Модифицированный белок, связывающий фактор н

Изобретение относится к модифицированному белку, связывающему фактор Н (fHbp), представляющему собой fHbp, или его вариант, модифицированному путем добавления по меньшей мере одной петли экзогенного пептида; и связанной нуклеиновой кислоте, композициям и применению. Модифицированный белок, связывающий фактор Н (fHbp), может быть использован для лечения или предупреждения возникновения патогенной инфекции или колонизации у субъекта. 5 н. и 12 з.п. ф-лы, 8 ил., 4 табл., 2 пр.

 

Данное изобретение относится к модифицированному белку, связывающему фактор Н (fHbp) и его применению для индукции иммунного ответа против патогенной инфекции или колонизации, например, против Neisseria meningitidis или Neisseria gonorrhoeae.

Менингококк Neisseria meningitidis (Nm) остается ведущей причиной сепсиса и бактериального менингита у детей и молодых совершеннолетних детей. Начало заболевания может быть чрезвычайно быстрым, с показателем смертности около 10% для септицемического заболевания¹, при этом те, кто выжил, могут испытывать значительную утрату трудоспособности, включая утрату конечностей и неврологические дефициты¹. Поэтому профилактическая иммунизация является лучшим способом защиты индивидуумов от менингококковой инфекции. Доступны вакцины на основе бактериальной капсулы², но имеются только частично эффективные вакцины, пригодные для эндемической инфекции серогруппы В, которая является причиной более 80% случаев в Великобритании в настоящее время³; полисахарид капсулы Nm серогруппы В является слабо иммуногененным, так как он идентичен по структуре с человеческим гликопротеином в нервной ткани и может индуцировать аутоиммунитет в случае использования в качестве вакцины⁴. Таким образом, существует острая потребность в создании новых вакцин, и прилагаются значительные усилия в науке и промышленности для достижения этой важной цели.

Главной мишенью иммунного ответа, вызванного против менингококковых везикул наружной мембраны (OMV), является PorA^16,17,18, интегральный белок наружной мембраны (ОМР) в менингококке¹⁹. Однако последовательность этого белка является разнообразной, и распространенность конкретных вариантов отличается по географическому региону, и вакцины OMV являются в значительной степени PorA-специфическими. Варианты PorA идентифицированы по последовательностям в вариабельных областях (VR) белка, которые локализованы в экспонированных на поверхности петлях белка и являются мишенью иммунных ответов¹⁷. PorA имеет семь внеклеточных петель; четвертая петля представляет собой вариабельную область 2 (VR2) и является мишенью наибольшей бактерицидной активности сыворотки (SBA), генерированной PorA после природной инфекции и после иммунизации OMV^16,18. Бактерицидная активность сыворотки (SBA) является известным коррелятом защиты против менингококкового заболевания. Несмотря на разнообразие последовательностей, около 70% изолятов в Великобритании будет покрыто вакцинами, содержащими шесть белков PorA (http://pubmlst.org/neisseria/PorA).

Основным препятствием для разработки бактериальных вакцин является трудность в получении некоторых количеств интегральных белков наружной мембраны (ОМР), таких как PorA, в их нативной конформации. Это обусловлено тем, что белки наружной мембраны (ОМР) содержат гидрофобные домены, которые пересекают мембрану и не сворачиваются правильно, когда экспрессируются в виде растворимых рекомбинантных белков. Правильное сворачивание является критическим для PorA, так как бактерицидная активность сыворотки (SBA) индуцируется конформационными, а не линейными эпитопами белка²⁰. Предыдущие попытки использовать пептиды PorA в качестве вакцин оказались неудачными, так как они не были достаточно иммуногенными и не презентировали иммуногенную часть PorA в ее правильной конформации. Таким образом, единственными вакцинами на основе PorA, находящимися на стадии разработки, являются везикулы наружной мембраны (OMV), которые обладают ограниченной эффективностью у грудных детей², являются реактогенными²¹ и плохо определяемыми, вызывая вопросы нормативно-правового регулирования. Везикулы наружной мембраны (OMV) в качестве иммуногенов не являются подходящими, поскольку устойчивость и токсичность могут вызывать проблемы во время изготовления. Например, везикулы наружной мембраны (OMV) могут содержать токсичный липополисахарид (LPS).

Менингококковый белок, связывающий фактор Н (fHbp) представляет собой экспонированный на поверхности липопротеин, который состоит из двух β-цилиндров⁵ (фигура 1А). N-Концевой β-цилиндр fHbp имеет относительно открытую структуру, тогда как С-концевой β-цилиндр стабилизирован за счет обширного водородного связывания между семью β-цепями, которые образуют этот цилиндр⁵.

Важно, что fHbp является ключевым антигеном в вакцинах против Nm серогруппы В, находящихся на стадии разработки фармацевтическими компаниями, такими как Pfizer, GSK и другие, и включен в вакцины^6,7,8 OMV следующего поколения. Вакцина компании Pfizer состоит из двух fHbp, тогда как вакцина компании GSK имеет один fHbp в коктейле других антигенов, который включает везикулы наружной мембраны (OMV). fHbp связывает человеческий, но не мышиный, фактор Н (fH)^9,10, наиболее представленный в плазме белок, который понижающе регулирует систему комплемента¹¹, важный аспект иммунитета против Nm¹². Иммунизация подростков и взрослых fHbp вызывает SBA¹³.

fHbp подразделяли на различные схемы на основе его предсказанной аминокислотной последовательности. В настоящей заявке распознаны три группы вариантов (v1, v2 и v3⁷) и число пептидов (www.mlst.org). Важно, что сыворотка, созданная против v1 fHbp, не опосредует бактерицидную активность сыворотки (SBA) против Nm, экспрессирующего белки v2 и v3, и наоборот. Вакцина компании GSK содержит один белок v1 (v1.1), тогда как состав компании Pfizer включает v1 и v3 fHbp¹³¹⁴. Таким образом, ни одна из существующих в настоящее время вакцин не включает v2 fHbp, даже несмотря на то, что значительная доля заболевания в Великобритании в настоящее время вызвана штаммами, экспрессирующими fHbp из этой группы вариантов³¹⁵.

В патентной заявке WO 2011024072 описано применение fHbp, который выбран или сконструирован таким образом, что он имеет последовательность, которая может вызывать продукцию бактерицидных антименингококковых антител широкого спектра после введения хозяину-животному. В этом документе указывается, что дополнительные менингококковые антигены могут быть обеспечены с помощью сконструированного fHbp в форме N- или С-концевого слитого белка. Однако такое предложение вряд ли будет обеспечивать белок, который будет представлять иммуногенную часть многих менингококковых антигенов, таких как PorA, в правильной конформации, и они не будут достаточно иммуногенными.

Целью настоящего изобретения является обеспечение альтернативных и улучшенных иммуногенных молекул для вакцинации против патогенных организмов, в частности, для предупреждения или уменьшения менингококковой или гонококковой инфекции или колонизации.

Согласно первому аспекту изобретения предлагается модифицированный белок, связывающий фактор Н (fHbp), представляющий собой fHbp или его вариант, который действует в качестве молекулярного каркаса для модификации путем добавления по меньшей мере одной петли экзогенного пептида из другого антигена.

В настоящем документе было показано, что иммуногенные пептиды, такие как пептиды из PorA, могут быть введены в белок, связывающий фактор Н (fHbp), который действует в качестве молекулярного каркаса. Пептиды, вводимые в fHbp, презентированы иммунной системе и способны вызывать защитные ответы, такие как SBA. Предпочтительно молекула fHbp обеспечивает идеальный молекулярный каркас для стабильного включения пептидных петель для дисплея эпитопов, в частности, эпитопов, которые трудно стабилизировать и отображать в их нативной конформации, например, петель из интегральных белков наружной мембраны (ОМР), таких как PorA. Это противоречит решениям, например, описанным в WO 2011024072, где простые N- или слитые С-концы fHbp и дополнительного антигена не решат трудности, связанные с внутренней стабильностью и растворимостью некоторых антигенов. В частности, многие белки наружной мембраны (ОМР), такие как PorA, трудно экспрессировать из-за нерастворимости их пересекающих мембрану доменов. PorA имеет структуру 16-бета-цепочечного цилиндра с экспонированными на поверхности петлями между цепями 1 и 2 (петля 1), цепями 7 и 8 (петля 4), цепями 9 и 10 (петля 5) и цепями 11 и 12 (петля 7), которые, как это было продемонстрировано, являются наиболее эффективными антигенами. fHbp содержит два бета-цилиндра, поэтому последовательности пептидных петель из белков наружной мембраны (ОМР) могут быть встроены в концы петель между бета-цепями fHbp для презентирования фрагментов внеклеточных петель из интегральных белков наружной мембраны (ОМР) в их нативных конформациях для иммунизации. Таким образом, каркасную молекулу модифицированного fHbp согласно изобретению можно применять в качестве профилактической или терапевтической вакцины, направленной на Nm или гонококк, в которой один белок презентирует ключевые эпитопы из двух различных антигенов.

В одном варианте осуществления fHbp представляет собой менингококковый fHbp. В другом варианте осуществления fHbp представляет собой гонококковый fHbp. fHbp может содержать любой из вариантов v1, v2 и v3. В одном варианте осуществления fHbp может содержать v1 fHbp. В другом варианте осуществления fHbp может содержать v2 fHbp. В другом варианте осуществления fHbp может содержать v3 fHbp.

В одном варианте осуществления вариант v1 fHbp может представлять собой вариант v1.1, v1.13, v1.14, v1.15, v1.4 или v1.55. В одном варианте осуществления вариант v1 fHbp может не быть представлять собой v1.1. В одном варианте осуществления вариант v1 fHbp может не представлять собой v1.55. В одном варианте осуществления вариант v1 fHbp может не представлять собой v1.1 или v1.55. В одном варианте осуществления вариант v2 fHbp может представлять собой вариант v2.16, v2.19, v2.22 или v2.25. В одном варианте осуществления вариант v3 fHbp может представлять собой вариант v3.45. В одном варианте осуществления fHbp содержит любой из вариантов v1.4, v2.25 или v3.45 fHbp.

Вариант fHbp может содержать ортолог fHbp. Например, вариант fHbp может содержать Ghfp, гонококковый гомолог fHbp. Ghfp является нефункциональным и тесно связан с V3 fHbp (>95% идентичности аминокислотной последовательности, константа диссоциации KD>100 мкМ с фактором Н).

В одном варианте осуществления fHbp, который должен быть в дальнейшем модифицирован по меньшей мере одной петлей экзогенного пептида, может содержать или состоять из последовательности

В другом варианте осуществления fHbp, который должен быть в дальнейшем модифицирован по меньшей мере одной петлей экзогенного пептида, может содержать или состоять из последовательности

В другом варианте осуществления fHbp, который должен быть в дальнейшем модифицирован по меньшей мере одной петлей экзогенного пептида, может содержать или состоять из последовательности

В другом варианте осуществления fHbp, который должен быть в дальнейшем модифицирован по меньшей мере одной петлей экзогенного пептида, может содержать или состоять из последовательности

В другом варианте осуществления fHbp, который должен быть в дальнейшем модифицирован по меньшей мере одной петлей экзогенного пептида, может содержать или состоять из последовательности

В другом варианте осуществления fHbp, который должен быть в дальнейшем модифицирован по меньшей мере одной петлей экзогенного пептида, может содержать или состоять из последовательности

В другом варианте осуществления fHbp, который должен быть в дальнейшем модифицирован по меньшей мере одной петлей экзогенного пептида, может содержать или состоять из последовательности

В другом варианте осуществления fHbp, который должен быть в дальнейшем модифицирован по меньшей мере одной петлей экзогенного пептида, может содержать или состоять из последовательности

В другом варианте осуществления fHbp, который должен быть в дальнейшем модифицирован по меньшей мере одной петлей экзогенного пептида, может содержать или состоять из последовательности

В другом варианте осуществления fHbp, который должен быть в дальнейшем модифицирован по меньшей мере одной петлей экзогенного пептида, может содержать или состоять из последовательности

В другом варианте осуществления fHbp, который должен быть в дальнейшем модифицирован по меньшей мере одной петлей экзогенного пептида, может содержать или состоять из последовательности

В другом варианте осуществления fHbp, который должен быть в дальнейшем модифицирован по меньшей мере одной петлей экзогенного пептида, может содержать или состоять из последовательности

В другом варианте осуществления fHbp, который должен быть в дальнейшем модифицирован по меньшей мере одной петлей экзогенного пептида, может содержать или состоять из последовательности

Вариант fHbp может содержать одну или несколько мутаций аминокислотных остатков, включая добавления, делеции или замены, относительно fHbp дикого типа в дополнение к петле(петлям) экзогенного пептида, обеспеченной на модифицированном fHbp. Например, fHbp может действовать в качестве каркаса, на котором обеспечены петли экзогенного пептида, и варианты относительно дикого типа могут содержать аминокислотные мутации в каркасном участке в областях снаружи точек прикрепления петли(петель) экзогенного пептида. Ссылка на fHbp дикого типа может относиться к любому из вариантов fHbp, обсуждаемых в настоящем документе, например, любой из SEQ ID NO: 1-13.

Вариант fHbp может содержать по меньшей мере одну аминокислотную замену по сравнению с аминокислотой в белке дикого типа. Вариант fHbp может содержать не более одной аминокислотной замены по сравнению с белком дикого типа. Вариант fHbp может содержать не более трех аминокислотных замен по сравнению с белком дикого типа. Вариант fHbp может содержать не более четырех аминокислотных замен по сравнению с белком дикого типа. Вариант fHbp может содержать не более пяти аминокислотных замен по сравнению с белком дикого типа. Вариант fHbp может содержать не более шести аминокислотных замен по сравнению с белком дикого типа. В одном варианте осуществления предлагается вариант fHbp, который содержит шесть аминокислотных мутаций по сравнению с белком дикого типа.

Аминокислотные замены могут представлять собой консервативные замены. Например, мутированный остаток может обладать по существу такими же свойствами, как замещенный остаток дикого типа. Например, замещенный остаток может содержать по существу аналогичный или такой же заряд или гидрофобность, как замещенный остаток дикого типа. Например, замещенный остаток может содержать по существу аналогичную молекулярную массу или стерический объем, как замещенный остаток дикого типа.

В одном варианте осуществления вариант fHbp может иметь по меньшей мере 75% идентичности с диким типом. В другом варианте осуществления вариант fHbp может иметь по меньшей мере 80% идентичности с диким типом. В другом варианте осуществления вариант fHbp может иметь по меньшей мере 85% идентичности с диким типом. В другом варианте осуществления вариант fHbp может иметь по меньшей мере 90% идентичности с диким типом. В другом варианте осуществления вариант fHbp может иметь по меньшей мере 95% идентичности с диким типом. В другом варианте осуществления вариант fHbp может иметь по меньшей мере 98% идентичности с диким типом. В другом варианте осуществления вариант fHbp может иметь по меньшей мере 99% идентичности с диким типом. В другом варианте осуществления вариант fHbp может иметь по меньшей мере 99,5% идентичности с диким типом. Вышеуказанное процентное изменение не предназначено для включения изменения процента идентичности при добавлении петли(петель) экзогенного пептида (т.е. это процент идентичности только компонента fHbp по сравнению с диким типом), и не включает делецию последовательности fHbp в участке встраивания петель из других белков.

Модифицированный fHbp может быть модифицирован таким образом, чтобы он не был способен связывать фактор Н, или по меньшей мере обладал пониженной активностью связывания фактора Н. Модифицированный fHbp может быть нефункциональным относительно функции fHbp дикого типа. В одном варианте осуществления модифицированный fHbp обладает нарушенной способностью связываться с фактором комплемента Н (CFH) с константой диссоциации (KD), которая на >2 порядков выше по сравнению с белком дикого типа. Нефункциональные fHbp могут быть обеспечены путем мутации последовательности fHbp. В одном варианте осуществления нефункциональные fHbp могут быть обеспечены с помощью одной или нескольких петель экзогенных пептидов, предотвращая связывание фактора Н.

Мутация(и) аминокислотного остатка может предотвращать или уменьшать связывание модифицированным fHbp фактора комплемента Н. В другом варианте осуществления мутация(и) аминокислотного остатка может существенно не влиять на функцию fHbp. В одном варианте осуществления мутация(и) аминокислотного остатка в fHbp или его вариантах может быть выбрана из группы, состоящей из аминокислоты в положении 85, 133, 134, 135, 136, 204, 206, 211, 212, 213, 222, 225, 227, 231 и 252 на v1.1 fHbp или соответствующем положении в других fHbp.

В одном варианте осуществления мутация(и) аминокислотного остатка может содержать или состоять из замены на аланин вместо остатка дикого типа. В одном варианте осуществления замена(ы) аминокислотного остатка может содержать или состоять из замены на любую другую аминокислоту вместо остатка дикого типа.

Предпочтительно обеспечение нефункционального fHbp (т.е. отсутствие связывания или меньшее связывание фактора Н) может устранять или уменьшать любые отрицательные эффекты рекрутинга фактора Н на успех вакцины.

В одном варианте осуществления мутация(и) аминокислотных остатков может повысить стабильность модифицированного fHbp, в частности, в варианте осуществления, где обеспечен V2 fHbp, при этом V2 fHbp может быть стабилизирован мутациями в последовательности V2 fHbp. Подробную информацию, касающуюся мутаций для стабильности V2, можно найти в патенте WO 2014030003, который включен в настоящий документе путем ссылки. Например, аминокислотная замена для стабилизации может находиться в одной или более аминокислотах в положении 35, 36, 42, 43, 46, 107, 112, 114, 137 и 138 в V2 fHbp. Замена для стабилизации может быть произведена в одном или нескольких из Ser35, Leu36, Asp42, Glu43, Arg46, Asp107, Val112, Leu114, Ser137 и Gly138.

В одном варианте осуществления петля(и) экзогенного пептида является иммуногенной. Петля(и) экзогенного пептида может происходить из белка, экспонированного на наружной мембране/поверхности.

Петля(и) экзогенного пептида может быть прокариотической по происхождению. Петля(и) экзогенного пептида может происходить из белка на бактерии, такого как белок наружной мембраны (ОМР) патогена. Белок наружной мембраны (ОМР) может представлять собой интегральный ОМР или липопротеин. Петля(и) экзогенного пептида может происходить из менингококкового белка, такого как менингококковый белок наружной мембраны. Петля(и) экзогенного пептида может происходить из белка наружной мембраны другого патогена, такого как N. gonorrhoeae.

Петля экзогенного пептида может содержать фрагмент трансмембранного бета-цилиндрического белка. Петля экзогенного пептида может содержать фрагмент бета-цилиндрического белка порина. Петля экзогенного пептида может содержать фрагмент PorA. В другом варианте осуществления петля экзогенного пептида может содержать фрагмент FetA.

Петля(и) экзогенного пептида, такая как фрагменты PorA, может иметь длину 16 аминокислот. В одном варианте осуществления петля(и) экзогенного пептида, такая как фрагменты PorA, может иметь длину от 8 до 20 аминокислот. В другом варианте осуществления петля(и) экзогенного пептида, такая как фрагменты PorA, может иметь длину от 8 до 16 аминокислот. В другом варианте осуществления петля(и) экзогенного пептида, такая как фрагменты PorA, может иметь длину от 10 до 16 аминокислот. В другом варианте осуществления петля(и) экзогенного пептида, такая как фрагменты PorA, может иметь длину от 12 до 16 аминокислот. В другом варианте осуществления петля(и) экзогенного пептида, такая как фрагменты PorA, может иметь длину от 14 до 18 аминокислот. В другом варианте осуществления петля(и) экзогенного пептида, такая как фрагмент PorA, может иметь длину, достаточную для обеспечения иммуногенного эпитопа. В другом варианте осуществления петля(и) экзогенного пептида, такая как фрагменты PorA, может иметь любую длину, достаточную для обеспечения иммуногенного эпитопа и поддержания нативной конформации относительно фрагмента в диком типе.

Петля(и) экзогенного пептида может быть выбрана из любой из петель 1-7 PorA или их фрагментов; и/или их комбинаций. Петля(и) экзогенного пептида может быть выбрана из любой из петель PorA, включающих петлю 1 (между бета-цепями 1 и 2), петлю 4 (между бета-цепями 7 и 8), петлю 5 (между бета-цепями 9 и 10) и петлю 7 (между бета-цепями 11-12); или их фрагментов; и/или их комбинаций.

Петля экзогенного пептида может содержать любой пептид, выбранный из петли 1 PorA (между бета-цепями 1 и 2); петли 4 (между бета-цепями 7 и 8); и петли 5 (между бета-цепями 9 и 10); или их фрагментов; и/или их комбинаций.

Петля экзогенного пептида может содержать петлю 1 PorA (между бета-цепями 1 и 2) или ее фрагмент. Петля экзогенного пептида может содержать петлю 4 PorA (между бета-цепями 7 и 8) или ее фрагмент. Петля экзогенного пептида может содержать петлю 5 PorA (между бета-цепями 9 и 10) или ее фрагмент.

Специалисту в данной области будет понятно, что последовательности вариантов петель PorA могут быть обеспечены незначительными мутациями относительно дикого типа и могут все же функционировать в качестве эпитопа. Таким образом, петля(и) экзогенного пептида может содержать варианты петли PorA. Варианты могут включать одно или несколько аминокислотных добавлений, делеций или замен относительно последовательности дикого типа. В другом варианте осуществления варианты могут включать не более чем одно аминокислотное добавление, делецию или замену относительно последовательности дикого типа. В другом варианте осуществления варианты могут включать не более 2, 3, 4 или 5 аминокислотных добавлений, делеций или замен относительно последовательности дикого типа. Замены могут представлять собой консервативные замены. Например, обеспечение альтернативного аминокислотного остатка, обладающего по существу аналогичными свойствами, такими как заряд, гидрофобность, стерический размер или молекулярная масса. Варианты могут включать последовательности, имеющие по меньшей мере 85% идентичности последовательности с последовательностью петли PorA дикого типа. В другом варианте осуществления варианты могут включать последовательности, имеющие по меньшей мере 90%, 95%, 98%, 99% или 99,5% идентичности последовательности с последовательностью петли PorA дикого типа.

В одном варианте осуществления модифицированный fHbp может содержать две или более петли экзогенного пептида. В одном варианте осуществления модифицированный fHbp может содержать три или более петли экзогенного пептида. В одном варианте осуществления модифицированный fHbp может содержать от 1 до 7 петель экзогенного пептида. В одном варианте осуществления модифицированный fHbp может содержать от 1 до 5 петель экзогенного пептида. В одном варианте осуществления модифицированный fHbp может содержать от 1 до 3 петель экзогенного пептида. В одном варианте осуществления модифицированный fHbp может содержать от 2 до 7 петель экзогенного пептида. В одном варианте осуществления модифицированный fHbp может содержать от 3 до 7 петель экзогенного пептида. В одном варианте осуществления модифицированный fHbp может содержать от 2 до 5 петель экзогенного пептида. В одном варианте осуществления модифицированный fHbp может содержать от 3 до 5 петель экзогенного пептида. Модифицированный fHbp или его варианты могут быть модифицированы петлей экзогенного пептида по меньшей мере в одном положении. Модифицированный fHbp или его вариант может быть модифицирован петлей экзогенного пептида по меньшей мере в двух положениях. Модифицированный fHbp или его вариант может быть модифицирован петлей экзогенного пептида по меньшей мере в трех положениях. Модифицированный fHbp или его вариант может быть модифицирован петлей экзогенного пептида по меньшей мере в четырех положениях. Модифицированный fHbp или его вариант может быть модифицирован петлей экзогенного пептида по меньшей мере в пяти положениях. Модифицированный fHbp или его вариант может быть модифицирован петлей экзогенного пептида по меньшей мере в шести положениях. Модифицированный fHbp или его вариант может быть модифицирован петлей экзогенного пептида по меньшей мере в семи положениях.

Петля пептида может быть обеспечена (например, используя fHbp в качестве каркаса) между двумя бета-листами белка, связывающего фактор Н. Петля пептида может быть встроена в fHbp или его вариант в одном или нескольких аминокислотных положениях, выбранных из положений, куда могут быть встроены петли экзогенного пептида, такие как петли PorA (в диапазон включены все остатки в петле), между аминокислотами 49-54, 83-88, 114-124, 199-206, 227-233 и 240-246 v1.1 fHbp, или в соответствующих положениях в других fHbp.

По меньшей мере одна петля экзогенного пептида может быть обеспечена в виде слитых N- или С-конца.

Последовательности fHbp, в которые может быть встроена петля(и) экзогенного пептида, могут находиться в любом из положений, подчеркнутых в контексте первичной аминокислотной последовательности V1.1 fHbp, представленной ниже. В варианте осуществления, в котором используется альтернативный вариант fHbp, сайты встраивания могут находиться в эквивалентных положениях.

Положение 1 в fHbp (P1), остатки 83-88

Р2, остатки 199-206

Р3, остатки 227-233

Р4, остатки 49-54

Р5, остатки 114-124

Р7, остатки 240-246

В одном варианте осуществления сайт встраивания петли экзогенного пептида может находиться в положении 1 в fHbp (P1), остатках 83-88 (последовательность EVDGQL (SEQ ID NO: 15)). В другом варианте осуществления сайт встраивания петли экзогенного пептида может находиться в положении Р2, остатках 199-206 (последовательность KPDGKRHA (SEQ ID NO: 16)). В другом варианте осуществления сайт встраивания петли экзогенного пептида может находиться в положении Р3, остатках 227-233 (последовательность FGGKAQE (SEQ ID NO: 17)). В другом варианте осуществления сайт встраивания петли экзогенного пептида может находиться в положении Р4, остатках 49-54 (последовательность AAQGAE (SEQ ID NO: 18)). В другом варианте осуществления сайт встраивания петли экзогенного пептида может находиться в положении Р5, остатках 114-124 (последовательность IQDSEHSGKM (SEQ ID NO: 19)). В другом варианте осуществления сайт встраивания петли экзогенного пептида может находиться в положении Р7, остатках 240-246 (последовательность KTVNGI (SEQ ID NO: 20)).

Сайт встраивания петли экзогенного пептида в любом заданном положении 1-7 может находиться между любыми остатками, идентифицированными в положениях 1-7 fHbp. Альтернативно, сайт встраивания петли экзогенного пептида в любом заданном положении 1-7 может находиться до первого остатка или после последнего остатка, идентифицированного в положениях 1-7 fHbp. Например, если петля экзогенного пептида встроена в положении 4, вставка может представлять собой * AAQGAE (SEQ ID NO: 21), A*AQGAE (SEQ ID NO: 22), AA*QGAE (SEQ ID NO: 23), AAQ*GAE (SEQ ID NO: 24), AAQG*AE (SEQ ID NO: 25), AAQGA*E (SEQ ID NO: 26) или AAQGAE* (SEQ ID NO: 27), где * обозначает сайт встраивания.

В другом варианте осуществления специалисту в данной области будет понятно, что сайт встраивания петли экзогенного пептида может быть вариабельным, таким образом, что от 1 до 5 остатков в области сайта встраивания могут быть удалены из fHbp (например, заменены петлей) без значительного влияния на структуру fHbp. В одном варианте осуществления один или несколько аминокислотных остатков в идентифицированных положениях заменены/замещены петлей экзогенного пептида. В альтернативном варианте осуществления два, три, четыре, пять или более аминокислотных остатков в идентифицированных положениях заменены/замещены петлей экзогенного пептида. В другом варианте осуществления сайт встраивания петли экзогенного пептида может быть вариабельным, таким образом, что от 1 до 3 остатков в области сайта встраивания могут быть удалены из fHbp (например, заменены петлей) без значительного влияния на структуру fHbp. В другом варианте осуществления сайт встраивания петли экзогенного пептида может быть вариабельным, таким образом, что от 1 до 2 остатков в области сайта встраивания могут быть удалены из fHbp (например, заменены петлей) без значительного влияния на структуру fHbp. В другом варианте осуществления сайт встраивания петли экзогенного пептида может быть вариабельным, таким образом, что 1 остаток в области сайта встраивания может быть удален из fHbp (например, заменен петлей) без значительного влияния на структуру fHbp. Например, когда сайт встраивания представляет собой аминокислотный остаток 86 на одном конце петли и остаток 87 на другом конце петли, вариант может включать замену 5, 4, 3, 2 или 1 остатка петлей в области указанного сайта встраивания. В альтернативном варианте осуществления шесть или более аминокислотных остатков в идентифицированных положениях заменены/замещены петлей экзогенного пептида. В альтернативном варианте осуществления семь или более (где это применимо) аминокислотных остатков в идентифицированных положениях заменены/замещены петлей экзогенного пептида. В альтернативном варианте осуществления восемь или более (где это применимо) аминокислотных остатков в идентифицированных положениях заменены/замещены петлей экзогенного пептида. В альтернативном варианте осуществления девять или более (где это применимо) аминокислотных остатков в идентифицированных положениях заменены/замещены петлей экзогенного пептида. Все аминокислотные остатки любого из положений встраивания 1-7 могут быть заменены петлей экзогенного пептида.

Например, если петля экзогенного пептида встроена в положении 4 и заменяет один или более остатков, вставка может представлять собой A*QGAE (SEQ ID NO: 28), AA*GAE (SEQ ID NO: 29), AA*AE (SEQ ID NO: 30), AA*E (SEQ ID NO: 31), AA*, A*GAE (SEQ ID NO: 32), A*AE (SEQ ID NO: 33), AA*E (SEQ ID NO: 34), A*E, A*, *AQGAE (SEQ ID NO: 35), *QGAE (SEQ ID NO: 36), *GAE (SEQ ID NO: 37), *AE, *E, AAQ* AE (SEQ ID NO: 38), AAQ*E (SEQ ID NO: 39), AAQ* (SEQ ID NO: 40), AAQG*E (SEQ ID NO: 41), AAQG* (SEQ ID NO: 42), AAQGA* (SEQ ID NO: 43), где * обозначает сайт встраивания, и один или более остатков удалены из исходной последовательности.

Специалист в данной области поймет, что эквивалентные комбинации сайтов встраивания и/или замен петлей экзогенного пептида могут быть сделаны с альтернативными последовательностями других идентифицированных положений встраивания 1-7.

В одном варианте осуществления область сайта встраивания может быть смещена на +/-5 остатков выше или ниже любого из положений 1-7. Альтернативно, область сайта встраивания может быть смещена на +/-4 остатка выше или ниже любого из положений 1-7. Альтернативно, область сайта встраивания может быть смещена на +/-3 остатка выше или ниже любого из положений 1-7. Альтернативно, область сайта встраивания может быть смещена на+1-2 остатка выше или ниже любого из положений 1-7. Альтернативно, область сайта встраивания может быть смещена н а+/-1 остаток выше или ниже любого из положений 1-7.

Дополнительно или альтернативно, петля(и) пептида может быть обеспечена в положении, которое стерически предотвращает взаимодействие fHbp:CFH. Это включает в себя петлю экзогенного пептида, встроенную в любой один или более сайтов между остатками 114-124, 199-206 или 240-246 (например, положения 2, 5 и 7), подчеркнутыми на первичной последовательности VI ниже:

В одном варианте осуществления изобретения модифицированный fHbp является иммуногенным. Модифицированный fHbp может представлять собой рекомбинантный белок. Модифицированный fHbp может представлять собой слитый белок, такой как рекомбинантный слитый белок. Модифицированный fHbp может представлять собой изолированную молекулу модифицированного fHbp. Молекула модифицированного fHbp согласно изобретению может быть описана как единичный белок, мультивалентная вакцина. Модифицированный fHbp может быть включен в OMV-вакцину.

В вариантах осуществления, в которых более одной петли экзогенного пептида встроено в fHbp или его варианты, петли экзогенного пептида могут быть одинаковыми, например, иметь одинаковые последовательности или по существу аналогичные. Например, некоторые эпитопы, такие как эпитопы PorA, могут не вызывать достаточных функциональных ответов, когда они представлены в отдельности на fHbp. В этом случае настоящее изобретение может быть использовано для обеспечения такого же эпитопа на множестве сайтах на этой же модифицированной молекуле fHbp, тем самым усиливая иммуногенное распознавание эпитопа.

Альтернативно, петли экзогенного пептида отличаться друг от друга. Например, когда петли экзогенного пептида происходят из одного белка, такого как PorA, различные петли экзогенного пептида могут происходить из различных областей белка, такого как PorA. В одном варианте осуществления различные петли экзогенного пептида могут быть получены в результате перекрывания и из различных областей белка, такого как PorA.

В вариантах осуществления, в которых более одной петли экзогенного пептида встроено в fHbp или его варианты, петли экзогенного пептида могут происходить из различных видов или штаммов. Например, когда мультивалентная вакцина требуется для множества различных антигенов, включая различные организмы.

Последовательность петли пептида PorA может быть выбрана из любой из последовательностей, представленных в Таблице 1 (например, любой из SEQ ID NO: 45-79). Комбинации различных последовательностей PorA из Таблицы 1 могут быть обеспечены (одна петля на сайт) в любом из сайтов встраивания Р1-Р7, описанных в настоящем документе. Дополнительно или альтернативно, две или более таких же последовательностей PorA из Таблицы 1 могут быть обеспечены (одна петля на сайт) в любом из сайтов встраивания Р1-Р7, описанных в настоящем документе.

Специалисту будет понятно, что варианты, включающие одну или две, или более аминокислотных замен, добавлений или делеций, могут быть обеспечены для последовательностей PorA из Таблицы 1 без значительного удаления иммуногенной функции. Замены могут быть сделаны для сходных аминокислотных остатков, например, имеющих сходную молекулярную массу, заряд, гидрофобность или фрагменты, или синтетических аналогов. Специалист, кроме того, поймет, что варианты могут представлять собой усечения последовательностей PorA из Таблицы 1, при этом усеченные варианты обеспечивают достаточные аминокислотные остатки для образования узнаваемого эпитопа. В одном варианте осуществления последовательность PorA имеет по меньшей мере 80% идентичности с любой одной из последовательностей в Таблице 1. В другом варианте осуществления последовательность PorA имеет по меньшей мере 85% идентичности с любой одной из последовательностей в Таблице 1. В другом варианте осуществления последовательность PorA имеет по меньшей мере 90% идентичности с любой одной из последовательностей в Таблице 1. В другом варианте осуществления последовательность PorA имеет по меньшей мере 95% идентичности с любой одной из последовательностей в Таблице 1. В другом варианте осуществления последовательность PorA имеет по меньшей мере 98% идентичности с любой одной из последовательностей в Таблице 1.

В одном варианте осуществления fHbp, который в дальнейшем будет модифицирован петлей экзогенного пептида, может содержать или состоять из последовательности:

при этом последовательность любой петли VR2 PorA в Таблице 1 может заменить любую аминокислоту или группы аминокислот, выделенные рамкой.

В одном варианте осуществления fHbp, который в дальнейшем будет модифицирован петлей экзогенного пептида, может содержать или состоять из последовательности:

(SEQ ID NO: 81, fHbp V1.4 GL989557230), при этом последовательность любой петли VR2 PorA в Таблице 1 может заменить любую аминокислоту или группы аминокислот, выделенных рамкой.

В одном варианте осуществления fHbp, который в дальнейшем будет модифицирован петлей экзогенного пептида, может содержать или состоять из последовательности:

(SEQ ID NO: 82, fHbp VI. 13 GI:752774533), при этом последовательность любой петли VR2 PorA в Таблице 1 может заменить любую аминокислоту или группы аминокислот, выделенных рамкой.

В одном варианте осуществления fHbp, который в дальнейшем будет модифицирован петлей экзогенного пептида, может содержать или состоять из последовательности:

при этом последовательность любой петли VR2 PorA в Таблице 1 может заменить любую аминокислоту или группы аминокислот, выделенных рамкой.

В одном варианте осуществления fHbp, который в дальнейшем будет модифицирован петлей экзогенного пептида, может содержать или состоять из последовательности:

при этом последовательность любой петли VR2 PorA в Таблице 1 может заменить любую аминокислоту или группы аминокислот, выделенных рамкой.

В одном варианте осуществления fHbp, который в дальнейшем будет модифицирован петлей экзогенного пептида, может содержать или состоять из последовательности:

при этом последовательность любой петли VR2 PorA в Таблице 1 может заменить любую аминокислоту или группы аминокислот, выделенных рамкой.

В одном варианте осуществления fHbp, который в дальнейшем будет модифицирован петлей экзогенного пептида, может содержать или состоять из последовательности:

(SEQ ID NO: 86, fHbp V2.16 GL488155511), при этом последовательность любой петли VR2 PorA в Таблице 1 может заменить любую аминокислоту или группы аминокислот, выделенных рамкой.

В одном варианте осуществления fHbp, который в дальнейшем будет модифицирован петлей экзогенного пептида, может содержать или состоять из последовательности:

(SEQ ID NO: 87, fHbp V2.19 GL488148626), при этом последовательность любой петли VR2 PorA в Таблице 1 может заменить любую аминокислоту или группы аминокислот, выделенных рамкой.

В одном варианте осуществления fHbp, который в дальнейшем будет модифицирован петлей экзогенного пептида, может содержать или состоять из последовательности:

(SEQ ID NO: 88, fHbp V2.22 GI: 120865922), при этом последовательность любой петли VR2 PorA в Таблице 1 может заменить любую аминокислоту или группы аминокислот, выделенных рамкой.

В одном варианте осуществления fHbp, который в дальнейшем будет модифицирован петлей экзогенного пептида, может содержать или состоять из последовательности:

(SEQ ID NO: 89, fHbp 2.25 GP488158712), при этом последовательность любой петли VR2 PorA в Таблице 1 может заменить любую аминокислоту или группы аминокислот, выделенных рамкой.

В одном варианте осуществления fHbp, который в дальнейшем будет модифицирован петлей экзогенного пептида, может содержать или состоять из последовательности:

при этом последовательность любой петли VR2 PorA в Таблице 1 может заменить любую аминокислоту или группы аминокислот, выделенных рамко й.

В одном варианте осуществления fHbp, который в дальнейшем будет модифицирован петлей экзогенного пептида, может содержать или состоять из последовательности:

при этом последовательность любой петли VR2 PorA в Таблице 1 может заменить любую аминокислоту или группы аминокислот, выделенных рамкой.

Модифицированный fHbp может содержать последовательность, представленную в любой из SEQ ID NO: 92-109.

Модифицированный fHbp может содержать последовательность, представленную в SEQ ID NO: 92-109, при этом последовательность заменена любой последовательностью петли VR2 PorA, например, любой последовательностью петли VR2, представленной в Таблице 1.

В одном варианте осуществления модифицированный fHbp может содержать или состоять из последовательности:

(SEQ ID NO: 92, fHbp V1.1 GL316985482, PorA VR2 P1.16 в P1), или такой же последовательности, при этом последовательность заменена любой последовательностью петли VR2 PorA, например, любой последовательностью петли PorA, представленной в Таблице 1.

В одном варианте осуществления модифицированный fHbp может содержать или состоять из последовательности:

или такой же последовательности, при этом последовательность заменена любой последовательностью петли VR2 PorA, например, любой последовательностью петли PorA, представленной в Таблице 1.

В одном варианте осуществления модифицированный fHbp может содержать или состоять из последовательности:

или такой же последовательности, при этом последовательность заменена любой последовательностью петли VR2 PorA, например, любой последовательностью петли PorA, представленной в Таблице 1.

В одном варианте осуществления модифицированный fHbp может содержать или состоять из последовательности:

или такой же последовательности, при этом последовательность заменена любой последовательностью петли VR2 PorA, например, любой последовательностью петли PorA, представленной в Таблице 1.

В одном варианте осуществления модифицированный fHbp может содержать или состоять из последовательности:

или такой же последовательности, при этом последовательность YYTKDTNNNLTLVP (SEQ ID NO: 68) заменена любой последовательностью петли VR2 PorA, например, любой последовательностью петли PorA, представленной в Таблице 1.

В одном варианте осуществления модифицированный fHbp может содержать или состоять из последовательности:

или такой же последовательности, при этом последовательность заменена любой последовательностью петли VR2 PorA, например, любой последовательностью петли PorA, представленной в Таблице 1.

В одном варианте осуществления модифицированный fHbp может содержать или состоять из последовательности:

или такой же последовательности, при этом последовательность заменена любой последовательностью петли VR2 PorA, например, любой последовательностью петли PorA, представленной в Таблице 1.

В одном варианте осуществления модифицированный fHbp может содержать или состоять из последовательности:

или такой же последовательности, при этом последовательность заменена последовательностью любой петли VR2 PorA, например, любой последовательностью петли PorA, обеспеченной в Таблице 1.

В одном варианте осуществления модифицированный fHbp может содержать или состоять из последовательности:

или такой же последовательности, при этом последовательность заменена любой последовательностью петли VR2 PorA, например, любой последовательностью петли PorA, представленной в Таблице 1.

В одном варианте осуществления модифицированный fHbp может содержать или состоять из последовательности:

или такой же последовательности, при этом последовательность заменена любой последовательностью петли VR2 PorA, например, любой последовательностью петли PorA, представленной в Таблице 1.

В одном варианте осуществления модифицированный fHbp может содержать или состоять из последовательности:

или такой же последовательности, при этом последовательность заменена любой последовательностью петли VR2 PorA, например, любой последовательностью петли PorA, представленной в Таблице 1.

В одном варианте осуществления модифицированный fHbp может содержать или состоять из последовательности:

или такой же последовательности, при этом последовательность заменена любой последовательностью петли VR2 PorA, например, любой последовательностью петли PorA, представленной в Таблице 1.

В одном варианте осуществления модифицированный fHbp может содержать или состоять из последовательности:

или такой же последовательности, при этом последовательность заменена любой последовательностью петли VR2 PorA, например, любой последовательностью петли PorA, представленной в Таблице 1.

В одном варианте осуществления модифицированный fHbp может содержать или состоять из последовательности:

или такой же последовательности, при этом последовательность заменена любой последовательностью петли VR2 PorA, например, любой последовательностью петли PorA, представленной в Таблице 1.

В одном варианте осуществления модифицированный fHbp может содержать или состоять из последовательности:

или такой же последовательности, при этом последовательность заменена любой последовательностью петли VR2 PorA, например, любой последовательностью петли PorA, обеспеченной в Таблице 1.

В одном варианте осуществления модифицированный fHbp может содержать или состоять из последовательности:

или такой же последовательности, при этом последовательность заменена любой последовательностью петли VR2 PorA, например, любой последовательностью петли PorA, представленной в Таблице 1.

В одном варианте осуществления модифицированный fHbp может содержать или состоять из последовательности:

или такой же последовательности, при этом последовательность заменена любой последовательностью петли VR2 PorA, например, любой последовательностью петли PorA, представленной в Таблице 1.

В одном варианте осуществления модифицированный fHbp может содержать или состоять из последовательности:

или такой же последовательности, при этом последовательность заменена любой последовательностью петли VR2 PorA, например, любой последовательностью петли PorA, представленной в Таблице 1.

Специалисту будет понятно, что одна, две, три или четыре, или более аминокислотных замен, делеций или добавлений может быть сделано в модифицированном fHbp согласно изобретению в настоящем документе без значительного удаления его иммуногенной функции или нарушения стабильности. Замены могут быть сделаны для сходных аминокислотных остатков, например, имеющих сходную молекулярную массу, заряд, гидрофобность или фрагменты, или синтетических аналогов. Такие модификации рассматриваются как часть изобретения. В одном варианте осуществления модифицированный fHbp может иметь по меньшей мере 75% идентичности с любым модифицированным fHbp, описанным в настоящем документе. В одном варианте осуществления модифицированный fHbp может иметь по меньшей мере 80% идентичности с любым модифицированным fHbp, описанным в настоящем документе. В одном варианте осуществления модифицированный fHbp может иметь по меньшей мере 85% идентичности с любым модифицированным fHbp, описанным в настоящем документе. В одном варианте осуществления модифицированный fHbp может иметь по меньшей мере 90% идентичности с любым модифицированным fHbp, описанным в настоящем документе. В одном варианте осуществления модифицированный fHbp может иметь по меньшей мере 95% идентичности с любым модифицированным fHbp, описанным в настоящем документе. В одном варианте осуществления модифицированный fHbp может иметь по меньшей мере 98% идентичности с любым модифицированным fHbp, описанным в настоящем документе. В одном варианте осуществления модифицированный fHbp может иметь по меньшей мере 99% идентичности с любым модифицированным fHbp, описанным в настоящем документе. В одном варианте осуществления модифицированный fHbp может иметь по меньшей мере 99,5% идентичности с любым модифицированным fHbp, описанным в настоящем документе.

В соответствии с другим аспектом изобретения обеспечена нуклеиновая кислота, кодирующая в основном или по меньшей мере модифицированный fHbp в соответствии с изобретением в настоящем документе.

Нуклеиновая кислота может содержаться в векторе, таком как вирусный вектор.

Согласно другом аспекту изобретения обеспечена композиция, содержащая модифицированный fHbp в соответствии с изобретением в настоящем документе.

Композиция может содержать две или более различных молекулы модифицированного fHbp (например, его различные формы/виды) в соответствии с изобретением в настоящем документе. Например, композиция может содержать два или более различных вариантов модифицированного fHbp в соответствии с изобретением. Например, композиция может содержать варианты v1 и v2 fHbp. Композиция может содержать варианты v2 и v3 fHbp. В другом варианте осуществления композиция содержит по меньшей мере вариант v2 fHbp.

Согласно другому аспекту изобретения предлагается композиция, содержащая нуклеиновую кислоту в соответствии с изобретением в настоящем документе.

Композиция может содержать фармацевтически приемлемый носитель. Композиция может, кроме того, содержать адъювант.

Согласно следующему аспекту изобретения предлагается модифицированный fHbp, нуклеиновая кислота или композиция в соответствии с изобретением для применения в качестве лекарственного средства.

Согласно следующему аспекту изобретения предлагается модифицированный fHbp, нуклеиновая кислота или композиция в соответствии с изобретением для применения в лечении или предупреждении патогенной инфекции или колонизации у субъекта.

Согласно следующему аспекту изобретения предлагается способ лечения или предупреждения возникновения патогенной инфекции или колонизации у субъекта, включающий введение субъекту модифицированного fHbp, нуклеиновой кислоты или композиции в соответствии с изобретением.

Согласно следующему аспекту изобретения предлагается способ вакцинации, включающий введение субъекту модифицированного fHbp, нуклеиновой кислоты или композиции в соответствии с изобретением.

Введение может быть осуществлено в терапевтически эффективном количестве. Специалист сможет определить подходящую дозировку и частоту введения.

Субъект может представлять собой млекопитающее, например, человека.

Инфекция может представлять собой бактериальную инфекцию. Например, инфекция может представлять собой менингит, такой как Neisseria meningitidis или Neisseria gonorrhoeae.

Согласно следующему аспекту изобретения предлагается единичный белок, мультивалентная вакцина, содержащая модифицированный белок, связывающий фактор Н (fHbp) в соответствии с изобретением.

Вакцину можно применять в качестве профилактической или терапевтической вакцины, направленной на. Nm.

Применение можно осуществлять с фармацевтически приемлемым носителем. Дополнительно или альтернативно, применение можно осуществлять с адъювантом. Подходящие фармацевтически приемлемые носители и адъюванты хорошо известны специалисту в данной области.

Согласно следующему аспекту изобретения предлагается комбинация модифицированного fHbp в соответствии с изобретением и по меньшей мере одной другой профилактически или терапевтически активной молекулы.

По меньшей мере одна другая профилактически или терапевтически активная молекула может содержать вакцину или антиген, отличный от модифицированного fHbp в соответствии с изобретением в настоящем документе. Комбинацию можно применять в комбинированной вакцине или терапии. Например, комбинацию можно применять в комбинированной вакцине или терапии, где используется другой менингококковый антиген.

В одном варианте осуществления по меньшей мере одна другая профилактически или терапевтически активная молекула представляет собой моновалентную вакцину, содержащую конъюгат белок : капсульный полисахарид. Моновалентная вакцина, содержащая конъюгат белок : капсульный полисахарид, может содержать любую капсулу серогруппы С или А с обезвреженными бактериальными токсинами, бивалентные вакцины (с капсульным полисахаридом серогруппы С и А, конъюгированным с обезвреженными бактериальными токсинами), квадри-(серогруппы А, С, Y, W) или пента- (А, С, Y, W, X) валентные конъюгированные вакцины.

Альтернативно, по меньшей мере одна другая профилактически или терапевтически активная молекула может представлять собой конъюгированную вакцину, при этом антиген(ы), содержащий каркас fHbp, несущий петли экзогенного пептида (такие как петли PorA), может быть включен в качестве молекулы белка-носителя в конъюгированную вакцину. Конъюгированная вакцина может содержать капсульные полисахариды любой серогруппы из штаммов А, С, Y, W или X индивидуально или в комбинации.

Согласно другому аспекту изобретения предлагается применение белка, связывающего фактор Н (fHbp) в качестве каркаса для дисплея эпитопа.

Применение в качестве каркаса для дисплея эпитопа может включать применение белка, связывающего фактор Н (fHbp), содержащего любую из модификаций, описанных в настоящем документе.

В дополнение к их потенциальному применению в качестве вакцин, композиции или модифицированные fHbp согласно изобретению могут быть полезными в качестве диагностических реагентов и в качестве показателя иммунной компетентности вакцины.

Термин «иммуногенный» означает, что молекула способна вызывать иммунный ответ в организме человека или животного. Иммунный ответ может быть защитным.

Иммунный ответ, вызванный модифицированным fHbp согласно изобретению, может влиять на способность Neisseria meningitidis (Nm) инфицировать субъекта, иммунизированного модифицированным fHbp согласно изобретению. Предпочтительно способность Nm инфицировать субъекта, иммунизированного модифицированным fHbp согласно изобретению, затруднена или предотвращена. Индуцируемый иммунный ответ может узнавать и разрушать Nm. Альтернативно или дополнительно, индуцированный иммунный ответ может затруднять или предотвращать репликацию Nm. Альтернативно или дополнительно, индуцированный иммунный ответ может затруднять или предупреждать вызывание Nm заболевания у человека или животного, не относящегося к человеку.

Термин «петля пептида», используемый в настоящем документе, понимается как последовательность одноцепочечного полипептида, заякоренная на обоих концах (например, заякоренная на каркас, такой как fHbp). Термин «петля» не подразумевает или не требует какой-либо конкретной вторичной структуры, принятой полипептидом.

Термин «экзогенный», используемый в контексте «петли экзогенного пептида», означает, что петля пептида происходит из другого источника по сравнению с белком fHbp (то есть не является fHbp или его фрагментом). Однако она может происходить от такого же организма, что и fHbp. Например, модифицированный fHbp может включать fHbp N. meningitidis, модифицированный (экзогенной) пептидной петлей(петлями), происходящими из PorA N. meningitidis.

Термин «слитый белок», используемый в настоящем документе, означает полипептид, содержащий комбинацию последовательностей из различных генных продуктов или источников.

Термин «слитый белок» может быть использован взаимозаменяемо с термином «химерная молекула».

Ссылка на «идентичность» последовательности, используемую в настоящем документе, может относиться к проценту идентичности между двумя выровненными последовательностями с использованием стандартных параметров NCBI BLASTp (http://blast.ncbi.nlm.nih.gov).

Термин «выделенный», в случае применения к модифицированному fHbp согласно настоящему изобретению, означает белок: (i) кодируемый нуклеиновыми кислотами с использованием способов рекомбинантной ДНК или вирусного вектора; или (ii) синтезированный, например, способами химического синтеза; или (iii) отделенный от биологических материалов, а затем очищенный. Выделенный полипептид согласно изобретению включает белок, экспрессированный из нуклеотидной последовательности, кодирующей белок, или из рекомбинантного вектора, содержащего нуклеотидную последовательность, кодирующую белок.

Термин «защитный» означает предупреждение заболевания, уменьшенный риск возникновения, передачи и/или прогрессирования инфекционного заболевания, снижение тяжести заболевания, излечение состояния или заболевания, облегчение симптомов или снижение тяжести заболевания или симптомов заболевания.

Термин «профилактика» означает предупреждение или профилактическое лечение заболевания. Профилактика может включать уменьшенный риск возникновения, передачи и/или прогрессирования инфекции, или уменьшенную тяжесть заболевания.

Термин «лечение» означает излечение состояния или заболевания, облегчение симптомов или уменьшение тяжести заболевания или симптомов заболевания.

Специалисты в данной области поймут, что необязательные признаки одного варианта осуществления или аспекта изобретения могут быть применимы, где это уместно, к другим вариантам осуществления или аспектам изобретения.

Варианты осуществления изобретения теперь будут описаны более подробно, исключительно в качестве примера, со ссылкой на прилагаемые чертежи.

Фигура 1. Дизайн химерного fHbp:PorAs

(A) Схематическое изображение поверхности N. meningitidis, показывающее главные признаки наружной мембраны, липоолигосахарид и пили 4 типа, а также важные антигены, fHbp и PorA. Петля иммуногенного VR2 PorA выделена цветом и fHbp показан взаимодействующим с доменами 6 и 7 человеческого CFH.

(B) Структура V1 fHbp с доменами 6-7 CFH, показывающая шесть положений (Р1-5 и Р7), используемых для создания химерного fHbp:PorAs, в который встроены петли PorA. Примечание: положение 5 находится на границе между fHbp:CFH.

Фигура 2: Применение fHbp в качестве молекулярного каркаса

А) Белковая структура V1.1 fHbp (серый, ленточное представление) с шестью положениями (Р1-5 и Р7), используемыми для создания химерной fHbp:PorAs. В) Вторичная структура V1.1 fHbp (серый, стрелки представляют β-листы, прямоугольники представляют α-спирали). Локализации сайтов встраивания VR2 Р1.16 PorA указаны сплошными черными линиями, числа указывают диапазон остатков, куда могут быть встроены петли VR2 PorA (соответствуют номерам остатков в 1D). С) Анализ очищенного fHbp:PorAs с петлей VR2 Р1.16 PorA в положениях 1-5 или 7 fHbp, дикого типа (V1.1 WT) с помощью SDS-PAGE и Вестерн-блоттинга. Блоты зондировали α-V1 fHbp pAb и α-P1.16 mAb. D) Первичная последовательность (SEQ ID NO: 1) V1.1 fHbp, указывающая локализации (подчеркнуто) положений 1-5 и 7, в которые могут быть встроены петли из других белков.

Фигура 3. Характеристика химерного fHbp: Рог As

(A) Структура fHbp:PorAs, перекрывающаяся с петлей Р1.16 (черный, PDBID: 2 тра) с Fab α-Р1.16 mAb, и fHbp:PorA с петлей в положении 1, положении 3 и положении 7, демонстрирующая, что эпитоп находится в конформации, распознаваемой бактерицидным антителом.

(B) Стабильность N-концевых (NT) и С-концевых (СТ) бета-цилиндров fHbp с помощью анализа методом дифференциальной сканирующей калориметрии, выполненного с использованием температурного градиента 20-120°С. Температура плавления показана для N-концевых (NT_TM) и С-концевых (СТ_ТМ) цилиндров fHbp. Связывание fHbp:PorAs с фактором комплемента Н (CFH) и анализ SPR с использованием mAbs (моноклональных антител) fHbp и химерного fHbp:PorAs, связанных с чипом СМ5 BIAcore. CFH (fH67) протекал над поверхностью при разбавлении в интервале 0,5-32 нМ, и рассчитывали константу диссоциации (K_D); константы диссоциации (K_D) для fHbp:PorAs подтверждают отсутствие CFH-связывания fHbp с петлей в положении 5, которая сталкивается с границей раздела fHbp:CFH (фигура 2A). NB=отсутствие связывания.

Фигура 4. Репертуар антигенов, выбранных для химерного fHbp:PorAs (А, В) Частота вариантов fHbp и подтипов VR2 PorA, соответственно, в изолятах N. meningitidis в Великобритании между 2010-2015 годами из библиотеки Meningitis Research Foundation Genome Library (http://www.meningitis.org/research/genome) показана в виде круговых диаграмм (выше) и в таблицах (ниже) с частотой специфических fHbps и Рог As.

Примечание: На долю V2 fHbp приходится 38,9% изолятов.

Точные совпадения последовательностей для:

- Вакцины Pfizer, 3,02%

- Bexsero fHbp (V1.1) или PorA (P1. 16), 15,86%

Химерного fHbp: Рог As, fHbp или PorA, 72%

(23,5% с fHbp и PorA)

Фигура 5. Распознавание антигенов Neisseria Meningitidis fHbp (А) и PorA (В) мышиной иммунной сывороткой. Лизаты целых клеток из штаммов Н44/76 (WT), Н44/67 ΔfHbp и Н44/67 ΔPorA Neisseria Meningitidis разделяли с помощью SDS-PAGE, переносили на PVDF-мембрану и зондировали с использованием мышиной иммунной сыворотки. Мышиную иммунную сыворотку получали путем иммунизации мышей BalbC три раза 20 мкг очищенных химер fHbp-PorA с петлями VR2 в Р1, Р2, Р4, Р5 или Р7.

Фигура 6. Стабилизация V2 fHbp: конструирование и иммуногенность fHbp:PorAs

(A) Стабилизация V2.22 и V2.25 V2 fHbp шестью (Мб) или двумя (М2) аминокислотными заменами. Анализ методом DSC проводили с 20 мкМ белка, используя температурный градиент 20-120°С. Температуру плавления регистрировали для N-концевых (NTtm) и С-концевых цилиндров fHbp.

(B) Петли PorA химерного fHbp:PorAs распознаются соответствующими моноклональными антителами (mAb). Петли VR2 PorA из Р1.2, Р1.4, Р1.9, Р1.14 и Р1.15 встраивали в положение 1 V2,25 fHbp. SDS-PAGE и Вестерн-блот-анализ очищенного V2.25 fHbp дикого типа и химерного V3.45 fHbp-PorA. Вестерн-блоты зондировали pAbs V2.25 fHbp и специфичными для петли mAbs PorA (NIBSC). Связывание CFH детектировали с помощью Вестерн-блот-анализа с нормальной человеческой сывороткой и pAbs CFH.

Фигура 7. Химерный fHbp:PorAs вызывает защитный иммунитет. Мышей иммунизировали химерным fHbp:PorA, то есть Р(1)(1)(13), Р(2)(1)(13) и Р(3)(1)(13) трижды, и измеряли бактерицидную активность сыворотки (SBA) против указанных штаммов; показатель SBA>8 считается защитным. Отсутствие PorA-направленной SBA (то есть SBA 0, против мутанта fHbp) с петлей VR2 в положении 3, то есть Р(3)(1)(13), по-видимому, обусловлено тем, что петля не выступает из цилиндра fHbp так далеко, как в положении 1.

Фигура 8. Частота вариантов VR2 PorA (А) и fHbp (В) в штаммах N. meningitidis серогруппы В (n=243), выделенных в 2016 году в Великобритании. Данные загружены из Meningococcal Research Foundation, 27 июня 2017 года. Прочее: остальные аллели, которые встречаются в <4 изолятах. (С) Анализ рекомбинантных химерных антигенов с помощью SDS-PAGE и Вестерн-блоттинга. Иммуноблоты зондировали mAbs VR2 α-PorA: P1.4, P1.9, P1.14 и P1.15. (D) Детекция PorA в панели изолятов N. meningitidis серогруппы В с помощью мышиной поликлональной антисыворотки из химерных антигенов fHbp^V1.4:PorA^{151/P1.1.10_1}, fHbp^V1.4:PorA^151/P1.14 и fHbpV^1.4:PorA^151/P1.15, fHbp^V3.45:Por^158/P1.4 и fHbp^V3.45:PorA^158/P1.9.

Пример 1

Было показано, что иммуногенные пептиды могут быть введены в белок, связывающий фактор Н (fHbp), и пептиды презентированы иммунной системе и способны вызывать защитные ответы (Фиг. 5 и 7). Пептиды использовали из интегрального мембранного белка PorA для подтверждения в принципе этого подхода. PorA трудно экспрессировать из-за нерастворимости его трансмембранных доменов. Иммуногенные части молекулы расположены во внеклеточных петлях, которые подвергаются воздействию иммунной системы. Однако эффективные иммунные ответы генерируются только против петель, находящихся в их правильной конформации; линейные пептидные последовательности не вызывают функциональных иммунных ответов. Зная структуру fHbp, можно ввести петли PorA в fHbp и генерировать соответствующие ответы против PorA. Это приводит к образованию химерной молекулы, основанной на последовательностях fHbp и PorA в определенных сайтах для создания химерной молекулы. Этот подход может быть использован для любого другого иммуногенного интегрального белка наружной мембраны.

Было показано, что вероятной причиной исключения v2 fHbp из вакцин является внутренняя нестабильность его N-концевого β-цилиндра: i) было невозможно определить атомную структуру этой части v2 fHbp¹⁰, ii) v2 fHbp является чувствительным к расщеплению протеазой (масс-спектрометрия показывает, что расщепленные участки расположены в N-концевом β-цилиндре, не показано), и iii) дифференциальная сканирующая калориметрия подтверждает, что нестабильность лежит в этой области v2 fHbp¹⁰.

Были успешно генерированы стабильные v2 fHbps. Был проведен мутагенез, воздействующий на N-концевой цилиндр, с заменой аминокислот (a.a.s) по отдельности или в комбинации. Замена шести аминокислот в М6 fHbp стабилизирует v2 fHbp (т.е. 6 замен в 130 аминокислотах этого β-цилиндра, <0,5%) (см. WO 2014030003 для подробной информации, касающейся мутаций). Это следует из дифференциальной сканирующей калориметрии (DSC) и чувствительности к расщеплению протеазой (см. WO 2014030003 для получения подробной информации). Боковые цепи измененных остатков способствуют взаимодействиям между β-листами N-концевого цилиндра, так как они ориентированы по направлению к центру молекулы; изменения не влияют на иммуногенность белка, как ожидалось (отсутствует различие в SBA, или уровнях IgG α-fHbp, не показано).

Химерный v1.1 fHbp создавали путем введения VR2 длиной 13 аминокислот из Р1.16 PorA, который вызывает SBA у реципиентов OMV-вакцин¹⁶. В то время как интегральные мембранные белки содержат гидрофобные (то есть нерастворимые) β-цилиндры, fHbp содержит два цилиндра, которые могут быть экспрессированы и очищены до высоких степеней очистки. Последовательность VR2 вводили в шесть различных положений fHbp (Фиг. 2 В); эти сайты выбирали на основе сходного расстояния между фланкирующими β-листами в PorA²² и fHbp для уменьшения вероятности того, что встраивание будет разрушать всю структуру fHbp (Фиг. 2 В для предсказанного эффекта вставок). Оценивали иммуногенность трех fHbp со вставкой VR2 в другой fHbp (Фиг. 2 В). Все белки вызывали ответы антител, направленных против fHbp и PorA (Фиг. 5 и 7), и важным является то, что оба белка, которые были протестированы (с VR2 в сайте 1 или 2), независимо индуцируют SBA против fHbp и PorA (SBA для Nm Н44/76, 512; и для Nm H44/76αfHbp, 256 для обоих fHbps). Это обеспечивает доказательство в принципе этого подхода.

FHbp в качестве каркаса для мультивалентных вакцин

Нефункциональные fHbp в качестве вакцин. Функция fHbp не была известна, когда начинали клинические испытания fHbp-содержащих вакцин; fHbp демонстрирует высокоаффинные взаимодействия с fH (константа диссоциации <5 нМ) независимо от группы вариантов, при этом fH занимает большую область fHbp⁵. Это взаимодействие может ухудшить применение fHbp в качестве вакцины путем i) блокирования иммуногенных эпитопов и препятствования образованию антител, которые могут конкурировать с fH, и ii) снижения активации комплемента (посредством рекрутинга fH) и, следовательно, активации В-клеток на участке индукции иммунного ответа. Использование нефункциональных fHbps решает эти проблемы. Были идентифицированы ключевые аминокислоты v1, 2 и 3 fHbps, которые необходимы для взаимодействий¹⁰ с fH, и было показано, что модификация отдельных аминокислот v1, v2 и v3 fHbps, которые предотвращают связывание fH, сохраняет или даже повышает иммуногенность этого важного вакцинного антигена^10,23.

Для создания и оценки монобелковых, мультивалентных вакцин-кандидатов:

Защитные эпитопы PorA из преобладающих сероподтипов (которые определяются их последовательностью PorA) Nm¹⁵ вводили в белки v1, стабильный v2 и v3; определяли их стабильность и узнавание mAbs PorA и fHbp. Последовательности PorA выбирали таким образом, чтобы охватить разнообразие изолятов в Великобритании, но могут быть использованы данные из любой коллекции менингококковых штаммов.

Способы исследования

Генерирование и характеристика вакцин-кандидатов. Рекомбинантные fHbps конструировали и экспрессировали в Е coli, используя стандартные плазмидные векторы; белки очищали путем аффинной очистки с использованием полигистидиновой метки в белке, анионного обмена и гель-фильтрации¹⁰ химерных v1, V2 и V3 fHbps, так как они либо присутствуют в существующих вакцинах (v1.1 и 3.45), либо в связи с опытом с белком (v2), или из-за их распространенности в штаммах Nm. Петли PorA вводили в fHbp стандартными способами, и было показано, что слитые белки связываются с моноклональными антителами (mAb) против общих сероподтипов PorA. Эту стратегию использовали для сравнения нативных и сконструированных последовательностей, и выполнения тонкого картирования антигенных и fH-связывающих кандидатов. DSC проводили с использованием VP Capillary DSC (GEHealthcare), и SPR с помощью Biacore 3000 (GE Healthcare) или ProteOn XPR36 (BioRad), как описано ранее¹⁰.

Список использованной литературы включен в настоящий документ путем ссылки.

Пример 2 - Химерные антигены, содержащие расширенный диапазон петель VR2 PorA, генерируют иммунные ответы

Для тестирования возможности адаптировать химерные антигены fHbp:PorA генерировали несколько химерных антигенов, состоящих из различных комбинаций fHbp и VR2 PorA. Полные данные по геному менингококка, имеющиеся для выделенных в Великобритании штаммов (библиотека Meningitis Research Foundation Meningococcus Genome Library, разработанная Public health England, the Wellcome Trust Sanger Institute и University of Oxford в качестве совместной работы), позволяют сконструировать химерные антигены, имеющие точные совпадения последовательностей с наиболее распространенными антигенами в заданном регионе. В 2016 году наиболее распространенными VR2 PorA в изолятах N. meningitidis серогруппы В являлись Р1.4 (15,2%), Р1.14 (15,2%), Р1.9 (12,8%), Р1.16 (11,1%) и Р1.15 (5,8%, Фигура 8 В). P1.10_1 VR2 присутствовал в 1,6% изолятов серогруппы В. Наиболее распространенными fHbp варианта 1, варианта 2 и варианта 3 являлись V1.4, V2.19 и V3.45, присутствующие в 21,8%, 5,3% и 4,9% изолятов N. meningitidis серогруппы В, соответственно (Фигура 8С). Было сконструировано пять различных химерных антигенов, в которых VR2 PorA был встроен в положение 151 (V1.4) или положение 158 (V3.45, Фигура 8А). После экспрессии и очистки химерного антигена Вестерн-блот-анализы подтвердили, что все эти химерные антигены удерживали эпитопы, распознаваемые их родственными α-VR2 mAb и α-fHbp pAbs (Фигура 8D). Термическую стабильность V1.1, V1.4 и V3.45 fHbps дикого типа и химерных антигенов определяли методом дифференциальной сканирующей калориметрии (DSC, Таблица 3).

Для изучения способности этих химерных антигенов fHbp:PorA вызывать иммунные ответы, группы мышей CD1 иммунизировали каждым химерным антигеном/алюминий-содержащим адъювантом; антисыворотку, полученную после иммунизации, объединяли. Для оценки полученных иммунных ответов PorA проводили вестерн-блоттинг с использованием объединенной антисыворотки и панели изолятов N. meningitidis серогруппы В. На Фигуре 8Е показано, что все химерные антигены вызывали образование антител α-PorA, которые распознавали их родственный VR2 PorA. Для оценки ответов SBA α-PorA проводили сывороточный бактерицидный анализ с использованием объединенной антисыворотки, содержащей химерный антиген/алюминий - содержащий адъювант, и штаммов N. meningitidis серогруппы В с несовпадающими вариантами fHbp для устранения перекрестной защиты fHbp. Титры изменялись в диапазоне от >20 до >1280 и в >8 раз превышали пороговое значение для принятой корреляции защитного иммунитета против N. meningitidis (Andrews, N. et al. Clin Diagn Lab Immunol 10, 780-786 (2003)) (Таблица 4).

Температура плавления, T_m

Титры SBA α-PorA генерировали с использованием объединенной антисыворотки, содержащей химерный антиген/алюминий - содержащий адъювант, и изолятов N. meningitidis серогруппы В с несовпадающими вариантами fHbp.* fHbp усеченный в остатке 242.

fHbp^v1,4:PorA^151/P115 не тестировали, так как он требовался для создания штаммов ΔfHbp, так как fHbp в штаммах с Р1.15 VR2 PorA не является несовпадающим.

--->

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

<110> ОКСФОРД ЮНИВЕРСИТИ ИННОВЭЙШН ЛИМИТЕД

<120> Модифицированный белок, связывающий фактор Н

<130> JA69120P.WOP

<150> GB1614687.0

<151> 2016-08-31

<160> 109

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 255

<212> БЕЛОК

<213> Neisseria meningitidis

<400> 1

Cys Ser Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile Gly Ala Gly Leu

1 5 10 15

Ala Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp Lys Gly Leu Gln

20 25 30

Ser Leu Thr Leu Asp Gln Ser Val Arg Lys Asn Glu Lys Leu Lys Leu

35 40 45

Ala Ala Gln Gly Ala Glu Lys Thr Tyr Gly Asn Gly Asp Ser Leu Asn

50 55 60

Thr Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys Val Ser Arg Phe Asp Phe Ile Arg

65 70 75 80

Gln Ile Glu Val Asp Gly Gln Leu Ile Thr Leu Glu Ser Gly Glu Phe

85 90 95

Gln Val Tyr Lys Gln Ser His Ser Ala Leu Thr Ala Phe Gln Thr Glu

100 105 110

Gln Ile Gln Asp Ser Glu His Ser Gly Lys Met Val Ala Lys Arg Gln

115 120 125

Phe Arg Ile Gly Asp Ile Ala Gly Glu His Thr Ser Phe Asp Lys Leu

130 135 140

Pro Glu Gly Gly Arg Ala Thr Tyr Arg Gly Thr Ala Phe Gly Ser Asp

145 150 155 160

Asp Ala Gly Gly Lys Leu Thr Tyr Thr Ile Asp Phe Ala Ala Lys Gln

165 170 175

Gly Asn Gly Lys Ile Glu His Leu Lys Ser Pro Glu Leu Asn Val Asp

180 185 190

Leu Ala Ala Ala Asp Ile Lys Pro Asp Gly Lys Arg His Ala Val Ile

195 200 205

Ser Gly Ser Val Leu Tyr Asn Gln Ala Glu Lys Gly Ser Tyr Ser Leu

210 215 220

Gly Ile Phe Gly Gly Lys Ala Gln Glu Val Ala Gly Ser Ala Glu Val

225 230 235 240

Lys Thr Val Asn Gly Ile Arg His Ile Gly Leu Ala Ala Lys Gln

245 250 255

<210> 2

<211> 255

<212> БЕЛОК

<213> Neisseria meningitidis

<400> 2

Cys Ser Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile Gly Ala Gly Leu

1 5 10 15

Ala Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp Lys Ser Leu Gln

20 25 30

Ser Leu Thr Leu Asp Gln Ser Val Arg Lys Asn Glu Lys Leu Lys Leu

35 40 45

Ala Ala Gln Gly Ala Glu Lys Thr Tyr Gly Asn Gly Asp Ser Leu Asn

50 55 60

Thr Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys Val Ser Arg Phe Asp Phe Ile Arg

65 70 75 80

Gln Ile Glu Val Asp Gly Gln Leu Ile Thr Leu Glu Ser Gly Glu Phe

85 90 95

Gln Val Tyr Lys Gln Ser His Ser Ala Leu Thr Ala Leu Gln Thr Glu

100 105 110

Gln Val Gln Asp Ser Glu His Ser Gly Lys Met Val Ala Lys Arg Gln

115 120 125

Phe Arg Ile Gly Asp Ile Ala Gly Glu His Thr Ser Phe Asp Lys Leu

130 135 140

Pro Glu Gly Gly Arg Ala Thr Tyr Arg Gly Thr Ala Phe Gly Ser Asp

145 150 155 160

Asp Ala Ser Gly Lys Leu Thr Tyr Thr Ile Asp Phe Ala Ala Lys Gln

165 170 175

Gly His Gly Lys Ile Glu His Leu Lys Ser Pro Glu Leu Asn Val Asp

180 185 190

Leu Ala Ala Ser Asp Ile Lys Pro Asp Lys Lys Arg His Ala Val Ile

195 200 205

Ser Gly Ser Val Leu Tyr Asn Gln Ala Glu Lys Gly Ser Tyr Ser Leu

210 215 220

Gly Ile Phe Gly Gly Gln Ala Gln Glu Val Ala Gly Ser Ala Glu Val

225 230 235 240

Glu Thr Ala Asn Gly Ile Arg His Ile Gly Leu Ala Ala Lys Gln

245 250 255

<210> 3

<211> 255

<212> БЕЛОК

<213> Neisseria meningitidis

<400> 3

Cys Ser Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile Gly Ala Gly Leu

1 5 10 15

Ala Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp Lys Gly Leu Gln

20 25 30

Ser Leu Thr Leu Asp Gln Ser Val Arg Lys Asn Glu Lys Leu Lys Leu

35 40 45

Ala Ala Gln Gly Ala Glu Lys Thr Tyr Gly Asn Gly Asp Ser Leu Asn

50 55 60

Thr Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys Val Ser Arg Phe Asp Phe Ile Arg

65 70 75 80

Gln Ile Glu Val Asp Gly Lys Leu Ile Thr Leu Glu Ser Gly Glu Phe

85 90 95

Gln Val Tyr Lys Gln Ser His Ser Ala Leu Thr Ala Leu Gln Thr Glu

100 105 110

Gln Val Gln Asp Ser Glu Asp Ser Gly Lys Met Val Ala Lys Arg Gln

115 120 125

Phe Arg Ile Gly Asp Ile Ala Gly Glu His Thr Ser Phe Asp Lys Leu

130 135 140

Pro Lys Gly Gly Ser Ala Thr Tyr Arg Gly Thr Ala Phe Gly Ser Asp

145 150 155 160

Asp Ala Gly Gly Lys Leu Thr Tyr Thr Ile Asp Phe Ala Ala Lys Gln

165 170 175

Gly His Gly Lys Ile Glu His Leu Lys Ser Pro Glu Leu Asn Val Glu

180 185 190

Leu Ala Thr Ala Tyr Ile Lys Pro Asp Glu Lys Arg His Ala Val Ile

195 200 205

Ser Gly Ser Val Leu Tyr Asn Gln Asp Glu Lys Gly Ser Tyr Ser Leu

210 215 220

Gly Ile Phe Gly Gly Gln Ala Gln Glu Val Ala Gly Ser Ala Glu Val

225 230 235 240

Glu Thr Ala Asn Gly Ile His His Ile Gly Leu Ala Ala Lys Gln

245 250 255

<210> 4

<211> 255

<212> БЕЛОК

<213> Neisseria meningitidis

<400> 4

Cys Ser Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile Gly Ala Gly Leu

1 5 10 15

Ala Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp Lys Ser Leu Gln

20 25 30

Ser Leu Thr Leu Asp Gln Ser Val Arg Lys Asn Glu Lys Leu Lys Leu

35 40 45

Ala Ala Gln Gly Ala Glu Lys Thr Tyr Gly Asn Gly Asp Ser Leu Asn

50 55 60

Thr Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys Val Ser Arg Phe Asp Phe Ile Arg

65 70 75 80

Gln Ile Glu Val Asp Gly Gln Leu Ile Thr Leu Glu Ser Gly Glu Phe

85 90 95

Gln Val Tyr Lys Gln Ser His Ser Ala Leu Thr Ala Leu Gln Thr Glu

100 105 110

Gln Glu Gln Asp Pro Glu His Ser Gly Lys Met Val Ala Lys Arg Arg

115 120 125

Phe Lys Ile Gly Asp Ile Ala Gly Glu His Thr Ser Phe Asp Lys Leu

130 135 140

Pro Lys Asp Val Met Ala Thr Tyr Arg Gly Thr Ala Phe Gly Ser Asp

145 150 155 160

Asp Ala Gly Gly Lys Leu Thr Tyr Thr Ile Asp Phe Ala Ala Lys Gln

165 170 175

Gly His Gly Lys Ile Glu His Leu Lys Ser Pro Glu Leu Asn Val Glu

180 185 190

Leu Ala Thr Ala Tyr Ile Lys Pro Asp Glu Lys His His Ala Val Ile

195 200 205

Ser Gly Ser Val Leu Tyr Asn Gln Asp Glu Lys Gly Ser Tyr Ser Leu

210 215 220

Gly Ile Phe Gly Gly Gln Ala Gln Glu Val Ala Gly Ser Ala Glu Val

225 230 235 240

Glu Thr Ala Asn Gly Ile His His Ile Gly Leu Ala Ala Lys Gln

245 250 255

<210> 5

<211> 263

<212> БЕЛОК

<213> Neisseria meningitidis

<400> 5

Cys Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp

1 5 10 15

Ile Gly Ala Gly Leu Ala Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys

20 25 30

Asp Lys Gly Leu Lys Ser Leu Thr Leu Glu Asp Ser Ile Ser Gln Asn

35 40 45

Gly Thr Leu Thr Leu Ser Ala Gln Gly Ala Glu Arg Thr Phe Lys Ala

50 55 60

Gly Asp Lys Asp Asn Ser Leu Asn Thr Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys

65 70 75 80

Ile Ser Arg Phe Asp Phe Ile Arg Gln Ile Glu Val Asp Gly Gln Leu

85 90 95

Ile Thr Leu Glu Ser Gly Glu Phe Gln Val Tyr Lys Gln Ser His Ser

100 105 110

Ala Leu Thr Ala Leu Gln Thr Glu Gln Val Gln Asp Ser Glu His Ser

115 120 125

Gly Lys Met Val Ala Lys Arg Gln Phe Arg Ile Gly Asp Ile Val Gly

130 135 140

Glu His Thr Ser Phe Gly Lys Leu Pro Lys Asp Val Met Ala Thr Tyr

145 150 155 160

Arg Gly Thr Ala Phe Gly Ser Asp Asp Ala Gly Gly Lys Leu Thr Tyr

165 170 175

Thr Ile Asp Phe Ala Ala Lys Gln Gly His Gly Lys Ile Glu His Leu

180 185 190

Lys Ser Pro Glu Leu Asn Val Asp Leu Ala Ala Ala Asp Ile Lys Pro

195 200 205

Asp Glu Lys His His Ala Val Ile Ser Gly Ser Val Leu Tyr Asn Gln

210 215 220

Ala Glu Lys Gly Ser Tyr Ser Leu Gly Ile Phe Gly Gly Gln Ala Gln

225 230 235 240

Glu Val Ala Gly Ser Ala Glu Val Glu Thr Ala Asn Gly Ile Arg His

245 250 255

Ile Gly Leu Ala Ala Lys Gln

260

<210> 6

<211> 260

<212> БЕЛОК

<213> Neisseria meningitidis

<400> 6

Cys Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Val Thr Ala Asp

1 5 10 15

Ile Gly Thr Gly Leu Ala Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys

20 25 30

Asp Lys Gly Leu Lys Ser Leu Thr Leu Glu Asp Ser Ile Ser Gln Asn

35 40 45

Gly Thr Leu Thr Leu Ser Ala Gln Gly Ala Glu Lys Thr Tyr Gly Asn

50 55 60

Gly Asp Ser Leu Asn Thr Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys Val Ser Arg

65 70 75 80

Phe Asp Phe Ile Arg Gln Ile Glu Val Asp Gly Gln Leu Ile Thr Leu

85 90 95

Glu Ser Gly Glu Phe Gln Val Tyr Lys Gln Ser His Ser Ala Leu Thr

100 105 110

Ala Leu Gln Thr Glu Gln Glu Gln Asp Pro Glu His Ser Glu Lys Met

115 120 125

Val Ala Lys Arg Arg Phe Arg Ile Gly Asp Ile Ala Gly Glu His Thr

130 135 140

Ser Phe Asp Lys Leu Pro Lys Asp Val Met Ala Thr Tyr Arg Gly Thr

145 150 155 160

Ala Phe Gly Ser Asp Asp Ala Gly Gly Lys Leu Thr Tyr Thr Ile Asp

165 170 175

Phe Ala Ala Lys Gln Gly His Gly Lys Ile Glu His Leu Lys Ser Pro

180 185 190

Glu Leu Asn Val Asp Leu Ala Val Ala Tyr Ile Lys Pro Asp Glu Lys

195 200 205

His His Ala Val Ile Ser Gly Ser Val Leu Tyr Asn Gln Asp Glu Lys

210 215 220

Gly Ser Tyr Ser Leu Gly Ile Phe Gly Glu Lys Ala Gln Glu Val Ala

225 230 235 240

Gly Ser Ala Glu Val Glu Thr Ala Asn Gly Ile His His Ile Gly Leu

245 250 255

Ala Ala Lys Gln

260

<210> 7

<211> 254

<212> БЕЛОК

<213> Neisseria meningitidis

<400> 7

Cys Ser Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile Gly Ala Gly Leu

1 5 10 15

Ala Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp Lys Ser Leu Gln

20 25 30

Ser Leu Thr Leu Asp Gln Ser Val Arg Lys Asn Glu Lys Leu Lys Leu

35 40 45

Ala Ala Gln Gly Ala Glu Lys Thr Tyr Gly Asn Gly Asp Ser Leu Asn

50 55 60

Thr Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys Val Ser Arg Phe Asp Phe Ile Arg

65 70 75 80

Gln Ile Glu Val Asp Gly Gln Leu Ile Thr Leu Glu Ser Gly Glu Phe

85 90 95

Gln Ile Tyr Lys Gln Asp His Ser Ala Val Val Ala Leu Gln Ile Glu

100 105 110

Lys Ile Asn Asn Pro Asp Lys Ile Asp Ser Leu Ile Asn Gln Arg Ser

115 120 125

Phe Leu Val Ser Gly Leu Gly Gly Glu His Thr Ala Phe Asn Gln Leu

130 135 140

Pro Asp Gly Lys Ala Glu Tyr His Gly Lys Ala Phe Ser Ser Asp Asp

145 150 155 160

Ala Gly Gly Lys Leu Thr Tyr Thr Ile Asp Phe Ala Ala Lys Gln Gly

165 170 175

His Gly Lys Ile Glu His Leu Lys Thr Pro Glu Gln Asn Val Glu Leu

180 185 190

Ala Ala Ala Glu Leu Lys Ala Asp Glu Lys Ser His Ala Val Ile Leu

195 200 205

Gly Asp Thr Arg Tyr Gly Ser Glu Glu Lys Gly Thr Tyr His Leu Ala

210 215 220

Leu Phe Gly Asp Arg Ala Gln Glu Ile Ala Gly Ser Ala Thr Val Lys

225 230 235 240

Ile Gly Glu Lys Val His Glu Ile Gly Ile Ala Gly Lys Gln

245 250

<210> 8

<211> 254

<212> БЕЛОК

<213> Neisseria meningitidis

<400> 8

Cys Ser Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile Gly Ala Gly Leu

1 5 10 15

Ala Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp Lys Ser Leu Gln

20 25 30

Ser Leu Thr Leu Asp Gln Ser Val Arg Lys Asn Glu Lys Leu Lys Leu

35 40 45

Ala Ala Gln Gly Ala Glu Lys Thr Tyr Gly Asn Gly Asp Ser Leu Asn

50 55 60

Thr Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys Val Ser Arg Phe Asp Phe Ile Arg

65 70 75 80

Gln Ile Glu Val Asp Gly Gln Leu Ile Thr Leu Glu Ser Gly Glu Phe

85 90 95

Gln Ile Tyr Lys Gln Asp His Ser Ala Val Val Ala Leu Gln Ile Glu

100 105 110

Lys Ile Asn Asn Pro Asp Lys Ile Asp Ser Leu Ile Asn Gln Arg Ser

115 120 125

Phe Leu Val Ser Gly Leu Gly Gly Glu His Thr Ala Phe Asn Gln Leu

130 135 140

Pro Ser Gly Lys Ala Glu Tyr His Gly Lys Ala Phe Ser Ser Asp Asp

145 150 155 160

Ala Gly Gly Lys Leu Thr Tyr Thr Ile Asp Phe Ala Ala Lys Gln Gly

165 170 175

His Gly Lys Ile Glu His Leu Lys Thr Pro Glu Gln Asn Val Glu Leu

180 185 190

Ala Ser Ala Glu Leu Lys Ala Asp Glu Lys Ser His Ala Val Ile Leu

195 200 205

Gly Asp Thr Arg Tyr Gly Gly Glu Glu Lys Gly Thr Tyr His Leu Ala

210 215 220

Leu Phe Gly Asp Arg Ala Gln Glu Ile Ala Gly Ser Ala Thr Val Lys

225 230 235 240

Ile Arg Glu Lys Val His Glu Ile Gly Ile Ala Gly Lys Gln

245 250

<210> 9

<211> 254

<212> БЕЛОК

<213> Neisseria meningitidis

<400> 9

Cys Ser Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile Gly Ala Gly Leu

1 5 10 15

Ala Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp Lys Ser Leu Gln

20 25 30

Ser Leu Thr Leu Asp Gln Ser Val Arg Lys Asn Glu Lys Leu Lys Leu

35 40 45

Ala Ala Gln Gly Ala Glu Lys Thr Tyr Gly Asn Gly Asp Ser Leu Asn

50 55 60

Thr Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys Val Ser Arg Phe Asp Phe Ile Arg

65 70 75 80

Gln Ile Glu Val Asp Gly Gln Leu Ile Thr Leu Glu Ser Gly Glu Phe

85 90 95

Gln Ile Tyr Lys Gln Asp His Ser Ala Val Val Ala Leu Gln Ile Glu

100 105 110

Lys Ile Asn Asn Pro Asp Lys Ile Asp Ser Leu Ile Asn Gln Arg Ser

115 120 125

Phe Leu Val Ser Gly Leu Gly Gly Glu His Thr Ala Phe Asn Gln Leu

130 135 140

Pro Ser Gly Lys Ala Glu Tyr His Gly Lys Ala Phe Ser Ser Asp Asp

145 150 155 160

Pro Asn Gly Arg Leu His Tyr Ser Ile Asp Phe Thr Lys Lys Gln Gly

165 170 175

Tyr Gly Arg Ile Glu His Leu Lys Thr Pro Glu Gln Asn Val Glu Leu

180 185 190

Ala Ser Ala Glu Leu Lys Ala Asp Glu Lys Ser His Ala Val Ile Leu

195 200 205

Gly Asp Thr Arg Tyr Gly Gly Glu Glu Lys Gly Thr Tyr His Leu Ala

210 215 220

Leu Phe Gly Asp Arg Ala Gln Glu Ile Ala Gly Ser Ala Thr Val Lys

225 230 235 240

Ile Arg Glu Lys Val His Glu Ile Gly Ile Ala Gly Lys Gln

245 250

<210> 10

<211> 254

<212> БЕЛОК

<213> Neisseria meningitidis

<400> 10

Cys Ser Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile Gly Ala Gly Leu

1 5 10 15

Ala Asp Ala Leu Thr Thr Pro Leu Asp His Lys Asp Lys Ser Leu Gln

20 25 30

Ser Leu Thr Leu Asp Gln Ser Val Arg Lys Asn Glu Lys Leu Lys Leu

35 40 45

Ala Ala Gln Gly Ala Glu Lys Thr Tyr Gly Asn Gly Asp Ser Leu Asn

50 55 60

Thr Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys Val Ser Arg Phe Asp Phe Ile Arg

65 70 75 80

Gln Ile Glu Val Asp Gly Gln Thr Ile Thr Leu Ala Ser Gly Glu Phe

85 90 95

Gln Ile Tyr Lys Gln Asn His Ser Ala Val Val Ala Leu Gln Ile Glu

100 105 110

Lys Ile Asn Asn Pro Asp Lys Ile Asp Ser Leu Ile Asn Gln Arg Ser

115 120 125

Phe Leu Val Ser Gly Leu Gly Gly Glu His Thr Ala Phe Asn Gln Leu

130 135 140

Pro Asp Gly Lys Ala Glu Tyr His Gly Lys Ala Phe Ser Ser Asp Asp

145 150 155 160

Pro Asn Gly Arg Leu His Tyr Ser Ile Asp Phe Thr Lys Lys Gln Gly

165 170 175

Tyr Gly Arg Ile Glu His Leu Lys Thr Pro Glu Gln Asn Val Glu Leu

180 185 190

Ala Ser Ala Glu Leu Lys Ala Asp Glu Lys Ser His Ala Val Ile Leu

195 200 205

Gly Asp Thr Arg Tyr Gly Gly Glu Glu Lys Gly Thr Tyr His Leu Ala

210 215 220

Leu Phe Gly Asp Arg Ala Gln Glu Ile Ala Gly Ser Ala Thr Val Lys

225 230 235 240

Ile Arg Glu Lys Val His Glu Ile Gly Ile Ala Gly Lys Gln

245 250

<210> 11

<211> 261

<212> БЕЛОК

<213> Neisseria meningitidis

<400> 11

Cys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile

1 5 10 15

Gly Thr Gly Leu Ala Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp

20 25 30

Lys Gly Leu Lys Ser Leu Thr Leu Glu Asp Ser Ile Ser Gln Asn Gly

35 40 45

Thr Leu Thr Leu Ser Ala Gln Gly Ala Glu Lys Thr Phe Lys Val Gly

50 55 60

Asp Lys Asp Asn Ser Leu Asn Thr Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Phe Asp Phe Val Gln Lys Ile Glu Val Asp Gly Gln Thr Ile

85 90 95

Thr Leu Ala Ser Gly Glu Phe Gln Ile Tyr Lys Gln Asp His Ser Ala

100 105 110

Val Val Ala Leu Gln Ile Glu Lys Ile Asn Asn Pro Asp Lys Ile Asp

115 120 125

Ser Leu Ile Asn Gln Arg Ser Phe Leu Val Ser Gly Leu Gly Gly Glu

130 135 140

His Thr Ala Phe Asn Gln Leu Pro Ser Gly Lys Ala Glu Tyr His Gly

145 150 155 160

Lys Ala Phe Ser Ser Asp Asp Ala Gly Gly Lys Leu Thr Tyr Thr Ile

165 170 175

Asp Phe Ala Ala Lys Gln Gly His Gly Lys Ile Glu His Leu Lys Thr

180 185 190

Pro Glu Gln Asn Val Glu Leu Ala Ser Ala Glu Leu Lys Ala Asp Glu

195 200 205

Lys Ser His Ala Val Ile Leu Gly Asp Thr Arg Tyr Gly Ser Glu Glu

210 215 220

Lys Gly Thr Tyr His Leu Ala Leu Phe Gly Asp Arg Ala Gln Glu Ile

225 230 235 240

Ala Gly Ser Ala Thr Val Lys Ile Arg Glu Lys Val His Glu Ile Gly

245 250 255

Ile Ala Gly Lys Gln

260

<210> 12

<211> 257

<212> БЕЛОК

<213> Neisseria meningitidis

<400> 12

Cys Ser Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile Gly Ala Gly Leu

1 5 10 15

Ala Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp Lys Gly Leu Lys

20 25 30

Ser Leu Thr Leu Glu Asp Ser Ile Ser Gln Asn Gly Thr Leu Thr Leu

35 40 45

Ser Ala Gln Gly Ala Glu Lys Thr Phe Lys Val Gly Asp Lys Asp Asn

50 55 60

Ser Leu Asn Thr Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys Ile Ser Arg Phe Asp

65 70 75 80

Phe Val Gln Lys Ile Glu Val Asp Gly Gln Thr Ile Thr Leu Ala Ser

85 90 95

Gly Glu Phe Gln Ile Tyr Lys Gln Asn His Ser Ala Val Val Ala Leu

100 105 110

Gln Ile Glu Lys Ile Asn Asn Pro Asp Lys Ile Asp Ser Leu Ile Asn

115 120 125

Gln Arg Ser Phe Leu Val Ser Gly Leu Gly Gly Glu His Thr Ala Phe

130 135 140

Asn Gln Leu Pro Gly Gly Lys Ala Glu Tyr His Gly Lys Ala Phe Ser

145 150 155 160

Ser Asp Asp Ala Gly Gly Lys Leu Thr Tyr Thr Ile Asp Phe Ala Ala

165 170 175

Lys Gln Gly His Gly Lys Ile Glu His Leu Lys Thr Pro Glu Gln Asn

180 185 190

Val Glu Leu Ala Ala Ala Glu Leu Lys Ala Asp Glu Lys Ser His Ala

195 200 205

Val Ile Leu Gly Asp Thr Arg Tyr Gly Ser Glu Glu Lys Gly Thr Tyr

210 215 220

His Leu Ala Leu Phe Gly Asp Arg Ala Gln Glu Ile Ala Gly Ser Ala

225 230 235 240

Thr Val Lys Ile Gly Glu Lys Val His Glu Ile Ser Ile Ala Gly Lys

245 250 255

Gln

<210> 13

<211> 285

<212> БЕЛОК

<213> Neisseria meningitidis

<400> 13

Met Thr Arg Ser Lys Pro Val Asn Arg Thr Thr Phe Cys Cys Leu Ser

1 5 10 15

Leu Thr Ala Gly Pro Asp Ser Asp Arg Leu Gln Gln Arg Arg Gly Gly

20 25 30

Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile Gly Thr Gly Leu Ala Asp Ala Leu

35 40 45

Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp Lys Gly Leu Lys Ser Leu Thr Leu

50 55 60

Glu Ala Ser Ile Pro Gln Asn Gly Thr Leu Thr Leu Ser Ala Gln Gly

65 70 75 80

Ala Glu Lys Thr Phe Lys Ala Gly Gly Lys Asp Asn Ser Leu Asn Thr

85 90 95

Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys Ile Ser Arg Phe Asp Phe Val Gln Lys

100 105 110

Ile Glu Val Asp Gly Gln Thr Ile Thr Leu Ala Ser Gly Glu Phe Gln

115 120 125

Ile Tyr Lys Gln Asp His Ser Ala Val Val Ala Leu Arg Ile Glu Lys

130 135 140

Ile Asn Asn Pro Asp Lys Ile Asp Ser Leu Ile Asn Gln Arg Ser Phe

145 150 155 160

Leu Val Ser Asp Leu Gly Gly Glu His Thr Ala Phe Asn Gln Leu Pro

165 170 175

Asp Gly Lys Ala Glu Tyr His Gly Lys Ala Phe Ser Ser Asp Asp Ala

180 185 190

Asp Gly Lys Leu Thr Tyr Thr Ile Asp Phe Ala Ala Lys Gln Gly His

195 200 205

Gly Lys Ile Glu His Leu Lys Thr Pro Glu Gln Asn Val Glu Leu Ala

210 215 220

Ser Ala Glu Leu Lys Ala Asp Glu Lys Ser His Ala Val Ile Leu Gly

225 230 235 240

Asp Thr Arg Tyr Gly Gly Glu Glu Lys Gly Thr Tyr Arg Leu Ala Leu

245 250 255

Phe Gly Asp Arg Ala Gln Glu Ile Ala Gly Ser Ala Thr Val Lys Ile

260 265 270

Gly Glu Lys Val His Glu Ile Gly Ile Ala Asp Lys Gln

275 280 285

<210> 14

<211> 256

<212> БЕЛОК

<213> Neisseria meningitidis

<400> 14

Cys Ser Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile Gly Ala Gly Leu

1 5 10 15

Ala Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp Lys Gly Leu Gln

20 25 30

Ser Leu Thr Leu Asp Gln Ser Val Arg Lys Asn Glu Lys Leu Lys Leu

35 40 45

Ala Ala Pro Gln Gly Ala Glu Lys Thr Tyr Gly Asn Gly Asp Ser Leu

50 55 60

Asn Thr Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys Val Ser Arg Phe Asp Phe Ile

65 70 75 80

Arg Gln Ile Glu Val Asp Gly Gln Leu Ile Thr Leu Glu Ser Gly Glu

85 90 95

Phe Gln Val Tyr Lys Gln Ser His Ser Ala Leu Thr Ala Phe Gln Thr

100 105 110

Glu Gln Ile Gln Asp Ser Glu His Ser Gly Lys Met Val Ala Lys Arg

115 120 125

Gln Phe Arg Ile Gly Asp Ile Ala Gly Glu His Thr Ser Phe Asp Lys

130 135 140

Leu Pro Glu Gly Gly Arg Ala Thr Tyr Arg Gly Thr Ala Phe Gly Ser

145 150 155 160

Asp Asp Ala Gly Gly Lys Leu Thr Tyr Thr Ile Asp Phe Ala Ala Lys

165 170 175

Gln Gly Asn Gly Lys Ile Glu His Leu Lys Ser Pro Glu Leu Asn Val

180 185 190

Asp Leu Ala Ala Ala Asp Ile Lys Pro Asp Gly Lys Arg His Ala Val

195 200 205

Ile Ser Gly Ser Val Leu Tyr Asn Gln Ala Glu Lys Gly Ser Tyr Ser

210 215 220

Leu Gly Ile Phe Gly Gly Lys Ala Gln Glu Val Ala Gly Ser Ala Glu

225 230 235 240

Val Lys Thr Val Asn Gly Ile Arg His Ile Gly Leu Ala Ala Lys Gln

245 250 255

<210> 15

<211> 6

<212> БЕЛОК

<213> Neisseria meningitidis

<400> 15

Glu Val Asp Gly Gln Leu

1 5

<210> 16

<211> 8

<212> БЕЛОК

<213> Neisseria meningitidis

<400> 16

Lys Pro Asp Gly Lys Arg His Ala

1 5

<210> 17

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> Neisseria meningitidis

<400> 17

Phe Gly Gly Lys Ala Gln Glu

1 5

<210> 18

<211> 6

<212> БЕЛОК

<213> Neisseria meningitidis

<400> 18

Ala Ala Gln Gly Ala Glu

1 5

<210> 19

<211> 10

<212> БЕЛОК

<213> Neisseria meningitidis

<400> 19

Ile Gln Asp Ser Glu His Ser Gly Lys Met

1 5 10

<210> 20

<211> 6

<212> БЕЛОК

<213> Neisseria meningitidis

<400> 20

Lys Thr Val Asn Gly Ile

1 5

<210> 21

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> Neisseria meningitidis

<220>

<221> Xaa

<222> (1)..(1)

<223> exogenous loop insert

<400> 21

Xaa Ala Ala Gln Gly Ala Glu

1 5

<210> 22

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Модифицированный полипептид

<220>

<221> Xaa

<222> (2)..(2)

<223> Exogenous loop insert

<400> 22

Ala Xaa Ala Gln Gly Ala Glu

1 5

<210> 23

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Модифицированный полипептид

<220>

<221> Xaa

<222> (3)..(3)

<223> Exogenous loop insert

<400> 23

Ala Ala Xaa Gln Gly Ala Glu

1 5

<210> 24

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Модифицированный полипептид

<220>

<221> Xaa

<222> (4)..(4)

<223> Exogenous loop insert

<400> 24

Ala Ala Gln Xaa Gly Ala Glu

1 5

<210> 25

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Модифицированный полипептид

<220>

<221> Xaa

<222> (5)..(5)

<223> Exogenous loop insert

<400> 25

Ala Ala Gln Gly Xaa Ala Glu

1 5

<210> 26

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Модифицированный полипептид

<220>

<221> Xaa

<222> (6)..(6)

<223> Exogenous loop insert

<400> 26

Ala Ala Gln Gly Ala Xaa Glu

1 5

<210> 27

<211> 7

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Модифицированный полипептид

19

<220>

<221> Xaa

<222> (7)..(7)

<223> Exogenous loop insert

<400> 27

Ala Ala Gln Gly Ala Glu Xaa

1 5

<210> 28

<211> 6

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Модифицированный полипептид

<220>

<221> Xaa

<222> (2)..(2)

<223> Exogenous loop insert

<400> 28

Ala Xaa Gln Gly Ala Glu

1 5

<210> 29

<211> 6

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Модифицированный полипептид

<220>

<221> Xaa

<222> (3)..(3)

<223> Exogenous loop insert

<400> 29

Ala Ala Xaa Gly Ala Glu

1 5

<210> 30

<211> 5

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Модифицированный полипептид

<220>

<221> Xaa

<222> (3)..(3)

<223> Exogenous loop insertion

<400> 30

Ala Ala Xaa Ala Glu

1 5

<210> 31

<211> 4

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Модифицированный полипептид

<220>

<221> misc_feature

<222> (3)..(3)

<223> Xaa can be any naturally occurring amino acid

<400> 31

Ala Ala Xaa Glu

1

<210> 32

<211> 5

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Modified polypepitide

<220>

<221> Xaa

<222> (2)..(2)

<223> Exogenous loop insertion

<400> 32

Ala Xaa Gly Ala Glu

1 5

<210> 33

<211> 4

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Модифицированный полипептид

<220>

<221> Xaa

<222> (2)..(2)

<223> Exogenous loop insertion

<400> 33

Ala Xaa Ala Glu

1

<210> 34

<211> 4

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Модифицированный полипептид

<220>

<221> Xaa

<222> (3)..(3)

<223> Exogenous loop insertion

<400> 34

Ala Ala Xaa Glu

1

<210> 35

<211> 6

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Модифицированный полипептид

<220>

<221> Xaa

<222> (1)..(1)

<223> Exogenous loop insertion

<400> 35

Xaa Ala Gln Gly Ala Glu

1 5

<210> 36

<211> 5

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Модифицированный полипептид

<220>

<221> Xaa

<222> (1)..(1)

<223> Exogenous loop insertion

<400> 36

Xaa Gln Gly Ala Glu

1 5

<210> 37

<211> 4

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Модифицированный полипептид

<220>

<221> Xaa

<222> (1)..(1)

<223> Exogenous loop insertion

<400> 37

Xaa Gly Ala Glu

1

<210> 38

<211> 6

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Модифицированный полипептид

<220>

<221> Xaa

<222> (4)..(4)

<223> Exogenous loop insertion

<400> 38

Ala Ala Gln Xaa Ala Glu

1 5

<210> 39

<211> 5

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Модифицированный полипептид

<220>

<221> Xaa

<222> (4)..(4)

<223> Exogenous loop insertion

<400> 39

Ala Ala Gln Xaa Glu

1 5

<210> 40

<211> 4

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Модифицированный полипептид

<220>

<221> Xaa

<222> (4)..(4)

<223> Exogenous loop insertion

<400> 40

Ala Ala Gln Xaa

1

<210> 41

<211> 6

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Модифицированный полипептид

<220>

<221> Xaa

<222> (5)..(5)

<223> Exogenous loop insertion

<400> 41

Ala Ala Gln Gly Xaa Glu

1 5

<210> 42

<211> 5

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Модифицированный полипептид

<220>

<221> Xaa

<222> (5)..(5)

<223> Exogenous loop insertion

<400> 42

Ala Ala Gln Gly Xaa

1 5

<210> 43

<211> 6

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Модифицированный полипептид

<220>

<221> Xaa

<222> (6)..(6)

<223> Exogenous loop insertion

<400> 43

Ala Ala Gln Gly Ala Xaa

1 5

<210> 44

<211> 255

<212> БЕЛОК

<213> Neisseria meningitidis

<400> 44

Cys Ser Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile Gly Ala Gly Leu

1 5 10 15

Ala Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp Lys Gly Leu Gln

20 25 30

Ser Leu Thr Leu Asp Gln Ser Val Arg Lys Asn Glu Lys Leu Lys Leu

35 40 45

Ala Ala Gln Gly Ala Glu Lys Thr Tyr Gly Asn Gly Asp Ser Leu Asn

50 55 60

Thr Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys Val Ser Arg Phe Asp Phe Ile Arg

65 70 75 80

Gln Ile Glu Val Asp Gly Gln Leu Ile Thr Leu Glu Ser Gly Glu Phe

85 90 95

Gln Val Tyr Lys Gln Ser His Ser Ala Leu Thr Ala Phe Gln Thr Glu

100 105 110

Gln Ile Gln Asp Ser Glu His Ser Gly Lys Met Val Ala Lys Arg Gln

115 120 125

Phe Arg Ile Gly Asp Ile Ala Gly Glu His Thr Ser Phe Asp Lys Leu

130 135 140

Pro Glu Gly Gly Arg Ala Thr Tyr Arg Gly Thr Ala Phe Gly Ser Asp

145 150 155 160

Asp Ala Gly Gly Lys Leu Thr Tyr Thr Ile Asp Phe Ala Ala Lys Gln

165 170 175

Gly Asn Gly Lys Ile Glu His Leu Lys Ser Pro Glu Leu Asn Val Asp

180 185 190

Leu Ala Ala Ala Asp Ile Lys Pro Asp Gly Lys Arg His Ala Val Ile

195 200 205

Ser Gly Ser Val Leu Tyr Asn Gln Ala Glu Lys Gly Ser Tyr Ser Leu

210 215 220

Gly Ile Phe Gly Gly Lys Ala Gln Glu Val Ala Gly Ser Ala Glu Val

225 230 235 240

Lys Thr Val Asn Gly Ile Arg His Ile Gly Leu Ala Ala Lys Gln

245 250 255

<210> 45

<211> 13

<212> БЕЛОК

<213> Neisseria meningitidis

<400> 45

Tyr Val Ala Val Glu Asn Gly Val Ala Lys Lys Val Ala

1 5 10

<210> 46

<211> 15

<212> БЕЛОК

<213> Neisseria meningitidis

<400> 46

His Phe Val Gln Gln Thr Pro Lys Ser Gln Pro Thr Leu Val Pro

1 5 10 15

<210> 47

<211> 15

<212> БЕЛОК

<213> Neisseria meningitidis

<400> 47

His Phe Val Gln Gln Thr Pro Gln Ser Gln Pro Thr Leu Val Pro

1 5 10 15

<210> 48

<211> 14

<212> БЕЛОК

<213> Neisseria meningitidis

<400> 48

Thr Leu Ala Asn Gly Ala Asn Asn Thr Ile Ile Arg Val Pro

1 5 10

<210> 49

<211> 14

<212> БЕЛОК

<213> Neisseria meningitidis

<400> 49

Thr Leu Ala Lys Gly Ala Asn Asn Thr Ile Ile Arg Val Pro

1 5 10

<210> 50

<211> 13

<212> БЕЛОК

<213> Neisseria meningitidis

<400> 50

His Val Val Val Asn Asn Lys Val Ala Thr His Val Pro

1 5 10

<210> 51

<211> 10

<212> БЕЛОК

<213> Neisseria meningitidis

<400> 51

Tyr Val Asp Glu Gln Ser Lys Tyr His Ala

1 5 10

<210> 52

<211> 15

<212> БЕЛОК

<213> Neisseria meningitidis

<400> 52

His Phe Val Gln Asn Lys Gln Asn Gln Arg Pro Thr Leu Val Pro

1 5 10 15

<210> 53

<211> 15

<212> БЕЛОК

<213> Neisseria meningitidis

<400> 53

His Phe Val Gln Asn Lys Gln Asn Gln Pro Pro Thr Leu Val Pro

1 5 10 15

<210> 54

<211> 15

<212> БЕЛОК

<213> Neisseria meningitidis

<400> 54

His Phe Val Gln Asp Lys Lys Gly Gln Pro Pro Thr Leu Val Pro

1 5 10 15

<210> 55

<211> 18

<212> БЕЛОК

<213> Neisseria meningitidis

<400> 55

His Phe Val Gln Asn Lys Gln Asn Gln Gln Asn Gln Pro Pro Thr Leu

1 5 10 15

Val Pro

<210> 56

<211> 18

<212> БЕЛОК

<213> Neisseria meningitidis

<400> 56

His Phe Val Gln Asn Lys Gln Asn Lys Gln Asn Gln Pro Pro Thr Leu

1 5 10 15

Val Pro

<210> 57

<211> 15

<212> БЕЛОК

<213> Neisseria meningitidis

<400> 57

His Phe Val Gln Asn Lys Gln Asn Lys Pro Pro Thr Leu Val Pro

1 5 10 15

<210> 58

<211> 18

<212> БЕЛОК

<213> Neisseria meningitidis

<400> 58

Tyr Trp Thr Thr Val Asn Thr Gly Ser Ala Thr Thr Thr Thr Thr Phe

1 5 10 15

Val Pro

<210> 59

<211> 17

<212> БЕЛОК

<213> Neisseria meningitidis

<400> 59

Tyr Trp Thr Thr Val Asn Thr Gly Ser Ala Thr Thr Thr Thr Phe Val

1 5 10 15

Pro

<210> 60

<211> 16

<212> БЕЛОК

<213> Neisseria meningitidis

<400> 60

Tyr Trp Thr Thr Val Asn Thr Gly Ser Ala Thr Thr Thr Phe Val Pro

1 5 10 15

<210> 61

<211> 17

<212> БЕЛОК

<213> Neisseria meningitidis

<400> 61

Tyr Tyr Thr Thr Val Thr Gln Gly Ser Ala Thr Thr Thr Thr Phe Val

1 5 10 15

Pro

<210> 62

<211> 10

<212> БЕЛОК

<213> Neisseria meningitidis

<400> 62

Tyr Val Asp Glu Lys Lys Met Val His Ala

1 5 10

<210> 63

<211> 10

<212> БЕЛОК

<213> Neisseria meningitidis

<400> 63

Tyr Val Asp Glu Lys Gln Val Ser His Ala

1 5 10

<210> 64

<211> 10

<212> БЕЛОК

<213> Neisseria meningitidis

<400> 64

Tyr Val Asp Glu Lys Lys Val Val His Ala

1 5 10

<210> 65

<211> 13

<212> БЕЛОК

<213> Neisseria meningitidis

<400> 65

His Tyr Thr Arg Gln Asn Asn Ala Asp Val Phe Val Pro

1 5 10

<210> 66

<211> 13

<212> БЕЛОК

<213> Neisseria meningitidis

<400> 66

His Tyr Thr Arg Gln Asn Asn Thr Asp Val Phe Val Pro

1 5 10

<210> 67

<211> 13

<212> БЕЛОК

<213> Neisseria meningitidis

<400> 67

His Tyr Thr Arg Gln Asn Asn Ile Asp Val Phe Val Pro

1 5 10

<210> 68

<211> 14

<212> БЕЛОК

<213> Neisseria meningitidis

<400> 68

Tyr Tyr Thr Lys Asp Thr Asn Asn Asn Leu Thr Leu Val Pro

1 5 10

<210> 69

<211> 14

<212> БЕЛОК

<213> Neisseria meningitidis

<400> 69

Tyr Tyr Thr Lys Asp Lys Asn Asp Asn Leu Thr Leu Val Pro

1 5 10

<210> 70

<211> 14

<212> БЕЛОК

<213> Neisseria meningitidis

<400> 70

Tyr Tyr Thr Lys Asp Lys Asn Asp Lys Leu Thr Leu Val Pro

1 5 10

<210> 71

<211> 13

<212> БЕЛОК

<213> Neisseria meningitidis

<400> 71

Tyr Tyr Thr Asn Thr Asn Asn Asn Leu Thr Leu Val Pro

1 5 10

<210> 72

<211> 17

<212> БЕЛОК

<213> Neisseria meningitidis

<400> 72

His Trp Asn Thr Val Tyr Asn Thr Asn Gly Thr Thr Thr Thr Phe Val

1 5 10 15

Pro

<210> 73

<211> 18

<212> БЕЛОК

<213> Neisseria meningitidis

<400> 73

His Trp Asn Thr Val Tyr Asn Thr Asn Gly Thr Thr Thr Thr Thr Phe

1 5 10 15

Val Pro

<210> 74

<211> 14

<212> БЕЛОК

<213> Neisseria meningitidis

<400> 74

Thr Tyr Thr Val Asp Ser Ser Gly Val Val Thr Pro Val Pro

1 5 10

<210> 75

<211> 14

<212> БЕЛОК

<213> Neisseria meningitidis

<400> 75

His Phe Val Ala Asp Ser Gln Gly Lys Ile Thr Arg Val Pro

1 5 10

<210> 76

<211> 17

<212> БЕЛОК

<213> Neisseria meningitidis

<400> 76

Tyr Tyr Tyr Thr Thr Ala Thr Asn Ser Ser Thr Ser Thr Thr Phe Val

1 5 10 15

Pro

<210> 77

<211> 17

<212> БЕЛОК

<213> Neisseria meningitidis

<400> 77

His Tyr Thr Thr Val Tyr Asn Ala Thr Thr Thr Thr Thr Thr Phe Val

1 5 10 15

Pro

<210> 78

<211> 18

<212> БЕЛОК

<213> Neisseria meningitidis

<400> 78

His Tyr Thr Thr Val Tyr Asn Ala Thr Thr Thr Thr Thr Thr Thr Phe

1 5 10 15

Val Pro

<210> 79

<211> 11

<212> БЕЛОК

<213> Neisseria meningitidis

<400> 79

Tyr Val Asp Asp Gln Gly Lys Val Lys Gly Pro

1 5 10

<210> 80

<211> 255

<212> БЕЛОК

<213> Neisseria meningitidis

<400> 80

Cys Ser Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile Gly Ala Gly Leu

1 5 10 15

Ala Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp Lys Gly Leu Gln

20 25 30

Ser Leu Thr Leu Asp Gln Ser Val Arg Lys Asn Glu Lys Leu Lys Leu

35 40 45

Ala Ala Gln Gly Ala Glu Lys Thr Tyr Gly Asn Gly Asp Ser Leu Asn

50 55 60

Thr Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys Val Ser Arg Phe Asp Phe Ile Arg

65 70 75 80

Gln Ile Glu Val Asp Gly Gln Leu Ile Thr Leu Glu Ser Gly Glu Phe

85 90 95

Gln Val Tyr Lys Gln Ser His Ser Ala Leu Thr Ala Phe Gln Thr Glu

100 105 110

Gln Ile Gln Asp Ser Glu His Ser Gly Lys Met Val Ala Lys Arg Gln

115 120 125

Phe Arg Ile Gly Asp Ile Ala Gly Glu His Thr Ser Phe Asp Lys Leu

130 135 140

Pro Glu Gly Gly Arg Ala Thr Tyr Arg Gly Thr Ala Phe Gly Ser Asp

145 150 155 160

Asp Ala Gly Gly Lys Leu Thr Tyr Thr Ile Asp Phe Ala Ala Lys Gln

165 170 175

Gly Asn Gly Lys Ile Glu His Leu Lys Ser Pro Glu Leu Asn Val Asp

180 185 190

Leu Ala Ala Ala Asp Ile Lys Pro Asp Gly Lys Arg His Ala Val Ile

195 200 205

Ser Gly Ser Val Leu Tyr Asn Gln Ala Glu Lys Gly Ser Tyr Ser Leu

210 215 220

Gly Ile Phe Gly Gly Lys Ala Gln Glu Val Ala Gly Ser Ala Glu Val

225 230 235 240

Lys Thr Val Asn Gly Ile Arg His Ile Gly Leu Ala Ala Lys Gln

245 250 255

<210> 81

<211> 255

<212> БЕЛОК

<213> Neisseria meningitidis

<400> 81

Cys Ser Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile Gly Ala Gly Leu

1 5 10 15

Ala Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp Lys Ser Leu Gln

20 25 30

Ser Leu Thr Leu Asp Gln Ser Val Arg Lys Asn Glu Lys Leu Lys Leu

35 40 45

Ala Ala Gln Gly Ala Glu Lys Thr Tyr Gly Asn Gly Asp Ser Leu Asn

50 55 60

Thr Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys Val Ser Arg Phe Asp Phe Ile Arg

65 70 75 80

Gln Ile Glu Val Asp Gly Gln Leu Ile Thr Leu Glu Ser Gly Glu Phe

85 90 95

Gln Val Tyr Lys Gln Ser His Ser Ala Leu Thr Ala Leu Gln Thr Glu

100 105 110

Gln Val Gln Asp Ser Glu His Ser Gly Lys Met Val Ala Lys Arg Gln

115 120 125

Phe Arg Ile Gly Asp Ile Ala Gly Glu His Thr Ser Phe Asp Lys Leu

130 135 140

Pro Glu Gly Gly Arg Ala Thr Tyr Arg Gly Thr Ala Phe Gly Ser Asp

145 150 155 160

Asp Ala Ser Gly Lys Leu Thr Tyr Thr Ile Asp Phe Ala Ala Lys Gln

165 170 175

Gly His Gly Lys Ile Glu His Leu Lys Ser Pro Glu Leu Asn Val Asp

180 185 190

Leu Ala Ala Ser Asp Ile Lys Pro Asp Lys Lys Arg His Ala Val Ile

195 200 205

Ser Gly Ser Val Leu Tyr Asn Gln Ala Glu Lys Gly Ser Tyr Ser Leu

210 215 220

Gly Ile Phe Gly Gly Gln Ala Gln Glu Val Ala Gly Ser Ala Glu Val

225 230 235 240

Glu Thr Ala Asn Gly Ile Arg His Ile Gly Leu Ala Ala Lys Gln

245 250 255

<210> 82

<211> 255

<212> БЕЛОК

<213> Neisseria meningitidis

<400> 82

Cys Ser Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile Gly Ala Gly Leu

1 5 10 15

Ala Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp Lys Gly Leu Gln

20 25 30

Ser Leu Thr Leu Asp Gln Ser Val Arg Lys Asn Glu Lys Leu Lys Leu

35 40 45

Ala Ala Gln Gly Ala Glu Lys Thr Tyr Gly Asn Gly Asp Ser Leu Asn

50 55 60

Thr Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys Val Ser Arg Phe Asp Phe Ile Arg

65 70 75 80

Gln Ile Glu Val Asp Gly Lys Leu Ile Thr Leu Glu Ser Gly Glu Phe

85 90 95

Gln Val Tyr Lys Gln Ser His Ser Ala Leu Thr Ala Leu Gln Thr Glu

100 105 110

Gln Val Gln Asp Ser Glu Asp Ser Gly Lys Met Val Ala Lys Arg Gln

115 120 125

Phe Arg Ile Gly Asp Ile Ala Gly Glu His Thr Ser Phe Asp Lys Leu

130 135 140

Pro Lys Gly Gly Ser Ala Thr Tyr Arg Gly Thr Ala Phe Gly Ser Asp

145 150 155 160

Asp Ala Gly Gly Lys Leu Thr Tyr Thr Ile Asp Phe Ala Ala Lys Gln

165 170 175

Gly His Gly Lys Ile Glu His Leu Lys Ser Pro Glu Leu Asn Val Glu

180 185 190

Leu Ala Thr Ala Tyr Ile Lys Pro Asp Glu Lys Arg His Ala Val Ile

195 200 205

Ser Gly Ser Val Leu Tyr Asn Gln Asp Glu Lys Gly Ser Tyr Ser Leu

210 215 220

Gly Ile Phe Gly Gly Gln Ala Gln Glu Val Ala Gly Ser Ala Glu Val

225 230 235 240

Glu Thr Ala Asn Gly Ile His His Ile Gly Leu Ala Ala Lys Gln

245 250 255

<210> 83

<211> 255

<212> БЕЛОК

<213> Neisseria meningitidis

<400> 83

Cys Ser Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile Gly Ala Gly Leu

1 5 10 15

Ala Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp Lys Ser Leu Gln

20 25 30

Ser Leu Thr Leu Asp Gln Ser Val Arg Lys Asn Glu Lys Leu Lys Leu

35 40 45

Ala Ala Gln Gly Ala Glu Lys Thr Tyr Gly Asn Gly Asp Ser Leu Asn

50 55 60

Thr Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys Val Ser Arg Phe Asp Phe Ile Arg

65 70 75 80

Gln Ile Glu Val Asp Gly Gln Leu Ile Thr Leu Glu Ser Gly Glu Phe

85 90 95

Gln Val Tyr Lys Gln Ser His Ser Ala Leu Thr Ala Leu Gln Thr Glu

100 105 110

Gln Glu Gln Asp Pro Glu His Ser Gly Lys Met Val Ala Lys Arg Arg

115 120 125

Phe Lys Ile Gly Asp Ile Ala Gly Glu His Thr Ser Phe Asp Lys Leu

130 135 140

Pro Lys Asp Val Met Ala Thr Tyr Arg Gly Thr Ala Phe Gly Ser Asp

145 150 155 160

Asp Ala Gly Gly Lys Leu Thr Tyr Thr Ile Asp Phe Ala Ala Lys Gln

165 170 175

Gly His Gly Lys Ile Glu His Leu Lys Ser Pro Glu Leu Asn Val Glu

180 185 190

Leu Ala Thr Ala Tyr Ile Lys Pro Asp Glu Lys His His Ala Val Ile

195 200 205

Ser Gly Ser Val Leu Tyr Asn Gln Asp Glu Lys Gly Ser Tyr Ser Leu

210 215 220

Gly Ile Phe Gly Gly Gln Ala Gln Glu Val Ala Gly Ser Ala Glu Val

225 230 235 240

Glu Thr Ala Asn Gly Ile His His Ile Gly Leu Ala Ala Lys Gln

245 250 255

<210> 84

<211> 263

<212> БЕЛОК

<213> Neisseria meningitidis

<400> 84

Cys Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp

1 5 10 15

Ile Gly Ala Gly Leu Ala Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys

20 25 30

Asp Lys Gly Leu Lys Ser Leu Thr Leu Glu Asp Ser Ile Ser Gln Asn

35 40 45

Gly Thr Leu Thr Leu Ser Ala Gln Gly Ala Glu Arg Thr Phe Lys Ala

50 55 60

Gly Asp Lys Asp Asn Ser Leu Asn Thr Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys

65 70 75 80

Ile Ser Arg Phe Asp Phe Ile Arg Gln Ile Glu Val Asp Gly Gln Leu

85 90 95

Ile Thr Leu Glu Ser Gly Glu Phe Gln Val Tyr Lys Gln Ser His Ser

100 105 110

Ala Leu Thr Ala Leu Gln Thr Glu Gln Val Gln Asp Ser Glu His Ser

115 120 125

Gly Lys Met Val Ala Lys Arg Gln Phe Arg Ile Gly Asp Ile Val Gly

130 135 140

Glu His Thr Ser Phe Gly Lys Leu Pro Lys Asp Val Met Ala Thr Tyr

145 150 155 160

Arg Gly Thr Ala Phe Gly Ser Asp Asp Ala Gly Gly Lys Leu Thr Tyr

165 170 175

Thr Ile Asp Phe Ala Ala Lys Gln Gly His Gly Lys Ile Glu His Leu

180 185 190

Lys Ser Pro Glu Leu Asn Val Asp Leu Ala Ala Ala Asp Ile Lys Pro

195 200 205

Asp Glu Lys His His Ala Val Ile Ser Gly Ser Val Leu Tyr Asn Gln

210 215 220

Ala Glu Lys Gly Ser Tyr Ser Leu Gly Ile Phe Gly Gly Gln Ala Gln

225 230 235 240

Glu Val Ala Gly Ser Ala Glu Val Glu Thr Ala Asn Gly Ile Arg His

245 250 255

Ile Gly Leu Ala Ala Lys Gln

260

<210> 85

<211> 260

<212> БЕЛОК

<213> Neisseria meningitidis

<400> 85

Cys Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Val Thr Ala Asp

1 5 10 15

Ile Gly Thr Gly Leu Ala Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys

20 25 30

Asp Lys Gly Leu Lys Ser Leu Thr Leu Glu Asp Ser Ile Ser Gln Asn

35 40 45

Gly Thr Leu Thr Leu Ser Ala Gln Gly Ala Glu Lys Thr Tyr Gly Asn

50 55 60

Gly Asp Ser Leu Asn Thr Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys Val Ser Arg

65 70 75 80

Phe Asp Phe Ile Arg Gln Ile Glu Val Asp Gly Gln Leu Ile Thr Leu

85 90 95

Glu Ser Gly Glu Phe Gln Val Tyr Lys Gln Ser His Ser Ala Leu Thr

100 105 110

Ala Leu Gln Thr Glu Gln Glu Gln Asp Pro Glu His Ser Glu Lys Met

115 120 125

Val Ala Lys Arg Arg Phe Arg Ile Gly Asp Ile Ala Gly Glu His Thr

130 135 140

Ser Phe Asp Lys Leu Pro Lys Asp Val Met Ala Thr Tyr Arg Gly Thr

145 150 155 160

Ala Phe Gly Ser Asp Asp Ala Gly Gly Lys Leu Thr Tyr Thr Ile Asp

165 170 175

Phe Ala Ala Lys Gln Gly His Gly Lys Ile Glu His Leu Lys Ser Pro

180 185 190

Glu Leu Asn Val Asp Leu Ala Val Ala Tyr Ile Lys Pro Asp Glu Lys

195 200 205

His His Ala Val Ile Ser Gly Ser Val Leu Tyr Asn Gln Asp Glu Lys

210 215 220

Gly Ser Tyr Ser Leu Gly Ile Phe Gly Glu Lys Ala Gln Glu Val Ala

225 230 235 240

Gly Ser Ala Glu Val Glu Thr Ala Asn Gly Ile His His Ile Gly Leu

245 250 255

Ala Ala Lys Gln

260

<210> 86

<211> 254

<212> БЕЛОК

<213> Neisseria meningitidis

<400> 86

Cys Ser Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile Gly Ala Gly Leu

1 5 10 15

Ala Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp Lys Ser Leu Gln

20 25 30

Ser Leu Thr Leu Asp Gln Ser Val Arg Lys Asn Glu Lys Leu Lys Leu

35 40 45

Ala Ala Gln Gly Ala Glu Lys Thr Tyr Gly Asn Gly Asp Ser Leu Asn

50 55 60

Thr Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys Val Ser Arg Phe Asp Phe Ile Arg

65 70 75 80

Gln Ile Glu Val Asp Gly Gln Leu Ile Thr Leu Glu Ser Gly Glu Phe

85 90 95

Gln Ile Tyr Lys Gln Asp His Ser Ala Val Val Ala Leu Gln Ile Glu

100 105 110

Lys Ile Asn Asn Pro Asp Lys Ile Asp Ser Leu Ile Asn Gln Arg Ser

115 120 125

Phe Leu Val Ser Gly Leu Gly Gly Glu His Thr Ala Phe Asn Gln Leu

130 135 140

Pro Asp Gly Lys Ala Glu Tyr His Gly Lys Ala Phe Ser Ser Asp Asp

145 150 155 160

Ala Gly Gly Lys Leu Thr Tyr Thr Ile Asp Phe Ala Ala Lys Gln Gly

165 170 175

His Gly Lys Ile Glu His Leu Lys Thr Pro Glu Gln Asn Val Glu Leu

180 185 190

Ala Ala Ala Glu Leu Lys Ala Asp Glu Lys Ser His Ala Val Ile Leu

195 200 205

Gly Asp Thr Arg Tyr Gly Ser Glu Glu Lys Gly Thr Tyr His Leu Ala

210 215 220

Leu Phe Gly Asp Arg Ala Gln Glu Ile Ala Gly Ser Ala Thr Val Lys

225 230 235 240

Ile Gly Glu Lys Val His Glu Ile Gly Ile Ala Gly Lys Gln

245 250

<210> 87

<211> 254

<212> БЕЛОК

<213> Neisseria meningitidis

<400> 87

Cys Ser Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile Gly Ala Gly Leu

1 5 10 15

Ala Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp Lys Ser Leu Gln

20 25 30

Ser Leu Thr Leu Asp Gln Ser Val Arg Lys Asn Glu Lys Leu Lys Leu

35 40 45

Ala Ala Gln Gly Ala Glu Lys Thr Tyr Gly Asn Gly Asp Ser Leu Asn

50 55 60

Thr Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys Val Ser Arg Phe Asp Phe Ile Arg

65 70 75 80

Gln Ile Glu Val Asp Gly Gln Leu Ile Thr Leu Glu Ser Gly Glu Phe

85 90 95

Gln Ile Tyr Lys Gln Asp His Ser Ala Val Val Ala Leu Gln Ile Glu

100 105 110

Lys Ile Asn Asn Pro Asp Lys Ile Asp Ser Leu Ile Asn Gln Arg Ser

115 120 125

Phe Leu Val Ser Gly Leu Gly Gly Glu His Thr Ala Phe Asn Gln Leu

130 135 140

Pro Ser Gly Lys Ala Glu Tyr His Gly Lys Ala Phe Ser Ser Asp Asp

145 150 155 160

Ala Gly Gly Lys Leu Thr Tyr Thr Ile Asp Phe Ala Ala Lys Gln Gly

165 170 175

His Gly Lys Ile Glu His Leu Lys Thr Pro Glu Gln Asn Val Glu Leu

180 185 190

Ala Ser Ala Glu Leu Lys Ala Asp Glu Lys Ser His Ala Val Ile Leu

195 200 205

Gly Asp Thr Arg Tyr Gly Gly Glu Glu Lys Gly Thr Tyr His Leu Ala

210 215 220

Leu Phe Gly Asp Arg Ala Gln Glu Ile Ala Gly Ser Ala Thr Val Lys

225 230 235 240

Ile Arg Glu Lys Val His Glu Ile Gly Ile Ala Gly Lys Gln

245 250

<210> 88

<211> 254

<212> БЕЛОК

<213> Neisseria meningitidis

<400> 88

Cys Ser Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile Gly Ala Gly Leu

1 5 10 15

Ala Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp Lys Ser Leu Gln

20 25 30

Ser Leu Thr Leu Asp Gln Ser Val Arg Lys Asn Glu Lys Leu Lys Leu

35 40 45

Ala Ala Gln Gly Ala Glu Lys Thr Tyr Gly Asn Gly Asp Ser Leu Asn

50 55 60

Thr Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys Val Ser Arg Phe Asp Phe Ile Arg

65 70 75 80

Gln Ile Glu Val Asp Gly Gln Leu Ile Thr Leu Glu Ser Gly Glu Phe

85 90 95

Gln Ile Tyr Lys Gln Asp His Ser Ala Val Val Ala Leu Gln Ile Glu

100 105 110

Lys Ile Asn Asn Pro Asp Lys Ile Asp Ser Leu Ile Asn Gln Arg Ser

115 120 125

Phe Leu Val Ser Gly Leu Gly Gly Glu His Thr Ala Phe Asn Gln Leu

130 135 140

Pro Ser Gly Lys Ala Glu Tyr His Gly Lys Ala Phe Ser Ser Asp Asp

145 150 155 160

Pro Asn Gly Arg Leu His Tyr Ser Ile Asp Phe Thr Lys Lys Gln Gly

165 170 175

Tyr Gly Arg Ile Glu His Leu Lys Thr Pro Glu Gln Asn Val Glu Leu

180 185 190

Ala Ser Ala Glu Leu Lys Ala Asp Glu Lys Ser His Ala Val Ile Leu

195 200 205

Gly Asp Thr Arg Tyr Gly Gly Glu Glu Lys Gly Thr Tyr His Leu Ala

210 215 220

Leu Phe Gly Asp Arg Ala Gln Glu Ile Ala Gly Ser Ala Thr Val Lys

225 230 235 240

Ile Arg Glu Lys Val His Glu Ile Gly Ile Ala Gly Lys Gln

245 250

<210> 89

<211> 254

<212> БЕЛОК

<213> Neisseria meningitidis

<400> 89

Cys Ser Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile Gly Ala Gly Leu

1 5 10 15

Ala Asp Ala Leu Thr Thr Pro Leu Asp His Lys Asp Lys Ser Leu Gln

20 25 30

Ser Leu Thr Leu Asp Gln Ser Val Arg Lys Asn Glu Lys Leu Lys Leu

35 40 45

Ala Ala Gln Gly Ala Glu Lys Thr Tyr Gly Asn Gly Asp Ser Leu Asn

50 55 60

Thr Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys Val Ser Arg Phe Asp Phe Ile Arg

65 70 75 80

Gln Ile Glu Val Asp Gly Gln Thr Ile Thr Leu Ala Ser Gly Glu Phe

85 90 95

Gln Ile Tyr Lys Gln Asn His Ser Ala Val Val Ala Leu Gln Ile Glu

100 105 110

Lys Ile Asn Asn Pro Asp Lys Ile Asp Ser Leu Ile Asn Gln Arg Ser

115 120 125

Phe Leu Val Ser Gly Leu Gly Gly Glu His Thr Ala Phe Asn Gln Leu

130 135 140

Pro Asp Gly Lys Ala Glu Tyr His Gly Lys Ala Phe Ser Ser Asp Asp

145 150 155 160

Pro Asn Gly Arg Leu His Tyr Ser Ile Asp Phe Thr Lys Lys Gln Gly

165 170 175

Tyr Gly Arg Ile Glu His Leu Lys Thr Pro Glu Gln Asn Val Glu Leu

180 185 190

Ala Ser Ala Glu Leu Lys Ala Asp Glu Lys Ser His Ala Val Ile Leu

195 200 205

Gly Asp Thr Arg Tyr Gly Gly Glu Glu Lys Gly Thr Tyr His Leu Ala

210 215 220

Leu Phe Gly Asp Arg Ala Gln Glu Ile Ala Gly Ser Ala Thr Val Lys

225 230 235 240

Ile Arg Glu Lys Val His Glu Ile Gly Ile Ala Gly Lys Gln

245 250

<210> 90

<211> 261

<212> БЕЛОК

<213> Neisseria meningitidis

<400> 90

Cys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile

1 5 10 15

Gly Thr Gly Leu Ala Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp

20 25 30

Lys Gly Leu Lys Ser Leu Thr Leu Glu Asp Ser Ile Ser Gln Asn Gly

35 40 45

Thr Leu Thr Leu Ser Ala Gln Gly Ala Glu Lys Thr Phe Lys Val Gly

50 55 60

Asp Lys Asp Asn Ser Leu Asn Thr Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Phe Asp Phe Val Gln Lys Ile Glu Val Asp Gly Gln Thr Ile

85 90 95

Thr Leu Ala Ser Gly Glu Phe Gln Ile Tyr Lys Gln Asp His Ser Ala

100 105 110

Val Val Ala Leu Gln Ile Glu Lys Ile Asn Asn Pro Asp Lys Ile Asp

115 120 125

Ser Leu Ile Asn Gln Arg Ser Phe Leu Val Ser Gly Leu Gly Gly Glu

130 135 140

His Thr Ala Phe Asn Gln Leu Pro Ser Gly Lys Ala Glu Tyr His Gly

145 150 155 160

Lys Ala Phe Ser Ser Asp Asp Ala Gly Gly Lys Leu Thr Tyr Thr Ile

165 170 175

Asp Phe Ala Ala Lys Gln Gly His Gly Lys Ile Glu His Leu Lys Thr

180 185 190

Pro Glu Gln Asn Val Glu Leu Ala Ser Ala Glu Leu Lys Ala Asp Glu

195 200 205

Lys Ser His Ala Val Ile Leu Gly Asp Thr Arg Tyr Gly Ser Glu Glu

210 215 220

Lys Gly Thr Tyr His Leu Ala Leu Phe Gly Asp Arg Ala Gln Glu Ile

225 230 235 240

Ala Gly Ser Ala Thr Val Lys Ile Arg Glu Lys Val His Glu Ile Gly

245 250 255

Ile Ala Gly Lys Gln

260

<210> 91

<211> 257

<212> БЕЛОК

<213> Neisseria meningitidis

<400> 91

Cys Ser Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile Gly Ala Gly Leu

1 5 10 15

Ala Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp Lys Gly Leu Lys

20 25 30

Ser Leu Thr Leu Glu Asp Ser Ile Ser Gln Asn Gly Thr Leu Thr Leu

35 40 45

Ser Ala Gln Gly Ala Glu Lys Thr Phe Lys Val Gly Asp Lys Asp Asn

50 55 60

Ser Leu Asn Thr Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys Ile Ser Arg Phe Asp

65 70 75 80

Phe Val Gln Lys Ile Glu Val Asp Gly Gln Thr Ile Thr Leu Ala Ser

85 90 95

Gly Glu Phe Gln Ile Tyr Lys Gln Asn His Ser Ala Val Val Ala Leu

100 105 110

Gln Ile Glu Lys Ile Asn Asn Pro Asp Lys Ile Asp Ser Leu Ile Asn

115 120 125

Gln Arg Ser Phe Leu Val Ser Gly Leu Gly Gly Glu His Thr Ala Phe

130 135 140

Asn Gln Leu Pro Gly Gly Lys Ala Glu Tyr His Gly Lys Ala Phe Ser

145 150 155 160

Ser Asp Asp Ala Gly Gly Lys Leu Thr Tyr Thr Ile Asp Phe Ala Ala

165 170 175

Lys Gln Gly His Gly Lys Ile Glu His Leu Lys Thr Pro Glu Gln Asn

180 185 190

Val Glu Leu Ala Ala Ala Glu Leu Lys Ala Asp Glu Lys Ser His Ala

195 200 205

Val Ile Leu Gly Asp Thr Arg Tyr Gly Ser Glu Glu Lys Gly Thr Tyr

210 215 220

His Leu Ala Leu Phe Gly Asp Arg Ala Gln Glu Ile Ala Gly Ser Ala

225 230 235 240

Thr Val Lys Ile Gly Glu Lys Val His Glu Ile Ser Ile Ala Gly Lys

245 250 255

Gln

<210> 92

<211> 268

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Модифицированный полипептид

<400> 92

Cys Ser Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile Gly Ala Gly Leu

1 5 10 15

Ala Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp Lys Gly Leu Gln

20 25 30

Ser Leu Thr Leu Asp Gln Ser Val Arg Lys Asn Glu Lys Leu Lys Leu

35 40 45

Ala Ala Gln Gly Ala Glu Lys Thr Tyr Gly Asn Gly Asp Ser Leu Asn

50 55 60

Thr Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys Val Ser Arg Phe Asp Phe Ile Arg

65 70 75 80

Gln Ile Glu Val Asp Tyr Tyr Thr Lys Asp Thr Asn Asn Asn Leu Thr

85 90 95

Leu Val Pro Gln Leu Ile Thr Leu Glu Ser Gly Glu Phe Gln Val Tyr

100 105 110

Lys Gln Ser His Ser Ala Leu Thr Ala Phe Gln Thr Glu Gln Ile Gln

115 120 125

Asp Ser Glu His Ser Gly Lys Met Val Ala Lys Arg Gln Phe Arg Ile

130 135 140

Gly Asp Ile Ala Gly Glu His Thr Ser Phe Asp Lys Leu Pro Glu Gly

145 150 155 160

Gly Arg Ala Thr Tyr Arg Gly Thr Ala Phe Gly Ser Asp Asp Ala Gly

165 170 175

Gly Lys Leu Thr Tyr Thr Ile Asp Phe Ala Ala Lys Gln Gly Asn Gly

180 185 190

Lys Ile Glu His Leu Lys Ser Pro Glu Leu Asn Val Asp Leu Ala Ala

195 200 205

Ala Asp Ile Lys Pro Asp Gly Lys Arg His Ala Val Ile Ser Gly Ser

210 215 220

Val Leu Tyr Asn Gln Ala Glu Lys Gly Ser Tyr Ser Leu Gly Ile Phe

225 230 235 240

Gly Gly Lys Ala Gln Glu Val Ala Gly Ser Ala Glu Val Lys Thr Val

245 250 255

Asn Gly Ile Arg His Ile Gly Leu Ala Ala Lys Gln

260 265

<210> 93

<211> 274

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Модифицированный полипептид

<400> 93

Cys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile

1 5 10 15

Gly Thr Gly Leu Ala Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp

20 25 30

Lys Gly Leu Lys Ser Leu Thr Leu Glu Asp Ser Ile Ser Gln Asn Gly

35 40 45

Thr Leu Thr Leu Ser Ala Gln Gly Ala Glu Lys Thr Phe Lys Val Gly

50 55 60

Asp Lys Asp Asn Ser Leu Asn Thr Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Phe Asp Phe Val Gln Lys Ile Glu Val Asp Tyr Tyr Thr Lys

85 90 95

Asp Thr Asn Asn Asn Leu Thr Leu Val Pro Gln Thr Ile Thr Leu Ala

100 105 110

Ser Gly Glu Phe Gln Ile Tyr Lys Gln Asp His Ser Ala Val Val Ala

115 120 125

Leu Gln Ile Glu Lys Ile Asn Asn Pro Asp Lys Ile Asp Ser Leu Ile

130 135 140

Asn Gln Arg Ser Phe Leu Val Ser Gly Leu Gly Gly Glu His Thr Ala

145 150 155 160

Phe Asn Gln Leu Pro Ser Gly Lys Ala Glu Tyr His Gly Lys Ala Phe

165 170 175

Ser Ser Asp Asp Ala Gly Gly Lys Leu Thr Tyr Thr Ile Asp Phe Ala

180 185 190

Ala Lys Gln Gly His Gly Lys Ile Glu His Leu Lys Thr Pro Glu Gln

195 200 205

Asn Val Glu Leu Ala Ser Ala Glu Leu Lys Ala Asp Glu Lys Ser His

210 215 220

Ala Val Ile Leu Gly Asp Thr Arg Tyr Gly Ser Glu Glu Lys Gly Thr

225 230 235 240

Tyr His Leu Ala Leu Phe Gly Asp Arg Ala Gln Glu Ile Ala Gly Ser

245 250 255

Ala Thr Val Lys Ile Arg Glu Lys Val His Glu Ile Gly Ile Ala Gly

260 265 270

Lys Gln

<210> 94

<211> 267

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Модифицированный полипептид

<400> 94

Cys Ser Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile Gly Ala Gly Leu

1 5 10 15

Ala Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp Lys Ser Leu Gln

20 25 30

Ser Leu Thr Leu Asp Gln Ser Val Arg Lys Asn Glu Lys Leu Lys Leu

35 40 45

Ala Ala Gln Gly Ala Glu Lys Thr Tyr Gly Asn Gly Asp Ser Leu Asn

50 55 60

Thr Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys Val Ser Arg Phe Asp Phe Ile Arg

65 70 75 80

Gln Ile Glu Val Asp Tyr Tyr Thr Lys Asp Thr Asn Asn Asn Leu Thr

85 90 95

Leu Val Pro Gln Leu Ile Thr Leu Glu Ser Gly Glu Phe Gln Ile Tyr

100 105 110

Lys Gln Asp His Ser Ala Val Val Ala Leu Gln Ile Glu Lys Ile Asn

115 120 125

Asn Pro Asp Lys Ile Asp Ser Leu Ile Asn Gln Arg Ser Phe Leu Val

130 135 140

Ser Gly Leu Gly Gly Glu His Thr Ala Phe Asn Gln Leu Pro Ser Gly

145 150 155 160

Lys Ala Glu Tyr His Gly Lys Ala Phe Ser Ser Asp Asp Ala Gly Gly

165 170 175

Lys Leu Thr Tyr Thr Ile Asp Phe Ala Ala Lys Gln Gly His Gly Lys

180 185 190

Ile Glu His Leu Lys Thr Pro Glu Gln Asn Val Glu Leu Ala Ser Ala

195 200 205

Glu Leu Lys Ala Asp Glu Lys Ser His Ala Val Ile Leu Gly Asp Thr

210 215 220

Arg Tyr Gly Gly Glu Glu Lys Gly Thr Tyr His Leu Ala Leu Phe Gly

225 230 235 240

Asp Arg Ala Gln Glu Ile Ala Gly Ser Ala Thr Val Lys Ile Arg Glu

245 250 255

Lys Val His Glu Ile Gly Ile Ala Gly Lys Gln

260 265

<210> 95

<211> 268

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Модифицированный полипептид

<400> 95

Cys Ser Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile Gly Ala Gly Leu

1 5 10 15

Ala Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp Lys Gly Leu Gln

20 25 30

Ser Leu Thr Leu Asp Gln Ser Val Arg Lys Asn Glu Lys Leu Lys Leu

35 40 45

Ala Ala Gln Gly Ala Glu Lys Thr Tyr Gly Asn Gly Asp Ser Leu Asn

50 55 60

Thr Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys Val Ser Arg Phe Asp Phe Ile Arg

65 70 75 80

Gln Ile Glu Val Asp Gly Gln Leu Ile Thr Leu Glu Ser Gly Glu Phe

85 90 95

Gln Val Tyr Lys Gln Ser His Ser Ala Leu Thr Ala Phe Gln Thr Glu

100 105 110

Gln Ile Gln Asp Ser Glu His Ser Gly Lys Met Val Ala Lys Arg Gln

115 120 125

Phe Arg Ile Gly Asp Ile Ala Gly Glu His Thr Ser Phe Asp Lys Leu

130 135 140

Pro Glu Gly Gly Arg Ala Thr Tyr Arg Gly Thr Ala Phe Gly Ser Asp

145 150 155 160

Asp Ala Gly Gly Lys Leu Thr Tyr Thr Ile Asp Phe Ala Ala Lys Gln

165 170 175

Gly Asn Gly Lys Ile Glu His Leu Lys Ser Pro Glu Leu Asn Val Asp

180 185 190

Leu Ala Ala Ala Asp Ile Lys Pro Asp Tyr Tyr Thr Lys Asp Thr Asn

195 200 205

Asn Asn Leu Thr Leu Val Pro Lys Arg His Ala Val Ile Ser Gly Ser

210 215 220

Val Leu Tyr Asn Gln Ala Glu Lys Gly Ser Tyr Ser Leu Gly Ile Phe

225 230 235 240

Gly Gly Lys Ala Gln Glu Val Ala Gly Ser Ala Glu Val Lys Thr Val

245 250 255

Asn Gly Ile Arg His Ile Gly Leu Ala Ala Lys Gln

260 265

<210> 96

<211> 274

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Модифицированный полипептид

<400> 96

Cys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile

1 5 10 15

Gly Thr Gly Leu Ala Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp

20 25 30

Lys Gly Leu Lys Ser Leu Thr Leu Glu Asp Ser Ile Ser Gln Asn Gly

35 40 45

Thr Leu Thr Leu Ser Ala Gln Gly Ala Glu Lys Thr Phe Lys Val Gly

50 55 60

Asp Lys Asp Asn Ser Leu Asn Thr Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Phe Asp Phe Val Gln Lys Ile Glu Val Asp Gly Gln Thr Ile

85 90 95

Thr Leu Ala Ser Gly Glu Phe Gln Ile Tyr Lys Gln Asp His Ser Ala

100 105 110

Val Val Ala Leu Gln Ile Glu Lys Ile Asn Asn Pro Asp Lys Ile Asp

115 120 125

Ser Leu Ile Asn Gln Arg Ser Phe Leu Val Ser Gly Leu Gly Gly Glu

130 135 140

His Thr Ala Phe Asn Gln Leu Pro Ser Gly Lys Ala Glu Tyr His Gly

145 150 155 160

Lys Ala Phe Ser Ser Asp Asp Ala Gly Gly Lys Leu Thr Tyr Thr Ile

165 170 175

Asp Phe Ala Ala Lys Gln Gly His Gly Lys Ile Glu His Leu Lys Thr

180 185 190

Pro Glu Gln Asn Val Glu Leu Ala Ser Ala Glu Leu Lys Ala Asp Tyr

195 200 205

Tyr Thr Lys Asp Thr Asn Asn Asn Leu Thr Leu Val Pro Lys Ser His

210 215 220

Ala Val Ile Leu Gly Asp Thr Arg Tyr Gly Ser Glu Glu Lys Gly Thr

225 230 235 240

Tyr His Leu Ala Leu Phe Gly Asp Arg Ala Gln Glu Ile Ala Gly Ser

245 250 255

Ala Thr Val Lys Ile Arg Glu Lys Val His Glu Ile Gly Ile Ala Gly

260 265 270

Lys Gln

<210> 97

<211> 267

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Модифицированный полипептид

<400> 97

Cys Ser Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile Gly Ala Gly Leu

1 5 10 15

Ala Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp Lys Ser Leu Gln

20 25 30

Ser Leu Thr Leu Asp Gln Ser Val Arg Lys Asn Glu Lys Leu Lys Leu

35 40 45

Ala Ala Gln Gly Ala Glu Lys Thr Tyr Gly Asn Gly Asp Ser Leu Asn

50 55 60

Thr Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys Val Ser Arg Phe Asp Phe Ile Arg

65 70 75 80

Gln Ile Glu Val Asp Gly Gln Leu Ile Thr Leu Glu Ser Gly Glu Phe

85 90 95

Gln Ile Tyr Lys Gln Asp His Ser Ala Val Val Ala Leu Gln Ile Glu

100 105 110

Lys Ile Asn Asn Pro Asp Lys Ile Asp Ser Leu Ile Asn Gln Arg Ser

115 120 125

Phe Leu Val Ser Gly Leu Gly Gly Glu His Thr Ala Phe Asn Gln Leu

130 135 140

Pro Ser Gly Lys Ala Glu Tyr His Gly Lys Ala Phe Ser Ser Asp Asp

145 150 155 160

Ala Gly Gly Lys Leu Thr Tyr Thr Ile Asp Phe Ala Ala Lys Gln Gly

165 170 175

His Gly Lys Ile Glu His Leu Lys Thr Pro Glu Gln Asn Val Glu Leu

180 185 190

Ala Ser Ala Glu Leu Lys Ala Asp Tyr Tyr Thr Lys Asp Thr Asn Asn

195 200 205

Asn Leu Thr Leu Val Pro Lys Ser His Ala Val Ile Leu Gly Asp Thr

210 215 220

Arg Tyr Gly Gly Glu Glu Lys Gly Thr Tyr His Leu Ala Leu Phe Gly

225 230 235 240

Asp Arg Ala Gln Glu Ile Ala Gly Ser Ala Thr Val Lys Ile Arg Glu

245 250 255

Lys Val His Glu Ile Gly Ile Ala Gly Lys Gln

260 265

<210> 98

<211> 268

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Модифицированный полипептид

<400> 98

Cys Ser Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile Gly Ala Gly Leu

1 5 10 15

Ala Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp Lys Gly Leu Gln

20 25 30

Ser Leu Thr Leu Asp Gln Ser Val Arg Lys Asn Glu Lys Leu Lys Leu

35 40 45

Ala Ala Gln Gly Ala Glu Lys Thr Tyr Gly Asn Gly Asp Ser Leu Asn

50 55 60

Thr Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys Val Ser Arg Phe Asp Phe Ile Arg

65 70 75 80

Gln Ile Glu Val Asp Gly Gln Leu Ile Thr Leu Glu Ser Gly Glu Phe

85 90 95

Gln Val Tyr Lys Gln Ser His Ser Ala Leu Thr Ala Phe Gln Thr Glu

100 105 110

Gln Ile Gln Asp Ser Glu His Ser Gly Lys Met Val Ala Lys Arg Gln

115 120 125

Phe Arg Ile Gly Asp Ile Ala Gly Glu His Thr Ser Phe Asp Lys Leu

130 135 140

Pro Glu Gly Gly Arg Ala Thr Tyr Arg Gly Thr Ala Phe Gly Ser Asp

145 150 155 160

Asp Ala Gly Gly Lys Leu Thr Tyr Thr Ile Asp Phe Ala Ala Lys Gln

165 170 175

Gly Asn Gly Lys Ile Glu His Leu Lys Ser Pro Glu Leu Asn Val Asp

180 185 190

Leu Ala Ala Ala Asp Ile Lys Pro Asp Gly Lys Arg His Ala Val Ile

195 200 205

Ser Gly Ser Val Leu Tyr Asn Gln Ala Glu Lys Gly Ser Tyr Ser Leu

210 215 220

Gly Ile Phe Gly Tyr Tyr Thr Lys Asp Thr Asn Asn Asn Leu Thr Leu

225 230 235 240

Val Pro Lys Ala Gln Glu Val Ala Gly Ser Ala Glu Val Lys Thr Val

245 250 255

Asn Gly Ile Arg His Ile Gly Leu Ala Ala Lys Gln

260 265

<210> 99

<211> 274

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Модифицированный полипептид

<400> 99

Cys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile

1 5 10 15

Gly Thr Gly Leu Ala Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp

20 25 30

Lys Gly Leu Lys Ser Leu Thr Leu Glu Asp Ser Ile Ser Gln Asn Gly

35 40 45

Thr Leu Thr Leu Ser Ala Gln Gly Ala Glu Lys Thr Phe Lys Val Gly

50 55 60

Asp Lys Asp Asn Ser Leu Asn Thr Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Phe Asp Phe Val Gln Lys Ile Glu Val Asp Gly Gln Thr Ile

85 90 95

Thr Leu Ala Ser Gly Glu Phe Gln Ile Tyr Lys Gln Asp His Ser Ala

100 105 110

Val Val Ala Leu Gln Ile Glu Lys Ile Asn Asn Pro Asp Lys Ile Asp

115 120 125

Ser Leu Ile Asn Gln Arg Ser Phe Leu Val Ser Gly Leu Gly Gly Glu

130 135 140

His Thr Ala Phe Asn Gln Leu Pro Ser Gly Lys Ala Glu Tyr His Gly

145 150 155 160

Lys Ala Phe Ser Ser Asp Asp Ala Gly Gly Lys Leu Thr Tyr Thr Ile

165 170 175

Asp Phe Ala Ala Lys Gln Gly His Gly Lys Ile Glu His Leu Lys Thr

180 185 190

Pro Glu Gln Asn Val Glu Leu Ala Ser Ala Glu Leu Lys Ala Asp Glu

195 200 205

Lys Ser His Ala Val Ile Leu Gly Asp Thr Arg Tyr Gly Ser Glu Glu

210 215 220

Lys Gly Thr Tyr His Leu Ala Leu Phe Gly Tyr Tyr Thr Lys Asp Thr

225 230 235 240

Asn Asn Asn Leu Thr Leu Val Pro Arg Ala Gln Glu Ile Ala Gly Ser

245 250 255

Ala Thr Val Lys Ile Arg Glu Lys Val His Glu Ile Gly Ile Ala Gly

260 265 270

Lys Gln

<210> 100

<211> 267

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Модифицированный полипептид

<400> 100

Cys Ser Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile Gly Ala Gly Leu

1 5 10 15

Ala Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp Lys Ser Leu Gln

20 25 30

Ser Leu Thr Leu Asp Gln Ser Val Arg Lys Asn Glu Lys Leu Lys Leu

35 40 45

Ala Ala Gln Gly Ala Glu Lys Thr Tyr Gly Asn Gly Asp Ser Leu Asn

50 55 60

Thr Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys Val Ser Arg Phe Asp Phe Ile Arg

65 70 75 80

Gln Ile Glu Val Asp Gly Gln Leu Ile Thr Leu Glu Ser Gly Glu Phe

85 90 95

Gln Ile Tyr Lys Gln Asp His Ser Ala Val Val Ala Leu Gln Ile Glu

100 105 110

Lys Ile Asn Asn Pro Asp Lys Ile Asp Ser Leu Ile Asn Gln Arg Ser

115 120 125

Phe Leu Val Ser Gly Leu Gly Gly Glu His Thr Ala Phe Asn Gln Leu

130 135 140

Pro Ser Gly Lys Ala Glu Tyr His Gly Lys Ala Phe Ser Ser Asp Asp

145 150 155 160

Ala Gly Gly Lys Leu Thr Tyr Thr Ile Asp Phe Ala Ala Lys Gln Gly

165 170 175

His Gly Lys Ile Glu His Leu Lys Thr Pro Glu Gln Asn Val Glu Leu

180 185 190

Ala Ser Ala Glu Leu Lys Ala Asp Glu Lys Ser His Ala Val Ile Leu

195 200 205

Gly Asp Thr Arg Tyr Gly Gly Glu Glu Lys Gly Thr Tyr His Leu Ala

210 215 220

Leu Phe Gly Tyr Tyr Thr Lys Asp Thr Asn Asn Asn Leu Thr Leu Val

225 230 235 240

Pro Arg Ala Gln Glu Ile Ala Gly Ser Ala Thr Val Lys Ile Arg Glu

245 250 255

Lys Val His Glu Ile Gly Ile Ala Gly Lys Gln

260 265

<210> 101

<211> 268

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Модифицированный полипептид

<400> 101

Cys Ser Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile Gly Ala Gly Leu

1 5 10 15

Ala Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp Lys Gly Leu Gln

20 25 30

Ser Leu Thr Leu Asp Gln Ser Val Arg Lys Asn Glu Lys Leu Lys Leu

35 40 45

Ala Ala Gln Tyr Tyr Thr Lys Asp Thr Asn Asn Asn Leu Thr Leu Val

50 55 60

Pro Ala Glu Lys Thr Tyr Gly Asn Gly Asp Ser Leu Asn Thr Gly Lys

65 70 75 80

Leu Lys Asn Asp Lys Val Ser Arg Phe Asp Phe Ile Arg Gln Ile Glu

85 90 95

Val Asp Gly Gln Leu Ile Thr Leu Glu Ser Gly Glu Phe Gln Val Tyr

100 105 110

Lys Gln Ser His Ser Ala Leu Thr Ala Phe Gln Thr Glu Gln Ile Gln

115 120 125

Asp Ser Glu His Ser Gly Lys Met Val Ala Lys Arg Gln Phe Arg Ile

130 135 140

Gly Asp Ile Ala Gly Glu His Thr Ser Phe Asp Lys Leu Pro Glu Gly

145 150 155 160

Gly Arg Ala Thr Tyr Arg Gly Thr Ala Phe Gly Ser Asp Asp Ala Gly

165 170 175

Gly Lys Leu Thr Tyr Thr Ile Asp Phe Ala Ala Lys Gln Gly Asn Gly

180 185 190

Lys Ile Glu His Leu Lys Ser Pro Glu Leu Asn Val Asp Leu Ala Ala

195 200 205

Ala Asp Ile Lys Pro Asp Gly Lys Arg His Ala Val Ile Ser Gly Ser

210 215 220

Val Leu Tyr Asn Gln Ala Glu Lys Gly Ser Tyr Ser Leu Gly Ile Phe

225 230 235 240

Gly Gly Lys Ala Gln Glu Val Ala Gly Ser Ala Glu Val Lys Thr Val

245 250 255

Asn Gly Ile Arg His Ile Gly Leu Ala Ala Lys Gln

260 265

<210> 102

<211> 274

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Модифицированный полипептид

<400> 102

Cys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile

1 5 10 15

Gly Thr Gly Leu Ala Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp

20 25 30

Lys Gly Leu Lys Ser Leu Thr Leu Glu Asp Ser Ile Ser Gln Asn Gly

35 40 45

Thr Leu Thr Leu Ser Ala Gln Tyr Tyr Thr Lys Asp Thr Asn Asn Asn

50 55 60

Leu Thr Leu Val Pro Ala Glu Lys Thr Phe Lys Val Gly Asp Lys Asp

65 70 75 80

Asn Ser Leu Asn Thr Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys Ile Ser Arg Phe

85 90 95

Asp Phe Val Gln Lys Ile Glu Val Asp Gly Gln Thr Ile Thr Leu Ala

100 105 110

Ser Gly Glu Phe Gln Ile Tyr Lys Gln Asp His Ser Ala Val Val Ala

115 120 125

Leu Gln Ile Glu Lys Ile Asn Asn Pro Asp Lys Ile Asp Ser Leu Ile

130 135 140

Asn Gln Arg Ser Phe Leu Val Ser Gly Leu Gly Gly Glu His Thr Ala

145 150 155 160

Phe Asn Gln Leu Pro Ser Gly Lys Ala Glu Tyr His Gly Lys Ala Phe

165 170 175

Ser Ser Asp Asp Ala Gly Gly Lys Leu Thr Tyr Thr Ile Asp Phe Ala

180 185 190

Ala Lys Gln Gly His Gly Lys Ile Glu His Leu Lys Thr Pro Glu Gln

195 200 205

Asn Val Glu Leu Ala Ser Ala Glu Leu Lys Ala Asp Glu Lys Ser His

210 215 220

Ala Val Ile Leu Gly Asp Thr Arg Tyr Gly Ser Glu Glu Lys Gly Thr

225 230 235 240

Tyr His Leu Ala Leu Phe Gly Asp Arg Ala Gln Glu Ile Ala Gly Ser

245 250 255

Ala Thr Val Lys Ile Arg Glu Lys Val His Glu Ile Gly Ile Ala Gly

260 265 270

Lys Gln

<210> 103

<211> 267

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Модифицированный полипептид

<400> 103

Cys Ser Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile Gly Ala Gly Leu

1 5 10 15

Ala Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp Lys Ser Leu Gln

20 25 30

Ser Leu Thr Leu Asp Gln Ser Val Arg Lys Asn Glu Lys Leu Lys Leu

35 40 45

Ala Ala Gln Tyr Tyr Thr Lys Asp Thr Asn Asn Asn Leu Thr Leu Val

50 55 60

Pro Ala Glu Lys Thr Tyr Gly Asn Gly Asp Ser Leu Asn Thr Gly Lys

65 70 75 80

Leu Lys Asn Asp Lys Val Ser Arg Phe Asp Phe Ile Arg Gln Ile Glu

85 90 95

Val Asp Gly Gln Leu Ile Thr Leu Glu Ser Gly Glu Phe Gln Ile Tyr

100 105 110

Lys Gln Asp His Ser Ala Val Val Ala Leu Gln Ile Glu Lys Ile Asn

115 120 125

Asn Pro Asp Lys Ile Asp Ser Leu Ile Asn Gln Arg Ser Phe Leu Val

130 135 140

Ser Gly Leu Gly Gly Glu His Thr Ala Phe Asn Gln Leu Pro Ser Gly

145 150 155 160

Lys Ala Glu Tyr His Gly Lys Ala Phe Ser Ser Asp Asp Ala Gly Gly

165 170 175

Lys Leu Thr Tyr Thr Ile Asp Phe Ala Ala Lys Gln Gly His Gly Lys

180 185 190

Ile Glu His Leu Lys Thr Pro Glu Gln Asn Val Glu Leu Ala Ser Ala

195 200 205

Glu Leu Lys Ala Asp Glu Lys Ser His Ala Val Ile Leu Gly Asp Thr

210 215 220

Arg Tyr Gly Gly Glu Glu Lys Gly Thr Tyr His Leu Ala Leu Phe Gly

225 230 235 240

Asp Arg Ala Gln Glu Ile Ala Gly Ser Ala Thr Val Lys Ile Arg Glu

245 250 255

Lys Val His Glu Ile Gly Ile Ala Gly Lys Gln

260 265

<210> 104

<211> 268

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Модифицированный полипептид

<400> 104

Cys Ser Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile Gly Ala Gly Leu

1 5 10 15

Ala Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp Lys Gly Leu Gln

20 25 30

Ser Leu Thr Leu Asp Gln Ser Val Arg Lys Asn Glu Lys Leu Lys Leu

35 40 45

Ala Ala Gln Gly Ala Glu Lys Thr Tyr Gly Asn Gly Asp Ser Leu Asn

50 55 60

Thr Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys Val Ser Arg Phe Asp Phe Ile Arg

65 70 75 80

Gln Ile Glu Val Asp Gly Gln Leu Ile Thr Leu Glu Ser Gly Glu Phe

85 90 95

Gln Val Tyr Lys Gln Ser His Ser Ala Leu Thr Ala Phe Gln Thr Glu

100 105 110

Gln Ile Gln Asp Ser Tyr Tyr Thr Lys Asp Thr Asn Asn Asn Leu Thr

115 120 125

Leu Val Pro His Ser Gly Lys Met Val Ala Lys Arg Gln Phe Arg Ile

130 135 140

Gly Asp Ile Ala Gly Glu His Thr Ser Phe Asp Lys Leu Pro Glu Gly

145 150 155 160

Gly Arg Ala Thr Tyr Arg Gly Thr Ala Phe Gly Ser Asp Asp Ala Gly

165 170 175

Gly Lys Leu Thr Tyr Thr Ile Asp Phe Ala Ala Lys Gln Gly Asn Gly

180 185 190

Lys Ile Glu His Leu Lys Ser Pro Glu Leu Asn Val Asp Leu Ala Ala

195 200 205

Ala Asp Ile Lys Pro Asp Gly Lys Arg His Ala Val Ile Ser Gly Ser

210 215 220

Val Leu Tyr Asn Gln Ala Glu Lys Gly Ser Tyr Ser Leu Gly Ile Phe

225 230 235 240

Gly Gly Lys Ala Gln Glu Val Ala Gly Ser Ala Glu Val Lys Thr Val

245 250 255

Asn Gly Ile Arg His Ile Gly Leu Ala Ala Lys Gln

260 265

<210> 105

<211> 274

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Модифицированный полипептид

<400> 105

Cys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile

1 5 10 15

Gly Thr Gly Leu Ala Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp

20 25 30

Lys Gly Leu Lys Ser Leu Thr Leu Glu Asp Ser Ile Ser Gln Asn Gly

35 40 45

Thr Leu Thr Leu Ser Ala Gln Gly Ala Glu Lys Thr Phe Lys Val Gly

50 55 60

Asp Lys Asp Asn Ser Leu Asn Thr Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Phe Asp Phe Val Gln Lys Ile Glu Val Asp Gly Gln Thr Ile

85 90 95

Thr Leu Ala Ser Gly Glu Phe Gln Ile Tyr Lys Gln Asp His Ser Ala

100 105 110

Val Val Ala Leu Gln Ile Glu Lys Ile Asn Asn Pro Tyr Tyr Thr Lys

115 120 125

Asp Thr Asn Asn Asn Leu Thr Leu Val Pro Lys Ile Asp Ser Leu Ile

130 135 140

Asn Gln Arg Ser Phe Leu Val Ser Gly Leu Gly Gly Glu His Thr Ala

145 150 155 160

Phe Asn Gln Leu Pro Ser Gly Lys Ala Glu Tyr His Gly Lys Ala Phe

165 170 175

Ser Ser Asp Asp Ala Gly Gly Lys Leu Thr Tyr Thr Ile Asp Phe Ala

180 185 190

Ala Lys Gln Gly His Gly Lys Ile Glu His Leu Lys Thr Pro Glu Gln

195 200 205

Asn Val Glu Leu Ala Ser Ala Glu Leu Lys Ala Asp Glu Lys Ser His

210 215 220

Ala Val Ile Leu Gly Asp Thr Arg Tyr Gly Ser Glu Glu Lys Gly Thr

225 230 235 240

Tyr His Leu Ala Leu Phe Gly Asp Arg Ala Gln Glu Ile Ala Gly Ser

245 250 255

Ala Thr Val Lys Ile Arg Glu Lys Val His Glu Ile Gly Ile Ala Gly

260 265 270

Lys Gln

<210> 106

<211> 267

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Модифицированный полипептид

<400> 106

Cys Ser Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile Gly Ala Gly Leu

1 5 10 15

Ala Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp Lys Ser Leu Gln

20 25 30

Ser Leu Thr Leu Asp Gln Ser Val Arg Lys Asn Glu Lys Leu Lys Leu

35 40 45

Ala Ala Gln Gly Ala Glu Lys Thr Tyr Gly Asn Gly Asp Ser Leu Asn

50 55 60

Thr Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys Val Ser Arg Phe Asp Phe Ile Arg

65 70 75 80

Gln Ile Glu Val Asp Gly Gln Leu Ile Thr Leu Glu Ser Gly Glu Phe

85 90 95

Gln Ile Tyr Lys Gln Asp His Ser Ala Val Val Ala Leu Gln Ile Glu

100 105 110

Lys Ile Asn Asn Pro Tyr Tyr Thr Lys Asp Thr Asn Asn Asn Leu Thr

115 120 125

Leu Val Pro Lys Ile Asp Ser Leu Ile Asn Gln Arg Ser Phe Leu Val

130 135 140

Ser Gly Leu Gly Gly Glu His Thr Ala Phe Asn Gln Leu Pro Ser Gly

145 150 155 160

Lys Ala Glu Tyr His Gly Lys Ala Phe Ser Ser Asp Asp Ala Gly Gly

165 170 175

Lys Leu Thr Tyr Thr Ile Asp Phe Ala Ala Lys Gln Gly His Gly Lys

180 185 190

Ile Glu His Leu Lys Thr Pro Glu Gln Asn Val Glu Leu Ala Ser Ala

195 200 205

Glu Leu Lys Ala Asp Glu Lys Ser His Ala Val Ile Leu Gly Asp Thr

210 215 220

Arg Tyr Gly Gly Glu Glu Lys Gly Thr Tyr His Leu Ala Leu Phe Gly

225 230 235 240

Asp Arg Ala Gln Glu Ile Ala Gly Ser Ala Thr Val Lys Ile Arg Glu

245 250 255

Lys Val His Glu Ile Gly Ile Ala Gly Lys Gln

260 265

<210> 107

<211> 268

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Модифицированный полипептид

<400> 107

Cys Ser Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile Gly Ala Gly Leu

1 5 10 15

Ala Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp Lys Gly Leu Gln

20 25 30

Ser Leu Thr Leu Asp Gln Ser Val Arg Lys Asn Glu Lys Leu Lys Leu

35 40 45

Ala Ala Gln Gly Ala Glu Lys Thr Tyr Gly Asn Gly Asp Ser Leu Asn

50 55 60

Thr Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys Val Ser Arg Phe Asp Phe Ile Arg

65 70 75 80

Gln Ile Glu Val Asp Gly Gln Leu Ile Thr Leu Glu Ser Gly Glu Phe

85 90 95

Gln Val Tyr Lys Gln Ser His Ser Ala Leu Thr Ala Phe Gln Thr Glu

100 105 110

Gln Ile Gln Asp Ser Glu His Ser Gly Lys Met Val Ala Lys Arg Gln

115 120 125

Phe Arg Ile Gly Asp Ile Ala Gly Glu His Thr Ser Phe Asp Lys Leu

130 135 140

Pro Glu Gly Gly Arg Ala Thr Tyr Arg Gly Thr Ala Phe Gly Ser Asp

145 150 155 160

Asp Ala Gly Gly Lys Leu Thr Tyr Thr Ile Asp Phe Ala Ala Lys Gln

165 170 175

Gly Asn Gly Lys Ile Glu His Leu Lys Ser Pro Glu Leu Asn Val Asp

180 185 190

Leu Ala Ala Ala Asp Ile Lys Pro Asp Gly Lys Arg His Ala Val Ile

195 200 205

Ser Gly Ser Val Leu Tyr Asn Gln Ala Glu Lys Gly Ser Tyr Ser Leu

210 215 220

Gly Ile Phe Gly Gly Lys Ala Gln Glu Val Ala Gly Ser Ala Glu Val

225 230 235 240

Lys Thr Val Tyr Tyr Thr Lys Asp Thr Asn Asn Asn Leu Thr Leu Val

245 250 255

Pro Gly Ile Arg His Ile Gly Leu Ala Ala Lys Gln

260 265

<210> 108

<211> 274

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Модифицированный полипептид

<400> 108

Cys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile

1 5 10 15

Gly Thr Gly Leu Ala Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp

20 25 30

Lys Gly Leu Lys Ser Leu Thr Leu Glu Asp Ser Ile Ser Gln Asn Gly

35 40 45

Thr Leu Thr Leu Ser Ala Gln Gly Ala Glu Lys Thr Phe Lys Val Gly

50 55 60

Asp Lys Asp Asn Ser Leu Asn Thr Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Phe Asp Phe Val Gln Lys Ile Glu Val Asp Gly Gln Thr Ile

85 90 95

Thr Leu Ala Ser Gly Glu Phe Gln Ile Tyr Lys Gln Asp His Ser Ala

100 105 110

Val Val Ala Leu Gln Ile Glu Lys Ile Asn Asn Pro Asp Lys Ile Asp

115 120 125

Ser Leu Ile Asn Gln Arg Ser Phe Leu Val Ser Gly Leu Gly Gly Glu

130 135 140

His Thr Ala Phe Asn Gln Leu Pro Ser Gly Lys Ala Glu Tyr His Gly

145 150 155 160

Lys Ala Phe Ser Ser Asp Asp Ala Gly Gly Lys Leu Thr Tyr Thr Ile

165 170 175

Asp Phe Ala Ala Lys Gln Gly His Gly Lys Ile Glu His Leu Lys Thr

180 185 190

Pro Glu Gln Asn Val Glu Leu Ala Ser Ala Glu Leu Lys Ala Asp Glu

195 200 205

Lys Ser His Ala Val Ile Leu Gly Asp Thr Arg Tyr Gly Ser Glu Glu

210 215 220

Lys Gly Thr Tyr His Leu Ala Leu Phe Gly Asp Arg Ala Gln Glu Ile

225 230 235 240

Ala Gly Ser Ala Thr Val Lys Ile Arg Tyr Tyr Thr Lys Asp Thr Asn

245 250 255

Asn Asn Leu Thr Leu Val Pro Lys Val His Glu Ile Gly Ile Ala Gly

260 265 270

Lys Gln

<210> 109

<211> 267

<212> БЕЛОК

<213> Искусственная последовательность

<220>

<223> Модифицированный полипептид

<400> 109

Cys Ser Ser Gly Gly Gly Gly Val Ala Ala Asp Ile Gly Ala Gly Leu

1 5 10 15

Ala Asp Ala Leu Thr Ala Pro Leu Asp His Lys Asp Lys Ser Leu Gln

20 25 30

Ser Leu Thr Leu Asp Gln Ser Val Arg Lys Asn Glu Lys Leu Lys Leu

35 40 45

Ala Ala Gln Gly Ala Glu Lys Thr Tyr Gly Asn Gly Asp Ser Leu Asn

50 55 60

Thr Gly Lys Leu Lys Asn Asp Lys Val Ser Arg Phe Asp Phe Ile Arg

65 70 75 80

Gln Ile Glu Val Asp Gly Gln Leu Ile Thr Leu Glu Ser Gly Glu Phe

85 90 95

Gln Ile Tyr Lys Gln Asp His Ser Ala Val Val Ala Leu Gln Ile Glu

100 105 110

Lys Ile Asn Asn Pro Asp Lys Ile Asp Ser Leu Ile Asn Gln Arg Ser

115 120 125

Phe Leu Val Ser Gly Leu Gly Gly Glu His Thr Ala Phe Asn Gln Leu

130 135 140

Pro Ser Gly Lys Ala Glu Tyr His Gly Lys Ala Phe Ser Ser Asp Asp

145 150 155 160

Ala Gly Gly Lys Leu Thr Tyr Thr Ile Asp Phe Ala Ala Lys Gln Gly

165 170 175

His Gly Lys Ile Glu His Leu Lys Thr Pro Glu Gln Asn Val Glu Leu

180 185 190

Ala Ser Ala Glu Leu Lys Ala Asp Glu Lys Ser His Ala Val Ile Leu

195 200 205

Gly Asp Thr Arg Tyr Gly Gly Glu Glu Lys Gly Thr Tyr His Leu Ala

210 215 220

Leu Phe Gly Asp Arg Ala Gln Glu Ile Ala Gly Ser Ala Thr Val Lys

225 230 235 240

Ile Arg Tyr Tyr Thr Lys Asp Thr Asn Asn Asn Leu Thr Leu Val Pro

245 250 255

Lys Val His Glu Ile Gly Ile Ala Gly Lys Gln

260 265

<---

1. Модифицированный белок, связывающий фактор H (fHbp), содержащий fHbp дикого типа или гонококковый ортолог дикого типа fHbp (Ghfp), или их вариант, имеющий по меньшей мере 75% идентичности с любой из последовательностей, представленных в SEQ ID NO: 1-13, который дополнительно модифицирован путем добавления петли экзогенного пептида, отличающийся тем, что петля экзогенного пептида имеет длину 8-20 аминокислот и при этом петля экзогенного пептида встроена в аминокислотном положении, которое соответствует любому из аминокислотных остатков с номерами 49-54, 83-88, 114-124, 199-206, 227-233 и 240-246 в SEQ ID NO: 1 или эквивалентных остатков в любой из SEQ ID NO: 2-13; и при этом экзогенная петля содержит последовательность, выбранную из любой из SEQ ID NO: 45-79.

2. Модифицированный белок, связывающий фактор Н, по п. 1, отличающийся тем, что модифицированный fHbp модифицирован таким образом, что он не способен связывать фактор Н, или по меньшей мере обладает пониженной активностью в отношении связывания фактора Н.

3. Модифицированный белок, связывающий фактор Н, по п. 1 или 2, отличающийся тем, что петля(и) экзогенного пептида имеет последовательность интегрального белка наружной мембраны.

4. Модифицированный белок, связывающий фактор H, по любому из пп. 1-3, отличающийся тем, что петля(и) экзогенного пептида имеет последовательность прокариотического полипептида.

5. Модифицированный белок, связывающий фактор H, по п. 4, отличающийся тем, что петля(и) экзогенного пептида представляет собой менингококковый белок.

6. Модифицированный белок, связывающий фактор H, по п. 4, отличающийся тем, что петля(и) экзогенного пептида представляет собой гонококковый белок.

7. Модифицированный белок, связывающий фактор H, по любому из пп. 1-6, отличающийся тем, что петля(и) экзогенного пептида содержит фрагмент PorA.

8. Модифицированный белок, связывающий фактор H, по любому из пп. 1-7, отличающийся тем, что петля(и) экзогенного пептида выбрана из любой из петель 1-7 PorA или их вариантов, включающих не более 1, 2, 3, 4 или 5 аминокислотных добавлений, делеций или замен; и их комбинаций; или отличающийся тем, что петля(и) экзогенного пептида выбрана из любой из петель PorA, содержащих последовательность в соответствии с любой из SEQ ID NO: 45-79, или их вариантов, включающих не более 1, 2, 3, 4 или 5 аминокислотных добавлений, делеций или замен.

9. Модифицированный белок, связывающий фактор H, по любому из пп. 1-8, отличающийся тем, что модифицированный fHbp содержит последовательность, представленную в любой из SEQ ID NO: 1-13; или ее вариант, имеющий по меньшей мере 75% идентичности с любой из последовательностей, представленных в SEQ ID NO: 1-13, при этом по меньшей мере одна петля экзогенного пептида представляет собой дополнительную вставку в пределах последовательности, представленной в любой из SEQ ID NО: 1-13, или ее варианта, имеющего по меньшей мере 75% идентичности с любой из последовательностей, представленных в SEQ ID NO: 1-13.

10. Нуклеиновая кислота, кодирующая модифицированный fHbp, по любому из пп. 1-9.

11. Нуклеиновая кислота по п. 10, отличающаяся тем, что нуклеиновая кислота представляет собой вектор, дополнительно необязательно вирусный вектор.

12. Композиция, содержащая терапевтически эффективное количество модифицированного fHbp, по любому из пп. 1-9 или нуклеиновую кислоту по пп. 10-11, и фармацевтически приемлемый носитель, причем композиция предназначена для индукции иммунного ответа против петли экзогенного пептида.

13. Композиция по п. 12, отличающаяся тем, что композиция содержит две или более различных молекулы модифицированного fHbp.

14. Композиция по любому из пп. 12, 13, отличающаяся тем, что композиция, кроме того, содержит адъювант.

15. Композиция по любому из пп. 12-14, отличающаяся тем, что композиция, кроме того, содержит по меньшей мере одну другую профилактически или терапевтически активную молекулу; и необязательно при этом, что по меньшей мере одна другая профилактически или терапевтически активная молекула представляет собой: моновалентную вакцину, содержащую конъюгат белок: капсульный полисахарид;

или конъюгированную вакцину, при этом антиген(ы), содержащий каркас fHbp, несущий петли экзогенного пептида, вводят в качестве молекулы белка-носителя в конъюгированную вакцину.

16. Применение модифицированного fHbp по любому из пп. 1-9, нуклеиновой кислоты по п. 10 или 11 или композиции по любому из пп. 12-15 для лечения или предупреждения возникновения менингококковой инфекции или колонизации у субъекта.

17. Применение белка, связывающего фактор H (fHbp), по любому из пп. 1-9 в качестве каркаса дисплея эпитопа.