Иммуногенные композиции для применения в пневмококковых вакцинах

Предложено применение иммуногенной композиции для иммунизации пациента против инфекции S. pneumoniae серотипов 18A, 18B и 18F. Указанная композиция содержит по меньшей мере один гликоконъюгат из капсульного сахарида S. pneumoniae серотипа 18C, где указанный гликоконъюгат получен посредством восстановительного аминирования. Композиция дополнительно содержит гликоконъюгаты из капсульного сахарида S. pneumoniae серотипов 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 19A, 19F и 23F, но не содержит капсульный сахарид из S. pneumoniae серотипов 18A, 18B и 18F. Также предложены набор для защиты против S. pneumoniae серогруппы 18, содержащий указанную композицию, и способ тестирования способности иммуногенной композиции защищать против S. pneumoniae серогруппы 18. Изобретения обеспечивают защиту против S. pneumoniae серогруппы 18. 5 н. и 12 з.п. ф-лы, 6 ил., 1 табл., 1 пр.

 

Область техники, к которой относится изобретение

Целью настоящего изобретения является получение иммуногенных композиций для защиты против S. pneumoniae серогруппы 18. Иммуногенные композиции по настоящему изобретению, как правило, содержат конъюгированные антигены капсульных сахаридов (гликоконъюгаты), где сахариды происходят из серотипов Streptococus pneumoniae. Настоящее изобретение относится к новым иммуногенным композициям для применения в пневмококковых вакцинах.

Уровень техники

Инфекции, вызванные пневмококками, являются главной причиной заболеваемости и смертности во всем мире. Пневмония, фебрильная бактериемия и менингит являются наиболее частыми проявлениями инвазивного пневмококкового заболевания, в то время как распространение бактерий по дыхательным путям может приводить к инфекции среднего уха, синуситу или рецидивирующему бронхиту. По сравнению с инвазивным заболеванием неинвазивные проявления обычно менее тяжелые, но встречаются значительно чаще.

Этиологический агент пневмококковых заболеваний, Streptococcus pneumoniae (пневмококк), является грамположительным инкапсулированным кокком, окруженным полисахаридной капсулой. Различия в составе этой капсулы позволяют серологически различать приблизительно 90 капсульных типов, некоторые из которых часто ассоциированы с пневмококковым заболеванием, другие - редко. Инвазивные пневмококковые инфекции включают пневмонию, менингит и фебрильную бактериемию; частыми неинвазивными проявлениями являются средний отит, синусит и бронхит.

Пневмококковые конъюгированные вакцины (PCV) представляют собой пневмококковые вакцины, используемые для защиты против заболевания, вызванного S. pneumoniae (пневмококком). В настоящее время существуют три вакцины PCV, доступные на мировом рынке: PREVNAR^® (называемая Prevenar в некоторых странах) (гептавалентная вакцина), SYNFLORIX^® (декавалентная вакцина) и PREVNAR 13^® (тридекавалентная вакцина).

Специфические серотипы, вызывающие заболевание, помимо 13 в PREVNAR 13^®, меняются в зависимости от региона, популяции, и могут меняться с течением времени из-за приобретения резистентности к антибиотику, введения пневмококковой вакцины и долгосрочных тенденций неизвестного происхождения.

Добавление конъюгатов к иммуногенной композиции не является прямолиненйным процессом, поскольку комбинация конъюгатов в одну мультивалентную инъекцию может приводить к конкуренции между различными компонентами и может неблагоприятным образом влиять на иммуногенность любого индивидуального конъюгата.

Этот феномен неблагоприятного влияния может ограничивать количество конъюгатов, которые можно включать в мультивалентную вакцину. Таким образом, защиту против большого количества серотипов, с ограничением в то же время количества конъюгатов в композиции, может быть очень сложно получить, несмотря на ее значительную ценность.

Целью настоящего изобретения является получение иммуногенных композиций для соответствующей защиты против S. pneumoniae, в частности, против S. pneumoniae серогруппы 18, с ограничением в то же время количества конъюгатов.

Серогруппа 18 Streptococcus pneumoniae состоит из четырех различных серотипов, 18F, 18A, 18B и 18C, каждый из которых образует специфический для своего собственного типа капсульный полисахарид.

Целью настоящего изобретения является получение иммуногенных композиций для соответствующей защиты против S. pneumoniae серотипов 18F, 18A, 18B и 18C, с ограниченным количеством конъюгатов.

Сущность изобретения

Настоящее изобретение относится к иммуногенной композиции, содержащей по меньшей мере один гликоконъюгат из S. pneumoniae серотипа 18C, для использования в способе иммунизации субъекта против инфекции S. pneumoniae серотипов 18A, 18B и/или 18F. Предпочтительно, указанная композиция не содержит капсульный сахарид из S. pneumoniae серотипов 18A, 18B и 18F.

В одном аспекте настоящее изобретение относится к применению иммуногенной композиции, содержащей по меньшей мере один гликоконъюгат из S. pneumoniae серотипа 18C, для получения лекарственного средства для иммунизации пациента против инфекции S. pneumoniae серотипов 18A, 18B и/или 18F. Предпочтительно, указанная композиция не содержит капсульный сахарид из S. pneumoniae серотипов 18A, 18B и/или 18F.

В одном аспекте вышеуказанные иммуногенные композиции дополнительно содержат по меньшей мере один гликоконъюгат из S. pneumoniae серотипов 4, 6B, 9V, 14, 19F и/или 23F.

В одном аспекте вышеуказанные иммуногенные композиции дополнительно содержат по меньшей мере один гликоконъюгат из S. pneumoniae серотипов 1, 5 и/или 7F.

В одном аспекте вышеуказанные иммуногенные композиции дополнительно содержат по меньшей мере один гликоконъюгат из S. pneumoniae серотипов 6A и/или 19A.

В одном аспекте вышеуказанные иммуногенные композиции дополнительно содержат по меньшей мере один гликоконъюгат из S. pneumoniae серотипов 3, 15B, 22F, 33F, 12F, 10A, 11A и/или 8.

В следующем аспекте вышеуказанные иммуногенные композиции дополнительно содержат по меньшей мере один гликоконъюгат из S. pneumoniae серотипов 2, 15C, 17F и/или 20.

В одном аспекте вышеуказанные иммуногенные композиции дополнительно содержат по меньшей мере один гликоконъюгат из S. pneumoniae серотипа 9N.

В следующем аспекте иммуногенная композиция представляет собой 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 или 25-валентную композицию пневмококковых конъюгатов.

В следующем аспекте гликоконъюгаты из иммуногенных композиций являются индивидуально конъюгированными с CRM₁₉₇.

В одном аспекте гликоконъюгаты из S. pneumoniae серотипов 1, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14 и/или 23F из иммуногенных композиций являются индивидуально конъюгированными с PD, и, если присутствует, гликоконъюгат из S. pneumoniae серотипа 18C является конъюгированным с TT, и гликоконъюгат из S. pneumoniae серотипа 19F является конъюгированным с DT.

В одном аспекте гликоконъюгаты получают с использованием химических реакций CDAP или посредством химических реакций восстановительного аминирования.

Иммуногенная композиция может дополнительно содержать антигены из других патогенов, и/или по меньшей мере один адъювант, такой как фосфат алюминия, сульфат алюминия или гидроксид алюминия.

В одном аспекте иммуногенные композиции являются способными стимулировать у человека образование антител IgG, которые способны связывать полисахарид S. pneumoniae серотипов 18A, 18B и/или 18F, в концентрации по меньшей мере 0,35 мкг/мл, как определено посредством анализа ELISA.

В одном аспекте иммуногенные композиции являются способными стимулировать образование титра по меньшей мере 1:8 против S. pneumoniae серотипов 18A, 18B и/или 18F по меньшей мере у 50% пациентов, как определено посредством анализа in vitro опсонофагоцитирующего уничтожения (OPA).

В одном аспекте иммуногенные композиции являются способными значительно увеличивать долю отвечающих против S. pneumoniae серотипов 18A, 18B и/или 18F, по сравнению с популяцией до иммунизации.

В одном аспекте иммуногенные композиции являются способными значительно увеличивать у пациентов-людей титры в OPA против S. pneumoniae серотипов 18A, 18B и/или 18F, по сравнению с популяцией до иммунизации.

В одном аспекте иммуногенные композиции предназначены для использования в способе иммунизации пациента против инфекции S. pneumoniae серотипов 18A, 18B и/или 18F.

В одном аспекте иммуногенные композиции предназначены для использования в способе предотвращения, лечения или облегчения инфекции, заболевания или состояния, вызванных S. pneumoniae серотипов 18A, 18B и/или 18F у пациента, для использования для предотвращения инфекции S. pneumoniae серотипов 18A, 18B и/или 18F у пациента или для использования в способе защиты или лечения человека, чувствительного к инфекции S. pneumoniae серотипов 18A, 18B и/или 18F, посредством введения указанных иммуногенных композиций системным способом или через слизистые оболочки.

В одном аспекте настоящее изобретение относится к применению иммуногенной композиции, описанной в настоящем описании, для получения лекарственного средства для предотвращения, лечения или облегчения инфекции, заболевания или состояния, вызванных S. pneumoniae серотипов 18A, 18B и/или 18F у пациента, для использования для предотвращения инфекции S. pneumoniae серотипов 18A, 18B и/или 18F у пациента или для использования в способе защиты или лечения человека, чувствительного к инфекции S. pneumoniae серотипов 18A, 18B и/или 18F, посредством введения указанных иммуногенных композиций системным способом или через слизистые оболочки.

В одном аспекте изобретение относится к способу предотвращения, лечения или облегчения инфекции, заболевания или состояния, ассоциированных с S. pneumoniae серотипов 18A, 18B и/или 18F, у пациента, включающему введение пациенту иммунологически эффективного количества иммуногенной композиции по изобретению.

В одном аспекте изобретение относится к способу предотвращения инфекции S. pneumoniae серотипов 18A, 18B и/или 18F у пациента, включающему введение пациенту иммунологически эффективного количества иммуногенной композиции по изобретению.

Изобретение, кроме того, относится к набору, содержащему иммуногенную композицию, описанную в настоящем описании, и информационный листок, где в указанном информационном листке упомянута способность композиции стимулировать образование функциональных антител против S. pneumoniae серотипов 18A, 18B и/или 18F, и к способу изготовления указанного набора.

Неожиданно обнаружено, что конъюгат полисахарида серотипа 18C, помимо стимуляции образования функциональных реакционноспособных антител против серогруппы 18C, может дополнительно стимулировать образование функциональных антител с перекрестной реакционной способностью для других серотипов внутри серогруппы 18: 18A, 18B и/или 18F.

Фигуры

Фигура 1 Перекрестные функциональные ответы в OPA. Подгруппу из 59 образцов сыворотки от взрослых, вакцинированных с использованием 13-валентной пневмококковой конъюгированной вакцины (исследование США 6115A1-004; идентификатор в ClinicalTrials.gov: NCT00427895), оценивали в OPA по присутствию функциональных антител против серотипов 18C, 18F, 18A, 18B. Процент образцов с положительным титром в OPA (т.е., ≥1:8) указан над каждой группой. Геометрические средние титров (GMT) перечислены на оси x под каждой группой.

Фигура 2 Перекрестные функциональные ответы в OPA для 66 совпадающих образцов сыворотки до/после. Подгруппу из панели 66 совпадающих образцов сыворотки до и после вакцинации от взрослых, вакцинированных с использованием 13-валентной пневмококковой конъюгированной вакцины (исследование 6115A1-3005; идентификатор в ClinicalTrials.gov: NCT00546572), оценивали в OPA по присутствию функциональных антител против серотипов 18C, 18F, 18A и 18B. Процент образцов с положительным титром в OPA (т.е., ≥1:8) указан над каждой группой. Геометрические средние титров (GMT) перечислены на оси x под каждой группой.

Фигура 3 Кумулятивные кривые обратного распределения (RCDC) до и после иммунизации - пневмококковый серотип 18C.

Кумулятивные кривые обратного распределения титров в OPA для серотипа 18C из панели совпадающих образцов сыворотки до и после вакцинации (N=66), вакцинированных с использованием 13-валентной пневмококковой конъюгированной вакцины (исследование 6115A1-3005; идентификатор в ClinicalTrials.gov: NCT00546572). Графики представляют собой процент сывороток с положительным по OPA титром (т.е., ≥1:8).

Фигура 4 Кумулятивные кривые обратного распределения (RCDC) до и после иммунизации - пневмококковый серотип 18A.

Кумулятивные кривые обратного распределения титров в OPA для серотипа 18A из панели совпадающих образцов сыворотки до и после вакцинации (N=66), вакцинированных с использованием 13-валентной пневмококковой конъюгированной вакцины (исследование 6115A1-3005; идентификатор в ClinicalTrials.gov: NCT00546572). Графики представляют собой процент сывороток с положительным по OPA титром (т.е., ≥1:8).

Фигура 5 Кумулятивные кривые обратного распределения (RCDC) до и после иммунизации - пневмококковый серотип 18B.

Кумулятивные кривые обратного распределения титров в OPA для серотипа 18B из панели совпадающих образцов сыворотки до и после вакцинации (N=66), вакцинированных с использованием 13-валентной пневмококковой конъюгированной вакцины (исследование 6115A1-3005; идентификатор в ClinicalTrials.gov: NCT00546572). Графики представляют собой процент сывороток с положительным по OPA титром (т.е., ≥1:8).

Фигура 6 Кумулятивные кривые обратного распределения (RCDC) до и после иммунизации - пневмококковый серотип 18F.

Кумулятивные кривые обратного распределения титров в OPA для серотипа 18F из панели совпадающих образцов сыворотки до и после вакцинации (N=66), вакцинированных с использованием 13-валентной пневмококковой конъюгированной вакцины (исследование 6115A1-3005; идентификатор в ClinicalTrials.gov: NCT00546572). Графики представляют собой процент сывороток с положительным по OPA титром (т.е., ≥1:8).

1 Иммуногенные композиции по изобретению

Иммуногенные композиции по настоящему изобретению, как правило, содержат конъюгированные антигены капсульных сахаридов (называемые также гликоконъюгатами), где сахариды происходят из серотипов S. pneumoniae.

Предпочтительно, количество капсульных сахаридов S. pneumoniae может лежать в диапазоне от 1 серотипа (или «в», валентностей) до 25 различных серотипов (25в). В одном варианте осуществления, присутствует один серотип. В одном варианте осуществления, присутствуют 2 различных серотипа. В одном варианте осуществления, присутствуют 3 различных серотипа. В одном варианте осуществления, присутствуют 4 различных серотипа. В одном варианте осуществления, присутствуют 5 различных серотипов. В одном варианте осуществления, присутствуют 6 различных серотипов. В одном варианте осуществления, присутствуют 7 различных серотипов. В одном варианте осуществления, присутствуют 8 различных серотипов. В одном варианте осуществления, присутствуют 9 различных серотипов. В одном варианте осуществления, присутствуют 10 различных серотипов. В одном варианте осуществления, присутствуют 11 различных серотипов. В одном варианте осуществления, присутствуют 12 различных серотипов. В одном варианте осуществления, присутствуют 13 различных серотипов. В одном варианте осуществления, присутствуют 14 различных серотипов. В одном варианте осуществления, присутствуют 15 различных серотипов. В одном варианте осуществления, присутствуют 16 различных серотипов. В одном варианте осуществления, присутствуют 17 различных серотипов. В одном варианте осуществления, присутствуют 18 различных серотипов. В одном варианте осуществления, присутствуют 19 различных серотипов. В одном варианте осуществления, присутствуют 20 различных серотипов. В одном варианте осуществления, присутствуют 21 различный серотип. В одном варианте осуществления, присутствуют 22 различных серотипа. В одном варианте осуществления, присутствуют 23 различных серотипа. В одном варианте осуществления, присутствуют 24 различных серотипа. В одном варианте осуществления, присутствуют 25 различных серотипов. Капсульные сахариды конъюгируют с белком-носителем для формирования гликоконъюгатов, как описано в настоящем описании ниже.

Если белок-носитель является одинаковым для 2 или более сахаридов в композиции, сахариды можно конъюгировать с одной и той же молекулой белка-носителя (где молекулы носителя имеют 2 или более различных конъюгированных с ними сахаридов) [см., например, WO 2004/083251].

В предпочтительном варианте осуществления, однако, каждый из сахаридов является индивидуально конъюгированным с различными молекулами белка-носителя (где каждая молекула белка-носителя имеет только один тип конъюгированного с ним сахарида). В указанном варианте осуществления, капсульные сахариды называют индивидуально конъюгированными с белком-носителем.

Для целей по изобретению, термин «гликоконъюгат» обозначает капсульный сахарид, ковалентно связанный с белком-носителем. В одном варианте осуществления, капсульный сахарид связан непосредственно с белком-носителем. Во втором варианте осуществления, бактериальный сахарид связан с белком посредством спейсера/линкера.

1.1 Белок-носитель по изобретению

Компонентом гликоконъюгата по изобретению является белок-носитель, с которым сахарид является конъюгированным. Термины «белковый носитель» или «белок-носитель», или «носитель», могут быть использованы взаимозаменяемо в настоящем описании. Белки-носители должны поддаваться стандартным способам конъюгации.

В предпочтительном варианте осуществления, белок-носитель гликоконъюгатов выбран из группы, состоящей из из: DT (дифтерийного токсина), TT (столбнячного анатоксина) или фрагмента C TT, CRM₁₉₇ (нетоксичного, но антигенно идентичного варианта дифтерийного токсина), цепи A мутанта CRM₁₉₇ дифтерийного токсина (CN103495161), других мутантов DT (таких как CRM176, CRM228, CRM45 (Uchida et al. (1973) J. Biol. Chem. 218:3838-3844), CRM9, CRM102, CRM103 или CRM107; и других мутаций, описанных в Nicholls and Youle in Genetically Engineered Toxins, Ed: Frankel, Maecel Dekker Inc. (1992); делеций или мутаций Glu-148 до Asp, Gln или Ser, и/или Ala 158 до Gly и других мутаций, описанных в Патентах США No. 4709017 и 4950740; мутации по меньшей мере одного или нескольких остатков Lys 516, Lys 526, Phe 530 и/или Lys 534, и других мутаций, описанных в Патентах США No. 5917017 и 6455673; или фрагмента, описанного в Патенте США No. 5843711, пневмококкового пневмолизина (ply) (Kuo et al. (1995) Infect lmmun 63:2706-2713), включая ply, детоксифицированный некоторым образом, например, dPLY-GMBS (WO 2004/081515 и WO 2006/032499) или dPLY-формол, PhtX, включая PhtA, PhtB, PhtD, PhtE (последовательности PhtA, PhtB, PhtD или PhtE описаны в WO 00/37105 и WO 00/39299) и слитые с Pht белки, например, слитые с PhtDE белки, слитые с PhtBE белки, Pht A-E (WO 01/98334, WO 03/054007, WO 2009/000826), OMPC (белка наружной мембраны менингококков, обычно выделяемого из Neisseria meningitidis серогруппы B (EP0372501), PorB (из N. meningitidis), PD (белка D Haemophilus influenzae; см., например, EP0594610 B), или их иммунологически функциональных эквивалентов, синтетических пептидов (EP0378881, EP0427347), белков теплового шока (WO 93/17712, WO 94/03208), коклюшных белков (WO 98/58668, EP0471177), цитокинов, лимфокинов, факторов роста или гормонов (WO 91/01146), искусственных белков, содержащих множество эпитопов, распознаваемых человеческими CD4+Т-клетками, из антигенов, происходящих из различных патогенов (Falugi et al. (2001) Eur J Immunol 31:3816-3824), таких как белок N19 (Baraldoi et al. (2004) Infect lmmun 72:4884-4887), пневмококкового поверхностного белка PspA (WO 02/091998), белков, связанных с усвоением железа (WO 01/72337), токсина A или B Clostridium difficile (WO 00/61761), связывающих трансферрин белков, пневмококкового белка адгезии (PsaA), рекомбинантного экзотоксина A Pseudomonas aeruginosa (в частности, его нетоксичных мутантов (таких как экзотоксин A, несущий замену глутаминовой кислоты 553 (Douglas et al. (1987) J. Bacteriol. 169(11):4967-4971)). Другие белки, такие как овальбумин, гемоцианин морского блюдечка (KLH), бычий сывороточный альбумин (BSA) или очищенное белковое производное туберкулина (PPD) также можно использовать в качестве белков-носителей. Другие пригодные белки-носители включают инактивированные бактериальные токсины, такие как холерный анатоксин (например, как описано в WO 2004/083251), LT Escherichia coli, ST E. coli и экзотоксин A из P. aeruginosa.

В предпочтительном варианте осуществления, белок-носитель гликоконъюгатов независимо выбран из группы, состоящей из TT, DT, мутантов DT (таких как CRM₁₉₇), белка D H. influenzae, слитых с PhtX, PhtD, PhtDE белков (в частности, белков, описанных в WO 01/98334 и WO 03/054007), детоксифицированного пневмолизина, PorB, белка N19, PspA, OMPC, токсина A или B C. difficile и PsaA.

В одном варианте осуществления, белок-носитель гликоконъюгатов по изобретению представляет собой DT (дифтерийный анатоксин). В другом варианте осуществления, белок-носитель гликоконъюгатов по изобретению представляет собой TT (столбнячный анатоксин).

В другом варианте осуществления, белок-носитель гликоконъюгатов по изобретению представляет собой PD (белок D H. influenzae; см., например, EP0594610 B).

Белок CRM₁₉₇ представляет собой нетоксичную форму дифтерийного токсина, но является иммунологически неотличимым от дифтерийного токсина. CRM₁₉₇ продуцируют Corynebacterium diphtheriae, инфицированные нетоксикогенным фагом β197^tox-, полученным посредством мутагенеза токсикогенного бета-фага коринебактерий с использованием нитрозогуанидина (Uchida et al. (1971) Nature New Biology 233:8-11). Белок CRM₁₉₇ имеет такую же молекулярную массу, как и дифтерийный токсин, но отличается от него заменой одного основания (гуанина на аденин) в структурном гене. Эта замена одного основания приводит к аминокислотной замене (глицина на глутаминовую кислоту) в зрелом белке и устраняет токсичные свойства дифтерийного токсина. Белок CRM₁₉₇ является безопасным и эффективным носителем сахаридов, зависимым от Т-клеток. Дополнительные подробности относительно CRM₁₉₇ и его продукции можно обнаружить, например, в Патенте США No. 5614382. В одном варианте осуществления, капсульные сахариды по изобретению конъюгированы с белком CRM₁₉₇ или цепью A CRM₁₉₇ (см. CN103495161). В одном варианте осуществления, капсульные сахариды по изобретению конъюгированы с цепью A CRM₁₉₇, полученной посредством экспрессии в генетически рекомбинантной E. coli (см. CN103495161). В одном варианте осуществления, все капсульные сахариды по изобретению конъюгированы с CRM₁₉₇. В одном варианте осуществления, все капсульные сахариды по изобретению конъюгированы с цепью A CRM₁₉₇.

Соответственно, в частых вариантах осуществления, гликоконъюгаты по изобретению содержат CRM₁₉₇ в качестве белка-носителя, где капсульный полисахарид является ковалентно связанным с CRM₁₉₇.

1.2 Капсульный сахарид по изобретению

Термин «сахарид» на протяжении этого описания может обозначать полисахарид или олигосахарид и включает оба. В частых вариантах осуществления, сахарид представляет собой полисахарид, в частности, капсульный полисахарид S. pneumoniae.

Капсульные полисахариды получают стандартными способами, известными специалисту в данной области.

По настоящему изобретению, капсульные полисахариды можно получать, например, из серотипов 1, 2, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 8, 9V, 9N, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 15C, 17F, 18C, 19A, 19F, 20, 22F, 23F и 33F S. pneumoniae. Как правило, капсульные полисахариды получают посредством выращивания каждого серотипа S. pneumoniae в среде (например, в среде на основе сои), затем полисахариды получают из культуры бактерий. Бактериальные штаммы S. pneumoniae, используемые для получения соответствующих полисахаридов, которые используют в гликоконъюгатах по изобретению, можно получать после сбора выросших культур или клинических образцов.

Популяцию организма (каждого серотипа S. pneumoniae) часто масштабируют от ампулы для посева до бутылей для посева и пассируют через один или несколько ферментеров для посева увеличивающегося объема, до достижения объемов ферментации промышленного масштаба. В конце цикла роста клетки лизируют, и затем лизат бульона собирают для нижестоящей переработки (очистки) (см., например, WO 2006/110381, WO 2008/118752 и Публикации патентных заявок США No. 2006/0228380, 2006/0228381, 2008/0102498 и 2008/0286838).

Индивидуальные полисахариды, как правило, очищают посредством центрифугирования, преципитации, ультрафильтрации и/или хроматографии на колонке (см., например, WO 2006/110352 и WO 2008/118752).

Очищенные полисахариды можно активировать (например, химически активировать) для придания им способности вступать в реакцию (например, либо непосредственно с белком-носителем, либо посредством линкера, такого как спейсер eTEC) и затем включать в гликоконъюгаты по изобретению, как далее описано в настоящем описании.

Капсульные полисахариды S. pneumoniae содержат повторяющиеся олигосахаридные звенья, которые могут содержать вплоть до 8 остатков сахара.

В одном варианте осуществления, капсульный сахарид по изобретению может представлять собой одно звено олигосахарида, или цепь повторяющихся олигосахаридных звеньев, более короткую, чем длина природного сахарида. В одном варианте осуществления, капсульный сахарид по изобретению представляет собой одно повторяющееся олигосахаридное звено соответствующего серотипа.

В одном варианте осуществления, капсульный сахарид по изобретению может представлять собой олигосахариды. Олигосахариды имеют низкое количество повторяющихся звеньев (как правило, 5-15 повторяющихся звеньев) и, как правило, получены синтетически или посредством гидролиза полисахаридов.

В одном варианте осуществления, все из капсульных сахаридов по настоящему изобретению и в иммуногенных композициях по настоящему изобретению представляют собой полисахариды. Высокомолекулярные капсульные полисахариды являются способными индуцировать иммунные ответы определенных антител, благодаря эпитопам, присутствующим на поверхности антигена. Выделение и очистку высокомолекулярных капсульных полисахаридов предпочтительно предусматривают для использования в конъюгатах, композициях и способах по настоящему изобретению.

В некоторых вариантах осуществления, очищенные полисахариды перед конъюгацией имеют молекулярную массу между 5 кДа и 4000 кДа. В других таких вариантах осуществления, полисахарид имеет молекулярную массу между 10 кДа и 4000 кДа; между 50 кДа и 4000 кДа; между 50 кДа и 3000 кДа; между 50 кДа и 2000 кДа; между 50 кДа и 1500 кДа; между 50 кДа и 1000 кДа; между 50 кДа и 750 кДа; между 50 кДа и 500 кДа; между 100 кДа и 4000 кДа; между 100 кДа и 3000 кДа; 100 кДа и 2000 кДа; между 100 кДа и 1500 кДа; между 100 кДа и 1000 кДа; между 100 кДа и 750 кДа; между 100 кДа и 500 кДа; между 100 и 400 кДа; между 200 кДа и 4000 кДа; между 200 кДа и 3000 кДа; между 200 кДа и 2000 кДа; между 200 кДа и 1500 кДа; между 200 кДа и 1000 кДа; или между 200 кДа и 500 кДа.

В следующих вариантах осуществления, капсульный полисахарид имеет молекулярную массу между 70 кДа и 150 кДа; 80 кДа и 160 кДа; 90 кДа и 250 кДа; 100 кДа и 1,000; 100 кДа и 500 кДа; 100 кДа и 400 кДа; 100 кДа и 160 кДа; 150 кДа и 600 кДа; 200 кДа и 1000 кДа; 200 кДа и 600 кДа; 200 кДа и 400 кДа; 300 кДа и 1000 KDa; 300 кДа и 600 кДа; 300 кДа и 500 кДа или 500 кДа и 600 кДа.

В следующих вариантах осуществления, капсульный полисахарид имеет молекулярную массу между 5 кДа и 100 кДа; 7 кДа и 100 кДа; 10 кДа и 100 кДа; 20 кДа и 100 кДа; 30 кДа и 100 кДа; 40 кДа и 100 кДа; 50 кДа и 100 кДа; 60 кДа и 100 кДа; 70 кДа и 100 кДа; 80 кДа и 100 кДа; 90 кДа и 100 кДа; 5 кДа и 90 KDa; 5 кДа и 80 кДа; 5 кДа и 70 кДа; 5 кДа и 60 кДа; 5 кДа и 50 кДа; 5 кДа и 40 кДа; 5 кДа и 30 кДа; 5 кДа и 20 кДа или 5 кДа и 10 кДа. Любое целое число внутри любого из вышеуказанных диапазонов предусматривают в качестве варианта осуществления по этому описанию.

Полисахарид может подвергаться небольшому уменьшению размера в ходе нормальных способов очистки. Кроме того, как описано в настоящем описании, полисахарид можно подвергать коррекции размера перед конъюгацией. Можно использовать механическую или химическую коррекцию размера. Химический гидролиз можно проводить с использованием уксусной кислоты. Например, сахариды серотипа 18C можно подвергать коррекции размера (и де-O-ацетилированию) посредством обработки уксусной кислотой (см., например, WO2006/110381, страница 37, строки 1-4). Механическую коррекцию размера можно проводить с использованием разрезания посредством гомогенизации высокого давления. Вышеупомянутые диапазоны молекулярной массы относятся к очищенным полисахаридам перед конъюгацией (например, перед активацией).

В предпочтительном варианте осуществления, очищенные полисахариды представляют собой капсульный полисахарид из серотипов 1, 2, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 8, 9V, 9N, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 15C, 17F, 18C, 19A, 19F, 20, 22F, 23F или 33F S. pneumoniae, где капсульный полисахарид имеет молекулярную массу, попадающую в один из диапазонов молекулярной массы, как описано в настоящем описании выше.

Как применяют в настоящем описании, термин «молекулярная масса» полисахарида или конъюгата белка-носителя-полисахарида относится к молекулярной массе, рассчитанной посредством эксклюзионной хроматографии (SEC) в комбинации с детектором многоугольного рассеяния лазерного излучения (MALLS).

В некоторых вариантах осуществления, пневмококковые сахариды из серотипов 9V, 18C, 11A, 15B, 22F и/или 33F по изобретению являются O-ацетилированными. В некоторых вариантах осуществления, пневмококковые сахариды из серотипов 9V, 11A, 15B, 22F и/или 33F по изобретению являются O-ацетилированными. В предпочтительном варианте осуществления, пневмококковый сахарид из серотипа 18C по изобретению является де-O-ацетилированным. Например, сахариды серотипа 18C можно де-O-ацетилировать посредством обработки кислотой (см., например, WO2006/110381, страницу 37, строки 1-4).

Степень O-ацетилирования полисахарида можно определять любым способом, известным в данной области, например, посредством протонного ЯМР (см., например, Lemercinier et al. (1996) Carbohydrate Research 296:83-96, Jones et al. (2002) J. Pharmaceutical and Biomedical Analysis 30:1233-1247, WO 2005/033148 и WO 00/56357). Другой общепринятый способ описан в Hestrin (1949) J. Biol. Chem. 180:249-261. Предпочтительно, присутствие O-ацетильных групп определяют анализом ионной HPLC.

Очищенные полисахариды, описанные в настоящем описании, химически активируют, чтобы сделать сахариды способными к реакции с белком-носителем. Эти пневмококковые конъюгаты получают отдельными способами и составляют в один лекарственный состав, как описано ниже.

1.3 Гликоконъюгаты по изобретению

Очищенные сахариды химически активируют, чтобы сделать сахариды (т.е., активированные сахариды) способными к реакции с белком-носителем, либо напрямую, либо посредством линкера. После активации, каждый капсульный сахарид отдельно конъюгируют с белком-носителем для получения гликоконъюгата. В одном варианте осуществления, каждый капсульный сахарид является конъюгированным с одним и тем же белком-носителем. Химическую активацию сахаридов и последующую конъюгацию с белком-носителем можно осуществлять способами активации и конъюгации, описанными в настоящем описании.

1.3.1 Гликоконъюгаты по изобретению

Капсульные полисахариды из серотипов 1, 2, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 8, 9V, 9N, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 15C, 17F, 18C, 19A, 19F, 20, 22F, 23F и/или 33F S. pneumoniae получают, как описано выше.

В одном варианте осуществления, полисахариды активируют с использованием тетрафторбората 1-циано-4-диметиламинопиридиния (CDAP) с образованием цианатного сложного эфира. Затем активированный полисахарид соединяют непосредственно или через спейсерную (линкерную) группу с аминогруппой на белке-носителе (предпочтительно, CRM₁₉₇). Например, спейсер может представлять собой цистамин или цистеамин для получения тиолированного полисахарида, который может быть соединен с носителем через тиоэфирную связь, полученную после реакции с активированным малеимидом белком-носителем (например, с использованием N-[γ-малеимидобутирилокси]сукцинимидного сложного эфира (GMBS)) или с галогенацетилированным белком-носителем (например, с использованием иодацетамида, N-сукцинимидилбромацетата (SBA; SIB), N-сукцинимидил(4-иодацетил)аминобензоата (SlAB), сульфосукцинимидил(4-иодацетил)аминобензоата (сульфо-SIAB), N-сукцинимидилиодацетата (SIA), или сукцинимидил-3-[бромацетамидо] пропионата (SBAP)). Предпочтительно, цианатный сложный эфир (необязательно, полученный посредством химических реакций CDAP) соединяют с гександиамином или дигидразидом адипиновой кислоты (ADH), и амино-дериватизированный сахарид конъюгируют с белком-носителем (например, CRM₁₉₇) с использованием карбодиимидных (например, EDAC или EDC) химических реакций через карбоксильную группу на белке-носителе. Такие конъюгаты описаны, например, в WO 93/15760, WO 95/08348 и WO 96/129094.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения, гликоконъюгаты из S. pneumoniae серотипов 1, 2, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 8, 9V, 9N, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 15C, 17F, 18C, 19A, 19F, 20, 22F, 23F и/или 33F получают с использованием химических реакций CDAP. В одном варианте осуществления настоящего изобретения, гликоконъюгаты из S. pneumoniae серотипов 1, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19F и 23F получают с использованием химических реакций CDAP. В одном варианте осуществления настоящего изобретения, гликоконъюгаты из S. pneumoniae серотипов 1, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19F и 23F получают с использованием химических реакций CDAP. В одном варианте осуществления настоящего изобретения, гликоконъюгаты из S. pneumoniae серотипов 1, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F и 23F получают с использованием химических реакций CDAP. В одном варианте осуществления настоящего изобретения, гликоконъюгаты из S. pneumoniae серотипов 1, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F и 23F получают с использованием химических реакций CDAP. В одном варианте осуществления настоящего изобретения, гликоконъюгаты из S. pneumoniae серотипов 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F и 23F получают с использованием химических реакций CDAP.

В других подходящих способах конъюгации используют карбодиимиды, гидразиды, активные сложные эфиры, норборан, п-нитробензойную кислоту, N-гидроксисукцинимид, S-NHS, EDC, TSTU. Многие из них описаны в Публикации международной патентной заявки No. WO 98/42721. Конъюгация может включать карбонильный линкер, который может образовываться в результате реакции свободной гидроксильной группы сахарида с CDI (см. Bethell et al. (1979) 1. Biol. Chern. 254:2572-2574; Hearn et al. (1981) J. Chromatogr. 218:509-518) с последующей реакцией с белком с образованием карбаматной связи. Это может включать восстановление аномерного конца до первичной гидроксильной группы, необязательное введение защиты/снятие защиты первичной гидроксильной группы, реакцию первичной гидроксильной группы с CDI с образованием карбаматного промежуточного соединения CDI и соединение карбаматного промежуточного соединения CDI с аминогруппой на белке.

В предпочтительном варианте осуществления, по меньшей мере один из капсульных полисахаридов из серотипов 1, 2, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 8, 9V, 9N, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 15C, 17F, 18C, 19A, 19F, 20, 22F, 23F и 33F S. pneumoniae конъюгируют с белком-носителем посредством восстановительного аминирования (такого как описано в Публикациях патентных заявок США No. 2006/0228380, 2007/184072, 2007/0231340 и 2007/0184071, WO 2006/110381, WO 2008/079653 и WO 2008/143709).

В одном варианте осуществления настоящего изобретения, гликоконъюгат из S. pneumoniae серотипа 18C получают посредством восстановительного аминирования. В одном варианте осуществления настоящего изобретения, гликоконъюгат из S. pneumoniae серотипа 6A получают посредством восстановительного аминирования. В одном варианте осуществления настоящего изобретения, гликоконъюгат из S. pneumoniae серотипа 19A получают посредством восстановительного аминирования. В одном варианте осуществления настоящего изобретения, гликоконъюгат из S. pneumoniae серотипа 3 получают посредством восстановительного аминирования. В одном варианте осуществления настоящего изобретения, гликоконъюгаты из S. pneumoniae серотипов 6A и 19A получают посредством восстановительного аминирования. В одном варианте осуществления настоящего изобретения, гликоконъюгаты из S. pneumoniae серотипов 3, 6A и 19A получают посредством восстановительного аминирования.

В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения, гликоконъюгаты из S. pneumoniae серотипов 4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F и 23F получают посредством восстановительного аминирования. В одном варианте осуществления настоящего изобретения, гликоконъюгаты из S. pneumoniae серотипов 1, 4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F и 23F получают посредством восстановительного аминирования. В одном варианте осуществления настоящего изобретения, гликоконъюгаты из S. pneumoniae серотипов 1, 4, 5, 6B, 9V, 14, 18C, 19F и 23F получают посредством восстановительного аминирования. В одном варианте осуществления настоящего изобретения, гликоконъюгаты из S. pneumoniae серотипов 1, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19F и 23F получают посредством восстановительного аминирования. В одном варианте осуществления настоящего изобретения, гликоконъюгаты из S. pneumoniae серотипов 1, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19F и 23F получают посредством восстановительного аминирования. В одном варианте осуществления настоящего изобретения, гликоконъюгаты из S. pneumoniae серотипов 1, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F и 23F получают посредством восстановительного аминирования. В одном варианте осуществления настоящего изобретения, гликоконъюгаты из S. pneumoniae серотипов 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F и 23F все получают посредством восстановительного аминирования.

В другом предпочтительном варианте осуществления, гликоконъюгаты из S. pneumoniae серотипов 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F, 22F и 23F все получают посредством восстановительного аминирования.

В другом предпочтительном варианте осуществления, гликоконъюгаты из S. pneumoniae серотипов 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 15B, 18C, 19A, 19F, 22F и 23F все получают посредством восстановительного аминирования.

В другом предпочтительном варианте осуществления, гликоконъюгаты из S. pneumoniae серотипов 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 8, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 18C, 19A, 19F, 22F и 23F все получают посредством восстановительного аминирования.

В другом предпочтительном варианте осуществления, гликоконъюгаты из S. pneumoniae серотипов 1, 2, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F и 23F все получают посредством восстановительного аминирования.

В другом предпочтительном варианте осуществления, гликоконъюгаты из S. pneumoniae серотипов 1, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 12F, 14, 15C, 18C, 19A, 19F, 22F, 23F и 33F все получают посредством восстановительного аминирования.

В другом предпочтительном варианте осуществления, гликоконъюгаты из S. pneumoniae серотипов 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 8, 9V, 10A, 11A, 14, 15B, 18C, 19A, 19F, 22F и 23F все получают посредством восстановительного аминирования.

В другом предпочтительном варианте осуществления, гликоконъюгаты из S. pneumoniae серотипов 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 8, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 18C, 19A, 19F, 22F и 23F все получают посредством восстановительного аминирования.

В другом предпочтительном варианте осуществления, гликоконъюгаты из S. pneumoniae серотипов 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 8, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 18C, 19A, 19F, 22F, 23F и 33F все получают посредством восстановительного аминирования.

В другом предпочтительном варианте осуществления, гликоконъюгаты из S. pneumoniae серотипов 1, 2, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 8, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 15C, 17F, 18C, 19A, 19F, 20, 22F, 23F и 33F все получают посредством восстановительного аминирования.

В другом предпочтительном варианте осуществления, гликоконъюгаты из S. pneumoniae серотипов 1, 2, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 8, 9V, 9N, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 15C, 17F, 18C, 19A, 19F, 20, 22F, 23F и 33F все получают посредством восстановительного аминирования.

Восстановительное аминирование включает две стадии, (1) окисление полисахарида, (2) восстановление активированного полисахарида и белка-носителя с образованием конъюгата. Перед окислением, полисахарид, необязательно, гидролизуют. Можно использовать механический или химический гидролиз. Химический гидролиз можно проводить с использованием уксусной кислоты.

Стадия окисления может включать реакцию с периодатом. Для целей по настоящему изобретению, термин «периодат» включает как периодат, так и периодную кислоту; термин также включает как метапериодат (IO₄^-), так и ортопериодат (IO₆^5-), и включает различные соли периодата (например, периодат натрия и периодат калия). В одном варианте осуществления, капсульный полисахарид окисляют в присутствии метапериодата, предпочтительно, в присутствии периодата натрия (NaIO₄). В другом варианте осуществления, капсульный полисахарид окисляют в присутствии ортопериодата, предпочтительно, в присутствии периодной кислоты.

В одном варианте осуществления, окисляющее средство представляет собой стабильное нитроксил- или нитроксид-радикальное соединение, такое как пиперидин-N-окси- или пирролидин-N-окси-соединения, в присутствии окислителя для избирательного окисления первичных гидроксилов (как описано в WO 2014/097099). В указанной реакции, фактическим окислителем в каталитическом цикле является N-оксоаммониевая соль. В одном аспекте указанные стабильные нитроксил- или нитроксид-радикальные соединения представляют собой пиперидин-N-окси- или пирролидин-N-окси-соединения. В одном аспекте указанное стабильное нитроксил- или нитроксид-радикальное соединение имеет группу TEMPO (2,2,6,6-тетраметил-1-пиперидинилокси) или a PROXYL (2,2,5,5-тетраметил-1-пирролидинилокси). В одном аспекте указанное стабильное нитроксил-радикальное соединение представляет собой TEMPO или его производное. В одном аспекте указанный окислитель представляет собой молекулу, несущую N- галогеновую группу. В одном аспекте указанный окислитель выбран из группы, состоящей из N-хлорсукцинимида, N-бромсукцинимида, N-иодсукцинимида, дихлоризоциануровой кислоты, 1,3,5-трихлор-1,3,5-триазинан-2,4,6-триона, дибромизоциануровой кислоты, 1,3,5-трибром-1,3,5-триазинан-2,4,6-триона, дииодизоциануровой кислоты, 1,3,5-трииод-1,3,5-триазинан-2,4,6-триона. Предпочтительно, указанный окислитель представляет собой N-хлорсукцинимид.

В предпочтительном варианте осуществления, капсульные полисахариды из серотипов 12F S. pneumoniae конъюгируют с белком-носителем посредством восстановительного аминирования, где окисляющее средство представляет собой свободный радикал 2,2,6,6-тетраметил-1-пиперидинилокси (TEMPO) и N-хлорсукцинимид (NCS) в качестве coокислителя (как описано в WO 2014/097099). Таким образом, в одном аспекте гликоконъюгаты из S. pneumoniae серотипа 12F можно получать способом, включающим стадии: a) реакции сахарида 12F с 2,2,6,6-тетраметил-1-пиперидинилокси (TEMPO) и N-хлорсукцинимидом (NCS) в водном растворителе для получения активированного сахарида; и b) реакции активированного сахарида с белком-носителем, содержащим одну или несколько аминогрупп (указанный способ обозначен далее в настоящем описании как «TEMPO/NCS-восстановительное аминирование»).

Необязательно, реакцию окисления гасят посредством добавления гасящего средства. Гасящее средство можно выбирать из вицинальных диолов, 1,2-аминоспиртов, аминокислот, глутатиона, сульфита, бисульфата, дитионита, метабисульфита, тиосульфата, фосфитов, гипофосфитов или фосфористой кислоты (например, глицерина, этиленгликоля, пропан-1,2-диола, бутан-1,2-диола или бутан-2,3-диола, аскорбиновой кислоты).

После стадии окисления полисахарида, полисахарид называют активированным и обозначают как «активированный полисахарид» ниже в настоящем описании. Активированный полисахарид и белок-носитель можно лиофилизировать (сушить сублимацией), либо независимо (дискретная лиофилизация), либо совместно (совместная лиофилизация). В одном варианте осуществления, активированный полисахарид и белок-носитель лиофилизируют совместно. В другом варианте осуществления, активированный полисахарид и белок-носитель лиофилизируют независимо.

В одном варианте осуществления, лиофилизацию проводят в присутствии невосстанавливающего сахара, возможные невосстанавливающие сахара включают сахарозу, трегалозу, рафинозу, стахиозу, мелизитозу, декстран, маннит, лактит и палатинит.

Второй стадией способа конъюгации является восстановление активированного полисахарида и белка-носителя с образованием конъюгата (так называемое восстановительное аминирование), с использованием восстанавливающего средства. Подходящие восстанавливающие средства включают цианоборгидриды (такие как цианоборгидрид натрия, триацетоксиборгидрид натрия, или боргидрид натрия или цинка в присутствии кислот Бренстеда или Льюиса), аминобораны, такие как пиридинборан, 2-пиколинборан, 2,6-диборанметанол, диметиламинборан, t-BuMeⁱPrN-BH₃, бензиламин-BH₃ или 5-этил-2-метилпиридинборан (PEMB) или смолу для обмена боргидрида. В одном варианте осуществления, восстанавливающее средство представляет собой цианоборгидрид натрия.

В одном варианте осуществления, реакцию восстановления проводят в водном растворителе (например, выбранном из PBS, MES, HEPES, Bis-tris, ADA, PIPES, MOPSO, BES, MOPS, DIPSO, MOBS, HEPPSO, POPSO, TEA, EPPS, бицина или HEPB, при pH между 6,0 и 8,5, 7,0 и 8,0, или 7,0 и 7,5), в другом варианте осуществления, реакцию проводят в апротонном растворителе. В одном варианте осуществления, реакцию восстановления проводят в растворителе DMSO (диметилсульфоксиде) или в DMF (диметилформамиде). Растворитель DMSO или DMF можно использовать для разведения активированного полисахарида и белка-носителя, которые были лиофилизированы.

По окончании реакции восстановления, в конъюгатах могут оставаться не вступившие в реакцию альдегидные группы, их можно кэпировать с использованием подходящего кэпирующего средства. В одном варианте осуществления, это кэпирующее средство представляет собой боргидрид натрия (NaBH₄). После конъюгации (реакции восстановления и, необязательно, кэпирования), гликоконъюгаты можно очищать (обогащать по отношению к количеству конъюгата полисахарид-белок) множеством способов, известных специалисту в данной области. Эти способы включают диализ, способы концентрирования/диафильтрации, проточную фильтрацию вдоль потока, преципитацию/элюцию, хроматографию на колонке (DEAE или хроматографию гидрофобного взаимодействия), и глубинную фильтрацию. В одном варианте осуществления, гликоконъюгаты очищают посредством диафильтрации или ионообменной хроматографии, или эксклюзионной хроматографии.

В одном варианте осуществления, гликоконъюгаты стерилизуют филдьтрацией.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения, гликоконъюгаты из S. pneumoniae серотипов 1, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19F и 23F получают с использованием химических реакций CDAP, и гликоконъюгат из S. pneumoniae серотипа 6A получают посредством восстановительного аминирования.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения, гликоконъюгаты из S. pneumoniae серотипов 1, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19F и 23F получают с использованием химических реакций CDAP, и гликоконъюгат из S. pneumoniae серотипа 19A получают посредством восстановительного аминирования.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения, гликоконъюгаты из S. pneumoniae серотипов 1, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19F и 23F получают с использованием химических реакций CDAP, и гликоконъюгаты из S. pneumoniae серотипов 6A и 19A получают посредством восстановительного аминирования.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения, гликоконъюгаты из S. pneumoniae серотипов 1, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19F и 23F получают с использованием химических реакций CDAP, и гликоконъюгаты из S. pneumoniae серотипов 3, 6A и 19A получают посредством восстановительного аминирования.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения, гликоконъюгаты из S. pneumoniae серотипов 1, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19F, 22F и 23F получают с использованием химических реакций CDAP, и гликоконъюгат из S. pneumoniae серотипа 6A получают посредством восстановительного аминирования.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения, гликоконъюгаты из S. pneumoniae серотипов 1, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19F, 22F и 23F получают с использованием химических реакций CDAP, и гликоконъюгат из S. pneumoniae серотипа 19A получают посредством восстановительного аминирования.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения, гликоконъюгаты из S. pneumoniae серотипов 1, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19F, 22F и 23F получают с использованием химических реакций CDAP, и гликоконъюгаты из S. pneumoniae серотипов 6A и 19A получают посредством восстановительного аминирования.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения, гликоконъюгаты из S. pneumoniae серотипов 1, 4, 5, 6B, 7F, 8, 9V, 14, 18C, 19F, 22F и 23F получают с использованием химических реакций CDAP, и гликоконъюгаты из S. pneumoniae серотипов 3, 6A и 19A получают посредством восстановительного аминирования.

В одном варианте осуществления, гликоконъюгаты по изобретению получают с использованием конъюгации eTEC, такой как описано в WO 2014/027302. Такие гликоконъюгаты содержат сахарид, ковалентно конъюгированный с белком-носителем посредством одного или нескольких спейсеров eTEC, где сахарид является ковалентно конъюгированным со спейсером eTEC посредством карбаматной связи, и где белок-носитель является ковалентно конъюгированным со спейсером eTEC посредством амидной связи. Связанные с eTEC гликоконъюгаты по изобретению могут быть представлены общей формулой (I):

(I),

где атомы, содержащие спейсер eTEC, содержатся в центральной рамке.

Спейсер eTEC включает семь линейных атомов (т.е., -C(O)NH(CH₂)₂SCH₂C(O)- ) и обеспечивает стабильные тиоэфирные и амидные связи между сахаридом и белком-носителем. Синтез связанного с eTEC гликоконъюгата включает реакцию активированной гидроксильной группы сахарида с аминогруппой тиоалкиламинного реагента, например, цистамина или цистеинамина, или их соли, образуя карбаматную связь с сахаридом с получением тиолированного сахарида. Образование одной или нескольких свободных сульфгидрильных групп осуществляется в результате реакции с восстанавливающим средством с получением активированного тиолированного сахарида. Реакция свободных сульфгидрильных групп активированного тиолированного сахарида с активированным белком-носителем, имеющим одну или несколько α- галогенацетамидных групп на амине, содержащем остатки, формирует тиоэфирную связь с образованием конъюгата, где белок-носитель присоединен к спейсеру eTEC посредством амидной связи.

В указанных гликоконъюгатах по изобретению, сахарид может представлять собой полисахарид или олигосахарид. Белок-носитель можно выбирать из любого пригодного носителя, как описано в настоящем описании или известно специалисту в данной области. В частых вариантах осуществления, сахарид представляет собой полисахарид. В некоторых таких вариантах осуществления, белок-носитель представляет собой CRM₁₉₇. В некоторых таких вариантах осуществления, связанный с eTEC гликоконъюгат содержит капсульный полисахарид S. pneumoniae серотипа 33F.

В особенно предпочтительных вариантах осуществления, связанный с eTEC гликоконъюгат содержит пневмококковый капсульный полисахарид серотипа 33F (Pn33F), который является ковалентно конъюгированным с CRM₁₉₇ посредством спейсера eTEC (связанные с eTEC гликоконъюгаты серотипа 33F).

В некоторых вариантах осуществления, гликоконъюгат из S. pneumoniae серотипов 1, 7F, 9V и/или 18C по изобретению является O-ацетилированным. В некоторых вариантах осуществления, гликоконъюгат из S. pneumoniae серотипов 1, 7F и 9V является O-ацетилированным, и гликоконъюгат из S. pneumoniae серотипа 18C является де-O-ацетилированным.

В некоторых вариантах осуществления, гликоконъюгат из S. pneumoniae серотипа 1 содержит сахарид, имеющий степень O-ацетилирования между 10 и 100%, между 20 и 100%, между 30 и 100%, между 40 и 100%, между 50 и 100%, между 60 и 100%, между 70 и 100%, между 75 и 100%, 80 и 100%, 90 и 100%, 50 и 90%, 60 и 90%, 70 и 90% или 80 и 90%. В других вариантах осуществления, степень O-ацетилирования составляет ≥ 10%, ≥ 20%, ≥ 30%, ≥ 40%, ≥ 50%, ≥ 60%, ≥ 70%, ≥ 80%, ≥ 90%, или приблизительно 100%.

В некоторых вариантах осуществления, гликоконъюгат из S. pneumoniae серотипа 7F содержит сахарид, имеющий степень O-ацетилирования между 10 и 100%, между 20 и 100%, между 30 и 100%, между 40 и 100%, между 50 и 100%, между 60 и 100%, между 70 и 100%, между 75 и 100%, 80 и 100%, 90 и 100%, 50 и 90%, 60 и 90%, 70 и 90% или 80 и 90%. В других вариантах осуществления, степень O-ацетилирования составляет ≥ 10%, ≥ 20%, ≥ 30%, ≥ 40%, ≥ 50%, ≥ 60%, ≥ 70%, ≥ 80%, ≥ 90% или приблизительно 100%.

В некоторых вариантах осуществления, гликоконъюгат из S. pneumoniae серотипа 9V содержит сахарид, имеющий степень O-ацетилирования между 10 и 100%, между 20 и 100%, между 30 и 100%, между 40 и 100%, между 50 и 100%, между 60 и 100%, между 70 и 100%, между 75 и 100%, 80 и 100%, 90 и 100%, 50 и 90%, 60 и 90%, 70 и 90% или 80 и 90%. В других вариантах осуществления, степень O-ацетилирования составляет ≥ 10%, ≥ 20%, ≥ 30%, ≥ 40%, ≥ 50%, ≥ 60%, ≥ 70%, ≥ 80%, ≥ 90% или приблизительно 100%.

В некоторых вариантах осуществления, гликоконъюгат из S. pneumoniae серотипа 18C содержит сахарид, имеющий степень O-ацетилирования между 10 и 100%, между 20 и 100%, между 30 и 100%, между 40 и 100%, между 50 и 100%, между 60 и 100%, между 70 и 100%, между 75 и 100%, 80 и 100%, 90 и 100%, 50 и 90%, 60 и 90%, 70 и 90% или 80 и 90%. В других вариантах осуществления, степень O-ацетилирования составляет ≥ 10%, ≥ 20%, ≥ 30%, ≥ 40%, ≥ 50%, ≥ 60%, ≥ 70%, ≥ 80%, ≥ 90% или приблизительно 100%. Предпочтительно, однако, гликоконъюгат из S. pneumoniae серотипа 18C является де-O-ацетилированным. В некоторых указанных вариантах осуществления, гликоконъюгат из S. pneumoniae серотипа 18C содержит сахарид, имеющий степень O-ацетилирования между 0 и 50%, между 0 и 40%, между 0 и 30%, между 0 и 20%, между 0 и 10%, между 0 и 5%, или между 0 и 2%. В других вариантах осуществления, степень O-ацетилирования составляет ≤ 50%, ≤ 40%, ≤ 30%, ≤ 20%, ≤ 10%, ≤ 5%, ≤ 2% или ≤ 1%.

Под % O-ацетилирования понимают процент данного сахарида относительно 100% (где каждое повторяющееся звено является полностью ацетилированным, применительно к его ацетилированной структуре).

В некоторых вариантах осуществления, гликоконъюгаты по настоящему изобретению содержат сахарид, имеющий молекулярную массу между 5 кДа и 2000 кДа. В других таких вариантах осуществления, сахарид имеет молекулярную массу между 50 кДа и 1000 кДа. В других таких вариантах осуществления, сахарид имеет молекулярную массу между 70 кДа и 900 кДа. В других таких вариантах осуществления, сахарид имеет молекулярную массу между 100 кДа и 800 кДа. В других таких вариантах осуществления, сахарид имеет молекулярную массу между 200 кДа и 600 кДа. В дополнительных таких вариантах осуществления, сахарид имеет молекулярную массу между 100 кДа и 1000 кДа; 100 кДа и 900 кДа; 100 кДа и 800 кДа; 100 кДа и 700 кДа; 100 кДа и 600 кДа; 100 кДа и 500 кДа; 100 кДа и 400 кДа; 100 кДа и 300 кДа; 150 кДа и 1000 кДа; 150 кДа и 900 кДа; 150 кДа и 800 кДа; 150 кДа и 700 кДа; 150 кДа и 600 кДа; 150 кДа и 500 кДа; 150 кДа и 400 кДа; 150 кДа и 300 кДа; 200 кДа и 1000 кДа; 200 кДа и 900 кДа; 200 кДа и 800 кДа; 200 кДа и 700 кДа; 200 кДа и 600 кДа; 200 кДа и 500 кДа; 200 кДа и 400 кДа; 200 кДа и 300; 250 кДа и 1000 кДа; 250 кДа и 900 кДа; 250 кДа и 800 кДа; 250 кДа и 700 кДа; 250 кДа и 600 кДа; 250 кДа и 500 кДа; 250 кДа и 400 кДа; 250 кДа и 350 кДа; 300 кДа и 1000 кДа; 300 кДа и 900 кДа; 300 кДа и 800 кДа; 300 кДа и 700 кДа; 300 кДа и 600 кДа; 300 кДа и 500 кДа; 300 кДа и 400 кДа; 400 кДа и 1000 кДа; 400 кДа и 900 кДа; 400 кДа и 800 кДа; 400 кДа и 700 кДа; 400 кДа и 600 кДа; 500 кДа и 600 кДа. В следующих вариантах осуществления, сахарид имеет молекулярную массу между 5 кДа и 100 кДа; 7 кДа и 100 кДа; 10 кДа и 100 кДа; 20 кДа и 100 кДа; 30 кДа и 100 кДа; 40 кДа и 100 кДа; 50 кДа и 100 кДа; 60 кДа и 100 кДа; 70 кДа и 100 кДа; 80 кДа и 100 кДа; 90 кДа и 100 кДа; 5 кДа и 90 KDa; 5 кДа и 80 кДа; 5 кДа и 70 кДа; 5 кДа и 60 кДа; 5 кДа и 50 кДа; 5 кДа и 40 кДа; 5 кДа и 30 кДа; 5 кДа и 20 кДа или 5 кДа и 10 кДа. Любое целое число внутри любого из вышеуказанных диапазонов предусматривают в качестве варианта осуществления описания. В некоторых таких вариантах осуществления, гликоконъюгат получают с использованием восстановительного аминирования.

В некоторых вариантах осуществления, гликоконъюгат по изобретению имеет молекулярную массу между 100 кДа и 15000 кДа; между 500 кДа и 10000 кДа; между 2000 кДа и 10000 кДа; между 3000 кДа и 8000 кДа кДа; или между 3000 кДа и 5000 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат имеет молекулярную массу между 500 кДа и 10000 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат имеет молекулярную массу между 1000 кДа и 8000 кДа. В других вариантах осуществления, гликоконъюгат имеет молекулярную массу между 2000 кДа и 8000 кДа или между 3000 кДа и 7000 кДа. В следующих вариантах осуществления, гликоконъюгат по изобретению имеет молекулярную массу между 200 кДа и 20000 кДа; между 200 кДа и 15000 кДа; между 200 кДа и 10000 кДа; между 200 кДа и 7500 кДа; между 200 кДа и 5000 кДа; между 200 кДа и 3000 кДа; между 200 кДа и 1000 кДа; между 500 кДа и 20000 кДа; между 500 кДа и 15000 кДа; между 500 кДа и 12500 кДа; между 500 кДа и 10000 кДа; между 500 кДа и 7500 кДа; между 500 кДа и 6000 кДа; между 500 кДа и 5000 кДа; между 500 кДа и 4000 кДа; между 500 кДа и 3000 кДа; между 500 кДа и 2000 кДа; между 500 кДа и 1500 кДа; между 500 кДа и 1000 кДа; между 750 кДа и 20000 кДа; между 750 кДа и 15000 кДа; между 750кДа и 12500 кДа; между 750кДа и 10000 кДа; между 750кДа и 7500 кДа; между 750 кДа и 6000 кДа; между 750 кДа и 5000 кДа; между 750 кДа и 4000 кДа; между 750 кДа и 3000 кДа; между 750 кДа и 2000 кДа; между 750 кДа и 1500 кДа; между 1000 кДа и 15000 кДа; между 1000 кДа и 12500 кДа; между 1000 кДа и 10000 кДа; между 1000 кДа и 7500 кДа; между 1000 кДа и 6000 кДа; между 1000 кДа и 5000 кДа; между 1000 кДа и 4000 кДа; между 1000 кДа и 2500 кДа; между 2000 кДа и 15000 кДа; между 2000 кДа и 12500 кДа; между 2000 кДа и 10000 кДа; между 2000 кДа и 7500 кДа; между 2000 кДа и 6000 кДа; между 2000 кДа и 5000 кДа; между 2000 кДа и 4000 кДа; или между 2000 кДа и 3000 кДа.

В следующих вариантах осуществления, гликоконъюгат по изобретению имеет молекулярную массу между 3000 кДа и 20000 кДа; между 3000 кДа и 15000 кДа; между 3000 кДа и 10000 кДа; между 3000 кДа и 7500 кДа; между 3000 кДа и 5000 кДа; между 4000 кДа и 20000 кДа; между 4000 кДа и 15000 кДа; между 4000 кДа и 12500 кДа; между 4000 кДа и 10000 кДа; между 4000 кДа и 7500 кДа; между 4000 кДа и 6000 кДа; или между 4000 кДа и 5000 кДа.

В следующих вариантах осуществления, гликоконъюгат по изобретению имеет молекулярную массу между 5000 кДа и 20000 кДа; между 5000 кДа и 15000 кДа; между 5000 кДа и 10000 кДа; между 5000 кДа и 7500 кДа; между 6000 кДа и 20000 кДа; между 6000 кДа и 15000 кДа; между 6000 кДа и 12500 кДа; между 6000 кДа и 10000 кДа или между 6000 кДа и 7500 кДа.

В следующих вариантах осуществления, гликоконъюгат по изобретению имеет молекулярную массу между 100 кДа и 250 кДа; между 100 кДа и 500 кДа; между 100 кДа и 750 кДа; между 100 кДа и 1000 кДа; между 100 кДа и 1500 кДа; между 100 кДа и 2000 кДа; между 100 кДа и 2500 кДа; между 100 кДа и 3000 кДа; между 250 кДа и 500 кДа; между 250 кДа и 1000 кДа; между 250 кДа и 1500 кДа; между 250 кДа и 2000 кДа или между 250 кДа и 2500 кДа.

Молекулярную массу гликоконъюгата измеряют посредством SEC-MALLS. Любое целое число внутри любого из вышеуказанных диапазонов предусматривают в качестве варианта осуществления описания.

В предпочтительном варианте осуществления, гликоконъюгат серотипа 22F по изобретению содержит по меньшей мере 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6 или 0,7 или приблизительно 0,8 мМ ацетата на мМ полисахарида серотипа 22F. В предпочтительном варианте осуществления, гликоконъюгат содержит по меньшей мере 0,5, 0,6 или 0,7 мМ ацетата на мМ полисахарида серотипа 22F. В предпочтительном варианте осуществления, гликоконъюгат содержит по меньшей мере 0,6 мМ ацетата на мМ полисахарида серотипа 22F. В предпочтительном варианте осуществления, гликоконъюгат содержит по меньшей мере 0,7 мМ ацетата на мМ полисахарида серотипа 22F.

В предпочтительном варианте осуществления, гликоконъюгат серотипа 33F по изобретению содержит по меньшей мере 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7 или 0,8 мМ ацетата на мМ капсульного полисахарида серотипа 33F. В предпочтительном варианте осуществления, гликоконъюгат содержит по меньшей мере 0,5, 0,6 или 0,7 мМ ацетата на мМ капсульного полисахарида серотипа 33F. В предпочтительном варианте осуществления, гликоконъюгат содержит по меньшей мере 0,6 мМ ацетата на мМ капсульного полисахарида серотипа 33F. В предпочтительном варианте осуществления, гликоконъюгат содержит по меньшей мере 0,7 мМ ацетата на мМ капсульного полисахарида серотипа 33F. В предпочтительном варианте осуществления, присутствие O-ацетильных групп определяют анализом ионной HPLC.

В предпочтительном варианте осуществления, гликоконъюгат серотипа 15B по изобретению содержит по меньшей мере 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7 или 0,8 мМ ацетата на мМ капсульного полисахарида серотипа 15B. В предпочтительном варианте осуществления, гликоконъюгат содержит по меньшей мере 0,5, 0,6 или 0,7 мМ ацетата на мМ капсульного полисахарида серотипа 15B. В предпочтительном варианте осуществления, гликоконъюгат содержит по меньшей мере 0,6 мМ ацетата на мМ капсульного полисахарида серотипа 15B. В предпочтительном варианте осуществления, гликоконъюгат содержит по меньшей мере 0,7 мМ ацетата на мМ капсульного полисахарида серотипа 15B. В предпочтительном варианте осуществления, присутствие O-ацетильных групп определяют анализом ионной HPLC.

В предпочтительном варианте осуществления, гликоконъюгат серотипа 15B по изобретению содержит по меньшей мере 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7 или 0,8 мМ глицерина на мМ капсульного полисахарида серотипа 15B. В предпочтительном варианте осуществления, гликоконъюгат серотипа 15B по изобретению содержит по меньшей мере 0,5, 0,6 или 0,7 мМ глицерина на мМ капсульного полисахарида серотипа 15B. В предпочтительном варианте осуществления, гликоконъюгат серотипа 15B по изобретению содержит по меньшей мере 0,6 мМ глицерина на мМ капсульного полисахарида серотипа 15B. В предпочтительном варианте осуществления, гликоконъюгат серотипа 15B по изобретению содержит по меньшей мере 0,7 мМ глицерина на мМ капсульного полисахарида серотипа 15B.

В предпочтительном варианте осуществления, гликоконъюгат серотипа 11A по изобретению содержит по меньшей мере 0,3, 0,5, 0,6, 1,0, 1,4, 1,8, 2,2, 2,6, 3,0, 3,4, 3,8, 4,2, 4,6 или приблизительно 5,0 мМ ацетата на мМ полисахарида серотипа 11A. В предпочтительном варианте осуществления, гликоконъюгат серотипа 11A содержит по меньшей мере 1,8, 2,2 или 2,6 мМ ацетата на мМ полисахарида серотипа 11A. В одном варианте осуществления, гликоконъюгат содержит по меньшей мере 0,6 мМ ацетата на мМ полисахарида серотипа 11A. В предпочтительном варианте осуществления, гликоконъюгат серотипа 11A по изобретению содержит по меньшей мере 0,6, 1,0, 1,4, 1,8, 2,2, 2,6, 3,0, 3,4, 3,8, 4,2 или приблизительно 4,6 мМ ацетата на мМ полисахарида серотипа 11A и менее, чем приблизительно 5,0 мМ ацетата на мМ полисахарида серотипа 11A. В одном варианте осуществления, гликоконъюгат серотипа 11A по изобретению содержит по меньшей мере 0,6, 1,0, 1,4, 1,8, 2,2, 2,6 или приблизительно 3,0 мМ ацетата на мМ полисахарида серотипа 11A и менее, чем приблизительно 3,4 мМ ацетата на мМ полисахарида серотипа 11A. В одном варианте осуществления, гликоконъюгат серотипа 11A по изобретению содержит по меньшей мере 0,6, 1,0, 1,4, 1,8, 2,2, 2,6 или приблизительно 3,0 мМ ацетата на мМ полисахарида серотипа 11A и менее, чем приблизительно 3,3 мМ ацетата на мМ полисахарида серотипа 11A. Любое из вышеуказанных чисел предусматривают в качестве варианта осуществления описания.

В предпочтительном варианте осуществления, гликоконъюгат серотипа 11A по изобретению содержит по меньшей мере 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9 или приблизительно 1,0 мМ глицерина на мМ полисахарида серотипа 11A. В предпочтительном варианте осуществления, гликоконъюгат серотипа 11A содержит по меньшей мере 0,2, 0,3 или 0,4 мМ глицерина на мМ полисахарида серотипа 11A. В предпочтительном варианте осуществления, гликоконъюгат серотипа 11A по изобретению содержит по меньшей мере 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8 или приблизительно 0,9 мМ глицерина на мМ полисахарида серотипа 11A и менее, чем приблизительно 1,0 мМ глицерина на мМ полисахарида серотипа 11A. В предпочтительном варианте осуществления, гликоконъюгат серотипа 11A по изобретению содержит по меньшей мере 0,3, 0,4, 0,5, 0,6 или приблизительно 0,7 мМ глицерина на мМ полисахарида серотипа 11A и менее, чем приблизительно 0,8 мМ глицерина на мМ полисахарида серотипа 11A. Любое из вышеуказанных чисел предусматривают в качестве варианта осуществления описания.

Другой способ характеризации гликоконъюгатов по изобретению осуществляют посредством количества остатков лизина в белке-носителе (например, CRM₁₉₇), которые становятся конъюгированными с сахаридом, которое может быть охарактеризовано как диапазон конъюгированных остатков лизина (степень конъюгации). Доказательство лизиновой модификации белка-носителя, за счет ковалентных связей с полисахаридами, можно получать посредством анализа аминокислот с использованием общепринятых способов, известных специалисту в данной области. Конъюгация в результате приводит к уменьшению количества восстановленных остатков лизина, по сравнению с исходным материалом белка-носителя, использованным для образования материалов конъюгата. В предпочтительном варианте осуществления, степень конъюгации гликоконъюгата по изобретению составляет между 2 и 15, между 2 и 13, между 2 и 10, между 2 и 8, между 2 и 6, между 2 и 5, между 2 и 4, между 3 и 15, между 3 и 13, между 3 и 10, между 3 и 8, между 3 и 6, между 3 и 5, между 3 и 4, между 5 и 15, между 5 и 10, между 8 и 15, между 8 и 12, между 10 и 15 или между 10 и 12. В одном варианте осуществления, степень конъюгации гликоконъюгата по изобретению составляет приблизительно 2, приблизительно 3, приблизительно 4, приблизительно 5, приблизительно 6, приблизительно 7, приблизительно 8, приблизительно 9, приблизительно 10, приблизительно 11, приблизительно 12, приблизительно 13, приблизительно 14 или приблизительно 15. В предпочтительном варианте осуществления, степень конъюгации гликоконъюгата по изобретению составляет между 4 и 7. В некоторых таких вариантах осуществления, белок-носитель представляет собой CRM₁₉₇.

Гликоконъюгаты по изобретению можно также характеризовать по соотношению (масс./масс.) сахарида к белку-носителю. В некоторых вариантах осуществления, соотношение полисахарида к белку-носителю в гликоконъюгате (масс./масс.) составляет между 0,5 и 3 (например, приблизительно 0,5, приблизительно 0,6, приблизительно 0,7, приблизительно 0,8, приблизительно 0,9, приблизительно 1,0, приблизительно 1,1, приблизительно 1,2, приблизительно 1,3, приблизительно 1,4, приблизительно 1,5, приблизительно 1,6, приблизительно 1,7, приблизительно 1,8, приблизительно 1,9, приблизительно 2,0, приблизительно 2,1, приблизительно 2,2, приблизительно 2,3, приблизительно 2,4, приблизительно 2,5, приблизительно 2,6, приблизительно 2,7, приблизительно 2,8, приблизительно 2,9, или приблизительно 3,0). В других вариантах осуществления, соотношение сахарида к белку-носителю (масс./масс.) составляет между 0,5 и 2,0, между 0,5 и 1,5, между 0,8 и 1,2, между 0,5 и 1,0, между 1,0 и 1,5 или между 1,0 и 2,0. В следующих вариантах осуществления, соотношение сахарида к белку-носителю (масс./масс.) составляет между 0,8 и 1,2. В предпочтительном варианте осуществления, соотношение капсульного полисахарида к белку-носителю в конъюгате составляет между 0,9 и 1,1. В некоторых таких вариантах осуществления, белок-носитель представляет собой CRM₁₉₇.

Гликоконъюгаты и иммуногенные композиции по изобретению могут содержать свободный сахарид, который не является ковалентно конъюгированным с белком-носителем, но, тем не менее, присутствует в композиции гликоконъюгате. Свободный сахарид может являться нековалентно ассоциированным с гликоконъюгатом (т.е., нековалентно связанным с ним, адсорбированным на нем, или заключенным в него или вместе с ним).

В предпочтительном варианте осуществления, гликоконъюгат содержит менее, чем приблизительно 50%, 45%, 40%, 35%, 30%, 25%, 20% или 15% свободного полисахарида по сравнению с общим количеством полисахарида. В предпочтительном варианте осуществления, гликоконъюгат содержит менее, чем приблизительно 25% свободного полисахарида, по сравнению с общим количеством полисахарида. В предпочтительном варианте осуществления, гликоконъюгат содержит менее, чем приблизительно 20% свободного полисахарида, по сравнению с общим количеством полисахарида. В предпочтительном варианте осуществления, гликоконъюгат содержит менее, чем приблизительно 15% свободного полисахарида, по сравнению с общим количеством полисахарида.

Гликоконъюгаты можно также характеризовать по распределению их молекулярного размера (K_d). Среды для эксклюзионной хроматографии (CL-4B) можно использовать для определения относительного распределения молекулярного размера конъюгата. Эксклюзионную хроматографию (SEC) используют в колонках с подачей самотеком для получения профиля распределения молекулярного размера конъюгатов. Большие молекулы, исключенные из пор в средах, элюируют более быстро, чем малые молекулы. Коллекторы фракций используют для сбора элюата колонки. Фракции тестируют колориметрически с использованием анализа сахаридов. Для определения K_d колонки калибруют, чтобы установить фракцию, в которой молекулы полностью исключены (V₀), (K_d=0), и фракцию, представляющую максимальное удержание (V_i), (K_d=1). Фракция, в которой достигнута указанная характеристика образца (V_e), связана с K_d выражением K_d=(V_e - V₀)/ (V_i - V₀).

В предпочтительном варианте осуществления, по меньшей мере 30% гликоконъюгата имеет K_d, меньшую или равную 0,3, на колонке CL-4B. В предпочтительном варианте осуществления, по меньшей мере 40% гликоконъюгата имеет K_d, меньшую или равную 0,3, на колонке CL-4B. В предпочтительном варианте осуществления, по меньшей мере 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, или 85% гликоконъюгата имеет K_d, меньшую или равную 0,3, на колонке CL-4B. В предпочтительном варианте осуществления, по меньшей мере 60% гликоконъюгата имеет K_d, меньшую или равную 0,3, на колонке CL-4B. В предпочтительном варианте осуществления, между 50% и 80% гликоконъюгата имеет K_d, меньшую или равную 0,3, на колонке CL-4B. В предпочтительном варианте осуществления, между 65% и 80% гликоконъюгата имеет K_d, меньшую или равную 0,3, на колонке CL-4B.

Частота присоединения цепи сахарида к лизину на белке-носителе является другим параметром для характеризации гликоконъюгатов по изобретению. Например, в некоторых вариантах осуществления, по меньшей мере одна ковалентная связь между белком-носителем и полисахаридом возникает для каждых 4 повторяющихся сахаридных звеньев полисахарида. В другом варианте осуществления, ковалентная связь между белком-носителем и полисахаридом возникает по меньшей мере один раз для каждых 10 повторяющихся сахаридных звеньев полисахарида. В другом варианте осуществления, ковалентная связь между белком-носителем и полисахаридом возникает по меньшей мере один раз для каждых 15 повторяющихся сахаридных звеньев полисахарида. В следующем варианте осуществления, ковалентная связь между белком-носителем и полисахаридом возникает по меньшей мере один раз для каждых 25 повторяющихся сахаридных звеньев полисахарида.

В частых вариантах осуществления, белок-носитель представляет собой CRM₁₉₇, и ковалентная связь посредством спейсера eTEC между CRM₁₉₇ и полисахаридом возникает по меньшей мере один раз для каждых 4, 10, 15 или 25 повторяющихся сахаридных звеньев полисахарида.

В других вариантах осуществления, конъюгат содержит по меньшей мере одну ковалентную связь между белком-носителем и сахаридом для каждых 5-10 повторяющихся сахаридных звеньев; каждых 2-7 повторяющихся сахаридных звеньев; каждых 3-8 повторяющихся сахаридных звеньев; каждых 4-9 повторяющихся сахаридных звеньев; каждых 6-11 повторяющихся сахаридных звеньев; каждых 7-12 повторяющихся сахаридных звеньев; каждых 8-13 повторяющихся сахаридных звеньев; каждых 9-14 повторяющихся сахаридных звеньев; каждых 10-15 повторяющихся сахаридных звеньев; каждых 2-6 повторяющихся сахаридных звеньев, каждых 3-7 повторяющихся сахаридных звеньев; каждых 4-8 повторяющихся сахаридных звеньев; каждых 6-10 повторяющихся сахаридных звеньев; каждых 7-11 повторяющихся сахаридных звеньев; каждых 8-12 повторяющихся сахаридных звеньев; каждых 9-13 повторяющихся сахаридных звеньев; каждых 10-14 повторяющихся сахаридных звеньев; каждых 10-20 повторяющихся сахаридных звеньев; каждых 4-25 повторяющихся сахаридных звеньев или каждых 2-25 повторяющихся сахаридных звеньев. В частых вариантах осуществления, белок-носитель представляет собой CRM₁₉₇.

В другом варианте осуществления, по меньшей мере одна связь между белком-носителем и сахаридом возникает для каждых 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 или 25 повторяющихся сахаридных звеньев полисахарида. В одном варианте осуществления, белок-носитель представляет собой CRM₁₉₇. Любое целое число внутри любого из вышеуказанных диапазонов предусматривают в качестве варианта осуществления описания.

1.3.2 Гликоконъюгаты серотипа 18C по изобретению

В одном варианте осуществления, гликоконъюгаты 18C по изобретению являются такими, как определено в настоящем разделе.

Капсульные полисахариды из S. pneumoniae серотипа 18C получают, как описано выше.

В одном варианте осуществления, полисахариды активируют с использованием тетрафторбората 1-циано-4-диметиламинопиридиния (CDAP) с образованием цианатного сложного эфира. Затем активированный полисахарид соединяют непосредственно или через спейсерную (линкерную) группу с аминогруппой на белке-носителе (предпочтительно, CRM₁₉₇). Например, спейсер может представлять собой цистамин или цистеамин для получения тиолированного полисахарида, который может быть соединен с носителем через тиоэфирную связь, полученную после реакции с активированным малеимидом белком-носителем (например, с использованием N-[γ- малеимидобутирилокси]сукцинимидного сложного эфира (GMBS)) или с галогенацетилированным белком-носителем (например, с использованием иодацетамида, N-сукцинимидилбромацетата (SBA; SIB), N-сукцинимидил(4-иодацетил)аминобензоата (SlAB), сульфосукцинимидил(4-иодацетил)аминобензоата (сульфо-SIAB), N-сукцинимидилиодацетата (SIA), или сукцинимидил-3-[бромацетамидо] пропионата (SBAP)). Предпочтительно, цианатный сложный эфир (необязательно, полученный посредством химических реакций CDAP) соединяют с гександиамином или дигидразидом адипиновой кислоты (ADH), и амино-дериватизированный сахарид конъюгируют с белком-носителем (например, CRM₁₉₇) с использованием карбодиимидных (например, EDAC или EDC) химических реакций через карбоксильную группу на белке-носителе. Такие конъюгаты описаны, например, в WO 93/15760, WO 95/08348 и WO 96/129094.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения, гликоконъюгат из S. pneumoniae серотипа 18C получают с использованием химических реакций CDAP.

В других подходящих способах конъюгации используют карбодиимиды, гидразиды, активные сложные эфиры, норборан, п-нитробензойную кислоту, N-гидроксисукцинимид, S-NHS, EDC, TSTU. Многие из них описаны в Публикации международной патентной заявки No. WO 98/42721. Конъюгация может включать карбонильный линкер, который может образовываться в результате реакции свободной гидроксильной группы сахарида с CDI (см. Bethell et al. (1979) 1. Biol. Chern. 254:2572-2574; Hearn et al. (1981) J. Chromatogr. 218:509-518) с последующей реакцией с белком с образованием карбаматной связи. Это может включать восстановление аномерного конца до первичной гидроксильной группы, необязательное введение защиты/снятие защиты первичной гидроксильной группы, реакцию первичной гидроксильной группы с CDI с образованием карбаматного промежуточного соединения CDI и соединение карбаматного промежуточного соединения CDI с аминогруппой на белке.

В предпочтительном варианте осуществления, капсульный полисахарид из S. pneumoniae серотипа 18C конъюгируют с белком-носителем посредством восстановительного аминирования (такого как описано в Публикациях патентных заявок США No. 2006/0228380, 2007/184072, 2007/0231340 и 2007/0184071, WO 2006/110381, WO 2008/079653 и WO 2008/143709).

Восстановительное аминирование включает две стадии, как описано выше.

В некоторых вариантах осуществления, гликоконъюгат из S. pneumoniae серотипа 18C по изобретению является O-ацетилированным. В некоторых вариантах осуществления, гликоконъюгат из S. pneumoniae серотипа 18C является де-O-ацетилированным.

В некоторых вариантах осуществления, гликоконъюгат из S. pneumoniae серотипа 18C содержит сахарид, имеющий степень O-ацетилирования между 10 и 100%, между 20 и 100%, между 30 и 100%, между 40 и 100%, между 50 и 100%, между 60 и 100%, между 70 и 100%, между 75 и 100%, 80 и 100%, 90 и 100%, 50 и 90%, 60 и 90%, 70 и 90% или 80 и 90%. В других вариантах осуществления, степень O-ацетилирования составляет ≥ 10%, ≥ 20%, ≥ 30%, ≥ 40%, ≥ 50%, ≥ 60%, ≥ 70%, ≥ 80%, ≥ 90% или приблизительно 100%. Предпочтительно, однако, гликоконъюгат из S. pneumoniae серотипа 18C является де-O-ацетилированным. В некоторых указанных вариантах осуществления, гликоконъюгат из S. pneumoniae серотипа 18C содержит сахарид, имеющий степень O-ацетилирования между 0 и 50%, между 0 и 40%, между 0 и 30%, между 0 и 20%, между 0 и 10%, между 0 и 5%, или между 0 и 2%. В других вариантах осуществления, степень O-ацетилирования составляет ≤ 50%, ≤ 40%, ≤ 30%, ≤ 20%, ≤ 10%, ≤ 5%, ≤ 2% или ≤ 1%.

Под % O-ацетилирования понимают процент данного сахарида относительно 100% (где каждое повторяющееся звено является полностью ацетилированным, применительно к его ацетилированной структуре).

В некоторых вариантах осуществления, гликоконъюгат из S. pneumoniae серотипа 18C по настоящему изобретению содержат сахарид, имеющий молекулярную массу между 5 кДа и 2000 кДа. В других таких вариантах осуществления, сахарид имеет молекулярную массу между 10 кДа и 1000 кДа. В других таких вариантах осуществления, сахарид имеет молекулярную массу между 15 кДа и 900 кДа. В других таких вариантах осуществления, сахарид имеет молекулярную массу между 20 кДа и 800 кДа. В дополнительных таких вариантах осуществления, сахарид имеет молекулярную массу между 100 кДа и 1000 кДа; 100 кДа и 900 кДа; 100 кДа и 800 кДа; 100 кДа и 700 кДа; 100 кДа и 600 кДа; 100 кДа и 500 кДа; 100 кДа и 400 кДа; 100 кДа и 300 кДа; 150 кДа и 1000 кДа; 150 кДа и 900 кДа; 150 кДа и 800 кДа; 150 кДа и 700 кДа; 150 кДа и 600 кДа; 150 кДа и 500 кДа; 150 кДа и 400 кДа; 150 кДа и 300 кДа; 200 кДа и 1000 кДа; 200 кДа и 900 кДа; 200 кДа и 800 кДа; 200 кДа и 700 кДа; 200 кДа и 600 кДа; 200 кДа и 500 кДа; 200 кДа и 400 кДа; 200 кДа и 300; 250 кДа и 1000 кДа; 250 кДа и 900 кДа; 250 кДа и 800 кДа; 250 кДа и 700 кДа; 250 кДа и 600 кДа; 250 кДа и 500 кДа; 250 кДа и 400 кДа; 250 кДа и 350 кДа; 300 кДа и 1000 кДа; 300 кДа и 900 кДа; 300 кДа и 800 кДа; 300 кДа и 700 кДа; 300 кДа и 600 кДа; 300 кДа и 500 кДа; 300 кДа и 400 кДа; 400 кДа и 1000 кДа; 400 кДа и 900 кДа; 400 кДа и 800 кДа; 400 кДа и 700 кДа; 400 кДа и 600 кДа; 500 кДа и 600 кДа. В более предпочтительных вариантах осуществления, сахарид имеет молекулярную массу между 5 кДа и 100 кДа; 7 кДа и 100 кДа; 10 кДа и 100 кДа; 20 кДа и 100 кДа; 30 кДа и 100 кДа; 40 кДа и 100 кДа; 50 кДа и 100 кДа; 60 кДа и 100 кДа; 70 кДа и 100 кДа; 80 кДа и 100 кДа или 90 кДа и 100 кДа. В более предпочтительных вариантах осуществления, сахарид имеет молекулярную массу между 5 кДа и 90 KDa; 5 кДа и 80 кДа; 5 кДа и 70 кДа; 5 кДа и 60 кДа; 5 кДа и 50 кДа; 5 кДа и 40 кДа; 5 кДа и 30 кДа; 5 кДа и 20 кДа, 5 кДа и 10 кДа, 10 кДа и 90 KDa; 10 кДа и 80 кДа; 10 кДа и 70 кДа; 10 кДа и 60 кДа; 10 кДа и 50 кДа; 10 кДа и 40 кДа; 10 кДа и 30 кДа; 10 кДа и 20 кДа, 20 кДа и 90 KDa; 20 кДа и 80 кДа; 20 кДа и 70 кДа; 20 кДа и 60 кДа; 20 кДа и 50 кДа; 20 кДа и 40 кДа или 20 кДа и 30 кДа. В более предпочтительных вариантах осуществления, сахарид имеет молекулярную массу между 30 кДа и 90 KDa; 30 кДа и 80 кДа; 30 кДа и 70 кДа; 30 кДа и 60 кДа; 30 кДа и 50 кДа; 30 кДа и 40 кДа; 40 кДа и 90 KDa; 40 кДа и 80 кДа; 40 кДа и 70 кДа; 40 кДа и 60 кДа; 40 кДа и 50 кДа; 50 кДа и 90 KDa; 50 кДа и 80 кДа; 50 кДа и 70 кДа или 50 кДа и 60 кДа. Любое целое число внутри любого из вышеуказанных диапазонов предусматривают в качестве варианта осуществления описания. В некоторых таких вариантах осуществления, гликоконъюгат получают с использованием восстановительного аминирования.

В некоторых вариантах осуществления, гликоконъюгат из S. pneumoniae серотипа 18C по настоящему изобретению имеет молекулярную массу между 100 кДа и 20000 кДа; между 200 кДа и 10000 кДа или между 300 кДа и 5000 кДа. В следующих вариантах осуществления, гликоконъюгат из S. pneumoniae серотипа 18C по изобретению имеет молекулярную массу между 100 кДа и 5000 кДа; между 150 кДа и 4000 кДа; между 200 кДа и 3000 кДа или между 250 кДа и 2000 кДа. В следующих вариантах осуществления, гликоконъюгат из S. pneumoniae серотипа 18C по изобретению имеет молекулярную массу между 100 кДа и 2000 кДа; между 150 кДа и 2000 кДа; между 200 кДа и 2000 кДа; между 250 кДа и 2000 кДа; между 300 кДа и 2000 кДа; между 350 кДа и 2000 кДа; между 400 кДа и 2000 кДа; между 450 кДа и 2000 кДа; между 500 кДа и 2000 кДа; между 550 кДа и 2000 кДа; между 600 кДа и 2000 кДа; между 700 кДа и 2000 кДа; между 800 кДа и 2000 кДа; между 900 кДа и 2000 кДа; между 1000 кДа и 2000 кДа; между 1250 кДа и 2000 кДа; между 1500 кДа и 2000 кДа или между 1,750 кДа и 2000 кДа. В следующих вариантах осуществления, гликоконъюгат из S. pneumoniae серотипа 18C по изобретению имеет молекулярную массу между 150 кДа и 2000 кДа; между 150 кДа и 1900 кДа; между 150 кДа и 1800 кДа; между 150 кДа и 1700 кДа; между 150 кДа и 1600 кДа; между 150 кДа и 1500 кДа; между 150 кДа и 1400 кДа; между 150 кДа и 1300 кДа; между 150 кДа и 1200 кДа; между 150 кДа и 1100 кДа; между 150 кДа и 1000 кДа; между 150 кДа и 900 кДа; между 150 кДа и 800 кДа; между 150 кДа и 700 кДа; между 150 кДа и 600 кДа; между 150 кДа и 500 кДа; между 150 кДа и 400 кДа; между 150 кДа и 300 кДа или между 150 кДа и 200 кДа. В следующих вариантах осуществления, гликоконъюгат из S. pneumoniae серотипа 18C по изобретению имеет молекулярную массу между 200 кДа и 2000 кДа; между 200 кДа и 1900 кДа; между 200 кДа и 1800 кДа; между 200 кДа и 1700 кДа; между 200 кДа и 1600 кДа; между 200 кДа и 1500 кДа; между 200 кДа и 1400 кДа; между 200 кДа и 1300 кДа; между 200 кДа и 1200 кДа; между 200 кДа и 1100 кДа; между 200 кДа и 1000 кДа; между 200 кДа и 900 кДа; между 200 кДа и 800 кДа; между 200 кДа и 700 кДа; между 200 кДа и 600 кДа; между 200 кДа и 500 кДа; между 200 кДа и 400 кДа или между 200 кДа и 300 кДа. В следующих вариантах осуществления, гликоконъюгат из S. pneumoniae серотипа 18C по изобретению имеет молекулярную массу между 250 кДа и 2000 кДа; между 250 кДа и 1900 кДа; между 250 кДа и 1800 кДа; между 250 кДа и 1700 кДа; между 250 кДа и 1600 кДа; между 250 кДа и 1500 кДа; между 250 кДа и 1400 кДа; между 250 кДа и 1300 кДа; между 250 кДа и 1200 кДа; между 250 кДа и 1100 кДа; между 250 кДа и 1000 кДа; между 250 кДа и 900 кДа; между 250 кДа и 800 кДа; между 250 кДа и 700 кДа; между 250 кДа и 600 кДа; между 250 кДа и 500 кДа; между 250 кДа и 400 кДа или между 250 кДа и 300 кДа. В следующих вариантах осуществления, гликоконъюгат из S. pneumoniae серотипа 18C по изобретению имеет молекулярную массу между 300 кДа и 2000 кДа; между 300 кДа и 1900 кДа; между 300 кДа и 1800 кДа; между 300 кДа и 1700 кДа; между 300 кДа и 1600 кДа; между 300 кДа и 1500 кДа; между 300 кДа и 1400 кДа; между 300 кДа и 1300 кДа; между 300 кДа и 1200 кДа; между 300 кДа и 1100 кДа; между 300 кДа и 1000 кДа; между 300 кДа и 900 кДа; между 300 кДа и 800 кДа; между 300 кДа и 700 кДа; между 300 кДа и 600 кДа; между 300 кДа и 500 кДа или между 300 кДа и 400 кДа. В следующих вариантах осуществления, гликоконъюгат из S. pneumoniae серотипа 18C по изобретению имеет молекулярную массу между 400 кДа и 2000 кДа; между 400 кДа и 1900 кДа; между 400 кДа и 1800 кДа; между 400 кДа и 1700 кДа; между 400 кДа и 1600 кДа; между 400 кДа и 1500 кДа; между 400 кДа и 1400 кДа; между 400 кДа и 1300 кДа; между 400 кДа и 1200 кДа; между 400 кДа и 1100 кДа; между 400 кДа и 1000 кДа; между 400 кДа и 900 кДа; между 400 кДа и 800 кДа; между 400 кДа и 700 кДа; между 400 кДа и 600 кДа или между 400 кДа и 500 кДа. В следующих вариантах осуществления, гликоконъюгат из S. pneumoniae серотипа 18C по изобретению имеет молекулярную массу между 500 кДа и 2000 кДа; между 500 кДа и 1900 кДа; между 500 кДа и 1800 кДа; между 500 кДа и 1700 кДа; между 500 кДа и 1600 кДа; между 500 кДа и 1500 кДа; между 500 кДа и 1400 кДа; между 500 кДа и 1300 кДа; между 500 кДа и 1200 кДа; между 500 кДа и 1100 кДа; между 500 кДа и 1000 кДа; между 500 кДа и 900 кДа; между 500 кДа и 800 кДа; между 500 кДа и 700 кДа или между 500 кДа и 600 кДа.

Молекулярную массу гликоконъюгата измеряют посредством SEC-MALLS. Любое целое число внутри любого из вышеуказанных диапазонов предусматривают в качестве варианта осуществления описания.

Другой способ характеризации гликоконъюгатов по изобретению осуществляют посредством количества остатков лизина в белке-носителе (например, CRM₁₉₇), которые становятся конъюгированными с сахаридом, которое может быть охарактеризовано как диапазон конъюгированных остатков лизина (степень конъюгации). Доказательство лизиновой модификации белка-носителя, за счет ковалентных связей с полисахаридами, можно получать посредством анализа аминокислот с использованием общепринятых способов, известных специалисту в данной области. Конъюгация в результате приводит к уменьшению количества восстановленных остатков лизина, по сравнению с исходным материалом белка-носителя, использованным для образования материалов конъюгата. В предпочтительном варианте осуществления, степень конъюгации гликоконъюгата из S. pneumoniae серотипа 18C по изобретению составляет между 2 и 15, между 2 и 13, между 2 и 10, между 2 и 8, между 2 и 6, между 2 и 5, между 2 и 4, между 3 и 15, между 3 и 13, между 3 и 10, между 3 и 8, между 3 и 6, между 3 и 5, между 3 и 4, между 5 и 15, между 5 и 10, между 8 и 15, между 8 и 12, между 10 и 15 или между 10 и 12. В одном варианте осуществления, степень конъюгации гликоконъюгата из S. pneumoniae серотипа 18C по изобретению составляет приблизительно 2, приблизительно 3, приблизительно 4, приблизительно 5, приблизительно 6, приблизительно 7, приблизительно 8, приблизительно 9, приблизительно 10, приблизительно 11, приблизительно 12, приблизительно 13, приблизительно 14 или приблизительно 15. В предпочтительном варианте осуществления, степень конъюгации гликоконъюгата из S. pneumoniae серотипа 18C по изобретению составляет между 4 и 7. В некоторых таких вариантах осуществления, белок-носитель представляет собой CRM₁₉₇.

Гликоконъюгат из S. pneumoniae серотипа 18C по изобретению можно также характеризовать по соотношению (масс./масс.) сахарида к белку-носителю. В некоторых вариантах осуществления, соотношение полисахарида к белку-носителю в гликоконъюгате из S. pneumoniae серотипа 18C по изобретению (масс./масс.) составляет между 0,5 и 3 (например, приблизительно 0,5, приблизительно 0,6, приблизительно 0,7, приблизительно 0,8, приблизительно 0,9, приблизительно 1,0, приблизительно 1,1, приблизительно 1,2, приблизительно 1,3, приблизительно 1,4, приблизительно 1,5, приблизительно 1,6, приблизительно 1,7, приблизительно 1,8, приблизительно 1,9, приблизительно 2,0, приблизительно 2,1, приблизительно 2,2, приблизительно 2,3, приблизительно 2,4, приблизительно 2,5, приблизительно 2,6, приблизительно 2,7, приблизительно 2,8, приблизительно 2,9, или приблизительно 3,0). В других вариантах осуществления, соотношение сахарида к белку-носителю (масс./масс.) составляет между 0,5 и 2,0, между 0,5 и 1,5, между 0,8 и 1,2, между 0,5 и 1,0, между 1,0 и 1,5 или между 1,0 и 2,0. В следующих вариантах осуществления, соотношение сахарида к белку-носителю (масс./масс.) составляет между 0,8 и 1,2. В предпочтительном варианте осуществления, соотношение капсульного полисахарида к белку-носителю в конъюгате составляет между 0,9 и 1,1. В некоторых таких вариантах осуществления, белок-носитель представляет собой CRM₁₉₇.

В предпочтительном варианте осуществления, гликоконъюгат из S. pneumoniae серотипа 18C по изобретению содержит менее, чем приблизительно 50%, 45%, 40%, 35%, 30%, 25%, 20% или 15% свободного полисахарида, по сравнению с общим количеством полисахарида. В предпочтительном варианте осуществления, гликоконъюгат содержит менее, чем приблизительно 25% свободного полисахарида, по сравнению с общим количеством полисахарида. В предпочтительном варианте осуществления, гликоконъюгат содержит менее, чем приблизительно 20% свободного полисахарида, по сравнению с общим количеством полисахарида. В предпочтительном варианте осуществления, гликоконъюгат содержит менее, чем приблизительно 15% свободного полисахарида, по сравнению с общим количеством полисахарида.

Гликоконъюгаты можно также характеризовать по распределению их молекулярного размера (K_d). Среды для эксклюзионной хроматографии (CL-4B) можно использовать для определения относительного распределения молекулярного размера конъюгата. Эксклюзионную хроматографию (SEC) используют в колонках с подачей самотеком для получения профиля распределения молекулярного размера конъюгатов. Большие молекулы, исключенные из пор в средах, элюируют более быстро, чем малые молекулы. Коллекторы фракций используют для сбора элюата колонки. Фракции тестируют колориметрически с использованием анализа сахаридов. Для определения K_d колонки калибруют, чтобы установить фракцию, в которой молекулы полностью исключены (V₀), (K_d=0), и фракцию, представляющую максимальное удержание (V_i), (K_d=1). Фракция, в которой достигнута указанная характеристика образца (V_e), связана с K_d выражением K_d=(V_e - V₀)/ (V_i - V₀).

В предпочтительном варианте осуществления, по меньшей мере 30% гликоконъюгата из S. pneumoniae серотипа 18C по изобретению имеет K_d, меньшую или равную 0,3, на колонке CL-4B. В предпочтительном варианте осуществления, по меньшей мере 40% гликоконъюгата имеет K_d, меньшую или равную 0,3, на колонке CL-4B. В предпочтительном варианте осуществления, по меньшей мере 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, или 85% гликоконъюгата имеет K_d, меньшую или равную 0,3, на колонке CL-4B. В предпочтительном варианте осуществления, по меньшей мере 60% гликоконъюгата имеет K_d, меньшую или равную 0,3, на колонке CL-4B. В предпочтительном варианте осуществления, между 50% и 80% гликоконъюгата имеет K_d, меньшую или равную 0,3, на колонке CL-4B. В предпочтительном варианте осуществления, между 65% и 80% гликоконъюгата имеет K_d, меньшую или равную 0,3, на колонке CL-4B.

Частота присоединения цепи сахарида к лизину на белке-носителе является другим параметром для характеризации гликоконъюгата из S. pneumoniae серотипа 18C по изобретению. Например, в некоторых вариантах осуществления, по меньшей мере одна ковалентная связь между белком-носителем и полисахаридом возникает для каждых 4 повторяющихся сахаридных звеньев полисахарида. В другом варианте осуществления, ковалентная связь между белком-носителем и полисахаридом возникает по меньшей мере один раз для каждых 10 повторяющихся сахаридных звеньев полисахарида. В другом варианте осуществления, ковалентная связь между белком-носителем и полисахаридом возникает по меньшей мере один раз для каждых 15 повторяющихся сахаридных звеньев полисахарида. В следующем варианте осуществления, ковалентная связь между белком-носителем и полисахаридом возникает по меньшей мере один раз для каждых 25 повторяющихся сахаридных звеньев полисахарида.

В других вариантах осуществления, конъюгат содержит по меньшей мере одну ковалентную связь между белком-носителем и сахаридом для каждых 5-10 повторяющихся сахаридных звеньев; каждых 2-7 повторяющихся сахаридных звеньев; каждых 3-8 повторяющихся сахаридных звеньев; каждых 4-9 повторяющихся сахаридных звеньев; каждых 6-11 повторяющихся сахаридных звеньев; каждых 7-12 повторяющихся сахаридных звеньев; каждых 8-13 повторяющихся сахаридных звеньев; каждых 9-14 повторяющихся сахаридных звеньев; каждых 10-15 повторяющихся сахаридных звеньев; каждых 2-6 повторяющихся сахаридных звеньев, каждых 3-7 повторяющихся сахаридных звеньев; каждых 4-8 повторяющихся сахаридных звеньев; каждых 6-10 повторяющихся сахаридных звеньев; каждых 7-11 повторяющихся сахаридных звеньев; каждых 8-12 повторяющихся сахаридных звеньев; каждых 9-13 повторяющихся сахаридных звеньев; каждых 10-14 повторяющихся сахаридных звеньев; каждых 10-20 повторяющихся сахаридных звеньев; каждых 4-25 повторяющихся сахаридных звеньев или каждых 2-25 повторяющихся сахаридных звеньев. В частых вариантах осуществления, белок-носитель представляет собой CRM₁₉₇.

В другом варианте осуществления, по меньшей мере одна связь между белком-носителем и сахаридом возникает для каждых 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 или 25 повторяющихся сахаридных звеньев полисахарида. В одном варианте осуществления, белок-носитель представляет собой CRM₁₉₇. Любое целое число внутри любого из вышеуказанных диапазонов предусматривают в качестве варианта осуществления описания.

1.4 Комбинация гликоконъюгатов по изобретению

В одном варианте осуществления, иммуногенная композиция по изобретению содержит любой из гликоконъюгатов, описанных в настоящем описании.

1.4.1 Комбинации гликоконъюгатов

В одном варианте осуществления, иммуногенная композиция по изобретению содержит по меньшей мере один гликоконъюгат из S. pneumoniae серотипа 18C.

В одном варианте осуществления, иммуногенная композиция по изобретению содержит по меньшей мере один гликоконъюгат из каждого из двух следующих серотипов S. pneumoniae: 18C и 4, 18C и 6B, 18C и 14, 18C и 9V, 18C и 19F или 18C и 23F.

В одном варианте осуществления, иммуногенная композиция по изобретению содержит по меньшей мере один гликоконъюгат из каждого из семи следующих серотипов S. pneumoniae: 18C, 4, 6B, 9V, 14, 19F и 23F.

В одном варианте осуществления, иммуногенная композиция по изобретению содержит по меньшей мере один гликоконъюгат из каждого из восьми следующих серотипов S. pneumoniae: 1, 4, 6B, 9V, 14, 18C, 19F и 23F; 4, 5, 6B, 9V, 14, 18C, 19F и 23F; 4, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19F и 23F.

В одном варианте осуществления, иммуногенная композиция по изобретению содержит по меньшей мере один гликоконъюгат из каждого из десяти следующих серотипов S. pneumoniae: 1, 5, 4, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19F и 23F.

В одном варианте осуществления, иммуногенная композиция по изобретению содержит по меньшей мере один гликоконъюгат из каждого из одиннадцати следующих серотипов S. pneumoniae: 1, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19F и 23F; 1, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F и 23F.

В одном варианте осуществления, иммуногенная композиция по изобретению содержит по меньшей мере один гликоконъюгат из каждого из двенадцати следующих серотипов S. pneumoniae: 1, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F и 23F.

В одном варианте осуществления, иммуногенная композиция по изобретению содержит по меньшей мере один гликоконъюгат из каждого из тринадцати следующих серотипов S. pneumoniae: 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F и 23F.

1.4.2 Дополнительные комбинации гликоконъюгатов

В одном варианте осуществления, любая из иммуногенных композиций, определенных в 1.4.1 выше, содержит дополнительно по меньшей мере один гликоконъюгат из S. pneumoniae серотипа 15B.

В одном варианте осуществления, любая из иммуногенных композиций, определенных в 1.4.1 выше, содержит дополнительно по меньшей мере один гликоконъюгат из S. pneumoniae серотипа 22F.

В одном варианте осуществления, любая из иммуногенных композиций, определенных в 1.4.1 выше, содержит дополнительно по меньшей мере один гликоконъюгат из S. pneumoniae серотипа 33F.

В одном варианте осуществления, любая из иммуногенных композиций, определенных в 1.4.1 выше, содержит дополнительно по меньшей мере один гликоконъюгат из S. pneumoniae серотипа 8.

В одном варианте осуществления, любая из иммуногенных композиций, определенных в 1.4.1 выше, содержит дополнительно по меньшей мере один гликоконъюгат из S. pneumoniae серотипа 10A.

В одном варианте осуществления, любая из иммуногенных композиций, определенных в 1.4.1 выше, содержит дополнительно по меньшей мере один гликоконъюгат из S. pneumoniae серотипа 11A.

В одном варианте осуществления, любая из иммуногенных композиций, определенных в 1.4.1 выше, содержит дополнительно по меньшей мере один гликоконъюгат из S. pneumoniae серотипа 12F.

В одном варианте осуществления, любая из иммуногенных композиций, определенных в 1.4.1 выше, содержит дополнительно по меньшей мере один гликоконъюгат из каждого из двух следующих серотипов S. pneumoniae:

15B и 22F,

15B и 33F,

15B и 12F,

15B и 10A,

15B и 11A,

15B и 8,

22F и 33F,

22F и 12F,

22F и 10A,

22F и 11A,

22F и 8,

33F и 12F,

33F и 10A,

33F и 11A,

33F и 8,

12F и 10A,

12F и 11A,

12F и 8,

10A и 11A,

10A и 8 или

11A и 8.

В одном варианте осуществления, любая из иммуногенных композиций, определенных в 1.4.1 выше, содержит дополнительно по меньшей мере один гликоконъюгат из каждого из трех следующих серотипов S. pneumoniae:

15B и 22F и 33F,

15B и 22F и 12F,

15B и 22F и 10A,

15B и 22F и 11A,

15B и 22F и 8,

15B и 33F и 12F,

15B и 33F и 10A,

15B и 33F и 11A,

15B и 33F и 8,

15B и 12F и 10A,

15B и 12F и 11A,

15B и 12F и 8,

15B и 10A и 11A,

15B и 10A и 8,

15B и 11A и 8,

22F и 33F и 12F,

22F и 33F и 10A,

22F и 33F и 11A,

22F и 33F и 8,

22F и 12F и 10A,

22F и 12F и 11A,

22F и 12F и 8,

22F и 10A и 11A,

22F и 10A и 8,

22F и 11A и 8,

33F и 12F и 10A,

33F и 12F и 11A,

33F и 12F и 8,

33F и 10A и 11A,

33F и 10A и 8,

33F и 11A и 8,

12F и 10A и 11A,

12F и 10A и 8,

12F и 11A и 8 или

10A и 11A и 8.

В одном варианте осуществления, любая из иммуногенных композиций, определенных в 1.4.1 выше, содержит дополнительно по меньшей мере один гликоконъюгат из каждого из четырех следующих серотипов S. pneumoniae:

15B и 22F и 33F и 12F,

15B и 22F и 33F и 10A,

15B и 22F и 33F и 11A,

15B и 22F и 33F и 8,

15B и 22F и 12F и 10A,

15B и 22F и 12F и 11A,

15B и 22F и 12F и 8,

15B и 22F и 10A и 11A,

15B и 22F и 10A и 8,

15B и 22F и 11A и 8,

15B и 33F и 12F и 10A,

15B и 33F и 12F и 11A,

15B и 33F и 12F и 8,

15B и 33F и 10A и 11A,

15B и 33F и 10A и 8,

15B и 33F и 11A и 8,

15B и 12F и 10A и 11A,

15B и 12F и 10A и 8,

15B и 12F и 11A и 8,

15B и 10A и 11A и 8,

22F и 33F и 12F и 10A,

22F и 33F и 12F и 11A,

22F и 33F и 12F и 8,

22F и 33F и 10A и 11A,

22F и 33F и 10A и 8,

22F и 33F и 11A и 8,

22F и 12F и 10A и 11A,

22F и 12F и 10A и 8,

22F и 12F и 11A и 8,

22F и 10A и 11A и 8,

33F и 12F и 10A и 11A,

33F и 12F и 10A и 8,

33F и 12F и 11A и 8,

33F и 10A и 11A и 8 или

12F и 10A и 11A и 8.

В одном варианте осуществления, любая из иммуногенных композиций, определенных в 1.4.1 выше, содержит дополнительно по меньшей мере один гликоконъюгат из каждого из пяти следующих серотипов S. pneumoniae:

15B и 22F и 33F и 12F и 10A,

15B и 22F и 33F и 12F и 11A,

15B и 22F и 33F и 12F и 8,

15B и 22F и 33F и 10A и 11A,

15B и 22F и 33F и 10A и 8,

15B и 22F и 33F и 11A и 8,

15B и 22F и 12F и 10A и 11A,

15B и 22F и 12F и 10A и 8,

15B и 22F и 12F и 11A и 8,

15B и 22F и 10A и 11A и 8,

15B и 33F и 12F и 10A и 11A,

15B и 33F и 12F и 10A и 8,

15B и 33F и 12F и 11A и 8,

15B и 33F и 10A и 11A и 8,

15B и 12F и 10A и 11A и 8,

22F и 33F и 12F и 10A и 11A,

22F и 33F и 12F и 10A и 8,

22F и 33F и 12F и 11A и 8,

22F и 33F и 10A и 11A и 8,

22F и 12F и 10A и 11A и 8 или

33F и 12F и 10A и 11A и 8.

В одном варианте осуществления, любая из иммуногенных композиций, определенных в 1.4.1 выше, содержит дополнительно по меньшей мере один гликоконъюгат из каждого из шести следующих серотипов S. pneumoniae:

15B и 22F и 33F и 12F и 10A и 11A,

15B и 22F и 33F и 12F и 10A и 8,

15B и 22F и 33F и 12F и 11A и 8,

15B и 22F и 33F и 10A и 11A и 8,

15B и 22F и 12F и 10A и 11A и 8,

15B и 33F и 12F и 10A и 11A и 8 или

22F и 33F и 12F и 10A и 11A и 8.

В одном варианте осуществления, любая из иммуногенных композиций, определенных в 1.4.1 выше, содержит дополнительно по меньшей мере один гликоконъюгат из каждого из семи следующих серотипов S. pneumoniae: 15B и 22F и 33F и 12F и 10A и 11A и 8.

В одном варианте осуществления, любая из иммуногенных композиций выше содержит дополнительно гликоконъюгаты из S. pneumoniae серотипа 2.

В одном варианте осуществления, любая из иммуногенных композиций выше содержит дополнительно гликоконъюгаты из S. pneumoniae серотипа 17F.

В одном варианте осуществления, любая из иммуногенных композиций выше содержит дополнительно гликоконъюгаты из S. pneumoniae серотипа 20.

В одном варианте осуществления, любая из иммуногенных композиций выше содержит дополнительно гликоконъюгаты из S. pneumoniae серотипа 15C.

Предпочтительно, все гликоконъюгаты из вышеуказанной иммуногенной композиции являются индивидуально конъюгированными с белком-носителем.

В одном варианте осуществления любой из вышеуказанных иммуногенных композиций, гликоконъюгаты из S. pneumoniae серотипа 18C являются конъюгированными с CRM₁₉₇. В одном варианте осуществления любой из вышеуказанных иммуногенных композиций, гликоконъюгаты из S. pneumoniae серотипа 22F являются конъюгированными с CRM₁₉₇. В одном варианте осуществления любой из вышеуказанных иммуногенных композиций, гликоконъюгаты из S. pneumoniae серотипа 33F являются конъюгированными с CRM₁₉₇. В одном варианте осуществления любой из вышеуказанных иммуногенных композиций, гликоконъюгаты из S. pneumoniae серотипа 15B являются конъюгированными с CRM₁₉₇. В одном варианте осуществления любой из вышеуказанных иммуногенных композиций, гликоконъюгаты из S. pneumoniae серотипа 12F являются конъюгированными с CRM₁₉₇. В одном варианте осуществления любой из вышеуказанных иммуногенных композиций, гликоконъюгаты из S. pneumoniae серотипа 10A являются конъюгированными с CRM₁₉₇. В одном варианте осуществления любой из вышеуказанных иммуногенных композиций, гликоконъюгаты из S. pneumoniae серотипа 11A являются конъюгированными с CRM₁₉₇. В одном варианте осуществления любой из вышеуказанных иммуногенных композиций, гликоконъюгаты из S. pneumoniae серотипа 8 являются конъюгированными с CRM₁₉₇. В одном варианте осуществления любой из вышеуказанных иммуногенных композиций, гликоконъюгаты из S. pneumoniae серотипов 4, 6B, 9V, 14, 19F и 23F являются конъюгированными с CRM₁₉₇. В одном варианте осуществления любой из вышеуказанных иммуногенных композиций, гликоконъюгаты из S. pneumoniae серотипов 1, 5 и 7F являются конъюгированными с CRM₁₉₇. В одном варианте осуществления любой из вышеуказанных иммуногенных композиций, гликоконъюгаты из S. pneumoniae серотипов 6A и 19A являются конъюгированными с CRM₁₉₇. В одном варианте осуществления любой из вышеуказанных иммуногенных композиций, гликоконъюгаты из S. pneumoniae серотипа 3 являются конъюгированными с CRM₁₉₇. В одном варианте осуществления любой из вышеуказанных иммуногенных композиций, гликоконъюгаты из S. pneumoniae серотипа 2 являются конъюгированными с CRM₁₉₇. В одном варианте осуществления, любой из вышеуказанных иммуногенных композиций, гликоконъюгаты из S. pneumoniae серотипа 17F являются конъюгированными с CRM₁₉₇. В одном варианте осуществления любой из вышеуказанных иммуногенных композиций, гликоконъюгаты из S. pneumoniae серотипа 20 являются конъюгированными с CRM₁₉₇. В одном варианте осуществления любой из вышеуказанных иммуногенных композиций, гликоконъюгаты из S. pneumoniae серотипа 15C являются конъюгированными с CRM₁₉₇.

В одном варианте осуществления, гликоконъюгаты из вышеуказанных иммуногенных композиций все являются индивидуально конъюгированными с CRM₁₉₇.

В одном варианте осуществления, гликоконъюгат из S. pneumoniae серотипа 18C из любой из вышеуказанных иммуногенных композиций является индивидуально конъюгированным с TT.

В одном варианте осуществления, гликоконъюгаты из S. pneumoniae серотипов 1, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14 и/или 23F из любой из вышеуказанных иммуногенных композиций являются индивидуально конъюгированными с PD.

В одном варианте осуществления, гликоконъюгат из S. pneumoniae серотипа 19F из любой из вышеуказанных иммуногенных композиций является конъюгированным с DT.

В одном варианте осуществления, гликоконъюгаты из S. pneumoniae серотипов 1, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14 и/или 23F из любой из вышеуказанных иммуногенных композиций являются индивидуально конъюгированными с PD, гликоконъюгат из S. pneumoniae серотипа 18C является конъюгированным с TT, и гликоконъюгат из S. pneumoniae серотипа 19F является конъюгированным с DT.

В одном варианте осуществления, вышеуказанная иммуногенная композиция содержит от 7 до 25 различных серотипов S. pneumoniae. В одном варианте осуществления, вышеуказанная иммуногенная композиция содержит гликоконъюгаты из 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 или 25 различных серотипов.

В одном варианте осуществления, вышеуказанная иммуногенная композиция содержит от 7 до 20 различных серотипов S. pneumoniae. В одном варианте осуществления, вышеуказанная иммуногенная композиция содержит гликоконъюгаты из 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20 различных серотипов. В одном варианте осуществления, вышеуказанная иммуногенная композиция содержит гликоконъюгаты из 16 или 20 различных серотипов.

В одном варианте осуществления, вышеуказанная иммуногенная композиция представляет собой 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20-валентную композицию пневмококковых конъюгатов. В одном варианте осуществления, вышеуказанная иммуногенная композиция представляет собой 14, 15, 16, 17, 18 или 19-валентную композицию пневмококковых конъюгатов. В одном варианте осуществления, вышеуказанная иммуногенная композиция представляет собой 16-валентную композицию пневмококковых конъюгатов. В одном варианте осуществления, вышеуказанная иммуногенная композиция представляет собой 19-валентную композицию пневмококковых конъюгатов. В одном варианте осуществления, вышеуказанная иммуногенная композиция представляет собой 20-валентную композицию пневмококковых конъюгатов.

В одном варианте осуществления, иммуногенная композиция по изобретению содержит гликоконъюгаты из S. pneumoniae серотипов 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 15B, 18C, 19A, 19F, 22F, 23F и 33F.

В одном варианте осуществления, иммуногенная композиция по изобретению содержит гликоконъюгаты из S. pneumoniae серотипов 1, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 15B, 18C, 19A, 19F, 22F, 23F и 33F.

В одном варианте осуществления, иммуногенная композиция по изобретению содержит конъюгированные сахариды S. pneumoniae из серотипов 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 8, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 18C, 19A, 19F, 22F, 23F и 33F.

В одном варианте осуществления, иммуногенная композиция по изобретению содержит конъюгированные сахариды S. pneumoniae из серотипов 1, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 8, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 18C, 19A, 19F, 22F, 23F и 33F.

В одном варианте осуществления, гликоконъюгаты из иммуногенной композиции по изобретению состоят из гликоконъюгатов из S. pneumoniae серотипов 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 15B, 18C, 19A, 19F, 22F, 23F и 33F. В одном варианте осуществления, гликоконъюгаты из иммуногенной композиции по изобретению состоят из гликоконъюгатов из серотипов 1, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 15B, 18C, 19A, 19F, 22F, 23F и 33F. В одном варианте осуществления, гликоконъюгаты из иммуногенной композиции по изобретению состоят из гликоконъюгатов из серотипов 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 8, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 18C, 19A, 19F, 22F, 23F и 33F. В одном варианте осуществления, гликоконъюгаты из иммуногенной композиции по изобретению состоят из гликоконъюгатов из 1, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 8, 9V, 10A, 11A, 12F, 14, 15B, 18C, 19A, 19F, 22F, 23F и 33F.

Предпочтительно, все гликоконъюгаты из иммуногенной композиции по изобретению являются индивидуально конъюгированными с белком-носителем. В одном варианте осуществления, гликоконъюгаты из вышеуказанной иммуногенной композиции являются индивидуально конъюгированными с CRM₁₉₇.

1.4.3 Дополнительные комбинации гликоконъюгатов

В одном варианте осуществления, никакая из иммуногенных композиций, определенных в 1.4.1 или 1.4.2 выше, не содержит капсульный сахарид из S. pneumoniae серотипа 18F.

В одном варианте осуществления, никакая из иммуногенных композиций, определенных в 1.4.1 или 1.4.2 выше, не содержит капсульный сахарид из S. pneumoniae серотипа 18A.

В одном варианте осуществления, никакая из иммуногенных композиций, определенных в 1.4.1 или 1.4.2 выше, не содержит капсульный сахарид из S. pneumoniae серотипа 18B.

В одном варианте осуществления, никакая из иммуногенных композиций, определенных в 1.4.1 или 1.4.2 выше, не содержит капсульный сахарид из S. pneumoniae серотипов 18F и 18A.

В одном варианте осуществления, никакая из иммуногенных композиций, определенных в 1.4.1 или 1.4.2 выше, не содержит капсульный сахарид из S. pneumoniae серотипов 18F и 18B.

В одном варианте осуществления, никакая из иммуногенных композиций, определенных в 1.4.1 или 1.4.2 выше, не содержит капсульный сахарид из S. pneumoniae серотипов 18A и 18B.

В одном варианте осуществления, никакая из иммуногенных композиций, определенных в 1.4.1 или 1.4.2 выше, не содержит капсульный сахарид из S. pneumoniae серотипов 18F, 18A и 18B.

2 Дозирование иммуногенных композиций

2.1 Количество полисахарида

Количество гликоконъюгата(гликоконъюгатов) в каждой дозе выбирают как количество, индуцирующее иммунопротективный ответ без существенных неблагоприятных побочных эффектов у типичных вакцинируемых. Такое количество можно менять в зависимости от конкретного используемого иммуногена и способа его представления.

Количество конкретного гликоконъюгата в иммуногенной композиции можно рассчитывать на основании общего количества полисахарида для этого конъюгата (конъюгированного и неконъюгированного). Например, гликоконъюгат с 20% свободного полисахарида имеет приблизительно 80 мкг конъюгированного полисахарида и приблизительно 20 мкг неконъюгированного полисахарида в дозе 100 мкг полисахарида. Количество гликоконъюгата можно менять в зависимости от серотипа стрептокока. Концентрацию сахарида можно определять посредством анализа уроновой кислоты.

«Иммуногенное количество» различных полисахаридных компонентов в иммуногенной композиции, может иметь отклонения, и каждое может содержать приблизительно 1,0 мкг, приблизительно 2,0 мкг, приблизительно 3,0 мкг, приблизительно 4,0 мкг, приблизительно 5,0 мкг, приблизительно 6,0 мкг, приблизительно 7,0 мкг, приблизительно 8,0 мкг, приблизительно 9,0 мкг, приблизительно 10,0 мкг, приблизительно 15,0 мкг, приблизительно 20,0 мкг, приблизительно 30,0 мкг, приблизительно 40,0 мкг, приблизительно 50,0 мкг, приблизительно 60,0 мкг, приблизительно 70,0 мкг, приблизительно 80,0 мкг, приблизительно 90,0 мкг или приблизительно 100,0 мкг какого-либо конкретного полисахаридного антигена.

Как правило, каждая доза может содержать от 0,1 мкг до 100 мкг полисахарида для данного серотипа, в частности, от 0,5 мкг до 20 мкг, более конкретно, от 1 мкг до 10 мкг, и даже более конкретно, от 2 мкг до 5 мкг. Любое целое число внутри любого из вышеуказанных диапазонов предусматривают в качестве варианта осуществления описания.

В одном варианте осуществления, каждая доза может содержать 1 мкг, 2 мкг, 3 мкг, 4 мкг, 5 мкг, 6 мкг, 7 мкг, 8 мкг, 9 мкг, 10 мкг, 15 мкг или 20 мкг полисахарида для данного серотипа.

2.2 Количество носителя

Как правило, каждая доза может содержать от 5 мкг до 150 мкг белка-носителя, в частности, от 10 мкг до 100 мкг белка-носителя, более конкретно, от 15 мкг до 100 мкг белка-носителя, более конкретно, от 25 до 75 мкг белка-носителя, более конкретно, от 30 мкг до 70 мкг белка-носителя, более конкретно, от 30 до 60 мкг белка-носителя, более конкретно, от 30 мкг до 50 мкг белка-носителя и даже более конкретно, от 40 до 60 мкг белка-носителя. В одном варианте осуществления, указанный белок-носитель представляет собой CRM₁₉₇.

В одном варианте осуществления, каждая доза может содержать приблизительно 25 мкг, приблизительно 26 мкг, приблизительно 27 мкг, приблизительно 28 мкг, приблизительно 29 мкг, приблизительно 30 мкг, приблизительно 31 мкг, приблизительно 32 мкг, приблизительно 33 мкг, приблизительно 34 мкг, приблизительно 35 мкг, приблизительно 36 мкг, приблизительно 37 мкг, приблизительно 38 мкг, приблизительно 39 мкг, приблизительно 40 мкг, приблизительно 41 мкг, приблизительно 42 мкг, приблизительно 43 мкг, приблизительно 44 мкг, приблизительно 45 мкг, приблизительно 46 мкг, приблизительно 47 мкг, приблизительно 48 мкг, приблизительно 49 мкг, приблизительно 50 мкг, приблизительно 51 мкг, приблизительно 52 мкг, приблизительно 53 мкг, приблизительно 54 мкг, приблизительно 55 мкг, приблизительно 56 мкг, приблизительно 57 мкг, приблизительно 58 мкг, приблизительно 59 мкг, приблизительно 60 мкг, приблизительно 61 мкг, приблизительно 62 мкг, приблизительно 63 мкг, приблизительно 64 мкг, приблизительно 65 мкг, приблизительно 66 мкг, приблизительно 67 мкг, 68 мкг, приблизительно 69 мкг, приблизительно 70 мкг, приблизительно 71 мкг, приблизительно 72 мкг, приблизительно 73 мкг, приблизительно 74 мкг или приблизительно 75 мкг белка-носителя. В одном варианте осуществления, указанный белок-носитель представляет собой CRM₁₉₇.

3 Дополнительные антигены

Иммуногенные композиции по изобретению содержат конъюгированные сахаридные антигены (гликоконъюгаты) S. pneumoniae. Они могут также дополнительно включать антигены из других патогенов, в частности, из бактерий и/или вирусов. Предпочтительные дополнительные антигены выбраны из: дифтерийного анатоксина (D), столбнячного анатоксина (T), коклюшного антигена (P), который, как правило, является бесклеточным (Pa), поверхностного антигена (HBsAg) вируса гепатита B (HBV), антигена вируса гепатита A (HAV), конъюгированного капсульного сахарида Haemophilus influenzae типа b (Hib), инактивированной вакцины на основе вируса полиомиелита (IPV).

В одном варианте осуществления, иммуногенные композиции по изобретению содержат D-T-Pa. В одном варианте осуществления, иммуногенные композиции по изобретению содержат D-T-Pa-Hib, D-T-Pa-IPV или D-T-Pa-HBsAg. В одном варианте осуществления, иммуногенные композиции по изобретению содержат D-T-Pa-HBsAg-IPV или D-T-Pa-HBsAg-Hib. В одном варианте осуществления, иммуногенные композиции по изобретению содержат D-T-Pa-HBsAg-IPV-Hib.

Коклюшные антигены: Bordetella коклюш вызывает коклюш. Коклюшные антигены в вакцинах являются либо клеточными (цельные клетки, в форме инактивированных клеток B.pertussis), либо бесклеточными. Получение клеточных коклюшных антигенов хорошо документировано (например, их можно получать посредством термической инактивации культуры B.pertussis фазы I). Предпочтительно, однако, по изобретению используют бесклеточные антигены. Когда используют бесклеточные антигены, является предпочтительным использовать один, два или (предпочтительно) три из следующих антигенов: (1) детоксифицированный коклюшный токсин (коклюшный анатоксин, или PT); (2) филаментный гемагтлютинин (FHA); (3) пертактин (также известный как белок наружной мембраны 69 килоДальтон). FHA и пертактин можно обрабатывать формальдегидом перед использованием по изобретению. PT предпочтительно детоксифицируют посредством обработки формальдегидом и/или глутаральдегидом. Бесклеточные коклюшные антигены предпочтительно адсорбируют на одном или больше адьювантов из солей алюминия. В качестве альтернативы, их можно добавлять в неадсорбированном состоянии. При добавлении пертактина, он, предпочтительно, уже является адсорбированным на адьюванте из гидроксида алюминия. PT и FHA могут являться адсорбированными на адьюванте из гидроксида алюминия или фосфата алюминия. Адсорбция всех из РТ, FHA и пертактина на гидроксиде алюминия является наиболее предпочтительной.

Инактивированная вакцина на основе вируса полиомиелита: Вирус полиомиелита вызывает полиомиелит. Вместо использования пероральной вакцины на основе вируса полиомиелита, в предпочтительных вариантах осуществления изобретения используют IPV. Перед введением пациентам, вирусы полиомиелита должны являться инактивированными, и это можно осуществлять посредством обработки формальдегидом. Полиомиелит может быть вызван одним из трех типов вируса полиомиелита. Эти три типа похожи и вызывают идентичные симптомы, но они являются антигенно различными, и инфекция одним типом не защищает от инфекции другими. Таким образом, является предпочтительным использование по изобретению антигенов трех вирусов полиомиелита: вируса полиомиелита типа 1 (например, штамма Mahoney), вируса полиомиелита типа 2 (например, штамма MEF-1) и вируса полиомиелита типа 3 (например, штамма Saukett). Вирусы предпочтительно выращивают, очищают и инактивируют индивидуально, и затем комбинируют для получения нерасфасованной трехвалентной смеси для использования по настоящему изобретению.

Дифтерийный анатоксин: Corynebacterium diphtheriae вызывает дифтерию. Дифтерийный токсин можно обрабатывать (например, с использованием формалина или формальдегида) для удаления токсичности, с сохранением в то же время способности индуцировать образование специфических антител против токсина после инъекции. Эти дифтерийные анатоксины используют в вакцинах против дифтерии. Предпочтительными дифтерийными анатоксинами являются те, которые получены посредством обработки формальдегидом. Дифтерийный анатоксин можно получать посредством выращивания C.diphtheriae в среде для роста, с последующей обработкой формальдегидом, ультрафильтрацией и преципитацией. Анатоксиновый материал затем можно обрабатывать способом, включающим стерильную фильтрацию и/или диализ. Дифтерийный анатоксин, предпочтительно, является адсорбированым на адъюванте на основе гидроксида алюминия.

Столбнячный анатоксин: Clostridium tetani вызывает столбняк. Столбнячный токсин можно обрабатывать для получения защитного анатоксина. Анатоксины используют в вакцинах против столбняка. Предпочтительными столбнячными анатоксинами являются те, которые получены посредством обработки формальдегидом. Столбнячный анатоксин можно получать посредством выращивания C. tetani в среде для роста, с последующей обработкой формальдегидом, ультрафильтрацией и преципитацией. Затем материал можно обрабатывать согласно способом, включающим стерильную фильтрацию и/или диализ.

Антигены вируса гепатита A: Вирус гепатита A (HAV) является одним из известных агентов, вызывающих вирусный гепатит. Предпочтительный компонент HAV основан на инактивированном вирусе, и инактивацию можно осуществлять посредством обработки формалином.

Вирус гепатита B (HBV) является одним из известных агентов, вызывающих вирусный гепатит. Главным компонентом капсида является белок, известный как поверхностный антиген HBV или, более общепринято, HBsAg, который, как правило, представляет собой полипептид из 226 аминокислот с молекулярной массой ~24 кДа. Все существующие вакцины против гепатита B содержат HBsAg, и когда этот антиген вводят нормальным вакцинируемым, он стимулирует продукцию антител против HBsAg, которые защищают против инфекции HBV.

Для изготовления вакцины, HBsAg получают двумя способами: очисткой антигена в форме частиц из плазмы носителей хронического гепатита B или экспрессией белка посредством способов рекомбинантной ДНК (например, рекомбинантной экспрессии в клетках дрожжей). В отличие от нативного HBsAg (т.е., как в очищенном продукте из плазмы), экспрессированный в дрожжах HBsAg как правило, является негликозилированным, и это представляет собой наиболее предпочтительную форму HBsAg для использования по настоящему изобретению.

Конъюгированные антигены Haemophilus influenzae типа b антигены: Haemophilus influenzae типа b (Hib) вызывает бактериальный менингит. Вакцины Hib, как правило, основаны на капсульном сахаридном антигене, получение которого хорошо документировано. Сахарид Hib можно конъюгировать с белком-носителем для того, чтобы повысить его иммуногенность, особенно у детей. Типичные белки-носители представляют собой столбнячный анатоксин, дифтерийный анатоксин, CRM197, H.influenzae и комплекс белка белок наружной мембраны комплекс из менингококка серогруппы В. Сахаридная группа конъюгата может содержать полноразмерный полирибозилрибитфосфат (PRP), как полученный из бактерий Hib, и/или фрагменты полноразмерного PRP. Конъюгаты Hib могут являться или могут не являться адсорбированными на адъюванте на основе соли алюминия.

В одном варианте осуществления, иммуногенные композиции по изобретению дополнительно включают конъюгированный капсульный сахарид N.meningitidis серогруппы Y (MenY) и/или конъюгированный капсульный сахарид N. meningitidis серогруппы C (MenC).

В одном варианте осуществления, иммуногенные композиции по изобретению дополнительно включают конъюгированный капсульный сахарид N. meningitidis серогруппы A (MenA), конъюгированный капсульный сахарид N. meningitidis серогруппы W135 (MenW135), конъюгированный капсульный сахарид N. meningitidis серогруппы Y (MenY), и/или конъюгированный капсульный сахарид N. meningitidis серогруппы C (MenC).

В одном варианте осуществления, иммуногенные композиции по изобретению дополнительно включают конъюгированный капсульный сахарид N. meningitidis серогруппы W135 (MenW135), конъюгированный капсульный сахарид N. meningitidis серогруппы Y (MenY) и/или конъюгированный капсульный сахарид N. meningitidis серогруппы C (MenC).

4 Адъювант(ы)

В некоторых вариантах осуществления, иммуногенные композиции, описанные в настоящем описании, могут дополнительно содержать по меньшей мере один адъювант (например, один, два или три адъюванта). Термин «адъювант» относится к соединению или смеси, которые усиливают иммунный ответ на антиген. Антигены могут действовать в первую очередь в качестве системы доставки, в первую очередь в качестве иммуномодулятора, или имеют сильные признаки и того, и другого. Подходящие адъюванты включают адъюванты, пригодные для использования у млекопитающих, включая человека.

Примеры известных пригодных адъювантов типа системы доставки, которые можно использовать для человека включают, но без ограничения, квасцы (например, фосфат алюминия, сульфат алюминия или гидроксид алюминия), фосфат кальция, липосомы, эмульсии масло-в-воде, такие как MF59 (4,3% масс./об. сквалена, 0,5% масс./об. полисорбат 80 (Tween 80), 0,5% масс./об. триолеат сорбитана (Span 85)), эмульсии масло-в-воде, такие как монтанид, и микрочастицы или наночастицы сополимера (D,L-лактида-гликолида) (PLG).

В одном варианте осуществления, иммуногенные композиции, описанные в настоящем описании, содержат соли алюминия (квасцы) в качестве адъюванта (например, фосфат алюминия, сульфат алюминия или гидроксид алюминия). В предпочтительном варианте осуществления, иммуногенные композиции, описанные в настоящем описании, содержат фосфат алюминия или гидроксид алюминия в качестве адъюванта. В одном варианте осуществления, иммуногенные композиции, описанные в настоящем описании, содержат от 0,1 мг/мл до 1 мг/мл или от 0,2 мг/мл до 0,3 мг/мл элементарного алюминия в форме фосфата алюминия. В одном варианте осуществления, иммуногенные композиции, описанные в настоящем описании, содержат приблизительно 0,25 мг/мл элементарного алюминия в форме фосфата алюминия.

Примеры известных пригодных адъювантов иммунномодуляторного типа, которые можно использовать у человека, включают, но без ограничения, экстракты сапонина из коры дерева Квиллайя от Aquilla (QS21, Quil A), агонисты TLR4, такие как MPL (монофосфориллипид A), 3DMPL (3-O-деацилированный MPL) или GLA-AQ, мутанты LT/CT, цитокины, такие как различные интерлейкины (например, IL-2, IL-12) или GM-CSF и т.п.

Примеры известных пригодных адъювантов иммунномодуляторного типа как с функцией доставки, так и с иммунномодуляторными функциями, которые можно использовать у человека включают, но без ограничения, ISCOMS (см., например, Sjölander et al. (1998) J. Leukocyte Biol. 64:713; WO 90/03184, WO 96/11711, WO 00/48630, WO 98/36772, WO 00/41720, WO 2006/134423 и WO 2007/026190) или GLA-EM, которые представляют собой комбинацию агониста TLR4 и эмульсии масло-в-воде.

Для применений в ветеринарии, включая, но без ограничения, эксперименты на животных, можно использовать полный адъювант Фрейнда (CFA), неполный адъювант Фрейнда (IFA), Emulsigen, N-ацетил-мурамил-L-треонил-D-изоглутамин (thr-MDP), N-ацетил-нормурамил-L-аланил-D-изоглутамин (CGP 11637, обозначенный как нор-MDP), N-ацетилмурамил-L-аланил-D-изоглутаминил-L-аланин-2-(1'-2'-дипальмитоил-sn-глицеро-3-гидроксифосфорилокси)-этиламин (CGP 19835A, обозначенный как MTP-PE), и RIBI, который содержит три компонента, экстрагированные из бактерий, монофосфориллипид A, димиколат трегалозы и каркас клеточной стенки (MPL+TDM+CWS) в 2% эмульсии сквален/Tween 80.

Дополнительные иллюстративный адъюванты для усиления эффективности пневмококковых вакцин, как описано в настоящем описании, включают, но без ограничения: (1) эмульсионные составы масло-в-воде (в присутствии или в отсутствие других специфических иммуностимулирующих средств, таких как мурамилпептиды (см. ниже) или компоненты клеточной стенки бактерий), например, такие как (a) SAF, содержащий 10% сквалан, 0,4% Tween 80, блокированный 5% плюроником полимер L121, и thr-MDP либо микрофлуидизированный в субмикронной эмульсии, либо встряхиваемый для образования эмульсии с большим размером частиц, и (b) адъювантная система RIBI™ (RAS), (Ribi Immunochem, Hamilton, MT), содержащая 2% сквален, 0,2% Tween 80 и один или несколько компонентов клеточной стенки бактерий, таких как монофосфориллипид A (MPL), димиколат трегалозы (TDM), и каркас клеточной стенки (CWS), предпочтительно, MPL+CWS (DETOX™); (2) можно использовать сапониновые адъюванты, такие как QS21, STIMULON™ (Cambridge Bioscience, Worcester, MA), Abisco® (Isconova, Sweden), или Iscomatrix® (Commonwealth Serum Laboratories, Australia), или частицы, образованные ими, такие как ISCOM (иммуностимулирующие комплексы), в которых ISCOM могут быть лишены дополнительного детергента (например, WO 00/07621); (3) полный адъювант Фрейнда (CFA) и неполный адъювант Фрейнда (IFA); (4) цитокины, такие как интерлейкины (например, IL-1, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-12 (WO 99/44636)), интерфероны (например, гамма-интерферон), макрофагальный колониестимулирующий фактор (M-CSF), фактор некроза опухоли (TNF) и т.д.; (5) монофосфориллипид A (MPL) или 3-O-деацилированный MPL (3dMPL) (см., например, GB-2220221, EP0689454), необязательно, в основном в отсутствие квасцов при использовании с пневмококковыми сахаридами (см., например, WO 00/56358); (6) комбинации 3dMPL, например, с QS21 и/или эмульсиями масло-в-воде (см., например, EP0835318, EP0735898, EP0761231); (7) полиоксиэтиленовый эфир или полиоксиэтиленовый сложный эфир (см., например, WO99/52549); (8) поверхностно-активное вещество полиоксиэтиленовый сложный эфир сорбитана в комбинации с октоксинолом (WO 01/21207) или поверхностно-активное вещество полиоксиэтиленалкильный эфир или сложный эфир в комбинации по меньшей мере с одним дополнительным неионным поверхностно-активным веществом, таким как октоксинол (WO 01/21152); (9) сапонин и иммуностимулирующий олигонуклеотид (например, CpG олигонуклеотид) (WO 00/62800); (10) иммуностимулятор и частица соли металла (см., например, WO00/23105); (11) сапонин и эмульсию масло-в-воде например, WO 99/11241; (12) сапонин (например, QS21)+3dMPL+IM2 (необязательно+стерол) например, WO 98/57659; (13) другие вещества, которые действуют в качестве иммуностимулирующих агентов, для повышения эффективности композиции. Мурамилпептиды включают N-ацетил-мурамил-L-треонил-D-изоглутамин (thr-MDP), N-25-ацетил-нормурамил-L-аланил-D-изоглутамин (нор-MDP), N-ацетилмурамил-L-аланил-D-изоглуглутарнинил-L-аланин-2-(1'-2'-дипальмитоил-sn-глицеро-3-гидроксифосфорилокси)-этиламин MTP-PE) и т.д.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения, иммуногенные композиции, как описано в настоящем описании, содержат CpG олигонуклеотид в качестве адъюванта. CpG олигонуклеотид, как применяют в настоящем описании, относится к иммуностимулирующему CpG олигодезоксинуклеотиду (CpG ODN), и соответственно, эти термины используют взаимозаменяемо, если не указано иное. Иммуностимулирующие CpG олигодезоксинуклеотиды содержат один или несколько иммуностимулирующих CpG мотивов, которые представляют собой неметилированные цитозин-гуаниновые динуклеотиды, необязательно, в определенных предпочтительных контекстах оснований. Статус метилирования иммуностимулирующего мотива CpG, как правило, касается цитозинового остатка в динуклеотиде. Иммуностимулирующий олигонуклеотид, содержащий по меньшей мере один неметилированный CpG динуклеотид, представляет собой олигонуклеотид, который содержит 5'-неметилированный цитозин, связанный фосфатной связью с 3'-гуанином, и который активирует иммунную систему посредством связывания с Toll-подобным рецептором 9 (TLR-9). В другом варианте осуществления, иммуностимулирующий олигонуклеотид может содержать один или несколько метилированных CpG динуклеотидов, которые могут активировать иммунную систему посредством TLR9, но не так сильно, как если бы CpG мотив(ы) был/были неметилированными. Иммуностимулирующие CpG олигонуклеотиды могут содержать один или несколько палиндромов, которые, в свою очередь, могут включать CpG динуклеотид. CpG олигонуклеотиды описаны в ряде выданных патентов, опубликованных патентных заявок и других публикаций, включая Патенты США No. 6194388; 6207646; 6214806; 6218371; 6239116; и 6339068.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения, иммуногенные композиции, как описано в настоящем описании, содержат любой из CpG олигонуклеотидов, описанных от страницы 3, строки 22, до страницы 12, строки 36, из WO 2010/125480.

Идентифицированы различные классы иммуностимулирующих CpG олигонуклеотидов. Они обозначены как класс A, B, C и P, и описаны более подробно от страницы 3, строки 22, до страницы 12, строки 36, из WO 2010/125480. Способы по изобретению включают использование этих различных классов иммуностимулирующих CpG олигонуклеотидов.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения, иммуногенные композиции, как описано в настоящем описании, содержат CpG олигонуклеотид класса A. В одном варианте осуществления настоящего изобретения, иммуногенные композиции, как описано в настоящем описании, содержат CpG олигонуклеотид класса B.

Последовательности CpG олигонуклеотида класса B по изобретению представляют собой последовательности, широко описанные выше, так же как описанные в опубликованных WO 96/02555, WO 98/18810 и в Патентах США No. 6194388; 6207646; 6214806; 6218371; 6239116; и 6339068. Иллюстративные последовательности включают, но без ограничения, последовательности, описанные в этих более поздних заявках и патентах.

В одном варианте осуществления, CpG олигонуклеотид «класса B» по изобретению имеет следующую последовательность нуклеиновой кислоты:

5' TCGTCGTTTTTCGGTGCTTTT 3' (SEQ ID NO: 1), или

5' TCGTCGTTTTTCGGTCGTTTT 3' (SEQ ID NO: 2), или

5' TCGTCGTTTTGTCGTTTTGTCGTT 3' (SEQ ID NO: 3), или

5' TCGTCGTTTCGTCGTTTTGTCGTT 3' (SEQ ID NO: 4), или

5' TCGTCGTTTTGTCGTTTTTTTCGA 3' (SEQ ID NO: 5).

В любой из этих последовательностей, все связи могут представлять собой фосфоротиоатные связи. В другом варианте осуществления, в любой из этих последовательностей, одна или несколько из связей могут являться фосфодиэфирными, предпочтительно, между «C» и «G» мотива CpG, что приводит к получению полужесткого CpG олигонуклеотида. В любой из этих последовательностей, 5'-Т может быть заменен этилуридином или галогеном; примеры замещений галогеном включают, но без ограничения, замещение бромуридином или иодуридином.

Некоторые неограничивающие примеры олигонуклеотидов класса B включают:

5' T*C*G*T*C*G*T*T*T*T*T*C*G*G*T*G*C*T*T*T*T 3' (SEQ ID NO: 6) или

5' T*C*G*T*C*G*T*T*T*T*T*C*G*G*T*C*G*T*T*T*T 3' (SEQ ID NO: 7), или

5' T*C*G*T*C*G*T*T*T*T*G*T*C*G*T*T*T*T*G*T*C*G*T*T 3' (SEQ ID NO: 8), или

5' T*C*G*T*C*G*T*T*T*C*G*T*C*G*T*T*T*T*G*T*C*G*T*T 3' (SEQ ID NO: 9), или

5' T*C*G*T*C*G*T*T*T*T*G*T*C*G*T*T*T*T*T*T*T*C*G*A 3' (SEQ ID NO: 10).

где «*» относится к фосфоротиоатной связи.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения, иммуногенные композиции, как описано в настоящем описании, содержат CpG олигонуклеотид класса C.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения, иммуногенные композиции, как описано в настоящем описании, содержат CpG олигонуклеотид класса P.

В одном варианте осуществления, олигонуклеотид включает по меньшей мере одну фосфоротиоатную связь. В другом варианте осуществления, все межнуклеотидные связи олигонуклеотида представляют собой фосфоротиоатные связи. В другом варианте осуществления, олигонуклеотид включает по меньшей мере одну фосфодиэфир-подобную связь. В другом варианте осуществления, фосфодиэфир-подобная связь представляет собой фосфодиэфирную связь. В другом варианте осуществления, липофильная группа является конъюгированной с олигонуклеотидом. В одном варианте осуществления, липофильная группа представляет собой холестерин.

В одном варианте осуществления, все межнуклеотидные связи CpG олигонуклеотидов, описанных в настоящем описании, представляют собой фосфодиэфирные связи («гибкие» олигонуклеотиды, как описано в WO 2007/026190). В другом варианте осуществления, CpG олигонуклеотидам по изобретению придают устойчивость к деградации (например, стабилизируют). «Стабилизированный олигонуклеотид» относится к олигонуклеотиду, который является относительно устойчивым к деградации in vivo (например, посредством экзо- или эндонуклеаз). Стабилизации нуклеиновой кислоты можно достигать посредством модификаций остова. Олигонуклеотиды, имеющие фосфоротиоатные связи, обеспечивают максимальную активность и защищают олигонуклеотиды от деградации внутриклеточными экзо- и эндонуклеазами.

Иммуностимулирующие олигонуклеотиды могут иметь химерный остов, который имеет комбинации фосфодиэфирных и фосфоротиоатных связей. Для целей по настоящему изобретению, химерный остов относится к частично стабилизированному остову, где по меньшей мере одна межнуклеотидная связь является фосфодиэфирной или фосфодиэфир-подобной и где по меньшей мере одна другая межнуклеотидная связь представляет собой стабилизированную межнуклеотидную связь, где по меньшей мере одна фосфодиэфирная или фосфодиэфир-подобная связь и по меньшей мере одна стабилизированная связь являются различными. Когда фосфодиэфирная связь преимущественно расположена в пределах CpG-мотива, такие молекулы называют «полужесткими», как описано в WO 2007/026190.

Другие модифицированные олигонуклеотиды включают комбинации фосфодиэфирных, фосфоротиоатных, метилфосфонатных, метилфосфоротиоатных, фосфородитиоатных и/или п-этокси-связей.

ODN со смешанными модификациями остова можно синтезировать, как описано в WO 2007/026190.

Размер CpG олигонуклеотида (т.е., количество нуклеотидных остатков вдоль длины олигонуклеотида) также может вносить вклад в стимулирующую активность олигонуклеотида. Для облегчения поглощения клетками, CpG олигонуклеотид по изобретению предпочтительно имеет минимальную длину из 6 нуклеотидных остатков. Олигонуклеотиды любого размера, более чем 6 нуклеотидов (даже длиной множество т.п.о.), являются способными индуцировать иммунный ответ, если присутствует достаточное количество иммуностимулирующих мотивов, поскольку более крупные олигонуклеотиды деградируют внутри клеток. В конкретных вариантах осуществления, CpG олигонуклеотиды имеют длину от 6 до 100 нуклеотидов, предпочтительно, длину от 8 до 30 нуклеотидов. В важных вариантах осуществления, нуклеиновые кислоты и олигонуклеотиды по изобретению не являются плазмидами или экспрессирующими векторами.

В одном варианте осуществления, CpG олигонуклеотид, описанный в настоящем описании, содержит замены или модификации, например, в основаниях и/или сахарах, как описано в разделах 134-147 WO 2007/026190.

В одном варианте осуществления, CpG олигонуклеотид по настоящему изобретению является химически модифицированным. Примеры химических модификаций известны специалисту в данной области и описаны, например, в Uhlmann et al. (1990) Chem. Rev. 90:543; S. Agrawal, Ed., Humana Press, Totowa, USA 1993; Crooke. et al. (1996) Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. 36:107-129; и Hunziker et al., (1995) Mod. Synth. Methods 7:331-417. Олигонуклеотид по изобретению может иметь одну или несколько модификации, где каждая модификация локализована в конкретном фосфодиэфирном межнуклеозидном мостике и/или в конкретном β-D-рибозном звене и/или в конкретном положении природного нуклеозидного основания, по сравнению с олигонуклеотидом такой же последовательности, которая составлена из природной ДНК или РНК.

В некоторых вариантах осуществления изобретения, содержащие CpG нуклеиновые кислоты можно просто смешивать с иммуногенными носителями в соответствии со способами, известными специалисту в данной области (см., например, WO 03/024480).

В конкретном варианте осуществления настоящего изобретения, любая из иммуногенных композиций, описанных в настоящем описании, содержит от 2 мкг до 100 мг CpG олигонуклеотида, предпочтительно, от 0,1 мг до 50 мг CpG олигонуклеотида, предпочтительно, от 0,2 мг до 10 мг CpG олигонуклеотида, предпочтительно, от 0,3 мг до 5 мг CpG олигонуклеотида, предпочтительно, от 0,3 мг до 5 мг CpG олигонуклеотида, даже более предпочтительно, от 0,5 мг до 2 мг CpG олигонуклеотида, даже более предпочтительно, от 0,75 мг до 1,5 мг CpG олигонуклеотида. В предпочтительном варианте осуществления, любая из иммуногенных композиций, описанных в настоящем описании, содержит приблизительно 1 мг CpG олигонуклеотида.

5 Состав

Иммуногенные композиции по изобретению можно составлять в жидкой форме (т.е., в форме растворов или суспензий) или в лиофилизированной форме. Жидкие составы можно преимущественно вводить непосредственно из их упакованной формы и, таким образом, они идеально подходят для инъекций без необходимости разведения в водной среде, как в ином случае необходимо для лиофилизированных композиций по изобретению.

Составление иммуногенной композиции по настоящему изобретению можно осуществлять с использованием способов, общепринятых в данной области. Например, индивидуальные пневмококковые конъюгаты можно составлять с физиологически приемлемым носителем для получения композиции. Примеры таких носителей включают, но без ограничения, воду, забуференный солевой раствор, полиолы (например, глицерин, пропиленгликоль, жидкий полиэтиленгликоль) и растворы декстрозы.

Настоящее описание относится к иммуногенной композиции, содержащей любую из комбинаций гликоконъюгатов, описанных в настоящем описании, и фармацевтически приемлемый наполнитель, носитель или разбавитель.

В одном варианте осуществления, иммуногенная композиция по изобретению находится в жидкой форме, предпочтительно в водной жидкой форме.

Иммуногенные композиции по этому описанию могут содержать одно или несколько из буфера, соли, двухвалентного катиона, неионного детергента, криопротектора, такого как сахар, и антиоксиданта, такого как ловушка свободного радикала, или хелатирующего средства, или любую из множества их комбинаций.

В одном варианте осуществления, иммуногенная композиция по изобретению содержит буфер. В одном варианте осуществления, указанный буфер имеет pKa от приблизительно 3,5 до приблизительно 7,5. В некоторых вариантах осуществления, буфер представляет собой фосфат, сукцинат, гистидин или цитрат. В конкретных вариантах осуществления, буфер представляет собой сукцинат в конечной концентрации от 1 мМ до 10 мМ. В одном конкретном варианте осуществления, конечная концентрация сукцинатного буфера составляет приблизительно 5 мМ.

В одном варианте осуществления, иммуногенная композиция по изобретению содержит соль. В некоторых вариантах осуществления, соль выбрана из группы, состоящей из хлорида магния, хлорида калия, хлорида натрия и их комбинации. В одном конкретном варианте осуществления, соль представляет собой хлорид натрия. В одном конкретном варианте осуществления, иммуногенная композиция по изобретению содержит хлорид натрия при 150 мМ.

В одном варианте осуществления, иммуногенные композиции по изобретению содержат поверхностно-активное вещество. В одном варианте осуществления, поверхностно-активное вещество выбрано из группы, состоящей из полисорбата 20 (TWEEN™20), полисорбата 40 (TWEEN™40), полисорбата 60 (TWEEN™60), полисорбата 65 (TWEEN™65), полисорбата 80 (TWEEN™80), полисорбата 85 (TWEEN™85), TRITON™ N-1 01, TRITON™ X-100, окстоксинола 40, ноноксинола-9, триэтаноламина, триэтаноламинполипептидолеата, гидроксистеарата полиоксиэтилена-660 (PEG-15, солютола H 15), полиоксиэтилен-35-рицинолеата (КРЕМОФОРА® EL), соевого лецитина и полоксамера. В одном конкретном варианте осуществления, поверхностно-активное вещество представляет собой полисорбат 80. В некоторых указанных вариантах осуществления, конечная концентрация полисорбата 80 в составе составляет по меньшей мере от 0,0001% до 10% полисорбата 80 по массе (масс./масс.). В некоторых указанных вариантах осуществления, конечная концентрация полисорбата 80 в составе составляет по меньшей мере от 0,001% до 1% полисорбата 80 по массе (масс./масс.). В некоторых указанных вариантах осуществления, конечная концентрация полисорбата 80 в составе составляет по меньшей мере от 0,01% до 1% полисорбата 80 по массе (масс./масс.). В других вариантах осуществления, конечная концентрация полисорбата 80 в составе составляет 0,01%, 0,02%, 0,03%, 0,04%, 0,05%, 0,06%, 0,07%, 0,08%, 0,09% или 0,1% полисорбата 80 (масс./масс.). В другом варианте осуществления, конечная концентрация полисорбата 80 в составе составляет 1% полисорбата 80 (масс./масс.).

В конкретных вариантах осуществления, иммуногенная композиция по изобретению имеет pH от 5,5 до 7,5, более предпочтительно, pH от 5,6 до 7,0, даже более предпочтительно, pH от 5,8 до 6,0.

В одном варианте осуществления, настоящее изобретение относится к контейнеру, наполненному любой из иммуногенных композиций, описанных в настоящем описании. В одном варианте осуществления, контейнер выбран из группы, состоящей из флакона, шприца, колбы, ферментер, биореактора, пакета, банки, ампулы, картриджа и одноразовой ручки. В конкретных вариантах осуществления, контейнер является силиконизированным.

В одном варианте осуществления, контейнер по настоящему изобретению изготовлен из стекла, металлов (например, стали, нержавеющей стали, алюминия и т.д.) и/или полимеров (например, термопластиков, эластомеров, термопластичных эластомеров). В одном варианте осуществления, контейнер по настоящему изобретению изготовлен из стекла.

В одном варианте осуществления, настоящее изобретение относится к шприцу, наполненному любой из иммуногенных композиций, описанных в настоящем описании. В конкретных вариантах осуществления, шприц является силиконизированным и/или изготовлен из стекла.

Типичная доза иммуногенной композиции по изобретению для инъекций имеет объем от 0,1 мл до 2 мл, более предпочтительно, от 0,2 мл до 1 мл, даже более предпочтительно, объем приблизительно 0,5 мл.

Таким образом контейнер или шприц как определено выше, заполняет объемом от 0,1 мл до 2 мл, более предпочтительно, от 0,2 мл до 1 мл, даже более предпочтительно, объемом приблизительно 0,5 мл, любой из иммуногенных композиций, определенных в настоящем описании.

6 Способность иммуногенных композиций по изобретению стимулировать образование антител с перекрестной активностью

В одном варианте осуществления, иммуногенная композиция по изобретению является способной стимулировать у человека образование антител IgG, которые способны связывать полисахарид S. pneumoniae серотипов 18A, 18B и/или 18F, как определено посредством анализа ELISA.

В способе ELISA (твердофазного иммуноферментного анализа), антитела из сыворотки вакцинированных пациентов инкубируют с полисахаридами, адсорбированными на твердой подложке. Связанные антитела детектируют с использованием конъюгированных с ферментом вторичных антител для детекции.

В одном варианте осуществления, указанный анализ ELISA представляет собой стандартизованный анализ ELISA, как определено WHO в «Training Manual For Enzyme Linked Immunosorbent Assay For The Quantitation Of Streptococcus Pneumoniae Serotype Specific IgG (Pn PS ELISA)». (доступном на http://www.vaccine.uab.edu/ELISA%20protocol.pdf, по состоянию на 31 марта 2014 г.).

ELISA измеряет специфические для типа антитела IgG против капсульного полисахарида S. pneumoniae (PS), присутствующие в сыворотке крови человека. Когда разведения сыворотки человека добавляют в покрытые специфическими для типа капсульными PS микропланшеты для титрования, антитела, специфические для этого капсульного PS, связываются с микропланшетами для титрования. Антитела, связанные с планшетами, детектируют с использованием меченного щелочной фосфатазой антитела козы против IgG человека, с последующим использованием п-нитрофенилфосфатного субстрата. Оптическая плотность окрашенного конечного продукта пропорциональна количеству антитела против капсульного PS, присутствующего в сыворотке.

В одном варианте осуществления, иммуногенная композиция по изобретению является способной стимулировать у человека образование антител IgG, которые способны связывать полисахарид S. pneumoniae серотипа 18A, в концентрации по меньшей мере 0,05 мкг/мл, 0,1 мкг/мл, 0,2 мкг/мл, 0,3 мкг/мл, 0,35 мкг/мл, 0,4 мкг/мл или 0,5 мкг/мл, как определено посредством анализа ELISA.

В одном варианте осуществления, иммуногенная композиция по изобретению является способной стимулировать у человека образование антител IgG, которые способны связывать полисахарид S. pneumoniae серотипа 18B, в концентрации по меньшей мере 0,05 мкг/мл, 0,1 мкг/мл, 0,2 мкг/мл, 0,3 мкг/мл, 0,35 мкг/мл, 0,4 мкг/мл или 0,5 мкг/мл, как определено посредством анализа ELISA.

В одном варианте осуществления, иммуногенная композиция по изобретению является способной стимулировать у человека образование антител IgG, которые способны связывать полисахарид S. pneumoniae серотипа 18F, в концентрации по меньшей мере 0,05 мкг/мл, 0,1 мкг/мл, 0,2 мкг/мл, 0,3 мкг/мл, 0,35 мкг/мл, 0,4 мкг/мл или 0,5 мкг/мл, как определено посредством анализа ELISA.

В одном варианте осуществления, иммуногенная композиция по изобретению является способной стимулировать у человека образование функциональных антител, способных к уничтожению S. pneumoniae серотипов 18A, 18B и/или 18F, как определено посредством опсонофагоцитирующего анализа (OPA) in vitro (см. Пример 1). В одном варианте осуществления, иммуногенная композиция по изобретению является способной стимулировать у человека образование функциональных антител, способных к уничтожению S. pneumoniae серотипа 18A, как определено посредством опсонофагоцитирующего анализа (OPA) in vitro. В одном варианте осуществления, иммуногенная композиция по изобретению является способной стимулировать у человека образование функциональных антител, способных к уничтожению S. pneumoniae серотипа 18B, как определено посредством опсонофагоцитирующего анализа (OPA) in vitro. В одном варианте осуществления, иммуногенная композиция по изобретению является способной стимулировать у человека образование функциональных антител, способных к уничтожению S. pneumoniae серотипа 18F, как определено посредством опсонофагоцитирующего анализа (OPA) in vitro. В одном варианте осуществления, иммуногенная композиция по изобретению является способной стимулировать у человека образование функциональных антител, способных к уничтожению S. pneumoniae серотипов 18A и 18B, как определено посредством опсонофагоцитирующего анализа (OPA) in vitro. В одном варианте осуществления, иммуногенная композиция по изобретению является способной стимулировать у человека образование функциональных антител, способных к уничтожению S. pneumoniae серотипов 18A и 18F, как определено посредством опсонофагоцитирующего анализа (OPA) in vitro. В одном варианте осуществления, иммуногенная композиция по изобретению является способной стимулировать у человека образование функциональных антител, способных к уничтожению S. pneumoniae серотипов 18B и 18F, как определено посредством опсонофагоцитирующего анализа (OPA) in vitro.

Опсонофагоцитирующий анализ пневмококков (OPA), измеряющий уничтожение клеток S. pneumoniae фагоцитирующими эффекторными клетками в присутствии функционального антитела и комплемента, считают важным суррогатом для оценки эффективности пневмококковых вакцин.

Опсонофагоцитирующий анализ пневмококков (OPA) in vitro можно проводить посредством совместной инкубации смеси клеток Streptococcus pneumoniae, термически инактивированной сыворотки человека, подлежащей тестированию, дифференцированных клеток HL-60 (фагоцитов) и экзогенного источника комплемента (например, комплемента детеныша кролика). Опсонофагоцитоз протекает в ходе инкубации, и бактериальные клетки, покрываемые антителом и комплементом, уничтожаются при опсонофагоцитозе. Колониеобразующие единицы (КОЕ) выживших бактерий, избежавших опсонофагоцитоза, определяют посредством высевания смеси для анализа. Титр в OPA определяют как величину, обратную разведению, приводящему к 50% уменьшению количества бактерий, по сравнению с контрольными лунками без тестируемой сыворотки. Титр в OPA интерполируют из двух разведений, включающих этот порог 50% уничтожения.

Титр в конечной точке 1:8 или более считают положительным результатом в данном типе ОРА уничтожения.

В одном варианте осуществления, иммуногенная композиция по изобретению является способной стимулировать получение титра по меньшей мере 1:8 против S. pneumoniae серотипа 18A по меньшей мере у 50% пациентов, как определено посредством анализа in vitro опсонофагоцитирующего уничтожения (OPA). В одном варианте осуществления, иммуногенная композиция по изобретению является способной стимулировать получение титра по меньшей мере 1:8 против S. pneumoniae серотипа 18A по меньшей мере у 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98% или по меньшей мере 99% пациентов, как определено посредством анализа in vitro опсонофагоцитирующего уничтожения (OPA).

В одном варианте осуществления, иммуногенная композиция по изобретению является способной стимулировать получение титра по меньшей мере 1:8 против S. pneumoniae серотипа 18B по меньшей мере у 50% пациентов, как определено посредством анализа in vitro опсонофагоцитирующего уничтожения (OPA). В одном варианте осуществления, иммуногенная композиция по изобретению является способной стимулировать получение титра по меньшей мере 1:8 против S. pneumoniae серотипа 18B по меньшей мере у 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98% или по меньшей мере 99% пациентов, как определено посредством анализа in vitro опсонофагоцитирующего уничтожения (OPA).

В одном варианте осуществления, иммуногенная композиция по изобретению является способной стимулировать получение титра по меньшей мере 1:8 против S. pneumoniae серотипа 18F по меньшей мере у 50% пациентов, как определено посредством анализа in vitro опсонофагоцитирующего уничтожения (OPA). В одном варианте осуществления, иммуногенная композиция по изобретению является способной стимулировать получение титра по меньшей мере 1:8 против S. pneumoniae серотипа 18F по меньшей мере у 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98% или по меньшей мере 99%, пациентов, как определено посредством анализа in vitro опсонофагоцитирующего уничтожения (OPA).

В некотором варианте осуществления, пациенты могут иметь специфические для серотипа титры OPA до пневмококковой вакцинации, например, из-за естественного воздействия S. pneumoniae (например, в случае взрослых пациентов).

Таким образом, можно проводить сравнение активности в OPA сыворотки до и после иммунизации иммуногенной композицией по изобретению и сравнивать по их ответу на серотипы 18A, 18B и 18F для оценки потенциального увеличения количества отвечающих (см. Пример 1).

В одном варианте осуществления, иммуногенная композиция по изобретению значительно увеличивает долю отвечающих (т.е., индивидуумов с сывороткой, имеющей титр по меньшей мере 1:8, как определено посредством OPA in vitro), по сравнению с популяцией до иммунизации.

Таким образом, в одном варианте осуществления, иммуногенная композиция по изобретению является способной значительно увеличивать долю отвечающих против S. pneumoniae серотипа 18A (т.е., индивидуумов с сывороткой, имеющей титр по меньшей мере 1:8, как определено посредством OPA in vitro), по сравнению с популяцией до иммунизации.

В одном варианте осуществления, иммуногенная композиция по изобретению является способной значительно увеличивать долю отвечающих против S. pneumoniae серотипа 18B (т.е., индивидуумов с сывороткой, имеющей титр по меньшей мере 1:8, как определено посредством OPA in vitro), по сравнению с популяцией до иммунизации.

В одном варианте осуществления, иммуногенная композиция по изобретению является способной значительно увеличивать долю отвечающих против S. pneumoniae серотипа 18F (т.е., индивидуумов с сывороткой, имеющей титр по меньшей мере 1:8, как определено посредством OPA in vitro), по сравнению с популяцией до иммунизации.

В одном варианте осуществления, иммуногенная композиция по изобретению является способной значительно увеличивать долю отвечающих против S. pneumoniae серотипов 18A и 18B (т.е., индивидуумов с сывороткой, имеющей титр по меньшей мере 1:8, как определено посредством OPA in vitro), по сравнению с популяцией до иммунизации.

В одном варианте осуществления, иммуногенная композиция по изобретению является способной значительно увеличивать долю отвечающих против S. pneumoniae серотипов 18A и 18F (т.е., индивидуумов с сывороткой, имеющей титр по меньшей мере 1:8, как определено посредством OPA in vitro), по сравнению с популяцией до иммунизации.

В одном варианте осуществления, иммуногенная композиция по изобретению является способной значительно увеличивать долю отвечающих против S. pneumoniae серотипов 18B и 18F (т.е., индивидуумов с сывороткой, имеющей титр по меньшей мере 1:8, как определено посредством OPA in vitro), по сравнению с популяцией до иммунизации.

В одном варианте осуществления, иммуногенная композиция по изобретению является способной значительно увеличивать долю отвечающих против S. pneumoniae серотипов 18A, 18B и 18F (т.е., индивидуумов с сывороткой, имеющей титр по меньшей мере 1:8, как определено посредством OPA in vitro), по сравнению с популяцией до иммунизации.

Сравнение активности в OPA сыворотки до и после иммунизации иммуногенной композицией по изобретению можно также выполнять посредством сравнения потенциального увеличения титров в OPA.

Таким образом, можно проводить сравнение активности в OPA сыворотки до и после иммунизации иммуногенной композицией по изобретению и сравнивать по их ответу на серотипы 18A, 18B и 18F для оценки потенциального увеличения титров в OPA (см. Пример 1).

В одном варианте осуществления, иммуногенные композиции по изобретению являются способными значительно увеличивать титры в OPA у пациентов-людей, по сравнению с популяцией до иммунизации.

Таким образом в одном варианте осуществления, иммуногенная композиция по изобретению является способной значительно увеличивать у пациентов-людей титры в OPA против S. pneumoniae серотипа 18A, по сравнению с популяцией до иммунизации. В одном варианте осуществления, кратность увеличения титра в OPA против S. pneumoniae серотипа 18A составляет по меньшей мере 1,5, 2,0, 3,0, 4,0, 5,0, 6,0, 7,0 7,5, 8,0 или 8,4.

В одном варианте осуществления, иммуногенная композиция по изобретению является способной значительно увеличивать у пациентов-людей титры в OPA против S. pneumoniae серотипа 18B по сравнению с популяцией до иммунизации. В одном варианте осуществления, кратность увеличения титра в OPA против S. pneumoniae серотипа 18B составляет по меньшей мере 2,0, 3,0, 4,0, 5,0, 6,0, 7,0, 8,0, 9,0, 10,0, 11,0, 12,0, 13,0, 14,0, 15,0, 15,5 или 16,0.

В одном варианте осуществления, иммуногенная композиция по изобретению является способной значительно увеличивать у пациентов-людей титры в OPA против S. pneumoniae серотипа 18F, по сравнению с популяцией до иммунизации. В одном варианте осуществления, кратность увеличения титра в OPA против S. pneumoniae серотипа 18F составляет по меньшей мере 2,0, 3,0, 3,5, 4,0, 4,5, 5,0, 5,5, 5,7 или 5,9.

В одном варианте осуществления, иммуногенная композиция по изобретению является способной значительно увеличивать у пациентов-людей титры в OPA против S. pneumoniae серотипов 18A и 18B, по сравнению с популяцией до иммунизации. В одном варианте осуществления, кратность увеличения титра в OPA против S. pneumoniae серотипа 18A составляет по меньшей мере 1,5, 2,0, 3,0, 4,0, 5,0, 6,0, 7,0 7,5, 8,0 или 8,4, и кратность увеличения титра в OPA против S. pneumoniae серотипа 18B составляет по меньшей мере 2,0, 3,0, 4,0, 5,0, 6,0, 7,0, 8,0, 9,0, 10,0, 11,0, 12,0, 13,0, 14,0, 15,0, 15,5 или 16,0. В одном варианте осуществления, кратность увеличения титра в OPA против S. pneumoniae серотипа 18A составляет по меньшей мере 8,4, и кратность увеличения титра в OPA против S. pneumoniae серотипа 18B составляет по меньшей мере 16,0.

В одном варианте осуществления, иммуногенная композиция по изобретению является способной значительно увеличивать у пациентов-людей титры в OPA против S. pneumoniae серотипов 18A и 18F, по сравнению с популяцией до иммунизации. В одном варианте осуществления, кратность увеличения титра в OPA против S. pneumoniae серотипа 18A составляет по меньшей мере 1,5, 2,0, 3,0, 4,0, 5,0, 6,0, 7,0 7,5, 8,0 или 8,4, и кратность увеличения титра в OPA против S. pneumoniae серотипа 18F составляет по меньшей мере 2,0, 3,0, 3,5, 4,0, 4,5, 5,0, 5,5, 5,7 или 5,9. В одном варианте осуществления, кратность увеличения титра в OPA против S. pneumoniae серотипа 18A составляет по меньшей мере 8,4, и кратность увеличения титра в OPA против S. pneumoniae серотипа 18F составляет по меньшей мере 5,9.

В одном варианте осуществления, иммуногенная композиция по изобретению является способной значительно увеличивать у пациентов-людей титры в OPA против S. pneumoniae серотипов 18B и 18F, по сравнению с популяцией до иммунизации. В одном варианте осуществления, кратность увеличения титра в OPA против S. pneumoniae серотипа 18B составляет по меньшей мере 2,0, 3,0, 4,0, 5,0, 6,0, 7,0, 8,0, 9,0, 10,0, 11,0, 12,0, 13,0, 14,0, 15,0, 15,5 или 16,0, и кратность увеличения титра в OPA против S. pneumoniae серотипа 18F составляет по меньшей мере 2,0, 3,0, 3,5, 4,0, 4,5, 5,0, 5,5, 5,7 или 5,9. В одном варианте осуществления, кратность увеличения титра в OPA против S. pneumoniae серотипа 18B составляет по меньшей мере 16,0, и кратность увеличения титра в OPA против S. pneumoniae серотипа 18F составляет по меньшей мере 5,9.

В одном варианте осуществления, иммуногенная композиция по изобретению является способной значительно увеличивать у пациентов-людей титры в OPA против S. pneumoniae серотипов 18A, 18B и 18F, по сравнению с популяцией до иммунизации. В одном варианте осуществления, кратность увеличения титра в OPA против S. pneumoniae серотипа 18A, составляет по меньшей мере 1,5, 2,0, 3,0, 4,0, 5,0, 6,0, 7,0 7,5, 8,0 или 8,4, кратность увеличения титра в OPA против S. pneumoniae серотипа 18B составляет по меньшей мере 2,0, 3,0, 4,0, 5,0, 6,0, 7,0, 8,0, 9,0, 10,0, 11,0, 12,0, 13,0, 14,0, 15,0, 15,5 или 16,0, и кратность увеличения титра в OPA против S. pneumoniae серотипа 18F составляет по меньшей мере 2,0, 3,0, 3,5, 4,0, 4,5, 5,0, 5,5, 5,7 или 5,9. В одном варианте осуществления, кратность увеличения титра в OPA против S. pneumoniae серотипа 18A составляет по меньшей мере 8,4, кратность увеличения титра в OPA против S. pneumoniae серотипа 18B составляет по меньшей мере 16,0, и кратность увеличения титра в OPA против S. pneumoniae серотипа 18F составляет по меньшей мере 5,9.

7 Применение иммуногенных композиций по изобретению

В одном варианте осуществления, иммуногенные композиции, описанные в настоящем описании, предназначены для использования в качестве лекарственного средства.

Иммуногенные композиции, описанные в настоящем описании, можно использовать в различных терапевтических или профилактических способах для предотвращения, лечения или облегчения бактериальной инфекции, заболевания или состояния у пациента. В частности, иммуногенные композиции, описанные в настоящем описании, можно использовать для предотвращения, лечения или облегчения инфекции S. pneumoniae, заболевания или состояния у пациента.

Таким образом, в одном аспекте изобретение относится к способу предотвращения, лечения или облегчения инфекции, заболевания или состояния, ассоциированных с S. Pneumoniae, у пациента, включающему введение пациенту иммунологически эффективного количества иммуногенной композиции по изобретению.

В одном аспекте изобретение относится к способу предотвращения, лечения или облегчения инфекции, заболевания или состояния, ассоциированных с S. pneumoniae серотипов 18A, 18B и 18F, у пациента, включающему введение пациенту иммунологически эффективного количества иммуногенной композиции по изобретению.

В одном аспекте изобретение относится к способу предотвращения, лечения или облегчения инфекции, заболевания или состояния, ассоциированных с S. pneumoniae серотипа 18A, у пациента, включающему введение пациенту иммунологически эффективного количества иммуногенной композиции по изобретению.

В одном аспекте изобретение относится к способу предотвращения, лечения или облегчения инфекции, заболевания или состояния, ассоциированных с S. pneumoniae серотипа 18B, у пациента, включающему введение пациенту иммунологически эффективного количества иммуногенной композиции по изобретению.

В одном аспекте изобретение относится к способу предотвращения, лечения или облегчения инфекции, заболевания или состояния, ассоциированных с S. pneumoniae серотипа 18F, у пациента, включающему введение пациенту иммунологически эффективного количества иммуногенной композиции по изобретению.

В одном аспекте изобретение относится к способу предотвращения, лечения или облегчения инфекции, заболевания или состояния, ассоциированных с S. pneumoniae серотипов 18A и 18B, у пациента, включающему введение пациенту иммунологически эффективного количества иммуногенной композиции по изобретению.

В одном аспекте изобретение относится к способу предотвращения, лечения или облегчения инфекции, заболевания или состояния, ассоциированных с S. pneumoniae серотипов 18A и 18F, у пациента, включающему введение пациенту иммунологически эффективного количества иммуногенной композиции по изобретению.

В одном аспекте изобретение относится к способу предотвращения, лечения или облегчения инфекции, заболевания или состояния, ассоциированных с S. pneumoniae серотипов 18B и 18F, у пациента, включающему введение пациенту иммунологически эффективного количества иммуногенной композиции по изобретению.

В одном аспекте изобретение относится к способу индукции иммунного ответа на S. pneumoniae серотипов 18A, 18B и/или 18F у пациента, включающему введение пациенту иммунологически эффективного количества иммуногенной композиции по изобретению.

В одном аспекте изобретение относится к способу индукции иммунного ответа на S. pneumoniae серотипа 18A у пациента, включающему введение пациенту иммунологически эффективного количества иммуногенной композиции по изобретению.

В одном аспекте изобретение относится к способу индукции иммунного ответа на S. pneumoniae серотипа 18B у пациента, включающему введение пациенту иммунологически эффективного количества иммуногенной композиции по изобретению.

В одном аспекте изобретение относится к способу индукции иммунного ответа на S. pneumoniae серотипа 18F у пациента, включающему введение пациенту иммунологически эффективного количества иммуногенной композиции по изобретению.

В одном аспекте иммуногенные композиции по настоящему изобретению предназначены для использования в способе предотвращения, лечения или облегчения инфекции, заболевания или состояния, вызванных S. pneumoniae серотипов 18A, 18B и/или 18F, у пациента.

В одном аспекте иммуногенные композиции по настоящему изобретению предназначены для использования в способе предотвращения, лечения или облегчения инфекции, заболевания или состояния, вызванных S. pneumoniae серотипа 18A, у пациента. В одном аспекте иммуногенные композиции по настоящему изобретению предназначены для использования в способе предотвращения, лечения или облегчения инфекции, заболевания или состояния, вызванных S. pneumoniae серотипа 18B, у пациента. В одном аспекте иммуногенные композиции по настоящему изобретению предназначены для использования в способе предотвращения, лечения или облегчения инфекции, заболевания или состояния, вызванных S. pneumoniae серотипа 18F, у пациента.

В одном аспекте иммуногенные композиции по настоящему изобретению предназначены для использования в способе предотвращения, лечения или облегчения инфекции, заболевания или состояния, вызванных S. pneumoniae серотипов 18A и 18B, у пациента. В одном аспекте иммуногенные композиции по настоящему изобретению предназначены для использования в способе предотвращения, лечения или облегчения инфекции, заболевания или состояния, вызванных S. pneumoniae серотипов 18A и 18F, у пациента. В одном аспекте иммуногенные композиции по настоящему изобретению предназначены для использования в способе предотвращения, лечения или облегчения инфекции, заболевания или состояния, вызванных S. pneumoniae серотипов 18B и 18F, у пациента.

В одном варианте осуществления, любая из иммуногенных композиций, описанных в настоящем описании, предназначена для использования в способе иммунизации пациента против инфекции S. pneumoniae серотипа 18A, 18B и/или 18F.

В одном варианте осуществления, любая из иммуногенных композиций, описанных в настоящем описании, предназначена для использования в способе иммунизации пациента против инфекции S. pneumoniae серотипа 18A. В одном варианте осуществления, любая из иммуногенных композиций, описанных в настоящем описании, предназначена для использования в способе иммунизации пациента против инфекции S. pneumoniae серотипа 18B. В одном варианте осуществления, любая из иммуногенных композиций, описанных в настоящем описании, предназначена для использования в способе иммунизации пациента против инфекции S. pneumoniae серотипа 18F.

В одном варианте осуществления, любая из иммуногенных композиций, описанных в настоящем описании, предназначена для использования в способе иммунизации пациента против инфекции S. pneumoniae серотипов 18A и 18B. В одном варианте осуществления, любая из иммуногенных композиций, описанных в настоящем описании, предназначена для использования в способе иммунизации пациента против инфекции S. pneumoniae серотипов 18A и 18F. В одном варианте осуществления, любая из иммуногенных композиций, описанных в настоящем описании, предназначена для использования в способе иммунизации пациента против инфекции S. pneumoniae серотипов 18B и 18F.

В одном аспекте настоящее изобретение относится к применению иммуногенной композиции, описанной в настоящем описании, для изготовления лекарственного средства для предотвращения, лечения или облегчения инфекции, заболевания или состояния, вызванных S. pneumoniae серотипов 18A, 18B и/или 18F, у пациента.

В одном аспекте настоящее изобретение относится к применению иммуногенной композиции, описанной в настоящем описании, для изготовления лекарственного средства для предотвращения, лечения или облегчения инфекции, заболевания или состояния, вызванных S. pneumoniae серотипов 18A и 18B, у пациента. В одном аспекте настоящее изобретение относится к применению иммуногенной композиции, описанной в настоящем описании, для изготовления лекарственного средства для предотвращения, лечения или облегчения инфекции, заболевания или состояния, вызванных S. pneumoniae серотипов 18A и 18F, у пациента. В одном аспекте настоящее изобретение относится к применению иммуногенной композиции, описанной в настоящем описании, для изготовления лекарственного средства для предотвращения, лечения или облегчения инфекции, заболевания или состояния, вызванных S. pneumoniae серотипов 18B и 18F, у пациента.

В одном варианте осуществления, настоящее изобретение относится к применению иммуногенной композиции, описанной в настоящем описании, для изготовления лекарственного средства для иммунизации пациента против инфекции S. pneumoniae серотипов 18A, 18B и/или 18F.

В одном варианте осуществления, настоящее изобретение относится к применению иммуногенной композиции, описанной в настоящем описании, для изготовления лекарственного средства для иммунизации пациента против инфекции S. pneumoniae серотипа 18A. В одном варианте осуществления, настоящее изобретение относится к применению иммуногенной композиции, описанной в настоящем описании, для изготовления лекарственного средства для иммунизации пациента против инфекции S. pneumoniae серотипа 18B. В одном варианте осуществления, настоящее изобретение относится к применению иммуногенной композиции, описанной в настоящем описании, для изготовления лекарственного средства для иммунизации пациента против инфекции S. pneumoniae серотипа 18F.

В одном варианте осуществления, настоящее изобретение относится к применению иммуногенной композиции, описанной в настоящем описании, для изготовления лекарственного средства для иммунизации пациента против инфекции S. pneumoniae серотипов 18A и 18B. В одном варианте осуществления, настоящее изобретение относится к применению иммуногенной композиции, описанной в настоящем описании, для изготовления лекарственного средства для иммунизации пациента против инфекции S. pneumoniae серотипов 18A и 18F. В одном варианте осуществления, настоящее изобретение относится к применению иммуногенной композиции, описанной в настоящем описании, для изготовления лекарственного средства для иммунизации пациента против инфекции S. pneumoniae серотипов 18B и 18F.

В одном аспекте настоящее изобретение относится к способу индукции иммунного ответа на S. pneumoniae серотипов 18A, 18B и/или 18F у пациента. В одном аспекте настоящее изобретение относится к способу индукции иммунного ответа на S. pneumoniae серотипа 18A у пациента. В одном аспекте настоящее изобретение относится к способу индукции иммунного ответа на S. pneumoniae серотипа 18B у пациента. В одном аспекте настоящее изобретение относится к способу индукции иммунного ответа на S. pneumoniae серотипа 18F у пациента. В одном варианте осуществления, иммуногенные композиции, описанные в настоящем описании, предназначены для использования в качестве вакцины. Более конкретно, иммуногенные композиции, описанные в настоящем описании, можно использовать для предотвращения инфекции S. pneumoniae серотипов 18A, 18B и/или 18F у пациента. Таким образом в одном аспекте изобретение относится к способу предотвращения инфекции S. pneumoniae серотипов 18A, 18B и/или 18F у пациента, включающему введение пациенту иммунологически эффективного количества иммуногенной композиции по изобретению. В некоторых таких вариантах осуществления, инфекция выбрана из группы, состоящей из пневмонии, синусита, среднего отита, острого среднего отита, менингита, бактериемии, сепсиса, эмпиемы плевры, конъюнктивита, остеомиелита, септического артрита, эндокардита, перитонита, перикардита, мастоидита, целлюлита, инфекции мягких тканей и абсцесса мозга. В одном аспекте пациент, подлежащий вакцинации, представляет собой млекопитающее, такое как человек, кошка, овца, свинья, лошадь, корова или собака.

В одном аспекте иммуногенные композиции, описанные в настоящем описании, предназначены для использования в способе предотвращения, лечения или облегчения инфекции, заболевания или состояния, ассоциированных с S. pneumoniae серотипов 18A, 18B и/или 18F, у пациента. В некоторых таких вариантах осуществления, инфекция, заболевание или состояние выбрано из группы, состоящей из пневмонии, синусита, среднего отита, острого среднего отита, менингита, бактериемии, сепсиса, эмпиемы плевры, конъюнктивита, остеомиелита, септического артрита, эндокардита, перитонита, перикардита, мастоидита, целлюлита, инфекции мягких тканей и абсцесса мозга.

В одном аспекте иммуногенная композиция, описанная в настоящем описании, предназначена для использования в способе предотвращения инфекции S. pneumoniae серотипов 18A, 18B и/или 18F у пациента. В некоторых таких вариантах осуществления, инфекция выбрана из группы, состоящей из пневмонии, синусита, среднего отита, острого среднего отита, менингита, бактериемии, сепсиса, эмпиемы плевры, конъюнктивита, остеомиелита, септического артрита, эндокардита, перитонита, перикардита, мастоидита, целлюлита, инфекции мягких тканей и абсцесса мозга. В одном аспекте пациент, подлежащий вакцинации, представляет собой млекопитающее, такое как человек, кошка, овца, свинья, лошадь, корова или собака.

В одном аспекте настоящее изобретение относится к применению иммуногенной композиции, описанной в настоящем описании, для изготовления лекарственного средства для предотвращения, лечения или облегчения инфекция, заболевания или состояния, ассоциированных с S. pneumoniae серотипов 18A, 18B и/или 18F, у пациента. В некоторых таких вариантах осуществления, инфекция, заболевание или состояние выбраны из группы, состоящей из пневмонии, синусита, среднего отита, острого среднего отита, менингита, бактериемии, сепсиса, эмпиемы плевры, конъюнктивита, остеомиелита, септического артрита, эндокардита, перитонита, перикардита, мастоидита, целлюлита, инфекции мягких тканей и абсцесса мозга.

В одном аспекте настоящее изобретение относится к применению иммуногенной композиции, описанной в настоящем описании, для изготовления лекарственного средства для предотвращения инфекции S. pneumoniae серотипов 18A, 18B и/или 18F у пациента. В некоторых таких вариантах осуществления, инфекция выбрана из группы, состоящей из пневмонии, синусита, среднего отита, острого среднего отита, менингита, бактериемии, сепсиса, эмпиемы плевры, конъюнктивита, остеомиелита, септического артрита, эндокардита, перитонита, перикардита, мастоидита, целлюлита, инфекции мягких тканей и абсцесса мозга. В одном аспекте пациент, подлежащий вакцинации, представляет собой млекопитающее, такое как человек, кошка, овца, свинья, лошадь, корова или собака.

Иммуногенные композиции по настоящему изобретению можно использовать для защиты или лечения человека, чувствительного к инфекции S. pneumoniae серотипов 18A, 18B и/или 18F, посредством введения иммуногенных композиций системным способом или через слизистые оболочки. В одном варианте осуществления, иммуногенные композиции, описанные в настоящем описании, вводят посредством внутримышечных, внутрибрюшинных, внутрикожных или подкожных способов. В одном варианте осуществления, иммуногенные композиции, описанные в настоящем описании, вводят посредством внутримышечной, внутрибрюшинной, внутрикожной или подкожной инъекции. В одном варианте осуществления, иммуногенные композиции, описанные в настоящем описании, вводят посредством внутримышечной или подкожной инъекции.

В одном варианте осуществления, иммуногенные композиции по настоящему описанию содержат по меньшей мере один гликоконъюгат из S. pneumoniae 9V (такой как гликоконъюгаты из раздела 1.3 выше).

8 Пациент, подлежащий лечению с использованием иммуногенных композиций по изобретению

Как описано в настоящем описании, иммуногенные композиции, описанные в настоящем описании, можно использовать в различных терапевтических или профилактических способах для предотвращения, лечения или облегчения бактериальной инфекции, заболевания или состояния у пациента.

В предпочтительном варианте осуществления, указанный пациент представляет собой человека. В наиболее предпочтительном варианте осуществления, указанный пациент представляет собой новорожденного (т.е., в возрасте до трех месяцев), младенца (т.е., в возрасте от 3 месяцев до одного года) или ребенка младшего дошкольного возраста (т.е., в возрасте от одного года до четырех лет).

В одном варианте осуществления, иммуногенные композиции, описанные в настоящем описании, предназначены для использования в качестве вакцины.

В таком варианте осуществления, пациент, подлежащий вакцинации, может иметь возраст менее 1 года. Например, пациент, подлежащий вакцинации, может иметь возраст приблизительно 1, приблизительно 2, приблизительно 3, приблизительно 4, приблизительно 5, приблизительно 6, приблизительно 7, приблизительно 8, приблизительно 9, приблизительно 10, приблизительно 11 или приблизительно 12 месяцев. В одном варианте осуществления, пациент, подлежащий вакцинации, имеет возраст приблизительно 2, 4 или 6 месяцев. В другом варианте осуществления, пациент, подлежащий вакцинации, имеет возраст менее 2 лет. Например, пациент, подлежащий вакцинации, может иметь возраст от приблизительно 12 до приблизительно 15 месяцев. В некоторых случаях, необходимо настолько мало, как одна доза иммуногенной композиции по изобретению, но в некоторых условиях, можно вводить вторую, третью или четвертую дозу (см. раздел 9 ниже).

В одном варианте осуществления настоящего изобретения, пациент, подлежащий вакцинации, представляет собой взрослого человека в возрасте 50 лет или старше, более предпочтительно, взрослого человека в возрасте 55 лет или старше. В одном варианте осуществления, пациент, подлежащий вакцинации, представляет собой взрослого человека в возрасте 65 лет или старше, 70 лет или старше, 75 лет или старше, или 80 лет или старше.

В одном варианте осуществления, пациент, подлежащий вакцинации, представляет собой индивидуума с иммунной недостаточностью, в частности, человека. Индивидуума с иммунной недостаточностью, как правило, определяют как индивидуума, имеющего ослабленную или уменьшенную способность поддерживать нормальную гуморальную или клеточную защиту против заражения инфекционными агентами.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения, пациент с иммунной недостаточностью, подлежащий вакцинации, страдает от заболевания или состояния, которое ухудшает иммунную систему и в результате приводит к ответу антител, который является недостаточным для защиты против пневмококкового заболевания или его лечения.

В одном варианте осуществления, указанное заболевание представляет собой нарушение, относящееся к первичному иммунодефициту. Предпочтительно, указанное нарушение, относящееся к первичному иммунодефициту, выбрано из группы, состоящей из: комбинированных Т- и В-клеточных иммунодефицитов, недостаточности антител, хорошо определенных синдромов, заболеваний с нарушением иммунной регуляции, нарушений фагоцитов, врожденных иммунодефицитов, аутовоспалительных нарушений и недостаточности комплемента. В одном варианте осуществления, указанное нарушение, относящееся к первичному иммунодефициту, выбрано из нарушений, описанных от страницы 24, строки 11, до страницы 25, строки 19, из WO 2010/125480.

В конкретном варианте осуществления настоящего изобретения, пациент с иммунной недостаточностью, подлежащий вакцинации, страдает заболеванием, выбранным из группы, состоящей из: инфекции HIV, синдрома приобретенного иммунодефицита (СПИД), злокачественной опухоли, хронической сердечной или легочной недостаточности, застойной сердечной недостаточности, сахарного диабета, хронического заболевания печени, алкоголизма, цирроза, протекания спинномозговой жидкости, кардиомиопатии, хронического бронхита, эмфиземы, хронического обструктивного заболевания легких (COPD), дисфункции селезенки (например, серповидно-клеточной анемии), отсутствия функции селезенки (асплении), малигнизации крови, лейкоза, множественной миеломы, болезни Ходжкина, лимфомы, почечной недостаточности, нефротического синдрома и астмы.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения, пациент с иммунной недостаточностью, подлежащий вакцинации, страдает от недостаточного питания.

В конкретном варианте осуществления настоящего изобретения, пациент с иммунной недостаточностью, подлежащий вакцинации, принимает лекарственное средство или проходит лечение, которое снижает устойчивость организма к инфекции. В одном варианте осуществления, указанное лекарственное средство выбрано из описанных от страницы 26, строки 33, до страницы 26, строки 4, из WO 2010/125480.

В конкретном варианте осуществления настоящего изобретения, пациент с иммунной недостаточностью, подлежащий вакцинации, является курильщиком.

В конкретном варианте осуществления настоящего изобретения, пациент с иммунной недостаточностью, подлежащий вакцинации, имеет количество белых кровяных клеток (количество лейкоцитов) ниже 5×10⁹ клеток на литр или ниже 4×10⁹ клеток на литр, или ниже 3×10⁹ клеток на литр, или ниже 2×10⁹ клеток на литр, или ниже 1×10⁹ клеток на литр, или ниже 0,5×10⁹ клеток на литр, или ниже 0,3×10⁹ клеток на литр, или ниже 0,1×10⁹ клеток на литр.

Количество белых кровяных клеток (количество лейкоцитов): Количество белых кровяных клеток (WBC) в крови. WBC, как правило, измеряют как часть CBC (полного анализа крови). Белые кровяные клетки представляют собой клетки в крови, борющиеся с инфекцией, и отличаются от красных (переносящих кислород) кровяных клеток, известных как эритроциты. Существуют различные типы белых кровяных клеток, включая нейтрофилы (полиморфноядерные лейкоциты; PMN), ленточные клетки (немного незрелые нейтрофилы), лимфоциты Т-типа (Т-клетки), лимфоциты В-типа (В-клетки), моноциты, эозинофилы, и базофилы. Все типы белых кровяных клеток отражены в количестве белых кровяных клеток. Нормальный диапазон для количества белых кровяных клеток, как правило, составляет между 4300 и 10800 клеток на кубический миллиметр крови. Это также может быть обозначено как количество лейкоцитов и может быть выражено в международных единицах, как 4,3-10,8×10⁹ клеток на литр.

В конкретном варианте осуществления настоящего изобретения, пациент с иммунной недостаточностью, подлежащий вакцинации, страдает нейтропенией. В конкретном варианте осуществления настоящего изобретения, пациент с иммунной недостаточностью, подлежащий вакцинации, имеет количество нейтрофилов ниже 2×10⁹ клеток на литр или ниже 1×10⁹ клеток на литр, или ниже 0,5×10⁹ клеток на литр, или ниже 0,1×10⁹ клеток на литр, или ниже 0,05×10⁹ клеток на литр.

Низкое количество белых кровяных клеток, или «нейтропения», представляет собой состояние, характеризуется аномально низким уровнем нейтрофилов в циркулирующей крови. Нейтрофилы представляют собой специфический вид белых кровяных клеток, которые помогают предотвращать инфекции и бороться с ними. Самой распространенной причиной того, что пациенты с злокачественными опухолями страдают от нейтропении, является побочный эффект химиотерапии. Нейтропения, индуцированная химиотерапией, увеличивает риск инфицирования пациента и нарушает лечение злокачественной опухоли.

В конкретном варианте осуществления настоящего изобретения, пациент с иммунной недостаточностью, подлежащий вакцинации, имеет количество CD4+ клеток ниже 500/мм³ или количество CD4+ клеток ниже 300/мм³, или количество CD4+ клеток ниже 200/мм³, количество CD4+ клеток ниже 100/мм³, количество CD4+ клеток ниже 75/мм³ или количество CD4+ клеток ниже 50/мм³.

Исследования CD4 клеток, как правило, регистрируют как количество клеток в мм³. Нормальный уровень CD4 составляет между 500 и 1600, и уровень CD8 составляет между 375 и 1100. Уровень CD4 резко падает у людей с HIV.

В одном варианте осуществления изобретения, любой из пациентов с иммунной недостаточностью, описанных в настоящем описании, представляет собой человека мужского пола или человека женского пола.

9 Режим

В некоторых случаях, необходимо настолько мало, как одна доза иммуногенной композиции по изобретению, но в некоторых условиях, таких как условия более сильного иммуннодефицита, можно вводить вторую, третью или четвертую дозу. После первичной вакцинации, пациентов можно подвергать одной или нескольким бустер-иммунизациям с адекватными промежутками.

В одном варианте осуществления, расписание вакцинации иммуногенной композицией по изобретению представляет собой однократную дозу. В конкретном варианте осуществления, указанное расписание с однократной дозой предназначено для здоровых индивидуумов в возрасте, по меньшей мере, 2 года.

В одном варианте осуществления, расписание вакцинации иммуногенной композицией по изобретению представляет собой расписание многократного дозирования. В конкретном варианте осуществления, указанное расписание многократного дозирования состоит из серий из 2 доз, разделенных интервалом от приблизительно 1 месяца до приблизительно 2 месяцев. В конкретном варианте осуществления, указанное расписание многократного дозирования состоит из серий из 2 доз, разделенных интервалом приблизительно 1 месяц, или серий из 2 доз, разделенных интервалом приблизительно 2 месяца.

В другом варианте осуществления, указанное расписание многократного дозирования состоит из серий из 3 доз, разделенных интервалом от приблизительно 1 месяца до приблизительно 2 месяцев. В другом варианте осуществления, указанное расписание многократного дозирования состоит из серий из 3 доз, разделенных интервалом приблизительно 1 месяц, или серий из 3 доз, разделенных интервалом приблизительно 2 месяца.

В другом варианте осуществления, указанное расписание многократного дозирования состоит из серий из 3 доз, разделенных интервалом приблизительно 1 месяца до приблизительно 2 месяцев, с последующей четвертой дозой от приблизительно 10 месяцев до приблизительно 13 месяцев после первой дозы. В другом варианте осуществления, указанное расписание многократного дозирования состоит из серий из 3 доз, разделенных интервалом приблизительно 1 месяц с последующей четвертой дозой от приблизительно 10 месяцев до приблизительно 13 месяцев после первой дозы, или серий из 3 доз, разделенных интервалом приблизительно 2 месяца, с последующей четвертой дозой от приблизительно 10 месяцев до приблизительно 13 месяцев после первой дозы.

В одном варианте осуществления, расписание многократного дозирования состоит из по меньшей мере одной дозы (например, 1, 2 или 3 доз) в первый год жизни, с последующей по меньшей мере одной дозой в младшем дошкольном возрасте.

В одном варианте осуществления, расписание многократного дозирования состоит из серий из 2 или 3 доз, разделенных интервалом от приблизительно 1 месяца до приблизительно 2 месяцев (например, 28-56 суток между дозами), начиная с возраста 2 месяцев, и с последующей дозой в младшем дошкольном возрасте 12-18 месяцев. В одном варианте осуществления, указанное расписание многократного дозирования состоит из серий из 3 доз, разделенных интервалом приблизительно 1-2 месяца (например, 28-56 суток между дозами), начиная с возраста 2 месяцев, и с последующей дозой в младшем дошкольном возрасте 12-15 месяцев. В другом варианте осуществления, указанное расписание многократного дозирования состоит из серий из 2 доз, разделенных интервалом приблизительно 2 месяца, начиная с возраста 2 месяцев, и с последующей дозой в младшем дошкольном возрасте 12-18 месяцев.

В одном варианте осуществления, расписание многократного дозирования состоит из серий из 4 доз вакцины в возрасте 2, 4, 6 и 12-15 месяцев.

В одном варианте осуществления, примирующую дозу вводят на сутки 0, и одну или несколько бустерных доз вводят с интервалами, лежащими в диапазоне от приблизительно 2 до приблизительно 24 недель, предпочтительно, с интервалом дозирования 4-8 недель.

В одном варианте осуществления, примирующую дозу вводят на сутки 0, и бустерную дозу вводят приблизительно через 3 месяца.

10 Набор и способ

В одном варианте осуществления, изобретение относится к набору, содержащему иммуногенную композицию, описанную в настоящем описании, и информационный листок.

В одном варианте осуществления, в указанном информационном листке упомянута способность композиции стимулировать образование функциональных антител против S. pneumoniae серотипов 18B, 18F и/или 18A.

В одном варианте осуществления, в указанном информационном листке упомянута способность композиции стимулировать образование функциональных антител против S. pneumoniae серотипа 18A.

В одном варианте осуществления, в указанном информационном листке упомянута способность композиции стимулировать образование антител против капсульных полисахаридов S. pneumoniae серотипов 18B, 18F и/или 18A в концентрации ≥ 0,35 мкг/мл в человеческой популяции.

В одном варианте осуществления, в указанном информационном листке упомянута способность композиции стимулировать образование антител против капсульных полисахаридов S. pneumoniae серотипа 18A в концентрации ≥ 0,35 мкг/мл в человеческой популяции.

В одном варианте осуществления, в указанном информационном листке упомянута способность композиции стимулировать получение титров в OPA против S. pneumoniae серотипов 18B, 18F и/или 18A в человеческой популяции.

В одном варианте осуществления, в указанном информационном листке упомянута способность композиции стимулировать получение титров в OPA против S. pneumoniae серотипов 18A в человеческой популяции.

В одном варианте осуществления, изобретение относится к способу изготовления набора, содержащего иммуногенную композицию и информационный листок, включающему стадии:

- получения иммуногенной композиции по настоящему описанию и

- объединения в одном и том же наборе указанной иммуногенной композиции и информационного листка, где в указанном информационном листке упомянута способность указанной композиции стимулировать образование функциональных антител против S. pneumoniae серотипов 18B, 18F и/или 18A.

В одном варианте осуществления, изобретение относится к способу изготовления набора, содержащего иммуногенную композицию и информационный листок, включающему стадии:

- получения иммуногенной композиции по настоящему описанию и

- объединения в одном и том же наборе указанной иммуногенной композиции и информационного листка, где в указанном информационном листке упомянута способность композиции стимулировать образование антител против капсульных полисахаридов S. pneumoniae серотипов 18B, 18F и/или 18A в концентрации ≥ 0,35 мкг/мл в человеческой популяции.

В одном варианте осуществления, изобретение относится к способу изготовления набора, содержащего иммуногенную композицию и информационный листок, включающему стадии:

- получения иммуногенной композиции по настоящему описанию и

- объединения в одном и том же наборе указанной иммуногенной композиции и информационного листка, где в указанном информационном листке упомянута способность композиции стимулировать получение титров в OPA против S. pneumoniae серотипов 18B, 18F и/или 18A в человеческой популяции.

В одном варианте осуществления, изобретение относится к способу изготовления набора, содержащего иммуногенную композицию и информационный листок, включающему стадии:

- получения иммуногенной композиции по настоящему описанию;

- печати информационного листка, где в указанном информационном листке упомянута способность указанной композиции стимулировать образование функциональных антител против S. pneumoniae серотипов 18B, 18F и/или 18A;

- объединения в одном и том же наборе указанной иммуногенной композиции и указанного информационного листка.

В одном варианте осуществления, изобретение относится к способу изготовления набора, содержащего иммуногенную композицию и информационный листок, включающему стадии:

- получения иммуногенной композиции по настоящему описанию;

- печати информационного листка, где в указанном информационном листке упомянута способность композиции стимулировать образование антител против капсульных полисахаридов S. pneumoniae серотипов 18B, 18F и/или 18A в концентрации ≥ 0,35 мкг/мл в человеческой популяции;

- объединения в одном и том же наборе указанной иммуногенной композиции и указанного информационного листка.

В одном варианте осуществления, изобретение относится к способу изготовления набора, содержащего иммуногенную композицию и информационный листок, включающему стадии:

- получения иммуногенной композиции по настоящему описанию;

- печати информационного листка, где в указанном информационном листке упомянута способность композиции стимулировать получение титров в OPA против S. pneumoniae серотипов 18B, 18F и/или 18A в человеческой популяции;

- объединения в одном и том же наборе указанной иммуногенной композиции и указанного информационного листка.

11 Способы

В одном варианте осуществления, изобретение относится к способу, содержащему стадии:

- инъекции пациенту иммунологически эффективного количества любой из иммуногенных композиций, определенных в настоящем описании;

- сбора образца сыворотки от указанного пациента;

- тестирования указанного образца сыворотки по активности опсонофагоцитирующего уничтожения против S. pneumoniae серотипа 18A посредством анализа опсонофагоцитирующего уничтожения (OPA) in vitro.

В одном варианте осуществления, изобретение относится к способу, содержащему стадии:

- инъекции пациенту иммунологически эффективного количества любой из иммуногенных композиций, определенных в настоящем описании;

- сбора образца сыворотки от указанного пациента;

- тестирования указанного образца сыворотки по активности опсонофагоцитирующего уничтожения против S. pneumoniae серотипа 18B посредством анализа опсонофагоцитирующего уничтожения (OPA) in vitro.

В одном варианте осуществления, изобретение относится к способу, содержащему стадии:

- инъекции пациенту иммунологически эффективного количества любой из иммуногенных композиций, определенных в настоящем описании;

- сбора образца сыворотки от указанного пациента;

- тестирования указанного образца сыворотки по активности опсонофагоцитирующего уничтожения против S. pneumoniae серотип 18F посредством анализа опсонофагоцитирующего уничтожения (OPA) in vitro.

В одном варианте осуществления, изобретение относится к способу, содержащему стадии:

- инъекции пациенту иммунологически эффективного количества любой из иммуногенных композиций, определенных в настоящем описании;

- сбора образца сыворотки от указанного пациента;

- тестирования указанного образца сыворотки по активности опсонофагоцитирующего уничтожения против S. pneumoniae серотипов 18A, 18B и/или 18F посредством анализа опсонофагоцитирующего уничтожения (OPA) in vitro.

12 Изобретение относится также к следующим вариантам осуществления, как определено в следующих пронумерованных абзацах 1-103

1. Иммуногенная композиция, содержащая по меньшей мере один гликоконъюгат из S. pneumoniae серотипа 18C, для использования в способе иммунизации пациента против инфекции S. pneumoniae серотипов 18A, 18B и/или 18F.

2. Иммуногенная композиция из абзаца 1, где указанная композиция не содержит капсульный сахарид из S. pneumoniae серотипа 18A.

3. Иммуногенная композиция из любого из абзацев 1-2, где указанная композиция не содержит капсульный сахарид из S. pneumoniae серотип 18B.

4. Иммуногенная композиция из любого из абзацев 1-3, где указанная композиция не содержит капсульный сахарид из S. pneumoniae серотип 18F.

5. Иммуногенная композиция из абзаца 1, где указанная композиция не содержит капсульный сахарид из S. pneumoniae серотипов 18A, 18B и 18F

6. Иммуногенная композиция из любого из абзацев 1-5, дополнительно содержащая по меньшей мере один гликоконъюгат из S. pneumoniae серотипа 4.

7. Иммуногенная композиция из любого из абзацев 1-6, дополнительно содержащая по меньшей мере один гликоконъюгат из S. pneumoniae серотипа 6B.

8. Иммуногенная композиция из любого из абзацев 1-7, дополнительно содержащая по меньшей мере один гликоконъюгат из S. pneumoniae серотип 9V.

9. Иммуногенная композиция из любого из абзацев 1-8, дополнительно содержащая по меньшей мере один гликоконъюгат из S. pneumoniae серотипа 14.

10. Иммуногенная композиция из любого из абзацев 1-9, дополнительно содержащая по меньшей мере один гликоконъюгат из S. pneumoniae серотипа 19F.

11. Иммуногенная композиция из любого из абзацев 1-10, дополнительно содержащая по меньшей мере один гликоконъюгат из S. pneumoniae серотипа 23F.

12. Иммуногенная композиция из любого из абзацев 1-5, дополнительно содержащая гликоконъюгаты из S. pneumoniae серотипов 4, 6B, 9V, 14, 19F и 23F.

13. Иммуногенная композиция из любого из абзацев 1-12, дополнительно содержащая по меньшей мере один гликоконъюгат из S. pneumoniae серотипа 1.

14. Иммуногенная композиция из любого из абзацев 1-13, дополнительно содержащая по меньшей мере один гликоконъюгат из S. pneumoniae серотипа 5.

15. Иммуногенная композиция из любого из абзацев 1-14, дополнительно содержащая по меньшей мере один гликоконъюгат из S. pneumoniae серотипа 7F.

16. Иммуногенная композиция из любого из абзацев 1-15, дополнительно содержащая гликоконъюгаты из S. pneumoniae серотипов 1, 5 и 7F.

17. Иммуногенная композиция из любого из абзацев 1-16, дополнительно содержащая по меньшей мере один гликоконъюгат из S. pneumoniae серотипа 6A.

18. Иммуногенная композиция из любого из абзацев 1-17, дополнительно содержащая по меньшей мере один гликоконъюгат из S. pneumoniae серотипа 19A.

19. Иммуногенная композиция из любого из абзацев 1-15, дополнительно содержащая гликоконъюгаты из S. pneumoniae серотипов 6A и 19A.

20. Иммуногенная композиция из любого из абзацев 1-19, дополнительно содержащая по меньшей мере один гликоконъюгат из S. pneumoniae серотипа 3.

21. Иммуногенная композиция из любого из абзацев 1-20, дополнительно содержащая по меньшей мере один гликоконъюгат из S. pneumoniae серотипа 15B.

22. Иммуногенная композиция из любого из абзацев 1-21, дополнительно содержащая по меньшей мере один гликоконъюгат из S. pneumoniae серотипа 22F.

23. Иммуногенная композиция из любого из абзацев 1-22, дополнительно содержащая по меньшей мере один гликоконъюгат из S. pneumoniae серотипа 33F.

24. Иммуногенная композиция из любого из абзацев 1-23, дополнительно содержащая по меньшей мере один гликоконъюгат из S. pneumoniae серотипа 12F.

25. Иммуногенная композиция из любого из абзацев 1-24, дополнительно содержащая по меньшей мере один гликоконъюгат из S. pneumoniae серотипа 10A.

26. Иммуногенная композиция из любого из абзацев 1-25, дополнительно содержащая по меньшей мере один гликоконъюгат из S. pneumoniae серотипа 11A.

27. Иммуногенная композиция из любого из абзацев 1-26, дополнительно содержащая по меньшей мере один гликоконъюгат из S. pneumoniae серотипа 8.

28. Иммуногенная композиция из любого из абзацев 1-20, дополнительно содержащая гликоконъюгаты из S. pneumoniae серотипов 22F и 33F.

29. Иммуногенная композиция из любого из абзацев 1-20, дополнительно содержащая гликоконъюгаты из S. pneumoniae серотипов 15B, 22F и 33F.

30. Иммуногенная композиция из любого из абзацев 1-23, дополнительно содержащая гликоконъюгаты из S. pneumoniae серотипов 12F, 10A, 11A и 8.

31. Иммуногенная композиция из любого из абзацев 1-30, дополнительно содержащая по меньшей мере один гликоконъюгат из S. pneumoniae серотипа 2.

32. Иммуногенная композиция из любого из абзацев 1-31, дополнительно содержащая по меньшей мере один гликоконъюгат из S. pneumoniae серотипа 17F.

33. Иммуногенная композиция из любого из абзацев 1-32, дополнительно содержащая по меньшей мере один гликоконъюгат из S. pneumoniae серотипа 20.

34. Иммуногенная композиция из любого из абзацев 1-30, дополнительно содержащая гликоконъюгаты из S. pneumoniae серотипов 2, 17F и 20.

35. Иммуногенная композиция из любого из абзацев 1-34, дополнительно содержащая по меньшей мере один гликоконъюгат из S. pneumoniae серотипа 15C.

36. Иммуногенная композиция из любого из абзацев 1-35, дополнительно содержащая по меньшей мере один гликоконъюгат из S. pneumoniae серотипа 9N.

37. Иммуногенная композиция из любого из абзацев 1-36, представляющая собой 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 или 25-валентную композицию пневмококковых конъюгатов.

38. Иммуногенная композиция из любого из абзацев 1-36, представляющая собой 14, 15, 16, 17, 18, 19 или 20-валентную композицию пневмококковых конъюгатов.

39. Иммуногенная композиция из любого из абзацев 1-36, представляющая собой 16-валентную композицию пневмококковых конъюгатов.

40. Иммуногенная композиция из любого из абзацев 1-36, представляющая собой 20-валентную композицию пневмококковых конъюгатов.

41. Иммуногенная композиция из любого из абзацев 1-40, где указанные гликоконъюгаты являются индивидуально конъюгированными с CRM₁₉₇.

42. Иммуногенная композиция из любого из абзацев 1-40, где все гликоконъюгаты являются индивидуально конъюгированными с CRM₁₉₇.

43. Иммуногенная композиция из любого из абзацев 1-40, где гликоконъюгаты из S. pneumoniae серотипов 1, 4, 5, 6B, 7F, 9V, 14 и/или 23F являются индивидуально конъюгированными с PD.

44. Иммуногенная композиция из любого из абзацев 1-40 или 43, где гликоконъюгат из S. pneumoniae серотипа 18C является конъюгированным с TT.

45. Иммуногенная композиция из любого из абзацев 10-40 или 43-44, где гликоконъюгат из S. pneumoniae серотипа 19F является конъюгированным с DT.

46. Иммуногенная композиция из любого из абзацев 1-40, где гликоконъюгат из S. pneumoniae серотипа 18C является конъюгированным с CRM₁₉₇.

47. Иммуногенная композиция из любого из абзацев 1-46, где указанные гликоконъюгаты получают с использованием химических реакций CDAP.

48. Иммуногенная композиция из любого из абзацев 1-46, где указанные гликоконъюгаты получают посредством восстановительного аминирования.

49. Иммуногенная композиция из любого из абзацев 1-48, где указанный гликоконъюгат из S. pneumoniae серотипа 18C получают посредством восстановительного аминирования.

50. Иммуногенная композиция из любого из абзацев 1-49, где указанный гликоконъюгат из S. pneumoniae серотипа 18C содержит сахарид, имеющий степень O-ацетилирования ≤ 10%.

51. Иммуногенная композиция из любого из абзацев 1-50, где указанный гликоконъюгат из S. pneumoniae серотипа 18C имеет молекулярную массу между 150 кДа и 2000 кДа.

52. Иммуногенная композиция из любого из абзацев 1-51, где указанная иммуногенная композиция дополнительно содержит антигены из других патогенов.

53. Иммуногенная композиция из любого из абзацев 1-51, где указанная иммуногенная композиция дополнительно содержат антигены, выбранные из: дифтерийного анатоксина (D), столбнячного анатоксина (T), коклюшного антигена (P), который, как правило, является бесклеточным (Pa), поверхностного антигена (HBsAg) вируса гепатита B (HBV), антигена вируса гепатита A (HAV), конъюгированного капсульного сахарида Haemophilus influenzae типа b (Hib), инактивированной вакцины на основе вируса полиомиелита (IPV).

54. Иммуногенная композиция из любого из абзацев 1-53, где указанная иммуногенная композиция дополнительно содержит по меньшей мере один адъювант, наиболее предпочтительно, любой из адъювантов, описанных в настоящем описании.

55. Иммуногенная композиция из любого из абзацев 1-53, где указанная иммуногенная композиция дополнительно содержит по меньшей мере один адъювант, выбранный из группы, состоящей из фосфата алюминия, сульфата алюминия и гидроксида алюминия.

56. Иммуногенная композиция из любого из абзацев 1-53, где указанная иммуногенная композиция содержит от 0,1 мг/мл до 1 мг/мл элементарного алюминия в форме фосфата алюминия в качестве адъюванта.

57. Иммуногенная композиция из любого из абзацев 1-56, которая является способной стимулировать у человека образование антител IgG, которые способны связывать полисахарид S. pneumoniae серотипа 18A, в концентрации по меньшей мере 0,35 мкг/мл, как определено посредством анализа ELISA.

58. Иммуногенная композиция из любого из абзацев 1-57, которая является способной стимулировать у человека образование антител IgG, которые способны связывать полисахарид S. pneumoniae серотипа 18B, в концентрации по меньшей мере 0,35 мкг/мл, как определено посредством анализа ELISA.

59. Иммуногенная композиция из любого из абзацев 1-58, которая является способной стимулировать у человека образование антител IgG, которые способны связывать полисахарид S. pneumoniae серотипа 18F, в концентрации по меньшей мере 0,35 мкг/мл, как определено посредством анализа ELISA.

60. Иммуногенная композиция из любого из абзацев 1-59, которая является способной стимулировать у человека образование функциональных антител, способных к уничтожению S. pneumoniae серотипов 18A, 18B и/или 18F, как определено посредством опсонофагоцитирующего анализа (OPA) in vitro.

61. Иммуногенная композиция из любого из абзацев 1-60, которая является способной стимулировать получение титра по меньшей мере 1:8 против S. pneumoniae серотипа 18A по меньшей мере у 50% пациентов, как определено посредством анализа in vitro опсонофагоцитирующего уничтожения (OPA).

62. Иммуногенная композиция из любого из абзацев 1-61, которая является способной стимулировать получение титра по меньшей мере 1:8 против S. pneumoniae серотипа 18B по меньшей мере у 50% пациентов, как определено посредством анализа in vitro опсонофагоцитирующего уничтожения (OPA).

63. Иммуногенная композиция из любого из абзацев 1-62, которая является способной стимулировать получение титра по меньшей мере 1:8 против S. pneumoniae серотипа 18F по меньшей мере у 50% пациентов, как определено посредством анализа in vitro опсонофагоцитирующего уничтожения (OPA).

64. Иммуногенная композиция из любого из абзацев 1-63, которая является способной значительно увеличивать долю отвечающих против S. pneumoniae серотипа 18A, по сравнению с популяцией до иммунизации.

65. Иммуногенная композиция из любого из абзацев 1-64, которая является способной значительно увеличивать долю отвечающих против S. pneumoniae серотипа 18B, по сравнению с популяцией до иммунизации.

66. Иммуногенная композиция из любого из абзацев 1-65, которая является способной значительно увеличивать долю отвечающих против S. pneumoniae серотипа 18F, по сравнению с популяцией до иммунизации

67. Иммуногенная композиция из любого из абзацев 1-66, которая является способной значительно увеличивать у пациентов-людей титры в OPA против S. pneumoniae серотипа 18A, по сравнению с популяцией до иммунизации.

68. Иммуногенная композиция из любого из абзацев 1-67, которая является способной значительно увеличивать у пациентов-людей титры в OPA против S. pneumoniae серотипа 18B, по сравнению с популяцией до иммунизации.

69. Иммуногенная композиция из любого из абзацев 1-68, которая является способной значительно увеличивать у пациентов-людей титры в OPA против S. pneumoniae серотипа 18F, по сравнению с популяцией до иммунизации.

70. Иммуногенная композиция из любого из абзацев 1-69 для использования в способе иммунизации пациента против инфекции S. pneumoniae серотипа 18A.

71. Иммуногенная композиция из любого из абзацев 1-69 для использования в способе иммунизации пациента против инфекции S. pneumoniae серотипа 18B.

72. Иммуногенная композиция из любого из абзацев 1-69 для использования в способе иммунизации пациента против инфекции S. pneumoniae серотипа 18F.

73. Иммуногенная композиция из любого из абзацев 1-69 для использования в способе иммунизации пациента против инфекции S. pneumoniae серотипов 18A и 18B.

74. Иммуногенная композиция из любого из абзацев 1-69 для использования в способе иммунизации пациента против инфекции S. pneumoniae серотипов 18A и 18F.

75. Иммуногенная композиция из любого из абзацев 1-69 для использования в способе иммунизации пациента против инфекции S. pneumoniae серотипов 18B и 18F.

76. Иммуногенная композиция из любого из абзацев 1-69 для использования в способе иммунизации пациента против инфекции S. pneumoniae серотипов 18A, 18B и 18F.

77. Иммуногенная композиция из любого из абзацев 1-69 для использования в способе предотвращения, лечения или облегчения инфекции, заболевания или состояния, вызванных S. pneumoniae серотипов 18A, 18B и/или 18F, у пациента.

78. Иммуногенная композиция из любого из абзацев 1-69 для использования для предотвращения инфекции S. pneumoniae серотипов 18A, 18B и/или 18F у пациента.

79. Иммуногенная композиция из любого из абзацев 1-69 для использования в способе защиты или лечения человека, чувствительного к инфекции S. pneumoniae серотипов 18A, 18B и/или 18F, посредством введения указанных иммуногенных композиций системным способом или через слизистые оболочки.

80. Способ предотвращения, лечения или облегчения инфекции, заболевания или состояния, ассоциированных с S. pneumoniae серотипов 18A, 18B и/или 18F у пациента, включающий введение пациенту иммунологически эффективного количества иммуногенной композиции из любого из абзацев 1-69.

81. Способ предотвращения инфекции S. pneumoniae серотипов 18A, 18B и/или 18F у пациента, включающий введение пациенту иммунологически эффективного количества иммуногенной композиции из любого из абзацев 1-69.

82. Иммуногенная композиция из любого из абзацев 1-69, где указанный пациент представляет собой человека в возрасте менее 1 года.

83. Иммуногенная композиция из любого из абзацев 1-69, где указанный пациент представляет собой человека в возрасте менее 2 лет.

84. Иммуногенная композиция из любого из абзацев 1-69, где указанный пациент представляет собой человека в возрасте 50 лет или старше.

85. Иммуногенная композиция из любого из абзацев 1-84 для использования в расписании вакцинации с многократными дозами.

86. Набор, содержащий иммуногенную композицию, описанную в настоящем описании, и информационный листок.

87. Набор, содержащий иммуногенную композицию из любого из абзацев 1-69 и информационный листок.

88. Набор из абзаца 86 или 87, где в указанном информационном листке упомянута способность композиции стимулировать образование функциональных антител против S. pneumoniae серотипов 18B, 18F и/или 18A.

89. Набор из абзаца 86 или 87, где в указанном информационном листке упомянута способность композиции стимулировать образование функциональных антител против S. pneumoniae серотипа 18A.

90. Набор из абзаца 86 или 87, где в указанном информационном листке упомянута способность композиции стимулировать образование антител против капсульных полисахаридов S. pneumoniae серотипов 18B, 18F и/или 18A в концентрации ≥ 0,35 мкг/мл в человеческой популяции.

91. Набор из абзаца 86 или 87, где в указанном информационном листке упомянута способность композиции стимулировать образование антител против капсульных полисахаридов S. pneumoniae серотип 18A в концентрации ≥ 0,35 мкг/мл в человеческой популяции.

92. Набор из любого из абзацев 86-91, где в указанном информационном листке упомянута способность композиции стимулировать получение титров в OPA против S. pneumoniae серотипов 18B, 18F и/или 18A в человеческой популяции.

93. Способ изготовления набора, содержащего иммуногенную композицию и информационный листок, включающий стадии:

-получения иммуногенной композиции из любого из абзацев 1-69 и

-объединения в одном и том же наборе указанной иммуногенной композиции и информационного листка, где в указанном информационном листке упомянута способность указанной композиции стимулировать образование функциональных антител против S. pneumoniae серотипов 18B, 18F и/или 18A.

94. Способ изготовления набора, содержащего иммуногенную композицию и информационный листок, включающий стадии:

-получения иммуногенной композиции из любого из абзацев 1-69 и

- объединения в одном и том же наборе указанной иммуногенной композиции и информационного листка, где в указанном информационном листке упомянута способность композиции стимулировать образование антител против капсульных полисахаридов S. pneumoniae серотипов 18B, 18F и/или 18A в концентрации ≥ 0,35 мкг/мл в человеческой популяции.

95. Способ изготовления набора, содержащего иммуногенную композицию и информационный листок, включающий стадии:

-получения иммуногенной композиции из любого из абзацев 1-69 и

- объединения в одном и том же наборе указанной иммуногенной композиции и информационного листка, где в указанном информационном листке упомянута способность композиции стимулировать получение титров в OPA против S. pneumoniae серотипов 18B, 18F и/или 18A в человеческой популяции.

96. Способ изготовления набора, содержащего иммуногенную композицию и информационный листок, включающий стадии:

- получения иммуногенной композиции из любого из абзацев 1-69;

- печати информационного листка, где в указанном информационном листке упомянута способность указанной композиции стимулировать образование функциональных антител против S. pneumoniae серотипов 18B, 18F и/или 18A;

- объединения в одном и том же наборе указанной иммуногенной композиции и указанного информационного листка.

97. Способ изготовления набора, содержащего иммуногенную композицию и информационный листок, включающий стадии:

- получения иммуногенной композиции из любого из абзацев 1-69;

- печати информационного листка, где в указанном информационном листке упомянута способность композиции стимулировать образование антител против капсульных полисахаридов S. pneumoniae серотипов 18B, 18F и/или 18A в концентрации ≥ 0,35 мкг/мл в человеческой популяции;

- объединения в одном и том же наборе указанной иммуногенной композиции и указанного информационного листка.

98. Способ изготовления набора, содержащего иммуногенную композицию и информационный листок, включающий стадии:

- получения иммуногенной композиции из любого из абзацев 1-69;

- печати информационного листка, где в указанном информационном листке упомянута способность композиции стимулировать получение титров в OPA против S. pneumoniae серотипов 18B, 18F и/или 18A в человеческой популяции;

- объединения в одном и том же наборе указанной иммуногенной композиции и указанного информационного листка.

99. Способ, включающий стадии:

- инъекции пациенту иммунологически эффективного количества иммуногенной композиции, определенной в любом из абзацев 1-69;

- сбора образца сыворотки от указанного пациента;

- тестирования указанного образца сыворотки по активности опсонофагоцитирующего уничтожения против S. pneumoniae серотипов 18A, 18B и/или 18F посредством анализа опсонофагоцитирующего уничтожения (OPA) in vitro.

100. Способ индукции иммунного ответа на S. pneumoniae серотипов 18A, 18B и/или 18F у пациента, включающий введение пациенту иммунологически эффективного количества иммуногенной композиции из любого из абзацев 1-69.

101. Применение иммуногенной композиции из любого из абзацев 1-69 для изготовления лекарственного средства для иммунизации пациента против инфекции S. pneumoniae серотипов 18A, 18B и/или 18F.

102. Применение иммуногенной композиции из любого из абзацев 1-69 для изготовления лекарственного средства для предотвращения, лечения или облегчения инфекции, заболевания или состояния, вызванных S. pneumoniae серотипов 18A, 18B и/или 18F у пациента.

103. Применение иммуногенной композиции из любого из абзацев 1-69 для изготовления лекарственного средства для предотвращения инфекции S. pneumoniae серотипов 18A, 18B и/или 18F у пациента.

Как применяют в настоящем описании, термин «приблизительно» означает в пределах статистически значимого диапазона значения, такого как указанный диапазон концентраций, временные рамки, молекулярная масса, температура или pH. Такой диапазон может лежать в пределах порядка величины, как правило, в пределах 20%, более конкретно, в пределах 10%, и даже более конкретно, в пределах 5% или в пределах 1% от данного значения или диапазона. Иногда такой диапазон может лежать в пределах погрешности эксперимента, типичной для стандартных способов, используемых для измерения и/или определения данного значения или диапазона. Допустимое отклонение, охватываемое термином «приблизительно», зависит от конкретной исследуемой системы, и может быть легко оценено специалистом в данной области. При каждом упоминании диапазона в рамках этой заявки, каждое целое число в пределах диапазона также предусмотрено в качестве варианта осуществления изобретения.

Термины «содержащий», «содержат» и «содержит» в настоящем описании предназначены авторами изобретения, чтобы являться, необязательно, взаимозаменяемыми с терминами «состоящий из», «состоят из» и «состоит из», соответственно, в каждом случае.

Содержание всех ссылок или патентных заявок, процитированных в этом описании патента, приведено в настоящем описании в качестве ссылки.

Изобретение проиллюстрировано сопровождающими примерами. Примеры ниже осуществляют с использованием стандартных способов, которые являются хорошо известными и общепринятыми для специалиста в данной области, за исключением того, что подробно описано иным образом. Эти примеры являются иллюстрирующими, а не ограничивающими изобретение.

ПРИМЕР

Пример 1. Оценка перекрестно реактивных опсонофагоцитирующих иммунных ответов внутри серогруппы 18 Streptococcus pneumoniae

Защита хозяина против S. pneumoniae опосредована в первую очередь зависимым от антител против капсульных полисахаридов опсонофагоцитозом. Опсонофагоцитирующий анализ пневмококков (OPA), измеряющий уничтожение клеток S. pneumoniae фагоцитирующими эффекторными клетками в присутствии функционального антитела и комплемента, считают важным суррогатом для оценки эффективности пневмококковых вакцин.

Материалы и способы

Сыворотка

Две случайно выбранные подгруппы иммунной сыворотки от взрослых, вакцинированных 13-валентной пневмококковой конъюгированной вакциной (13vPnC), тестировали в анализах OPA для серотипов 18F, 18A, 18B и 18C. Сыворотки были собраны в клинических исследованиях США 6115A1-004 (N=59, после вакцинации) и 6115A1-3005 (N=66, совпадающие образцы до и после вакцинации), соответственно.

Исследование 6115A1-3005 (идентификатор в ClinicalTrials.gov: NCT00546572) представляло собой рандомизированное, модифицированное двойное слепое исследование фазы 3, с активным препаратом в качестве контроля, оценивающее безопасность, переносимость и иммуногенность PREVNAR 13^®, по сравнению с 23-валентной пневмококковой полисахаридной вакциной (23vPS), у амбулаторных пожилых индивидуумов в возрасте 70 лет и старше, которым вводили 1 дозу 23vPS по меньшей мере за 5 лет до включения в исследование (см. http://clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT00546572, по состоянию на 4 октября 2016 г.).

Исследование 6115A1-004 (идентификатор в ClinicalTrials.gov: NCT00427895) представляло собой рандомизированное, модифицированное двойное слепое исследование фазы 3, с активным препаратом в качестве контроля, оценивающее безопасность, переносимость и иммуногенность 13-валентной пневмококковой конъюгированной вакцины (13vPnC), по сравнению с 23-валентной пневмококковой полисахаридной вакциной (23vPS) у взрослых в возрасте 60-64 года, наивных по 23vPS, и безопасность, переносимость и иммуногенность 13vPnC у взрослых в возрасте 18-59 лет, наивных по 23vPS (см.: http://clinicaltrials.gov/show/NCT00427895, по состоянию на 4 октября 2016 г.).

13-валентная пневмококковая конъюгированная вакцина (13vPnC), тестированная в этих исследованиях, содержала конъюгаты из пневмококков серотипов 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 18C, 19A, 19F и 23F, индивидуально конъюгированных с белком-носителем - перекрестно реагирующим с дифтерийным анатоксином материалом 197 (CRM₁₉₇) (Prevenar 13 ®).

Способ опсонофагоцитирующего анализа микроколоний (mcOPA)

Опсонофагоцитирующие анализы (OPA) использовали для измерения уровня функциональных антител в сыворотке человека против S. pneumoniae серотипов 18F, 18A, 18B и/или 18C. Тестируемую сыворотку подвергали реакциям анализа, измеряющим способность специфического для капсульного полисахарида иммуноглобулина опсонизировать бактерии, запускать накопление комплемента, таким образом, способствуя фагоцитозу и уничтожению бактерий фагоцитами. Титр в OPA определяют как величину, обратную разведению, приводящему к 50% уменьшению количества бактерий, по сравнению с контрольными лунками без тестируемой сыворотки. Титр в OPA интерполируют из двух разведений, включающих этот порог 50% уничтожения.

Способы OPA основаны на способах, описанных в Hu et al., (2005) Clin Diagn Lab Immunol12:287-295.

Опсонофагоцитирующий анализ микроколоний количественно оценивает функциональные антитела против S. pneumoniae посредством измерения выживаемости бактериальный в реакциях микроколоний OPA (mcOPA), содержащих тестируемую сыворотку. Серийные разведения (в 2,5 раза) инактивированной нагреванием сыворотки добавляли к бактериям-мишеням в анализируемых планшетах и инкубировали в течение 30 минут при встряхивании. Комплемент детеныша кролика (в возрасте 3-4 недели, конечная концентрация 12,5%) и дифференцированные клетки HL-60 затем добавляли в каждую лунку в приблизительном соотношении эффектора к мишени 200:1 и инкубировали при 37°C при встряхивании. Для остановки реакции, 80 мкл 0,9% NaCl добавляли во все лунки, реакционный раствор перемешивали, и аликвоту 10-мкл переносили в лунки планшетов для фильтрации Millipore, MultiScreenHTS HV, содержащие 200 мкл воды. Жидкость фильтровали через планшеты в вакууме, и 150 мкл среды HySoy добавляли в каждую лунку и фильтровали.

После фильтрации, планшеты для фильтрации инкубировали в течение ночи в инкубаторе с 5% CO2 при 37°C и затем фиксировали с использованием раствора для удаления красителя (Bio-Rad). Затем планшеты окрашивали с использованием Кумасси синего и один раз промывали для удаления красителя. Колонии визуализировали и подсчитывали в анализаторе Cellular Technology Limited (CTL) ImmunoSpot Analyzer®. Титр антитела в OPA определяли как величину, обратную низшему разведению сыворотки, приводящему к 50% уменьшению количества бактериальных колоний, по сравнению с контрольными лунками с бактериями-эффекторными клетками-комплементом, не содержавшими сыворотки.

Результаты - Ответы в OPA для 18F, 18A, 18B и 18C

Перекрестный функциональный ответ иммунной сыворотки от взрослых, иммунизированных 13vPnC, против серотипов 18F, 18A и 18B оценивали в соответствующих опсонофагоцитирующих анализах микроколоний (mcOPA), вместе с гомологичным функциональным ответом на серотип 18C. Тестировали две случайно выбранные подгруппы иммунной сыворотки от взрослых, вакцинированных 13vPnC. Сыворотки были собраны в клинических исследованиях США 6115A1-004 (N=59, после вакцинации) и 6115A1-3005 (N=66, совпадающие образцы до и после вакцинации), соответственно (см. выше).

Пациенты в исследовании 6115A1-004 являлись ранее наивными к любой пневмококковой вакцинации, и им вводили однократную дозу 13vPnC в качестве части протокола исследования. Как показано на фигуре 1, для всех иммунных сывороток из исследования 6115A1-004 (59/59) показаны положительные титры не только для серотипа 18C, являющегося антигеном в вакцине, но также для серотипов 18F, 18A и 18B, что позволяет предполагать перекрестную защиту, как измерено посредством OPA. 100% отвечающих обнаружено для всех серогрупп (18C, 18F, 18A и 18B) (Фигура 1), поддерживая результаты из 6115A1-3005 (Фигура 2).

Пациентам в исследовании 6115A1-3005 ранее вводили 1 дозу 23vPS по меньшей мере за 5 лет до включения в исследование, и вводили однократную дозу 13vPnC в качестве части протокола исследования. Совпадающие панели сывороток до и после вакцинации (N=66) от взрослых, иммунизированных 13vPnC (исследование 6115A1-3005) оценивали в OPA по гомологичному ответу на серотип 18C и по перекрестной реакционной способности антител против 18C для серотипов 18F, 18A и 18B. Как показано на фигуре 2, относительно высокий иммунитет (процент отвечающих) на 18C (77%), 18A (73%), 18B (74%) и 18F (77%) детектирован в анализе OPA, вероятно, благодаря их предшествующей иммунизации 23vPS, включающей неконъюгированный полисахарид из серотипа 18C. Однако, процент отвечающих увеличивался до 92% или более для всех четырех серотипов после вакцинации 13vPnC, содержащей только конъюгат серотипа 18C из серогруппы 18. Кратность увеличения значений титра показана в таблице 1 и является сходной между серотипами, также позволяя предполагать перекрестную реакционную способность.

Таблица 1. Кратность увеличения титра в OPA для совпадающих образцов до и после вакцинации, 13vPnC

	Титры в OPA
		18A	18B
	До	После	До	После	До	После	До	После
GMT	134	797	35	295	41	658	108	646
Кратность увеличения	5,9	8,4	16,0	6,0

Более тщательный анализ распределения титра в OPA показан на кумулятивных кривых обратного распределения (RCDC) на фигурах 3-6. RCDC показывают увеличение специфического для серотипа иммунного ответа после вакцинации для серотипов 18C, 18F, 18A и 18B.

Заключение

Перекрестное для серотипов функциональное уничтожение штаммов серогруппы 18 (18F, 18A, 18B и 18C) наблюдали в mcOPA. На основании этих данных, вакцина 13vPnC, вероятно, обеспечивает более широкий охват серотипов, чем предполагали ранее, посредством обеспечения дополнительной защиты против серотипов 18F, 18A и 18B, в дополнение к ожидаемой защите против 18C.

Все публикации и патентные заявки, упомянутые в описании, являются показателями квалификации специалистов в области, к которой относится это изобретение. Содержание всех публикаций и патентных заявок, приведено в настоящем описании в качестве ссылки в той же степени, как если бы было конкретно и индивидуально указано, что содержание каждой индивидуальной публикации или патентной заявки приведено в качестве ссылки.

Несмотря на то, что вышеописанное изобретение описано в некоторых подробностях посредством иллюстрации и примера для целей ясности понимания, определенные изменения и модификации можно осуществлять на практике в пределах прилагаемой формулы изобретения.

--->

СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> Pfizer Inc.

<120> Иммуногенные композиции для применения в пневмококковых вакцинах

<130> PC72317

<160> 10

<170> PatentIn версии 3.5

<210> 1

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CpG олигонуклеотид «класса B»

<400> 1

tcgtcgtttt tcggtgcttt t 21

<210> 2

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CpG олигонуклеотид «класса B»

<400> 2

tcgtcgtttt tcggtcgttt t 21

<210> 3

<211> 24

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CpG олигонуклеотид «класса B»

<400> 3

tcgtcgtttt gtcgttttgt cgtt 24

<210> 4

<211> 24

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CpG олигонуклеотид «класса B»

<400> 4

tcgtcgtttc gtcgttttgt cgtt 24

<210> 5

<211> 24

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CpG олигонуклеотид «класса B»

<400> 5

tcgtcgtttt gtcgtttttt tcga 24

<210> 6

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CpG олигонуклеотид «класса B»

<400> 6

tcgtcgtttt tcggtgcttt t 21

<210> 7

<211> 21

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CpG олигонуклеотид «класса B»

<400> 7

tcgtcgtttt tcggtcgttt t 21

<210> 8

<211> 24

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CpG олигонуклеотид «класса B»

<400> 8

tcgtcgtttt gtcgttttgt cgtt 24

<210> 9

<211> 24

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CpG олигонуклеотид «класса B»

<400> 9

tcgtcgtttc gtcgttttgt cgtt 24

<210> 10

<211> 24

<212> ДНК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> CpG олигонуклеотид «класса B»

<400> 10

tcgtcgtttt gtcgtttttt tcga 24

<---

1. Применение иммуногенной композиции, содержащей по меньшей мере один гликоконъюгат из капсульного сахарида S. pneumoniae серотипа 18C, где указанный гликоконъюгат получен посредством восстановительного аминирования, для иммунизации пациента против инфекции S. pneumoniae серотипов 18A, 18B и 18F, где указанная композиция дополнительно содержит гликоконъюгаты из капсульного сахарида S. pneumoniae серотипов 1, 3, 4, 5, 6A, 6B, 7F, 9V, 14, 19A, 19F и 23F, но не содержит капсульный сахарид из S. pneumoniae серотипов 18A, 18B и 18F, причем указанные гликоконъюгаты получены индивидуальной конъюгацией капсульных сахаридов с CRM₁₉₇ и причем указанная иммуногенная композиция содержит от 0,5 мкг до 20 мкг каждого полисахарида.

2. Применение по п.1, в котором иммуногенная композиция дополнительно содержит гликоконъюгаты из S. pneumoniae серотипов 22F и 33F.

3. Применение по п.1, в котором иммуногенная композиция дополнительно содержит гликоконъюгаты из S. pneumoniae серотипов 15B, 22F и 33F.

4. Применение по любому из пп. 1-3, в котором иммуногенная композиция дополнительно содержит гликоконъюгаты из S. pneumoniae серотипов 12F, 10A, 11A и 8.

5. Применение по любому из пп. 1-4, в котором иммуногенная композиция представляет собой 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 или 25-валентную композицию пневмококковых конъюгатов.

6. Применение по любому из пп. 1-5, где указанный гликоконъюгат из S. pneumoniae серотипа 18C содержит сахарид, имеющий степень O-ацетилирования ≤ 10%.

7. Применение по любому из пп. 1-6, в котором иммуногенная композиция дополнительно содержит по меньшей мере один адъювант.

8. Применение по любому из пп. 1-7, в котором иммуногенная композиция способна стимулировать у человека образование антител IgG, которые способны связывать полисахарид S. pneumoniae серотипов 18A, 18B и 18F, в концентрации по меньшей мере 0,35 мкг/мл, как определено посредством анализа ELISA.

9. Применение по любому из пп. 1-8, в котором иммуногенная композиция способна стимулировать у человека образование функциональных антител, способных к уничтожению S. pneumoniae серотипов 18A, 18B и 18F, как определено посредством опсонофагоцитирующего анализа (OPA) in vitro.

10. Применение по любому из пп. 1-9, в котором иммуногенная композиция способна стимулировать получение титра по меньшей мере 1:8 против S. pneumoniae серотипов 18A, 18B и 18F по меньшей мере у 50% пациентов, как определено посредством анализа in vitro опсонофагоцитирующего уничтожения (OPA).

11. Применение по любому из пп. 1-10, в котором иммуногенная композиция способна увеличивать долю отвечающих против S. pneumoniae серотипов 18A, 18B и 18F, по сравнению с популяцией до иммунизации.

12. Применение по любому из пп. 1-11, в котором иммуногенная композиция способна увеличивать у пациентов-людей титры в OPA против S. pneumoniae серотипов 18A, 18B и 18F, по сравнению с популяцией до иммунизации.

13. Применение иммуногенной композиции по любому из пп. 1-12 для предотвращения, лечения или облегчения инфекции, заболевания или состояния, вызванных S. pneumoniae серотипов 18A, 18B и 18F, у пациента.

14. Применение иммуногенной композиции по любому из пп. 1-12 для предотвращения инфекции S. pneumoniae серотипов 18A, 18B и 18F у пациента.

15. Набор для защиты против S. pneumoniae серогруппы 18, содержащий иммуногенную композицию по любому из пп. 1-12 и информационный листок, где в указанном информационном листке упомянута способность композиции стимулировать образование антител против капсульных полисахаридов S. pneumoniae серотипов 18B, 18F и 18A, в концентрации ≥ 0,35 мкг/мл в человеческой популяции.

16. Набор по п.15, где в указанном информационном листке упомянута способность композиции стимулировать получение титров в OPA против S. pneumoniae серотипов 18B, 18F и 18A в человеческой популяции.

17. Способ тестирования способности иммуногенной композиции защищать против S. pneumoniae серогруппы 18, включающий стадии:

- инъекции пациенту иммунологически эффективного количества иммуногенной композиции, определенной по любому из пп. 1-12;

- сбора образца сыворотки от указанного пациента;

- тестирования указанного образца сыворотки по активности опсонофагоцитирующего уничтожения против S. pneumoniae серотипов 18A, 18B и 18F посредством анализа опсонофагоцитирующего уничтожения (OPA) in vitro.