Применение комплекса азотсодержащего соединения с металлом для диагностики или лечения опухолей с экспрессией интегрина

Изобретение относится к применению комплекса соединения с металлом для лечения опухолей с экспрессией интегрина, где указанное соединение представляет собой 2,2',2ʺ-(10-(2-(((R)-1-((2-(4-(4-(N-((S)-1-карбокси-2-(5-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)пентанамид)этил)сульфамоил)-3,5-диметилметокси)бутанамид)этил)амино)-1-оксо-3-сульфопропан-2-ил)амино)-2-оксоэтил)-1,4,7,10-тетраазациклододекан-1,4,7-триил)триуксусную кислоту и указанный металл представляет собой Lu. 1 з.п. ф-лы, 6 ил., 7 табл., 17 пр.

 

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ

[0001] Настоящее изобретение относится к способу получения нового азотсодержащего соединения или его соли и способу получения промежуточного соединения для соединения или его соли.

Уровень техники

[0002] Интегрины представляют тип рецепторов клеточной адгезии, которые относятся к семейству гетеродимерных гликопротеиновых комплексов, образованных α- и β-субъединицами, и в основном участвуют в адгезии клеток к внеклеточному матриксу и передаче информации из внеклеточного матрикса.

Среди интегринов известны интегрины α_Vβ₃ и α_Vβ₅, которые являются рецепторами витронектина, и экспрессируются на низком уровне на эпителиальных клетках или зрелых эндотелиальных клетках, в то время как они гиперэкспрессируются в различных опухолевых клетках или новых кровеносных сосудах. Полагается, что гиперэкспрессия интегринов α_Vβ₃ и α_Vβ₅ вовлечена в процессы распространения рака, такие как инфильтрация или метастазирование, сопровождающиеся ангиогенезом опухоли, и высоко коррелирует со злокачественностью новообразований (Nature Reviews Сancer, Vol. 10, pp. 9-23, 2010). Было установлено, что гиперэкспрессия интегрина наблюдается при раке, таком как злокачественные опухоли головы и шеи, колоректальный рак, рак молочной железы, мелкоклеточный рак легкого, немелкоклеточный рак легкого, глиобластома, злокачественная меланома, рак поджелудочной железы и рак предстательной железы (Clin. Cancer Res., Vol. 12, pp. 3942-3949, 2006).

Кроме того, было установлено, что при заболеваниях, связанных с интегрином, таких как ишемические болезни, включая ишемическую болезнь сердца или заболевание периферических сосудов, интегрин гиперэкспрессируется в эндотелиальных клетках кровеносных сосудов во время ангиогенеза после ишемии (Circulation, Vol. 107, pp. 1046-1052, 2003).

[0003] Связь между вышеуказанными заболеваниями и экспрессией интегрина представляет большой интерес с точки зрения мишени для фармацевтических продуктов, и имеются сообщения, относящиеся к лечению с использованием низкомолекулярного соединения (заявки на патент США 6001961A, 6130231A, 2002/169200A и 2001/53853А) или соединения, в которое введен радиоактивный изотоп (не прошедшая экспертизу заявка на патент Японии JP2002-532440A, международные заявки WO2013/048996 и WO2011/149250A), или относящиеся к визуализации очагов заболеваний.

[0004] Например, попытка осуществления визуализации с использованием пептидного лиганда, имеющего последовательность Arg-Gly-Asp (RGD), описана в Cancer Research., Vol 61, pp. 1781- 1785, 2001; Cardiovascular Research, Vol. 78, pp. 395-403, 2008 и тому подобное, и попытка применения непептидного низкомолекулярного соединения описана в Cardiovascular Research, Vol. 78, pp. 395-403, 2008 и тому подобное. Кроме того, соединение, в которое был введен ¹⁸F позитрон-излучающий нуклид (Clin. Cancer Res., Vol. 13, pp. 6610-6616, 2007 и J. Nucl. Med., Vol. 49, pp. 879-886, 2008), используется для визуализации опухолей у человека (Cancer Res., Vol. 62, pp. 6146-6151, 2002 и Int. J. Cancer, Vol. 123, pp. 709-715, 2008).

Документы уровня техники

Патентные документы

[0005]

Патентный документ 1: US6001961A

Патентный документ 2: US6130231A

Патентный документ 3: US2002/169200A

Патентный документ 4: US2001/53853A

Патентный документ 5: JP2002-532440A

Патентный документ 6: WO2013/048996

Патентный документ 7: WO2011/149250A

Непатентные документы

[0006]

Непатентный документ 1: Nature Reviews cancer, Vol. 10, pp. 9-23, 2010

Непатентный документ 2: Clin. Cancer Res. Vol. 12, pp. 3942-3949, 2006

Непатентный документ 3: Circulation, Vol. 107, pp. 1046-1052, 2003

Непатентный документ 4: Cancer Res. Vol. 61, pp. 1781-1785, 2001

Непатентный документ 5: Cardiovascular Research, Vol. 78, pp. 395-403, 2008

Непатентный документ 6: Clin. Cancer Res., Vol. 13, pp. 6610-6616, 2007

Непатентный документ 7: J. Nucl. Med., Vol. 49, pp. 879-886, 2008

Непатентный документ 8: Cancer Res., Vol. 62, pp. 6146-6151, 2002

Непатентный документ 9: Int. J. Cancer., Vol. 123, pp.709-715, 2008

Сущность изобретения

[0007] Согласно информации, известной заявителям настоящего изобретения, азотсодержащее соединение, представленное следующей формулой [11], является эффективным соединением, связывающим интегрин, которое обладает высокими проникающими свойствами и устойчивым эффектом в отношении ангиогенеза и опухоли, связанной с интегринами, и показывает высокий клиренс в крови. Комплекс азотсодержащего соединения, представленного формулой [11], или его соли и металла, пригоден в качестве лекарственного средства для диагностики или лечения заболеваний, связанных с интегрином.

[0008]

[0009] (в формуле L¹ представляет группу формулы [2a])

[0010]

[0011] (в формуле R^3a, R^4a, R^5a и R^6a являются одинаковыми или отличными друг от друга и представляют атом водорода или C_1-6 алкильную группу; p¹ представляет целое число от 1 до 3; q¹ представляет целое число от 0 до 3; и r¹ представляет целое число от 1 до 6); L² представляет группу формулы [2b]

[0012]

[0013] (в формуле R^3b, R^4b, R^5b и R^6b являются одинаковыми или отличными друг от друга и представляют атом водорода или C_1-6 алкильную группу; p² представляет целое число от 1 до 3; q² представляет целое число от 0 до 3; и r² представляет целое число от 1 до 6); L³ представляет группу формулы [2с]

[0014]

[0015] (в формуле R^3c, R^4c, R^5c и R^6c являются одинаковыми или отличными друг от друга и представляют атом водорода или C_1-6 алкильную группу; p³ представляет целое число от 1 до 3; q³ представляет целое число от 0 до 3; и r³ представляет целое число от 1 до 6); A² представляет любую из групп формул [12]-[17]

[0016]

[0017] (в формулах * представляет положение связывания); и m представляет целое число от 1 до 3).

Конкретные примеры азотсодержащего соединения, представленного формулой [11], включают 2,2',2ʺ-(10-(2-(((R)-1-((2-(4-(4-(N-((S)-1-карбокси-2-(5-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)пентанамид)этил)сульфамоил)-3,5-диметилметокси)бутанамид)этил)амино)-1-оксо-3-сульфопропан-2-ил)амино)-2-оксоэтил)-1,4,7,10-тетраазациклододекан-1,4,7-триил)триуксусную кислоту (далее по тексту также относится к соединению А), 2,2'-(7-((R)-1-карбокси-4-(((R)-1-((2-(4-(4-(N-(S)-1-карбокси-2-(5-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)пентанамид)этил)сульфамоил)-3,5-диметилфенокси)пентанамид)этил)амино)-1-оксо-3-сульфопропан-2-ил)амино)-4-оксобутил)-1,4,7-триазонан-1,4-диил)диуксусную кислоту (далее по тексту также относится к соединению В) и тому подобное.

[0018] Целями настоящего изобретения является обеспечение эффективного способа получения азотсодержащего соединения, используемого для получения лекарственного средства для лечения заболеваний, связанных с интегрином, или его соли, и для получения промежуточного соединения для соединения или соли.

[0019] Для достижения вышеуказанных целей заявители настоящего изобретения провели всесторонние исследования. В результате они установили, что с использованием следующего способа получения можно эффективно получать азотсодержащее соединение, используемое для получения лекарственного средства для лечения заболеваний, связанных с интегрином, или его соль. Кроме того, они обнаружили, что следующее получаемое промежуточное соединение является промежуточным продуктом, преимущественным для эффективного получения азотсодержащего соединения, используемого для получения лекарственного средства для лечения заболеваний, связанных с интегрином, или его соли. На основе того, что они установили, заявители осуществили настоящее изобретение.

[0020] То есть, настоящее изобретение обеспечивает следующее.

<1> Способ получения соединения, представленного формулой [11], или его соли, включающий (1) стадию взаимодействия соединения, представленного формулой [1], или его соли

[0021]

[0022] (в формуле R¹ представляет атом водорода или аминозащитную группу; R² представляет карбоксилзащитную группу; L¹ представляет группу формулы [2a]

[0023]

[0024] (в формуле R^3a, R^4a, R^5a и R^6a являются одинаковыми или отличными друг от друга и представляют атом водорода или C_1-6 алкильную группу; p¹ представляет целое число от 1 до 3; q¹ представляет целое число от 0 до 3; и r¹ представляет целое число от 1 до 6); L² представляет группу формулы [2b]

[0025]

[0026] (в формуле R^3b, R^4b, R^5b и R^6b являются одинаковыми или отличными друг от друга и представляют атом водорода или C_1-6 алкильную группу; p² представляет целое число от 1 до 3; q² представляет целое число от 0 до 3; и r² представляет целое число от 1 до 6)), с соединением, представленным формулой [3], или его солью

[0027]

[0028] (в формуле L³ представляет группу формулы [2с])

[0029]

[0030] (в формуле R^3c, R^4c, R^5c и R^6c являются одинаковыми или отличными друг от друга и представляют атом водорода или C_1-6 алкильную группу; p³ представляет целое число от 1 до 3; q³ представляет целое число 0 до 3; и r³ представляет целое число от 1 до 6); A¹ представляет любую из групп формул [4]-[9]

[0031]

[0032] (в формулах * представляет положение связывания); и R⁷ являются одинаковыми или отличными друг от друга и представляют собой карбоксилзащитную группу); и m представляет целое число от 1 до 3)), с получением тем самым соединения, представленного формулой [10], или его соли;

[0033]

[0034] (в формуле R¹, R², L¹, L², L³, A¹ и m имеют те же значения, определенные выше для R¹, R², L¹, L², L³, A¹ и m); и (2) стадию снятия защиты с соединения, представленного формулой [10], или его соли,

[0035]

[0036] (в формуле А² представляет любую из групп формул [12]-[17]

[0037]

[0038] (в формулах * представляет положение связывания); и L¹, L², L³ и m имеют те же значения, определенные выше для L¹, L², L³ и m).

<2> Способ получения, описанный в п. <1>, где R² представляет C_1-6 алкильную группу, которая может быть замещена, или бензильную группу, которая может быть замещена.

<3> Способ получения, описанный в пп. <1> или <2>, где L³ представляет группу формулы [18c]

[0039]

[0008] (в формуле R^5c и R^6c могут быть одинаковыми или отличными друг от друга и представляют атом водорода или C_1-6 алкильную группу; и r³ представляет целое число от 1 до 6).

<4> Способ получения, описанный в любом из пп. <1>-<3>, где L¹ представляет группу формулы [18a]

[0041]

[0042] (в формуле R^5a и R^6a являются одинаковыми или отличными друг от друга и представляют атом водорода или C_1-6 алкильную группу; и r¹ представляет целое число от 1 до 6).

<5> Способ получения, описанный в любом из пп. <1>-<4>, где L² представляет группу формулы [18b]

[0043]

[0044] (в формуле R^5b и R^6b являются одинаковыми или отличными друг от друга и представляют атом водорода или C_1-6 алкильную группу; и r² представляет целое число от 1 до 6).

<6> Способ получения, описанный в любом из пп. <1>-<5>, где R¹ представляет атом водорода, C_1-6 алкоксикарбонильную группу, которая может быть замещена, арилсульфонильную группу, которая может быть замещена, или гетероциклическую сульфонильную группу, которая может быть замещена.

<7> Способ получения, описанный в любом из пп. <1>-<6>, где R⁷ представляет C_1-6 алкильную группу, которая может быть замещена, или бензильную группу, которая может быть замещена.

<8> Способ получения, описанный в любом из пп. <1>-<7>, где стадия снятия защиты является стадией снятия защиты с использованием кислоты.

<9> Способ получения комплекса металла, включающий стадию взаимодействия соединения, представленного формулой [11], или его соли, полученных способом получения, описанным в любом из пп. <1>-<7>, с ионом металла.

<10> Соединение, представленное формулой [19], или его соль

[0045]

[0046] (в формуле R⁸ представляет C_2-6 алкильную группу, которая может быть замещена, или бензильную группу, которая может быть замещена; R⁹ представляет атом водорода, аминозащитную группу или группу формулы [20])

[0047]

[0048] (в формуле, * представляет положение связывания; R¹⁰ представляет гидроксильную группу или группу формулы [21])

[0049]

[0050] (в формуле: *, L³, A¹ и m имеют те же значения, определенные выше для *, L³, A¹ и m); и L² имеет то же значение, определенное выше для L²); и R¹ и L¹ имеют те же значения, определенные выше для R¹ и L¹).

<11> Соединение, описанное в п. <10>, или его соль, где R⁸ представляет C_2-6 алкильную группу, которая может быть замещена.

<12> Соединение, описанное в пп. <10> или <11>, или его соль, где L³ представляет группу формулы [18c]

[0051]

[0052] (в формуле R^5c, R^6c и r³ имеют те же значения, определенные выше для R^5c, R^6c и r³).

<13> Соединение, описанное в любом из пп. <10>-<12>, или его соль, где L¹ представляет группу формулы [18a]

[0053]

[0054] (в формуле R^5a, R^6a и r¹ имеют те же значения, определенные выше для R^5a, R^6a и r¹).

<14> Соединение, описанное в любом из пп. <10>-<13>, или его соль, где L² представляет группу формулы [18b]

[0055]

[0056] (в формуле R^5b, R^6b и r² имеют те же значения, определенные выше для R^5b, R^6b и r²).

<15> Соединение, описанное в любом из пп. <10>-<14>, или его соль, где R¹ представляет атом водорода, C_1-6 алкоксикарбонильную группу, которая может быть замещена, арилсульфонильную группу, которая может быть замещена, или гетероциклическую сульфонильную группу, которая может быть замещена.

<16> Соединение, описанное в любом из пп. <10>-<15>, или его соль, где R⁷ представляет C_1-6 алкильную группу, которая может быть замещена, или бензильную группу, которая может быть замещена.

<17> Соединение, представленное формулой [3], или его соль

[0057]

[0058] (в формуле L³, A¹ и m имеют те же значения, определенные выше для L³, A¹ и m).

<18> Соединение, описанное в п. <17>, или его соль, где R⁷ представляет C_1-6 алкильную группу, которая может быть замещена, или бензильную группу, которая может быть замещена.

[0059] Согласно способу получения по настоящему изобретению можно в промышленных масштабах получать новое азотсодержащее соединение, имеющее высокую оптическую чистоту, или его соль, простым способом через короткие стадии.

Кроме того, полученное промежуточное соединение по настоящему изобретению пригодно в качестве промежуточного соединения для нового азотсодержащего соединения или его соли.

Краткое описание чертежей

[0060] На фиг. 1 показаны результаты, полученные визуализацией опухоли с экспрессией интегрина с помощью ПЭТ с использованием комплекса [⁶⁴Cu]-(соединение A).

На фиг.2 показаны результаты, полученные визуализацией опухоли с экспрессией интегрина с помощью ПЭТ с использованием комплекса [⁶⁴Cu]-(соединение B).

На фиг.3 показаны результаты, полученные визуализацией опухоли с экспрессией интегрина с использованием гамма-камеры.

На фиг.4 показаны результаты, полученные визуализацией опухоли с экспрессией интегрина на модели внутричерепной опухоли.

На фиг. 5 показана тенденция накопления радиоактивности в крови обезьяны, которой был введен комплекс [¹¹¹In]-(соединение A).

На фиг.6 показаны результаты, полученные с помощью получения во времени плоского изображения обезьяны, которой был введен комплекс [¹¹¹In]-(соединение A).

Описание предпочтительных вариантов изобретения

[0061]В дальнейшем настоящее изобретение будет конкретно описано.

В настоящем изобретении, если не указано иное, каждый термин имеет следующее значение.

[0062] Атом галогена означает атом фтора, атом хлора, атом брома или атом йода.

[0063] C_1-6 алкильная группа означает линейную или разветвленную C_1-6 алкильную группу, такую как этил, метил, пропил, изопропил, бутил, втор-бутил, изобутил, трет-бутил, пентил, изопентил, 2-метилбутил, 2-пентил, 3-пентил или гексил.

C_2-6 алкильная группа означает линейную или разветвленную C_2-6 алкильную группу, такую как этил, пропил, изопропил, бутил, втор-бутил, изобутил, трет-бутил, пентил, изопентил, 2-метилбутил, 2-пентил, 3-пентил или гексил.

C_3-8 циклоалкильная группа означает C_3-8 циклоалкильную группу, такую как циклопропил, циклобутил, циклопентил или циклогексил.

Арильная группа означает C_6-13 арильную группу, такую как фенил, нафтил или флуоренил.

Ar C_1-6 алкильная группа означает C_6-10 Ar C_1-6 алкильную группу, такую как бензил, дифенилметил, тритил, фенэтил, 2-фенилпропил, 3-фенилпропил или нафтилметил.

[0064] C_1-6 алкоксигруппа означает линейную, циклическую или разветвленную C_1-6 алкилоксигруппу, такую как метокси, этокси, пропокси, изопропокси, циклопропокси, бутокси, изобутокси, втор-бутокси, трет-бутокси, циклобутокси, пентилокси или гексилокси.

C_1-6 алкокси-C_1-6 алкильная группа означает C_1-6 алкилокси-C_1-6 алкильную группу, такую как метоксиметил или 1-этоксиэтил.

[0065] C_1-6 алкиламиногруппа означает линейную, разветвленную или циклическую C_1-6алкиламиногруппу, такую как метиламино, этиламино, пропиламино, изопропиламино, циклопропиламино, бутиламино, втор-бутиламино, трет-бутиламино, циклобутиламино, пентиламино, циклопентиламино, гексиламино или циклогексиламино.

Ди(C_1-6алкил)аминогруппа означает линейную, разветвленную или циклическую ди(C_1-6алкил)аминогруппу, такую как диметиламино, диэтиламино, дипропиламино, диизопропиламино, дибутиламино, ди(трет-бутил)амино, дипентиламино, дигексиламино, (этил)(метил) амино, (метил)(пропил)амино, (циклопропил)(метил)амино, (циклобутил)(метил)амино или (циклогексил)(метил)амино.

[0066] C_2-6 алканоильная группа означает линейную или разветвленную C_2-6 алканоильную группу, такую как ацетил, пропионил, валерил, изовалерил или пивалоил.

Ароильная группа означает C_6-10 арильную группу, такую как бензоил или нафтоил.

Гетероциклическая карбонильная группа означает моноциклическую или бициклическую гетероциклическую карбонильную группу, такую как фуроил, теноил, пирролидинилкарбонил, пиперидинилкарбонил, пиперазинилкарбонил, морфолинилкарбонил или пиридинилкарбонил.

Ацильная группа означает формил, C_2-6 алканоил, ароил или гетероциклический карбонил.

[0067] C_1-6 алкоксикарбонильная группа означает линейную или разветвленную C_1-6 алкилоксикарбонильную группу, такую как метоксикарбонил, этоксикарбонил, изопропоксикарбонил, трет-бутоксикарбонил или 1,1-диметилпропоксикарбонил.

Ar С_1-6 алкоксикарбонильная группа означает С_6-13 Ar С_1-6 алкилоксикарбонильную группу, такую как бензилоксикарбонил, фенэтилоксикарбонил или флуоренилметилоксикарбонил.

Арилоксикарбонильная группа означает C_6-10 арилоксикарбонильную группу, такую как фенилоксикарбонил или нафтилоксикарбонил.

[0068] C_1-6 алкилсульфонильная группа означает C_1-6 алкилсульфонильную группу, такую как метилсульфонил, этилсульфонил или пропилсульфонил.

Арилсульфонильная группа означает C_6-10 арилсульфонильную группу, такую как бензолсульфонил, п-толуолсульфонил или нафталинсульфонил.

С_1-6 алкилсульфонилоксигруппа означает C_1-6 алкилсульфонилоксигруппу, такую как метилсульфонилокси или этилсульфонилокси.

Арилсульфонилоксигруппа означает C_6-10 арилсульфонилоксигруппу, такую как бензолсульфонилокси или п-толуолсульфонилокси.

Гетероциклическая сульфонильная группа означает моноциклическую или бициклическую гетероциклическую сульфонильную группу, такую как пиперидинсульфонил, пиридинсульфонил, хинолинсульфонил, дигидробензофурансульфонил, бензофурансульфонил, хромансульфонил и хроменсульфонил.

[0069] Моноциклическая азотсодержащая гетероциклическая группа означает моноциклическую гетероциклическую группу, содержащую только атомы азота в качестве гетероатомов, образующих кольцо, такую как азиридинил, азетидинил, пирролидинил, пирролинил, пирролил, пиперидил, тетрагидропиридил, дигидропиридил, пиридил, гомопиперидинил, октагидроазоцинил, имидазолидинил, имидазолинил, имидазолил, пиразолидинил, пиразолинил, пиразолил, пиперазинил, пиразинил, пиридазинил, пиримидинил, гомопиперазинил, триазолил или тетразолил.

Моноциклическая кислородсодержащая гетероциклическая группа означает моноциклическую гетероциклическую группу, содержащую только атомы кислорода в качестве гетероатомов, образующих кольцо, такую как оксетанил, тетрагидрофуранил, фуранил, тетрагидропиранил, пиранил, 1,3-диоксанил или 1,4-диоксанил.

Моноциклическая серосодержащая гетероциклическая группа означает моноциклическую гетероциклическую группу, содержащую только атомы серы в качестве гетероатомов, образующих кольцо, такую как тиенил.

Моноциклическая азот/кислородсодержащая гетероциклическая группа означает моноциклическую гетероциклическую группу, содержащую только атомы азота и атомы кислорода в качестве гетероатомов, образующих кольцо, такую как оксазолил, изоксазолил, оксадиазолил, морфолинил или оксазепанил.

Моноциклическая азот/серосодержащая гетероциклическая группа, означает моноциклическую гетероциклическую группу, содержащую только атомы азота и атомы серы в качестве гетероатомов, образующих кольцо, такую как тиазолил, изотиазолил, тиадиазолил, мономорфолинил, 1-оксидотиоморфолинил или 1,1-диоксидотиоморфолинил.

Моноциклическая гетероциклическая группа означает моноциклическую азотсодержащую гетероциклическую группу, моноциклическую кислородсодержащую гетероциклическую группу, моноциклическую серосодержащую гетероциклическую группу, моноциклическую азот/кислородсодержащую гетероциклическую группу или моноциклическую азот/серосодержащую гетероциклическую группу.

[0070] Бициклическая азотсодержащая гетероциклическая группа означает бициклическую гетероциклическую группу, содержащую только атомы азота в качестве гетероатомов, образующих кольцо, такую как индолинил, индолил, изоиндолинил, изоиндолил, бензимидазолил, индазолил, бензотриазолил, пиразолопиридинил, хинолил, тетрагидрохинолинил, тетрагидроизохинолинил, изохинолинил, хинолидинил, цинолинил, фталазинил, хиназолинил, дигидрохиноксалинил, хиноксалинил, нафтиридинил, пуринил, птеридинил или хинуклидинил.

Бициклическая кислородсодержащая гетероциклическая группа означает бициклическую гетероциклическую группу, содержащую только атомы кислорода в качестве гетероатомов, образующих кольцо, такую как дигидробензофуранил, бензофуранил, изобензофуранил, дигидробензофуранил, хроманил, хроменил, изохроманил, хроманил, 1,3-бензодиоксолил, 1,3-бензодиоксанил или 1,4-бензодиоксанил.

Бициклическая серосодержащая гетероциклическая группа означает бициклическую гетероциклическую группу, содержащую только атомы серы в качестве гетероатомов, образующих кольцо, такую как 2,3-дигидробензотиенил или бензотиенил.

Бициклическая азот/кислородсодержащая гетероциклическая группа означает бициклическую гетероциклическую группу, содержащую только атомы азота и атомы кислорода в качестве гетероатомов, образующих кольцо, такую как бензоксазолил, бензизоксазолил, бензоксадиазолил, бензоморфолинил, дигидропиранопиридил, диоксопирролидил, фторпиридинил, дигидродиоксинопиридил или дигидропиридооксазинил.

Бициклическая азот/серосодержащая гетероциклическая группа означает бициклическую гетероциклическую группу, содержащую только атомы азота и атомы серы в качестве гетероатомов, образующих кольцо, такую как бензотиазолил, бензизотиазолил или бензотиадиазолил.

Бициклическая гетероциклическая группа означает бициклическую азотсодержащую гетероциклическую группу, бициклическую кислородсодержащую гетероциклическую группу, бициклическую серосодержащую гетероциклическую группу, бициклическую азот/кислородсодержащую гетероциклическую группу или бициклическую азот/серосодержащую гетероциклическую группу.

[0071] Гетероциклическая группа означает моноциклическую гетероциклическую группу или бициклическую гетероциклическую группу.

[0072] Силильная группа означает триалкилсилильную группу, такую как триметилсилил, триэтилсилил или трибутилсилил.

[0073] Аминозащитная группа включает все группы, которые могут быть использованы в качестве общей аминозащитной группы, и их примеры включают группы, описанные в монографии W. Greene et al., Protective Groups in Organic Synthesis, 4^th edition, pp. 696-926, 2007, John Wiley & Sons, INC. В частности, примеры аминозащитной группы включают Ar C_1-6 алкильную группу, C_1-6 алкокси-C_1-6 алкильную группу, ацильную группу, C_1-6 алкоксикарбонильную группу, Ar C_1-6 алкоксикарбонильную группу, арилоксикарбонильную группу, C_1-6 алкилсульфонильную группу, гетероциклическую сульфонильную группу, арилсульфонильную группу, силильную группу и тому подобное. Эти группы могут быть замещены одним или несколькими заместителями, выбранными из группы заместителей А.

[0074] Группа заместителей A: атом галогена, нитрогруппа, цианогруппа, аминогруппа, которая может быть защищена, гидроксильная группа, которая может быть защищена, C_1-6 алкильная группа, C_3-8 циклоалкильная группа, арильная группа, C_1-6 алкоксигруппа, C_1-6 алкиламиногруппа, ди(C_1-6 алкил)аминогруппа, гетероциклическая группа и оксигруппа.

Карбоксилзащитная группа включает все группы, которые могут быть использованы в качестве общей карбоксилзащитной группы, и ее примеры включают группы, описанные в монографии W. Greene et al., Protective Groups in Organic Synthesis, 4^th edition, pp. 533-646, 2007, John Wiley & Sons, INC. Конкретные примеры карбоксилзащитной группы включают C_1-6 алкильную группу, арильную группу, бензильную группу, Ar C_1-6 алкильную группу, C_1-6 алкокси-C_1-6 алкильную группу, силильную группу и тому подобное. Эти группы могут быть замещены одним или несколькими заместителями, выбранными из группы заместителей А.

Гидроксилзащитная группа включает все группы, которые могут быть использованы в качестве общей гидроксилзащитной группы, и их примеры включают группы, описанные в монографии W. Greene et al., Protective Groups in Organic Synthesis, 4^th edition, pp. 16-299, 2007, John Wiley & Sons, INC. Конкретные примеры гидроксилзащищающей группы включают C_1-6 алкильную группу, Ar C_1-6 алкильную группу, C_1-6 алкокси-C_1-6 алкильную группу, ацильную группу, C_1-6 алкоксикарбонильную группу, Ar C_1-6 алкоксикарбонильную группу, C_1-6 алкилсульфонильную группу, арилсульфонильную группу, силильную группу, тетрагидрофуранильную группу, тетрагидропиранильную группу и тому подобное. Эти группы могут быть замещены одним или несколькими заместителями, выбранными из группы заместителей А.

[0076] Примеры уходящей группы включают атом галогена, C_1-6 алкилсульфонилоксигруппу, арилсульфонилоксигруппу и тому подобное. С_1-6 алкилсульфонилоксигруппа и арилсульфонилоксигруппа могут быть замещены одним или несколькими заместителями, выбранными из группы заместителей А.

[0077] Примеры галогенированных углеводородов включают метиленхлорид, хлороформ, дихлорэтан и тому подобное.

Примеры простых эфиров включают диэтиловый эфир, диизопропиловый эфир, диоксан, тетрагидрофуран, анизол, диметиловый эфир этиленгликоля, диметиловый эфир диэтиленгликоля, диэтиловый эфир диэтиленгликоля и тому подобное.

Примеры спиртов включают метанол, этанол, пропанол, 2-пропанол, бутанол, 2-метил-2-пропанол и тому подобное.

Примеры сложных эфиров включают метилацетат, этилацетат, пропилацетат, бутилацетат и тому подобное.

Примеры амидов включают N,N-диметилформамид, N,N-диметилацетамид, N-метилпирролидон и тому подобное.

Примеры нитрилов включают ацетонитрил, пропионитрил и тому подобное.

[0078] Примеры неорганического основания включают гидроксид натрия, гидроксид калия, гидроксид лития, трет-бутоксид натрия, трет-бутоксид калия, гидрокарбонат натрия, карбонат натрия, карбонат калия, карбонат лития, карбонат цезия и тому подобное.

Примеры органического основания включают триэтиламин, N,N-диизопропилэтиламин, 1,8-диазабицикло(5.4.0)ундек-7-ен (DBU), 4-диметиламинопиридин, пиридин, имидазол, N-метилимидазол, N-метилморфолин и тому подобное.

[0079] Примеры солей соединения формулы [1], [3], [10], [11] или [19] включают общеизвестные соли, образованные основной группой, такой как аминогруппа, и кислой группой, такой как гидроксильная группа и карбоксильная группа.

Примеры солей, образованных основной группой, включают соли минеральных кислот, таких как хлористоводородная кислота, бромистоводородная кислота, азотная кислота и серная кислота; соли органических карбоновых кислот, таких как муравьиная кислота, уксусная кислота, лимонная кислота, щавелевая кислота, фумаровая кислота, малеиновая кислота, янтарная кислота, яблочная кислота, винная кислота, аспарагиновая кислота, трихлоруксусная кислота и трифторуксусная кислота; И соль с сульфоновой кислотой, такой как метансульфоновая кислота, бензолсульфоновая кислота, п-толуолсульфоновая кислота, мезитиленсульфоновая кислота и нафталинсульфоновая кислота.

Примеры солей, образованных кислой группой, включают соли щелочных металлов, таких как литий, натрий и калий; соли щелочноземельных металлов, таких как калий и магний; соли аммония; соли азотсодержащего органического основания, такого как триметиламин, триэтиламин, трибутиламин, пиридин, N,N-диметиланилин, N-метилпиперидин, N-метилморфолин, диэтиламин, дициклогексиламин, прокаин, дибензиламин, N-бензил-β-фенэтиламин, 1-эфенамин и N,N'-дибензилэтилендиамин, и тому подобное.

Среди вышеуказанных солей в качестве предпочтительных солей приведены фармакологически приемлемые соли.

[0080] Примеры металла в виде иона металла и комплекса металла включают парамагнитный металл, поглощающий рентгеновские лучи металл, радиоактивный металл и тому подобное.

[0081] В случае, когда комплекс металла используется в качестве лекарственного средства для диагностики или лечения, то примеры комплекса металла включают следующие комплексы металлов согласно их применению.

[0082] Примеры комплекса металла, используемого в качестве лекарственного средства для диагностики на основе ядерного магнитного резонанса или тому подобное, включают комплексы, содержащие ион парамагнитного металла (например, ион металла, выбранного из группы, состоящей из Co, Mn, Cu, Cr, Ni, V, Au, Fe, Eu, Gd, Dy, Tb, Ho и Er) в качестве металлического компонента.

[0083] Примеры комплекса металла, используемого в лекарственном средстве для рентгенодиагностики или тому подобное, включают комплексы, содержащие ион поглощающего рентгеновские лучи металла (например, ион металла, выбранного из группы, состоящей из Re, Sm, Ho, Lu, Pm, Y, Bi, Pb, Os, Pd, Gd, La, Au, Yb, Dy, Cu, Rh, Ag и Ir) в качестве металлического компонента.

[0084] Примеры комплекса металла, используемого в лекарственном средстве для радиодиагностики, лечения и тому подобное, включают комплексы, содержащие ион нецитотоксического радиоактивного металла (например, ион металла, выбранного из группы, состоящей из комплекса ¹⁸F алюминия, комплекса ¹⁸F галлия, комплекса ¹⁸F индия, комплекса ¹⁸F лютеция, комплекса ¹⁸F таллия, ⁴⁴Sc, ⁴⁷Sc, ⁵¹Cr, ^52mMn, ⁵⁵Co, ⁵⁷Co, ⁵⁸Co, ⁵²Fe, ⁵⁹Fe, ⁶⁰Co, ⁶²Cu, ⁶⁴Cu, ⁶⁷Cu, ⁶⁷Ga, ⁶⁸Ga, ⁷²As, ⁷²Se, ⁷³Se, ⁷⁵Se, ⁷⁶As, ⁸²Rb, ⁸²Sr, ⁸⁵Sr, ⁸⁹Sr, ⁸⁹Zr, ⁸⁶Y, ⁸⁷Y, ⁹⁰Y, ⁹⁵Tc, ^99mTc, ¹⁰³Ru, ¹⁰³Pd, ¹⁰⁵Rh, ¹⁰⁹Pd, ¹¹¹In, ^114mIn, ^117mSn, ¹¹¹Ag, ^113mIn, ¹⁴⁰La, ¹⁴⁹Pm, ¹⁴⁹Tb, ¹⁵²Tb, ¹⁵⁵Tb, ¹⁶¹Tb, ¹⁵³Sm, ¹⁵⁹Gd, ¹⁶⁵Dy, ¹⁶⁶Dy, ¹⁶⁶Ho, ¹⁶⁵Er, ¹⁶⁹Yb, ¹⁷⁵Yb, ¹⁷⁷Lu, ¹⁸⁶Re, ¹⁸⁸Re, ¹⁹²Ir, ¹⁹⁷Hg, ¹⁹⁸Au, ¹⁹⁹Au, ²⁰¹Tl, ²⁰³Hg, ²¹¹At, ²¹²Bi, ²¹²Pb, ²¹³Bi, ²¹⁷Bi, ²²³Ra, ²²⁵Ac и ²²⁷Th) в качестве металлического компонента.

[0085] В случае, когда комплекс металла используется в качестве лекарственного средства для радиодиагностики, то в качестве металла можно использовать нецитотоксический радиоактивный металл.

Примеры нецитотоксического радиоактивного металла включают гамма-излучающий нуклид и позитрон-излучающий нуклид. Его примеры включают комплекс ¹⁸F алюминия, комплекс ¹⁸F галлия, комплекс ¹⁸F индия, комплекс ¹⁸F лютеция, комплекс ¹⁸F таллия, ^99mTc, ¹¹¹In, ^113mIn, ^114mIn, ⁶⁷Ga, ⁶⁸Ga, ⁸²Rb, ⁸⁶Y, ⁸⁷Y, ¹⁵²Tb, ¹⁵⁵Tb, ²⁰¹Tl, ⁵¹Cr, ⁵²Fe, ⁵⁷Co, ⁵⁸Co, ⁶⁰Co, ⁸²Sr, ⁸⁵Sr, ¹⁹⁷Hg, ⁴⁴Sc, ⁶²Cu, ⁶⁴Cu, ⁸⁹Zr и тому подобное.

[0086] В случае, когда комплекс металла используется в качестве лекарственного средства для лучевой терапии, то в качестве металла может использоваться цитотоксический радиоактивный металл.

Примерами цитотоксического радиоактивного металла являются α-лучи-испускающий нуклид и β-лучи-испускающий нуклид. Его конкретные примеры включают ⁹⁰Y, ^114mIn, ^117mSn, ¹⁸⁶Re, ¹⁸⁸Re, ⁶⁴Cu, ⁶⁷Cu, ⁵⁹Fe, ⁸⁹Sr, ¹⁹⁸Au, ²⁰³Hg, ²¹²Pb, ¹⁶⁵Dy, ¹⁰³Ru, ¹⁴⁹Tb, ¹⁶¹Tb, ²¹²Bi, ¹⁶⁶Ho, ¹⁶⁵Er, ¹⁵³Sm, ¹⁷⁷Lu, ²¹³Bi, ²²³Ra, ²²⁵Ac, ²²⁷Th и тому подобное.

[0087] Лечение означает диагностику или лечение различных заболеваний.

Диагностика означает процесс определения того, насколько определенное состояние является заболеванием, представляющим интерес, или определение состояния заболевания, представляющего интерес.

Лечение означает подавление состояния заболевания, представляющего интерес, подавление прогрессирования заболевания, представляющего интерес, и тому подобное.

Лекарственное средство означает вещество, вводимое для проведения процедуры.

[0088] R¹ предпочтительно представляет атом водорода, C_1-6 алкоксикарбонильную группу, которая может быть замещена, гетероциклическую сульфонильную группу, которая может быть замещена, или арилсульфонильную группу, которая может быть замещена, более предпочтительно атом водорода, C_1-6 алкоксикарбонильную группу, которая может быть замещена одним или несколькими заместителями, выбранными из группы заместителей А, гетероциклическую сульфонильную группу, которая может быть замещена одним или несколькими заместителями, выбранными из группы заместителей А, или арилсульфонильную группу, которая может быть замещена одним или несколькими заместителями, выбранными из группы заместителей А, и еще более предпочтительно атом водорода, C_1-6 алкоксикарбонильную группу, 2,2,4,6,7-пентаметилдигидробензофуран-5-сульфонил или 2,2,5,7,8-пентаметилхроман-6-сульфонил.

[0089] R² предпочтительно представляет C_1-6 алкильную группу, которая может быть замещена, или бензильную группу, которая может быть замещена, более предпочтительно C_1-6 алкильную группу, которая может быть замещена одним или несколькими заместителями, выбранными из группы заместителей A, или бензильную группу, которая может быть замещена одним или несколькими заместителями, выбранными из группы заместителей А, еще более предпочтительно C_1-6 алкильную группу, которая может быть замещена атомом галогена, или бензильную группу, которая может быть замещена одной или несколькими группами, выбранными из атома галогена, нитрогруппы и C_1-6 алкоксигруппы, и особенно предпочтительно C_1-6 алкильную группу, которая может быть замещена атомом галогена.

[0090] R^3a предпочтительно представляет атом водорода.

R^3b предпочтительно представляет атом водорода.

R^3c предпочтительно представляет атом водорода.

[0091] R^4a предпочтительно представляет атом водорода.

R^4b предпочтительно представляет атом водорода.

R^4c предпочтительно представляет атом водорода.

[0092] R^5a предпочтительно представляет атом водорода.

R^5b предпочтительно представляет атом водорода.

R^5c предпочтительно представляет атом водорода.

[0093] R^6a предпочтительно представляет атом водорода.

R^6b предпочтительно представляет атом водорода.

R^6c предпочтительно представляет атом водорода.

[0094] R⁷ предпочтительно представляет C_1-6 алкильную группу, которая может быть замещена, или бензильную группу, которая может быть замещена, более предпочтительно C_1-6 алкильную группу, которая может быть замещена одним или несколькими заместителями, выбранными из группы заместителей A, или бензильную группу, которая может быть замещена одним или несколькими заместителями, выбранными из группы заместителей А, еще более предпочтительно C_1-6 алкильную группу, которая может быть замещена атомом галогена, или бензильную группу, которая может быть замещена одной или несколькими группами, выбранными из атома галогена, нитрогруппы и C_1-6 алкоксигруппы, и особенно предпочтительно C_1-6 алкильную группу, которая может быть замещена атомом галогена.

[0095] R⁸ предпочтительно представляет C_2-6 алкильную группу, которая может быть замещена, С_2-6 алкильную группу, которая может быть замещена одним или несколькими заместителями, выбранными из группы заместителей А, или бензильную группу, которая может быть замещена одним или несколькими заместителями, выбранными из группы заместителей А, еще более предпочтительно C_2-6 алкильную группу, которая может быть замещена атомом галогена, или бензильную группу, которая может быть замещена одной или несколькими группами, выбранными из атома галогена, нитрогруппы и C_1-6 алкоксигруппы, и еще более предпочтительно C_2-6 алкильную группу.

[0096] R⁹ предпочтительно представляет атом водорода или группу формулы [20].

[0097]

[0098] (в формуле, *, R¹⁰ и L² имеют те же значения, определенные выше для *, R¹⁰ и L²).

В случае, когда R⁹ представляет аминозащитную группу, то аминозащитная группа предпочтительно представляет C_1-6 алкильную группу, которая может быть замещена одним или несколькими заместителями, выбранными из группы заместителей A, C_1-6 алкоксикарбонильную группу, которая может быть замещена одним или несколькими заместителями, выбранными из группы заместителей А, или Ar С_1-6 алкоксикарбонильную группу, которая может быть замещена одним или несколькими заместителями, выбранными из группы заместителей А, и более предпочтительно бензильную группу, трет-бутоксикарбонильную группу, бензилоксикарбонильную группу или 9-флуоренилметилоксикарбонильную группу.

[0099] L¹ предпочтительно представляет группу формулы [18a].

[0100]

[0101] (в формуле R^5a, R^6a и r¹ имеют те же значения, определенные выше для R^5a, R^6a и r¹).

[0102] L² предпочтительно представляет группу формулы [18b].

[0103]

[0104] (в формуле R^5b, R^6b и r² имеют те же значения, определенные выше для R^5b, R^6b и r²).

[0105] L³ предпочтительно представляет группу формулы [18c].

[0106]

[0107] (в формуле R^5c, R^6c и r³ имеют те же значения, определенные выше для R^5c, R^6c и r³).

[0108] A¹ предпочтительно представляет группу формулы [4] или [5].

[0109]

[0110] (в формуле * и R⁷ имеют те же значения, определенные выше для * и R⁷).

[0111] А² предпочтительно представляет группу формулы [12] или [13].

[0112]

[0113] (в формулах * имеет то же значение, определенное выше для *).

[0114] m предпочтительно равно 1 или 2.

[0115] p¹ предпочтительно равно 1 или 2.

p² предпочтительно равно 1 или 2.

p³ предпочтительно равно 1 или 2.

[0116] q¹ предпочтительно равно 0 или 1 и более предпочтительно 0.

q² предпочтительно равно 0 или 1 и более предпочтительно 0.

q³ предпочтительно равно 0 или 1 и более предпочтительно 0.

[0117] r¹ предпочтительно представляет целое число от 3 до 5, более предпочтительно 3 или 4 и еще более предпочтительно 4.

r² предпочтительно представляет целое число от 2 до 4, более предпочтительно 3 или 4 и еще более предпочтительно 3.

r³ предпочтительно представляет целое число от 2 до 4, более предпочтительно 2 или 3 и еще более предпочтительно 2.

[0118] В качестве нецитотоксического радиоактивного металла, с точки зрения периода полураспада, энергии излучения, простоты реакции мечения и т. п., предпочтительными являются комплекс ¹⁸F алюминия, ¹¹¹In, ⁶⁷Ga, ⁶⁸Ga, ⁶⁴Cu и ⁸⁹Zr.

[0119] В качестве цитотоксического радиоактивного металла, с точки зрения с точки зрения периода полураспада, энергии излучения, простоты реакции мечения и стабильности комплекса, ⁶⁴Cu, ⁶⁷Cu, ⁹⁰Y, ¹⁵³Sm, ¹⁶⁶Ho, ¹⁷⁷Lu и ²²⁵Ac являются предпочтительными.

[0120] Далее будет описан способ получения по настоящему изобретению.

[0121] Способ получения 1

[0122]

[0123] (в формуле R¹, R², L¹, L², L³, A¹, A² и m имеют те же значения, определенные выше для R¹, R², L¹, L², L³, A¹, A² и m).

[0124] (1)

Путем проведения реакции между соединением, представленным формулой [1], и соединением, представленным формулой [3], в присутствии конденсирующего агента и в присутствии или в отсутствие основания, можно получить соединение, представленное формулой [10].

Эту реакцию можно провести способами, описанными, например, в публикациях Bioconjugate Chem. Vol. 3, p. 2, 1992; Chemical Reviews, Vol. 97, p. 2243, 1997 и тому подобное.

[0125] Растворитель, используемый в этой реакции, особым образом не ограничивается, при условии, что растворитель не оказывает отрицательного влияния на ход реакции. Примеры растворителя включают простые эфиры, сложные эфиры, галогенированные углеводороды, нитрилы, амиды, спирты и воду, и эти растворители могут быть использованы, будучи смешанными. В качестве растворителя амиды являются предпочтительными, и более предпочтительны N,N-диметилформамид, N,N-диметилацетамид и N-метилпирролидон.

Количество используемого растворителя особым образом не ограничивается и может быть больше количества соединения, представленного формулой [1], в 1-1000 раз (об./мас.).

[0126] Примеры основания, которое используется, при необходимости, в этой реакции, включают неорганическое основание и органическое основание. В качестве основания органическое основание является предпочтительным, и триэтиламин или N,N-диизопропилэтиламин являются более предпочтительными.

Количество используемого основания может быть больше, чем количество соединения, представленного формулой [1], в 1-50 раз в расчете на моли и предпочтительно больше, чем количество соединения в 1-10 раз в расчете на моли.

[0127] Примеры конденсирующего агента, используемого в этой реакции, включают карбодиимиды, такие как N,N'-дициклогексилкарбодиимид и 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимид; карбонилы, такие как карбонилдиимидазол; азиды кислот, такие как дифенилфосфорилазид; цианиды кислот, такие как диэтилфосфорилцианид; активные карбаматы, такие как 2-этокси-1-этоксикарбонил-1,2-дигидрохинолин; мочевины, такие как гексафторфосфат O-бензотриазол-1-ил-1,1,3,3-тетраметилурония и гексафторфосфат O-(7-азабензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилурония; соль фосфония, такая как гексафторфосфат бензотриазол-1-илокси-трисдиметиламинофосфония и гексафторфосфат (бензотриазол-1-илокси)трипирролидинофосфония; и тому подобное. В качестве конденсирующего агента предпочтительны карбодиимиды или мочевины, и 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимид, гексафторфосфат O-бензотриазол-1-ил-1,1,3,3-тетраметилурония и гексафторфосфат O-(7-азабензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилурония являются более предпочтительными.

В отношении способа конденсации, то после того, как соединение, представленное формулой [1], и соединение, представленное формулой [3] смешаны друг с другом, то можно добавить конденсирующий агент. В качестве другого способа, то после предварительного активирования конденсирующим агентом соединение, представленное формулой [1], можно подвергнуть взаимодействию с соединением, представленным формулой [3]. Кроме того, можно использовать активный сложный эфир, такой как N-гидроксисукцинимид или пентафторфенол.

[0128] Количество соединения, представленного формулой [3], особым образом не ограничивается и может быть больше, чем количество соединения, представленное формулой [1], в 0,5-10 раз в расчете на моли.

[0129] Температура реакции может составлять от -30°С до 100°С и предпочтительно составляет от 0°С до 50°С.

Время реакции может составлять от 1 мин до 72 ч.

[0130] (2)

Путем снятия защиты с соединения, представленного формулой [10], может быть получено соединение, представленное формулой [11].

Данную реакцию можно провести, например, способом, описанным в монографии T. W. Greene et al., Protective Groups in Organic Synthesis, 4^th edition, pp. 696-926, 2007, John Wiley & Sons, INC.

[0131] В отношение способа снятия защиты с соединения, представленного формулой [10], то снятием защиты с соединения с использованием кислоты можно уменьшить снижение оптической чистоты соединения, представленного формулой [11].

Примеры кислоты включают хлористоводородную кислоту, бромистоводородную кислоту, серную кислоту, метансульфоновую кислоту, уксусную кислоту, муравьиную кислоту, п-толуолсульфоновую кислоту, трифторметансульфоновую кислоту, трифторуксусную кислоту и тому подобное. Среди них хлористоводородная кислота, муравьиная кислота и трифторуксусная кислота являются предпочтительными.

Количество используемой кислоты может быть равным или больше, чем количество соединения, представленного формулой [10], в 1 раз (мас./мас.), и предпочтительно больше, чем количество соединения в 1-100 (мас./мас.). Кислоту можно использовать самостоятельно в качестве растворителя или ее можно разбавить растворителем, который не оказывает отрицательного влияния на ход реакции.

[0132] Способ получения 2

Комплекс соединения, представленного формулой [11], или его соли и металла, может быть получен, например, как описано ниже.

Путем смешивания соединения, представленного формулой [11], или его соли с ионом металла в присутствии буферного раствора, можно получить комплекс.

[0133] Буферный раствор, используемый в данной реакции, особым образом не ограничивается, если буферный раствор не влияет отрицательно на ход реакции. Примеры буферного раствора включают натрий-ацетатный буферный раствор, аммиачно-ацетатный буферный раствор, натрий-цитратный буферный раствор и аммиачно-цитратный буферный раствор.

рН буферного раствора предпочтительно находится в диапазоне от 3 до 6.

[0134] Температура реакции и время реакции варьируются в зависимости от комбинации соединения, представленного формулой [11], или его соли и радиоактивного металла, но могут составлять от 0°С до 150°С и от 5 до 60 мин соответственно.

[0135] Комплекс, полученный вышеуказанным способом получения, можно выделить и очистить с помощью общего способа, такого как экстракция, кристаллизация, дистилляция или колоночная хроматография.

В случае, когда в качестве металла используется радиоактивный металл, то комплекс также может быть получен на основе вышеуказанного способа получения. С учетом того факта, что радиоактивный металл излучает радиацию и того факта, что радиоактивный металл является микроэлементом, следует обратить внимание на следующие моменты.

Не является предпочтительным излишне удлинять время реакции, поскольку соединение, возможно, будет разлагаться в результате облучения. Как правило, меченое соединение можно получить с радиохимическим выходом выше 80%. Однако в случае, когда требуется более высокая степень чистоты, то соединение можно очистить с помощью способа, такого как препаративная жидкостная хроматография, препаративная ТСХ, диализ, твердофазная экстракция и/или ультрафильтрация.

Кроме того, в отношении комплекса фторида металла, который представляет собой комбинацию фторида и металла, в качестве металла, то комплекс можно получить проведением реакции между комплексом фторида металла и соединением, представленным формулой [11], или его солью. Данную реакцию можно выполнить, например, способом, описанным в заявке на патент Японии JP5388355A.

Для того, чтобы ингибировать разложение, вызванное облучением, то предпочтительно внести добавку, такую как гентизиновая кислота, аскорбиновая кислота, бензиловый спирт, токоферол, галловая кислота, сложный эфир галловой кислоты или α-тиоглицерин.

[0136] Далее будет описан способ получения исходных соединений для способа получения.

Способ получения A

[0138]

[0139] (в формулах X представляет атом галогена, R^a представляет аминозащитную группу, и R¹, R², L¹ и L² имеют те же значения, определенные выше для R¹, R², L¹ и L²).

[0140] В качестве соединения, представленного формулой [24], например, известна 4-(4-(хлорсульфонил)-3,5-диметилфенокси)бутановая кислота.

[0141] (1)

Путем удаления защитной группы R^a в соединении, представленном формулой [22], может быть получено соединение, представленное формулой [23].

Данную реакцию можно провести на основе (2) способа получения 1 при условии, что аминозащитная группа R¹ и карбоксилзащитная группа R² не могут быть удалены одновременно. Например, в случае, когда аминозащитная группа R¹ и карбоксилзащитная группа R² являются защитными группами, которые можно удалить в кислых условиях, то в отношение R^a, защитная группа, такая как бензилоксикарбонильная группа, которая может быть удалена с помощью гидрирования в нейтральных условиях, или защитная группу, такая как 9-флуоренилоксикарбонильная группа, которая может быть удалена в щелочных условиях, и подвергается обработке в нейтральных условиях или в щелочных условиях.

[0142] (2)

Путем проведения реакции между соединением, представленным формулой [23], и соединением, представленным формулой [24], в присутствии основания, можно получить соединение, представленное формулой [1].

[0143] Растворитель, используемый в этой реакции, особым образом не ограничивается, при условии, что растворитель не оказывает отрицательного влияния на ход реакции. Примеры растворителя включают простые эфиры, сложные эфиры, галогенированные углеводороды, нитрилы и амиды. Данные растворители могут быть использованы, будучи смешанными. В качестве растворителя галогенированные углеводороды и простые эфиры являются предпочтительными, и метиленхлорид и тетрагидрофуран являются более предпочтительными.

Количество используемого растворителя особым образом не ограничивается и может быть больше количества соединения, представленного формулой [23], в 1-1000 раз (об./мас.).

[0144] Примеры основания, которое используется в этой реакции, включают неорганическое основание и органическое основание. В качестве основания гидрокарбонат натрия, карбонат натрия, карбонат калия и N-метилимидазол являются предпочтительными, и гидрокарбонат натрия и карбонат натрия являются более предпочтительными.

Количество используемого основания может быть больше количества соединения, представленного формулой [23], в 1-50 раз в расчете на моли и предпочтительно больше количества соединения в 1-10 раз в расчете на моли.

[0145] Количество соединения, представленного формулой [24], особым образом не ограничивается. Количество может быть больше количества соединения, представленного формулой [23], в 1-150 раз в расчете на моли и предпочтительно больше количества соединения в 1-10 раз в расчете на моли.

[0146] Температура реакции может составлять от -30°С до 100°С и предпочтительно составляет от 0°С до 50°С.

Время реакции предпочтительно составляет от 1 мин до 72 ч.

[0147] Способ получения Aa

В случае, когда R¹ представляет атом водорода, то соединение, представленное формулой [22], представляет соединение, представленное формулой [27].

[0148]

[0149] (в формулах R^a, R² и L¹ имеют те же значения, определенные выше для R^a, R² и L¹).

[0150] В качестве соединения, представленного формулой [25], например, известна 5-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)пентановая кислота.

В качестве соединения, представленного формулой [26], например, известен (S)-трет-бутил 3-амино-2-(((бензилокси)карбонил)амино)пропаноат.

[0151] Путем проведения реакции между соединением, представленным формулой [25], и соединением, представленным формулой [26], в присутствии конденсирующего агента и в присутствии или в отсутствие основания, можно получить соединение, представленное формулой [27].

Данную реакцию можно провести на основе (1) способа получения 1.

[0152] Способ получения Ab

В случае, когда R¹ представляет аминозащитную группу, то соединение, представленное формулой [22], представляет соединение, представленное формулой [31].

[0153]

[0154] (в формулах R^b представляет карбоксилзащитную группу, R^c представляет аминозащитную группу, и R^a, R² и L¹ имеют те же значения, определенные выше для R^a, R² и L¹).

[0155] В качестве соединения, представленного формулой [28], например, известны этил 5-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)пентаноат и метил 5-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)пентаноат.

[0156] Соединение, представленное формулой [31], может быть получено из соединения, представленного формулой [28].

(1)

Путем защиты аминогруппы в 1,2,3,4-тетрагидро-1,8-нафтиридинильной группе соединения, представленного формулой [28], можно получить соединение, представленное формулой [29].

R^c предпочтительно представляет C_1-6 алкоксикарбонильную группу, которая может быть замещена, гетероциклическую сульфонильную группу, которая может быть замещена, или арилсульфонильную группу, которая может быть замещена, более предпочтительно C_1-6 алкоксикарбонильную группу, которая может быть замещена одним или несколькими заместителями, выбранными из группы заместителей А, гетероциклическую сульфонильную группу, которая может быть замещена одним или несколькими заместителями, выбранными из группы заместителей А, или арилсульфонильную группу, которая может быть замещена одним или несколькими заместителями, выбранными из группы заместителей А, и еще более предпочтительно C_1-6 алкоксикарбонильную группу, 2,2,4,6,7-пентаметилдигидробензофуран-5-сульфонильную группу или 2,2,5,7,8-пентаметилхроман-6-сульфонильную группу.

В случае, когда R^c представляет 2,2,4,6,7-пентаметилдигидробензофуран-5-сульфонильную группу или 2,2,5,7,8-пентаметилхроман-6-сульфонильную группу, то R^c можно избирательно удалить.

[0157] (2)

Путем удаления защитной группы R^b в соединении, представленном формулой [29], может быть получено соединение, представленное формулой [30].

Данную реакцию можно провести на основе (2) способа получения 1 в условиях, когда защитная группа R^c не подвергается удалению одновременно. Например, в случае, когда защитная группа R^c представляет C_1-6 алкоксикарбонильную группу, C_1-6 алкилсульфонильную группу, арилсульфонильную группу или гетероциклическую сульфонильную группу, то соединение, представленное формулой [30], может быть получено щелочным гидролизом.

[0158] (3)

Путем проведения реакции между соединением, представленным формулой [30], и соединением, представленным формулой [26], в присутствии конденсирующего агента и в присутствии или в отсутствие основания, может быть получено соединение, представленное формулой [31].

Данную реакцию можно провести на основе (1) способа получения 1.

[0159] В качестве другого способа, путем защиты аминогруппы в соединении, представленном формулой [27], можно получить соединение, представленное формулой [31].

Данную реакцию можно провести на основе (1) способа получения Ab.

[0160] Способ получения B

[0161]

[0162] (в формулах R^d представляет гидроксильную группу или уходящую группу; R^e представляет аминозащитную группу; R^f представляет аминозащитную группу; и L³, A¹ и m имеют те же значения, определенные выше для L³, A¹ и m).

[0163] В качестве соединения, представленного формулой [32], например, известен бензил(2-аминоэтил)карбамат.

В качестве соединения, представленного формулой [33], например, известна (R)-2-(((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-3-сульфопропановая кислота.

[0164] (1)

Путем проведения реакции между соединением, представленным формулой [32], и соединением, представленным формулой [33], в присутствии основания может быть получено соединение, представленное формулой [34].

Данную реакцию можно провести на основе (1) способа получения 1.

[0165] (2)

Соединение, представленное формулой [35], может быть получено путем удаления защитной группы R^e в соединении, представленном формулой [34].

Данную реакцию можно провести на основе (2) способа получения 1.

В случае, когда m равно 2 или 3, то повторением операции взаимодействия соединения, представленного формулой [34], с соединением, представленным формулой [33], и затем удалением защитной группы R^e, может быть получено соединение, представленное формулой [35].

[0166] (3)

Соединение, представленное формулой [36], представляет соединение, известное как бифункциональный хелат.

В качестве соединения, представленного формулой [36], например, известны три-трет-бутиловый эфир 1,4,7,10-тетраазациклододекан-1,4,7,10-тетрауксусной кислоты (DOTA), имеющий защищенную карбоксильную группу, и ((R)-4-(4,7-бис(2-(трет-бутокси)-2-оксоэтил)-1,4,7-триазонан-1-ил)-5-(трет-бутокси)-5-оксопентановая кислота (NODAGA) с защищенной карбоксильной группой.

В случае, когда R^d в формуле [36] представляет гидроксильную группу, то путем проведения реакции между соединением, представленным формулой [35], и соединением, представленным формулой [36], в присутствии конденсирующего агента и в присутствии или в отсутствие основания может быть получено соединение, представленное формулой [37].

В случае, когда R^d в формуле [36] является активным эфиром сукцинимидоксидной группы или тому подобное, то путем проведения реакции между соединением, представленным формулой [35], и соединением, представленным формулой [36], в присутствии или в отсутствие основания может быть получено соединение, представленное формулой [37].

Данную реакцию можно провести на основе (1) способа получения 1.

(4)

Посредством удаления защитной группы R^f в соединении, представленном формулой [37], можно получить соединение, представленное формулой [3].

Данную реакцию можно провести на основе (2) способа получения 1.

[0167] Путем проведения известной реакции, такой как конденсация, присоединение, окисление, восстановление, перегруппировка, замещение, галогенирование, дегидратация или гидролиз, или путем проведения реакции, осуществляемой соответствующим объединением вышеуказанных реакций, соединения, полученные вышеуказанными способами получения, могут быть преобразованы в другие соединения.

[0168] Соединения, полученные вышеуказанными способами получения, можно выделить и очистить с помощью общего способа, такого как экстракция, кристаллизация, дистилляция или колоночная хроматография. Кроме того, соединения, полученные вышеуказанными способами получения, могут быть использованы, как таковые, для следующей реакции, без выделения.

[0169] В случае, когда аминогруппа, гидроксильная или карбоксильная группа присутствуют в соединениях, полученных вышеуказанными способами получения, и их промежуточных продуктах, то реакцию можно провести соответствующей рекомбинацией в них защитных групп. В случае, когда имеется две или более защитных групп, то защитные группы можно избирательно удалить, подвергнув известной реакции.

[0170] Среди соединений, используемых в вышеуказанных способах получения, соединение, которое может принимать форму соли, можно использовать в виде соли.

[0171] В случае, когда соединения, используемые в вышеуказанных способах получения, имеют изомеры (например, оптический изомер, геометрический изомер и таутомер), то такие изомеры также могут быть использованы. Кроме того, в случае, когда имеются сольват, гидрат и кристаллы различной формы, то такие сольваты, гидраты и кристаллы различной формы также могут быть использованы.

Примеры

[0172] Далее настоящее изобретение будет более конкретно описано на основе ссылочных примеров и примеров, но настоящее изобретение не ограничивается ими.

[0173] Если не указано иное, то в качестве носителя для колоночной хроматографии на силикагеле использовали силикагель 60N, 63-210 мкм (сферический/нейтральный) (производства KANTO KAGAKU).

Отношение компонентов в элюенте представляет собой объемное отношение.

Например, «смесь гексан/этилацетат=от 90/10 до 50/50» означает, что элюент «смесь гексан:этилацетат=90:10» сменялся на элюент «смесь гексан:этилацетат=50:50».

[0174] ¹H-ЯМР спектры снимали с использованием спектрометров Bruker A V300 (производства Bruker) или JEOL JNM-AL400 (JEOL) с использованием тетраметилсилана в качестве внутреннего стандарта, и значения δ были описаны с использованием м.д.

[0175] Если не указано иное, то анализ ВЭЖХ проводили с использованием хроматографа Nexera HPLC System (Shimadzu Corporation) (колонка TSGgel ODS-100Z (Tosoh Corporation), 4,6 × 150 мм, колонка: GL Intertsustain C18 (GL Sciences Inc.), 4,6 × 150 мм или колонка: Waters BEH C18 (WATERS), 2,1 × 100 мм), растворитель: (на основе муравьиной кислоты) раствор А=муравьиная кислота:вода (1:1000), раствор B=муравьиная кислота:метанол:ацетонитрил (1:800:200), (на основе ацетата аммония) раствор А=5 мМ водный раствор ацетата аммония, раствор В=5 мМ водный раствор ацетата аммония:метанол:ацетонитрил (5:36:9) или (на основе ТФУК) раствор A=ТФУК:вода:ацетонитрил (1:900:100), раствор B=ТФУК:вода:ацетонитрил (1:100:900), градиентный цикл: 0 мин (раствор А/раствор B=90/10), 30 мин (раствор А/раствор B=0/100), скорость потока 1,0 мл/мин). Время удерживания (мин) описывали с использованием времени удерживания (мин). В случае, когда условия анализа были другими, то условия описаны в ссылочных примерах или примерах.

[0176] Если не указано иное, то препаративную ВЭЖХ проводили с использованием системы Waters 600E (Waters) (колонка: SunFire PrepC18OBD 30 × 150 мм (Waters) или SunFire PrepC18OBD 19 × 150 мм (Waters), растворитель: раствор А=муравьиная кислота:вода (1:1000), раствор В=муравьиная кислота:метанол:ацетонитрил (1: 800:200) или растворитель: раствор А=10 мМ водный раствор ацетата аммония, раствор В=10 мМ водный раствор ацетата аммония:метанол:ацетонитрил (10:800:200)).

[0177] Если не указано иное, то для анализа ТСХ использовали силикагель 60F₂₅₄ (Merck) или RP-18F₂₅₄ (Merck).

[0178] Анализ МС и ЖХ/МС проводили с использованием системы ACQUITY SQD LC/MS (Waters) (колонка BEHC18 2,1 × 30 мм (Waters), раствор А=0,1% муравьиная кислота/вода, раствор B=0,1% муравьиная кислота/ацетонитрил, градиентный цикл: 0 мин (раствор А/раствор B=95/5), 2 мин (раствор А/раствор B=5/95), 3 мин (раствор А/раствор B=5/95), скорость потока: 0,5 мл/мин). Время удерживания (мин) описывали с использованием времени удерживания (мин), и детектировали положительные и отрицательные ионные пики ESI.

[0179] Каждая аббревиатура означает следующее.

Boc: трет-бутоксикарбонил

(ВОС)₂O: ди-трет-бутилдикарбонат

tBU: трет-бутил

DIEA: N,N-диизопропилэтиламин

DMAc: N,N-диметилацетамид

ДМФА: N,N-диметилформамид

Et: этил

Fmoc: 9-флуоренилметилоксикарбонил

HBTU: гексафторфосфат O-бензотриазол-1-ил-1,1,3,3-тетраметилурония

IPA: 2-пропанол

Me: метил

NMP: N-метилпирролидон

TBME: трет-бутилметиловый эфир

ТФУК: трифторуксусная кислота

ТГФ: тетрагидрофуран

Z: бензилоксикарбонил

[0180]

[0181] Ссылочный пример 1

(1)

[0182]

[0183] HBTU (67,9 г) добавляли 5 отдельными порциями с интервалом 10 мин к раствору в DMAc (500 мл) 5-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)пентановой кислоты (41,9 г), (S)-трет-бутил 3-амино-2-((бензилокси)карбонил)амино)пропаноата (50,0 г) и DIEA (57,8 мл) с последующим перемешиванием в течение 2 ч при комнатной температуре. К реакционной смеси добавляли водный насыщенный раствор гидрокарбоната натрия (50 мл) с последующим перемешиванием в течение 10 мин. Затем добавляли водный насыщенный раствор гидрокарбоната натрия (200 мл) с последующим перемешиванием в течение 30 мин. К этому добавляли этилацетат (300 мл) с последующим перемешиванием в течение 10 мин. После этого нерастворимое вещество удаляли фильтрованием и полученный продукт дважды промывали этилацетатом (100 мл). Органический слой дважды промывали водным насыщенным раствором гидрокарбоната натрия (250 мл), и затем дважды водным насыщенным раствором хлорида натрия (100 мл). Органический слой высушивали над безводным сульфатом натрия и растворитель отгоняли при пониженном давлении. К полученному остатку добавляли этилацетат (300 мл) и гексан (170 мл), и раствор перемешивали в течение ночи для осаждения твердого вещества. Затем добавляли гексан (430 мл) с последующим перемешиванием в течение 2 ч при комнатной температуре. Твердое вещество собирали фильтрованием с получением тем самым (S)-трет-бутил 2-(((бензилокси)карбонил) амино)-3-(5-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)пентанамид) пропаноата (69,0 г) в виде светло-желтого твердого вещества.

МС (ESI, m/z): 511 [М+Н]⁺

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ: 7,38-7,27 (5H, м), 7,05 (1H, д, J=7,3 Гц), 6,33 (1H, д, J=7,3 Гц), 6,15-6,03 (2H, м) 6,01 (2H, уш.д, J=5,9 Гц), 5,10 (2H, с), 4,95-4,82 (1H, м), 4,31 (1H, дт, J=5,9 Гц, 5,9 Гц), 3,64 (2H, т, J=2,5 Гц), 2,28-2,46 м), 1,73-1,59 (4H, м), 1,45 (9H, с)

ВЭЖХ (TSKgel ODS-100Z, на основе муравьиной кислоты) время удерживания (мин): 15,69

[0184] (2)

[0185]

[0186] Метанол (25 мл) и 10% палладий на угле (0,250 г) добавляли к (S)-трет-бутил 2-(((бензилокси)карбонил)амино)-3- (5-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)пентанамид) пропаноату (5,00 г) с последующим перемешиванием в течение 1 ч в атмосфере водорода при давлении 0,4 МПа. Нерастворимое вещество удаляли фильтрованием и метанол отгоняли при пониженном давлении. Операцию добавления ацетонитрила (10 мл) к остатку и отгонку растворителя при пониженном давлении повторяли дважды с получением тем самым (S)-трет-бутил 2-амино-3-(5-(5,6,7,8-трагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)пентанамид)пропаноата (3,83 г) в виде светло-желтого маслянистого вещества.

МС (ESI, m/z): 377 [М+Н]⁺

¹H-ЯМР (CDCl3) δ: 7,04 (д, J=7,3 Гц, 1H), 6,33 (д, J=7,3 Гц, 1H), 6,26-6,13 (м, 1H), 5,01-4,88 (м, 1H) 3,70-3,57 (м, 1H), 3,51-3,44 (м, 1H), 3,43-3,35 (м, 2H), 3,32-3,20 (м, 1H), 2,73-2,63 (м, 2H), 2,60-2,50 (м, 2H), 2,26-2,15 (м, 2H), 1,96-1,84 (м, 2H), 1,80-1,61 (м, 6H), 1,46 (с, 9H)

ВЭЖХ (TSKgel ODS-100Z, на основе муравьиной кислоты) время удерживания (мин): 21,41

[0187] (3)

[0188]

[0189] 4-(4-Хлорсульфонил)-3,5-диметилфенокси)бутановую кислоту (0,670 г) добавляли к суспензии в метиленхлориде (20 мл) (S)-трет-бутил 2-амино-3-(5-5,6,7,8-террагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)пентанамид)пропаноата (1,99 г) и гидрокарбоната натрия (1,23 г) с охлаждением на льду с последующим перемешиванием в течение 30 мин. Затем добавляли 4-(4-(хлорсульфонил)-3,5-диметилфенокси)бутановую кислоту (0,340 г) с последующим перемешиванием в течение 30 мин. Затем добавляли 4-(4-(хлорсульфонил)-3,5-диметилфенокси)бутановую кислоту (0,340 г) с последующим перемешиванием в течение 1 ч. Раствор перемешивали в течение 14 ч при комнатной температуре и растворитель отгоняли при пониженном давлении. К полученному остатку добавляли этилацетат (30 мл) и воду (30 мл), раствор перемешивали и добавляли карбонат натрия (3,0 г) для доведения рН до 9,6. Разделение жидкостей проводили добавлением воды (50 мл) и этилацетата (50 мл) и водный слой промывали этилацетатом (40 мл). К водному слою добавляли ацетонитрил (80 мл) и хлорид аммония (30 г) с последующим перемешиванием. Затем органический слой отделяли, водный слой экстрагировали, используя ацетонитрил (40 мл), и весь органический слой высушивали над безводным сульфатом натрия. Растворитель отгоняли при пониженном давлении с получением тем самым (S)-4-(4-(N-(1-(трет-бутокси)-1-оксо-3-(5-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)пентанамид)пропан-2-ил)сульфамоил)-3,5-диметилфенокси)бутановой кислоты (2,58 г) в виде желтого аморфного твердого вещества.

МС (ESI, m/z): 647 [М+Н]⁺

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ: 7,24 (1H, д, J=7,3 Гц), 6,67 (2H, с), 6,27 (1H, д, J=7,3 Гц), 6,08-5,86 (1H, м) 5,62 (1H, м), 4,17-3,99 (2H, м), 3,93-3,83 (1H, м), 3,58-3,25 (4H, м), 2,80-2,56 (11H, м), 2,54-2,42 (2H, м), 2,19-2,05 (2H, м), 2,01-1,76 (4H, м), 1,73-1,45 (4H, м), 1,40 (9H, с)

ВЭЖХ (TSKgel ODS-100Z, на основе муравьиной кислоты) время удерживания (мин): 15,90

[0190] Ссылочный пример 2

(1)

[0191]

[0192] (BOC)₂O (3,1 мл) добавляли к смеси (S)-трет-бутил 2- ((бензилокси)карбонил)амино)-3-(5-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)пентанамид)пропаноата (2,3 г), ТГФ (25 мл) и DIEA (2,4 мл) и смесь кипятили с обратным холодильником в течение 8 ч. Растворитель отгоняли при пониженном давлении и полученный продукт очищали колоночной хроматографией на силикагеле (смесь гексан/этилацетат=1/1) с получением тем самым (S)-трет-бутил 7-(5-((2-(((бензилокси)карбонил)амино)-3-(трет-бутокси)-3-оксопропил)амино)-5-оксопентил)-3,4-дигидро-1,8-нафтиридин-1(2H)карбоксилата (1,86 г) в виде светло-желтого маслянистого вещества.

ЖХ/МС время удерживания (мин): 1,37

МС (ESI, m/z): 611,4 [М+Н]⁺

[0193] (2)

[0194]

[0195]

7-(5-((2-(((Бензилокси)карбонил)амино)-3-(трет-бутокси)-3-оксопропил)амино)-5-оксопентил)-3,4-дигидро-1,8-нафтиридин-12H)карбоксилат (750 мг), 10% палладий на угле (0,13 г) и метанол (30 мл) помещали в трубку из нержавеющей стали и перемешивали в течение 4 ч в атмосфере азота при давлении 0,5 МПа. Нерастворимое вещество удаляли фильтрованием и растворитель отгоняли при пониженном давлении с получением тем самым (S)-трет-бутил 7-(5-((2-амино-3-(трет-бутокси)-3-оксопропил)амино)-5-оксопентил)-3,4-дигидро-1,8-нафтиридин-1(2H)карбоксилата (617 мг) в виде светло-желтого маслянистого вещества.

ЖХ/МС время удерживания (мин): 0,79

МС (ESI, m/z): 477,3 [М+Н]⁺

[0196] (3)

[0197]

[0198] N-метилимидазол (0,5 мл) и 4-(4-(хлорсульфонил)-3,5-диметилфенокси)бутановую кислоту (1,8 г) добавляли при 0°С к раствору в ТГФ (10 мл) (S)-трет-бутил 7-(5-((2-амино-3-(трет-бутокси)-3-оксопропил)амино)-5-оксопентил)-3,4-дигидро-1,8-нафтиридин-1(2Н)карбоксилата (2,8 г), смесь перемешивали в течение 3 ч при 0°С и растворитель отгоняли при пониженном давлении. К полученному остатку добавляли этилацетат (30 мл) и воду (30 мл), органический слой отделяли, промывали насыщенным водным раствором хлорида натрия (30 мл) и затем высушивали над безводным сульфатом натрия. Растворитель отгоняли при пониженном давлении и полученный продукт очищали колоночной хроматографией на силикагеле (привитый диол силикагель (CHROMATOREX-DIOL, FUJI SILYSIA CHEMICAL LTD), смесь гексан/этилацетат=от 55/45 до 20/80) с получением тем самым (S)-4-(4-(N-(1-(трет-бутокси)-3-(5-(8-(трет-бутоксикарбонил)-5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)пентанамид)-1-оксопропан-2-ил)сульфамоил)-3,5-диметилфенокси)бутановой кислоты (1,58 г) в виде желтого аморфного твердого вещества.

ЖХ/МС время удерживания (мин): 1,23

МС (ESI, m/z): 747,4 [М+Н]⁺

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ: 7,33 (1H, д, J=7,9 Гц), 6,84 (1H, д, J=7,9 Гц), 6,63 (2H, с), 5,75 (1H, т, J=5,6 Гц), 5,64 (1H, д, J=7,3 Гц), 4,17-3,97 (3H, м), 3,86-3,65 (3H, м), 3,54-3,28 (2H, м), 2,77-2,68 (4H, м), 2,62 (6H, с), 2,51 (2H, т, J=6,6 Гц), 2,15-1,86 (6H, м), 1,74-1,47 (6H, м), 1,50 (9H, с), 1,37 (9H, с)

[0199] Ссылочный пример 3

(1-А-1)

[0200]

[0201] 2,2,5,7,8-Пентаметилхроман-6-ил)сульфонилхлорид (3,02 г) добавляли к смеси метил 5-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)пентаноата (2,00 г), карбоната калия (1,66 г) и ацетонитрила (12 мл) с последующим перемешиванием в течение 1,5 ч при 70°С. Добавлением этилацетата (20 мл) и воды (30 мл) органический слой отделяли. После этого органический слой промывали один раз водным насыщенным раствором гидрокарбоната натрия (20 мл) и затем дважды водным насыщенным раствором хлорида натрия (20 мл) и высушивали над безводным сульфатом натрия, и растворитель отгоняли при пониженном давлении. Полученный остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (смесь гексан/этилацетат=от 90/10 до 75/25) с получением тем самым метил 5-(8-((2,2,5,7,8-пентаметилхроман-6-ил)сульфонил)-5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)пентаноата (2,87 г) в виде светло-желтого пенистого вещества.

ЖХ/МС время удерживания (мин): 2,06

МС (ESI, m/z): 515,5 [М+Н]⁺

(1-А-2)

[0203]

[0204] 2,5 М водный раствор гидроксида натрия (3 мл) и метанол (5 мл) добавляли к смеси метил 5-(8-((2,2,5,7,8-пентаметилхроман-6-ил)сульфонил)-5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)пентаноата (1,94 г), ТГФ (10 мл) и воды (1 мл) с последующим перемешиванием в течение 3 ч при комнатной температуре. Растворитель отгоняли при пониженном давлении и к остатку добавляли воду (15 мл) и гидросульфат натрия для доведения значения рН до 4. Добавлением этилацетата (15 мл) органический слой отделяли. Затем органический слой промывали водой (20 мл) и насыщенным водным раствором хлорида натрия (20 мл) и высушивали над безводным сульфатом натрия. Растворитель отгоняли при пониженном давлении с получением тем самым 5-(8-((2,2,5,7,8-пентаметилхроман-6-ил)сульфонил)-5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)пентановой кислоты (2,00 г) в виде бесцветного пенистого вещества.

ЖХ/МС время удерживания (мин): 1,78

МС (ESI, m/z): 501,4 [М+Н]⁺

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ: 7,18 (1H, д, J=7,2 Гц), 6,55 (1H, д, J=7,1 Гц), 4,06-4,09 (2H, м), 2,75 (2H, т, J=6,6 Гц), 2,64 (2H, т, J=6,6 Гц), 2,59 (с, 3H), 2,53 (с, 3H), 2,35 (2H, т, J=7,2 Гц), 2,16 (2H, т, J=7,2 Гц), 2,12 (3H, с), 2,02-2,08 (2H, м), 1,81 (2H, т, J=7,2 Гц), 1,33-1,47 (2H, м), 1,14-1,26 (2H, м)

[0205] (1-А-3)

[0206]

HBTU (1,22 г) добавляли к раствору в ДМФА (8 мл) 5-(8-((2,2,5,7,8-пентаметилхроман-6-ил)сульфонил)-5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)пентановой кислоты (1,47 г), (S)-трет-бутил 3-амино-2-(((бензилокси)карбонил)амино)пропаноата (951 мг) и DIEA (1,13 мл) с последующим перемешиванием в течение 30 мин при комнатной температуре. К этому добавляли воду (30 мл) и этилацетат (30 мл) с последующим перемешиванием. Органический слой отделяли, последовательно промывали 5% водным раствором лимонной кислоты (15 мл), водой (15 мл), насыщенным водным раствором хлорида натрия (15 мл), водным насыщенным раствором гидрокарбоната натрия (15 мл) и водным насыщенным раствором хлорида натрия (15 мл) и высушивали над безводным сульфатом натрия и растворитель отгоняли при пониженном давлении. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (смесь гексан/этилацетат=от 60/40 до 30/70) с получением тем самым (S)-трет-бутил 2-((бензилокси)карбонил)амино)-3-(5-(8-((2,2,5,7,8-пентаметилхроман-6-ил)сульфонил)-5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)пентанамид)пропаноата (2,16 г ) в виде бесцветного пенистого вещества.

ЖХ/МС время удерживания (мин): 2,08

МС (ESI, m/z): 777,7 [М+Н]⁺

[0208] (1-В)

[0209]

[0210] 2,2,5,7,8-Пентаметилхроман-6-ил)сульфонилхлорид (0,712 г) добавляли к смешанному раствору (S)-трет-бутил 2-((бензилокси)карбонил)амино)-3-(5-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)пентанамид)пропаноата (1,0 г), карбоната калия (0,677 г) и ацетонитрила (5,6 мл) при комнатной температуре, с последующим перемешиванием в течение 1 ч при комнатной температуре и раствор кипятили с обратным холодильником в течение 3 ч. Температуру реакционного раствора снижали до комнатной температуры, добавляли воду (10 мл) и экстрагировали, используя этилацетат. Органический слой промывали водным насыщенным раствором хлорида натрия и высушивали над безводным сульфатом натрия и растворитель отгоняли при пониженном давлении. Полученный остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (смесь гексан/этилацетат) с получением тем самым (S)-трет-бутил 2-(((бензилокси)карбонил)амино)-3-(5-(8-((2,2,5,7,8-пентаметилхроман-6-ил)сульфонил)-5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)пентанамид)пропаноата (0,500 г) в виде белого твердого вещества.

ЖХ/МС время удерживания (мин): 2,08

МС (ESI, m/z): 777,7 [М+Н]⁺

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ: 7,37-7,29 (м, 4H), 7,15 (д, 1H, J=7,9 Гц), 6,53 (д, 1H, J=7,9 Гц), 5,99-5,90 (м, 1H) 5,79-5,71 (м, 1H), 5,09 (с, 2H), 4,34-4,22 (м, 1H), 4,11-4,02 (м, 2H), 3,72-3,50 (м, 2H), 2,73 (т, 2H, J ), 2,63 (т, 2H, J=6,6 Гц) ), 1,79 (т, 2H, J=6,9 Гц), 1,58-1,50 (м, 8H), 1,48-1,35 (м, 8H), 1,33-1,15 (м, 6H)

[0211] (2)

[0212]

[0213] Метанольный раствор (14 мл) (S)-трет-бутил 2-(((бензилокси)карбонил)амино)-3-(5-(8-((2,2,5,7,8-пентаметилхроман-6-ил)сульфонил)-5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)пентанамид)пропаноата (0,500 г) пропускали через реактор для гидрирования поточного типа (H-Cube, ThalesNano Inc.), снабженный картриджем с 10% палладием на угле, и растворитель отгоняли при пониженном давлении с получением тем самым (S)-трет-бутил 2-амино-3-(5-(8-((2,2,5,7,8-пентаметилхроман-6-ил)сульфонил)-5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)пентанамид)пропаноата (0,309 г) в виде светло-желтого твердого вещества.

ЖХ/МС время удерживания (мин): 1,45

МС (ESI, m/z): 643,6 [М+Н]⁺

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ: 7,16 (д, 1H, J=7,9 Гц), 6,54 (д, 1H, J=7,9 Гц), 6,09-5,98 (м, 1H), 4,12-4,02 (м, 2H) 3,67-3,56 (м, 1H), 3,49-3,42 (м, 1H), 3,30-3,18 (м, 1H), 2,74 (т, 2H, J=6,3 Гц), 2,64 (т, 2H, J=6,9 Гц), 2,57 (с, 3H), 2,54 (с, 3H), 2,33 (т, 2H, J=7,3 Гц), 2,14-1,97 (м, 6H), 1,90-1,68 (м, 4H), 1,51-1,37 (м, 11H), 1,34-1,16 (м, 9H)

[0214] (3)

[0215]

[0216] 4-(4-(Хлорсульфонил)-3,5-диметилфенокси)бутановую кислоту (57,4 мг) добавляли к смешанному раствору (S)-трет-бутил 2-амино-3-(5-(8-((2,2,5,7,8-пентаметилхроман-6-ил)сульфонил)-5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)пентанамид)пропаноата (100 мг), гидрокарбоната натрия (39,3 мг) и N,N-диметилацетамида (1,6 мл) с последующим перемешиванием в течение 27 ч при комнатной температуре с получением тем самым реакционной смеси, содержащей (S)-4-(4-(N-(1-(трет-бутокси)-1-оксо-3-(5-(8-((2,2,5,7,8-пентаметилхроман-6-ил)сульфонил)-5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)пентанамид)пропан-2-ил)сульфамоил)-3,5-диметилфенокси)бутановой кислоты.

[0217] Ссылочный пример 4

(1-А-1)

[0218]

[0219] Ацетонитрил (8 мл) добавляли к смеси метил 5-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)пентаноата (1,04 г), (2,2,4,6,7-пентаметил-2,3-дигидробензофуран-5-ил)сульфонил хлорида (1,33 г) и карбоната калия (870 мг) с последующим перемешиванием в течение 8 ч при 70°С. Добавлением этилацетата (20 мл) и воды (30 мл) к смеси органический слой отделяли. Затем органический слой промывали водным насыщенным раствором гидрокарбоната натрия (30 мл) и высушивали над безводным сульфатом натрия и растворитель отгоняли при пониженном давлении. Полученный остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (смесь гексан/этилацетат=от 85/15 до 65/35) и затем перекристаллизовывали из смеси IPA/гексан с получением тем самым метил 5-(8-((2,2,4,6,7-пентаметил-2,3-дигидробензофуран-5-ил)сульфонил)-5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)пентаноата (1,18 г) в виде белого твердого вещества.

ЖХ/МС время удерживания (мин): 1,96

МС (ESI, m/z): 501,4 [М+Н]⁺

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ: 7,19 (1H, д, J=8,1 Гц), 6,56 (1H, д, J=8,1 Гц), 4,06-4,13 (2H, м), 3,64 (3H, 2H, с), 2,75 (2H, т, J=7,2 Гц), 2,56 (3H, с), 2,50 (3H, с), 2,37 (2H, т, J=7,2 Гц), 2,16 (2H, т, J=7,5 Гц), 2,08 (3H, с), 2,01-2,05 (2H, м), 1,22-1,32 (2H, м)

[0220] (1-А-2)

[0221]

[0222] 2,5 М водный раствор гидроксида натрия (1,2 мл) добавляли к смеси метил 5-(8-((2,2,4,6,7-пентаметил-2,3-дигидробензофуран-5-ил)сульфонил)-5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)пентаноата (499 мг), ТГФ (5 мл), воды (0,3 мл) и МеОН (2,5 мл) с последующим перемешиванием в течение 7 ч при комнатной температуре. К реакционной смеси добавляли воду (25 мл) и гидросульфат натрия до тех пор, пока значение рН не становилось равным 4, затем добавляли этилацетат (30 мл) и органический слой отделяли. Полученный органический слой дважды промывали водой (20 мл) и затем один раз водным насыщенным раствором хлорида натрия (20 мл) и высушивали над безводным сульфатом натрия. После этого растворитель отгоняли при пониженном давлении с получением тем самым 5-(8-((2,2,4,6,7-пентаметил-2,3-дигидробензофуран-5-ил)сульфонил)-5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)пентановой кислоты (501 мг) в виде бесцветного пенистого вещества.

ЖХ/МС время удерживания (мин): 1,49

МС (ESI, m/z): 487,4 [М+Н]⁺

[0223] (1-А-3)

[0224]

[0225] HBTU (436 мг) добавляли к раствору в ДМФА (4 мл) 5-(8-((2,2,4,6,7-пентаметил-2,3-дигидробензофуран-5-ил)сульфонил)-5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)пентановой кислоты (501 мг), (S)-трет-бутил 3-амино-2-(((бензилокси)карбонил)амино)пропаноата (294 мг) и DIEA (0,42 мл) с последующим перемешиванием в течение 30 мин при комнатной температуре. Добавляли водный насыщенный раствор хлорида аммония (20 мл) и этилацетат (30 мл) с последующим перемешиванием. После этого органический слой отделяли, последовательно промывали водой (20 мл) и насыщенным водным раствором хлорида натрия (20 мл) и высушивали над безводным сульфатом магния и затем растворитель отгоняли при пониженном давлении. Остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (смесь гексан/этилацетат=от 60/40 до 30/70) с получение тем самым (S)-трет-бутил 2-((бензилокси)карбонил)амино)-3-(5-(8-((2,2,4,6,7-пентаметил-2,3-дигидробензофуран-5-ил)сульфонил)-5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)пентанамид)пропаноата (768 мг) в виде бесцветного пенистого вещества.

ЖХ/МС время удерживания (мин): 2,01

МС (ESI, m/z): 763,6 [М+Н]⁺

[0226] (1-В)

[0227]

[0228] Используя (S)-трет-бутил 2-(((бензилокси)карбонил)амино)-3-(5-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)пентанамид)пропаноат (1,0 г), получали (S)-трет-бутил 2-(((бензилокси)карбонил)амино)-3-(5-(8-((2,2,4,6,7-пентаметил-2,3-дигидробензофуран-5-ил)сульфонил)-5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)пентанамид)пропаноат (136 мг) в виде светло-желтого твердого вещества способом, аналогичным описанному в (1-B) ссылочного примера 3.

ЖХ/МС время удерживания (мин): 2,01

МС (ESI, m/z): 763,7 [М+Н]⁺

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ: 7,37-7,29 (м, 4H), 7,16 (д, 1H, J=7,3 Гц), 6,54 (д, 1H, J=7,3 Гц), 5,98-5,89 (м, 1H) 5,78-5,69 (м, 1H), 5,10 (с, 2H), 4,34-4,24 (м, 1H), 4,10-4,04 (м, 2H), 3,71-3,52 (м, 2H), 2,97 (с, 2H) 2,73 (т, 2H, J=6,3 Гц), 2,55 (с, 3H), 2,49 (с, 3H), 2,35 (т, 2H, J=7,6 Гц), 2,10-1,92 (м, 5H), 1,58-1,50 (м, 5H), 1,49-1,35 (м, 15H), 1,33-1,21 (м, 2H)

[0229] (2)

[0230]

[0231] (S)-трет-Бутил 2-(((бензилокси)карбонил)амино)-3-(5-(8-((2,2,4,6,7-пентаметил-2,3-дигидробензофуран-5-ил)сульфонил)-5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)пентанамид)пропаноат (150 мг), метанол (3 мл) и 10% палладий на угле (30 мг) помещали в автоклав и перемешивали в течение 2,5 ч при комнатной температуре в атмосфере азота при давлении 0,9 МПа. Затем добавляли водород, с последующим перемешиванием в течение 3 ч при комнатной температуре в атмосфере азота при давлении 0,9 МПа. Нерастворимое вещество удаляли фильтрованием и растворитель отгоняли при пониженном давлении с получением тем самым (S)-трет-бутил 2-амино-3-(5-(8-((2,2,4,6,7-пентаметил-2,3-дигидробензофуран-5-ил)сульфонил)-5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)пентанамид)пропаноата (130 мг) в виде черного маслянистого вещества.

ЖХ/МС время удерживания (мин): 1,51

МС (ESI, m/z): 629 [M+H]⁺

¹H-ЯМР (CDCl₃, 300 МГц) δ: 7,17 (1H, д, J=7,3 Гц), 6,55 (1H, д, J=7,3 Гц), 6,01-5,94 (1H, м), 4,11-4,04 (2H, м), 3,66-3,56 (1H, м), 3,51-3,39 (1H, м), 3,28-3,18 (1H, м), 2,98 (2H, с), 2,74 (2H, т, J=6,3 Гц), 2,56 (3H, с), 2,50 (3H, с), 2,36 (2H, т, J=7,3 Гц), 2,10-1,97 (7H, м), 1,60-1,52 (4H, м), 1,46 (15H, с) 1,34-1,22 (2H, м)

[0232] (3)

[0233]

[0234] 4-(4-(Хлорсульфонил)-3,5-диметилфенокси)бутановую кислоту (58 мг) добавляли к смеси (S)-трет-бутил 2-амино-3-(5- (8-((2,2,4,6,7-пентаметил-2,3-дигидробензофуран-5-ил)сульфонил) -5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)пентанамид)пропаноата (99 мг), DMAc (1 мл) и гидрокарбоната натрия (40 мг) с последующим перемешиванием в течение 15 ч при комнатной температуре с получением тем самым реакционной смеси, содержащей (S)-4-(4-(N-(1-(трет-бутокси)-1-оксо-3-(5-(8-((2,2,4,6,7-пента метил-2,3-дигидробензофуран-5-ил)сульфонил)-5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)пентанамид)пропан-2-ил)сульфамоил)-3,5-диметилфенокси)бутановой кислоты.

ЖХ/МС время удерживания (мин): 1,86

МС (ESI, m/z): 899,4 [М+Н]⁺

[0235] Ссылочный пример 5

(1)

[0236]

[0237] К водному раствору (400 мл) L-цистеиновой кислоты (50 г) добавляли гидрокарбонат натрия (50 г) с последующим перемешиванием. Раствор в ацетоне (800 мл) 9-флуоренилметил N-сукцинимидилкарбоната (109,7 г) добавляли по каплям к вышеуказанному раствору в течение 25 мин с последующим перемешиванием в течение 7 ч при комнатной температуре. К реакционной смеси добавляли ацетон (400 мл) и твердое вещество собирали фильтрованием и три раза промывали ацетоном (100 мл). Твердое вещество растворяли в воде (600 мл) и нагревали до 50°С. Затем при перемешивании добавляли метанол (1200 мл) и затем к этому добавляли воду (200 мл) и метанол (400 мл) с последующим перемешиванием в течение 2 ч при комнатной температуре. Твердое вещество собирали фильтрованием и трижды промывали водным метанолом (смесь метанол:вода=2:1, 100 мл) с получением тем самым (R)-2-(((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-3-сульфо пропаноата динатрия (93,5 г) в виде белого твердого вещества.

ЖХ/МС время удерживания (мин): 1,01

МС (ESI, m/z): 390,1 [без M-H]^-

¹H-ЯМР (300 МГц, D₂O) δ: 7,82 (д, 2H, J=7,2 Гц), 7,66 (д, 2H, J=7,8 Гц), 7,41 (т, 2H, J=7,8 Гц), 2Н, J=7,2 Гц) ВЭЖХ (TSKgel ODS-100Z, на основе ацетата аммония) время удерживания (мин): 13,5

[0238] (2)

[0239]

[0240] Метансульфоновую кислоту (46 г) добавляли по каплям к суспензии в DMAc (500 мл) (R)-2-(((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-3-сульфопропаноата динатрия (87,1 г) в течение 5 мин с последующим перемешиванием в течение 40 мин при комнатной температуре. К реакционной смеси добавляли N-(бензилокси)карбонил-1,2-диаминоэтан гидрохлорид (51,2 г) с последующим перемешиванием в течение 30 мин при комнатной температуре. Затем добавляли DIEA (165 мл) и HBTU (83,5 г) с последующим перемешиванием в течение 1,5 ч при комнатной температуре. К реакционному раствору добавляли воду (1 л), добавляли по каплям водный раствор ацетата калия (ацетат калия (196 г)/вода (800 мл)) при перемешивании. Реакционный раствор перемешивали в течение 30 мин при температуре от 50°С до 55°С, затем охлаждали до комнатной температуры и перемешивали в течение 2 ч. Твердое вещество собирали фильтрованием и трижды промывали ледяной водой (300 мл). К полученному твердому веществу добавляли ацетон (2 л) с последующим перемешиванием в течение 1 ч при комнатной температуре. Затем твердое вещество собирали фильтрованием и три раза промывали ацетоном (200 мл) с получением тем самым (R)-2-((((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-3-((2-(((бензилокси)карбонил)амино) этил)амино)-3-оксопропан-1-сульфоната калия (106,7 г) в виде белого твердого вещества.

ЖХ/МС время удерживания (мин): 1,22

МС (ESI, m/z): 566,2 [без M-H]^-

ВЭЖХ (TSKgel ODS-100Z, на основе ацетата аммония) время удерживания (мин): 24,2

[0241] (3)

[0242]

[0243] Диэтиламин (85,5 мл) добавляли к смеси (R)-2-((((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-3-((2-(((бензилокси)карбонил)амино)этил)амино)-3-оксопропан-1-сульфоната калия (50,0 г), воды (100 мл) и ацетонитрила (300 мл) с последующим перемешиванием в течение 7 ч при комнатной температуре. Растворитель отгоняли при пониженном давлении и операцию добавления ацетонитрила (100 мл) и толуола (200 мл) к остатку и проведения концентрирования при пониженном давлении проводили дважды с получением тем самым белого твердого вещества. К твердому веществу добавляли ацетонитрил (750 мл), так чтобы твердое вещество растворилось, и затем твердое вещество собирали фильтрованием с получением тем самым (R)-2-амино-3-((2((бензилокси)карбонил)амино)этил)амино)-3-оксопропан-1-сульфоната (38 г). Твердое вещество растворяли в воде (500 мл), нерастворимое вещество удаляли фильтрованием и затем по каплям добавляли концентрированную хлористоводородную кислоту (15 мл) при комнатной температуре при перемешивании с последующим перемешиванием в течение 3 ч при комнатной температуре. Реакционную смесь охлаждали до 10°С. После этого твердое вещество собирали фильтрованием, трижды промывали ледяной водой (100 мл) и затем высушивали с получением тем самым (R)-2-амино-3-((2-((бензилокси)карбонил)амино)этил)амино)-3-оксопропан-1-сульфоновой кислоты (20,1 г) в виде белого твердого вещества.

ЖХ/МС время удерживания (мин): 0,70

МС (ESI, m/z): 346,1 [М+Н]⁺

ВЭЖХ (TSKgel ODS-100Z, на основе муравьиной кислоты) время удерживания (мин): 10,0

[0244] (4)

[0245]

[0246] Смесь (R)-2-амино-3-((2-((бензилокси)карбонил)амино)этил)амино)-3-оксопропан-1-сульфоновой кислоты (16,5 г), 2-(4,7,10-трис(2-(трет-бутокси)-2-оксоэтил)-1,4,7,10-тетраазациклододекан-1-ил)уксусной кислоты (24,8 г), DMAc (125 мл) и DIEA (18,9 мл) перемешивали в течение 20 мин при комнатной температуре и затем добавляли HBTU (17,7 г) пятью отдельными порциями с интервалом 10 мин с последующим перемешиванием в течение 1 ч при комнатной температуре. К реакционной смеси добавляли водный насыщенный раствор хлорида натрия (125 мл) и этилацетат (250 мл), и затем органическую фазу отделяли и дважды промывали водным насыщенным раствором хлорида натрия (125 мл) и затем дважды водным насыщенным раствором гидрокарбоната натрия (125 мл). Органический слой высушивали над безводным сульфатом натрия и растворитель отгоняли при пониженном давлении с получением тем самым (R)-3-((2-((бензилокси)карбонил)амино)этил)амино)-3-оксо-2-(2-(4,7,10-трис(2-(трет-бутокси)-2-оксоэтил)-1,4,7,10-тетраазациклододекан-1-ил)ацетамид)пропан-1-сульфоновой кислоты (47,6 г) в виде бесцветного пенистого вещества.

ЖХ/МС время удерживания (мин): 1,21

МС (ESI, m/z): 900,6 [М+Н]⁺

ВЭЖХ (TSKgel ODS-100Z, на основе муравьиной кислоты) время удерживания (мин): 18,5

[0247] (5)

[0248]

[0249] 10% палладий на угле (0,489 г) и метанольный раствор (20 мл) (R)-3-((2-(((бензилокси)карбонил)амино)этил)амино)-3-оксо-2-(2-(4,7,10-трис(2-(трет-бутокси)-2-оксоэтил)-1,4,7,10-тетраазациклододекан-1-ил)ацетамид)пропан-1-сульфоновой кислоты (2,05 г) помещали в трубку из нержавеющей стали с последующим перемешиванием в течение 5 ч при 30°С в атмосфере азота при давлении 0,5 МПа. Нерастворимое вещество удаляли фильтрованием, растворитель отгоняли при пониженном давлении. Затем к тому добавляли толуол (20 мл) и затем растворитель снова отгоняли при пониженном давлении с получением тем самым (R)-3-((2-аминоэтил)амино)-3-оксо-2-(2-(4,7,10-трис(2-трет-бутокси)-2-оксоэтил)-1,4,7,10-тетраазациклододекан-1-ил)ацетамид)пропан-1-сульфоновой кислоты (1,47 г) в виде розово-фиолетового твердого вещества.

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ: 8,58-8,35 (1H, м), 7,90-7,68 (1H, м), 4,73-4,59 (1H, м), 3,69-1,87 (33H, м), 1,49-1,34 (27H, м)

ВЭЖХ (TSKgel ODS-100Z) время удерживания (мин): 10,1

[0250] Ссылочный пример 6

(1-А)

[0251]

[0252] Метансульфоновую кислоту (43 мкл) добавляли к суспензии в ДМФА (1 мл) (R)-2-((((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-3-сульфопропаноата динатрия (130,6 мг) с последующим перемешиванием в течение 20 мин при комнатной температуре. Затем к смеси добавляли (R)-2-амино-3-((2-(((бензилокси)карбонил)амино)этил)амино)-3-оксопропан-2-сульфоновую кислоту (103,6 мг), DIEA (230 мкл) и HBTU (125 мг) с последующим перемешиванием в течение 20 мин при комнатной температуре. К реакционному раствору добавляли воду (0,4 мл) и при перемешивании добавляли смешанный раствор ацетата натрия (ацетат натрия (250 мг)/вода (125 мкл)/метанол (3 мл)), и IPA (9 мл) и метанол (2 мл). Полученное твердое вещество собирали фильтрованием, трижды промывали метанолом (1 мл) и высушивали при пониженном давлении с получением тем самым (9R,12R)-12-((((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-3,8,11-триоксо-1-фенил-9-(сульфонатометил)-2-окса-4,7,10-триазатридекан-13-сульфоната динатрия (213 мг) в виде белого твердого вещества.

ЖХ/МС время удерживания (мин): 1,15

МС (ESI, m/z): 717,1 [без M - H]^-

[0253] (1-В)

[0254]

[0255] Метансульфоновую кислоту (2,54 г) добавляли по каплям к суспензии в ДМФА (35,0 мл) (R)-2-((((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-3-сульфопропаноата динатрия (5,22 г) с последующим перемешиванием при комнатной температуре до получения гомогенного раствора. К раствору добавляли (R)-2-амино-3-((2-(((бензилокси)карбонил)амино)этил)амино)-3-оксопропан-1-сульфоновую кислоту (4,14 г), DIEA (9,2 мл) и HBTU (5,0 г) с последующим перемешиванием в течение 1,5 ч при комнатной температуре. К реакционному раствору добавляли воду (50,0 мл) с последующим перемешиванием в течение 30 мин при комнатной температуре, и затем нерастворимое вещество удаляли фильтрованием. Водный раствор ацетата калия (ацетат калия (11,8 г)/вода (40,0 мл)) добавляли к фильтрату при комнатной температуре при перемешивании с последующим перемешиванием в течение 1 ч и затем твердое вещество собирали фильтрованием и промывали ледяной водой (50,0 мл). К твердому веществу добавляли ацетонитрил (200 мл) с последующим перемешиванием в течение 1 ч при 60°С. Затем твердое вещество охлаждали до 35°С и собирали фильтрованием с получением тем самым (9R,12R)-12-((((9Н-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-3,8,11-триокси-1-фенил-9-(сульфона тометил)-2-окса-4,7,10-триазатридекан-13-сульфоната дикалия (8,71 г) в виде белого твердого вещества.

ЖХ/МС время удерживания (мин): 1,15

МС (ESI, m/z): 717,2 [без M - H]^-

¹H-ЯМР (300 МГц, ДМСО) δ: 8,42 (д, 1H, J=6,6 Гц), 7,95 (1H, уш.), 7,89 (2H, д, J=7,2 Гц), 7,70 (2H, т, J=6,6 Гц), 7,52 (1H, д, J=5,7 Гц), 7,41 (2H, д, J=7,2 Гц), 7,25-7,35 (7H, м), 7,10 (1H, уш.), 4,90-5,01 (2H, м), 4,25 (3H, с), 4,16-4,30 (1H, м), 2,79-3,13 (8H, м)

[0256] (2)

[0257]

[0258] Диэтиламин (1 мл) добавляли к суспензии в воде (1,4 мл) и ацетонитриле (4,2 мл) (9R,12R)-12-((((9H-флуорен-9-ил)метокси)карбонил)амино)-3,8,11-триоксо-1-фенил-9-(сульфонато метил)-2-окса-4,7,10-триазатридекан-13-сульфоната дикалия (556,5 мг) с последующим перемешиванием в течение 2 ч при комнатной температуре. Растворитель отгоняли при пониженном давлении, к остатку добавляли ацетонитрил (10 мл) и толуол (10 мл) и растворитель отгоняли при пониженном давлении. К этому добавляли ацетонитрил (20 мл) и полученный раствор перемешивали в течение ночи. Затем твердое вещество собирали фильтрованием с получением тем самым (9R,12R)-12-амино-3,8,11-триоксо-1-фенил-9-(сульфонатометил)-2-окса-4,7,10-триазатридекан-13-сульфоната дикалия (452 мг) в виде белого твердого вещества.

ЖХ/МС время удерживания (мин): 0,65

МС (ESI, m/z): 495,1 [без M - H]^-

¹H-ЯМР (ДМСО-d₆/ТФУК-d): 8,75 (1H, д, J=7,2 Гц), 8,10 (2H, уш.с), 7,28-7,26 (2H, м), 7,17 (1H, уш.с), 5,01 (2H, уш.с), 4,43 (1H, кв, J=7,2 Гц), 3,98-4,01 (1H, м), 2,78-3,18 (8H, м)

[0259] (3)

[0260]

[0261] Раствор в ДМФА (4,5 мл) (9R,12R)-12-амино-3,8,11-триоксо-1-фенил-9-(сульфонатометил)-2-окса-4,7,10-триаза тридекан-13-сульфоната дикалия (224 мг) и 2-(4,7,10-трис(2-(трет-бутокси)-2-оксоэтил)-1,4,7,10-тетраазациклододекан-1-ил) уксусной кислоты (236 мг) перемешивали в течение 20 мин при комнатной температуре, затем добавляли DIEA (0,14 мл) и HBTU (157 мг) с последующим перемешиванием. К реакционной смеси добавляли воду (0,1 мл) и этилацетат (13,5 мл) с последующим перемешиванием. После этого осажденное твердое вещество собирали фильтрованием и растворитель отгоняли при пониженном давлении. Затем добавляли воду (3 мл) и этилацетат (3 мл) и водный слой отделяли и промывали этилацетатом (3 мл). Затем к этому добавляли водный насыщенный раствор гидрокарбоната натрия (2 мл) и на обращеннофазовую колонку с силикагелем (внутренний диаметр стеклянной колонки: 10,5 см, Daisogel-SR120-40/60-ODS-RPS: 400 г) наносили раствор и элюирование проводили при нормальном давлении с использованием водного насыщенного раствора карбоната натрия (6 мл), воды (6 мл), воды, содержащей 0,1% муравьиной кислоты (6 мл), воды, содержащей 0,1% муравьиной кислоты/20% ацетонитрила (6 мл), воды, содержащей 0,1% муравьиной кислоты/40% ацетонитрила (12 мл), и воды, содержащей 0,1% муравьиной кислоты/60% ацетонитрила (12 мл) в таком порядке, с получением (9R,12R)-3,8,11-триоксо-1-фенил-9-(сульфометил)-12-(2-(4,7,10-трис(2-(трет-бутокси)-2-оксоэтил)-1,4,7,10-тетраазациклододекан-1-ил)ацетамид)-2-окса-4,7,10-триазатридекан-13-сульфоновой кислоты (265 мг) в виде белого твердого вещества.

МС (ESI, m/z): 1151 [М+Н]⁺

¹H-ЯМР (D₂O) δ: 7,49-7,35 (5H, м), 5,10 (2H, с), 4,35-2,82 (34H, м), 1,57-1,38 (27H, м)

[0262] (4)

[0263]

[0264] 10% палладий на угле (26 мг), (9R,12R)-3,8,11-триоксо-1-фенил-9-(сульфометил)-12-(2-(4,7,10-трис(2-(трет-бутокси)-2-оксоэтил)-1,4,7,10-тетраазациклододекан-1-ил)ацетамид)-2-окса-4,7,10-триазатридекан-13-сульфоновую кислоту (244 мг), воду (0,15 мл) и метанол (3 мл) помещали в трубку из нержавеющей стали с последующим перемешиванием в течение 2 ч при комнатной температуре в атмосфере азота при давлении 0,9 МПа. Нерастворимое вещество удаляли фильтрованием и растворитель отгоняли при пониженном давлении с получением тем самым (R)-3-((2-аминоэтил)амино)-3-оксо-2-((R)-3-сульфо-2-(2-(4,7,10-трис (2-(трет-бутокси)-2-оксоэтил)-1,4,7,10-тетраазациклододекан-1-ил)ацетамид)пропанамид)пропан-1-сульфоновой кислоты (209 мг) в виде белого твердого вещества.

МС (ESI, m/z): 917 [М+Н]⁺

¹H-ЯМР (D₂O) δ: 3,83-3,25 (16H, м), 3,18-2,78 (18H, м), 1,51-1,45 (27H, м)

[0265] Ссылочный пример 7

(1-А-1)

[0266]

[0267] Смесь бромида калия (60,2 г), воды (300 мл), бромистоводородной кислоты (40 мл) и (S)-2-амино-5-(бензилокси)-5-оксопентановой кислоты (40,0 г) охлаждали до 3°С и добавляли по каплям водный раствор (60 мл) нитрита натрия (23,3 г) в течение 1 ч и 50 мин с последующим перемешиванием в течение 40 мин. К реакционной смеси добавляли серную кислоту (10 мл) с последующим перемешиванием в течение 10 мин. Затем органический слой отделяли добавлением этилацетата (400 мл), дважды промывали водой (400 мл) и высушивали над безводным сульфатом натрия, и затем растворитель концентрировали при пониженном давлении. Полученный продукт очищали колоночной хроматографией на силикагеле (смесь гексан/этилацетат=от 100/0 до 50/50) с получением (S)-5-(бензилокси)-2-бром-5-оксопентановой кислоты (36,1 г) в виде бесцветного маслянистого вещества.

МС (ESI, m/z): 299 [М - Н]^-

¹H ЯМР (CDCl₃, 300 МГц): 7,38-7,33 (4H, м), 5,15 (2H, с), 4,42 (1H, дд, J=8,6, 5,9 Гц), 2,67-2,59 (2H, м), 2,53- 2,25 (2H, м)

Оптическая чистота: 97% ee

[0268] (1-А-2)

[0269]

[0270] При температуре 4°С смесь трет-бутил 2,2,2-трихлорацетимидата (43,0 мл) и гексана (72 мл) добавляли по каплям в течение 30 мин к смеси (S)-5-(бензилокси)-2-бром-5-оксопентановой кислоты (36,1 г), хлороформа (72,0 мл) и гексана (72,0 мл), и затем добавляли комплекс диэтилового эфира - трифторида бора (1,51 мл) в течение 5 мин с последующим перемешиванием в течение 1 ч. К реакционной смеси добавляли гидрокарбонат натрия (10 г) с последующим перемешиванием в течение 1 ч. Затем нерастворимое вещество удаляли фильтрованием и растворитель отгоняли при пониженном давлении. Полученный остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (смесь гексан/этилацетат=от 100/0 до 85/15) с получением (S)-O⁵-бензил-O¹-трет-бутил-2-бромпентандиоата (39,0 г) в виде бесцветного маслянистого вещества.

¹H ЯМР (CDCl₃, 300 МГц) δ: 7,37 (5H, с), 5,14 (2H, с), 4,24 (1H, дд, J=8,6, 5,9 Гц), 2,60-2,52 (2H, м), 2,44-2,18 (2H, м), 1,52 (9H, с)

Оптическая чистота: 94% ee

[0271] (1-A-3)

[0272]

[0273] При комнатной температуре хлороформный раствор (380 мл) (S)-O⁵-бензил-O¹-трет-бутил-2-бромпентандиоата (38,0 г) добавляли по каплям в течение 30 мин к хлороформному раствору (1,4 мл) 1,4,7-триазациклононана (41,1 г) с последующим перемешиванием в течение 19 ч при комнатной температуре. Добавлением воды (400 мл) к реакционной смеси органический слой отделяли и водный слой экстрагировали, используя хлороформ (200 мл). Органический слой высушивали над безводным сульфатом натрия и растворитель отгоняли при пониженном давлении. Полученный остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (смесь дихлорметан/этанол=от 100/90 до 99/1) с получением тем самым (R)-O⁵-бензил-O¹-трет-бутил-2-(1,4,7-триазонан-1-ил)пентандиоата (23,0 г) в виде бесцветного маслянистого вещества.

МС (ESI, m/z): 406 [М+Н]⁺

¹H ЯМР (CDCl₃, 300 МГц) δ: 7,34 (5H, с), 5,13 (2H, с), 3,22 (1H, дд, J=8,6, 6,6 Гц), 2,87-2,62 (12H, м), 2,61-2,51 (2H, м), 2,11-1,85 (4H, м), 1,46 (9H, с)

[0274] (1-А-4)

[0275]

[0276] При температуре 3°С карбонат калия (19,6 г) и трет-бутилбромацетат (16,5 мл) добавляли к ацетонитрильному раствору (230 мл) (R)-O⁵-бензил-O¹-трет-бутил-2-(1,4,7-триазонан-1-ил)пентандиоата (23,0 г) с последующим перемешиванием в течение 5 ч при комнатной температуре. Нерастворимое вещество удаляли фильтрованием, растворитель отгоняли при пониженном давлении и полученный остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (смесь гексан/этилацетат=от 100/0 до 85/15) с получением тем самым (R)-O⁵-бензил-O¹-трет-бутил-2-(4,7-бис(2-(трет-бутокси)-2-оксоэтил)-1,4,7-триазонан-1-ил)пентандиоата (30,7 г) в виде бесцветного маслянистого вещества.

МС (ESI, m/z): 634 [M+H]⁺

¹H ЯМР (CDCl₃, 300 МГц): 7,35 (5H, с), 5,13 (2H, с), 3,28 (4H, с), 3,18 (1H, дд, J=8,9, 6,3 Гц), 2,98-2,65 (12H, М), 2,65-2,44 2H, м), 2,08-1,81 (2H, м), 1,44 (27H, с)

Оптическая чистота: 96% ee

[0277] (1-А-5)

[0278]

[0279] (R)-O⁵-бензил-O¹-трет-бутил-2-(4,7-бис(2-(трет-бутокси)-2-оксоэтил)-1,4,7-триазонан-1-ил)пентандиоат (30,6 г ), тетрагидрофуран (150 мл) и гидроксид палладия/уголь (6,1 г) помещали в автоклав с последующим перемешиванием в течение 3 ч при комнатной температуре в атмосфере азота при давлении 5,0 МПа. Нерастворимое вещество удаляли фильтрованием через целит, растворитель удаляли при пониженном давлении с получением тем самым черного маслянистого вещества. К полученному маслянистому веществу добавляли этилацетат (150 мл) и активированный уголь (10 г). Затем нерастворимое вещество удаляли фильтрованием и растворитель отгоняли при пониженном давлении с получением тем самым (R)-4-(4,7-бис(2-(трет-бутокси)-2-оксоэтил)-1,4,7-триазонан-1-ил)-5-(трет-бутокси)-5-оксопентановой кислоты (24,2 г) в виде светло-желтого твердого вещества.

ЖХ/МС время удерживания (мин): 1,34

МС (ESI, m/z): 544,5 [М+Н]⁺

¹H-ЯМР (CDCl₃, 300 МГц) δ: 3,38 (4H, с), 3,32 (1H, дд, J=9,8, 4,0 Гц), 3,19-2,93 (8H, м), 2,82 (4H, с), 2,74-2,64 (1H, м), 2,57-2,47 (1H, м), 2,07-1,89 (2H, м), 1,48 (9H, с), 1,45 (18H, с)

Оптическая чистота: 98% ee

[0280] (1-B-1)

[0281]

[0282] 8,0 М водный раствор гидроксида калия (3,36 мл) добавляли к раствору в тетрагидрофуране (20 мл) (S)-5-трет-бутил 5-оксотетрагидрофуран-2-карбоксилата (5,0 г) с последующим перемешиванием в течение 1 ч при 40°C. К смеси добавляли воду (23,5 мл) и раствор перемешивали в течение 2 ч, и затем в течение 1,5 ч при 45°С. Добавляли 8,0 М водный раствор гидроксида калия (0,67 мл) и воду (4,71 мл) с последующим перемешиванием в течение 2,5 ч и растворитель отгоняли при пониженном давлении. N,N'-диметилформамид (20 мл) добавляли к полученному твердому веществу с последующим перемешиванием. Затем добавляли 4-бромметилбифенил (5,98 г) с последующим перемешиванием в течение 16 ч. К реакционной смеси добавляли воду (150 мл), дважды экстрагировали, используя этилацетат (50 мл). Затем органический слой высушивали над безводным сульфатом натрия, и растворитель отгоняли при пониженном давлении. Полученный сырой продукт очищали колоночной хроматографией на силикагеле (CHROMATOREX (FUJI SILYSIA CHEMICAL LTD), смесь гексан/этилацетат=от 100/0 до 85/15) с получением тем самым белого твердого вещества (6,0 г). Этилацетатный раствор (8 мл) полученного твердого вещества (5,2 г) перемешивали при 70°С, так чтобы твердое вещество растворилось, и затем добавляли к нему гексан (72 мл) с последующим перемешиванием в течение 4 ч при комнатной температуре. Осажденное твердое вещество собирали фильтрованием, промывали гексаном и высушивали при пониженном давлении с получением тем самым (S)-O⁵-([1,1'-бифенил]-4-илметил)-O¹-трет-бутил-2-гидроксипентандиоата (4,28 г) в виде белого твердого вещества.

ЖХ/МС время удерживания (мин): 1,78

МС (ESI, m/z): 371,3 [М+Н]⁺

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ: 7,62-7,56 (4H, м), 7,48-7,41 (4H, м), 7,39-7,32 (1H, м), 5,17 (2H, с), 4,13-4,07 (1H, м), 2,87 (1H, д, J=5,3 Гц), 2,63-2,43 (2H, м), 2,23-2,12 (1H, м), 1,98-1,86 (1H, м), 1,49 (9H, с)

Оптическая чистота: 100% ee

[0283] (1-В-2)

[0284]

[0285] При температуре 0°С добавляли 4-метилморфолин (594 мкл) и хлорметансульфонилхлорид (436 мкл) добавляли к раствору в метиленхлориде (5 мл) (S)-O⁵-([1,1'-бифенил]-4-илметил)-O¹-трет-бутил-2-гидроксипентандиоата (1,0 г) с последующим перемешиванием в течение 30 мин. К этому добавляли воду (20 мл) и затем органический слой отделяли и высушивали над безводным сульфатом натрия. Затем растворитель отгоняли при пониженном давлении с получением тем самым (S)-O⁵-([1,1'-бифенил]-4-илметил)-O¹-трет-бутил-2-(((хлорметил)сульфонил)окси)пентандиоата (1,46 г) в виде светло-желтого маслянистого вещества.

ЖХ/МС время удерживания (мин): 1,96

МС (ESI, m/z): 484,2 [М+Н]⁺

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ: 7,60-7,59 (4H, м), 7,48-7,41 (4H, м), 7,38-7,34 (1H, м), 5,19 (2H, с), 5,09 (1H, дд, J=8,33, 4,33 Гц), 4,73 (2Н, дд, J=17,5, 12,2 Гц), 2,68-2,50 (2Н, м), 2,43-2,15 (2Н, м)

[0286] (1-В-3)

[0287]

[0288] Карбонат калия (57 мг) добавляли к ацетонитрильному раствору (1 мл) ди-трет-бутил 2,2'-(1,4,7-триазонан-1,4-диил)диацетата (89 мг) с последующим перемешиванием в течение 5 мин. Ацетонитрильный раствор (1 мл) (S)-O⁵-([1,1-бифенил]-4-илметил)-O¹-трет-бутил-2-трет-бутил-2-(((хлорметил)сульфонил)окси)пентандиоата (100 мг) добавляли к полученной смеси с последующим перемешиванием в течение 20 мин. Добавляли воду (2 мл), затем дважды экстрагировали, используя этилацетат (3 мл), и органический слой отделяли. Растворитель отгоняли при пониженном давлении и остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (KP-NH (Biotage), смесь гексан/этилацетат=от 100/0 до 80/20) с получением тем самым (R)-O⁵-([1,1'-бифенил]-4-илметил)-O¹-трет-бутил-2-(4,7-бис(2-(трет-бутокси)-2-оксоэтил)-1,4,7-триазонан-1-ил)пентандиоата (126 мг) в виде светло-желтого маслянистого вещества.

ЖХ/МС время удерживания (мин): 1,96

МС (ESI, m/z): 710,5 [М+Н]⁺

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ: 7,62-7,56 (4H, м), 7,48-7,41 (4H, м), 7,39-7,32 (1H, м), 5,17 (2H, с), 3,28 (4H, с), 3,19 (1H, дд, J=8,9, 6,3 Гц), 2,98-2,67 (12H, м), 2,65-2,46 (2H, м), 2,08-1,84 (2H, м), 1,44 (27H, с)

Оптическая чистота: 98,9% ee

[0289] (1-В-4)

[0290]

[0291] 10% гидроксид палладия на угле (340 мг) и раствор в тетрагидрофуране (17 мл) (R)-O⁵-([1,1'-бифенил]-4-илметил)-O¹-трет-бутил-2-(4,7-бис(2-(трет-бутокси)-2-оксоэтил)-1,4,7-триазонан-1-ил)пентандиоата (1,71 г) помещали в автоклав с последующим перемешиванием в течение 4 ч при комнатной температуре в атмосфере азота при давлении 0,9 МПа. Нерастворимое вещество удаляли фильтрованием и растворитель отгоняли при пониженном давлении. К полученному черному маслянистому веществу добавляли этилацетат (8,5 мл) и активированный уголь (510 мг) с последующим перемешиванием в течение 15 мин при комнатной температуре. Нерастворимое вещество удаляли фильтрованием, используя целит, и растворитель отгоняли при пониженном давлении с получением тем самым коричневого маслянистого вещества (1,49 г). К полученному маслянистому веществу (500 мг) добавляли водный раствор (10 мл) с последующим перемешиванием в течение 30 мин с охлаждением на льду и нерастворимое вещество удаляли фильтрованием. Дважды проводили экстракцию полученного фильтрата, используя хлороформ (10 мл), и растворитель отгоняли при пониженном давлении с получением тем самым (R)-4-(4,7-бис(2-(трет-бутокси)-2-оксоэтил)-1,4,7-триазонан-1-ил)-5-(трет-бутокси)-5-оксопентановой кислоты (456 мг) в виде желтого маслянистого вещества.

ЖХ/МС время удерживания (мин): 1,34

МС (ESI, m/z): 544,5 [М+Н]⁺

[0292] (2)

[0293]

[0294] Смесь (R)-4-(4,7-бис(2-(трет-бутокси)-2-оксоэтил)-1,4,7-триазонан-1-ил)-5-(трет-бутокси)-5-оксопентановой кислоты (22,0 г), DMAc (150 мл), DIEA (16,9 мл) и (R)-2-амино-3-((2-(((бензилокси)карбонил)амино)этил)амино)3-оксопропан-1-сульфоновой кислоты (14,7 г) перемешивали в течение 20 мин при комнатной температуре, и затем добавляли HBTU (16,9 г) с последующим перемешиванием в течение 1,5 ч при комнатной температуре. Смесь охлаждали до 7°С, затем добавляли водный насыщенный раствор хлорида натрия (600 мл) и этилацетат (600 мл) с последующим перемешиванием. Органический слой отделяли, дважды промывали водным насыщенным раствором гидрокарбоната натрия (600 мл) и высушивали над сульфатом натрия и растворитель отгоняли при пониженном давлении с получением тем самым (R)-3-((2-(((бензилокси)карбонил)амино)этил)амино)-2-((R)-4-(4,7-бис(2-(трет-бутокси)-2-оксоэтил)-1,4,7-триазонан-1-ил)-5-(трет-бутокси)-5-оксопентанамид)-3-оксопропан-1-сульфоновой кислоты (37,2 г) в виде желтого твердого вещества.

ЖХ/МС время удерживания (мин): 1,45

МС (ESI, m/z): 871 [M+H]⁺

¹H-ЯМР (CDCl₃, 300 МГц) δ: 7,52 (1H, уш.с), 7,30 (5H, м), 6,10 (1H, уш.с), 5,06 (2H, уш.с), 4,84 (1H, уш.с), 3,80-1,67 29H, м), 1,47-1,41 (27H, м)

ВЭЖХ (Waters BEH C18, на основе муравьиной кислоты, градиентный цикл: 0 мин (раствор А/раствор B=50/50), 15 мин (раствор раствор А/раствор B=0/100), 18 мин (раствор А/раствор B=0/100), скорость потока: 0,4 мл/мин) время удерживания (мин)): 8,95

[0295] (3)

[0296]

[0297] Гидроксид палладия на угле (3,7 г), этанол (250 мл) и (R)-3-((2-((бензилокси)карбонил)амино)этил)амино)-2-((R)-4-(4,7-бис(2-(трет-бутокси)-2-оксоэтил)-1,4,7-триазонан-1-ил)-5-(трет-бутокси)-5-оксопентамид)-3-оксопропан-1-сульфоновую кислоту (37,0 г) помещали в автоклав с последующим перемешиванием в течение 3 ч в атмосфере азота при давлении 4,0 МПа. Нерастворимое вещество удаляли фильтрованием и растворитель отгоняли при пониженном давлении. К полученному маслянистому веществу добавляли этанол (150 мл) и активированный уголь (8 г) с последующим перемешиванием в течение 30 мин при комнатной температуре, нерастворимое вещество удаляли фильтрованием и растворитель отгоняли при пониженном давлении, с получением тем самым (R)-3-((2-аминоэтил)амино)-2-((R)-4-(4,7-бис(2-(трет-бутокси)-2-оксоэтил)-1,4,7-триазонан-1-ил)-5-(трет-бутокси)-5-оксопентанамид)-3-оксопропан-1-сульфоновой кислоты (30,0 г) в виде черного твердого вещества.

ЖХ/МС время удерживания (мин): 1,13

МС (ESI, m/z): 737 [М+Н]⁺

¹H-ЯМР (CDCl₃, 300 МГц): 7,72 (1H, уш.с), 4,83 (1H, уш.с), 3,75-1,82 (31H, м), 1,46 (27H, с)

ВЭЖХ (Waters BEH, на основе муравьиной кислоты, градиентный цикл: 0 мин (раствор А/раствор B=50/50), 7 мин (раствор А/раствор B=40/60), 15 мин (раствор А/раствор B=0/100), скорость потока: 0,4 мл/мин) время удерживания (мин)): 6,70

[0298] Ссылочный пример 8

[0299]

[0300] (1) Концентрированную серную кислоту (20 мл) добавляли к метанольному раствору (1 л) 6-оксопентановой кислоты (99,2 г) и смесь кипятили с обратным холодильником в течение 4 ч. После охлаждения реакционной смеси до комнатной температуры растворитель отгоняли при пониженном давлении и добавляли воду (1 л) и этилацетат (600 мл). Органический слой отделяли и промывали 5% водным раствором гидрокарбоната натрия (600 мл) и водным насыщенным раствором хлорида натрия (600 мл) и растворитель отгоняли при пониженном давлении с получением тем самым соединения (01) (95,2 г ).

ТСХ Rf: 0,45 (смесь гексан/этилацетат=2/1)

[0301] (2)

Соединение (01) (189 г) и метанол (600 мл) добавляли к смеси 2-аминоникотинальдегида (133 г) и метанола (500 мл), и затем добавляли пирролидин (100 мл) и смесь кипятили с обратным холодильником в течение 8 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, растворитель отгоняли при пониженном давлении, добавляли толуол (100 мл) и растворитель отгоняли при пониженном давлении. К полученному остатку добавляли толуол (150 мл) с последующим перемешиванием в течение 2 ч при 50°С и затем в течение 3 ч при комнатной температуре, и твердое вещество собирали фильтрованием с получением тем самым соединения (02) (149 г).

ТСХ Rf: 0,56 (смесь гексан/этилацетат=5/1)

ЖХ/МС время удерживания (мин): 0,73

МС (ESI, m/z): 245,2 [М+Н]⁺

[0302] (3)

10% палладий на угле (10,0 г), соединение (02) (97,5 г) и метанол (250 мл) помещали в автоклав с последующим перемешиванием в течение 8 ч в атмосфере водорода при давлении 5 МПа. Нерастворимое вещество удаляли фильтрованием и растворитель отгоняли при пониженном давлении. К полученному остатку добавляли ацетонитрил (100 мл) и твердое вещество собирали фильтрованием с получением тем самым (03) (71,5 г).

¹H-ЯМР (CDCl₃, 300 МГц) δ: 7,05 (1H, д, J=7,5 Гц), 6,34 (1H, д, 7,5 Гц), 4,74 (1H, уш.с), 3,66 (3H, с), 3,37-3,42 (2H, м), 2,68 (2H, т, J=6,0 Гц), 2,52-2,57 (2H, м), 2,30-2,37 (2H, м), 1,90 (2H, тт, J=5,7, 6,0 Гц), 1,63-1,70 (4H, м)

ВЭЖХ (Waters 600E system (Waters) (колонка: CAPCELL PAK C18MG, 4,6 × 150 мм (Shiseido Japan Co., Ltd.), растворитель: раствор А=муравьиная кислота:вода (1:1000), раствор B=муравьиная кислота:метанол:ацетонитрил (1:800:200), градиентный цикл: 0 мин (раствор А/раствор B=80/20), 10 мин (раствор А/раствор B=0/100), 15 мин (раствор А/раствор B=0/100), скорость потока: 1,0 мл/мин) время удерживания (мин): 8,06

[0303] (4)

К соединению (03) (70,0 г) добавляли метанол (210 мл) и смесь растворяли при нагревании до 40°С. Затем по каплям добавляли смесь гидроксида натрия (16,9 г) и воды (105 мл) в течение 15 мин с последующим перемешиванием в течение 1 ч при 40°С. Растворитель отгоняли при пониженном давлении и к остатку добавляли воду (210 мл). Раствор нагревали до 40°С и по каплям добавляли концентрированную хлористоводородную кислоту до тех пор, пока значение рН не становилось равным 5, при температуре, поддерживаемой равной или ниже 50°С. К этому добавляли воду (50 мл), раствор охлаждали до комнатной температуры и выдерживали в течение ночи. Твердое вещество собирали фильтрованием с получением тем самым соединения (04) (62,2 г).

ЖХ/МС время удерживания (мин): 0,62

МС (ESI, m/z): 235,2 [М+Н]⁺

ВЭЖХ (Waters 600E system (Waters) (колонка: CAPCELL PAK C18MG, 4,6 × 150 мм (Shiseido Japan Co., Ltd.), растворитель: раствор А=муравьиная кислота:вода (1:1000), раствор B=муравьиная кислота:метанол:ацетонитрил (1:800:200), градиентный цикл: 0 мин (раствор А/раствор B=80/20), 10 мин (раствор А/раствор B=0/100), 15 мин (раствор А/раствор B=0/100), скорость потока: 1,0 мл/мин) время удерживания (мин): 7,03

[0304] (5)

HBTU (4,98 г) добавляли понемногу к смеси метил (2S)-3-амино-2-((4-(4-((2-(бензилоксикарбониламино)этил)амино)-4-оксобутокси)-2,6-диметилфенил)сульфониламино)пропаноата (7,40 г), соединения (04) (3,37 г), ДМФА (50 мл) и DIEA (3,86 мл) с последующим перемешиванием в течение 2 ч при комнатной температуре. К реакционной смеси добавляли 5% водный раствор гидрокарбоната натрия (200 мл) и этилацетат (200 мл) с последующим перемешиванием в течение 10 мин при комнатной температуре. Органический слой отделяли, трижды промывали насыщенным водным раствором хлорида натрия и высушивали над безводным сульфатом натрия, и затем растворитель отгоняли при пониженном давлении. К полученному остатку добавляли этилацетат (50 мл) и твердое вещество собирали фильтрованием с получением тем самым соединения (05) (9,20 г).

ЖХ/МС время удерживания (мин): 1,12

МС (ESI, m/z): 781,5 [М+Н]⁺, 779,6 [М-Н]^-

[0305] (6)

Метанол (40 мл) добавляли к соединению (05) (7,20 г) и 10% Pd/C (300 мг) с последующим перемешиванием в течение 3 ч при комнатной температуре в атмосфере водорода. Нерастворимое вещество удаляли фильтрованием и растворитель отгоняли при пониженном давлении. К полученному остатку добавляли толуол (50 мл) и растворитель отгоняли при пониженном давлении с получением тем самым соединения (06) (5,45 г).

ЖХ/МС время удерживания (мин): 0,73

МС (ESI, m/z): 647,4 [М+Н]⁺

[0306] (7)

Раствор в ДМФА (1,5 мл) HBTU (141 мг) добавляли к раствору соединения (06) (120 мг), Fmoc-цистеиновой кислоты (145 мг), ДМФА (2 мл) и DIEA (140 мкл) с последующим перемешиванием в течение 20 мин при комнатной температуре. К реакционной смеси добавляли воду (2 мл) и полученный продукт очищали препаративной ВЭЖХ с получением тем самым соединения (07) (87,7 мг).

ЖХ/МС (LCMS-2010EV (Shimadzu Corporation) (колонка: SunFire C 18 4,6 × 150 мм (Waters), растворитель: раствор А=0,1% муравьиная кислота/вода, раствор B=0,1% муравьиная кислота/метанол:ацетонитрил (4:1), градиентный цикл: 0 мин (раствор А/ раствор B=80/20), 10 мин (раствор А/раствор B=0/100), 15 мин (раствор А/раствор B=0/100), скорость потока: 1 мл/мин) время удерживания (мин): 11,83

МС (ESI, m/z): 1020,25 [M+H]⁺, 1018,50 [M-H]^-

[0307]

[0308] (8)

Диэтиламин (0,5 мл) добавляли к раствору в ДМФА (0,5 мл) соединения (07) (28,1 мг) с последующим перемешиванием в течение 1,5 ч при комнатной температуре. Растворитель отгоняли при пониженном давлении, добавляли ДМФА (400 мкл) и DIEA (20 мкл), и затем добавляли раствор в ДМФА (150 мл) три-трет-бутил 1,4,7,10-тетраазациклододекан-1,4,7,10-тетрауксусной кислоты (31,6 мг), ДМФА (150 мкл), DIEA (20 мкл) и HBTU (20,9 мг) с последующим перемешиванием в течение 45 мин при комнатной температуре. Добавляли воду (500 мкл), экстрагировали три раза, используя смесь гексан/этилацетат (1/1) (0,5 мл), и экстракт очищали препаративной ВЭЖХ с получением тем самым соединения (Р1) (19,6 мг).

ЖХ/МС время удерживания (мин): 1,12

МС (ESI, m/z): 1352,5 [М+Н]⁺, 1350,6 [М-Н]^-

ВЭЖХ (Waters 600E system (Waters) (колонка: SunFire C18OBD, 4,6 × 150 мм (Waters), растворитель: раствор А=муравьиная кислота:вода (1:1000), раствор B=муравьиная кислота:метанол:ацетонитрил (1:800:200), градиентный цикл: 0 мин (раствор А/раствор B=80/20), 10 мин (раствор А/раствор B=0/100), 15 мин (раствор А/раствор B=0/100), скорость потока: 1,0 мл/мин) время удерживания (мин): 9,71

[0309] (9)

ТГФ (1,4 мл), воду (200 мкл) и 3 моль/л водный раствор гидроксида лития (200 мкл) добавляли к соединению (P1) (11,8 мг) с последующим перемешиванием в течение 1,5 ч при комнатной температуре. Добавляли ТФУК и растворитель отгоняли при пониженном давлении. Смесь ТФУК/триэтилсилан (95/5) (1 мл) добавляли к полученному остатку с последующим перемешиванием в течение 100 мин при комнатной температуре. Растворитель отгоняли при пониженном давлении, к остатку добавляли воду/ацетонитрил (2/1) (1,8 мл) и муравьиную кислоту (1,8 мл), и полученный раствор очищали препаративной ВЭЖХ с получением тем самым соединения (Р2) (соединение A) (8,9 мг).

ЖХ/МС время удерживания (мин): 0,75

МС (ESI, m/z): 1170,4 [М+Н]⁺, 585,9 [М+2Н]²⁺, 1168,4 [М-Н]^-

ВЭЖХ (Waters 600E system (Waters) (колонка: SunFire C18OBD, 4,6 × 150 мм (Waters), растворитель: раствор А=муравьиная кислота:вода (1:1000), раствор B=муравьиная кислота:метанол:ацетонитрил (1:800:200), градиентный цикл: 0 мин (раствор А/раствор B=80/20), 10 мин (раствор А/раствор B=0/100), 15 мин (раствор А/раствор B=0/100), скорость потока: 1,0 мл/мин) время удерживания (мин): 8,75

[0310] Ссылочный пример 9

[0311]

[0312] (1) Нитрит натрия (2,6 г) добавляли в течение 10 мин к смеси бензилового эфира L-глутаминовой кислоты (5,0 г), воды (10 мл), бромида натрия (7,6 г) и бромистоводородной кислоты (6 мл) при температуре, равной или ниже 5°С, с последующим перемешиванием в течение 2 ч при 5°С. К реакционной смеси добавляли диизопропиловый эфир и концентрированную серную кислоту (2 мл), органический слой отделяли, последовательно промывали водой и насыщенным водным раствором хлорида натрия, и затем высушивали над безводным сульфатом натрия. Растворитель отгоняли при пониженном давлении и полученный остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (смесь гексан/этилацетат=1/1) с получением тем самым соединения (Aa1) (3,1 г).

ЖХ/МС время удерживания (мин): 1,32

МС (ESI, m/z): 301,1 [М+Н]⁺

¹H-ЯМР (300 МГц, CDCl₃) δ: 7,31-7,38 (5H, м), 5,1 (2H, с), 4,41 (1H, дд, J=6,0, 7,8 Гц), 2,58-2,63 (2H, м) 2,25-2,50 (2H, м)

[0313] (2)

Смесь трет-бутил-2,2,2-трихлорацетимидата (4,3 мл) и гексана (12 мл) добавляли в течение 20 мин к хлороформному раствору (15 мл) соединения (Aa1) (3,1 г) при комнатной температуре. К нему добавляли DMAc (1,5 мл) и BF₃⋅OEt₂ (220 мкл) с последующим перемешиванием в течение 40 мин при комнатной температуре, растворитель отгоняли при пониженном давлении и полученный продукт очищали колоночной хроматографией на силикагеле (смесь гексан/этилацетат=от 95/5 до 85/15) с получением тем самым соединения (Aa2) (2,84 г).

¹H-ЯМР (300 МГц, CDCl₃) δ: 7,31-7,38 (5H, м), 5,14 (2H, с), 4,24 (1H, дд, J=6,0, 8,7 Гц), 2,53-2,59 (2H, м) 2,19-2,43 (2H, м), 1,47 (9H, с)

[0314] (3)

Хлороформный раствор (50 мл) соединения (Aa2) (1,70 г) добавляли к хлороформному раствору (60 мл) 1,4,7-триазациклононана (1,84 г) с последующим перемешиванием в течение 3 суток при комнатной температуре. Растворитель отгоняли при пониженном давлении и полученный продукт очищали колоночной хроматографией на силикагеле (смесь гексан/этилацетат=от 50/50 до 0/100, и затем смесь этилацетат/метанол=80/20) с получением тем самым соединения (Aa3) (0,76 г).

ЖХ/МС время удерживания (мин): 0,91

МС (ESI, m/z): 406,5 [М+Н]⁺

[0315] (4)

Трет-бутилбромацетат (580 мл) добавляли к смеси соединения (Aa3) (0,76 г), DMAc (7 мл) и карбоната калия (607 мг) с последующим перемешиванием в течение 2 ч при комнатной температуре. Добавляли этилацетат (30 мл) и воду (30 мл) и органический слой отделяли, последовательно дважды промывали водой (30 мл) и один раз насыщенным водным раствором хлорида натрия (30 мл) и высушивали над безводным сульфата натрия. Растворитель отгоняли при пониженном давлении и полученный остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (смесь гексан/этилацетат=от 95/5 до 60/40) с получением тем самым соединения (Aa4) (1,04 г).

ЖХ/МС время удерживания (мин): 1,63

МС (ESI, m/z): 634,7 [М+Н]⁺

[0316] (5)

Соединение (Aa4) (0,28 г), изопропиловый спирт (20 мл), воду (0,5 мл) и 10% палладий на угле (0,10 г) помещали в герметичную трубку с последующим перемешиванием в течение 7 ч в атмосфере водорода при давлении 0,5 МПа. Нерастворимое вещество удаляли фильтрованием и растворитель отгоняли при пониженном давлении с получением тем самым соединения (Aa5) (0,24 г).

ЖХ/МС время удерживания (мин): 1,34

МС (ESI, m/z): 544,7 [М+Н]⁺

[0317] (6)

HBTU (64,5 мг) добавляли к смеси соединения (Aa5) (94,9 мг), (R)-2-амино-3-((2-(4-(4-(N-((S)-1-метокси-1-оксо-3-(5-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)пентанамид)пропан-2-ил)сульфа моил)-3,5-диметилфенокси)бутанамид)этил)амино)-3-оксопропан-3,5-диметилфенокси)бутанамид)этил)амино)-3-оксопропан-1-сульфоновой кислоты (104 мг), ДМФА (0,8 мл) и N,N-диизопропилэтиламина (61 мкл) с последующим перемешиванием в течение 35 мин при комнатной температуре. К этому добавляли воду (1,1 мл) и ацетонитрил (0,8 мл) с последующим перемешиванием, и затем полученный продукт очищали препаративной ВЭЖХ с получением тем самым соединения (Аа6) (151 мг).

ЖХ/МС время удерживания (мин): 1,28

МС (ESI, m/z): 1324,2 [М+Н]⁺, 1322,2 [М - Н]^-

ВЭЖХ (Waters 600E system (Waters) (колонка: CAPCELL PAK C18MG, 4,6 × 150 мм (Waters), растворитель: раствор А=муравьиная кислота:вода (1:1000), раствор B=муравьиная кислота:метанол:ацетонитрил (1:800:200), градиентный цикл: 0 мин (раствор А/раствор B=80/20), 10 мин (раствор А/раствор B=0/100), 15 мин (раствор А/раствор B=0/100), скорость потока: 1,0 мл/мин) время удерживания (мин): 11,82

[0318] (7)

Концентрированную хлористоводородную кислоту (2,5 мл) добавляли к соединению (Aa6) (73 мг) с последующим перемешиванием в течение 2 суток при комнатной температуре и полученную смесь концентрировали при пониженном давлении. Полученный раствор разбавляли 50% водным ацетонитрилом (2 мл) и затем очищали препаративной ВЭЖХ с получением тем самым соединения (Aa7) (соединение B) (33,3 мг).

ЖХ/МС время удерживания (мин): 0,77

МС (ESI, m/z): 1141,8 [М+Н]⁺, 1139,8 [М - Н]^-

ВЭЖХ (Waters 600E system (Waters) (колонка: CAPCELL PAK C18MG, 4,6 × 150 мм (Waters), растворитель: раствор А=муравьиная кислота:вода (1:1000), раствор B=муравьиная кислота:метанол:ацетонитрил (1:800:200), градиентный цикл: 0 мин (раствор А/раствор B=80/20), 10 мин (раствор А/раствор B=0/100), 15 мин (раствор А/раствор B=0/100), скорость потока: 1,0 мл/мин) время удерживания (мин): 9,37

[0319] Ссылочный пример 10

В настоящем ссылочном примере использовали соединение А, полученное в ссылочном примере 8, и соединение В, полученное в ссылочном примере 9.

(А)

Раствор хлорида индия [¹¹¹In] (80 МБк, 100 мл) добавляли к смеси соединения А (8,5 мкг) и 0,2 моль/л натрий-ацетатного буферного раствора (рН 4,0) (1,5 мл). Раствор нагревали до 100°С в течение 15 мин, и затем выдерживали в течение 5 мин при комнатной температуре с получением тем самым комплекса [¹¹¹In]-(соединение A). В результате анализа соединения с использованием ТСХ с обращенной фазой (Whatman, KC18F, проявляющий раствор: метанол/0,5 моль/л водный раствор ацетата натрия (50/50)), значение Rf радиоактивномеченного соединения было равным 0,4. Радиохимическая чистота, измеренная сразу же после получения соединения и измеренная через 24 ч при комнатной температуре, была равной или выше 95%.

[0320] (B)

Раствор хлорида иттрия [⁹⁰Y] (700 МБк, 240 мл) добавляли к смеси соединения (79 мкг), гентизиновой кислоты (1,8 мг), 0,6 моль/л натрий-ацетатного буферного раствора (рН 4,0, 120 мкл) и 0,4 моль/л водного раствора гидроксида натрия (24 мкл). Раствор нагревали до 100°С в течение 20 мин, и затем выдерживали в течение 5 мин при комнатной температуре с получением тем самым комплекса [⁹⁰Y]-(соединение A). В результате анализа соединения с использованием ТСХ с обращенной фазой (Whatman, KC18F, проявляющий раствор: метанол/0,5 моль/л водный раствор ацетата аммония (50/50)), значение Rf радиоактивномеченного соединения было равным 0,4. Радиохимическая чистота, измеренная сразу же после получения соединения и измеренная через 24 ч при комнатной температуре, была равной или выше 95%.

[0321] (С)

Раствор хлорида меди [⁶⁴Cu] (рН 5, 35 МБк, 55 мкл) добавляли к смеси соединения А (5,8 мкг) и 0,2 моль/л натрий-ацетатного буферного раствора (рН 4,0, 219 мкл). Раствор нагревали до 100°С в течение 15 мин и выдерживали в течение 5 мин при комнатной температуре с получением тем самым комплекса [⁶⁴Cu]- (соединение A). В результате анализа соединения с использованием ТСХ с обращенной фазой (Whatman, KC18F, проявляющий раствор: метанол/0,5 моль/л водный раствор ацетата аммония (50/50)), значение Rf радиоактивномеченного соединения было равным 0,4. Радиохимическая чистота, измеренная сразу же после получения соединения и измеренная через 24 ч при комнатной температуре, была равной или выше 90%.

[0322] (D)

0,2 моль/л натрий-ацетатный буферный раствор хлорида меди [⁶⁴Cu] (pH 4,0) (40 МБк, 155 мкл) добавляли к смеси соединения B (4,2 мкг), гентизиновой кислоты (1 мг) и 0,2 моль/л натрий-ацетатного буферного раствора (pH 4,0) (5,0 мкл). Раствор нагревали до 100°С в течение 15 мин и выдерживали в течение 5 мин при комнатной температуре с получением тем самым комплекса [⁶⁴Cu]-(соединение B). В результате анализа соединения с использованием ТСХ с обращенной фазой (Whatman, KC18F, проявляющий раствор: метанол/0,5 моль/л водный раствор ацетата аммония (50/50)), значение Rf радиоактивномеченного соединения было равным 0,4. Радиохимическая чистота, измеренная сразу же после получения соединения и измеренная через 24 ч при комнатной температуре, была равной или выше 90%.

[0323] Пример 1

(1)

[0324]

[0325] HBTU (0,252 г) добавляли к смеси (S)-4-(4-(N-(1-(трет-бутокси)-1-оксо-3-(5-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)пентанамид)пропан-2-ил)сульфамоил)-3,5-диметил фенокси)бутановой кислоты (0,500 г), (R)-3-((2-аминоэтил)амино)-3-оксо-2-(2-(4,7,10-трис(2-(трет-буток си)-2-оксоэтил)-1,4,7,10-тетраазациклододекан-1-ил)ацетамид)пропан-1-сульфоновой кислоты (0,711 г), DIEA (0,328 мл) и DMAc (5,0 мл) с последующим перемешиванием в течение 10 мин. Затем дополнительно добавляли HBTU (0,100 г) с последующим перемешиванием в течение 2 ч. К реакционной смеси добавляли воду (15 мл) с последующим перемешиванием в течение 10 мин. После этого к нему добавляли воду (10 мл) с последующим перемешиванием в течение 30 мин. Супернатантную жидкость удаляли, к остатку добавляли воду (10 мл) с последующим перемешиванием в течение 10 мин. Затем удаляли супернатантную жидкость, добавляли метанол (10 мл) и растворитель отгоняли при пониженном давлении. Полученный остаток растворяли в этилацетате (2,26 мл), содержащем 12% метанола, и очищали колоночной хроматографией на силикагеле (силикагель NH, смесь метанол/этилацетат=от 3/97 до 30/70) с получением тем самым (R)-3-((2-(4-(4-(N-((S)-1-(трет-бутокси)-1-оксо-3-(5-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)пентанамид)пропан-2-ил)сульфамоил)-3,5-диметил фенокси)бутан амид)этил)амино)-3-оксо-2-(2-(4,7,10-трис(2-(трет-бутокси)-2-оксоэтил)-1,4,7,10-тетраазациклододекан-1-ил)ацетамид)пропан-1-сульфоновой кислоты (0,776 г) в виде белого аморфного твердого вещества.

МС (ESI, m/z): 1394 [M+H]⁺

¹Н-ЯМР (CDCl₃) δ: 8,57-8,29 (1H, м), 8,14-8,00 (1H, м), 7,10-6,97 (2H, м), 6,66 (2H, с), 6,33 (1H, д, J=7,3 Гц), 6,30-6,22 (1H, м), 4,98-4,84 (1H, м), 4,74-4,61 (1H, м), 4,08-3,94 (2H, м), 3,78-1,55 (59H, м), 1,51-1,38 (27H, м), 1,30 (9H, с)

ВЭЖХ (TSKgel ODS-100Z) время удерживания (мин): 15,84

[0326] (2-1)

[0327]

[0328] При комнатной температуре смесь ТФУК/триэтилсилана (100 мл/13,7 мл) добавляли в течение 10 мин к (R)-3-((2-(4-(4-(N-((S)-1-(трет-бутокси)-1-оксо-3-(5-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)пентанамид)пропан-2-ил)сульфамоил)-3,5-диметилфенокси)бутанамид)этил)амино)-3-оксо-2-(2-(4,7,10-трис(2-(трет-бутокси)-2-оксоэтил)-1,4,7,10-тетраазациклододекан-1-ил)ацетамид)пропан-1-сульфоновой кислоте (20,0 г) с последующим перемешиванием в течение 7 ч. ТФУК отгоняли при пониженном давлении и операцию добавления ацетонитрила (50 мл) к полученному остатку и отгонки растворителя повторяли дважды. Полученный остаток растворяли в ацетонитриле (80 мл) и к раствору добавляли TBME (160 мл) при комнатной температуре с последующим перемешиванием в течение 30 мин. Осажденное твердое вещество собирали фильтрованием с получением таким образом соли ТФУК (21,3 г) 2,2',2ʺ-(10-(2-(((R)-1-((2-(4-(4)-(N-((S)-1-карбокси-2-(5-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)пентанамид)этил)сульфамоил)-3,5-диметилфенокси)бутан амид)этил)амино)-1-оксо-3-сульфопропан-2-ил)амино)-2-оксоэтил)-1,4,7,10-тетраазациклододекан-1,4,7-триил)триуксусной кислоты (соединение А) в виде белого твердого вещества.

МС (ESI, m/z): 1170 [без M+H]⁺

(2-2)

[0329]

[0330] Воду (200 мл) и карбонат лития (5,0 г) добавляли к твердому веществу, полученному в (2-1), для доведения рН до 8,3. Реакционную смесь наносили на обращеннофазовую колонку с силикагелем (внутренний диаметр стеклянной колонки: 10,5 см, Daisogel-SR120-40/60-ODS-RPS: 400 г) и элюирование проводили при нормальном давлении с использованием воды, содержащей 5% метанола (400 мл), воды, содержащей 10% метанола (1200 мл), воды, содержащей 20% метанола (800 мл) и воды, содержащей 30% метанола (1600 мл) в таком порядке, с получением тем самым соли лития (12,3 г) соединения А в виде белого аморфного твердого вещества.

МС (ESI, m/z): 1170 [без M+H]⁺

(2-3)

[0331]

[0332] Воду (120 мл) и муравьиную кислоту (5,0 мл) добавляли к твердому веществу (12,3 г), полученному в (2-2). Реакционную смесь наносили на обращеннофазовую колонку с силикагелем (внутренний диаметр стеклянной колонки: 10,5 см, Daisogel-SR120-40/60-ODS-RPS: 400 г) и элюирование проводили при нормальном давлении с использованием воды, содержащей 0,1% муравьиной кислоты/5% ацетонитрила (800 мл), воды, содержащей 10% ацетонитрила (800 мл), и воды, содержащей 30% ацетонитрила (2400 мл) в таком порядке с получением тем самым соединения А (11,1 г) в виде белого твердого вещества.

ЖХ/МС время удерживания (мин): 0,75

МС (ESI, m/z): 1170,4 [М+Н]⁺, 1168,4 [М-Н]^-,

¹H-ЯМР (D₂O) δ: 7,49 (1H, д, J=7,3 Гц), 6,71 (2H, с), 6,50 (1H, д, J=7,3 Гц), 4,67 (1H, дд, J=7,9, 5,0 Гц), 4,00 (2H, т, J=5,9 Гц), 3,93-3,02 (34H, м), 2,72 (2H, т, J=6,1 Гц), 2,59 (2H, т, J=7,3 Гц), 2,34 (2H, т, J=7,3 Гц), 2,12-1,80 (6H, м), 1,62-1,38 (4H, м)

ВЭЖХ (TSKgel ODS-100Z, на основе муравьиной кислоты) время удерживания (мин): 11,17

[0333] Пример 2

(1)

[0334]

[0339] HBTU (509 мг) добавляли к раствору в NMP (S)-4-(4-(N-(1-(трет-бутокси)-3-(5-(8-(трет-бутоксикарбонил)-5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)пентанамид)-1-оксопропан-2-ил)сульфамоил)-3,5-диметилфенокси)бутановой кислоты (668 мг), (R)-3-((2-аминоэтил)амино)-3-оксо-2-(2-(4,7,10-трис(2-(трет-бутокси)-2-оксоэтил)-1,4,7,10-тетраазациклододекан-1-ил)ацетамид)пропан-1-сульфоновой кислоты (0,719 мг) и DIEA (187 мкл) с последующим перемешиванием в течение 2 ч при комнатной температуре. Затем к реакционной смеси добавляли воду (50 мл) с последующим перемешиванием. Полученное твердое вещество собирали фильтрованием и очищали колоночной хроматографией на силикагеле (смесь гексан/этилацетат=от 25/75 до 0/100, и затем смесь этилацетат/метанол=70/30) с получением тем самым (R)-3-((2-(4-(4-(N-((S)-1-(трет-бутокси)-3-(5-(8-(трет-бутоксикарбонил)-5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)пентанамид)-1-оксопропан-2-ил)сульфамоил)-3,5-диметилфенокси)бутанамид)этил)амино)-3-оксо-2-(2-(4,7,10-трис(2-(трет-бутокси)-2-оксоэтил)-1,4,7,10-тетраазациклододекан-1-ил)ацетамид)пропан-1-сульфоновой кислоты (381 мг) в виде белого аморфного твердого вещества.

ЖХ/МС время удерживания (мин): 1,27

МС (ESI, m/z): 1495 [M+H]⁺

[0336] (2)

[0337]

[0338] Смесь ТФУК/триэтилсилан (1/1) (2 мл) добавляли к суспензии в хлороформе (1 мл) (R)-3-((2-(4-(4-(N-((S)-1-(трет-бутокси)-3-(5-(8-(трет-бутоксикарбонил)-5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)пентанамид)-1-оксопропан-2-ил)сульфамоил)-3,5-диметилфенокси)бутанамид)этил)амино)-3-оксо-2-(2-(4,7,10-трис(2-(трет-бутокси)-2-оксоэтил)-1,4,7,10-тетраазациклододекан-1-ил)ацетамид)пропан-1-сульфоновой кислоты (250 мг) с последующим перемешиванием в течение 4 ч при комнатной температуре. Растворитель отгоняли при пониженном давлении и операцию добавления ацетонитрила (1 мл) к полученному остатку и отгонку растворителя при пониженном давлении повторяли дважды. Полученный остаток очищали с использованием обращеннофазовой колонки с силикагелем (Sep-Pak C18, Waters), смесь вода/метанол=от 100/0 до 60/40) с получением тем самым соединения A (109,9 мг) в виде белого твердого вещества.

ЖХ/МС время удерживания (мин): 0,75

МС (ESI, m/z): 1170,4 [М+Н]⁺

¹H-ЯМР (D₂O) δ: 7,49 (1H, д, J=7,3 Гц), 6,71 (2H, с), 6,50 (1H, д, J=7,3 Гц), 4,67 (1H, дд, J=7,9, 5,0 Гц), 4,00 (2H, т, J=5,9 Гц), 3,93-3,02 (34H, м), 2,72 (2H, т, J=6,1 Гц), 2,59 (2H, т, J=7,3 Гц), 2,34 2H, т, J=7,3 Гц), 2,12-1,80 (6H, м), 1,62-1,38 (4H, м)

[0339] Пример 3

[0340]

[0341] На ледяной бане HBTU (82 мг) добавляли к смеси (S)-4-(4-(N-(1-(трет-бутокси)-1-оксо-3-(5-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)пентанамид)пропан-2-ил)сульфамоил)-3,5-диметил фенокси)бутановой кислоты (140 мг), (R)-3-((2-аминоэтил)амино)-3-оксо-2-((R)-3-сульфо-2-(2-(4,7,10-трис(2-(трет-бутокси)-2-оксо этил)-1,4,7,10-тетраазациклододекан-1-ил)ацетамид)пропан амид)пропан-1-сульфоновой кислоты (189 мг), DIEA (0,076 мл) и ДМФА (3,0 мл) с последующим перемешиванием в течение 1 ч при комнатной температуре. К реакционной смеси добавляли воду (0,1 мл) и растворитель отгоняли при пониженном давлении. Добавлением к остатку ацетонитрила (4 мл) и водного насыщенного раствора хлорида натрия (1,5 мл), органический слой отделяли, и водный слой дважды экстрагировали, используя ацетонитрил (3 мл). Растворитель органического слоя отгоняли при пониженном давлении и остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (привитой диол силикагель (Purif-Pack DIOL 60 мкм, Shoko Scientific Co., Ltd.), смесь гексан/этилацетат=от 50/50 до 0/100, смесь хлороформ/этанол=от 100/0 до 80/20) с получением тем самым (R)-3-((2-(4-(4-(N-((S)-1-(трет-бутокси)-1-оксо-3-(5-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)пентанамид)пропан-2-ил)суль фамоил)-3,5-диметилфенокси)бутанамид)этил)амино)-3-оксо-2-((R)-3-сульфо-2-(2-(4,7,10-трис(2-(трет-бутокси)-2-оксоэтил)-1,4,7,10-тетраазациклододекан-1-ил)ацетамид)пропанамид)пропан-1-сульфоновой кислоты (296 мг) в виде белого аморфного твердого вещества.

МС (ESI, m/z): 1545 [М+Н]⁺

¹H-ЯМР (D₂O) δ: 7,35 (1H, д, J=7,3 Гц), 6,80 (2H, с), 6,52 (1H, д, J=7,3 Гц), 4,63-4,58 (1H, м), 4,10-4,02 (2H, м), 3,92-3,83 (1H, м), 3,75-2,95 (33H, м), 2,70 (2H, т, J=6,1 Гц), 2,55 (6H, с), 2,36 (2H, т, J=7,3 Гц), 2,17-2,08 (2H, м), 2,07-1,98 (2H, м), 1,90 (9H, с), 1,88-1,81 (2H, м), 1,58-1,12 (37H, м)

[0342] (2)

[0343]

[0344] 6 моль/л хлористоводородную кислоту (1 мл), охлажденную до 0°С, добавляли к (R)-3-((2-(4-(4-(N-((S)-1-(трет-бутокси)-1-оксо-3-(5-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)пентанамид)пропан-2-ил)сульфамоил)-3,5-диметилфенокси)бутанамид)этил)амино)-3-оксо-2-((R)-3-сульфо-2-(2-(4,7,10-трис(2-(трет-бутокси)-2-оксоэтил)-1,4,7,10-тетраазациклододекан-1-ил)ацетамид)пропанамид)пропан-1-сульфоновой кислоте (262 мг) с последующим перемешиванием в течение 12,5 ч при комнатной температуре. Смесь охлаждали на ледяной бане и затем к ней добавляли 5 моль/л водного раствора гидроксида натрия (1 мл) в течение 10 мин, при этом внутренняя температура поддерживалась равной или ниже 13°С. Затем к реакционной смеси добавляли ацетат натрия тригидрат (172 мг). Полученную реакционную смесь наносили на обращеннофазовую колонку с силикагелем (Sep-Pak C18, Waters) и элюирование проводили при нормальном давлении с использованием воды, содержащей 0,1% муравьиной кислоты (12 мл), воды, содержащей 0,1% муравьиной кислоты/5% ацетонитрила (6 мл), воды, содержащей 0,1% муравьиной кислоты/10% ацетонитрила (6 мл), воды, содержащей 0,1% муравьиной кислоты/15% ацетонитрила (6 мл), воды, содержащей 0,1% муравьиной кислоты/20% ацетонитрила (6 мл), воды, содержащей 0,1% муравьиной кислоты/25% ацетонитрила (6 мл), воды, содержащей 0,1% муравьиной кислоты/30% ацетонитрила (6 мл), воды, содержащей 0,1% муравьиной кислоты/35% ацетонитрила (6 мл) и воды, содержащей 0,1% муравьиной кислоты/40% ацетонитрила (6 мл) в таком порядке, и растворитель отгоняли при пониженном давлении с получением тем самым 2,2',2ʺ-(10-((4R,7R)-16-(4-(N-((S)-1-карбокси-2-(5-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)пентанамид)этил)сульфамоил)-3,5-диметилфенокси)-2,5,8,13-тетраоксо-4,7-бис(сульфометил)-3,6,9,12-тетраазагексадецил)-1,4,7,10-тетраацициклододекан-1,4,7-триил)триуксусной кислоты (159 мг) в виде бесцветного твердого вещества.

МС (ESI, m/z): 1321 [М+Н]⁺

¹H-ЯМР (D₂O) δ: 7,52 (1H, д, J=7,3 Гц), 6,76 (2H, с), 6,53 (1H, д, J=7,3 Гц), 4,68-4,61 (1H, м), 4,04 (2H, т, J=6,1 Гц), 3,99-3,10 (38H, м), 2,74 (2H, т, J=6,1 Гц), 2,61 (2H, т, J=7,4 Гц), 2,54 (6H, с) 2,33 (2H, т, J=7,3 Гц), 1,95 (6H, ддт, J=42,9, 19,8, 6,6 Гц), 1,60-1,35 (4H, м)

[0345] Пример 4

(1)

[0346]

[0347] (R)-3-((2-Аминоэтил)амино)-3-оксо-2-(2-(4,7,10-трис(2-(трет-бутокси)-2-оксоэтил)-1,4,7,10-тетраазациклододекан-1-ил)ацетамид)пропан-1-сульфоновую кислоту (143 мг) и диизопропилэтиламин (66,3 мкл) добавляли к реакционной смеси, содержащей (S)-4-(4-(N-1-(трет-бутокси)-1-оксо-3-(5-(8-((2,2,5,7,8-пентаметилхроман-6-ил)сульфонил)-5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)пентанамид)пропан-2-ил)сульфамоил)-3,5-диметилфенокси)бутановую кислоту, полученную в (3) ссылочного примера 3, с последующим перемешиванием в течение 20 мин при комнатной температуре. Затем добавляли HBTU (70,9 мг) с последующим перемешиванием в течение 21 ч при комнатной температуре. После этого к реакционному раствору добавляли воду с последующим перемешиванием в течение 3 ч. Водный слой удаляли декантацией и затем добавляли воду для приготовления суспензии при перемешивании, и твердое вещество собирали фильтрованием. Твердое вещество очищали колоночной хроматографией на силикагеле (смесь хлороформ/метанол) с получением тем самым (R)-3-((2-(4-(4-(N-((S)-1-(трет-бутокси)-1-оксо-3-(5-(8-((2,2,5,7,8-пентаметилхроман-6-ил)суль фонил)-5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)пентанамид)пропан-2-ил)сульфамоил)-3,5-диметилфеноксил)бутанамид)этил)амино)-3-оксо-2-(2-(4,7,10-трис(2-(трет-бутокси)-2-оксоэтил)-1,4,7,10-тетраазациклододекан-1-ил)ацетамид)пропан-1-сульфоновой кислоты (83,0 мг) в виде белого твердого вещества.

ЖХ/МС время удерживания (мин): 1,75

МС (ESI, m/z): 1662,1 [М+Н]⁺

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ: 8,60-8,48 (м, 1H), 7,72-7,54 (м, 1H), 7,18 (д, 1H, J=7,6 Гц), 6,66 (с, 2H), 6,56 (д, 1H, J=7,6 Гц), 6,18-6,07 (м, 1H), 5,79-5,69 (м, 1H), 4,81-4,69 (м, 1H), 4,12-2,47 (м, 45H), 2,42-2,28 (м, 4H ), 2,14-1,12 (м, 67H)

[0348] (2)

[0349]

[0350] Смешанный раствор трифторуксусной кислоты (0,4 мл) и триэтилсилана (19,2 мкл) добавляли к (R)-3-(2-(4-(4-(N-((S)-1-(трет-бутокси))-1-оксо-3-(5-(8-((2,2,5,7,8-пентаметилхроман-6-ил)сульфонил)-5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)пентанамид)пропан-2-ил)сульфамоил)-3,5-диметилфеноксил)бутанамид)этил)амино)-3-оксо-2-(2-(4,7,10-трис(2-(трет-бутокси)-2-оксоэтил)-1,4,7,10-тетраазациклододекан-1-ил)ацетамид)пропан-1-сульфоновой кислоте (20 мг) с последующим перемешиванием в течение 24 ч при комнатной температуре. Затем растворитель отгоняли при пониженном давлении. TBME (5 мл) добавляли к полученному остатку, твердое вещество собирали фильтрованием с получением тем самым соли ТФУК (21,4 мг) соединения А в виде белого твердого вещества.

ЖХ/МС время удерживания (мин): 0,70

МС (ESI, m/z): 1170,9 [М+Н]⁺, 1168,9 [М-Н]^-

[0351] Пример 5

(1)

[0352]

[0353] Способом, аналогичным описанному в (1) примера 4, реакционную смесь, содержащую (S)-4-(4-(N-(1-(трет-бутокси)-1-оксо-3-(5-(8-((2,2,4,6,7-пентаметил-2,3-дигидробензофуран-5-ил)сульфонил)-5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)пентанамид)пропан-2-ил)сульфамоил)-3,5-диметил фенокси)бутано вую кислоту, полученную в (3) ссылочного примера 4, подвергали взаимодействию с (R)-3-((2-аминоэтил)амино)-3-оксо-2-(2-(4,7,10-трис(2-(трет-бутокси)-2-оксоэтил)-1,4,7,10-тетраазациклододекан-1-ил)актамид)пропан-1-сульфоновой кислотой (21,3 мг) с получением тем самым (R)-3-((2-(4-(4-(N-((S)-1-(трет-бутокси)-1-оксо-3-(5-(8-((2,2,4,6,7-пентаметил-2,3-дигидробензофуран-5-ил)сульфонил)-5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)пентанамид)пропан-2-ил)сульфамоил)-3,5-диметилфенокси)бутанамид)этил)амино)-3-оксо-2-(2-(4,7,10-трис(2-(трет-бутокси)-2-оксоэтил)-1,4,7,10-тетраазациклододекан-1-ил)ацетамид)пропан-1-сульфоновой кислоты в виде белого твердого вещества (56,2 мг).

ЖХ/МС время удерживания (мин): 1,68

МС (ESI, m/z): 1648,1 [М+Н]⁺

¹H-ЯМР (CDCl₃) δ: 8,59-8,46 (м, 1H), 7,74-7,64 (м, 1H), 7,59-7,46 (м, 1H), 7,19 (д, 1H, J=7,6 Гц), 6,66 (с, 2H), 6,58 (д, 1H, J=7,6 Гц), 6,17-6,06 (м, 1H), 5,77-5,67 (м, 1H), 4,81-4,70 (м, 1H), 4,12-2,79 (м, 30H ), 2,74 (т, 2H, J=6,3 Гц), 2,61 (с, 6H), 2,56 (с, 3H), 2,50 (с, 3H), 2,44-2,30 (м, 4H), 2,14-1,19 (м, 65H)

(2)

[0354]

[0355] Смешанный раствор трифторуксусной кислоты (0,4 мл) и триэтилсилана (19,2 мкл) добавляли к (R)-3-(2-(4-(4-(N-((S)-1-(трет-бутокси))-1-оксо-3-(5-(8-((2,2,4,6,7-пентаметил-2,3-дигидробензофуран-5-ил)сульфонил)-5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)пентанамид)пропан-2-ил)сульфамоил)-3,5-диметилфенокси)бутанамид)этил)амино)-3-оксо-2-(2-(4,7,10-трис(2-(трет-бутокси)-2-оксоэтил)-1,4,7,10-тетраазациклододекан-1-ил)ацетамид)пропан-1-сульфоновой кислоте (10 мг) с последующим перемешиванием в течение 24 ч при комнатная температура. Затем растворитель отгоняли при пониженном давлении. К полученному остатку добавляли TBME (5 мл), твердое вещество собирали фильтрованием с получением тем самым соли ТФУК (8,2 мг) соединения А в виде белого твердого вещества.

ЖХ/МС время удерживания (мин): 0,70

МС (ESI, m/z): 1170,9 [М+Н]⁺, 1168,9 [М-Н]^-

[0356] Пример 6

(1)

[0357]

[0358] HBTU (18,3 г) добавляли к смеси (R)-3-((2-аминоэтил)амино)-2-((R)-4-(4,7-бис(2-(трет-бутокси)2-оксоэтил)-1,4,7-триазонан-1-ил)-5-(трет-бутокси)-5-оксопентанамид)-3-оксопропан-1-сульфоновой кислоты (29,5 г), DMAc (150 мл), DIEA (17,4 мл) и (S)-4-(4-(N-(1-(трет-бутокси)-1-оксо-3-(5-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)пентанамид)пропан-2-ил)сульфамоил)-3,5-диметилфенокси)бутановой кислоты (23,3 г) с последующим перемешиванием в течение 1,5 ч при комнатной температуре. Реакционный раствор добавляли по каплям к водному насыщенному раствору хлорида аммония (600 мл), охлажденному до 6°С, с последующим перемешиванием в течение 10 мин. Супернатант удаляли и затем к остатку добавляли воду (600 мл) с последующим перемешиванием в течение 10 мин. После этого супернатант снова удаляли, полученное вязкое твердое вещество растворяли в смеси этанол/хлороформ (20/1) (100 мл) и затем концентрировали при пониженном давлении. Воду удаляли повторением два раза операции добавления этанола (100 мл) к остатку и концентрирования растворителя при пониженном давлении и затем остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (NH-силикагель (NH-Sil, Biotage), смесь хлороформ/метанол=от 100/0 до 70/30 до 20/80) с получением тем самым (R)-2-((R)-4-(4,7-бис(2-(трет-бутокси)-2-оксоэтил)-1,4,7-триазонан-1-ил)-5-(трет-бутокси)-5-оксопентамид)-3-((2-(4-(4-(N-((S)-1-(трет-бутокси)-1-оксо-3-(5-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)пентанамид)пропан-2-ил)сульфамоил)-3,5-диметилфенокси)бутанамид)этил)амино)-3-оксопропан-1-сульфоновой кислоты (27,7 г) в виде белого твердого вещества.

ЖХ/МС время удерживания (мин): 1,40

МС (ESI, m/z): 1365 [М+Н]⁺

¹H-ЯМР (CDCl₃, 300 МГц) δ: 7,61 (1H, уш.с), 7,33 (1H, уш.с), 7,33 (1H, уш.с), 6,65 (2H, с), 6,52 (1H, уш.с), 6,36 (1H, д, J=7,3 Гц), 4,71 (1H, м), 3,98 (2H, т, J=6,3 Гц), 3,87 (1H, уш.с), 3,60-1,53 (57H, м), 1,49-1,42 (27H, м ), 1,34 (9H, с)

ВЭЖХ (Waters BEH C18, на основе муравьиной кислоты, градиентный цикл: 0 мин (раствор А/раствор B=30/70), 10 мин (раствор А /раствор B=0/100), 12 мин (раствор А/раствор B=0/100), скорость потока: 0,4 мл/мин)) время удерживания (мин): 4,81

[0359] (2)

[0360]

[0361] 6 моль/л хлористоводородную кислоту (300 мл) добавляли к (R)-2-((R)-4-(4,7-бис(2-(трет-бутокси)-2-оксоэтил)-1,4,7-триазонан-1-ил)-5-(трет-бутокси)-5-оксопентамид)-3-((2-(4-(4-(N-((S)-1-(трет-бутокси)-1-оксо-3-(5-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)пентанамид)пропан-2-ил)сульфамоил)-3,5-диметилфенокси)бутанамид)этил)амино)-3-оксопропан-1-сульфоновой кислоте (15,1 г) с последующим перемешиванием в течение 14 ч при комнатной температуре. Смесь охлаждали на ледяной бане и затем к ней добавляли 5 моль/л водного раствора гидроксида натрия (300 мл) в течение 1 ч и 20 мин, при внутренней температуре равной или ниже 13°C. После этого к смеси добавляли безводный ацетат натрия (49,5 г) и рН реакционного раствора доводили до 4,07. Полученную реакционную смесь наносили на обращеннофазовую колонку с силикагелем (внутренний диаметр стеклянной колонки: 10,5 см, Daisogel-SR120-40/60-ODS-RPS: 315 г) и элюирование проводили при нормальном давлении с использованием воды (600 мл), воды, содержащей 10% ацетонитрила (600 мл), и воды, содержащей 30% ацетонитрила (1800 мл) в таком порядке. Фракции, содержащие 2,2'-(7-((R)-1-карбокси-4-(((R)-1-((2-(4-(4-(N-((S)-1-карбокси-2-(5-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)пентанамид)этил)сульфамоил)-3,5-диметилфенокси)бутанамид)этил)амино)-1-оксо-3-сульфопропан-2-ил)амино)-4-оксобутил)-1,4,7-триазонан-1,4-диил)диуксусную кислоту объединяли, и растворитель отгоняли при пониженном давлении. К полученному остатку добавляли воду (100 мл), и при перемешивании раствора на льду, к нему добавляли карбонат лития (1,38 г) четырьмя отдельными порциями для доведения рН реакционного раствора до 8,10. После этого реакционный раствор наносили обращеннофазовую колонку с силикагелем (внутренний диаметр стеклянной колонки: 10,5 см, Daisogel-SR120-40/60-ODS-RPS: 315 г), элюирование проводили при нормальном давлении с использованием воды (600 мл), воды, содержащей 5% ацетонитрила (600 мл), воды, содержащей 10% ацетонитрила (600 мл), воды, содержащей 15% ацетонитрила (600 мл), воды, содержащей 20% ацетонитрила (600 мл), и воды, содержащей 25% ацетонитрила (600 мл) в таком порядке, и фракцию, содержащую литиевую соль 2,2'-(7-((R)-1-карбокси-4-(((R)-1-((2-(4-(4-(N-((S)-1-карбокси-2-(5-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)пентанамид)этил)сульфамоил)-3,5-диметилфенокси)бутанамид)этил)амино)-1-оксо-3-сульфопропан-2-ил)амино)-4-оксобутил)-1,4,7-триазонан-1,4-диил)диуксусной кислоты концентрировали при пониженном давлении. К раствору добавляли воду (100 мл) и добавляли муравьиную кислоту (2,79 мл) при перемешивании на ледяной бане. Полученную смесь наносили на обращеннофазовую колонку с силикагелем (внутренний диаметр стеклянной колонки: 6,5 см, Daisogel-SR120-40/60-ODS-RPS: 150 г) и элюирование проводили при нормальном давлении с использованием 0,1% водного раствора муравьиной кислоты (300 мл), воды (300 мл), воды, содержащей 30% ацетонитрила (300 мл), воды, содержащей 40% ацетонитрила (300 мл), и воды, содержащей 50% ацетонитрила (300 мл) в таком порядке. Собирали фракцию, содержащую 2,2'-(7-((R)-1-карбокси-4-(((R)-1-((2-(4-(4-(N-((S)-1-карбокси-2-(5-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)пентанамид)этил)сульфамоил)-3,5-диметилфенокси)бутанамид)этил)амино)-1-оксо-3-сульфопропан-2-ил)амино)-4-оксобутил)-1,4,7-триазонан-1,4-диил)диуксусную кислоту, и растворитель отгоняли при пониженном давлении. К полученному остатку добавляли воду (150 мл) и затем раствор лиофилизировали с получением тем самым 2,2'-(7-((R)-1-карбокси-4-(((R)-1-((2-(4-(4-(N-((S)карбокси-2-(5-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)пентанамид)этил)сульфамоил)-3,5-диметилфенокси)бутанамид)этил)амино)-1-оксо-3-сульфопропан-2-ил)амино)-4-оксобутил)-1,4,7-триазонан-1,4-диил)диуксусной кислоты (8,93 г) в виде белого твердого вещества.

ЖХ/МС время удерживания (мин): 0,76

МС (ESI, m/z): 1141 [М+Н]⁺

¹H-ЯМР (D₂O, 300 МГц): 7,51 (1H, д, J=7,5 Гц), 6,75 (2H, с), 6,53 (1H, д, J=7,5 Гц), 4,65 (1H, дд, J=7,9, 5,0 Гц), 4,03 (2H, т, J=5,9 Гц), 3,91 (1H, дд, J=9,2, 4,3 Гц), 3,74 (4H, с), 3,60-2,88 (24H, м), 2,73 2H, т, J=5,9 Гц), 2,61 (2H, т, J=7,3 Гц), 2,53 (6H, с), 2,50-2,41 (1H, м), 2,32 (2H, т, J=7,4 Гц) 2,13-1,80 (8H, м), 1,62-1,37 (4H, м)

ВЭЖХ (GL Inertsustain C18, на основе ТФУК, градиентный цикл: 0 мин (раствор А/ раствор B=90/10), 20 мин (раствор А/раствор B=75/25), 30 мин (раствор А/раствор B=75/25), скорость потока: 1,0 мл/мин) время удерживания (мин): 9,80

[0362] Пример 7

(1)

[0363]

[0364] DIEA (67 мкл), (R)-3-((2-аминоэтил)амино)-2-((R)-4-(4,7-бис(2-(трет-бутокси)-2-оксоэтил)-1,4,7-триазонан-1-ил)-5-(трет-бутокси)-5-оксопентанамид)-3-оксопропан-1-сульфоновую кислоту (140 мг) и HBTU (72 мг) добавляли к реакционной смеси, содержащей (S)-4-(4-(N-(1-(трет-бутокси)-1-оксо-3-(5-(8-((2,2,4,6,7-пентаметил-2,3-дигидробензофуран-5-ил)сульфонил)-5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)пентанамид)пропан-2-ил)сульфамоил)-3,5-диметилфенокси)бутановую кислоту, полученную в (3) ссылочного примера 4, с последующим перемешиванием в течение 2,5 ч при комнатной температуре. К реакционной смеси добавляли водный насыщенный раствор хлорида аммония (4 мл), затем супернатант удаляли и полученное вязкое твердое вещество очищали колоночной хроматографией на силикагеле (NH-силикагель, смесь хлороформ/метанол=от 100/0 до 80/20 до 70/30 до 50/50), с получением тем самым (R)-2-((R)-4-(4,7-бис(2-(трет-бутокси)-2-оксоэтил)-1,4,7-триазонан-1-ил)-5-(трет-бутокси)-5-оксопентамид)-3-((2-(4-(4-(N-((S)-1-(трет-бутокси)-1-оксо-3-(5-(8-((2,2,4,6,7-пентаметил-2,3-дигидроксибензофуран-5-ил)ульфонил)-5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)пентанамид)пропан-2-ил)сульфамоил)-3,5-диметилфенокси)бутанамид)этил)амино)-3-оксопропан-1-сульфоновой кислоты (25 мг) в виде белого твердого вещества.

ЖХ/МС время удерживания (мин): 1,90

МС (ESI, m/z): 1618 [М+Н]⁺

¹H-ЯМР (CDCl₃, 300 МГц): 7,95-7,31 (2H, м), 7,18 (1H, д, J=7,3 Гц), 6,65 (2H, с), 6,58 (1H, д, J=7,3 Гц), 6,11 (1H, с), 5,72 (1H, уш. с), 4,80 (1H, уш.с), 4,13-3,95 (4H, м), 3,75-2,24 (49H, м), 2,19-1,75 (12H, м), 1,54 -1,16 (46H, м)

[0365] (2)

[0366]

[0367] ТФУК (0,5 мл) добавляли к (R)-2-((R)-4-(4,7-бис(2-(трет-бутокси)-2-оксоэтил)-1,4,7-триазонан-1-ил)-5-(трет-бутокси)-5-оксопентамид)-3-((2-(4-(4-(N-((S)-1-(трет-бутокси)-1-оксо-3-(5-(8-((2,2,4,6,7-пентаметил-2,3-дигидроксибензофуран-5-ил)сульфонил)-5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)пентанамид)пропан-2-ил)сульфамоил)-3,5-диметилфенокси)бутанамид)этил)амино)-3-оксопропан-1-сульфоновой кислоте (5 мг) с последующим перемешиванием в течение 6 ч при комнатной температуре, и растворитель отгоняли. Остаток очищали препаративной ВЭЖХ с получением тем самым 2,2'-(7-((R)-1-карбокси-4-(((R)-1-((2-(4-(4-(N-((S)-1-карбокси-2-(5-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)пентанамид)этил)сульфамоил)-3,5-диметилфенокси)бутанамид)этил)амино)-1-окси-3-сульфопропан-2-ил)амино)-4-оксобутил)-1,4,7-триазонан-1,4-диил)диуксусной кислоты (2 мг) в виде белого твердого вещества.

ЖХ/МС время удерживания (мин): 0,75

МС (ESI, m/z): 1141 [М+Н]⁺

[0363] Пример 8

В настоящем примере использовали соединение А, полученное в примере 1, и соединение В, полученное в примере 6.

[0369] (A)

Раствор хлорида галлия [⁶⁷Ga] (200 МБк, 63 мкл) добавляли к смешанному раствору соединения А (21 мкг), гентизиновой кислоты (1,0 мг), 0,2 моль/л натрий-ацетатного буферного раствора (рН 4,0, 730,7 мкл) и 4,5 моль/л водного раствора гидроксида натрия (6,3 мкл). Раствор нагревали до 100°С в течение 15 мин и затем выдерживали в течение 5 мин при комнатной температуре с получением тем самым комплекса [⁶⁷Ga]-(соединение A). В результате анализа соединения с использованием ТСХ с обращенной фазой (Merck, RP-8 F₂₅₄, проявляющий раствор: метанол/0,5 моль/л водный раствор ацетата натрия/28% водный аммиак (50/50/1), значение Rf радиоактивномеченного соединения было равным 0,4. Радиохимическая чистота, измеренная сразу же после получения соединения и измеренная через 3,5 ч при комнатной температуре, была равной или выше 95%.

[0370] (B)

Раствор хлорида лютеция [¹⁷⁷Lu] (666 МБк, 333 мкл) в 0,2 моль/л натрий-ацетатном буферном растворе (рН 4,0), добавляли к смешанному раствору соединения А (70,0 мкг), гентизиновой кислоты (1,8 мг) и 0,2 моль/л натрий-ацетатного буферного раствора (рН 4,0, 83,3 мкл). Раствор нагревали до 100°С в течение 15 мин, и затем выдерживали в течение 5 мин при комнатной температуре с получением тем самым комплекса [¹⁷⁷Lu]- (соединение A). В результате анализа соединения с использованием ТСХ с обращенной фазой (Merck, RP-8 F₂₅₄, проявляющий раствор: метанол/0,5 моль/л водный раствор ацетата натрия/28% водный аммиак (50/50/1), значение Rf радиоактивномеченного соединения было равным 0,4. Радиохимическая чистота, измеренная сразу же после получения соединения и измеренная через 3,5 ч при комнатной температуре, была равной или выше 95%.

[0371] (С)

Раствор хлорида галлия [⁶⁷Ga] (40 МБк, 11,7 мкл) добавляли к смешанному раствору соединения B (4,1 г), гентизиновой кислоты (1,0 мг), 0,2 моль/л натрий-ацетатного буферного раствора (рН 4,5, 147,13 мкл) и 4,5 моль/л водного раствора гидроксида натрия (1,17 мкл). Раствор нагревали до 100°С в течение 15 мин и затем выдерживали в течение 5 мин при комнатной температуре с получением тем самым комплекса [⁶⁷Ga]-(соединение B). В результате анализа соединения с использованием ТСХ с обращенной фазой (Merck, RP-8 F₂₅₄, проявляющий раствор: метанол/0,5 моль/л водный раствор ацетата натрия/28% водный аммиак (50/50/1), значение Rf радиоактивномеченного соединения было равным 0,5. Радиохимическая чистота, измеренная сразу же после получения соединения и измеренная через 5,5 ч при комнатной температуре, была равной или выше 95%.

[0372] В следующих тестовых примерах 1-9 использовали соединение А, полученное в ссылочном примере 8, и соединение В, полученное в ссылочном примере 9.

Тестовый пример 1. Анализ аффинности связывания интегрина δ_vβ₃

0,2 мкг/мл δ_Vβ₃ иммобилизовали в 96-луночных планшетах (Corning Incorporated) и затем блокировали с использованием 1% Block Ace (DS Pharma Biomedical Co., Ltd.), и затем планшет промывали T-PBS (PBS, содержащий 0,05% Твина 20). Каждый из концентрированного раствора 2× испытуемого соединения (концентрация 10× из 3,16× разведения, приготовленного из 0,3 мкмоль/л, буфер (20 мМ Трис-HCl, pH 7,5, 150 мМ NaCl, 1 мМ CaCl₂, 1 мМ MgCl₂, 1 мМ MnCl₂)) и 4 мкг/мл раствора биотинилированного витронектина (меченый витронектин (Upstate Biotechnology Inc.) с использованием набора EZ-Link Sulfo-NHS-Biotinylation (Pierce Protein Biology), и затем доводили концентрацию) вносили в планшет в количестве 50 мкл, и планшет встряхивали в течение 2 ч при комнатной температуре. Планшет промывали T-PBS, в него вносили авидин-пероксидазу (0,2 мкг/мл) (Pierce Protein Biology) и планшет встряхивали в течение 1 ч при комнатной температуре. Планшет промывали T-PBS, в него добавляли раствор o-фенилендиамина (Sigma-Aldrich Co., LLC.), для развития окраски (реакцию останавливали с использованием 4 моль/л серной кислоты) и измеряли поглощение (490 нм, сравнительная длина волны: 595 нм). Значение IC₅₀ определяли с использованием программы XLfit 3.0 (ID Business Solutions Ltd.). Для каждого планшета в качестве образца контроля качества (QC), RGDfV (Bachem AG) анализировали в двух параллелях.

[0373] Тестовый пример 2. Анализ аффинности связывания интегрина δ_vβ₅

0,2 мкг/мл δ_Vβ₃ иммобилизовали в 96-луночных планшетах (Corning Incorporated) и затем блокировали с использованием 1% Block Ace (DS Pharma Biomedical Co., Ltd.), и затем планшет промывали PBST (10 мМ Na₂HPO₄, рН 7,5, 150 мМ NaCl, 0,01% Твина 20). Каждый из концентрированного раствора 2× испытуемого соединения (концентрация 10× из 3,16× разведения, приготовленного из 0,3 мкмоль/л, буфер (20 мМ Трис-HCl, pH 7,5, 150 мМ NaCl, 1 мМ CaCl₂, 1 мМ MgCl₂, 1 мМ MnCl₂)) и 4 мкг/мл раствора биотинилированного витронектина (меченый витронектин (Upstate Biotechnology Inc.) с использованием набора EZ-Link Sulfo-NHS-Biotinylation (Pierce Protein Biology), и затем доводили концентрацию) вносили в планшет в количестве 50 мкл, и планшет встряхивали в течение 2 ч при комнатной температуре. Планшет промывали PBST, в него вносили авидин-пероксидазу (0,2 мкг/мл) (Pierce Protein Biology) и планшет встряхивали в течение 1 ч при комнатной температуре. Планшет промывали PBST, в него добавляли раствор o-фенилендиамина (Sigma-Aldrich Co., LLC.), для развития окраски (реакцию останавливали с использованием 4 моль/л серной кислоты) и измеряли поглощение (490 нм, сравнительная длина волны: 595 нм). Значение IC₅₀ определяли с использованием программы XLfit 3.0 (ID Business Solutions Ltd.). Для каждого планшета в качестве образца контроля качества (QC), RGDfV (Bachem AG) анализировали в двух параллелях.

[0374] В качестве испытуемых соединений в тестовых примерах 1 и 2 использовали соединение А и соединение В. Результаты показаны ниже.

[0375]

Таблица 1
Значение IC50	Результаты оценки
ниже 1 нмоль/л	+++
1-10 нмоль/л	++
10-100 нмоль/л	+

[0376]

Таблица 2
Соединение	αVβ3	αVβ5
Соединение A	+++	+++
Соединение B	+++	+++

[0377] Соединения, представленные в таблице 2, демонстрировали высокую аффинность связывания интегрина.

[0378] Тестовый пример 3. Оценка, основанная на накоплении радиоактивности ¹¹¹In-меченного соединения, ⁶⁴Cu-меченого соединения и ⁹⁰Y-меченного соединения в опухоли

1×10⁷ клеток U87MG прививали в подкожное пространство правого бока мышей Balb/c AJcl-nu/nu (в возрасте 6-9 недель, KURARAY CO., LTD. или Japan SLC. Inc). Через 2-3 недели, когда объем опухолей становился равным 200-500 мм³, по 3 мыши распределяли в каждую группу на каждую временную точку. ¹¹¹In-меченное соединение (740 кБк) вводили в хвостовую вену, животных подвергали эвтаназии через определенный промежуток времени и опухоли извлекали. Измеряли массу опухолей, определяли радиоактивность с помощью гамма-счетчика и рассчитывали концентрацию радиоактивности в опухолях (% ИД/г). Для ⁶⁴Cu-меченного соединения (500 кБк) и ⁹⁰Y-меченного соединения (500 кБк) концентрацию радиоактивности в опухолях (% ИД/г) рассчитывали с использованием аналогичного метода.

Результаты показаны ниже.

[0379]

Таблица 3
Радиоактивномеченное соединение	Концентрация радиоактивности в опухолях (% ИД/г)
Через 4 ч	Через 24 ч
[111In]-(соединение A)	11,10	9,62
[90Y]-(соединение A)	12,52	15,29
[64Cu]-(соединение A)	9,25	8,48
[64Cu]-(соединение B)	11,19	8,53

[0380] Концентрация радиоактивности соединений, представленных в таблице 3, достигала 9,25-12,52% ИД/г в опухолях в течение 4 ч после введения и достигала уровня 8,48-15,29% ИД/г в течение 24 ч после введения.

[0381] Тестовый пример 4. Визуализация опухоли с экспрессией интегрина с помощью позитронно-эмиссионной томографии (ПЭТ) с использованием [⁶⁴Cu]-(соединения A) и [⁶⁴Cu]-(соединения B)

1×10⁷ клеток U87MG прививали в подкожное пространство правого бока мышей Balb/c AJcl-nu/nu (в возрасте 6-9 недель, KURARAY CO., LTD. или Japan SLC. Inc). Через 2 недели в хвостовую вену мышей с объемом опухолей 250-650 мм³ вводили [⁶⁴Cu]-(соединение A) из расчета 4,8 МБк/мышь. Через 1, 4, 24 и 48 ч мышей визуализировали на microPET/CT (Inveon, Siemens Healthcare GmbH) под изофлурановой анестезией. Через 48 ч после визуализации цельную кровь отбирали из нижней полой вены под глубокой изофлурановой анестезией, животных подвергали эвтаназии, и затем извлекали опухоли. Измеряли массу опухолей, определяли радиоактивность с помощью гамма-счетчика и рассчитывали концентрацию радиоактивности в опухоли (% ИД/г). Для [⁶⁴Cu]-(соединения B) визуализацию проводили таким же методом.

На фиг. 1 и 2 показаны снимки ПЭТ, относящиеся к каждому соединению на каждую временную точку.

Через 1 ч после введения было обнаружено, что все соединения проникали в опухоли, и опухоли визуализировались в течение 48 ч. В отношение [⁶⁴Cu]-(соединения A), то поскольку изображение показало участок, в который проникало соединение в низкой степени в центральной области опухоли, то наблюдали опухоль, извлеченную после конца 48 ч периода визуализации. В результате обнаружили гематому, локализация которой совпадала с изображением в центральном участке. На время вскрытия (через 48 ч после введения) концентрация радиоактивности в опухоли составляла 5,6% ИД/г.

[0382] Тестовый пример 5. Визуализация опухоли с экспрессией интегрина с помощью гамма-камеры с использованием [¹¹¹In]-(соединения A)

1×10⁷ клеток U87MG прививали в подкожное пространство правого бока мышей Balb/c AJcl-nu/nu (самцы, в возрасте 6 недель, KURARAY CO., LTD). Через 2 недели в хвостовую вену мышей с объемом опухолей 300-600 мм³ вводили раствор [¹¹¹In]-(соединения A) из расчета 1 МБк/мышь. Через 24, 48 и 72 ч после введения получали плоское изображение под изофлурановой анестезией с использованием гамма-камеры (Symbia, Siemens Healthcare GmbH). При анализе изображений рассчитывали радиоактивность (% ИД) опухолей.

На фиг.3 показан снимок и уровень радиоактивности в опухолях на каждую временную точку. Через 24-72 ч после введения уровень радиоактивности в опухолях был выше, чем в других органах, и наличие опухолей могло быть четко подтверждено.

[0383] Тестовый пример 6. Визуализация опухоли с экспрессией интегрина с использованием [¹¹¹In]-(соединения A) (модель внутричерепной опухоли)

1×10⁷ клеток U87MG прививали в череп мышей Balb/c AJcl-nu/nu (самцы, в возрасте 6 недель, KURARAY CO., LTD) с использованием двухступенчатой иглы. Через 2-4 недели в хвостовую вену мышей вводили раствор [¹¹¹In]-(соединения A) из расчета 1 МБк/мышь. Через 24, 48 и 72 ч после введения получали плоское изображение под изофлурановой анестезией с использованием гамма-камеры (Symbia, Siemens Healthcare GmbH) (фиг.4). После получения конечной плоского изображения извлекали головной мозг, и готовили замороженные срезы. При приведении некоторых участков опухоли в контакт с IP-пластиной получали изображения проникновения соединений с помощью авторадиографии (ARG). Для последовательных срезов проводили окрашивание гематоксилин-эозином, и проверяли наличие опухоли. С помощью получения плоского изображения и ARG, на модели внутричерепной опухоли было подтверждено проникновение [¹¹¹In]-(соединения A), совпадающее с опухолью.

[0384] Тестовый пример 7. Терапевтический тест на модели подкожной прививки клеток U87MG с использованием [⁹⁰Y]-(соединения A)

1×10⁷ клеток U87MG прививали в подкожное пространство правого бока мышей Balb/c Slc-nu/nu (самцы, в возрасте 6 недель, Japan SLC. Inc). Через 2 недели мышей с опухолями, имеющими объем 100-500 мм³, распределяли по группам. Забуференный фосфатом физиологический раствор (PBS) или [⁹⁰Y]-(соединение A) вводили в хвостовую вену и измеряли объем опухолей. На временную точку, когда объем опухолей у мышей в группе с PBS превышал 2000 мм³, которая является из этических соображений гуманной конечной точкой, оценивали противоопухолевую активность. В качестве показателей оценки использовали показатель ингибирования роста опухоли ((1-(средний объем опухолей в группе мышей, которым вводили соединение - средний объем опухолей в группе мышей, которым вводили соединением до введения)/(средний объем опухолей в группе с PBS - средний объем опухолей в группе с PBS до введения)) × 100 (здесь, в случае, когда показатель ингибирования превышал 100%, то показатель ингибирования считался равным 100%)) и количество особей с опухолью, имеющей объем, равный или меньше исходного объема опухолей (количество животных с регрессией).

Результаты показаны ниже.

[0385]

Таблица 4
Соединение	Доза ((МБк)	Частота введения (число раз)	Количество животных	Объем опухолей (мм3)	Показатель ингибирования (%)	Число животных с регрессией
на начало введения	через 16 суток после введения
PBS	-	1	8	333±117	1994±225	-	0
[90Y]-(соединение A)	14,8	1	8	351±72	429±188	95	2
22,2	1	8	343±88	386±142	97	2
(Среднее значение±SD)

[0386] Соединение, приведенное в таблице 4, показало высокую противоопухолевую активность.

[0387] Тестовый пример 8. Терапевтический тест на модели подкожной прививки клеток T98G с использованием [⁹⁰Y]-(соединения A)

Смесь, полученную смешиванием суспензии клеток T98G (глиобластома человека, 1×10⁷ клеток) с MATRIGEL (BD Biosciences, Япония) в равном количестве, прививали в подкожное пространство правого бока мышей Balb/c Slc-nu/nu (самцы, в возрасте 6 недель, Japan SLC. Inc). Через 77 суток, на временной точке, когда объем опухолей достигал 300-1200 мм³, мышей распределяли на группы. Забуференный фосфатом физиологический раствор (PBS) или [⁹⁰Y]- (P2) вводили в хвостовую вену и измеряли объем опухолей. Показатели оценки рассчитывали аналогично тому, как описано в тестовом примере 7, и оценивали противоопухолевую активность.

Результаты показаны ниже.

[0383]

Таблица 5
Соединение	Доза ((МБк)	Частота введения (число раз)	Количество животных	Объем опухолей (мм3)	Показатель ингибирования (%)	Число животных с регрессией
на начало введения	через 13 суток после введения
PBS	-	1	6	754±317	1439±638	-	0
[90Y]-(соединение A)	22,2	1	6	755±293	882±399	82	1
29,6	1	6	736±264	755±313	97	3
Среднее значение±SD)

[0389] Соединение, приведенное в таблице 5, показало высокую противоопухолевую активность.

[0390] Тестовый пример 9. Визуализация обезьяны с использованием [¹¹¹In]-(соединения A)

У макаки-крабоеда отбирали образцы крови в течение времени, и с использованием [¹¹¹In]-(соединения A), по концентрации радиоактивности в крови, рассчитывали фармакокинетические параметры соединения в крови с использованием программы OLINDA/EXM 1.0. Кроме того, используя [¹¹¹In]-(соединение A), по данным распределения по органам, полученного путем визуализации, рассчитывали поглощенную дозу каждым органом, полученную в случае, когда соединение вводили человеку, с использованием программы OLINDA/EXM 1.0.

[¹¹¹In]-(соединение A) (98 МБк/9,3 мкг) вводили макаке-крабоеду (Hamri Co., Ltd., самцы, в возрасте 3 лет, 3,4 кг) под анестезией. После введения в течение времени отбирали образцы крови, и визуализацию проводили с использованием гамма-камеры. Кровь отбирали через 10, 30 и 60 мин после введения и 2, 4, 5, 6, 24, 48, 72 и 144 ч после введения. В отношение визуализации, то через 1, 2, 4, 6, 24, 48, 72 и 144 ч плоское изображение получали с использованием гамма-камеры (Symbia, Siemens Healthcare GmbH). В отношение анестезии, то анестезию животному проводили кетамином в дозе 20 мг/кг до введения [¹¹¹In]-(соединения A), и анестезию поддерживали до конца визуализации, которая продолжалась в течение 6 ч после введения, путем ингаляционной анестезии (изофлуран 2-3%, от 5 до 8 л/мин). Через 24 ч вводили кетамин (20 мг/кг) и ксилазин (2 мг/кг) для проведения отбора образцов крови и визуализации.

На фиг. 5 показана тенденция накопления радиоактивности в крови обезьяны, которой вводили [¹¹¹In]-(соединение A). Фармакокинетические параметры в крови также показаны ниже.

[0391]

Таблица 6
Фармакокинетические параметры в крови	Результаты анализа
AUC (%ИД⋅ч/мл)	0,22
T1/2α (ч)	0,46
T1/2β (ч)	19,3
Cmax (%ИД/мл)	0,018
CL (мл/ч/кг)	130,2
Vss (л/кг)	3,52

[0392] AUC составляла 0,22 (% ИД⋅ч/мл), T1/2α равнялся 0,46 (ч), T1/2β составлял 19,3 (ч), Cmax равнялась 0,018 (% ИД/мл), CL составлял 130,2 (мл/кг) и Vss равнялся 3,52 (л/кг).

[0393] На фиг.6 приведены результаты, полученные выполнением во времени плоской визуализации на обезьяне, которой вводили [¹¹¹In]-(соединение A). Во время визуализации, до 6 ч после введения, проникновение соединения в мочевой пузырь и желчный пузырь повышалось с течением времени. Кроме того, с использованием программного обеспечения OLINDA/EXM 1.0 для анализа дозы экспозиции была смоделирована поглощенная доза для человека с использованием каждого из меченых соединений, и результаты показаны ниже.

[0394]

Таблица 7
Орган	Поглощенная доза (mGy/МБк)
[90Y]-(соединение A)	[111In]-(соединение A)	[64Cu]-(соединение A)
Все тело	0,27	0,05	0,02
Красный мозг	0,06	0,05	0,01
Головной мозг	1,96	0,25	0,11
Легкие	1,35	0,12	0,08
Печень	1,12	0,19	0,09
Почки	14,7	1,19	0,69
Тонкий кишечник	0,87	0,05	0,06

[0395] Способ получения по настоящему изобретению является пригодным в качестве способа получения нового азотсодержащего соединения или его соли. Кроме того, полученное промежуточное соединение по настоящему изобретению пригодно в качестве промежуточного соединения для эффективного получения нового азотсодержащего соединения и его соли.

1. Применение комплекса соединения с металлом для лечения опухолей с экспрессией интегрина, где указанное соединение представляет собой 2,2',2ʺ-(10-(2-(((R)-1-((2-(4-(4-(N-((S)-1-карбокси-2-(5-(5,6,7,8-тетрагидро-1,8-нафтиридин-2-ил)пентанамид)этил)сульфамоил)-3,5-диметилметокси)бутанамид)этил)амино)-1-оксо-3-сульфопропан-2-ил)амино)-2-оксоэтил)-1,4,7,10-тетраазациклододекан-1,4,7-триил)триуксусную кислоту и указанный металл представляет собой Lu.

2. Применение по п.1, где металл представляет собой ¹⁷⁷Lu.