Способ прогнозирования угрозы выкидыша при реактивации латентной цитомегаловирусной инфекции путем определения в сыворотке крови эстрадиола и рецептора эстрогена альфа

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству, патологической физиологии, и может быть использовано для прогнозирования угрозы выкидыша на ранних сроках при реактивации латентной цитомегаловирусной инфекции. У женщин в сыворотке крови определяют в пг/мл содержание эстрадиола (E2) и в нг/мл рецептора эстрогена α (ERα) методом иммуноферментного анализа. Затем прогнозируют угрозу выкидыша на ранних сроках при реактивации латентной цитомегаловирусной инфекции с помощью прогностического индекса ПИ:

ПИ= –126,801 – (0,146×Е2) + (18,352× ERα), где ПИ – дискриминантная функция, граничное значение которой (–1,421). При ПИ, равной или меньше граничного значения, прогнозируют угрозу выкидыша на ранних сроках при реактивации латентной цитомегаловирусной инфекции. При ПИ больше граничного значения прогнозируют отсутствие угрозы выкидыша на ранних сроках при реактивации латентной цитомегаловирусной инфекции. Способ обеспечивает возможность повышения точности прогнозирования угрозы выкидыша ранних сроков при реактивации латентной цитомегаловирусной инфекции за счет определения методом иммуноферментного анализа в сыворотке крови содержания эстрадиола и рецептора эстрогена α, вычисления прогностического индекса по полученным данным с использованием метода дискриминантного анализа. 2 пр.

 

Область применения: изобретение относится к области медицины, в частности к акушерству, а также к области научных исследований - патологической физиологии, и предназначено для прогнозирования угрозы выкидыша на ранних сроках при реактивации латентной цитомегаловирусной инфекции.

Уровень техники

В настоящее время сфера научных интересов исследователей и практических врачей в перинатальной охране плода сместилась к ранним срокам беременности - к первому триместру, так как именно в этот период происходят формирование фетоплацентарной системы, закладка органов и тканей плода, экстраэмбриональных структур, что в большинстве случаев определяет дальнейшее течение беременности [1, 5]. По данным ряда авторов, частота прерывания беременности в первом триместре составляет 50% [14]. Высокая частота угрозы прерывания на ранних сроках указывает на трудности, возникающие при ведении женщин с невынашиванием беременности, которые обусловлены многофакторностью этиологии и патогенетических механизмов заболевания, несовершенством применяемых диагностических методик и отсутствием адекватного подхода к терапии угрозы прерывания [1, 13, 15].

Причины невынашивания беременности разнообразны. Нередко невынашивание беременности связывают с инфекционным фактором, в частности с цитомегаловирусной инфекцией [16, 24]. Инфицирование цитомегаловирусом в ранние сроки беременности приводит к самопроизвольному прерыванию беременности (9,7%), угроза прерывания наблюдается у 36%, преждевременные роды у 30%, перинатальная заболеваемость 5,4% [7]. Механизмом данных патологий может являться патогенное действие вируса на фетоплацентарную систему. При этом наблюдается нарушение инвазии синцитиотрофобласта [37], гестационной трансформации трофобласта и ворсин хориона [8, 12], происходят деструктивные процессы вследствие активации процессов перекисного окисления липидов и медиаторов воспаления [2, 3], нарушения гормонального баланса [4, 10].

Большое значение в наступлении и поддержании нормальной беременности имеет адекватный уровень тропных и половых гормонов. Понимание и влияние на изменение уровня гормонов может привести к повышению возможностей в терапии репродуктивных потерь [11].

Эстроген является одним из наиболее важных репродуктивных стероидных гормонов, связанных с развитием плаценты и плода, который играет решающую роль в поддержании беременности, регулируя имплантацию, выработку связанных с беременностью гормонов и маточно-плацентарный кровоток [18, 22, 32]. Данный гормон стимулирует выработку сосудистого эндотелиального фактора роста и образование кровеносных сосудов, обеспечивая адекватное кровообращение матери и плода [25]. Заметное усиление биосинтеза эстрогенов плаценты наблюдалось на ранних сроках беременности, когда начинаются процессы ангиогенеза [19]. Помимо этого показано, что эстроген выполняет двоякую функцию в иммунной регуляции, поскольку модулирует иммунный ответ, индуцируя периферические Т-клетки для секреции провоспалительных цитокинов (IFN-g и IL-2) [36], а также способствует толерантности, индуцируя секрецию IL-10 [21]. Аутокринная роль плаценты в продукции эстрогена имеет решающее значение для дифференцировки клеток трофобласта [23].

Функция эстрогена опосредуется рецепторами эстрогена (ER), которые представляют собой группу белков, классифицируемых как ядерные рецепторы, входящие в состав факторов транскрипции, активируемых лигандом. Существует две формы ER, ERα и ERβ, которые кодируются соответственно ESR1 и ESR2 [27]. Было обнаружено, что экспрессия ESR1 в матке мышей намного выше, чем ESR2, что указывает на более важную роль ESR1 в невынашивании беременности [29]. В экспериментальных исследованиях показано, что блокировка рецептора эстрогена в результате перорального приема тамоксифена самкам шляпных обезьян приводила к торможению беременности в постовуляторный период [33].

По некоторым данным, недостаточная гормонально зависимая структурно-функциональная перестройка эндометрия не исключает возникновение дефектов имплантации, что в случае наступления беременности может привести к гибели эмбриона в ранние сроки [13].

Зарубежные исследователи утверждают, что изменение уровня эстрогена в сыворотке крови приводит к нарушению рецептивности эндометрия и снижению частоты наступления беременности [34]. Также сообщалось, что дефицит эстрогенов связан с высоким риском последующего выкидыша [28].

Эстрадиол - это форма эстрогенов в организме женщины, которая в зависимости от срока беременности синтезируется клетками трофобласта [20]. Эстрогены оказывают мощное воздействие на иммунные клетки и регулируют их пролиферацию, распределение и функцию в тканях матки [38], что необходимо для имплантации, развития плаценты и плода не только при физиологическом течении беременности, но и в условия материнской инфекции [30]. Было показано, что низкие концентрации эстрадиола способствуют ответам Th1 и клеточному иммунитету, а высокие концентрации данного гормона усиливают ответы Th2 и гуморальный иммунитет [35].

Действие эстрадиола на клетки-мишени и развитие эстрогенового ответа определяется рецептором эстрогена альфа (ЕRα), экспрессия которого установлена в репродуктивных тканях [22] и плаценте [26].

Следовательно, метаболизм и баланс половых гормонов играет важную роль в поддержании и развитии беременности. Как правило, основными эндокринными индексами, используемыми для оценки угрозы прерывания беременности, являются сывороточные уровни хорионического гонадотропина и пролактина. Так же связь между плодом и матерью в течение первого триместра контролируется эстрогеном и андрогеном [39]. Недавний метаанализ [31] подтвердил ценность измерения эстрадиола в прогнозировании исхода угрозы выкидыша.

Таким образом, недостаточная выработка эстрадиола и рецептора эстрагена α может являться одной из причин самопроизвольного прерывания беременности, так как данные соединения являются важными факторами эмбрионального развития.

Аналогами данного изобретения являются описанные в литературе методы лабораторного исследования, имеющие своей целью прогнозирование угрозы прерывания беременности. В настоящее время наиболее часто в клинической практике для верификации угрозы прерывания беременности используют определение в сыворотке крови прогестерона, хорионического гонадотропина, уровень α-2-микроглобулина [6], эстриола, плацентарного лактогена и интерлейкина 6 [17], а также исследование прогестерона, эстрадиола, хорионического гонадотропина и маркеров апоптоза: супероксиддисмутазы и ФАС-лиганда [5]. Несмотря на высокую информативность, данные методы не позволяют проводить интеграцию изучаемых показателей с инфекционной патологией.

На основании вышеописанных известных сведений, нами предложен способ прогнозирования угрозы выкидыша ранних сроков при реактивации латентной цитомегаловирусной инфекции.

Наиболее близким по техническому решению является способ, предложенный нами ранее [9], который позволяет прогнозировать угрозу выкидыша ранних сроков при цитомегаловирусной инфекции по определению в крови содержания эстрадиола и фактора некроза опухолей α.

Несмотря на достоинства данного метода, в нем не учитывается эстрогеновый ответ, определяемый рецептором эстрогена α в прогнозировании угрозы выкидыша.

Указанные факторы могут быть устранены в заявленном способе.

Техническим результатом, достигаемым при осуществлении предлагаемого изобретения, является повышение точности прогнозирования угрозы выкидыша ранних сроков при реактивации латентной цитомегаловирусной инфекции.

Заявляемый технический результат достигается тем, что у беременных женщин с реактивацией латентной цитомегаловирусной инфекции, методом иммуноферментного анализа (ИФА) в сыворотке крови определяют содержание эстрадиола (E2) (пг/мл) с помощью стандартного набора реактивов «DRG» (USA) и рецептора эстрогена α (ERα) (нг/л) с использованием наборов «Cloud-Clon Corporation» (USA).

Полученные значения используют для вычисления прогностического индекса (ПИ), по формуле, разработанной с использованием метода дискриминантного анализа:

ПИ= -126,801- (0,146×Е2) + (18,352× ERα),

где ПИ - прогностический индекс дискриминантной функции, граничное значение которой (-1,421).

При ПИ равном или меньше граничного значения, прогнозируют угрозу выкидыша у беременных женщин с реактивацией латентной цитомегаловирусной инфекции в ранние сроки беременности. При ПИ больше граничного значения прогнозируют отсутствие угрозы выкидыша.

Новизна заявляемого способа заключается в определении с учетом значений эстрадиола и рецептора эстрогена α в сыворотке крови у беременных женщин с реактивацией латентной цитомегаловирусной инфекции в ранние сроки беременности прогностического индекса ПИ, по отношению которого к граничному значению дискриминантной функции прогнозируют угрозу выкидыша.

Ранее совокупность указанных признаков в прогнозировании угрозы выкидыша у беременных женщин с реактивацией латентной цитомегаловирусной инфекции в ранние сроки беременности не использовалась.

Способ содержит следующие приемы:

- у беременных женщин с реактивацией латентной цитомегаловирусной инфекции в сыворотке крови, взятой из локтевой вены утром натощак, методом ИФА определяют содержание эстрадиола (Е2) с помощью стандартного набора реактивов «DRG» (USA);

- измеряют концентрацию рецептора эстрогена α (ERα) методом ИФА с использованием наборов «Cloud-Clon Corporation» (USA);

- с помощью дискриминантного уравнения определяют прогностический индекс ПИ= -126,801- (0,146×Е2) + (18,352× ERα),

где ПИ - прогностический индекс дискриминантной функции, граничное значение которого (-1,421);

- определяют угрозу выкидыша: при ПИ равной или меньше граничного значения, прогнозируют угрозу выкидыша у беременных женщин с реактивацией латентной цитомегаловирусной инфекции в ранние сроки беременности, при ПИ больше граничного значения - прогнозируют отсутствие угрозы выкидыша.

Вероятность правильного прогноза составляет 82%.

Эффективность метода подтверждается следующими клиническими примерами.

Пример 1. Беременная Д., 23 г., находилась на стационарном лечении в гинекологическом отделении Городской клинической больницы (г. Благовещенск). Поступила с болями внизу живота и кровянистыми выделениями из половых путей. Гинекологический анамнез осложнен: 1 медицинский аборт без осложнений. Проведен анализ крови на TORCH-инфекции, содержание эстрадиола, рецептора эстрогена α, УЗИ органов малого таза. По ИФА выявлены антитела IgM к цитомегаловирусу, титр антител IgG составил 1600, индекс авидности - 90%.

По УЗИ: в полости матки плодное яйцо с эмбрионом 7 недель 5 дней. Сердцебиение определяется. Гипертонус по задней стенке матки. Внутренний зев сомкнут. Ниже плодного яйца гематома небольших размеров (отслойка ворсинчатого хориона).

Диагноз: беременность 7-8 недель. Угрожающий самопроизвольный выкидыш. Реактивация латентной цитомегаловирусной инфекции.

По заявленному способу при лабораторном исследовании сыворотки крови получены следующие показатели: содержание эстадиола - 570,0 пг/мл; рецептора эстрогена α - 9,40 нг/л. Прогностический индекс, рассчитанный по формуле, составил (-37,511), что свидетельствовало о высоком риске угрозы выкидыша, в связи с чем пациентка отнесена в группу риска по реализации невынашивания в ранние сроки.

На третий день стационарного лечения усилились боли внизу живота и кровянистые выделения из половых путей. Выставлен диагноз самопроизвольный выкидыш в ходу при сроке 8 недель беременности.

Прогноз по заявленному способу подтвердился.

Пример 2. Беременная И., 22 л., находилась на стационарном лечении в гинекологическом отделении Городской клинической больницы (г. Благовещенск). Гинекологический анамнез осложнен: 1 медицинский аборт без осложнений. Проведен анализ сыворотки крови на TORCH-инфекции, содержание эстрадиола, рецептора эстрогена α, УЗИ органов малого таза.

По ИФА титр антител IgG - 800, индекс авидности - 92%. Диагноз: Беременность 7 недель. Хроническая цитомегаловирусная инфекция, латентная стадия.

По УЗИ: в полости матки плодное яйцо с эмбрионом 7 недель 2 дня. Сердцебиение определяется. Внутренний зев сомкнут.

По заявленному способу при лабораторном исследовании сыворотки крови получены следующие показатели: содержание эстрадиола - 830,0 пг/мл, рецептора эстрогена α - 19,80 нг/л. Прогностический индекс, рассчитанный по формуле, составил - (115). Отсутствие угрозы выкидыша на ранних сроках.

Прогноз по заявленному способу подтвердился.

Приведенные примеры наглядно показывают точность прогнозирования угрозы выкидыша на ранних сроках у женщин с реактивацией латентной цитомегаловирусной инфекции.

Способ прошел клиническую апробацию. С его помощью проведено прогнозирование угрозы выкидыша у 50 беременных женщин с реактивацией латентной цитомегаловирусной инфекции. Правильный прогноз определялся в 82% случаев, что подтверждает высокую эффективность заявляемого способа.

Используемые источники

1. Джабиева А.А., Джабиев А.В., Ордиян И.М. Исходы беременности и родов у женщин с угрозой прерывания в первом триместре // Вестник РУДН, серия Медицина, 2012. №6. С. 66-77.

2. Ишутина Н.А., Дорофиенко Н.Н. Пероксидация липидов при беременности, осложненной цитомегаловирусной инфекцией // Бюллетень физиологии и патологии дыхания. 2014. Вып. 54. С. 66-69.

3. Ишутина Н.А., Дорофиенко Н.Н., Андриевская И.А. Малоновый диальдегид и фактор некроза опухолей α в периферической крови беременных с цитомегаловирусной инфекцией // Бюллетень физиологии и патологии дыхания. 2015. Вып. 55. С. 78-81.

4. Ишутина Н.А., Луценко М.Т., Андриевская И.А. Роль холестерола и эстрадиола в развитии плацентарной недостаточности при цитомегаловирусной инфекции в III триместре гестации // Бюллетень физиологии и патологии дыхания. 2017. Вып. 65. С. 54-58.

5. Камилова М.Я., Арабова С.У., Рахматуллоева Д.М., Гулакова Д.М. Изменения уровней маркеров апоптоза и гормонального фона у женщин с угрозой прерывания беременности //Известия Академии наук республики Таджикистан. Отделение биологических и медицинских наук. 2015. №2 (190). С. 85-87.

6. Способ прогнозирования невынашивания беременности: пат. № 2002135161А RU / авторы: В.И. Краснопольский, О.Ф. Серова, В.А. Туманова, Н.В. Зароченцева, Л.Н. Липовенко, Т.Н. Мельник, И.В. Бакотина, А.П. Лазарев; заявитель: Государственное учреждение Здравоохранения Московский областной научно-исследовательский институт акушерства и гинекологии; заяв. 20.12.2004; опубл. 10.05.2006.

7. Кытикова О.Ю., Новгородцева Т.П., Петрова К.К. Патофизиологические механизмы повреждающего действия цитомегаловирусной инфекции при беременности //Бюллетень физиологии и патологии дыхания. 2017. Вып. 66. С. 98-107.

8. Луценко М.Т. Цитомегаловирусная инфекция // Бюллетень физиологии и патологии дыхания. 2012. Вып. 44. С. 131-136.

9. Способ оценки индуцирующего действия цитомегаловирусной инфекции на содержание в первом триместре гестации эстрадиола на фоне увеличения в периферической крови TNFα: пат. № 2502073 С1 RU / авторы и заявители: М.Т. Луценко, И.А. Андиевская; патентообладатель Федеральное государственное бюджетное учреждение «Дальневосточный научный центр физиологии и патологии дыхания» Сибирского отделения РАМН; заяв. 31.07.2012; опубл. 20.12.2013. Бюл. 35

10. Луценко М.Т., Андриевская И.А., Довжикова И.В. Образование дегидроэпиандростерона сульфата во время беременности, осложненной цитомегаловирусной инфекцией. Архив патологии. 2012. №74(1). С. 46-47.

11. Лызикова Ю.А., Зиновкин Д.А. Локальный и системный гормональный дисбаланс у пациенток с хроническим эндометритом // Проблемы здоровья и экологии. 2018. №2 . С. 24-28.

12. Милованов А.П. Патология системы мать-плацента-плод. М.: Медицина, 1999. 446 с.

13. Сидельникова В.М. Невынашивание беременности: современный взгляд на проблему // Акушерство и гинекология. 2007. №5. С. 24-27.

14. Радзинский В.Е., Оразмурадова А.А. Ранние сроки беременности. М.: Status Praesens; 2008. 448 с.

15. Радзинский В.Е., Князев С.А., Оразмурадова Л.Д. Биоценозы гениталий при угрожающем невынашивании и преждевременных родах // Вестник РУДН, серия Медицина, 2009. №6. С. 364-373.

16. Чешик С.Г., Кистенева Л.Б. Цитомегаловирусная инфекция и спонтанные аборты у женщин в I и II триместрах беременности // Вопросы вирусологии. 2016. №61(2). С. 74-78.

17. Способ прогнозирования угрозы прерывания беременности с ранних сроков гестации: пат. № 2285926 С2 RU / авторы и заявители: Г.Н. Чистякова; патентообладатель: Уральский НИИ охраны материнства и младенчества; заяв. 19.01.2005; опубл. 20.10.2006. Бюл. 29.

18. Albrecht E.D., Aberdeen G.W., Pepe G.J. The role of estrogen in the maintenance of primate pregnancy // Am J Obstet Gynecol. 2000. Vol.182. P. 432-438. doi: 10.1016/S0002-9378(00)70235-3.

19. Albrecht E.D., Pepe G.J. Estrogen regulation of placental angiogenesis and fetal ovarian development during primate pregnancy // The International Journal of Developmental Biology. 2010. Vol.54, №2-3. P. 397-407.

20. Cao W., Xu W., Chen T. et al. CD4⁺CD25⁺FoxP3⁺ regulatory T cells and cytokines interact with estradiol in cases of missed abortion // Exp Ther Med. 2014. 7(2). P. 417-422.

21. Cohen-Solal J.F., Jeganathan V., Grimaldi C.M., et al. Sex hormones and SLE: Influencing the fate of autoreactive B cells // Curr Top Microbiol Immunol. 2006. Vol. 305. P. 67-88.

22. Corbo R.M., Ulizzi L., Piombo L., Martinez-Labarga C., De Stefano G.F., Scacchi R. Estrogen receptor alpha polymorphisms and fertility in populations with different reproductive patterns // Molecular Human Reproduction.2007. Vol. 13б №8. P. 537-540.

23. Gambino Y.P., Maymó J.L., Pérez-Pérez A., et al. 17Beta-estradiol enhances leptin expression in human placental cells through genomic and nongenomic actions // Biology of Reproduction. 2010. Vol. 83, №1. P. 42-51.

24. Giakoumelou S, Wheelhouse N, Cuschieri K, Entrican G, Howie SE, Horne AW. The role of infection in miscarriage // Hum Reprod Update. 2016. Vol. 22(1). P. 116-33. doi: 10.1093/humupd/dmv041.

25. Hildebrandt V.A., Babischkin J.S., Koos R.D., et al. Developmental regulation of vascular endothelial growth/permeability factor messenger ribonucleic acid levels in and vascularization of the villous placenta during baboon pregnancy // Endocrinology. 2001.Vol. 142. P. 2050-2057.

26. Kumar P., Kamat A., Mendelson C.R. Estrogen receptor α (ERα) mediates stimulatory effects of estrogen on aromatase (CYP19) gene expression in human placenta // Molecular Endocrinology. 2009. Vol. 23(6). P. 784-793.

27. Koehler K.F., Helguero L.A., Haldosén L.A., Warner M., Gustafsson J.A. Reflections on the discovery and significance of estrogen receptor beta // Endocr Rev. 2005. Vol.26. P. 465-478. doi: 10.1210/er.2004-0027.

28. Lam S.Y., Baker H.W., Evans J.H., Pepperell R.J. Factors affecting fetal loss in induction of ovulation with gonadotropins: increased abortion rates related to hormonal profiles in conceptual cycles // Am J Obstet Gynecol. 1989. Vol.160. P. 621-628. doi: 10.1016/S0002-9378(89)80043-2.

29. Lemmen J.G., Broekhof J.L., Kuiper G.G., Gustafsson J.A, van der Saag P.T., van der Burg B., et al. Expression of estrogen receptor alpha and beta during mouse embryogenesis // Mech Dev. 1999. Vol. 81. P.163-167. doi: 10.1016/S0925-4773(98)00223-8.

30. Littauer E.Q., Skountzou I. Hormonal Regulation of Physiology, Innate Immunity and Antibody Response to H1N1 Influenza Virus Infection During Pregnancy // Front Immunol. 2018. Vol. 29(9). P. 2455.

31. Pillai R.N., Konje J.C., Tincello D.G., Potdar N. Role of serum biomarkers in the prediction of outcome in women with threatened miscarriage: a systematic review and diagnostic accuracy meta-analysis // Hum Reprod Update. 2016. № 22. P. 228-239.

32. Pineda B., Hermenegildo C., Tarín J.J., Laporta P., Cano A., García-Pérez M.A. Alleles and haplotypes of the estrogen receptor alpha gene are associated with an increased risk of spontaneous abortion // Fertility and Sterility. 2010. Vol. 93, №6. P.1809-1815.

33. Ravindranath N., Moudgal N.R. Use of tamoxifen, an antioestrogen, in establishing a need for oestrogen in early pregnancy in the bonnet monkey (Macaca radiata) // Journal of Reproduction and Fertility. 1987. Vol.81, №2. P. 327-336.

34. Requena A., Cruz M., Meseguer M., Garcia-Velasco J. High progesterone levels in women with high ovarian response do not affect clinical outcomes: a retrospective cohort study // Reproductive Biology and Endocrinology. 2014. Vol.12, №1. P. 69.

35. Straub R.H. The complex role of estrogens in inflammation // Endocr Rev. 2007. Vol. 28. P. 521-574.

36. Tanriverdi F., Silveira L.F., Maccoll G.S., Bouloux P.M. The hypothalamic-pituitary-gonadal axis: Immune function and autoimmunity // J Endocrinol. 2003. Vol. 176. P. 293-304.

37. Tao L., Suhua C., Juanjuan C., Zongzhi Y., Juan X., Dandan Z. In vitro study on human cytomegalovirus affecting early pregnancy villous EVT's invasion function // Virol. J. 2011, №8. P. 114. doi: 10.1186/1743-422X-8-114.

38. Tai P., Wang J., Jin H. et al. Induction of regulatory T cells by physiological level estrogen // J Cell Physiol. 2008. 214(2). P. 456-464.

39. Xu Q., Chen J., Wei Z., Brandon T.R., Zava D.T., Shi Y.E., Cao Y. Sex Hormone Metabolism and Threatened Abortion // Med Sci Monit. 2017 №23. P. 5041-5048. doi: 10.12659/msm.904500.

Способ прогнозирования угрозы выкидыша на ранних сроках при реактивации латентной цитомегаловирусной инфекции, отличающийся тем, что у женщин в сыворотке крови определяют в пг/мл содержание эстрадиола (E2) и в нг/мл рецептора эстрогена α (ERα) методом иммуноферментного анализа, а затем прогнозируют угрозу выкидыша на ранних сроках при реактивации латентной цитомегаловирусной инфекции с помощью прогностического индекса ПИ:

ПИ= –126,801 – (0,146×Е2) + (18,352× ERα),

где ПИ – дискриминантная функция, граничное значение которой (–1,421), при ПИ, равной или меньше граничного значения, прогнозируют угрозу выкидыша на ранних сроках при реактивации латентной цитомегаловирусной инфекции, при ПИ больше граничного значения прогнозируют отсутствие угрозы выкидыша на ранних сроках при реактивации латентной цитомегаловирусной инфекции.