Производные аминофторпиперидина в качестве ингибитора киназы
Изобретение относится к соединениям или к их фармацевтически приемлемым солям, выбранным из: 1) 1-((3S,4R)-3-(5-хлор-2-(1-этил-1H-пиразол-4-иламино)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-иламино)-4-фторпиперидин-1-ил)проп-2-ен-1-она, 2) 1-((3S,4R)-3-(5-хлор-2-(1-(2,2-дифторэтил)-1H-пиразол-4-иламино)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-иламино)-4-фторпиперидин-1-ил)проп-2-ен-1-она, 3) 1-((3S,4R)-3-(5-хлор-2-(1-циклопропил-1H-пиразол-4-иламино)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-иламино)-4-фторпиперидин-1-ил)проп-2-ен-1-она, 4) 1-((3S,4R)-3-(5-хлор-2-(изоксазол-4-иламино)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-иламино)-4-фторпиперидин-1-ил)проп-2-ен-1-она, 5) 1-((3S,4R)-3-(5-хлор-2-(изотиазол-4-иламино)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-иламино)-4-фторпиперидин-1-ил)проп-2-ен-1-она, 6) 4-((3S,4R)-1-акрилоил-4-фторпиперидин-3-иламино)-2-(1-этил-1H-пиразол-4-иламино)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбонитрила, 7) 4-((3S,4R)-1-акрилоил-4-фторпиперидин-3-иламино)-2-(1-(2,2-дифторэтил)-1H-пиразол-4-иламино)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбонитрила, 8) 4-((3S,4R)-1-акрилоил-4-фторпиперидин-3-иламино)-2-(1-циклопропил-1H-пиразол-4-иламино)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбонитрила, 9) 4-((3S,4R)-1-акрилоил-4-фторпиперидин-3-иламино)-2-(изоксазол-4-иламино)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбонитрила, 10) 1-((3S,4R)-3-(2-(1-этил-1H-пиразол-4-иламино)-5-метил-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-иламино)-4-фторпиперидин-1-ил)проп-2-ен-1-она, 11) 1-((3S,4R)-4-фтор-3-(2-(изоксазол-4-иламино)-5-метил-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-иламино)пиперидин-1-ил)проп-2-ен-1-она и 12) 1-((3S,4S)-3-(5-хлор-2-(1-этил-1H-пиразол-4-иламино)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-иламино)-4-фторпиперидин-1-ил)проп-2-ен-1-она. Изобретение также относится к фармацевтической композиции для ингибирования активности JAK3 и/или BTK, содержащей указанные соединения или их фармацевтически приемлемые соли. Технический результат – получены новые соединения и фармацевтическая композиция на их оносве, которые могут найти применение в медицине для лечения воспалительного и пролиферативного заболеваний. 2 н.п. ф-лы, 2 табл., 12 пр.
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ
Данное изобретение относится к производному аминофторпиперидина, обладающему ингибирующим киназу действием, способы его получения и его применению.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
Протеинкиназа является ферментом, который катализирует фосфорилирование специфических остатков других белков, и играет важную роль в путях трансдукции сигнала, которые передают внеклеточные сигналы в ядро. Дополнительно, она вовлечена во множество заболеваний in vivo. При наступлении или развитии воспалительного заболевания, аутоиммунного заболевания, пролиферативного заболевания или гиперпролиферативного заболевания и/или заболевания, медиированного иммунитетом, имеются различные доказательства того, что T-клетки (или T-лимфоциты) и B-клетки (или B-лимфоциты) играют важную роль.
Янускиназа (обозначенная далее как "JAK") является цитоплазматической белковой тирозинкиназой, которая играет ключевые роли в регулировании клеточной функции в системе лимфо- и кроветворения. Известно, что цитокины играют важную роль в регулировании воспаления, иммунитета и нормальной клеточной функции, и JAK активирует STAT (переносчики сигнала и активаторы транскрипции) белки через фосфорилирование тирозина с получением быстрых сигнальных путей к цитокинам. Известно, что подача сигналов JAK/STAT ассоциирована с аллергиями, астмой, аутоиммунными заболеваниями (например, отторжением трансплантата, ревматоидным артритом, амиотрофическим боковым склерозом, рассеянным склерозом и т.д.), солидными раками, раками крови (например, лейкозом, лимфомой и так далее).
Семейство JAK классифицируется на четыре члена: JAK 1, JAK 2, JAK 3 и TYK 2. Члены семейства JAK образуют пары друг с другом для медиирования сигналов из множества цитокинов. Это включает JAK2 и JAK1 ассоциированные с подачей сигнала гемопоэтическим фактором роста, и сочетание TYK2 и JAK2 важно для подачи сигнала интерфероном и способствует переносимости хозяина. JAK2 может вызывать анемию, тромбоцитопению, лейкопению, особенно когда она вовлечена в подачу сигнала гемопоэтическим фактором роста и вызывает избыточное ингибирование.
Было обнаружено, что экспрессия JAK1, JAK2 и TYK2 широко распространена, а экспрессия JAK3 ограничена лимфоцитами и ассоциирована с подачей сигнала для общих гамма-цепей, членов IL-2, IL-4, IL-7, IL-9, IL-15 и IL-21 рецепторов, в частности, общей гамма-цепи семейства IL-2. Как только цитокин связан, рецептор несет соседний JAK3 поблизости, что вызывает аутофосфорилирование C-окончания β-цепи. В результате это вызывает активацию STAT белка, что является важным шагом в ретрансляции сигнала в ядро. JAK3 контролирует сигнальные пути различных цитокинов через этот процесс. Это делает JAK3 привлекательной целью для подавления иммунного ответа.
B-клетки играют важную роль в развитии аутоиммунных и/или воспалительных заболеваний. Терапевтически агенты на основе белка, которые снижают В-клетки, например, ритуксан, являются эффективными при вызванных аутоантителом воспалительных заболеваниях, таких как ревматоидный артрит. Таким образом, ингибиторы протеинкиназы, которые играют роль в активации В-клетки, являются полезными терапевтическими агентами для лечения медиированных В-клетками заболеваний, например, для производства аутоантител.
Трансдукция сигнала через рецептор В-клетки (BCR) регулирует различные реакции В-клетки, включая пролиферацию и дифференциацию в зрелые вырабатывающие антитела клетки. BCR является важным регулирующим элементом активности В-клетки, и аномальная трансдукция сигнала может вызвать образование патогенных аутоантител, приводящее к множеству аутоиммунных и/или воспалительных заболеваний и пролиферации дегерулированной В-клетки.
Тирозинкиназа Брутона (далее названа "BTK") является важным регулятором развития, активации, подачи сигнала и выживания B-клеток. BTK вовлечена в пути трансдукции сигнала, инициированные связыванием различных внеклеточных лигандов с их поверхностным рецептором клетки. После лигирования антигенного рецептора B-клетки (BCR), требуется активность BTK через одновременное действие протеинтирозинкиназ Lyn и Syk для вызова медиированной фосфолипазой C-γ2 мобилизации кальция. Поэтому ингибирование BTK может быть полезным терапевтическим подходом при блокировании наступления медиированных B-клеткой заболеваний.
Как указано выше, янускиназа и киназы на основе TEC играют важную роль в активации T-клеток и/или B-клеток, вовлеченных в развитие воспалительных заболеваний, аутоиммунных заболеваний, пролиферативных заболеваний или гиперпролиферативных заболеваний, и медиированных иммунитетом заболеваний. Поэтому разработка веществ, которые эффективно ингибируют эти заболевания, может быть полезной в качестве родственного терапевтического агента. Конкретные примеры заболеваний, которые можно лечить и предотвращать, включают рак, отторжение трансплантата, рассеянный склероз, ревматоидный артрит, псориазный артрит, псориаз, астму, аллергический дерматит, атопический дерматит, экзему, диабет I типа, диабетические осложнения, язвенный колит, болезнь Крона, аутоиммуное расстройство щитовидной железы, системное облысение, синдром Съоргена и подобные.
Ингибитор JAK3 киназы тофацитиниб (CP-690550) (Pfizer Inc.) является одобрен в настоящее время и продается для лечения ревматоидного артрита. Кроме того, ингибитор BTK киназы, ибрутиниб (PCI-32765) (Pharmacyclics) находится на клинической стадии, но тяжелые побочные эффекты, такие как кожная сыпь и диарея, были описаны в клинических случаях. Таким образом, существует необходимость в разработке более стабильного и эффективного вещества, которое ингибирует JAK и/или BTK (см. Nat Rev Rheumatol. 2009 Jun 5(6) 317-24; Expert OpinInvestig Drugs. 2014 Aug 23(8) 1067-77; Drug Discov Today 2014 Aug 19(8) 1200-4; WO2002/096909; WO2010-009342).
Поэтому авторы данного изобретения обнаружили новое производное аминофторпиперидина, имеющее превосходное ингибирующее действие, тем самым совершив данное изобретение.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Техническая проблема
Объектом данного изобретения является получение производного аминофторпиперидина, имеющего ингибирующее действие против киназы, в частности, тирозинкиназы, способ его получения и его применение.
Другим объектом данного изобретения является получение фармацевтической композиции, содержащей производное аминофторпиперидина в качестве активного ингредиента.
ТЕХНИЧЕСКОЕ РЕШЕНИЕ
Для достижения указанных выше объектов, представлено соединение, представленное следующей химической формулой 1, или его фармацевтически приемлемая соль:
[Химическая формула 1]
где в химической формуле 1,
R1 представляет собой C1-5 алкил, галоген или циано,
X является N-R2, O или S,
R2 представляет собой C1-5 алкил, C1-5 галоалкил или C3-6 циклоалкил.
Предпочтительно, R1 является метилом, этилом, пропилом, изопропилом, бутилом, изобутилом, пентилом, изопентилом, неопентилом, бромом, хлором, фтором или циано.
Предпочтительно, R2 представляет собой метил, этил, пропил, изопропил, бутил, изобутил, пентил, изопентил, неопентил, фторметил, дифторметил, трифторметил, 2-фторэтил, 2,2-дифторэтил, 2,2,2-трифторэтил, циклопропил, циклобутил, циклопентил или циклогексил.
Типовые примеры соединения, представленного химической формулой 1, включают следующие:
1) 1-((3S,4R)-3-(5-хлор-2-(1-этил-1H-пиразол-4-илaмино)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-иламино)-4-фторпиперидин-1-ил)проп-2-ен-1-он,
2) 1-((3S,4R)-3-(5-хлор-2-(1-(2,2-дифторэтил)-1H-пиразол-4-иламино)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-иламино)-4-фторпиперидин-1-ил)проп-2-ен-1-он,
3) 1-((3S,4R)-3-(5-хлор-2-(1-циклопропил-1H-пиразол-4-иламино)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-иламино)-4-фторпиперидин-1-ил)проп-2-ен-1-он,
4) 1-((3S,4R)-3-(5-хлор-2-(изоксазол-4-иламино)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-иламино)-4-фторпиперидин-1-ил)проп-2-ен-1-он,
5) 1-((3S,4R)-3-(5-хлор-2-(изотиазол-4-иламино)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-иламино)-4-фторпиперидин-1-ил)проп-2-ен-1-он,
6) 4-((3S,4R)-1-акрилоил-4-фторпиперидин-3-иламино)-2-(1-этил-1H-пиразол-4-иламино)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбонитрил,
7) 4-((3S,4R)-1-акрилоил-4-фторпиперидин-3-иламино)-2-(1-(2,2-дифторэтил)-1H-пиразол-4-иламино)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбонитрил,
8) 4-((3S,4R)-1-акрилоил-4-фторпиперидин-3-иламино)-2-(1-циклопропил-1H-пиразол-4-иламино)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбонитрил,
9) 4-((3S,4R)-1-акрилоил-4-фторпиперидин-3-иламино)-2-(изоксазол-4-иламино)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбонитрил,
10) 1-((3S,4R)-3-(2-(1-этил-1H-пиразол-4-иламино)-5-метил-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-иламино)-4-фторпиперидин-1-ил)проп-2-ен-1-он,
11) 1-((3S,4R)-4-фтор-3-(2-(изоксазол-4-иламино)-5-метил-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-иламино)пиперидин-1-ил)проп-2-ен-1-он, и
12) 1-((3S,4S)-3-(5-хлор-2-(1-этил-1H-пиразол-4-иламино)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-иламино)-4-фторпиперидин-1-ил)проп-2-ен-1-он.
Кроме того, соединения в соответствии с данным изобретением могут существовать в форме солей, особенно фармацевтически приемлемых солей. В качестве солей могут без ограничений применяться соли, обычно применяемые в данной области техники, такие как аддитивные соли, образованные фармацевтически приемлемыми свободными кислотами. Термин “фармацевтически приемлемая соль” в данном описании относится к любой органической или неорганической аддитивной соли соединения, представленного химической формулой 1, концентрация которой имеет эффективное действие, так как она относительно нетоксична и безопасна для пациентов, и побочные эффекты которой не снижают преимущественной эффективности указанного выше соединения.
Фармацевтически приемлемые соли могут быть получены обычными способами с применением неорганических или органических кислот. Например, фармацевтически приемлемая соль может быть получена растворением соединения, представленного химической формулой 1, в смешиваемом с водой органическом растворителе, например, ацетоне, метаноле, этаноле или ацетонитриле, с последующим добавлением органической кислоты или неорганической кислоты, и фильтрацией и сушкой выпавших в осадок кристаллов. Альтернативно, она может быть получена обработкой растворителя или избыточного количества кислоты из кислотно-аддитивной реакционной смеси при пониженном давлении с последующей сушкой остатка, или добавлением другого органического растворителя с последующей фильтрацией выпавшей в осадок соли. В это время предпочтительные соли могут включать соли, полученные из хлористоводородной кислоты, бромистоводородной кислоты, серной кислоты, фосфорной кислоты, азотной кислоты, уксусной кислоты, гликолевой кислоты, молочной кислоты, пировиноградной кислоты, малоновой кислоты, янтарной кислоты, глутаровой кислоты, фумаровой кислоты, яблочной кислоты, миндальной кислоты, винной кислоты, лимонной кислоты, аскорбиновой кислоты, пальмитиновой кислоты, малеиновой кислоты, гидроксималеиновой кислоты, бензойной кислоты, гидроксибензойной кислоты, фенилуксусной кислоты, коричной кислоты, салициловой кислоты, метансульфоновой кислоты, бензолсульфоновой кислоты или толуолсульфоновой кислоты и подобных.
Фармацевтически неприемлемая соль или сольват соединения химической формулы 1 может применяться в качестве промежуточного соединения при получении соединения химической формулы 1 или его фармацевтически приемлемой соли или сольвата.
Соединение химической формулы 1 в соответствии с данным изобретением включает не только его фармацевтически приемлемые соли, но все сольваты и гидраты, которые могут быть получены из них, и включает также все возможные стереоизомеры. Сольват, гидрат и стереоизомер соединения, представленного химической формулой 1, может быть получен и применяться из соединения химической формулы 1 с применением обычных способов.
Кроме того, соединение, представленное химической формулой 1 в соответствии с данным изобретением может быть получено либо в кристаллической форме, либо в не кристаллической форме, и если соединение, представленное химической формулой 1, получают в кристаллической форме, оно может быть необязательно гидрировано или сольватировано. В данном описании соединение, представленное химической формулой 1, может не только включать стехиометрический гидрат, но включать соединение, содержащее различные количества воды. Сольват соединения, представленного химической формулой 1 в соответствии с данным изобретением, включают и стехиометрические сольваты, и не стехиометрические сольваты.
Более того, в качестве примера, данное описание может дать соединение, представленное химической формулой 1, согласно схеме реакции 1 ниже.
[Схема реакции 1]
(в реакционной схеме 1, R1 и X такие, как определены выше, Z представляет собой галоген и, предпочтительно, Z представляет собой хлор)
Стадия i представляет собой стадию получения соединения, представленного химической формулой 1-3, взаимодействием соединения, представленного химической формулой 1-1, с соединением, представленным химической формулой 1-2. Реакцию предпочтительно проводят при температуре от комнатной до высокой, в присутствии диизопропилэтиламина, и растворителем, предпочтительно, является этанол.
Стадия ii представляет собой реакцию удаления защитной группы соединения, представленного химической формулой 1-3, которая является стадией получения соединения, представленного химической формулой 1-4. Предпочтительно проводить реакцию в присутствии хлористоводородной кислоты (предпочтительно, 6N хлористоводородной кислоты), и растворителем предпочтительно является метанол.
Стадия iii представляет собой стадию получения соединения, представленного химической формулой 1-5, взаимодействием соединения, представленного химической формулой 1-4, с хлорангидридом. Реакцию предпочтительно проводят при -20°C - 0°C в присутствии триэтиламина или гидрокарбоната натрия. Далее, растворителем предпочтительно является смесь дихлорметана или тетрагидрофурана и воды.
Стадия iv представляет собой стадию получения соединения, представленного химической формулой 1, взаимодействием соединения, представленного химической формулой 1-5, с амином. Реакцию предпочтительно проводят при высокой температуре в присутствии трифторуксусной кислоты, и растворителем предпочтительно является 2-бутанол.
Далее, как показано на схеме реакции 1, соединение, представленное химической формулой 1-3, соединение, представленное химической формулой 1-6, соединение, представленное химической формулой 1-7 и соединение, представленное химической формулой 1 может быть получено в этом порядке, и каждая стадия iv, ii и iii является такой, как описана выше, за исключением реагентов.
Согласно другому варианту данного описания, представлена фармацевтическая композиция для профилактики или лечения заболеваний, которые являются благоприятными для ингибирования киназы, содержащая соединение, представленное химической формулой 1, или его фармацевтически приемлемую соль, гидрат, сольват или его изомер, в качестве активного ингредиента.
В этом случае, заболевания, которые ассоциированы с ингибированием киназы, включают воспалительные заболевания, аутоиммунные заболевания, пролиферативные заболевания или гиперпролиферативные заболевания и медиированные иммунитетом заболевания, раки, опухоли и подобные.
Используемый здесь термин «профилактика» относится к любому действию, направленному на задержку или ингибирование возникновения, распространения или рецидива вышеупомянутых заболеваний путем введения композиции в соответствии с данным изобретением, а термин «лечение», используемый здесь, относится к любому действию на улучшение или изменение симптомов вышеуказанных заболеваний в лучшую сторону путем введения композиции в соответствии с данным изобретением.
Фармацевтическая композиция в соответствии с данным изобретением может быть составлена для перорального или парентерального введения согласно стандартной фармацевтической практике. Эти составы могут содержать добавки, такие как фармацевтически приемлемый носитель, адъювант или разбавитель, в дополнение к активному ингредиенту.
Подходящие носители включают, например, физиологический солевой раствор, полиэтиленгликоль, этанол, растительное масло и изопропилмиристат и подобные. Разбавители включают, например, лактозу, декстрозу, сахарозу, маннит, сорбит, целлюлозы и/или глицин, и подобные, но не ограничены ими. Дополнительно, соединения в соответствии с данным изобретением могут быть растворены в маслах, пропиленгликоле или других растворителях, обычно применяемых для получения растворов для инъекций. Более того, соединения в соответствии с данным изобретением могут быть составлены в виде мазей или кремов для местного нанесения.
Фармацевтические дозированные формы соединений в соответствии с данным изобретением могут включать применение соединений в форме фармацевтически приемлемых солей или сольватов, и применение соединений отдельно или в сочетании и/или в подходящей смеси вместе с другими фармацевтически активными соединениями.
Соединения в соответствии с данным изобретением могут быть составлены в растворы для инъекций растворением, суспендированием или эмульгированием соединений в водорастворимым растворителе, таком как обычный солевой раствор, 5% декстроза или не водный растворитель, такой как синтетический глицерид жирной кислоты, высший эфир жирной кислоты или пропиленгликоль. Составы в соответствии с данным изобретением могут включать обычные добавки, такие как солюбилизаторы, изотонические агенты, эмульгирующие агенты, стабилизаторы и консерванты.
Предпочтительная доза соединения в соответствии с данным изобретением может варьироваться согласно состоянию и массе тела пациента, тяжести заболевания, типу лекарственного средства и способу и длительности введения, но она может быть подходящим образом выбрана специалистом в данной области техники. Для получения желаемого эффекта, однако, соединение в соответствии с данным изобретением может вводиться ежедневно в дозе 0,0001-100 мг/кг (массы тела) и, предпочтительно, 0,001-100 мг/кг (массы тела). Введение может проводиться один раз в сутки или в разделенных дозах каждый день пероральным или парентеральным путем. В зависимости от способа введения, композиция может содержать соединение в соответствии с данным изобретением в количестве 0,001-99% массовых, предпочтительно, 0,01-60% массовых.
Фармацевтическая композиция в соответствии с данным изобретением может вводиться млекопитающим, таким как крыса, мышь, домашнее животное, человек, различными способами. Введение может проводиться всеми возможными способами, например, пероральным, ректальным, внутривенным, внутримышечным, подкожным, внутриэндометриальным, интрацеребровентрикулярной инъекцией.
ПОЛОЖИТЕЛЬНЫЕ ЭФФЕКТЫ
Соединение, представленное химической формулой 1, в соответствии с данным изобретением или его фармацевтически приемлемую соль, гидрат, сольват или изомер могут полезно применяться для профилактики или лечения заболеваний, которые связаны с ингибированием киназы.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ВАРИАНТОВ
Ниже настоящее описание будет описано более подробно с помощью примеров. Однако эти примеры представлены только для иллюстративных целей и не должны рассматриваться как ограничивающие объем настоящего описания этими примерами.
Пример 1: Получение 1-((3S,4R)-3-(5-хлор-2-(1-этил-1H-пиразол-4-иламино)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-иламино)-4-фторпиперидин-1-ил)проп-2-ен-1-она
Стадия 1: Получение трет-бутил (3S,4R)-3-((2,5-дихлор-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)амино)-4-фторпиперидин-1-карбоксилат
После растворения 2,4,5-трихлор-7H-пирроло[2,3-d]пиримидина (2,0 г, 9,0 ммоль) в этаноле (10,0 мл), туда добавляют N, N-диизопропилэтиламин (4,8 мл, 28,0 ммоль) и трет-бутил (3S,4R)-3-амино-4-фторпиперидин-1-карбоксилат (2,0 г, 9,0 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при 110°C в течение 24 часов. После добавления этилацетата, добавляют дистиллированную воду, и органический слой отделяют. Отделенный органический слой обрабатывают сульфатом натрия, фильтруют и концентрируют при пониженном давлении. Остаток отделяют хроматографией на колонке с получением 1,8 г (выход: 45,9%) указанного в заголовке соединения.
1H ЯМР (500 МГц, CD3OD) δ 7,12 (с, 1H), 6,35-6,33 (м, 1H), 5,08-4,98 (м, 1H), 4,52-4,49 (м, 1H), 4,02-4,00 (м, 1H), 3,75-3,73 (м, 1H), 3,44-3,42 (м, 1H), 2,09-1,46 (м, 2H), 1,41 (с, 9H)
Стадия 2: Получение 2,5-дихлор-N-((3S,4R)-4-фторпиперидин-3-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-амина
6N раствор хлористоводородной кислоты (180,0 мл, избыток), растворенной в метаноле добавляют к трет-бутил (3S,4R)-3-((2,5-дихлор-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)амино)-4-фторпиперидин-1-карбоксилату (1,8 г, 4,4 ммоль). После перемешивания при комнатной температуре в течение 30 минут, реакционный раствор концентрируют и затем следующую реакцию проводят без отделения.
Стадия 3: Получение 1-((3S,4R)-3-((2,5-дихлор-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)амино)-4-фторпиперидин-1-ил)проп-2-ен-1-она
После растворения 2,5-дихлор-N-((3S,4R)-4-фторпиперидин-3-ил)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-амина (1,3 г, 4,0 ммоль) и бикарбоната натрия (1,8 г, 22,0 ммоль) в тетрагидрофуране/дистиллированной воде (5,0 мл/1,0 мл), туда добавляют акрилоилхлорид (355,0 мкл, 4,0 ммоль) при 0°C. Реакционную смесь перемешивают при 0°C в течение 1 часа. После добавления этилацетата, добавляют дистиллированную воду, и органический слой отделяют. Отделенный органический слой обрабатывают сульфатом натрия, фильтруют и концентрируют при пониженном давлении. Остаток отделяют хроматографией на колонке с получением 1,1 мг (выход: 67,5%) указанного в заголовке соединения.
1H ЯМР (500 МГц, CD3OD) δ 7,14 (с, 1H), 6,92-6,87 (м, 1H), 6,25-6,22 (м, 1H), 5,78-5,76 (м, 1H), 5,17-5,03 (м, 1H), 4,60-4,28 (м, 3H), 3,49-3,44 (м, 1H), 3,23-3,20 (м, 1H), 2,17-2,15 (м, 1H), 2,01-1,94 (м, 1H)
Стадия 4: Получение 1-((3S,4R)-3-(5-хлор-2-(1-этил-1H-пиразол-4-иламино)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-иламино)-4-фторпиперидин-1-ил)проп-2-ен-1-она
1-((3S,4R)-3-((2,5-дихлор-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-ил)амино)-4-фторпиперидин-1-ил)проп-2-ен-1-он (1,0 г, 2,8 ммоль) и 1-этил-1H-пиразол-4-амин (238,7 мг, 2,1 ммоль) растворяют в 2-бутаноле (10,0 мл). После добавления трифторуксусной кислоты (197,3 мл, 2,6 ммоль), реакционную смесь подвергают взаимодействию при 110°C в течение 12 часов, и затем растворитель концентрируют. Продукт реакции нейтрализуют добавлением 7N раствора аммиака, растворенного в метаноле, и остаток отделяют хроматографией на колонке с получением 179,0 мг (выход: 19,3%) указанного в заголовке соединения.
1H ЯМР (500 МГц, CD3OD) δ 7,96-7,91 (м, 1H), 7,53-7,48 (м, 1H), 6,84-6,62 (м, 2H), 6,30-6,14 (м, 1H), 5,81-5,61 (м, 1H), 5,12-5,02 (м, 1H), 4,55-4,41 (м, 1H), 4,24-4,01 (м, 4H), 3,53-3,41 (м, 1H), 3,25-2,95 (м, 1H), 2,20-2,17 (м, 1H), 1,99-1,84 (м, 1H), 1,44-1,39 (м, 3H)
Пример 2: Получение 1-((3S,4R)-3-(5-хлор-2-(1-(2,2-дифторэтил)-1H-пиразол-4-иламино)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-иламино)-4-фторпиперидин-1-ил)проп-2-ен-1-она
29,3 мг (выход: 57,1%) указанного в заголовке соединения получают по методике примера 1, за исключением того, что 1-(2,2-дифторэтил)-1H-пиразол-4-амин применяют вместо 1-этил-1H-пиразол-4-амина в примере 1.
1H ЯМР (500 МГц, CD3OD) δ 8,10-7,99 (м, 1H), 7,62-7,51 (м, 1H), 6,84-6,61 (м, 2H), 6,29-6,13 (м, 1H), 5,82-5,60 (м, 1H), 5,12-5,02 (м, 1H), 4,55-4,41 (м, 3H), 4,23-4,02 (м, 1H), 3,52-3,40 (м, 1H), 3,26-2,95 (м, 1H), 2,22-2,11 (м, 1H), 1,99-1,86 (м, 1H), 1,32-1,28 (м, 2H)
Пример 3: Получение 1-((3S,4R)-3-(5-хлор-2-(1-циклопропил-1H-пиразол-4-иламино)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-иламино)-4-фторпиперидин-1-ил)проп-2-ен-1-она
7,3 мг (выход: 13,3%) указанного в заголовке соединения получают по методике примера 1, за исключением того, что 1-циклопропил-1H-пиразол-4-амин применяют вместо 1-этил-1H-пиразол-4-амина в примере 1.
1H ЯМР (500 МГц, CD3OD) δ 7,99-7,96 (м, 1H), 7,50-7,48 (м, 1H), 6,85-6,61 (м, 2H), 6,29-6,15 (м, 1H), 5,81-5,63 (м, 1H), 5,14-5,04 (м, 1H), 4,58-4,42 (м, 1H), 4,27-4,01 (м, 1H), 3,57-3,46 (м, 2H), 3,26-2,97 (м, 1H), 2,20-2,17 (м, 1H), 2,01-1,98 (м, 1H), 1,94-1,60 (м, 1H), 1,04-0,89 (м, 4H)
Пример 4: Получение 1-((3S,4R)-3-(5-хлор-2-(изоксазол-4-иламино)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-иламино)-4-фторпиперидин-1-ил)проп-2-ен-1-она
18,7 мг (выход: 24,1%) указанного в заголовке соединения получают по методике примера 1, за исключением того, что изооксазол-4-амин применяют вместо 1-этил-1H-пиразол-4-амина в примере 1.
1H ЯМР (500 МГц, CD3OD) δ 9,08-8,99 (м, 1H), 8,51-8,40 (м, 1H), 6,89-6,66 (м, 2H), 6,33-6,09 (м, 1H), 5,85-5,60 (м, 1H), 5,15-4,98 (м, 1H), 4,62-4,28 (м, 1H), 4,27-3,96 (м, 2H), 3,58-3,38 (м, 1H), 3,09-2,65 (м, 1H), 2,25-2,08 (м, 1H), 1,97-1,78 (м, 1H)
Пример 5: Получение 1-((3S,4R)-3-(5-хлор-2-(изотиазол-4-иламино)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-иламино)-4-фторпиперидин-1-ил)проп-2-ен-1-она
7,3 мг (выход: 40,3%) указанного в заголовке соединения получают по методике примера 1, за исключением того, что изотиазол-4-амин применяют вместо 1-этил-1H-пиразол-4-амина в примере 1.
1H ЯМР (500 МГц, CD3OD) δ 9,00-8,85 (м, 1H), 8,65-8,55 (м, 1H), 7,15-6,65 (м, 2H), 6,35-6,10 (м, 1H), 5,85-5,60 (м, 1H), 5,20-5,05 (м, 1H), 4,65-4,00 (м, 3H), 3,60-3,40 (м, 1H), 3,10-3,00 (м, 1H), 2,10-1,90 (м, 1H), 1,65-1,55 (м, 1H)
Пример 6: Получение 4-((3S,4R)-1-акрилоил-4-фторпиперидин-3-иламино)-2-(1-этил-1H-пиразол-4-иламино)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбонитрила
2,8 мг (выход: 23,1%) указанного в заголовке соединения получают по методике примера 1, за исключением того, что 2,4-дихлор-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбонитрил применяют вместо 2,4,5-трихлор-7H-пирроло[2,3-d]пиримидина в примере 1.
1H ЯМР (500 МГц, CD3OD) δ 8,00-7,90 (м, 1H), 7,60-7,50 (м, 2H), 6,90-6,60 (м, 1H), 6,30-6,10 (м, 1H), 5,82-5,60 (м, 1H), 5,20-5,00 (м, 1H), 4,60-4,45 (м, 1H), 4,30-4,00 (м, 3H), 3,60-3,40 (м, 1H), 2,25-2,10 (м, 1H), 2,08-1,85 (м, 2H), 1,63-1,52 (м, 1H), 1,45-1,38 (м, 3H)
Пример 7: Получение 4-((3S,4R)-1-акрилоил-4-фторпиперидин-3-иламино)-2-(1-(2,2-дифторэтил)-1H-пиразол-4-иламино)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбонитрила
5,6 мг (выход: 42,4%) указанного в заголовке соединения получают по методике примера 1, за исключением того, что 2,4-дихлор-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбонитрил применяют вместо 2,4,5-трихлор-7H-пирроло[2,3-d]пиримидина, и 1-(2,2-дифторэтил)-1H-пиразол-4-амин применяют вместо 1-этил-1H-пиразол-4-амина в примере 1.
1H ЯМР (500 МГц, CD3OD) δ 8,17-7,97 (м, 1H), 7,70-7,50 (м, 2H), 6,90-6,60 (м, 1H), 6,33-5,98 (м, 2H), 5,82-5,60 (м, 1H), 5,20-5,00 (м, 1H), 4,60-4,40 (м, 3H), 4,30-3,00 (м, 3H), 2,25-2,10 (м, 1H), 2,02-1,85 (м, 1H), 1,65-1,50 (м, 1H)
Пример 8: Получение 4-((3S,4R)-1-акрилоил-4-фторпиперидин-3-иламино)-2-(1-циклопропил-1H-пиразол-4-иламино)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбонитрила
4,1 мг (выход: 32,8%) указанного в заголовке соединения получают по методике примера 1, за исключением того, что 2,4-дихлор-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбонитрил применяют вместо 2,4,5-трихлор-7H-пирроло[2,3-d]пиримидина, и 1-циклопропил-1H-пиразол-4-амин применяют вместо 1-этил-1H-пиразол-4-амина в примере 1.
1H ЯМР (500 МГц, CD3OD) δ 8,05-7,97 (м, 1H), 7,60-7,50 (м, 2H), 6,90-6,60 (м, 1H), 6,30-6,10 (м, 1H), 5,82-5,60 (м, 1H), 5,20-5,00 (м, 1H), 4,62-4,40 (м, 1H), 4,30-4,00 (м, 1H), 3,60-3,30 (м, 2H), 3,10-3,00 (м, 1H), 2,30-2,10 (м, 1H), 2,05-1,95 (м, 1H), 1,65-1,55 (м, 1H), 1,08-0,93 (м, 4H)
Пример 9: Получение 4-((3S,4R)-1-акрилоил-4-фторпиперидин-3-иламино)-2-(изоксазол-4-иламино)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбонитрила
11,5 мг (выход: 12,2%) указанного в заголовке соединения получают по методике примера 1, за исключением того, что 2,4-дихлор-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбонитрил применяют вместо 2,4,5-трихлор-7H-пирроло[2,3-d]пиримидина, и изооксазол-4-амин применяют вместо 1-этил-1H-пиразол-4-амина в примере 1.
1H ЯМР (500 МГц, CD3OD) δ 9,10-9,00 (м, 1H), 8,50-8,40 (м, 1H), 7,63-7,55 (м, 1H), 6,90-6,65 (м, 1H), 6,30-6,10 (м, 1H), 5,85-5,60 (м, 1H), 5,20-5,05 (м, 1H), 4,65-4,00 (м, 3H), 3,65-3,00 (м, 2H), 2,10-1,90 (м, 1H), 1,65-1,50 (м, 1H)
Пример 10: Получение 1-((3S,4R)-3-(2-(1-этил-1H-пиразол-4-иламино)-5-метил-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-иламино)-4-фторпиперидин-1-ил)проп-2-ен-1-она
13,8 мг (выход: 41,4%) указанного в заголовке соединения получают по методике примера 1, за исключением того, что 2,4-дихлор-5-метил-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин применяют вместо 2,4,5-трихлор-7H-пирроло[2,3-d]пиримидина в примере 1.
1H ЯМР (500 МГц, CD3OD) δ 8,00-7,85 (м, 1H), 7,50-7,40 (м, 1H), 6,90-6,60 (м, 1H), 6,52 (с, 1H), 6,33-6,13 (м, 1H), 5,85-5,60 (м, 1H), 5,20-5,02 (м, 1H), 4,55-4,40 (м, 1H), 4,15-4,00 (м, 3H), 3,55-3,40 (м, 1H), 3,30-2,98 (м, 1H), 2,40-2,30 (м, 3H), 2,25-1,55 (м, 3H), 1,45-1,32 (м, 3H)
Пример 11: Получение 1-((3S,4R)-4-фтор-3-(2-(изоксазол-4-иламино)-5-метил-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-иламино)пиперидин-1-ил)проп-2-ен-1-она
10,4 мг (выход: 13,5%) указанного в заголовке соединения получают по методике примера 1, за исключением того, что 2,4-дихлор-5-метил-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин применяют вместо 2,4,5-трихлор-7H-пирроло[2,3-d]пиримидина, и изооксазол-4-амин применяют вместо 1-этил-1H-пиразол-4-амина в примере 1.
1H ЯМР (500 МГц, CD3OD) δ 9,10-9,00 (м, 1H), 8,50-8,40 (м, 1H), 6,95-6,68 (м, 1H), 6,60-6,52 (м, 1H), 6,33-6,13 (м, 1H), 5,85-5,60 (м, 1H), 5,20-5,02 (м, 1H), 4,55-4,40 (м, 1H), 4,35-4,00 (м, 2H), 3,60-3,40 (м, 1H), 3,10-3,00 (м, 1H), 2,36 (с, 3H), 2,10-1,95 (м, 2H)
Пример 12: Получение 1-((3S,4S)-3-(5-хлор-2-(1-этил-1H-пиразол-4-иламино)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-иламино)-4-фторпиперидин-1-ил)проп-2-ен-1-она
14,4 мг (выход: 15,5%) указанного в заголовке соединения получают по методике примера 1, за исключением того, что трет-бутил(3S,4S)-3-амино-4-фторпиперидин-1-карбоксилат применяют вместо трет-бутил(3S,4R)-3-амино-4-фторпиперидин-1-карбоксилата в примере 1.
1H ЯМР (500 МГц, CD3OD) δ 7,95-7,88 (м, 1H), 7,55-7,48 (м, 1H), 6,88-6,60 (м, 2H), 6,30-6,15 (м, 1H), 5,85-5,60 (м, 1H), 5,15-4,97 (м, 1H), 4,60-4,35 (м, 1H), 4,15-4,05 (м, 2H), 4,04-3,92 (м, 1H), 3,90-3,65 (м, 2H), 2,20-1,80 (м, 3H), 1,48-1,35 (м, 3H)
Экспериментальный пример 1: Измерение ингибирующего действия против JAK 3 и BTK ферментов
Ингибирующее действие против JAK3 и BTK киназ измеряют для соединений, полученных в Примерах через in vitro анализ платформы ADP Glow (Glo).
Более конкретно, ингибирующее действие против JAK3 и BTK киназы измеряют с применением набора для анализа JAK3 киназы (Promega, V9441) и набора для анализа BTK киназы (Promega, V9071), которые получают от Promega. Рекомбинантные очищенные человеческие JAK3 и BTK разводят 1x киназным рабочим буфером (JAK3: 40 мМ Tris-Cl, pH 7,5, 20 мМ MgCl2, 0,1 мг/мл АБС и 50 мкМ ДТТ/BTK: 40 мМ Tris-Cl, pH 7,5, 20 мМ MgCl2, 0,1 мг/мл АБС, 2 мМ MnCl2 и 50 мкМ ДТТ) и добавляют в 96-луночные планшеты (JAK3: конечная концентрация 4 нг на реакцию/BTK: конечная концентрация 8 нг на реакцию). Соединения, полученные в представленных выше примерах, обрабатывают так, чтобы получить конечный 1% ДМСО водный раствор, и субстратный коктейль, содержащий АТФ (JAK3: конечная концентрация 5 мкМ/BTK: конечная концентрация 10 мкМ) и 0,2 мкг/мкл поли(Glu4, Tyr1)пептида (конечная концентрация JAK3 и BTK) во всего 25 мкл реагентов добавляют в 96-луночные планшеты для начала ферментной реакции. После инкубирования (30°C) в течение 1 часа добавляют эквивалентный объем (25 мкл на реакцию) ADP Glo и инкубируют (30°C) в течение 40 минут при комнатной температуре. Затем добавляют реагент для определения киназы (50 мкл на реакцию) и инкубируют (30°C) в течение 30 минут при комнатной температуре. Киназную активность измеряют хемилюминесценцией согласно инструкциям набора для анализа киназы ADP Glo, и ингибирующее действие соединений в соответствии с данным изобретением рассчитывают. Для анализа результатов каждого соединения применяют Microsoft Excel, и значения IC50 рассчитывают в программе SigmaPlot. Результаты показаны в таблице 1 ниже. Затем, для сравнения, также оценивают тофацитиниб и ибрутиниб.
[Таблица 1]
| № примера | JAK3 IC50 (нМ) |
BTK IC50 (нМ) |
| 1 | 0,1 | 0,6 |
| 2 | 0,1 | 0,8 |
| 3 | 0,1 | 0,8 |
| 4 | 0,2 | 3,2 |
| 5 | 0,6 | 3,9 |
| 6 | 0,2 | 0,9 |
| 7 | 0,2 | 0,8 |
| 8 | 0,3 | 0,9 |
| 9 | 0,3 | 2,2 |
| 10 | 0,5 | 3,3 |
| 11 | 0,7 | 9,1 |
| 12 | 0,2 | 1,0 |
| Тофацитиниб | 3,3 | |
| Ибрутиниб | 0,7 |
Экспериментальный пример 2: JAK3-медиированный клеточный анализ (HT-2/IL-2 анализ)
Ингибирующее действие против JAK3 киназы на клеточном уровне измеряют для соединений, полученных в примерах, с применением in vitro анализа фосфорилирования STAT5, вызванного стимулированием IL-2 в клетках HT-2. Более конкретно, фосфорилирование STAT5 анализируют с применением набора для анализа HTRF®phospho-STAT5 (Tyr694) (Cisbio, 64AT5PEG), который получают от Cisbio. Клетки HT-2 культивируют в течение 2 часов в среде, не содержащей фактор роста. Культивированные HT-2 клетки распределяют в 96-луночные планшеты по 50 мкл так, чтобы получить плотность 2,5×105 клеток/лунку. Соединения, полученные в представленных выше примерах, готовят так, чтобы получить конечный 0,3% ДМСО водный раствор, и клетки HT-2 обрабатывают соединениями в течение 30 минут. После обработки соединения, IL-2 готовят так, чтобы получить конечную концентрацию 20 нг/мл, и клетки HT-2 обрабатывают в течение 10 минут. Затем клетки расщепляют обработкой лизисными буферами в течение 30 минут. Уровень фосфорилирования STAT5 измеряют согласно инструкциям набора для анализа HTRF® phospho-STAT5, и ингибирующее действие соединений в соответствии с данным изобретением рассчитывают. Для анализа результатов каждого соединения применяют Microsoft Excel, и значения IC50 рассчитывают в программе SigmaPlot.
[Таблица 2]
| № примера | IC50 JAK3 клетки (нМ) |
| 1 | 30,9 |
| 2 | 49 |
| 4 | 51,8 |
| 5 | 288,3 |
| 9 | 282,0 |
| 10 | 241,5 |
| 11 | 248 |
| 12 | 25,4 |
1. Соединение, представленное следующими соединениями, или его фармацевтически приемлемая соль:
1) 1-((3S,4R)-3-(5-хлор-2-(1-этил-1H-пиразол-4-иламино)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-иламино)-4-фторпиперидин-1-ил)проп-2-ен-1-он,
2) 1-((3S,4R)-3-(5-хлор-2-(1-(2,2-дифторэтил)-1H-пиразол-4-иламино)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-иламино)-4-фторпиперидин-1-ил)проп-2-ен-1-он,
3) 1-((3S,4R)-3-(5-хлор-2-(1-циклопропил-1H-пиразол-4-иламино)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-иламино)-4-фторпиперидин-1-ил)проп-2-ен-1-он,
4) 1-((3S,4R)-3-(5-хлор-2-(изоксазол-4-иламино)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-иламино)-4-фторпиперидин-1-ил)проп-2-ен-1-он,
5) 1-((3S,4R)-3-(5-хлор-2-(изотиазол-4-иламино)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-иламино)-4-фторпиперидин-1-ил)проп-2-ен-1-он,
6) 4-((3S,4R)-1-акрилоил-4-фторпиперидин-3-иламино)-2-(1-этил-1H-пиразол-4-иламино)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбонитрил,
7) 4-((3S,4R)-1-акрилоил-4-фторпиперидин-3-иламино)-2-(1-(2,2-дифторэтил)-1H-пиразол-4-иламино)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбонитрил,
8) 4-((3S,4R)-1-акрилоил-4-фторпиперидин-3-иламино)-2-(1-циклопропил-1H-пиразол-4-иламино)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбонитрил,
9) 4-((3S,4R)-1-акрилоил-4-фторпиперидин-3-иламино)-2-(изоксазол-4-иламино)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-5-карбонитрил,
10) 1-((3S,4R)-3-(2-(1-этил-1H-пиразол-4-иламино)-5-метил-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-иламино)-4-фторпиперидин-1-ил)проп-2-ен-1-он,
11) 1-((3S,4R)-4-фтор-3-(2-(изоксазол-4-иламино)-5-метил-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-иламино)пиперидин-1-ил)проп-2-ен-1-он и
12) 1-((3S,4S)-3-(5-хлор-2-(1-этил-1H-пиразол-4-иламино)-7H-пирроло[2,3-d]пиримидин-4-иламино)-4-фторпиперидин-1-ил)проп-2-ен-1-он.
2. Фармацевтическая композиция для ингибирования активности JAK3 и/или BTK, содержащая соединение по п.1 или его фармацевтически приемлемую соль.
