, гидрокси-группу, алкильную группу, содержащую от 1 до 6 атомов углерода, или алкокси-группу, содержащую от 1 до 6 атомов углерода,

Y¹ представляет собой простую связь, и Y² представляет собой -C(O)-, или Y¹ представляет собой -(CR⁹R¹⁰)_p-, и Y² представляет собой простую связь,

L представляет собой линейный алкилен, содержащий 2-6 атомов углерода,

R⁵ и R⁶ независимо представляют собой атом водорода или алкильную группу, содержащую от 1 до 3 атомов углерода,

m представляет собой 0 или 1, предпочтительно 1,

все представляют собой простые связи или все представляют собой двойные связи,

или его фармацевтически приемлемую соль.

Примеры предпочтительных соединений по настоящему изобретению включают приведенные ниже соединения или их фармацевтически приемлемые соли:

(4E,8E,12E,16E,20E)-N-{2-[{4-[(2-амино-4-{[1-гидроксигексан-3-ил]амино}-6-метилпиримидин-5-ил)метил]бензил}(метил)амино]этил}-4,8,12,17,21,25-гексаметилгексакоза-4,8,12,16,20,24-гексаенамид;

(4E,8E,12E,16E,20E)-1-(4-{4-[(2-амино-4-{[1-гидроксипентан-2-ил]амино}-6-метилпиримидин-5-ил)метил]-3-метоксибензил}пиперазин-1-ил)-4,8,12,17,21,25-гексаметилгексакоза-4,8,12,16,20,24-гексаен-1-он;

(4E,8E,12E,16E,20E)-1-(4-{4-[(2-амино-4-{[1-гидроксипентан-2-ил]амино}-6-метилпиримидин-5-ил)метил]-3-метоксибензоил}пиперазин-1-ил)-4,8,12,17,21,25-гексаметилгексакоза-4,8,12,16,20,24-гексаен-1-он;

4-[(2-амино-4-{[1-гидроксипентан-2-ил]амино}-6-метилпиримидин-5-ил)метил]-N-(2-{[(4E,8E,12E,16E,20E)-4,8,12,17,21,25-гексаметилгексакоза-4,8,12,16,20,24-гексаеноил]амино}этил)-3-метоксибензамид; и

4-[(2-амино-4-{[1-гидроксипентан-2-ил]амино}-6-метилпиримидин-5-ил)метил]-N-(2-{[(4E,8E,12E,16E,20E)-4,8,12,17,21,25-гексаметилгексакоза-4,8,12,16,20,24-гексаеноил](метил)амино}этил)-3-метоксибензамид.

Альтернативно,

(4E,8E,12E,16E,20E)-N-{2-[{4-[(2-амино-4-{[(3S)-1-гидроксигексан-3-ил]амино}-6-метилпиримидин-5-ил)метил]бензил}(метил)амино]этил}-4,8,12,17,21,25-гексаметилгексакоза-4,8,12,16,20,24-гексаенамид;

(4E,8E,12E,16E,20E)-1-(4-{4-[(2-амино-4-{[(2S)-1-гидроксипентан-2-ил]амино}-6-метилпиримидин-5-ил)метил]-3-метоксибензил}пиперазин-1-ил)-4,8,12,17,21,25-гексаметилгексакоза-4,8,12,16,20,24-гексаен-1-он;

(4E,8E,12E,16E,20E)-1-(4-{4-[(2-амино-4-{[(2S)-1-гидроксипентан-2-ил]амино}-6-метилпиримидин-5-ил)метил]-3-метоксибензоил}пиперазин-1-ил)-4,8,12,17,21,25-гексаметилгексакоза-4,8,12,16,20,24-гексаен-1-он;

4-[(2-амино-4-{[(2S)-1-гидроксипентан-2-ил]амино}-6-метилпиримидин-5-ил)метил]-N-(2-{[(4E,8E,12E,16E,20E)-4,8,12,17,21,25-гексаметилгексакоза-4,8,12,16,20,24-гексаеноил]амино}этил)-3-метоксибензамид; и

4-[(2-амино-4-{[(2S)-1-гидроксипентан-2-ил]амино}-6-метилпиримидин-5-ил)метил]-N-(2-{[(4E,8E,12E,16E,20E)-4,8,12,17,21,25-гексаметилгексакоза-4,8,12,16,20,24-гексаеноил](метил)амино}этил)-3-метоксибензамид.

Настоящее изобретение включает композицию, содержащую несколько указанных выше соединений в комбинации.

Примеры фармацевтически приемлемой соли соединения, имеющего формулу (1), включают кислотно-аддитивные соли соединения, имеющего формулу (1), или соли соединения, имеющего формулу (1), с основаниями.

Примеры кислотно-аддитивной соли включают кислотно-аддитивные соли с неорганическими или органическими кислотами, такими как хлористоводородная кислота, бромистоводородная кислота, серная кислота, трифторуксусная кислота, лимонная кислота и малеиновая кислота. Примеры соли с основанием включают соли с щелочными металлами, такие как соль натрия или соль калия, соли с щелочно-земельными металлами, такие как соль кальция, и соль аммония.

Соединение, имеющее формулу (1), можно получить описанными ниже способами с применением известных соединений в качестве исходных.

Исходное соединение можно использовать в форме соли. Приведенные ниже способы являются иллюстративными, и соединение можно получать другим способом, основанным на знаниях, которыми владеет квалифицированный специалист в области органического синтеза.

Способ 1 получения соединения (1)

Соединение, имеющее формулу (1), или его соль можно получить, например, представленным ниже способом.

Соединение (1) можно получить реакцией соединения (3) с соединением (2) в инертном растворителе, с применением конденсирующего агента, опционально в присутствии основания.

Выбор основания не ограничен каким-либо специальным образом, при условии, что оно используется квалифицированными специалистами в области химических органических реакций, и его примеры включают органические основания, такие как N-метилморфолин, триэтиламин, диизопропилэтиламин, трибутиламин, 1,8-диазабицикло[4.3.0]нон-5-ен, 1,4-диазабицикло[5.4.0]ундец-7-ен, пиридин, диметиламинопиридин и пиколин; и неорганические основания, такие как бикарбонат натрия, бикарбонат калия, карбонат натрия и карбонат калия. Основание обычно применяют в количестве от 0,1 до 100 эквивалентов, предпочтительно от 1 до 5 эквивалентов, относительно соединения (3).

Конденсирующим агентом могут быть реагенты, описанные в Experimental Chemistry Course, Vol. 22, edited by The Chemical Society of Japan, Maruzen Co., Ltd., и его примеры включают эфиры фосфорной кислоты, такие как диэтилцианофосфат и дифенилфосфорилазид; карбодиимиды, такие как 1-этил-3-(3-диэтиламинопропил)-карбодиимид гидрохлорид (WSC•HCl) и дициклогексилкарбодиимид (DCC); комбинации дисульфида, такого как 2,2'-дипиридил дисульфид, и фосфина, такого как трифенилфосфин; галогениды фосфора, такие как N,N'-бис(2-оксо-3-оксазолидинил)фосфин хлорид (BOPCl); комбинации диэфиров азодикарбоновых кислот, таких как диэтил азодикарбоксилат, и фосфина, такого как трифенилфосфин; галогениды 2-галоген-1-низший алкилпиридиния, такие как 2-хлор-1-метилпиридиния иодид; 1,1'-карбонил диимидазол (CDI); дифенилфосфорилазид (DPPA); диэтилфосфорилцианид (DEPC); тетрафторбораты, такие как 2-(1H-бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилурония тетрафторборат (TBTU) и 2-хлор-1,3-диметилимидазолидиния тетрафторборат (CIB); фосфаты, такие как 2-(1H-бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилурония гексафторфосфат (HBTU), бензотриазол-1-илокситрис(диметиламино)фосфония гексафторфосфат (BOP), бензотриазол-1-илокситрис(пирролидино)фосфония гексафторфосфат (PYBOP), и 2-(7-аза-1H-бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилурония гексафторфосфат (HATU).

Примеры инертного растворителя включают простоэфирные растворители, такие как тетрагидрофуран, диэтиловый эфир, 1,4-диоксан, 1,2-диметоксиэтан; углеводородные растворители, такие как гексан, гептан, толуол, бензол и ксилол; галогенированные углеводородные растворители, такие как дихлорметан, хлороформ и дихлорэтан; кетонные растворители, такие как ацетон; апротонные растворители, такие как ацетонитрил, N,N'-диметилформамид, диметилсульфоксид и гексаметилфосфамид; и их смесь. Температура реакции предпочтительно выбрана (но не ограничивается только ей) из диапазона примерно от -70°C до 100°C, более предпочтительно от 0°C до 40°C.

Альтернативно, соединение (3) можно превратить с ацилгалогенид с помощью галогенирующего агента (например, 1-хлор-N,N,2-триметилпропениламин, оксихлорид фосфора, трихлорид фосфора, тионилхлорид, пентахлорид фосфора) и затем вводить в реакцию с соединением (2) в инертном растворителе, опционально в присутствии основания, с получением соединения (1).

Примеры инертного растворителя включают простоэфирные растворители, такие как тетрагидрофуран, диэтиловый эфир, 1,4-диоксан, 1,2-диметоксиэтан; углеводородные растворители, такие как гексан, гептан, толуол, бензол и ксилол; галогенированные углеводородные растворители, такие как дихлорметан, хлороформ и дихлорэтан; кетонные растворители, такие как метилэтилкетон и ацетон; и апротонные растворители, такие как ацетонитрил, N,N'-диметилформамид, диметилсульфоксид и гексаметилфосфамид. Примеры основания включают органические основания, такие как N-метилморфолин, триэтиламин, диизопропилэтиламин, трибутиламин, 1,8-диазабицикло[4.3.0]нон-5-ен, 1,4-диазабицикло[5.4.0]ундец-7-ен, пиридин, диметиламинопиридин, пиколин. Галогенирующий агент можно применять в количестве от 0,1 до 100 эквивалентов, предпочтительно от 0,8 до 3 эквивалентов, относительно соединения (3). Температура реакции предпочтительно выбрана (но не ограничивается только ей) из диапазона примерно от -30°C до 60°C.

Соединение (3) можно получить согласно хорошо известному в данной области методу (см. Org. Biomol. Chem. 2011, 9, 4367).

Способ 1 получения соединения (2)

Соединение (2a), где Y² в формуле (2) представляет собой -C(O)-, или его соль можно получить, например, представленным ниже способом.

,

где X, R¹, R², R³, R⁴, R⁵, R⁶, Y¹ и L имеют указанные выше значения.

Соединение (2a) можно синтезировать из соединения (4) и соединения (5a) согласно способу, описанному для получения соединения (1).

Соединение (4) можно получить согласно хорошо известному в данной области методу, такому как описано в WO 2009/067081 и WO 2010/103885.

Способ 2 получения соединения (2)

Соединение (2b), где Y² в формуле (2) представляет собой простую связь, или его соль можно получить, например, представленным ниже способом.

,

где X, R¹, R², R³, R⁴, R⁵, R⁶ и L имеют указанные выше значения, Y¹ представляет собой -(CR⁹R¹⁰)_p-, -CH=CH-(CR⁹R¹⁰)_q- или -C≡C-(CR⁹R¹⁰)q'-,

где p, q и q' имеют указанные выше значения, и

(1) Q¹ представляет собой -Y¹NHR⁵, и Q² представляет собой CHO; или

(2) Q¹ представляет собой -Y^1'-CHO, где Y^1' отсутствует или представляет собой алкилен, и -Y^1'-(CR⁹R¹⁰)- соответствует -Y¹-, и Q² представляет собой -CH₂NHR⁵.

Соединение (2b) можно получить сочетанием соединения (6) и соединения (5b) в условиях хорошо известной реакции восстановительного аминирования. Конкретнее, альдегидное соединение и аминное соединение вводят в реакцию в растворителе с восстанавливающим агентом, таким как триацетоксиборгидрид натрия и цианоборгидрид натрия, в присутствии или отсутствии кислоты, такой как уксусная кислота, с получением соединения (2b).

Соединение (6) можно получить согласно хорошо известному в данной области методу, такому как описано в WO2010/133885, WO2012/066335, и WO2012/066336.

Способ 3 получения соединения (2)

Также, соединение (2b) или его соль можно получить приведенным ниже способом.

,

где X, R¹, R², R³, R⁴, R⁵, R⁶ и L имеют указанные выше значения, и Y¹ представляет собой -(CR⁹R¹⁰)_p-, -CH=CH-(CR⁹R¹⁰)_q-, -C≡C-(CR⁹R¹⁰)q'- или -(CR⁹R¹⁰)_r-O-(CR^9'R^10')_r'-, где R⁹, R¹⁰, R^9', R^10', p, q, q', r и r' имеют указанные выше значения, и LG представляет собой уходящую группу.

Стадия 1

Соединение (7) можно получить согласно хорошо известному в данной области методу (см. WO 2010/133885, WO 2012/066336, и т.д.). Уходящая группа LG в соединении (8) не ограничена специальным образом и представляет собой одну из хорошо известных в данной области, и можно применять в ее роли атом галогена, алкилсульфонилокси-группу, арилсульфонилокси-группу и т.п.

Соединение (8) можно получить реакцией соединения (7) с метансульфонилхлоридом, п-толуолсульфонилхлоридом и т.п., в присутствии основания, такого как триэтиламин, диизопропилэтиламин, пиридин, диметиламинопиридин, карбонат натрия, карбонат калия и т.п. Температура реакции предпочтительно выбрана (но не ограничивается только им) из диапазона примерно от 0°C до 120°C.

Стадия 2

Соединение (2b) можно получить реакцией соединения (8) с соединением (5a) в инертном растворителе в присутствии основания.

Выбор основания не ограничен каким-либо специальным образом, при условии, что оно используется в качестве основания в стандартных реакциях, и его примеры включают органические основания, такие как N-метилморфолин, триэтиламин, диизопропилэтиламин, трибутиламин, 1,8-диазабицикло[4.3.0]нон-5-ен, 1,4-диазабицикло[5.4.0]ундец-7-ен, пиридин, диметиламинопиридин и пиколин; и неорганические основания, такие как бикарбонат натрия, бикарбонат калия, карбонат натрия, карбонат калия, карбонат цезия, гидроксид натрия и гидроксид калия. Основание обычно применяют в количестве от 0,1 до 100 эквивалентов, предпочтительно от 1 до 3 эквивалентов, относительно соединения (8).

Примеры инертного растворителя включают простоэфирные растворители, такие как тетрагидрофуран, диэтиловый эфир, 1,4-диоксан, 1,2-диметоксиэтан; углеводородные растворители, такие как гексан, гептан, толуол, бензол и ксилол; апротонные растворители, такие как ацетонитрил, N,N'-диметилформамид, N-метилпирролидон, диметилсульфоксид и их смесь. Температура реакции предпочтительно выбрана (но не ограничивается только ей) из диапазона примерно от 0°C до 120°C.

Способ 4 получения соединения (2)

Соединение (2b) или его соль можно также получить приведенным ниже способом.

,

где X, R¹, R², R³, R⁴, R⁵ и R⁶ имеют указанные выше значения, L представляет собой замещенный или незамещенный алкилен, содержащий от 2 до 6 атомов углерода, Y¹ представляет собой простую связь, -(CR⁹R¹⁰)_q-, -CH=CH-(CR⁹R¹⁰)_q-, -C≡C-(CR⁹R¹⁰)q'- или -(CR⁹R¹⁰)_r-O-(CR^9'R^10')_r'-, где R⁹, R¹⁰, R^9', R^10', q, q’, r и r’ имеют указанные выше значения, и LG представляет собой уходящую группу.

Соединение (2b) можно получить способом, аналогичным описанному на стадии 2 в Способе 3 получения Соединения (2), применяя соединение (9) и соединение (5c).

Соединение (9) можно получить согласно хорошо известному в данной области методу, такому как описано в WO2010/133885 и WO2012/066336.

Способ 5 получения соединения (2)

Соединение (2c) или его соль можно получить приведенным ниже способом.

,

где X, R¹, R², R³, R⁴, R⁵ и R⁶ имеют указанные выше значения, L’ представляет собой замещенный или незамещенный алкилен, содержащий от 1 до 5 атомов углерода, Y¹ представляет собой простую связь, -(CR⁹R¹⁰)_p-, -CH=CH-(CR⁹R¹⁰)_q-, -C≡C-(CR⁹R¹⁰)q'- или -(CR⁹R¹⁰)_r-O-(CR^9'R^10')_r'-, где R⁹, R¹⁰, R^9', R^10', p, q, r и r' имеют указанные выше значения.

Соединение (2c) можно получить как описано в способе получения соединения (1), применяя соединение (9) и соединение (5d).

В настоящем изобретении описаны интермедиаты из описанных выше способов. Примеры таких интермедиатов включают соединения, имеющие формулу (2):

,

где

X представляет собой метилен, атом кислорода, атом серы, SO, SO₂ или NR⁷, где R⁷ представляет собой атом водорода или алкильную группу, содержащую от 1 до 3 атомов углерода;

R¹ и R² независимо представляют собой атом водорода или замещенную или незамещенную алкильную группу, содержащую от 1 до 6 атомов углерода, при условии что когда алкильная группа является замещенной, она замещена 1-4 одинаковыми или разными заместителями, выбранными из группы, состоящей из гидрокси-группы, атома галогена и алкокси-группы, содержащей от 1 до 6 атомов углерода;

R³ представляет собой алкильную группу, содержащую от 1 до 6 атомов углерода, алкокси-группу, содержащую от 1 до 6 атомов углерода, или алкилтио-группу, содержащую от 1 до 6 атомов углерода;

R⁴ представляет собой атом водорода, атом галогена, гидрокси-группу, алкильную группу, содержащую от 1 до 6 атомов углерода, алкокси-группу, содержащую от 1 до 6 атомов углерода, или циано-группу;

Y¹ представляет собой простую связь, -(CR⁹R¹⁰)_p-, -CH=CH-(CR⁹R¹⁰)_q-, -C≡C-(CR⁹R¹⁰)_q'-, или -(CR⁹R¹⁰)_r-O-(CR^9'R^10')_r'-, где R⁹, R¹⁰, R^9' и R^10' независимо представляют собой атом водорода или алкильную группу, содержащую от 1 до 4 атомов углерода;

Y² представляет собой простую связь или -C(O)-;

L представляет собой замещенный или незамещенный линейный алкилен, содержащий от 2 до 6 атомов углерода, или двухвалентную группу, образованную из 4-8-членного циклоалкана, при условии что когда линейный алкилен или циклоалкан является замещенным, он замещен 1-4 одинаковыми или разными заместителями, выбранными из группы, состоящей из алкильной группы, содержащей от 1 до 5 атомов углерода, гидрокси-группы и атома галогена, и любая из метиленовых групп в линейном алкилене L необязательно заменена на карбонильную группу;

R⁵ и R⁶ независимо представляют собой атом водорода или замещенную или незамещенную алкильную группу, содержащую от 1 до 6 атомов углерода, или R⁵ или R⁶ связан с любым атомом углерода в L с образованием 4-8-членного азотсодержащего насыщенного гетероцикла, или R⁵ и R⁶ объединены с образованием замещенного или незамещенного 5-8-членного азотсодержащего насыщенного гетероцикла; при условии что когда алкильная группа является замещенной, она замещена одинаковыми или разными 1-4 группами, выбранными из группы, состоящей из гидрокси-группы и атома галогена; когда 4-8-членный азотсодержащий насыщенный гетероцикл или 5-8-членный азотсодержащий насыщенный гетероцикл является замещенным, он замещен одинаковыми или разными 1-4 группами, выбранными из группы, состоящей из метильной группы, этильной группы, пропильной группы, гидроксиметильной группы, гидроксиэтильной группы, карбонильной группы, гидрокси-группы и атома галогена;

p представляет собой целое число от 1 до 6;

q и q' независимо равны целым числам от 0 до 4;

r представляет собой целое число от 0 до 5, и r' представляет собой целое число от 1 до 5, при условии что r' представляет собой целое число, равное 2 или больше, когда сумма r и r' равна 5 или меньше, и Y² представляет собой простую связь; и

R⁸ представляет собой атом водорода или амино-защитную группу,

и их фармацевтически приемлемые соли.

Защитная группа в R⁸ в формуле (2) может представлять собой (но не ограничена только ими) группу, обычно применяющуюся в качестве защитной группы для амино-группы. Частные примеры включают карбаматы, такие как т-бутоксикарбонильная группа, бензилоксикарбонильная группа и 9-флуоренилметилоксикарбонильная группа; бензильную группу; сульфоны, такие как нозильная группа; имиды, такие как фталимид.

В способе по настоящему изобретению, если конкретную функциональную группу в реагенте, такую как гидрокси-группа или амино-группа, необходимо защитить, то постановку защиты и снятие защиты можно проводить с помощью одной или больше защитных групп на подходящей стадии описанного способа, по хорошо известным в данной области методикам.

Введение и снятие защитных групп описано в работах J. W. F. McOmie, Ed., “Protective Groups in Organic Chemistry”, Plenum Press (1973) и T. W. Greene and P. G. M. Wuts, “Protective Groups in Organic Synthesis,” 3rd Edition, Wiley-Interscience (1999).

В настоящем изобретении описана фармацевтическая композиция, содержащая описанное выше соединение, имеющее формулу (1), или его фармацевтически приемлемую соль, в комбинации с фармацевтически приемлемым разбавителем или носителем.

Фармацевтическую композицию можно применять в качестве адъюванта для поддержания или повышения иммуностимулирующей активности действующего вещества, имеющего иммуностимулирующую активность.

То есть, соединение по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемая соль обладают активностью, заключающейся в том, что они индуцируют или усиливают антиген-специфичное антитело, в частности антиген-специфичный IgG, конкретнее Th1-типа антиген-специфичный IgG (например, IgG2c).

Кроме того, соединение по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемая соль обладают активностью, заключающейся в том, что они индуцируют или повышают уровень CD4-положительных (т.е. MHC class 2-рестриктированных) и/или CD8-положительных (т.е. MHC Class 1-рестриктированных) T-лимфоцитов.

Кроме того, соединение по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемая соль обладают активностью, заключающейся в том, что они индуцируют или повышают уровень MHC-рестриктированных антиген-специфичных T-лимфоцитов.

Также, соединение по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемая соль обладают активностью, заключающейся в том, что они индуцируют или повышают уровень T-лимфоцитов памяти, конкретнее CD8-положительных эффекторных T-лимфоцитов памяти.

Кроме того, соединение по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемая соль при введении млекопитающему отличается тем, что его активность в индуцировании системных медиаторов воспаления, т.е. в повышении концентрации интерферона-α, интерферона-γ, IL-6, IP-10 и т.п., ниже, чем у той же дозировки соединения без скваленовой структуры.

Фармацевтическая композиция может содержать антиген. Примеры антигена включают опухолевый антигенный белок; опухолевый антигенный пептид, производный от указанного опухолевого антигенного белка, такого как NY-ESO-1, MAGE-3, WT1 и Her2/neu; гипервариабельный участок антитела; и патоген-производный антиген, такой как белок или его частичный пептид, полученный из вируса или бактерии. Также, при использовании в настоящем тексте, в понятие антигена входит комплекс такого антигена и носителя. Примеры такого комплекса включают комплексы, в которых антиген (включая белки и пептиды, но не ограничиваясь только ими) химически связан с белком, который служит носителем, через хорошо известный в данной области линкер; и комплексы, в которых антиген содержится в вирусоподобной частице (virus-like particle (VLP)). Таким образом, соединение по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемая соль, при использовании в комбинации с указанным выше антигеном, может применяться в качестве лекарственного средства для лечения или профилактики рака, вирусной или бактериальной инфекции.

Кроме того, соединение по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемая соль могут применяться в качестве адъюванта для усиления иммуностимуляции при лечении, направленном на индуцирование другой иммунологической или иммунной реакции. Частные примеры такого лечения включают ex vivo и in vivo подходы к усилению иммуногенности опухолевых клеток у пациента (например, трансфекция цитокинами, такими как интерлейкин 2, интерлейкин 4 или гранулоцитарный-макрофагальный колониестимулирующий фактор), подходы, направленные на снижение анергии T клеток, подходы с применением трансфицированных иммуноцитов (например, цитокин-трансфицированных дендритных клеток), подходы с применением цитокин-трансфицированных опухолевых клеток, подходы, направленные на снижение активности иммуносупрессорных клеток (например, регуляторных Т-лимфоцитов, подавленных клеток костного мозга и IDO (индоламин 2,3-диоксигеназа)-экспрессирующих дендритных клеток), и лучевая терапия, направленная на индуцирование иммунного ответа.

Примеры способа введения фармацевтической композиции включают парентеральное введение, конкретнее – внутрисосудистое (например, внутривенное), подкожное, внутрикожное, внутримышечное, интраназальное и чрезкожное введение.

В одном варианте осуществления, фармацевтическая композиция по настоящему изобретению может содержать соединение, имеющее формулу (1), или его фармацевтически приемлемую соль и фармацевтически приемлемый разбавитель или носитель.

Дозированная форма фармацевтической композиции по настоящему изобретению может представлять собой жидкий препарат для инъекций или назальные капли или лиофилизированный препарат, полученный лиофилизацией жидкого препарата.

Примеры жидкого препарата для инъекций включают эмульсию, содержащую водный раствор и масляную композицию, липосомы, водный раствор или суспензию, где действующее вещество и/или соединение, имеющее формулу (1), или его фармацевтически приемлемая соль растворены или диспергированы в воде, и масляный раствор или суспензию, где действующее вещество и/или соединение, имеющее формулу (1), или его фармацевтически приемлемая соль растворены или диспергированы в масле.

Примеры жидкого препарата для назальных капель включают эмульсию, содержащую водный раствор и масляную композицию, липосомы, водный раствор или суспензию, где действующее вещество и/или соединение, имеющее формулу (1), или его фармацевтически приемлемая соль растворены или диспергированы в воде.

Водный раствор, препарат в форме водного раствора или водной суспензии могут представлять собой водный раствор или водную суспензию, содержащие дистиллированную воду для инъекций и, при необходимости, буферные добавки, рН-регулятор, стабилизатор, изотонизирующий агент или эмульгатор.

Масляная композиция, препарат в форме масляного раствора или масляной суспензии могут представлять собой композицию, содержащую растительное масло и жир, животное масло и жир, углеводород, сложный эфир жирной кислоты и т.п., конкретнее – композицию, содержащую сквален, сквалан и т.п.

Эмульсия, в контексте настоящего изобретения, может представлять собой эмульсию типа масло-в-воде или вода-в-масле. Масло, использующееся в эмульсии типа масло-в-воде, не ограничено каким-либо особым образом, при условии, что оно способно растворять или однородно диспергировать соединение, имеющее формулу (1) (или его фармацевтически приемлемую соль), и оно может представлять собой растительное масло и жир, животное масло и жир, углеводород, сложный эфир жирной кислоты и т.п., и конкретнее – сквален, сквалан и т.п. Масло, использующееся в эмульсии типа вода-в-масле, не ограничено каким-либо особым образом, при условии, что оно способно растворять или однородно диспергировать соединение, имеющее формулу (1) (или его фармацевтически приемлемую соль), и оно может представлять собой растительное масло и жир, животное масло и жир, углеводород, сложный эфир жирной кислоты и т.п.

Конкретнее, эмульсия типа масло-в-воде может содержать 0,1 - 10 вес.% сквалена. В одном варианте осуществления, эмульсия типа масло-в-воде может содержать 0.001 - 1 вес.% соединения, имеющего формулу (1), или его фармацевтически приемлемой соли и 1 - 10 вес.% сквалена. Эмульсия типа масло-в-воде может дополнительно содержать одно или больше поверхностно-активных веществ или буферных добавок. Поверхностно-активные вещества и их количество не ограничены каким-либо особым образом, при условии, что они являются предпочтительными для поддержания однородного эмульгированного состояния, и их примеры включают полисорбаты, полиоксиэтилен гидрированное касторовое масло, полиоксиэтилен полиоксипропилен гликоли, сложные эфиры жирных кислот с полиспиртами и сложные эфиры жирных кислот, например 0,1 - 5 вес.% полисорбата 80, 0,1 - 5 вес.% сорбитан триолеата (например, Span 85^TM). Примеры буферных добавок включают фосфатные соли и соли органических кислот.

При приготовлении лиофилизированных препаратов можно при необходимости добавлять вспомогательное вещество. Вспомогательные вещества и их количество не ограничены каким-либо особым образом, при условии, что они являются предпочтительными для формирования хорошей лиофилизированной пеллеты или лиофилизированного порошка, и их примеры включают сахариды, сахарные спирты, аминокислоты и хлорид натрия, например 0,1 – 20% маннита.

Фармацевтическая композиция по настоящему изобретению может дополнительно содержать другие добавки, и примеры таких добавок включают поверхностно-активные вещества, антиоксиданты, консерванты и успокаивающие вещества.

Соединение, имеющее формулу (1), или его фармацевтически приемлемую соль можно вводить одновременно или с любым интервалом до или после антигенного вещества (иммуногена) в дозировке однократного введения от 5 до 5000 мг/м² площади поверхности тела, т.е. примерно от 0,1 нг/кг до 100 мг/кг, что обеспечивает профилактически или терапевтически эффективную дозировку. Лекарственная форма с однократной дозировкой для инъекций, таблеток или капсул обычно содержит, например, от 1 нг до 250 мг действующего вещества, и предпочтительно применяется в дозировке, составляющей от 1 нг до 50 мг/кг в сутки. Однако, суточная дозировка может значительно варьироваться в зависимости от субъекта, подвергающегося лечению, способа введения и степени тяжести заболевания. Таким образом, оптимальную дозировку может определить лечащий врач, проводящий лечение конкретного пациента или теплокровного животного.

Термин "лечение" при использовании в настоящем тексте означает облегчение некоторых или всех симптомов заболевания, частично или полностью, или предотвращение или замедление прогресса заболевания.

Термин "предотвращение" при использовании в настоящем тексте означает первичное предотвращение заболевания (предотвращение наступления заболевания) или вторичное предотвращение (предотвращение рецидива у пациента, у которого были облегчены симптомы или было излечено заболевание после его наступления, предотвращение повторного проявления).

Поскольку соединение по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемая соль обладает иммуностимулирующей активностью in vitro или in vivo, то его можно применять в качестве адъюванта вакцины для поддержания или усиления иммуногенности антигена.

Соединение по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемая соль может применяться для поддержания или усиления эффекта иммуностимулирующего вещества, которое представляет собой средство для лечения или предотвращения заболевания, т.е. вещество, индуцирующее антиген-специфичную иммунную реакцию.

Фармацевтическая композиция, содержащая соединение по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемую соль и вещество, усиливающее антиген-специфичную иммунную реакцию (называемое также антигеном), также представляет собой вариант осуществления настоящего изобретения. Антиген может представлять собой (но не ограничен только ими) антигенный белок, антигенный пептид (частичный пептид), являющийся производным указанного антигенного белка, или их комплекс с носителем.

В частном варианте осуществления настоящего изобретения, соединение по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемую соль можно вводить в комбинации с опухолевым антигенным белком или опухолевым антигенным пептидом в целях иммунотерапии рака для лечения или предотвращения рака. Примеры рака включают общеизвестные виды рака, такие как рак мочевого пузыря, рак головы и шеи, рак предстательной железы, рак груди, рак легкого, рак яичника, рак поджелудочной железы, рак тонкого и толстого кишечника, рак желудка, рак кожи и рак мозга; злокачественные опухоли (лимфома Ходжкина и неходжкинская лимфома, и т.д.), которые поражают костный мозг (включая лейкемию) и лимфопролиферативную систему. Лечение и предотвращение рака, в контексте настоящего изобретения, может представлять собой предотвращение метастазирующего процесса и рецидива опухоли, и предотвращение и лечение паранеопластического синдрома.

Примеры антигена включают (но не ограничиваются только ими) MAGE (Science, 254: p 1643 (1991)), gp 100 (J. Exp. Med., 179: p 1005 (1994)), MART-1 (Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 91: p3515 (1994)), тирозиназу (J. Exp. Med., 178: p489 (1993)), белки семейства антигенов MAGE (J. Exp. Med., 179: p921 (1994)), β-катенин (J. Exp. Med., 183: p1185 (1996)), CDK4 (Science, 269: p1281 (1995)), HER2/neu (J. Exp. Med., 181: p2109 (1995)), мутантный p53 (Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 93: p14704(1996)), CEA (J. Natl. Cancer. Inst., 87: p982 (1995)), PSA (J. Natl. Cancer. Inst., 89: p293 (1997)), WT1 (Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 101: p13885 (2004)), HPV-производный антиген (J. Immunol., 154: p5934 (1995)) и EBV-производный антиген (Int. Immunol., 7: p653 (1995)).

Примеры опухолевого антигенного пептида, производного от ракового антигена, включают (но не ограничиваются только ими) MAGEA3 пептид 168-176 (Coulie PG et al., Immunol. Rev. 188: 33 (2002)), gp100 пептид 209-217 (Rosenberg SA et al., Nat. Med. 4: 321 (1998)), gp100 пептид 280-288 (Phan GQ et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 100: 8372 (2003)), Melan-A пептид 27-35 (Cormier JN et al., Cancer J. Sci. Am. 3: 37 (1997)), Melan-A пептид 26-35, Тирозиназы пептид 1-9, Тирозиназы пептид 368-376, gp100 пептид 280-288, gp100 пептид 457-466 (Jager E et al., Int. J. Cancer 67: 54 (1996)), HER-2 пептид 369-384, HER-2 пептид 688-703, HER-2 пептид 971-984 (Knutson KL et al., J. Clin. Invest. 107: 477 (2001)) и MAGE-A12 пептид 170-178 (Bettinotti MP et al., Int. J. Cancer 105: 210 (2003)).

Кроме того, соединение по настоящему изобретению или его фармацевтически приемлемая соль, при введении в комбинации с действующим веществом вакцины для предотвращения инфекционных заболеваний, может предотвращать различные инфекционные заболевания, такие как остроконечная кондилома, обыкновенные бородавки, подошвенные бородавки, гепатит В, гепатит С, вирус простого герпеса, контагиозный моллюск, черная оспа, вирус иммунодефицита человека (ВИЧ), вирус папилломы человека (HPV), респираторно-синцитиальный вирус (РС-вирус), норовирус, цитомегаловирус (CMV), вирус ветряной оспы (VZV), риновирус, аденовирус, коронавирус, грипп и парагрипп; бактериальные заболевания, такие как туберкулез, mycobacterium avium и болезнь Хансена; инфекции, такие как микоз, хламидии, кандидоз, аспергиллез, криптококковый менингит, пневмоцистная пневмония, криптоспоридиоз, гистоплазмоз, токсоплазмоз, малярия, трипаносомные инфекции и лейшманиоз. Примеры действующего вещества в вакцинах для предотвращения инфекционных заболеваний включают (но не ограничиваются только ими) вещества, полученные из микроорганизмов/патогенов, включая бактерии, грибы, простейшие, и вирусов, вызывающих инфекционные заболевания, такие как антигенный белок, антигенный пептид (частичный пептид) из указанного антигенного белка, полисахарид, липид и их комбинация или комбинация веществ, полученных из указанных микроорганизмов/патогенов, и носителя.

Примеры вирусного антигенного пептида, производного от вирусного антигена, включают (но не ограничиваются только ими) матриксный белок гриппа пептид 58-66 (Jager E et al., Int. J. Cancer 67: 54 (1996)), HPV16 E7 пептид 86-93 (van Driel WJ et al., Eur. J. Cancer 35:946 (1999)), HPV E7 пептид 12-20 (Scheibenbogen C et al., J. Immunother 23: 275 (2000)), HPV16 E7 пептид 11-20 (Smith JWI et al., J. Clin. Oncol. 21: 1562 (2003)), HSV2 gD (Berman PW et al., Science 227: 1490 (1985)), CMV gB (Frey SE et al., Infect Dis. 180: 1700 (1999), Gonczol E. et al., Exp. Opin. Biol. Ther. 1: 401 (2001)) и CMV pp65 (Rosa CL et al., Blood 100: 3681 (2002), Gonczol E. et al., Exp. Opin. Biol. Ther. 1: 401 (2001)).

Носитель, в контексте настоящего изобретения, представляет собой вещество, такое как белок и липид, к которому антигенный белок или антигенный пептид присоединен химически и/или физически, и его примеры включают (но не ограничиваются только ими), CRM 197 (Vaccine. 2013 Oct 1; 31(42):4827-33), KLH (Cancer Immunol Immunother. 2003 Oct; 52(10):608-16), вирусоподобные частицы (PLoS ONE 5(3): e9809) и липосомы (J Liposome Res. 2004; 14(3-4):175-89).

Антигенный белок можно получить путем клонирования кДНК, кодирующей антигенный белок, и экспрессирования в клетке-хозяине, согласно пособиям, таким как Molecular Cloning 2nd ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press (1989).

Синтез антигенного пептида можно проводить согласно методу, общепринятому в химии пептидов, например, как описано в литературных источниках (Peptide Synthesis, Interscience, New York, 1966; The Proteins, Vol. 2, Academic Press Inc., New York, 1976).

В настоящем изобретении также описан набор, содержащий:

a) соединение, имеющее формулу (1), или его фармацевтически приемлемую соль;

b) антиген; и

c) контейнер или приспособление для вмещения дозированной лекарственной формы из a) и b) в комбинации или по отдельности.

Антиген не ограничен каким-либо специальным образом, при условии, что он представляет собой антиген, который можно применять в качестве действующего вещества в вакцинах, и его примеры включают антигенные белки, такие как перечислено выше, антигенные пептиды (частичные пептиды), являющиеся производными таких антигенных белков, и их комплексы с носителем.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения, описано применение соединения, имеющего формулу (1), или его фармацевтически приемлемой соли для производства адъюванта вакцины.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения, описано применение соединения, имеющего формулу (1), или его фармацевтически приемлемой соли в качестве адъюванта вакцины для изготовления вакцины для лечения заболевания или патологического состояния.

В одном варианте осуществления, в настоящем изобретении описан способ лечения, предотвращения или профилактики развития заболеваний, включающий стадию введения пациенту соединения, имеющего приведенную выше формулу (I), или его фармацевтически приемлемой соли, совместно с антигеном.

Настоящее изобретение ниже описано с привлечением примеров, которые не должны рассматриваться как каким-либо образом ограничивающие объем настоящего изобретения.

Примеры

ТГФ: тетрагидрофуран

EtOAc: этилацетат

NMP: N-метилпирролидинон

ТЭА: триэтиламин

Условия проведения анализа методом ВЭЖХ-МС (высокоэффективная жидкостная хроматография – масс-спектрометрия) приведены ниже. Наблюдаемые значения МС (m/z) приведены для M+H.

МС детектор: LCMS-IT-TOF

ВЭЖХ: Shimadzu Nexera X2 LC 30AD

Колонка: Kinetex 1.7μ C18 100A New column 50 × 2.1 мм

Скорость потока: 1.2 мл/мин

Длина волны детектора: 254 нм

Подвижная фаза: Раствор A: 0,1%-ный водный раствор муравьиной кислоты

Раствор B: ацетонитрил

Программирование по времени:

Стадия время (мин)

1 0.01-1.40 Раствор A: Раствор B = от 90: 10 до 5: 95

2 1.40-1.60 Раствор A: Раствор B = 5: 95

3 1.61-2.00 Раствор A: Раствор B = 99: 1

Пример 1

(4E,8E,12E,16E,20E)-N-{2-[{4-[(2-амино-4-{[(3S)-1-гидроксигексан-3-ил]амино}-6-метилпиримидин-5-ил)метил]бензил}(метил)амино]этил}-4,8,12,17,21,25-гексаметилгексакоза-4,8,12,16,20,24-гексаенамид

Стадия 1

Метил 4-2-(этоксикарбонил)-3-оксобутил)бензоат (3.56 г, 12.8 ммоль) и карбонат гуанидина (4.61 г, 25.6 ммоль) растворяли в метаноле (23 мл), и смесь кипятили при перемешивании в течение 7 часов. После охлаждения реакционной смеси, добавляли воду (30 мл) и уксусную кислоту (0,660 мл, 11.5 ммоль). Выпавший твердый осадок собирали фильтрованием. Полученное твердое вещество суспендировали в ТГФ и кипятили при перемешивании в течение одного часа. После охлаждения, твердый осадок отделяли фильтрованием, промывали ТГФ и сушили, получая целевой продукт (1.62 г, 46%).

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d⁶) δ2.00 (3H, с), 3.71 (2H, с), 3.82 (3H, с), 6.35(1H, ушир), 7.31 (2H, д, J = 8.3 Гц), 7.84 (2H, д, J = 8.3 Гц).

Стадия 2

Соединение, полученное на стадии 1 (1.62 г, 5.93 ммоль), и N,N,N',N'-тетраметил-1,3-пропандиамин (1.41 мл, 8.89 ммоль) суспендировали в ТГФ (24 мл) и добавляли 2-мезитиленсульфонил хлорид (1.94 г, 8.89 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре 20 часов. Добавляли воду в смесь. Смесь экстрагировали этилацетатом. Органический слой промывали насыщенным раствором хлорида натрия, сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали и упаривали при пониженном давлении. Полученное твердое вещество промывали эфиром и гексаном, и сушили, получая целевой продукт (2.69 г, 99.6%).

¹H-ЯМР (400 МГц, ДМСО-d⁶) δ2.20 (3H, с), 2.29 (3H, с), 2.48 (6H, с), 3.84 (3H, с), 3.88 (2H, с), 6.35 (1H, ушир), 7.08 (2H, с), 7.19 (2H, д, J = 8.3 Гц), 7.85 (2H, д, J = 8.3 Гц).

Стадия 3

Метил 4-((2-амино-4-((мезитилсульфонил)окси)-6-метилпиримидин-5-ил)метил)бензоат (3.6 г, 8.0 ммоль) растворяли в пропионитриле (80 мл). Добавляли (S)-(+)-3-амино-1-гексанол (5.6 г, 48 ммоль) и трифторуксусную кислоту (1.2 мл, 16 ммоль), и смесь нагревали до 110°C. После перемешивания в течение 36 часов, смесь охлаждали до комнатной температуры и упаривали при пониженном давлении. Остаток очищали на колонке с силикагелем (этилацетат:метанол = от 20:1 до 5:1), получая целевой продукт (2.1 г, 71%).

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ 0,73 (т, J = 7.2 Гц, 3H), 0,90-1.76 (м, 6H), 2.41 (с, 3H), 3.49-3.61 (м, 2H), 3.69-3.87 (м, 2H), 3.90 (с, 3H), 4.24 (м, 1H), 7.17 (д, J = 8.0 Гц, 2H), 7.98 (д, J = 8.0 Гц, 2H).

Стадия 4

(S)-Метил 4-((2-амино-4-((1-гидроксигексан-3-ил)амино)-6-метилпиримидин-5-ил)метил)бензоат] (2.1 г, 5.6 ммоль) растворяли в смеси тетрагидрофуран (56 мл)/метанол (5.6 мл). Добавляли боргидрид лития (3M в тетрагидрофуране, 5.6 мл, 17 ммоль), и смесь нагревали до 60°C. После перемешивания в течение 2 часов, добавляли боргидрид лития (3M в тетрагидрофуране, 5.6 мл, 17 ммоль), и смесь перемешивали далее при 60°C в течение 2 часов. После охлаждения до 0°C, добавляли 4н. раствор хлористоводородной кислоты (30 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре 1 час, нейтрализовали водным раствором гидрокарбоната натрия, и затем экстрагировали этилацетатом. Органический слой промывали насыщенным раствором хлорида натрия, сушили над сульфатом магния и упаривали при пониженном давлении, получая сырой продукт (1.2 г).

¹H-ЯМР (CD₃OD) δ 0,78 (т, J = 7.2 Гц, 3H), 1.03-1.76 (м, 6H), 2.18 (с, 3H), 3.41-3.48 (м, 2H), 3.76-3.88 (м, 2H), 4.23 (м, 1H), 4.55 (с, 2H), 7.11 (д, J = 8.0 Гц, 2H), 7.26 (д, J = 8.0 Гц, 2H).

Стадия 5

(S)-3-((2-амино-5-(4-(гидроксиметил)бензил)-6-метилпиримидин-4-ил)амино) гексан-1-ол (1.2 г, 3.5 ммоль) растворяли в смеси хлороформ (35 мл)/метанол (3.5 мл), и добавляли диоксид марганца (3.1 г, 35 ммоль). Смесь перемешивали в течение ночи и фильтровали через целит. Фильтрат упаривали при пониженном давлении. Остаток очищали на колонке с силикагелем (хлороформ:метанол = от 99:1 до 4:1), получая целевой продукт (0,72 г, 37% за две стадии).

¹H-ЯМР (CD₃OD) δ 0,70 (т, J = 7.2Гц, 3H), 1.05-1.77 (м, 6H), 2.20 (с, 3H), 3.42-3.50 (м, 2H), 3.90-4.03 (м, 2H), 4.32 (м, 1H), 7.35 (д, J = 8.0 Гц, 2H), 7.84 (д, J = 8.0 Гц, 2H), 9.93 (с, 1H).

Стадия 6

(S)-4-((2-амино-4-((1-гидроксигексан-3-ил)амино)-6-метилпиримидин-5-ил)метил) бензальдегид (0,28 г, 0,82 ммоль) растворяли в хлороформе (8 мл). Добавляли трет-бутил (2-(метиламино)этил)карбамат (0,29 г, 1.6 ммоль), уксусную кислоту (0,23 мл, 4.1 ммоль) и триацетоксиборгидрид натрия (0,52 г, 2.5 ммоль). Смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Добавляли воду, и смесь экстрагировали этилацетатом. Органический слой промывали насыщенным раствором хлорида натрия, сушили над сульфатом магния, упаривали при пониженном давлении. Остаток очищали на колонке с амино-силикагелем (этилацетат: метанол = от 99: 1 до 95: 5), получая сырой продукт (0,23 г, 56 %).

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ 0,66 (т, J = 7.2 Гц, 3H), 0,91-1.77 (м, 6H), 1.40 (с, 9H), 2.12 (с, 3H), 2.26 (с, 3H), 2.39-2.44 (м, 2H), 3.15-3.46 (м, 4H), 3.43 (с, 2H), 3.61-3.86 (м, 2H), 4.05(м, 1H), 4.67-4.77 (ушир, 2H), 4.91-5.01 (ушир, 1H), 7.05 (д, J = 8.0 Гц, 2H), 7.18 (д, J = 8.0 Гц, 2H).

Стадия 7

(S)-Бутил (2-((4-((2-амино-4-((1-гидроксигексан-3-ил)амино)-6-метилпиримидин-5-ил)метил)бензил)(метил)амино)этил)карбамат (0,150 г, 0,29 ммоль) растворяли в хлороформе (4 мл). Добавляли хлороводород (4M в циклопентил-метиловом эфире, 2.2 мл, 8.80 ммоль). Смесь перемешивали при комнатной температуре 1 час и затем упаривали при пониженном давлении. (4E,8E,12E,16E,20E)-4,8,12,17,21,25-Гексаметилгексакоза-4,8,12,16,20,24-гексаеновую кислоту (123 мг, 0,262 ммоль), 1-[бис(диметиламино) метилен]-1H-1,2,3-триазоло[4,5-b]пиридин-1-ия 3-оксид гексафторфосфат (150 мг, 0,393 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламин (0,137 мл, 0,787 ммоль) растворяли в N,N-диметилформамиде (3 мл), и смесь перемешивали 5 минут. Сырой продукт растворяли в N,N-диметилформамиде (3 мл) и добавляли в смесь. Смесь перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Добавляли воду, и смесь экстрагировали этилацетатом. Органический слой промывали насыщенным раствором хлорида натрия, сушили над сульфатом магния и упаривали при пониженном давлении. Остаток очищали на колонке с амино-силикагелем (хлороформ: метанол = от 99: 1 до 90:10), получая целевой продукт (80 мг, 32%).

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ 0,71 (т, J = 7.2Гц, 3H), 0,92-1.83 (м, 27H), 1.95-2.08 (м, 20H), 2.18-2.32 (м, 10H), 2.46 (т, J = 6.0 Гц, 2H), 3.28-3.43 (м, 4H), 3.46 (с, 2H), 3.64-3.81 (м, 2H), 4.10 (м, 1H), 4.48-4.58 (ушир, 2H), 5.06-5.17 (м, 6H), 5.94-6.04 (ушир, 1H), 7.06 (д, J = 8.0 Гц, 2H), 7.20 (д, J = 8.0 Гц, 2H). ESI: [M+H]⁺ 852.6.

Пример 2

(4E,8E,12E,16E,20E)-1-(4-{4-[(2-амино-4-{[(2S)-1-гидроксипентан-2-ил]амино}-6-метилпиримидин-5-ил)метил]-3-метоксибензил}пиперазин-1-ил)-4,8,12,17,21,25-гексаметилгексакоза-4,8,12,16,20,24-гексаен-1-он

Целевой продукт (96 мг, 23% за две стадии) получали по методике, аналогичной стадии 6 и стадии 7 примера 1, используя известное соединение (S)-4-((2-амино-4-((1-гидроксипентан-2-ил)амино)-6-метилпиримидин-5-ил)метил)-3-метоксибензальдегид (0,10 г, 0,28 ммоль), т-бутил пиперазин-1-карбоксилат (0,13 г, 0,71 ммоль) и (4E,8E,12E,16E,20E)-4,8,12,17,21,25-гексаметилгексакоза-4,8,12,16,20,24-гексаеновую кислоту (72 мг, 0,15 ммоль).

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ 0,77 (т, J = 7.2Гц, 3H), 1.00-1.44 (м, 4H), 1.57-1.65 (м, 21H), 1.88-2.04 (м, 20H), 2.23-2.38 (м, 11H), 3.38-3.74 (м, 6H), 3.44 (с, 2H), 3.67 (с, 2H), 3.88 (с, 3H), 4.00 (м, 1H), 4.77-4.87 (ушир, 2H), 5.03-5.11 (м, 6H), 6.79 (д, J = 8.0 Гц, 1H), 6.86 (с, 1H), 6.89 (д, J = 8.0 Гц, 1H). ESI: [M+H]⁺ 879.6.

Пример 3

(4E,8E,12E,16E,20E)-1-(4-{4-[(2-амино-4-{[(2S)-1-гидроксипентан-2-ил]амино}-6-метилпиримидин-5-ил)метил]-3-метоксибензоил}пиперазин-1-ил)-4,8,12,17,21,25-гексаметилгексакоза-4,8,12,16,20,24-гексаен-1-он

Стадия 1

(S)-4-((2-амино-4-((1-гидроксипентан-2-ил)амино)-6-метилпиримидин-5-ил)метил)-3-метоксибензойную кислоту (190 мг, 0,507 ммоль), которую получали как описано в WO2012/066336, и 1-BOC-пиперазин (142 мг, 0,761 ммоль) растворяли в N,N-диметилформамиде (5 мл). Добавляли 1-[бис(диметиламино)метилен]-1H-1,2,3-триазоло[4,5-b]пиридиний 3-оксид гексафторфосфат (289 мг, 0,761 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламин (197 мг, 1.52 ммоль), и смесь перемешивали при комнатной температуре 10 часов. Добавляли воду в смесь, и экстрагировали хлороформом. Органический слой сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали и упаривали при пониженном давлении. Полученный остаток очищали методом колоночной хроматографии на силикагеле (этилацетат/метанол = от 20/1 до 5/1), получая целевой продукт (202 мг, 73%) в виде бесцветного аморфного вещества.

MS (ESI+): [M+H]⁺ 543.4.

Стадия 2

(S)-трет-Бутил 4-(4-((2-амино-4-((1-гидроксипентан-2-ил)амино)-6-метилпиримидин-5-ил) метил)-3-метоксибензоил)пиперазин-1-карбоксилат (200 мг, 0,369 ммоль) растворяли в хлороформе (3.0 мл). Добавляли 4M раствор хлороводорода в циклопентилметиловом эфире (3 мл, 12.0 ммоль), и смесь перемешивали при комнатной температуре 1 час. Добавляли в реакционную смесь толуол, и смесь упаривали при пониженном давлении. Остаток добавляли в раствор (4E,8E,12E,16E,20E)-4,8,12,17,21,25-гексаметилгексакоза-4,8,12,16,20,24-гексаеновой кислоты (166 мг, 0,355 ммоль), 1-[бис(диметиламино) метилен]-1H-1,2,3-триазоло[4,5-b]пиридиний 3-оксид гексафторфосфата (202 мг, 0,532 ммоль) и N,N-диизопропилэтиламина (0,185 мл, 1.065 ммоль) в N,N-диметилформамиде (5 мл), и смесь перемешивали при комнатной температуре 6 часов. Добавляли воду, и смесь экстрагировали хлороформом. Органический слой промывали насыщенным раствором хлорида натрия, сушили над безводным сульфатом натрия, фильтровали и упаривали при пониженном давлении. Остаток очищали методом колоночной хроматографии на силикагеле (хлороформ/метанол 20/1), получая указанное в заголовке соединение (159 мг, 50%).

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ 0,83 (т, J = 7.3Гц, 3H), 1.15-1.48 (м, 4H), 1.58-1.68 (м, 21H), 1.94-2.15 (м, 20H), 2.25-2.32 (м, 2H), 2.32 (с, 3H), 2.40-2.48 (м, 2H), 3.37-3.80 (м, 12H), 3.93 (с, 3H), 3.99-4.05 (м, 1H), 4.65 (ушир.с, 2H), 4.80 (ушир, 1H), 5.07-5.18 (м, 6H), 6.86 (дд, J = 7.8, 1.4 Гц, 1H), 6.97-7.00 (м, 2H). MS (ESI+): [M+H]⁺ 893.6.

Пример 4

4-[(2-амино-4-{[(2S)-1-гидроксипентан-2-ил]амино}-6-метилпиримидин-5-ил)метил]-N-(2-{[(4E,8E,12E,16E,20E)-4,8,12,17,21,25-гексаметилгексакоза-4,8,12,16,20,24-гексаеноил] амино}этил)-3-метоксибензамид

Стадия 1

Указанное в заголовке соединение (216 мг, 78%) получали по методике, аналогичной стадии 1 примера 3, используя (S)-4-((2-амино-4-((1-гидроксипентан-2-ил)амино)-6-метилпиримидин-5-ил)метил)-3-метоксибензойную кислоту (0,14 г, 0,41 ммоль), которую получали как описано в WO2012/066336, и трет-бутил (2-аминоэтил)карбамат (137 мг, 0,855 ммоль).

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ 0,81 (т, J = 7.3 Гц, 3H), 1.07-1.40 (м, 4H), 1.47 (с, 9H), 2.32 (с, 3H), 3.37-3.45 (м, 3H), 3.52-3.57 (м, 2H), 3.63-3.67 (м, 1H), 3.74 (с, 2H), 3.97 (с, 3H), 3.97-4.03 (м, 1H), 4.58 (ушир, 2H), 4.75-4.77 (ушир, 1H), 4.97-4.99 (ушир, 1H), 6.95-6.98 (м, 1H), 7.22-7.23 (м, 1H), 7.27-7.31 (ушир, 1H), 7.47-7.49 (м, 1H).

Стадия 2

Указанное в заголовке соединение (84.0 мг, 24%) получали по методике, аналогичной стадии 2 примера 3, используя соединение, полученное на стадии 1 (205 мг, 0,397 ммоль).

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ 0,81 (т, J = 7.3 Гц, 3H), 1.07-1.46 (м, 4H), 1.55-1.70 (м, 21H), 1.90-2.10 (м, 20H), 2.26-2.30 (м, 4H), 2.33 (с, 3H), 3.38-3.44 (м, 1H), 3.46-3.58 (м, 4H), 3.62-3.67 (м, 1H), 3.74 (с, 2H), 3.97 (с, 3H), 3.97-4.03 (м, 1H), 4.54-4.57 (ушир, 2H), 4.76-4.79 (ушир, 1H), 5.06-5.15 (м, 6H), 6.10-6.14 (ушир, 1H), 7.00 (д, J = 8.0 Гц, 1H), 7.24 (дд, J = 8.0, 1.6 Гц, 1H), 7.38-7.41 (ушир, 1H), 7.45 (д, J = 1.6 Гц, 1H). MS (ESI+): [M+H]⁺ 867.6.

Пример 5

4-[(2-амино-4-{[(2S)-1-гидроксипентан-2-ил]амино}-6-метилпиримидин-5-ил)метил]-N-(2-{[(4E,8E,12E,16E,20E)-4,8,12,17,21,25-гексаметилгексакоза-4,8,12,16,20,24-гексаеноил] (метил)амино}этил)-3-метоксибензамид

Стадия 1

Указанное в заголовке соединение (242 мг, 81%) получали по методике, аналогичной стадии 1 примера 3, используя (S)-4-((2-амино-4-((1-гидроксипентан-2-ил)амино)-6-метилпиримидин-5-ил)метил)-3-метоксибензойную кислоту (0,14 г, 0,41 ммоль), которую получали как описано в WO2012/066336, и т-бутиловый эфир N-(2-аминоэтил)-N-метилкарбаминовой кислоты (98 мг, 0,561 ммоль).

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ 0,84 (т, J = 7.3 Гц, 3H), 1.07-1.41 (м, 4H), 1.43 (с, 9H), 2.31 (с, 3H), 2.91 (с, 3H), 3.39-3.44 (м, 1H), 3.45-3.55 (м, 2H), 3.56-3.61 (м, 2H), 3.62-3.67 (м, 1H), 3.73 (с, 2H), 3.96 (с, 3H), 3.97-4.02 (м, 1H), 4.55-4.59 (ушир, 2H), 4.74-4.78 (ушир, 1H), 6.94-6.97 (м, 1H), 7.21-7.24 (м, 1H), 7.47-7.50 (м, 2H).

Стадия 2

Указанное в заголовке соединение (149 мг, 38%) получали по методике, аналогичной стадии 2 примера 3, используя соединение, полученное на стадии 1 (236 мг, 0,445 ммоль).

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ 0,80 (т, J = 7.3 Гц, 3H), 1.06-1.45 (м, 4H), 1.56-1.68 (м, 21H), 1.90-2.09 (м, 20H), 2.21-2.31 (м, 2H), 2.33 (с, 3H), 2,37-2.43 (м, 2H), 3.08 (с, 3H), 3.37-3.45 (м, 1H), 3.55-3.69 (м, 5H), 3.73 (с, 2H), 3.96 (с, 3H), 3.97-4.03 (м, 1H), 4.55-4.58 (ушир, 2H), 4.77-4.80 (ушир, 1H), 5.06-5.14 (м, 6H), 7.00 (д, J = 8.0 Гц, 1H), 7.24 (дд, J = 8.0, 1.2 Гц, 1H), 7.44 (д, J = 1.6 Гц, 1H), 7.53-7.55 (ушир, 1H). MS (ESI+): [M+H]⁺ 881.6.

Пример тестирования 1

Для первой иммунизации вводили смесь равных объемов (100 мкл/мышь) овальбумина (OVA) (1 мг/мл) и соединения из описанных выше примеров (0,1 мг/мл) внутримышечно в икроножную мышцу C57BL/6 мышей. Через две недели вводили такое же количество той же смеси внутримышечно в икроножную мышцу для бустер-иммунизации. Спустя одну неделю после бустер-иммунизации отбирали пробу крови из сердца под ингаляционной анестезией изофлураном, и отделяли плазму центрифугированием. Измеряли уровень OVA-специфичного IgG методом ELISA с применением набора для определения мышиного анти-овальбуминового IgG методом ELISA (см. фиг. 1).

Определяли также уровень OVA-специфичного IgG1 и IgG2c в плазме крови иммунизированных мышей методом ELISA. Конкретнее, раствор OVA (SIGMA) добавляли в 96-луночный планшет, затем добавляли обезжиренное молоко 1% (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.). Добавляли образец плазмы крови, разбавленный фосфатным буфером, и затем вторичное антитело (козьи антитела к IgG1 (Jackson) или IgG2c (Southern Bio)). Добавляли SureBlue^TM TMB microwell пероксидазу (KPL), и концентрацию продукта энзиматической реакции определяли на микропланшет-ридере (см. фиг. 2).

Все соединения из примеров 1-5 индуцировали образование OVA-специфичного IgG сильнее, чем группа с отрицательным контролем. В частности, соединения из примера 1 и примера 4 индуцировали значительную выработку OVA-специфичного IgG, в сравнении с группой с отрицательным контролем. Кроме того, соединения из примера 1 и примера 4 значительно повышали соотношение IgG2c (один из IgG Th1-типа) к IgG1 (один из IgG Th2-типа), по сравнению с группой с отрицательным контролем.

Пример тестирования 2

Клетки селезенки готовили из мышей из примера тестирования 1. К клеткам добавляли OVA и Брефелдин A (eBioscience) и инкубировали в течение ночи. Затем клетки собирали, красили мечеными аллофикоцианином антимышиными CD3e антителами, ФИТЦ-мечеными антимышиными CD4 антителами и Fixable Viability Dye Fluor^® 450 (eBioscience), и фиксировали в буфере для фиксирования/пермеабилизации (eBioscience). После обработки буфером для пермеабилизации (eBioscience), клетки окрашивали коктейлем антител: PerCP-Cy5.5-меченые анти-IFN-γ антитела, PE-Cy7-меченые анти-IL-2 антитела и PE-меченые TNF-α (eBioscience). Сбор и анализ данных проводили с применением FACS Cant II (BD Biosciences) и программы FLOWJO (TreeStar). Результаты приведены на фиг. 3.

Клетки селезенки также окрашивали eFluor 450-мечеными антимышиными CD3e антителами, Alexa Fluor^® 647-мечеными антимышиными CD8 антителами, PE-мечеными H-2K^b OVA Tetramer-SINFEKL (MBL) и Flexable Viability Dye eFluor 520 (eBioscience). Сбор и анализ данных проводили с применением FACS Cant II (BD Biosciences) и программы FLOWJO (TreeStar). Результаты приведены на фиг. 4.

Клетки селезенки затем инкубировали с коктейлем антител: eFluor450-меченые антимышиные CD3e антитела, Alexa Fluor647-меченые антимышиные CD8 антитела, PE-Cy7-меченые антимышиные CD44 антитела, PerCP-Cy5.5-меченые антимышиные CD62L антитела и Fixable Viability Dye520 (eBioscience). Сбор и анализ данных проводили с применением FACS Cant II (BD Biosciences) и программы FLOWJO (TreeStar). Результаты приведены на фиг. 5.

Соединения из примера 1 и примера 4 значительно увеличивали концентрацию OVA-специфичных мультифункциональных CD4-положительных T-лимфоцитов, концентрацию рестриктированных по антигенам главного комплекса гистосовместимости (MHC-рестриктированных) OVA-специфичных CD8-положительных T-лимфоцитов, и концентрацию CD8-положительных эффекторных T-лимфоцитов памяти, по сравнению с группой с отрицательным контролем.

Промышленная применимость

Соединение по настоящему изобретению может применяться в качестве адъюванта, который добавляют в вакцину для усиления иммуностимулирующего эффекта.

1. Соединение, имеющее формулу (1), или его фармацевтически приемлемая соль:

,

где

X представляет собой метилен;

R¹ и R² независимо представляют собой замещенную или незамещенную алкильную группу, содержащую от 1 до 6 атомов углерода, при условии, что когда алкильная группа является замещенной, она замещена гидрокси-группой;

R³ представляет собой алкильную группу, содержащую от 1 до 6 атомов углерода;

R⁴ представляет собой атом водорода или алкокси-группу, содержащую от 1 до 6 атомов углерода;

Y¹ представляет собой простую связь или -(CR⁹R¹⁰)_p-, где R⁹ и R¹⁰ независимо представляют собой атом водорода;

Y² представляет собой простую связь или -C(O)-;

L представляет собой незамещенный линейный алкилен, содержащий от 2 до 6 атомов углерода;

R⁵ и R⁶ независимо представляют собой атом водорода или незамещенную алкильную группу, содержащую от 1 до 6 атомов углерода, или R⁵ и R⁶ объединены с атомом азота, с которым они соединяются, с образованием 6-членного азотсодержащего насыщенного гетероцикла;

m равен 1;

p представляет собой целое число 1 и

представляет собой двойную связь.

2. Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по п. 1, где Y¹ представляет собой простую связь и Y² представляет собой -C(O)-.

3. Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по п. 1, где Y¹ представляет собой -(CR⁹R¹⁰)_p-, где R⁹ и R¹⁰ независимо представляют собой атом водорода; p представляет собой целое число 1; и Y² представляет собой простую связь.

4. Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по любому из пп. 1-3, где L представляет собой линейный алкилен, содержащий 2 или 3 атома углерода.

5. Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по п. 1,

где

X представляет собой метилен;

R¹ представляет собой алкильную группу, содержащую от 1 до 3 атомов углерода, необязательно замещенную гидроксильной группой;

R² представляет собой алкильную группу, содержащую от 1 до 6 атомов углерода;

R³ представляет собой алкильную группу, содержащую от 1 до 3 атомов углерода;

R⁴ представляет собой атом водорода или алкокси-группу, содержащую от 1 до 3 атомов углерода;

Y¹ представляет собой простую связь или метилен;

Y² представляет собой простую связь или -C(O)-;

L представляет собой линейный алкилен, содержащий 2 или 3 атома углерода;

R⁵ и R⁶ независимо представляют собой атом водорода или алкильную группу, содержащую от 1 до 3 атомов углерода, или R⁵ и R⁶ объединены с атомом азота, с которым они соединяются, с образованием 6-членного азотсодержащего насыщенного гетероцикла;

m равен 1 и

все представляют собой двойные связи.

6. Соединение по п. 1, которое представляет собой

(4E,8E,12E,16E,20E)-N-{2-[{4-[(2-амино-4-{[(3S)-1-гидроксигексан-3-ил]амино}-6-метилпиримидин-5-ил)метил]бензил}(метил)амино]этил}-4,8,12,17,21,25-гексаметилгексакоза-4,8,12,16,20,24-гексаенамид;

(4E,8E,12E,16E,20E)-1-(4-{4-[(2-амино-4-{[(2S)-1-гидроксипентан-2-ил]амино}-6-метилпиримидин-5-ил)метил]-3-метоксибензил}пиперазин-1-ил)-4,8,12,17,21,25-гексаметилгексакоза-4,8,12,16,20,24-гексаен-1-он;

(4E,8E,12E,16E,20E)-1-(4-{4-[(2-амино-4-{[(2S)-1-гидроксипентан-2-ил]амино}-6-метилпиримидин-5-ил)метил]-3-метоксибензоил}пиперазин-1-ил)-4,8,12,17,21,25-гексаметилгексакоза-4,8,12,16,20,24-гексаен-1-он;

4-[(2-амино-4-{[(2S)-1-гидроксипентан-2-ил]амино}-6-метилпиримидин-5-ил)метил]-N-(2-{[(4E,8E,12E,16E,20E)-4,8,12,17,21,25-гексаметилгексакоза-4,8,12,16,20,24-гексаеноил]амино}этил)-3-метоксибензамид; или

4-[(2-амино-4-{[(2S)-1-гидроксипентан-2-ил]амино}-6-метилпиримидин-5-ил)метил]-N-(2-{[(4E,8E,12E,16E,20E)-4,8,12,17,21,25-гексаметилгексакоза-4,8,12,16,20,24-гексаеноил](метил)амино}этил)-3-метоксибензамид;

или его фармацевтически приемлемая соль.

7. Соединение по п. 1, которое представляет собой (4E,8E,12E,16E,20E)-N-{2-[{4-[(2-амино-4-{[(3S)-1-гидроксигексан-3-ил]амино}-6-метилпиримидин-5-ил)метил]бензил}(метил)амино]этил}-4,8,12,17,21,25-гексаметилгексакоза-4,8,12,16,20,24-гексаенамид,

или его фармацевтически приемлемая соль.

8. Соединение по п. 1, которое представляет собой

4-[(2-амино-4-{[(2S)-1-гидроксипентан-2-ил]амино}-6-метилпиримидин-5-ил)метил]-N-(2-{[(4E,8E,12E,16E,20E)-4,8,12,17,21,25-гексаметилгексакоза-4,8,12,16,20,24-гексаеноил]амино}этил)-3-метоксибензамид,

или его фармацевтически приемлемая соль.

9. Фармацевтическая композиция, обладающая свойствами усиления антиген-специфической иммунной реакции и улучшения способности к иммунному ответу, содержащая терапевтически эффективное количество соединения или его фармацевтически приемлемой соли по любому из пп. 1-8.

10. Соединение или его фармацевтически приемлемая соль по любому из пп. 1-8 для применения в качестве адъюванта вакцины для предотвращения инфекционных заболеваний.

11. Применение соединения или его фармацевтически приемлемой соли по любому из пп. 1-8 для изготовления лекарственного средства для усиления антиген-специфичной иммунной реакции у субъекта, нуждающегося в том.

12. Применение соединения или его фармацевтически приемлемой соли по любому из пп. 1-8 для изготовления лекарственного средства для улучшения способности к иммунному ответу у субъекта, нуждающегося в том.

13. Применение соединения или его фармацевтически приемлемой соли по любому из пп. 1-8 для изготовления адъюванта вакцины для предотвращения инфекционных заболеваний.

14. Применение соединения или его фармацевтически приемлемой соли по любому из пп. 1-8 для изготовления лекарственного средства для предотвращения инфекционных заболеваний у субъекта, нуждающегося в том.

15. Применение соединения или его фармацевтически приемлемой соли по любому из пп. 1-8 для изготовления лекарственного средства для предотвращения инфекционных заболеваний у субъекта, нуждающегося в том, в комбинации с активным ингредиентом вакцины для предотвращения инфекционных заболеваний.

16. Применение (1) соединения или его фармацевтически приемлемой соли по любому из пп. 1-8 и (2) активного ингредиента вакцины для предотвращения инфекционных заболеваний для изготовления лекарственного средства для предотвращения инфекционных заболеваний у субъекта, нуждающегося в том.

17. Набор, содержащий

а) соединение или его фармацевтически приемлемую соль по любому из пп. 1-8 и

b) антиген.