Циклические динуклеотиды в качестве агонистов sting

Авторы патента:

БЕЙГЕЛЬМАН, Леонид (US)

БИНЬЯН, Жилль (US)

КОННОЛЛИ, Питер Дж. (US)

ЭДВАРДС, Джеймс Патрик (US)

ЭМАНУЭЛ, Стюарт (US)

ЛАКЕРР, Сильвия (US)

РИХТЕР, Марк (US)

СХЕПЕНС, Вим Герт Грит (BE)

ТАТИКОНДА, Сантош Кумар (US)

ТЮРИНГ, Йоханнес Вильхельмус Йохн Фитцжеральд (BE)

ВЬЕЙЕВУА, Марсель (BE)

ВАН, Гуани (US)

ЧЖУН, Минхун (US)

C07H21/04 - с дезоксирибозилом в качестве сахаридного радикала

C07H19/213 - содержащим циклический фосфат

C07D519/00 - Гетероциклические соединения, содержащие несколько систем из двух или более релевантных гетероциклических колец, конденсированных непосредственно или с общей карбоциклической системой, не отнесенные к группам C07D453/00 или C07D455/00

A61P35/00 - Противоопухолевые средства

A61P29/00 - Анальгетики нецентрального действия, жаропонижающие или противовоспалительные средства, например противоревматические средства; нестероидные противовоспалительные средства (НПВС)

A61K45/06 - Лекарственные препараты, содержащие активные ингредиенты, не отнесенные к группам A61K 31/00- A61K 41/00

A61K31/7084 - соединения, содержащие два нуклеозида или нуклеотида, например никотинамид-аденин динуклеотид, флавин-аденин динуклеотид

Владельцы патента RU 2776060:

ЯНССЕН БАЙОТЕК, ИНК. (US)

Группа изобретений относится к области органической химии и фармацевтики и направлена на лечение заболеваний, синдромов или расстройств, на которые влияет модулирование STING. Описано соединение формулы (I), в котором B₁ и B₂ независимо выбраны из группы, состоящей из b2, b5, b6, b7, b16, b17, b18, b21, b26, b27 и b28, значения R_1a, R_1b, R_1c, R_2a, R_2c, R_2b, X₁, X₂, Y и Y_1, Z и Z₁, М и M₁, R₄, R₅ такие, как раскрыто в формуле изобретения. Кроме того, описаны конкретные соединения и промежуточное соединение, фармацевтическая композиция для лечения заболевания, синдрома или состояния, модулируемого STING, содержащая терапевтически эффективное количество указанных выше соединений, способ лечения заболевания, синдрома или состояния, модулируемого STING, включающий введение пациенту терапевтически эффективного количества описанных соединений, и способ лечения заболевания, синдрома или состояния, где на указанное заболевание, синдром или состояние влияет агонизм в отношении STING. Также описано применение указанных соединений для получения лекарственного средства для лечения заболевания, синдрома или состояния, модулируемого STING, и применение соединений в способе лечения заболевания, синдрома или состояния, модулируемого STING. Технический результат: обеспечение эффективных агонистов белка STING. 8 н. и 13 з.п. ф-лы, 2 табл., 58 пр.

ПЕРЕКРЕСТНЫЕ ССЫЛКИ НА СМЕЖНЫЕ ЗАЯВКИ

Данная заявка испрашивает приоритет по предварительной заявке на патент США № 62/599,111, поданной 15 декабря 2017 г., которая полностью включена в настоящий документ путем ссылки.

ОБЛАСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение относится к новым соединениям, представляющим собой агонисты белка STING (стимулятор генов интерферонов) и используемым при лечении расстройств, на которые оказывает влияние модуляция белка STING. Изобретение также относится к фармацевтическим композициям, содержащим одно или более таких соединений, процессам получения таких соединений и композиций и применению таких соединений или фармацевтических композиций для лечения различных заболеваний, синдромов и расстройств. Изобретение может участвовать в активации нижележащего сигнального пути, вследствие которой дополнительно происходит активация вторичных мессенджеров и факторов роста, и в продукции интерферона, участвующего во врожденном и адаптивном иммунитете. Более конкретно, настоящее изобретение относится к применению таких соединений или фармацевтических композиций для лечения различных инфекций, заболеваний, синдромов и расстройств, включая, без ограничений, меланому, рак толстой кишки, рак молочной железы, рак предстательной железы, рак легкого, фибросаркому, а также для противовирусной терапии.

ПРЕДПОСЫЛКИ СОЗДАНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ

STING (стимулятор генов интерферона), также известный как TMEM173, Mita, MPYS и ERIS, представляет собой трансмембранный рецептор, расположенный внутри клетки, и ключевой датчик цитозольных нуклеиновых кислот (Zhong B, et al. «The Adaptor Protein MITA Links Virus-Sensing Receptors to IRF3 Transcription Factor Activation». Immunity. 2008. vol. 29; 538-550). В недавних исследованиях были выявлены биологические свойства STING и его роль в мобилизации врожденного иммунного ответа, приводящего к возникновению эффективной противоопухолевой активности в мышиных моделях. Благодаря активации пути STING происходит продукция интерферонов типа I (главным образом, ИФН-α и ИФН-β), индуцируемых через сигнальный путь IRF3 (интерферон - регулирующий фактор 3). Считается, что активация IRF3 опосредована TBK1, который рекрутирует и фосфорилирует IRF3, таким образом формируя IRF3-гомодимер, способный проникать в ядро для транскрипции интерферона типа I и других генов (Liu S, et al. «Phosphorylation of innate immune adaptor proteins MAYS, STING, and TRIP induces IRF3 activation» Science. 2015: 2630-2637). Кроме того, TBK1 активирует энхансер легкой цепи ядерного фактора каппа в активированных B-клетках, благодаря которому происходит продукция провоспалительных цитокинов ((IL-1α, IL-1β, IL-2, IL-6, ФНО-α, и т. д.), посредством онкогенного фактора транскрипции NF-_KB. Кроме того, STING активирует STAT6 (сигнальный трансдуктор и активатор транскрипции 6) и индуцирует (клетки типа Th2), увеличивает (IL-12) или уменьшает (IL-10) выработку различных цитокинов, включая хемокины CCL2, CCL20, и CCL26 (Chen H, et al. «Activation of STAT6 by STING Is Critical for Antiviral Innate Immunity» Cell. 2011, vol. 14: 433-446). Кроме того, было обнаружено, что прямое фосфорилирование STING по Ser366 при активации происходит через TBK1 или ULK1 (Corrales, L. et al «Direct activation of STING in the tumor microenvironment leads to potent and systemic tumor regression and immunity» Cell Reports, 2015, vol. 11: 1-13; Konno, H. et al. «Cyclic dinucleotides trigger ULK1 (ATG1) phosphorylation of STING to prevent sustained innate immune signaling» Cell, 2013, vol. 155: 688-698).

Выявлен природный лиганд, который связывается со STING и активирует его (2’,3’)циклический гуанозинмонофосфат-аденозинмонофосфат (2’,3’-cGAMP), а также фермент, ответственный за синтез (cGAS, также известный как C6orf150 или MB21D1), что обеспечивает возможность модуляции этого пути. cGAMP представляет собой высокоаффинный лиганд STING, продуцируемый клетками млекопитающих, который выступает в качестве эндогенного вторичного мессенджера для активации пути STING. Он представляет собой циклический динуклеотид с уникальной 2’, 3’- связью, которую cGAS образует в присутствии экзогенной двухцепочечной ДНК (например, высвобожденной при вторжении бактерий, вирусов или простейших) или собственной ДНК млекопитающих (Wu et al, 2013; Sun, L. et al. «Cyclic GMP-AMP Synthase Is a Cytosolic DNA Sensor That Activates the Type I Interferon Pathway» Science, 2013, vol. 339: 786-791; Bhat N and Fitzgerald KA. «Recognition of Cytosolic DNA by cGAS and other STING-dependent sensors». Ear J Immunol 2014 Mar; 44(3):634-40). Активация STING может также происходить при связывании экзогенных (3’,3) циклических динуклеотидов (c-ди-GMP, c-ди-AMP и 3’3’-cGAMP), которые высвобождаются вторгшимися бактериями (Zhang X, et al. «Cyclic GMP-AMP Containing Mixed Phosphodiester Linkages Is An Endogenous High-Affinity Ligand for STING» Molecular Cell, 2013, vol. 51: 226-235; Danilchanka, O and Mekalanos, JJ. «Cyclic Dinucleotides and the Innate Immune Response» Cell. 2013. vol. 154: 962-970).

При активации пути STING инициируется иммунный ответ, вследствие чего происходит генерация специфических киллерных T-клеток, благодаря которым возможно усыхание опухолей и обеспечение длительного иммунитета без рецидивов. Поразительная противоопухолевая активность, полученная с помощью агонистов STING в доклинических моделях, вызвала значительный интерес к данной мишени и низкомолекулярным соединениям, которые могут модулировать путь STING и обладают потенциалом как для лечения рака, так и подавления аутоиммунных заболеваний.

Активация пути STING также участвует в противовирусном ответе. В отсутствие STING потеря функционального ответа либо на клеточном уровне, либо на уровне организма означает неспособность контролировать вирусную нагрузку. В случае активации пути STING инициируется иммунный ответ, вследствие чего продуцируются противовирусные и провоспалительные цитокины, которые борются с вирусом и мобилизуют врожденную и адаптивную части иммунной системы. В конечном счете вырабатывается долговременный иммунитет к патогенному вирусу. Поразительная противовирусная активность, полученная с помощью агонистов STING в доклинических моделях, вызвала значительный интерес к данной мишени и низкомолекулярным соединениям, которые могут модулировать путь STING и обладают потенциалом для лечения хронических вирусных инфекций, таких как гепатит В.

Хроническая инфекция вируса гепатита B (ВГВ) представляет собой глобальную проблему здравоохранения и поражает более 5% населения планеты (более 350 миллионов человек по всему миру и 1,25 миллиона субъектов в США). Несмотря на наличие определенных вакцин против ВГВ и видов лечения, влияние хронической инфекции ВГВ по-прежнему остается серьезной нерешенной глобальной медицинской проблемой в связи с недостаточными возможностями лечения и неизменной частотой появления новых инфекций в большинстве развивающихся стран. Текущие способы лечения ограничены только двумя классами агентов: интерфероном-альфа и аналогами нуклеозидов, играющими роль ингибиторов вирусной полимеразы. Однако ни одно из данных лекарственных средств не обеспечивает излечения заболевания, при этом их влияние ограничено из-за резистентности к лекарственному средству, низкой эффективности и проблем переносимости. Низкие частоты выздоровления от ВГВ по меньшей мере частично объясняются тем фактом, что полного подавления продукции вируса сложно достичь с помощью одного противовирусного агента. Однако вследствие устойчивого подавления ДНК ВГВ замедляется прогрессирование заболевания печени и удается предотвратить развитие гепатоцеллюлярной карциномы. Текущая терапия инфицированных ВГВ пациентов направлена на снижение сывороточной ДНК ВГВ до низких или необнаруживаемых концентраций и в конечном счете на замедление или предотвращение развития цирроза печени и гепатоцеллюлярной карциномы. В данной области, следовательно, существует потребность в терапевтических агентах, которые могут усиливать подавление продукции вируса и которые могут обеспечивать лечение, облегчение или предотвращение инфекции ВГВ. Посредством введения таких терапевтических агентов инфицированному ВГВ пациенту либо в качестве монотерапии, либо в комбинации с другими (или вспомогательными) способами лечения ВГВ можно существенно снижать вирусную нагрузку, улучшать прогноз, замедлять прогрессирование заболевания и повышать показатели сероконверсии.

Благодаря потенциальным терапевтическим преимуществам, связанным с усилением как врожденного, так и адаптивного иммунитета, STING представляет собой перспективную терапевтическую мишень со впечатляющей активностью как по отдельности, так и в комбинации с другими видами иммунотерапии.

ИЗЛОЖЕНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее изобретение относится к соединениям формулы (I):

в которой:

B₁ и B₂ независимо выбраны из группы, состоящей из b1, b2, b3, b4, b5, b6, b7, b8, b9, b10, b11, b12, b13, b14, b15, b16, b17, b18, b19, b20, b21, b22, b23, b24, b25, b26, b27, b28, b29, b30, b31, b32 и b33;

R_1a независимо выбран из водорода; гидрокси; фтора; C_1-3 алкокси, необязательно независимо замещенного 1-7 галогеновыми заместителями или метокси; C_3-6 алкенилокси; C_2-6 алкинилокси; гидрокси(C_1-3)алкокси; или C_1-3 алкила, необязательно независимо замещенного 1-3 заместителями, выбранными из фтора, хлора, брома, йода или гидрокси;

R_1b независимо выбран из водорода, фтора или гидрокси; при условии, что, когда R_1b представляет собой фтор, R_1a представляет собой водород или фтор;

R_1c независимо выбран из водорода или метила;

R_2a независимо выбран из водорода; гидрокси; фтора; C_1-3 алкокси, необязательно независимо замещенного 1-7 галогеновыми заместителями или метокси; C_3-6 алкенилокси; C_2-6 алкинилокси; гидрокси(C_1-3)алкокси; или C_1-3 алкила, необязательно независимо замещенного 1-3 заместителями, выбранными из фтора, хлора, брома, йода или гидрокси; и R₃ представляет собой водород;

или R_2a представляет собой -O- и R_2c представляет собой -CH₂-; так, что R_2a, R_2c и атомы, к которым они присоединены, формируют 5-членное кольцо;

R_2b независимо выбран из водорода, фтора или гидрокси; при условии, что, когда R_2b представляет собой фтор, R_2a представляет собой водород или фтор;

R_2c независимо выбран из водорода, фтора, CH₃ или CH₂F;

X₁ и X₂ независимо выбраны из группы, состоящей из O, S и CH₂;

каждый из Y и Y₁ независимо отсутствует или выбран из группы, состоящей из O и NH;

Z и Z₁ независимо выбраны из группы, состоящей из O и NH;

один из M и M₁ представляет собой , а другой из M и M₁ независимо выбран из ;

так, что когда M представляет собой , один из Y и Z представляет собой NH, а другой из Y и Z представляет собой O;

и так, что M₁ представляет собой , один из Y₁ и Z₁ представляет собой NH, а другой из Y₁ и Z₁ представляет собой O;

R₄ независимо выбран из группы, состоящей из гидрокси, метила, BH3 и -SR₅; где R₅ независимо выбран из группы, состоящей из водорода, -CH₂O(O)R₆, -CH₂OC(O)OR6, -CH₂CH₂SC(O)R₆ и -CH₂CH₂S-SCH₂R₆;

R₆ независимо выбран из группы, состоящей из C_6-10 арила, гетероарила, гетероциклоалкила, C_3-12 циклоалкила и C_1-20 алкила, необязательно независимо замещенных 1-5 фтор- или гидрокси-заместителями, C_1-6 алкилом, C_6-10 арилом или C_3-12 циклоалкилом;

или его энантиомера, диастереомера или фармацевтически приемлемой солевой формы;

при условии, что, когда каждый из B₁ и B₂ представляет собой b6, и Z-M-Y представляет собой OS(O₂)NH, и Y₁-M_1-Z₁ представляет собой OP(O)(OH)O или OP(O)(SH)O, R_1a отличается от OH;

при условии, что соединение формулы (I) отличается от соединения, в котором B₂ представляет собой b6; X₂ представляет собой O; R_2a представляет собой OCH₃; R_2b представляет собой H; R_2c представляет собой H; Z-M-Y представляет собой OS(O)₂NH; Y₁-M₁-Z₁ представляет собой OP(O)(OH)O; B₁ представляет собой b7; X₁ представляет собой O; R_1a представляет собой OCH₃; R_1b представляет собой H; а R_1c представляет собой H;

при условии, что соединение формулы (I) отличается от соединения, в котором B₂ представляет собой b6; X₂ представляет собой O; R_2a представляет собой F; R_2b представляет собой H; R_2c представляет собой H; Z-M-Y представляет собой (*R)OP(O)(SH)O; Y₁-M₁-Z₁ представляет собой NHS(O)₂O; B₁ представляет собой b21; X₁ представляет собой O; R_1a представляет собой OH; R_1b представляет собой H; а R_1c представляет собой H;

при условии, что соединение формулы (I) отличается от соединения, в котором B₂ представляет собой b30; X₂ представляет собой O; R_2a представляет собой H; R_2b представляет собой H; R_2c представляет собой H; Z-M-Y представляет собой OS(O)₂NH; Y₁-M₁-Z₁ представляет собой OP(O)(OH)O; B₁ представляет собой b7; X₁ представляет собой O; R_1a представляет собой OCH₃; R_1b представляет собой H; а R_1c представляет собой H.

В настоящем изобретении также обеспечена фармацевтическая композиция, содержащая фармацевтически приемлемый носитель, фармацевтически приемлемый эксципиент и/или фармацевтически приемлемый разбавитель и соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую солевую форму, или состоящая и/или по существу состоящая из них.

Кроме того, предложены процессы получения фармацевтической композиции, содержащей смесь соединения формулы (I) и фармацевтически приемлемый носитель, фармацевтически приемлемый эксципиент и/или фармацевтически приемлемый разбавитель или состоящей и/или по существу состоящей из них.

В настоящем изобретении дополнительно предложены способы лечения или облегчения вирусной инфекции, заболевания, синдрома или состояния у субъекта, включая млекопитающее и/или человека, у которого на вирусную инфекцию, заболевание, синдром или состояние, выбранные из группы, состоящей из меланомы, рака толстой кишки, рака молочной железы, рака предстательной железы, рака легких, фибросаркомы и гепатита В, влияет агонизм STING, с использованием соединения формулы (I).

В настоящем изобретении дополнительно предложены способы лечения или облегчения вирусной инфекции, заболевания, синдрома или состояния у субъекта, включая млекопитающее и/или человека, выбранные из группы, состоящей из меланомы, рака толстой кишки, рака молочной железы, рака предстательной железы, рака легких, фибросаркомы и гепатита В, с использованием соединения формулы (I).

Настоящее изобретение также относится к применению любого из соединений, описанных в настоящем документе, при получении лекарственного средства, где лекарственное средство получают для лечения у пациента вирусной инфекции, заболевания, синдрома или состояния, на которое оказывает влияние агонизм STING, выбранных из группы, состоящей из меланомы, рака толстой кишки, рака молочной железы, рака предстательной железы, рака легкого, фибросаркомы и гепатита B.

Настоящее изобретение также относится к применению любого из соединений, описанных в настоящем документе, при получении лекарственного средства, где лекарственное средство получают для лечения у пациента вирусной инфекции, заболевания, синдрома или состояния, выбранного из группы, состоящей из меланомы, рака толстой кишки, рака молочной железы, рака предстательной железы, рака легкого, фибросаркомы и гепатита B.

Настоящее изобретение также относится к получению замещенных производных циклического динуклеотида, которые действуют в качестве селективных агонистов STING.

Примерами изобретения являются способы лечения вирусной инфекции, заболевания, синдрома или состояния, модулируемые STING, выбранных из группы, состоящей из меланомы, рака толстой кишки, рака молочной железы, рака предстательной железы, рака легкого, фибросаркомы и гепатита B, включающие введение пациенту терапевтически эффективного количества любого из описанных выше соединений или фармацевтических композиций.

Примерами изобретения являются способы лечения вирусной инфекции, заболевания, синдрома или состояния, выбранного из группы, состоящей из меланомы, рака толстой кишки, рака молочной железы, рака предстательной железы, рака легкого, фибросаркомы и гепатита B, включающие введение пациенту терапевтически эффективного количества любого из описанных выше соединений или фармацевтических композиций.

В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению формулы (I) для применения в лечении вирусной инфекции, заболевания, синдрома или состояния, на которое влияет агонизм STING, выбранных из группы, состоящей из меланомы, рака толстой кишки, рака молочной железы, рака предстательной железы, рака легкого, фибросаркомы и гепатита B.

В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к композиции, содержащей соединение формулы (I), для лечения вирусной инфекции, заболевания, синдрома или состояния, выбранного из группы, состоящей из меланомы, рака толстой кишки, рака молочной железы, рака предстательной железы, рака легкого, фибросаркомы и гепатита B.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Со ссылкой на заместители термин «независимо» обозначает ситуацию, в которой заместители могут быть одинаковыми или отличаться друг от друга в случае возможного присутствия более одного заместителя.

Термин «алкил», применяемый по отдельности или в составе группы заместителей, обозначает линейную и разветвленную углеродные цепи, имеющие от 1 до 8 атомов углерода. Следовательно, указанные количества атомов углерода (например, C_1-8) независимо обозначают количество атомов углерода в алкильной функциональной группе или алкильной части более крупного алкилсодержащего заместителя. В замещающих группах со множеством алкильных групп, таких как (C_1-6 алкил)₂амино-, C_1-6 алкильные группы диалкиламино могут быть одинаковыми или разными.

Термин «алкокси» обозначает -O-алкильную группу, где термин «алкил» соответствует приведенному выше определению.

Термины «алкенил» и «алкинил» обозначают линейные и разветвленные углеродные цепи, имеющие от 2 до 8 атомов углерода, где алкенильная цепь содержит по меньшей мере одну двойную связь, а алкинильная цепь содержит по меньшей мере одну тройную связь.

Термин «циклоалкил» обозначает насыщенные или частично насыщенные моноциклические или полициклические углеводородные кольца, имеющие от 3 до 14 атомов углерода. Примеры таких колец включают циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклогептил и адамантил.

Термин «гетероциклил» обозначает неароматическую моноциклическую или бициклическую кольцевую систему, имеющую от 3 до 10 кольцевых членов, которые включают по меньшей мере 1 атом углерода и от 1 до 4 гетероатомов, независимо выбранных из N, O и S. Включенный в термин гетероциклил представляет собой неароматическое циклическое кольцо из 5-7 членов, из которых 1-2 члена представляют собой N, или неароматическое циклическое кольцо из 5-7 членов, из которых 0, 1 или 2 члена представляют собой N, и до 2 членов представляют собой O или S, и по меньшей мере один член должен представлять собой N, O или S; при этом кольцо необязательно содержит от 0 до 1 ненасыщенной связи, и, если кольцо состоит из 6 или 7 членов, оно необязательно содержит до 2 ненасыщенных связей. Члены углеродного кольца, формирующие гетероциклическое кольцо, могут быть полностью насыщенными или частично насыщенными.

Термин «гетероциклил» также включает две 5-членные моноциклические гетероциклоалкильные группы, соединенные мостиковой связью с образованием бициклического кольца. Такие группы не считаются полностью ароматическими и не обозначаются как гетероарильные группы. Если гетероцикл является бициклическим, оба кольца гетероцикла являются неароматическими и по меньшей мере одно из колец содержит гетероатомный член кольца. Примеры гетероциклических групп включают, без ограничений, пирролинил (включая 2H-пиррол, 2-пирролинил или 3-пирролинил), пирролидинил, имидазолинил, имидазолидинил, пиразолинил, пиразолидинил, пиперидинил, морфолинил, тиоморфолинил и пиперазинил. Если не указано иное, гетероцикл присоединен к боковой группе на любом гетероатоме или атоме углерода с образованием стабильной структуры.

Термин «арил» обозначает ненасыщенное ароматическое моноциклическое или бициклическое карбоциклическое кольцо из 6-10 углеродных членов. Примеры арильных колец включают фенил и нафталенил.

Термин «гетероарил» относится к ароматической моноциклической или бициклической кольцевой системе с 5-10 кольцевыми членами, которая содержит атомы углерода и от 1 до 4 гетероатомов, независимо выбранных из группы, состоящей из N, O и S. Термин «гетероарил» также обозначает ароматические 5- или 6-членные кольца, где кольцо состоит из атомов углерода и имеет по меньшей мере один гетероатом. Приемлемые гетероатомы включают атомы азота, кислорода и серы. В случае 5-членных колец гетероарильное кольцо предпочтительно содержит один член, представляющий собой атом азота, кислорода или серы, а также до 3 дополнительных атомов азота. В случае 6-членных колец гетероарильное кольцо предпочтительно содержит от 1 до 3 атомов азота. В случае когда 6-членное кольцо имеет 3 атома азота, максимум 2 атома азота смежны. Примеры гетероарильных групп включают фурил, тиенил, пирролил, оксазолил, тиазолил, имидазолил, пиразолил, изоксазолил, изотиазолил, оксадиазолил, триазолил, тиадиазолил, пиридинил, пиридазинил, пиримидинил, пиразинил, индолил, изоиндолил, бензофурил, бензотиенил, индазолил, бензимидазолил, бензотиазолил, бензоксазолил, бензизоксазолил, бензотиадиазолил, бензотриазолил, хинолинил, изохинолинил и хиназолинил. Если не указано иное, гетероарил присоединен к боковой группе на любом гетероатоме или атоме углерода с образованием в результате стабильной структуры.

Термин «атом галогена» или «галоген» обозначает атомы фтора, хлора, брома и йода.

Если термин «алкил» или «арил» либо любой из образованных от данных корней префиксов появляется в названии заместителя (например, арилалкил, алкиламино), это название следует интерпретировать как включающее ограничения, указанные выше для терминов «алкил» и «арил». Указанное количество атомов углерода (например, C₁-C₆) относится независимо к количеству атомов углерода в алкильной функциональной группе, арильной функциональной группе или в алкильной части большего заместителя, в названии которого корень «алкил» стоит в качестве префикса. Для алкильных и алкокси-заместителей указанное число атомов углерода включает все независимые члены, входящие в пределы установленного диапазона. Например, C_1-6 алкил будет включать в себя отдельно метил, этил, пропил, бутил, пентил и гексил, а также их подкомбинации (например, C_1-2, C_1-3, C_1-4, C_1-5, C_2-6, C_3-6, C_4-6, C_5-6, C_2-5 и т. д.).

В целом согласно стандартным правилам номенклатуры, используемым во всем тексте данного описания, сначала описывается конечная часть указанной боковой цепи с последующим описанием смежных функциональных групп по направлению к точке прикрепления цепи. Таким образом, например, название заместителя «C₁-C₆ алкилкарбонил» обозначает группу формулы:

Термин R в стереоцентре обозначает, что стереоцентр имеет чистую R-конфигурацию, определенную как указано в данной области техники; аналогично термин S обозначает, что стереоцентр имеет чистую S-конфигурацию. В настоящем документе термины *R или *S в стереоцентре используются для указания на наличие у стереоцентра чистой, но неизвестной конфигурации. В настоящем документе термин RS обозначает стереоцентр, существующий в форме смеси R- и S-конфигураций. Аналогично термины *RS или *SR обозначают стереоцентр, существующий в форме смеси R- и S-конфигураций и имеющий неизвестную конфигурацию относительно другого стереоцентра внутри молекулы.

В настоящем документе термин «*» обозначает стереоцентр, который может существовать в виде чистой, но неизвестной конфигурации, или смеси R- и S-конфигураций.

Соединения, содержащие один стереоцентр без обозначения стереосвязи, представляют собой смесь двух энантиомеров. Соединения, содержащие два стереоцентра без обозначения стереосвязи для обоих из них, представляют собой смесь четырех диастереомеров. Соединения с двумя стереоцентрами, каждый из которых обозначен как RS и имеет обозначения стереосвязи, представляют собой двухкомпонентную смесь, обладающую относительной стереохимической структурой, как показано в структурной формуле. Соединения с двумя стереоцентрами, каждый из которых обозначен как *RS и имеет обозначения стереосвязи, представляют собой двухкомпонентную смесь с неизвестной относительной стереохимической структурой. Необозначенные стереоцентры, указанные в структурной формуле без обозначения стереосвязей, представляют собой смесь R- и S-конфигураций. Для необозначенных стереоцентров, структурная формула которых приводится с обозначениями стереосвязей, абсолютная стереохимическая структура соответствует показанной формуле.

Если не указано иное, подразумевают, что определение любого заместителя или переменной в определенном положении в молекуле не зависит от соответствующих определений на других участках данной молекулы. Очевидно, что специалист в данной области может выбирать заместители и схемы замещения соединений настоящего изобретения с образованием химически стабильных соединений, которые можно легко синтезировать с помощью методик, известных в данной области, а также способами, изложенными в настоящем документе.

Термин «субъект» обозначает животное, предпочтительно млекопитающее, наиболее предпочтительно человека, являющегося объектом лечения, наблюдения или эксперимента.

Термин «терапевтически эффективное количество» обозначает количество активного соединения или фармацевтического агента, включая соединение настоящего изобретения, индуцирующее биологическую или медицинскую реакцию в тканевой системе животного или человека, необходимую исследователю, ветеринару, врачу или другому клиницисту, включая облегчение или частичное облегчение симптомов заболевания, синдрома, состояния или расстройства, требующего лечения.

Термин «композиция» обозначает продукт, включающий установленные ингредиенты в терапевтически эффективных количествах, а также любой продукт, полученный непосредственно или опосредованно из комбинаций установленных ингредиентов в установленных количествах.

Предполагается, что термин «агонист STING»» включает в себя соединение, которое взаимодействует со STING за счет связывания с ним и индуцирует дальнейшую передачу сигнала, характеризующуюся активацией молекул, связанных с функцией STING. Сюда относится прямое фосфорилирование STING, IRF3 и/или NF-kB, а также может относиться STAT6. Вследствие активации пути STING повышается продукция интерферонов типа I (главным образом ИФН-α и ИФН-β) и экспрессия генов, стимулированных интерфероном (Chen H, et al. «Activation of STAT6 by STING Is Critical for Antiviral Innate Immunity». Cell. 2011, vol. 14: 433-446; и Liu S-Y, et al. “Systematic identification of type I and type II interferon- induced antiviral factors Proc. Natl. Acad. Sci. 2012:vol.1094239-4244).

Термин «модулируемое с помощью STING» используется для обозначения состояния, на которое STING влияет напрямую или посредством пути STING, включая, без ограничений, вирусные инфекции, заболевания или состояния, такие как меланома, рак толстой кишки, рак молочной железы, рак предстательной железы, рак легкого, фибросаркома и гепатит B.

Если не указано иное, используемый в настоящем документе термин «расстройство, модулируемое STING» означает любую вирусную инфекцию, заболевание, расстройство или состояние, отличающееся тем, что, по меньшей мере, один из его характерных симптомов ослабевает или исчезает при лечении агонистом STING. Приемлемые примеры включают, без ограничений, меланому, рак толстой кишки, рак молочной железы, рак предстательной железы, рак легкого, фибросаркому и гепатит B.

Если не указано иное, используемый в настоящем документе термин «влиять» или «подверженный влиянию» (когда речь идет о вирусной инфекции, заболевании, синдроме, состоянии или расстройстве, подверженном влиянию агонизма STING) включает снижение частоты и/или тяжести одного или более симптомов или проявлений указанной вирусной инфекции, заболевания, синдрома, состояния или расстройства; и/или включает предотвращение развития одного или более симптомов или проявлений указанной вирусной инфекции, заболевания, синдрома, состояния или расстройства или развития вирусной инфекции, заболевания, состояния, синдрома или расстройства.

Соединения настоящего изобретения используют в способах лечения или облегчения вирусной инфекции, заболевания, синдрома, состояния или расстройства, подверженных влиянию агонизма STING. Такие способы включают введение субъекту, включая животное, млекопитающее и человека, требующему такого лечения, облегчения и/или профилактики, терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) или его энантиомера, диастереомера, сольвата или фармацевтически приемлемой соли, или состоят и/или по существу состоят из такого способа.

В частности, соединения формулы (I) или их энантиомер, диастереомер, сольват или фармацевтически приемлемую солевую форму используют для лечения или облегчения заболеваний, синдромов, состояний или расстройств, таких как меланома, рак толстой кишки, рак молочной железы, рак предстательной железы, рак легкого, фибросаркома и гепатит В.

Более конкретно, соединения формулы (I) или их энантиомер, диастереомер, сольват или фармацевтически приемлемую солевую форму используют для лечения или облегчения меланомы, рака толстой кишки, рака молочной железы, рака предстательной железы, рака легкого, фибросаркомы и гепатита В, включая введение пациенту терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) или его энантиомера, диастереомера, сольвата или его фармацевтически приемлемой солевой формы, как определено в настоящем документе.

Некоторые варианты осуществления, описанные в настоящем документе, относятся к способам облегчения и/или лечения вирусной инфекции, включая инфекции, вызванные Hepadnaviridae, таким как вирус гепатита B или ВГВ. Способы могут включать введение субъекту, согласно определению страдающему от вирусной инфекции, эффективного количества одного или более соединений формулы (I), или их фармацевтически приемлемой солевой формы, или фармацевтической композиции, содержащей одно или более соединений формулы (I) или их фармацевтически приемлемой солевой формы.

Другие варианты осуществления изобретения, описанные в данном документе, относятся к способу ослабления и/или лечения вирусной инфекции, который может включать приведение клетки, инфицированной вирусом, в контакт с эффективным количеством одного или более соединений, описанных в настоящем документе (например, соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой солевой формы), или фармацевтической композиции, содержащей одно или более соединений, описанных в настоящем документе, или их фармацевтически приемлемую соль. Другие варианты осуществления изобретения, описанные в данном документе, относятся к применению одного или более соединений формулы (I) или их фармацевтически приемлемой солевой формы при получении лекарственного средства для ослабления и/или лечения вирусной инфекции.

Еще другие варианты осуществления изобретения, описанные в настоящем документе, относятся к одному или более соединениям формулы (I) или их фармацевтически приемлемой солевой форме, или фармацевтической композиции, включающей одно или более соединений формулы (I) или их фармацевтически приемлемую солевую форму, которые могут быть использованы для облегчения и/или лечения вирусной инфекции. Некоторые варианты осуществления, описанные здесь, относятся к способу ингибирования репликации вируса, который может включать приведение клетки, инфицированной вирусом, в контакт с эффективным количеством одного или более соединений формулы (I) или их фармацевтически приемлемой солевой формы, или фармацевтической композиции, которая включает одно или более соединений, описанных в настоящем документе или их фармацевтически приемлемую солевую форму.

Другие варианты осуществления, описанные в данном документе, относятся к использованию одного или более соединений формулы (I) или их фармацевтически приемлемой солевой формы при получении лекарственного средства для ингибирования репликации вируса. Еще другие варианты осуществления изобретения, описанные в настоящем документе, относятся к одному или более соединениям, описанным в данном документе (например, соединению формулы (I) или его фармацевтически приемлемой солевой форме), или фармацевтической композиции, включающей одно или более соединений, описанных в данном документе, или их фармацевтически приемлемую солевую форму, которая может быть использована для ингибирования репликации вируса.

В некоторых вариантах осуществления вирусная инфекция может представлять собой вирусную инфекцию гепатита B. Способы могут включать введение субъекту, согласно определению страдающему от вирусной инфекции, эффективного количества одного или более соединений формулы (I) или их фармацевтически приемлемой солевой формы, или фармацевтической композиции, содержащей одно или более соединений формулы (I), или их фармацевтически приемлемой солевой формы.

Другие варианты осуществления, описанные здесь, относятся к способу облегчения и/или лечения вирусной инфекции, которая может включать приведение клетки, инфицированной ВГВ, в контакт с эффективным количеством одного или более соединений формулы (I), их фармацевтически приемлемой солевой формы или фармацевтической композиции, которая включает одно или более соединений формулы (I) или их фармацевтически приемлемую солевую форму. Другие варианты осуществления, описанные в данном документе, относятся к применению одного или более соединений формулы (I) или их фармацевтически приемлемой солевой формы при получении лекарственного средства для облегчения и/или лечения ВГВ.

Еще другие варианты осуществления изобретения, описанные в настоящем документе, относятся к одному или более соединениям формулы (I) или их фармацевтически приемлемой солевой форме, или фармацевтической композиции, включающей одно или более соединений формулы (I) или их фармацевтически приемлемую солевую форму, которые могут быть использованы для улучшения и/или лечения ВГВ. Некоторые варианты осуществления, описанные здесь, относятся к способу ингибирования репликации ВГВ, который может включать приведение клетки, инфицированной вирусом, в контакт с эффективным количеством одного или более соединений формулы (I) или их фармацевтически приемлемой солевой формы, или фармацевтической композиции, которая включает одно или более соединений формулы (I) или их фармацевтически приемлемую соль.

Другие варианты осуществления, описанные в данном документе, относятся к использованию одного или более соединений формулы (I) или их фармацевтически приемлемой соли при получении лекарственного средства для ингибирования репликации ВГВ. Другие варианты осуществления изобретения, описанные в настоящем документе, относятся к одному или более соединений формулы (I), или их фармацевтически приемлемой соли, или фармацевтической композиции, содержащей одно или более соединений формулы (I) или их фармацевтически приемлемую солевую форму, которые могут быть использованы для ингибирования репликации ВГВ.

Варианты осуществления настоящего изобретения включают соединение формулы (I), описанное в настоящем документе, или его энантиомер, диастереомер, сольват или фармацевтически приемлемую солевую форму, где заместители, выбранные из одного или более указанных здесь переменных (например, B₂, X₂, R_2a, R_2b, R_2c, Z-M-Y, Y₁-M_1-Z₁, B₁, X₁, R_1a, R_1b, R_1c), представляют собой любые независимые отдельные заместители или любую подгруппу заместителей из приведенных в качестве примера в перечне в таблице 1 ниже.

Таблица 1

№ соед.

B₂

X₂

R_2a

R_2b

R_2c

Z-M-Y

Y1-M1-Z1

B₁

X₁

R_1a

R_1b

R_1c

OP(O)(OH)O

NHS(O)₂O

OCH₃

(*R)OP(O)(SH)O

NHS(O)₂O

OCH₃

b21

OS(O)₂NH

OP(O)(OH)O

OCH₃

CH₂ с образованием кольца с R₂

OS(O)₂NH

(*R)OP(O)(SH)O

OCH₃

CH₂ с образованием кольца с R₂

OS(O)₂NH

(*S)OP(O)(SH)O

OCH₃

№ соед.

B₂

X₂

R_2a

R_2b

R_2c

Z-M-Y

Y1-M1-Z1

B₁

X₁

R_1a

R_1b

R_1c

OP(O)(OH)O

OS(O)₂NH

OCH₃

NHS(O)₂O

OP(O)(OH)O

OCH₃

(*R)OP(O)(SH)O

NHS(O)₂O

OCH₃

(*S)OP(O)(SH)O

NHS(O)₂O

OCH₃

CH₂

OP(O)(OH)O

NHS(O)₂O

OCH₃

CH₂ с образованием кольца с R₂

OP(O)(OH)O

NHS(O)₂O

OCH₃

№ соед.

B₂

X₂

R_2a

R_2b

R_2c

Z-M-Y

Y1-M1-Z1

B₁

X₁

R_1a

R_1b

R_1c

10A

CH₂ с образованием кольца с R₂

(*R)OP(O)(SH)O

NHS(O)₂O

OCH₃

OP(O)(OH)O

NHS(O)₂O

OP(O)(OH)O

NHS(O)₂O

OCH₃

13A

(*R)OP(O)(SH)O

NHS(O)₂O

OCH₃

14A

(*R)OP(O)(BH₃)O

NHS(O)₂O

OCH₃

OP(O)(OH)O

NHS(O)₂O

b17

№ соед.

B₂

X₂

R_2a

R_2b

R_2c

Z-M-Y

Y1-M1-Z1

B₁

X₁

R_1a

R_1b

R_1c

16A

(*R)OP(O)(SH)O

NHS(O)₂O

b17

16B

(*S)OP(O)(SH)O

NHS(O)₂O

b17

OP(O)(OH)O

NHS(O)₂O

OP(O)(OH)O

NHS(O)₂O

19A

(*R)OS(O)₂NH

OP(O)(SH)O

OCH₃

19B

(*S)OS(O)₂NH

OP(O)(SH)O

OCH₃

№ соед.

B₂

X₂

R_2a

R_2b

R_2c

Z-M-Y

Y1-M1-Z1

B₁

X₁

R_1a

R_1b

R_1c

NHS(O)₂O

OP(O)(OH)O

OCH₃

21A

CH₂

(*R)OP(O)(SH)O

NHS(O)₂O

OCH₃

OS(O)₂NH

OP(O)(OH)O

OCH₃

23A

OS(O)₂NH

(*R)OP(O)(SH)O

OCH₃

23B

OS(O)₂NH

(*S)OP(O)(SH)O

OCH₃

OS(O)₂NH

OP(O)(SH)O

OCH₃

№ соед.

B₂

X₂

R_2a

R_2b

R_2c

Z-M-Y

Y1-M1-Z1

B₁

X₁

R_1a

R_1b

R_1c

CH₂ с образованием кольца с R₂

OS(O)₂NH

OP(O)(OH)O

OCH₃

OS(O)₂NH

OP(O)(OH)O

NHS(O)₂O

b28

OCH₃

OP(O)(OH)O

NHS(O)₂O

OCH₃

OP(O)(OH)O

NHS(O)₂O

OP(O)(OH)O

NHS(O)₂O

№ соед.

B₂

X₂

R_2a

R_2b

R_2c

Z-M-Y

Y1-M1-Z1

B₁

X₁

R_1a

R_1b

R_1c

31A

(*R)OP(O)(SH)O

NHS(O)₂O

31B

(*S)OP(O)(SH)O

NHS(O)₂O

32A

OS(O)₂NH

(*R)OP(O)(SH)O

32B

OS(O)₂NH

(*S)OP(O)(SH)O

OP(O)(OH)O

NHS(O)₂O

OP(O)(OH)O

NHS(O)₂O

№ соед.

B₂

X₂

R_2a

R_2b

R_2c

Z-M-Y

Y1-M1-Z1

B₁

X₁

R_1a

R_1b

R_1c

OS(O)₂NH

OP(O)(OH)O

NHS(O)₂O

OS(O)₂NH

OP(O)(OH)O

b17

OP(O)(OH)O

NHS(O)₂O

OP(O)(OH)O

NHS(O)₂O

b18

OP(O)(OH)O

NHS(O)₂O

b18

OCH₃

№ соед.

B₂

X₂

R_2a

R_2b

R_2c

Z-M-Y

Y1-M1-Z1

B₁

X₁

R_1a

R_1b

R_1c

OS(O)₂NH

OP(O)(OH)O

42A

(*R)OP(O)(SH)O

NHS(O)₂O

42B

(*S)OP(O)(SH)O

NHS(O)₂O

43A

(*R)OP(O)(SH)O

NHS(O)₂O

CH₂

44A

(*R)OP(O)(SH)O

NHS(O)₂O

44B

(*S)OP(O)(SH)O

NHS(O)₂O

№ соед.

B₂

X₂

R_2a

R_2b

R_2c

Z-M-Y

Y1-M1-Z1

B₁

X₁

R_1a

R_1b

R_1c

OP(O)(OH)O

b17

46A

OS(O)₂NH

(*R)OP(O)(SH)O

46B

OS(O)₂NH

(*S)OP(O)(SH)O

OS(O)₂NH

OP(O)(SH)O

CH₂

OP(O)(OH)O

NHS(O)₂O

OP(O)(OH)O

NHS(O)₂O

b21

№ соед.

B₂

X₂

R_2a

R_2b

R_2c

Z-M-Y

Y1-M1-Z1

B₁

X₁

R_1a

R_1b

R_1c

50A

(*R)OP(O)(SH)O

NHS(O)₂O

b17

OP(O)(OH)O

NHS(O)₂O

b17

OCH₃

b18

OP(O)(OH)O

O(O)₂ONH

OCH₃

b18

OS(O)₂NH

OP(O)(SH)O

OCH₃

OP(O)(OH)O

NHS(O)₂O

b26

OCH₃

OP(O)(OH)O

NHS(O)₂O

b27

OCH₃

Вариант осуществления настоящего изобретения относится к соединению формулы (Ia):

где

R_1c независимо выбран из водорода или метила;

R_2c независимо выбран из водорода, фтора, CH₃ или CH₂F;

X₁ и X₂ независимо выбран из группы, состоящей из O, S и CH₂;

каждый из Y и Y₁ независимо отсутствует или выбран из группы, состоящей из O и NH;

Z и Z₁ независимо выбраны из группы, состоящей из O и NH;

один из M и M₁ представляет собой , а другой из M и M₁ независимо выбраны из

так, что, когда M представляет собой , один из Y и Z представляет собой NH, а другой из Y и Z представляет собой O;

R₄ независимо выбран из группы, состоящей из гидрокси, метила, BH₃ и -SR₅; где R₅ независимо выбран из группы, состоящей из водорода, -CH₂O(O)R₆, -CH₂OC(O)OR₆, -CH₂CH₂SCi(O)R₆ и -CH₂CH₂S-SCH₂R₆;

или его энантиомера, диастереомера или фармацевтически приемлемой солевой формы;

при условии, что, когда каждый из B₁ и B₂ представляет собой b6, и Z-M-Y представляет собой OS(O₂)NH, и Y₁-M₁-Z₁ представляет собой OP(O)(OH)O или OP(O)(SH)O, R_1a отличается от OH.

Дополнительный вариант осуществления настоящего изобретения относится к соединению формулы (I), выбранному из соединений 1-55:

или их фармацевтически приемлемой солевой формы.

Для применения в медицине соли соединений формулы (I) относятся к нетоксичным «фармацевтически приемлемым солям». Однако для получения соединений формулы (I) или их фармацевтически приемлемых солевых форм можно использовать другие соли. Приемлемые фармацевтически приемлемые соли соединений формулы (I) включают кислотно-аддитивные соли, которые, например, могут быть образованы путем смешивания раствора соединения с раствором фармацевтически приемлемой кислоты, такой как, например, хлористоводородная кислота, серная кислота, фумаровая кислота, малеиновая кислота, янтарная кислота, уксусная кислота, бензойная кислота, лимонная кислота, винная кислота, угольная кислота или фосфорная кислота. Кроме того, если соединения формулы (I) несут кислотную функциональную группу, их приемлемые фармацевтически приемлемые соли могут включать соли щелочных металлов, такие как соли натрия или калия; соли щелочноземельных металлов, такие как соли кальция или магния; а также соли, образованные с приемлемыми органическими лигандами, такие как четвертичные аммониевые соли. Таким образом, репрезентативные фармацевтически приемлемые соли включают ацетат, бензолсульфонат, бензоат, бикарбонат, бисульфат, битартрат, борат, бромид, эдетат кальция, камсилат, карбонат, хлорид, клавуланат, цитрат, дигидрохлорид, эдетат, эдисилат, эстолат, эсилат, фумарат, глюцептат, глюконат, глутамат, гликолиларсанилат, гексилрезорцинат, гидрабамин, гидробромид, гидрохлорид, гидроксинафтоат, йодид, изотионат, лактат, лактобионат, лаурат, малат, малеат, манделат, мезилат, метилбромид, метилнитрат, метилсульфат, мукат, напсилат, нитрат, N-метилглюкаминаммониевую соль, олеат, памоат (эмбонат), пальмитат, пантотенат, фосфат/дифосфат, полигалактуронат, салицилат, стеарат, сульфат, субацетат, сукцинат, таннат, тартрат, теоклат, тозилат, триэтиодид и валерат.

Типичные примеры кислот и оснований, которые моно применять при получении фармацевтически приемлемых солей, включают кислоты, включая уксусную кислоту, 2,2-дихлоруксусную кислоту, ацилированные аминокислоты, адипиновую кислоту, альгиновую кислоту, аскорбиновую кислоту, L-аспарагиновую кислоту, бензолсульфоновую кислоту, бензойную кислоту, 4-ацетамидобензойную кислоту, (+)-камфорную кислоту, камфорсульфоновую кислоту, (+)-(1S)-камфора-10-сульфиновую кислоту, каприновую кислоту, капроновую кислоту, каприловую кислоту, коричную кислоту, лимонную кислоту, цикламовую кислоту, додецилсульфокислоту, этан-1,2-дисульфоновую кислоту, этансульфоновую кислоту, 2-гидрокси-этансульфоновую кислоту, муравьиную кислоту, фумаровую кислоту, галактаровую кислоту, гентизиновую кислоту, глюкогептоновую кислоту, D-глюконовую кислоту, D-глюкуроновую кислоту, L-глутаминовую кислоту, α-оксо-глутаровую кислоту, гликолевую кислоту, гиппуровую кислоту, бромистоводородную кислоту, соляную кислоту, (+)-L-молочную кислоту, (±)-DL-молочную кислоту, лактобионовую кислоту, малеиновую кислоту, (-)-L-яблочную кислоту, малоновую кислоту, (±)-DL-миндальную кислоту, метансульфоновую кислоту, нафталин-2-сульфоновую кислоту, нафталин-1,5-дисульфоновую-кислоту, 1-гидрокси-2-нафтойную кислоту, никотиновую кислоту, азотную кислоту, олеиновую кислоту, оротовую кислоту, щавелевую кислоту, пальмитиновую кислоту, памовую кислоту, фосфорную кислоту, L-пироглутаминовую кислоту, салициловую кислоту, 4-амино-салициловую кислоту, себациновую кислоту, стеариновую кислоту, янтарную кислоту, серную кислоту, дубильные кислоты, (+)-L-винную кислоту, тиоциановую кислоту, п-толуолсульфоновую кислоту и ундециленовую кислоту; а также основания, в том числе аммиак, L-аргинин, бенетамин, бензатин, гидроксид кальция, холин, деанол, диэтаноламин, диэтиламин, 2-(диэтиламин)этанол, этаноламин, этилендиамин, N-метил-глюкамин, гидрабамин, 1H-имидазол, L-лизин, гидроксид магния, 4-(2-гидроксиэтил)морфолин, пиперазин, гидроксид калия, 1-(2-гидроксиэтил)пирролидин, гидроксид натрия, триэтаноламин, трометамин и гидроксид цинка.

Варианты осуществления настоящего изобретения включают пролекарства соединений формулы (I). В целом такие пролекарства представляют собой функциональные производные соединения, которые легко преобразовывать в требуемое соединение in vivo. Таким образом, в вариантах осуществления настоящего изобретения, описывающих способы лечения или профилактики, термин «введение» охватывает лечение или профилактику различных описанных заболеваний, состояний, синдромов и расстройств либо с использованием конкретно описанного соединения, либо с использованием соединения, которое не было конкретно описано, но которое преобразуется в установленное соединение in vivo после введения пациенту. Стандартные методики отбора и получения приемлемых производных пролекарств описаны, например, в работе Design of Prodrugs, ed. H. Bundgaard, Elsevier, 1985.

Когда соединения в соответствии с вариантами осуществления данного изобретения имеют по меньшей мере один хиральный центр, они могут соответственно существовать в виде энантиомеров. Если соединения имеют два или более хиральных центров, они могут дополнительно существовать в виде диастереомеров. Следует понимать, что все такие изомеры и их смеси входят в объем настоящего изобретения. Кроме того, некоторые из кристаллических форм соединений могут существовать в виде полиморфов, и в таком качестве подразумевается их включение в настоящее изобретение. Кроме того, некоторые из соединений могут образовывать сольваты с водой (т. е. гидраты) или широко распространенными органическими растворителями, при этом такие сольваты также входят в объем настоящего изобретения. Специалистам в данной области будет понятно, что используемый в настоящем документе термин «соединение» включает сольватированные соединения формулы (I).

В тех случаях, когда в процессах получения соединений в соответствии с определенными вариантами осуществления изобретения образуются смеси стереоизомеров, эти изомеры могут быть разделены стандартными способами, такими как препаративная хроматография. Соединения можно получать в рацемической форме или отдельные энантиомеры можно получать в результате энантиоспецифического синтеза или посредством разделения. Соединения могут, например, быть разделены на соответствующие энантиомеры стандартными методиками, такими как образование диастереомерных пар путем образования соли с оптически активной кислотой, такой как, например, (-)-ди-п-толуоил-D-винная кислота и/или (+)-ди-п-толуоил-L-винная кислота, с последующей фракционной кристаллизацией и восстановлением свободного основания. Соединения также можно разделять посредством образования диастереомерных сложных эфиров или амидов с последующим хроматографическим разделением и удалением хирального вспомогательного соединения. В альтернативном варианте осуществления соединения можно разделять с помощью хиральной ВЭЖХ-колонки.

Один вариант осуществления настоящего изобретения относится к композиции, включая фармацевтическую композицию, содержащую (+)-энантиомер соединения формулы (I), состоящую из и/или по существу состоящую из него, где указанная композиция по существу не содержит (-)-изомера указанного соединения. В данном контексте «по существу не содержит» означает присутствие менее около 25%, предпочтительно менее около 10%, более предпочтительно менее около 5%, еще более предпочтительно менее около 2% и еще более предпочтительно менее около 1% (-)-изомера, содержание которого рассчитывают как:

Другой вариант осуществления настоящего изобретения представляет собой композицию, включая фармацевтическую композицию, содержащую (-)-энантиомер соединения формулы (I), состоящую из и/или по существу состоящую из него, где указанная композиция по существу не содержит (+)-изомера указанного соединения. В контексте настоящего документа выражение «по существу не содержит» означает содержание менее около 25%, предпочтительно менее около 10%, более предпочтительно менее около 5%, еще более предпочтительно менее около 2% и еще более предпочтительно менее около 1% (+)-изомера, содержание которого рассчитывают как:

В ходе применения любого из процессов получения соединений различных вариантов осуществления настоящего изобретения может быть необходимой и/или желательной защита чувствительных или реакционноспособных групп на любой из рассматриваемых молекул. Для этих целей можно использовать стандартные защитные группы, например описанные в публикациях Protective Groups in Organic Chemistry, Second Edition, J.F.W. McOmie, Plenum Press, 1973; T.W. Greene & P.G.M, Wilts, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons, 1991; и T.W. Greene & P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, Third Edition, John Wiley & Sons, 1999. Защитные группы можно удалять на любой удобной для этого последующей стадии, используя способы, известные в данной области.

Хотя соединения вариантов осуществления настоящего изобретения (включая их фармацевтически приемлемые соли и фармацевтически приемлемые сольваты) можно вводить отдельно, они будут по существу введены в виде добавки с фармацевтически приемлемым носителем, фармацевтически приемлемым эксципиентом и/или фармацевтически приемлемым разбавителем, выбранными с учетом предполагаемого пути введения и стандартной фармацевтической или ветеринарной практики. Таким образом, конкретные варианты осуществления настоящего изобретения относятся к фармацевтическим и ветеринарным композициям, содержащим соединения формулы (I) и по меньшей мере один фармацевтически приемлемый носитель, фармацевтически приемлемый эксципиент и/или фармацевтически приемлемый разбавитель.

В качестве примера в фармацевтических композициях вариантов осуществления настоящего изобретения соединения формулы (I) могут быть смешаны с любым (-и) приемлемым (-и) связующим (-и) веществом (-ами), смазывающим (-и) веществом (-ами), суспендирующим (-и) агентом (-ами), покрывающим (-и) агентом (-ами), солюбилизирующим (-и) агентом (-ами) и их комбинациями.

Твердые дозированные формы для перорального введения, такие как таблетки или капсулы, содержащие соединения настоящего изобретения, можно вводить по меньшей мере в одной дозированной форме за один раз в зависимости от ситуации. Соединения также можно вводить в составах с замедленным высвобождением.

Дополнительные пероральные формы, в которых можно вводить соединения, обладающие признаками изобретения, включают эликсиры, растворы, сиропы и суспензии; где каждое из них необязательно содержит ароматизаторы и красители.

В альтернативном варианте осуществления соединения формулы (I) можно вводить путем ингаляции (интратрахеальной или интраназальной) или в форме суппозитория или пессария, либо их можно наносить местно в форме лосьона, раствора, крема, мази или присыпки. Например, их можно вносить в крем, который содержит водную эмульсию полиэтиленгликолей или жидкого парафина, состоит и/или по существу состоит из них. При необходимости в концентрации от около 1% масс, до около 10% масс. крема их также можно включать в состав мази, содержащей воск или полутвердый парафин в качестве основы вместе с любыми стабилизаторами и консервантами, состоящей из и/или по существу состоящей из них. Альтернативный способ введения включает трансдермальное введение с использованием накожного или трансдермального пластыря.

Фармацевтические композиции настоящего изобретения (а также соединения настоящего изобретения по отдельности) можно также вводить парентерально в виде инъекций, например, путем внутрикавернозного, внутривенного, внутримышечного, подкожного, внутрикожного или интратекального введения. В этом случае композиции будут также включать по меньшей мере один приемлемый носитель, приемлемый эксципиент и приемлемый разбавитель.

Для парентерального введения фармацевтические композиции настоящего изобретения лучше всего использовать в форме стерильного водного раствора, который может содержать другие вещества, например соли и моносахариды, в достаточном количестве для получения раствора, изотоничного крови.

В дополнение к описанным выше способам введения для лечения рака фармацевтические композиции могут быть получены с возможностью введения посредством внутриопухолевой или околоопухолевой инъекции. Подобная активация иммунной системы для уничтожения опухолей на удаленном сайте обычно называется абскопальным эффектом, и он был продемонстрирован на животных с использованием множества способов лечения (van der Jeught, et al., Oncotarget, 2015, 6(3), 1359-1381). Дополнительное преимущество местного, или внутриопухолевого, или околоопухолевого введения заключается в возможности получения эквивалентной эффективности при гораздо более низких дозах и сведения таким образом к минимуму или устранения нежелательных явлений, которые могут наблюдаться при гораздо более высоких дозах (Marabeile, A., et al., Clinical Cancer Research, 2014, 20(7), 1747-1756).

Для трансбуккального или сублингвального введения фармацевтические композиции настоящего изобретения можно вводить в форме таблеток или пастилок, которые можно получать традиционным способом.

В качестве дополнительного примера фармацевтические композиции, содержащие в качестве активного ингредиента по меньшей мере одно из соединений формулы (I), можно получать путем смешивания соединения (-ий) с фармацевтически приемлемым носителем, фармацевтически приемлемым разбавителем и/или фармацевтически приемлемым эксципиентом в соответствии с традиционными фармацевтическими методами смешивания. Носитель, эксципиент и разбавитель могут принимать широкое разнообразие форм в зависимости от желаемого способа введения (например, перорального, парентерального и т. п.). Таким образом, для жидких пероральных препаратов, таких как суспензии, сиропы, эликсиры и растворы, приемлемые носители, эксципиенты и разбавители включают воду, гликоли, масла, спирты, вкусоароматические агенты, консерванты, стабилизаторы, красители и т. п.; для твердых пероральных препаратов, таких как порошки, капсулы и таблетки, приемлемые носители, эксципиенты и разбавители включают крахмалы, сахара, разбавители, гранулирующие агенты, смазывающие вещества, связующие вещества, разрыхлители и т. п. Твердые пероральные препараты могут также быть необязательно покрыты веществами, такими как сахар, или энтеросолюбильным покрытием так, чтобы модулировать основной участок абсорбции и дезинтеграции. Для парентерального введения носитель, эксципиент и разбавитель, как правило, включают стерильную воду, а также для улучшения растворимости и консервирования композиции можно добавлять другие ингредиенты. Суспензии или растворы для инъекций можно также получать с использованием водных носителей вместе с соответствующими добавками, такими как солюбилизаторы и консерванты.

Терапевтически эффективное количество соединения формулы (I) или его фармацевтической композиции включает диапазон дозировок от около 0,01 мг до около 3000 мг или любое определенное количество или диапазон в указанном диапазоне, в частности от около 0,05 мг до около 1000 мг или любое определенное количество или диапазон в указанном диапазоне, или более конкретно от около 0,05 мг до около 250 мг или любое определенное количество или диапазон в указанном диапазоне активного компонента при схеме приема от около 1 до около 4 раз в сутки для среднего человека (70 кг); хотя специалисту в данной области будет очевидно, что терапевтически эффективное количество соединения формулы (I) изменяется в зависимости от заболеваний, синдромов, состояний и расстройств, лечение которых проводится.

Для перорального введения фармацевтическая композиция предпочтительно предложена в форме таблеток, содержащих около 1,0, около 10, около 50, около 100, около 150, около 200, около 250 и около 500 миллиграммов соединения формулы (I).

Преимуществом является то, что соединение формулы (I) можно вводить в однократной суточной дозе или что суточную дозу можно разделять на два, три или четыре приема в сутки.

Оптимальные дозировки вводимого соединения формулы (I) можно легко определять и варьировать в зависимости от конкретного используемого соединения, способа введения, эффективности препарата и прогрессирования вирусной инфекции, заболевания, синдрома, состояния или расстройства. Кроме того, из-за факторов, связанных с конкретным пациентом, получающим лечение, включая пол пациента, возраст, массу, рацион питания и время введения, возникает необходимость корректировки дозы для достижения необходимого терапевтического уровня и желаемого терапевтического эффекта. Следовательно, приведенные выше дозы представляют собой примеры для среднего случая. Разумеется, могут существовать отдельные случаи, в которых требуется применение большего или меньшего диапазона доз, и такие случаи входят в объем настоящего изобретения.

Соединения формулы (I) можно вводить в форме любой из описанных выше композиций и в соответствии с любой из описанных выше схем дозирования, либо с использованием любых общепринятых в данной области композиций и схем дозирования в любых случаях, когда пациент нуждается в применении соединения формулы (I).

Как агонисты белка STING, соединения формулы (I) можно использовать в способах лечения или профилактики вирусной инфекции, заболевания, синдрома, состояния или расстройства у субъекта, в том числе животного, млекопитающего и человека, у которых на вирусную инфекцию, заболевание, синдром, состояние или расстройство влияет модуляция, включая агонизм, белка STING. Такие способы включают введение (состоят и/или по существу состоят из введения) нуждающемуся в лечении или профилактике субъекту, включая животное, млекопитающее и человека, терапевтически эффективного количества соединения, соли или сольвата формулы (I).

В одном варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению формулы (I) или его фармацевтически приемлемой солевой форме для применения в лечении рака, а также раковых заболеваний и состояний или вирусной инфекции.

К примерам раковых заболеваний и состояний, при которых соединения формулы (I) или их фармацевтически приемлемые соли или сольваты могут оказывать потенциально положительные противоопухолевые эффекты, относятся, без ограничений, рак легкого, кости, поджелудочной железы, кожи, головы, шеи, матки, яичника, желудка, толстой кишки, молочной железы, пищевода, тонкого кишечника, кишечника, эндокринной системы, щитовидной железы, паращитовидной железы, надпочечника, уретры, предстательной железы, пениса, яичек, мочеиспускательного канала, мочевого пузыря, почки или печени; рак прямой кишки; рак анальной области; карциномы фаллопиевых труб, эндометрия, шейки матки, влагалища, вульвы, почечной лоханки, почечно-клеточный рак; саркома мягких тканей; миксома; рабдомиома; фиброма; липома; тератома; холангиокарцинома; гепатобластома; ангиосаркома; гемагрома; гепатома; фибросаркома; хондросаркома; миелома; хронический или острый лейкоз; лимфоцитозная лимфома; первичная лимфома центральной нервной системы; новообразования ЦНС; опухоли оси позвоночника; плоскоклеточные карциномы; синовиальная саркома; злокачественные плевральные мезотелиомы; глиома ствола головного мозга; аденома гипофиза; бронхиальная аденома; хондроматозная ханлартома; инезотелиома; болезнь Ходжкина или комбинация одного или более из перечисленных выше видов рака. Соответственно настоящее изобретение относится к способу лечения или уменьшения тяжести раковых заболеваний, выбранных из группы, состоящей из рака головного мозга (глиом), глиобластом, астроцитом, мультиформной глиобластомы, синдрома Банаяна - Зонана, болезни Каудена, болезни Лермитта - Дюкло, опухоли Вильма, саркомы Юинга, рабдомиосаркомы, эпендимомы, медуллобластомы, рака головы и шеи, рака почек, рака печени, меланомы, рака яичников, рака поджелудочной железы, аденокарциномы, дуктальной маденокарциномы, аденосквамозной карциномы, карциномы ацинарных клеток, глюкагономы, инсулиномы, рака предстательной железы, саркомы, остеосаркомы, гигантоклеточной опухоли кости, рака щитовидной железы, лимфобластного Т-клеточного лейкоза, хронического миелогенного лейкоза, хронического лимфоцитарного лейкоза, лейкоза ворсистых клеток, острого лимфобластного лейкоза, острого миелогенного лейкоза, хронического нейтрофильного лейкоза, острого лимфобластного Т-клеточного лейкоза, плазмацитомы, иммунобластного крупноклеточного лейкоза, мантийноклеточного лейкоза, множественной миеломы, мегакариобластного лейкоза, множественной миеломы, острого мегакариоцитарного лейкоза, промиелоцитарного лейкоза, эритролейкоза, злокачественной лимфомы, ходжкиновской лимфомы, неходжкиновской лимфомы, лимфобластной Т-клеточной лимфомы, лимфомы Беркитта, фолликулярной лимфомы, нейробластомы, рака мочевого пузыря, рака уротелия, рака вульвы, рака шейки матки, рака эндометрия, рака почек, мезотелиомы, рака пищевода, рака слюнной железы, гепатоцеллюлярного рака, рака желудка, носоглоточного рака, рака щек, рака ротовой полости, GIST (желудочно-кишечная стромальная опухоль) и рака яичек.

В другом варианте осуществления настоящее изобретение относится к соединению формулы (I) или его фармацевтически приемлемой солевой форме для применения при лечении расстройства, на которое оказывает влияние агонист STING, выбранного из группы, состоящей из меланомы, рака толстой кишки, рака молочной железы, рака предстательной железы, рака легкого, фибросаркомы и гепатита B.

Описанные соединение формулы (I) можно использовать в комбинации с одним или более дополнительными соединениями, используемыми для лечения инфекции ВГВ. Эти дополнительные соединения могут содержать другие описанные соединения и/или соединения, с помощью которых, как известно, можно лечить, предотвращать или уменьшать симптомы или эффекты инфекции ВГВ. Такие соединения включают, без ограничений, ингибиторы полимеразы ВГВ, интерфероны, ингибиторы проникновения вируса в клетку, ингибиторы созревания вируса, описанные в литературе модуляторы сборки капсида, ингибиторы обратной транскриптазы, иммуномодулирующие агенты, агонисты TLR и другие агенты с другими или неизвестными механизмами действия, которые влияют на жизненный цикл ВГВ или влияют на последствия инфекции ВГВ.

В не имеющих ограничительного характера примерах описанные соединения можно применять в комбинации с одним или более лекарственными средствами (или их солью), выбранными из группы, состоящей из:

ингибиторов обратной транскриптазы ВГВ и ингибиторов ДНК- и РНК-полимеразы, включая, без ограничений, ламивудин (3TC, Zeffix, Heptovir, Epivir и Epivir-HBV), энтекавир (Baraclude, Entavir), адефовир дипивоксил (Hepsara, Preveon, bis-POM PMEA), тенофовира дизопроксил фумарат (Viread, TDF или PMPA);

интерферонов, включая, без ограничений, интерферон-альфа (ИФН-α), интерферон-бета (ИФН-β), интерферон-лямбда (ИФН-λ) и интерферон-гамма (ИФН-γ);

ингибиторов проникновения вируса в клетку;

ингибиторов созревания вируса;

модуляторов сборки капсида, таких как, без ограничений, BAY 41-4109;

ингибиторов обратной транскриптазы;

иммуномодулирующих агентов, таких как агонисты TLR; и

агентов с другими или неизвестными механизмами, таких как, без ограничений, AT-61 ((E)-N-(1-хлор-3-оксо-1-фенил-3-(пиперидин-1-ил)проп-1-ен-2-ил)бензамид), AT-130 ((E)-N-(1-бром-1-(2-метоксифенил)-3-оксо-3-(пиперидин-1-ил)проп-1-ен-2-ил)-4-нитробензамид) и аналогов, представленные в настоящем документе.

В одном варианте осуществления дополнительный терапевтический агент представляет собой интерферон. Термин «интерферон» или ИФН относится к любому члену семейства высокогомологичных видоспецифичных белков, ингибирующих репликацию вируса и клеточную пролиферацию и модулирующих иммунный ответ. Например, человеческие интерфероны сгруппированы в три класса: тип I, который включает интерферон-альфа (ИФН-α), интерферон-бета (ИФН-β) и интерферон-омега (ИФН-ω); тип II, который включает интерферон-гамма (ИФН-γ); и тип III, который включает интерферон-лямбда (ИФН-λ). В настоящем документе термин «интерферон» включает рекомбинантные формы интерферонов, которые были разработаны и доступны на рынке. В настоящем документе термин «интерферон» также включает подтипы интерферонов, такие как химически модифицированные или мутировавшие интерфероны. Химически модифицированные интерфероны могут включать пегилированные интерфероны и гликозилированные интерфероны. Примеры интерферонов также включают, без ограничений, интерферон-альфа-2a, интерферон-альфа-2b, интерферон-альфа-n1, интерферон-бета-1a, интерферон-бета-1b, интерферон-лямбда-1, интерферон-лямбда-2 и интерферон-лямбда-3. Примеры пегилированных интерферонов включают пегилированный интерферон-альфа-2a и пегилированный интерферон-альфа-2b.

Соответственно, в одном варианте осуществления соединения формулы I можно вводить в комбинации с интерфероном, выбранным из группы, состоящей из интерферона-альфа (ИФН-α), интерферона-бета (ИФН-β), интерферона-лямбда (ИФН-λ) и интерферона-гамма (ИФН-γ). В одном конкретном варианте осуществления интерферон представляет собой интерферон-альфа-2a, интерферон-альфа-2b или интерферон-альфа-n1. В другом конкретном варианте осуществления интерферон-альфа-2a или интерферон-альфа-2b пегилированы. В предпочтительном варианте осуществления интерферон-альфа-2a представляет собой пегилированный интерферон-альфа-2a (PEGASYS). В другом варианте осуществления дополнительный терапевтический агент выбран из терапевтической группы иммуномодуляторов или иммуностимуляторов, которая включает биологические агенты, принадлежащие к классу интерферонов.

Кроме того, дополнительный терапевтический агент может представлять собой агент, который нарушает функцию другого (-их) основного (-ых) вирусного (-ых) белка (-ов) или белков хозяина, требуемых для репликации или персистенции ВГВ.

В другом варианте осуществления дополнительный терапевтический агент представляет собой противовирусный агент, который блокирует проникновение в клетку или созревание вируса или воздействует на полимеразу ВГВ, такой как нуклеозидные или нуклеотидные или ненуклеоз(т)идные ингибиторы полимеразы. В дополнительном варианте осуществления комбинированной терапии ингибитор обратной транскриптазы или ингибитор ДНК- или РНК-полимеразы представляет собой зидовудин, диданозин, залцитабин, диданозин (ddA), ставудин, ламивудин, абакавир, эмтрицитабин, энтекавир, априцитабин, атевирапин, рибавирин, ацикловир, фамцикловир, валацикловир, ганцикловир, валганцикловир, тенофовир, адефовир, 9-(2-фосфонилметоксипропил)аденин (PMPA), цидофовир, эфавиренз, невирапин, делавирдин или этравирин.

В варианте осуществления дополнительный терапевтический агент представляет собой иммуномодулирующий агент, индуцирующий естественный ограниченный иммунный ответ, способствующий индукции иммунных ответов против неродственных вирусов. Другими словами, иммуномодулирующий агент способен вызывать созревание антигенпредставляющих клеток, пролиферацию Т-клеток и высвобождение цитокинов (например, среди прочих, IL-12, IL-18, ИФН-альфа, -бета и -гамма и ФНО-альфа).

В дополнительном варианте осуществления дополнительный терапевтический агент представляет собой модулятор TLR или агонист TLR, такой как агонист TLR-7 или агонист TLR-9. В дополнительном варианте осуществления комбинированной терапии агонист TLR-7 выбран из группы, состоящей из SM360320 (9-бензил-8-гидрокси-2-(2-метокси-этокси)аденина) и AZD 8848 (метил-[3-({[3-(6-амино-2-бутокси-8-оксо-7,8-дигидро-9H-пурин-9-ил)пропил][3-(4-морфолинил)пропил]амино}метил)фенил]ацетата).

В любом из способов, предложенных в настоящем документе, способ может дополнительно включать введение субъекту по меньшей мере одной вакцины против ВГВ, ингибитора нуклеозида ВГВ, интерферона или любой их комбинации. В варианте осуществления вакцина против ВГВ представляет собой по меньшей мере одно из RECOMBIVAX HB, ENGERIX-B, ELOVAC B, GENEVAC-B или SHANVAC B.

В одном варианте осуществления способы, описанные в настоящем документе, дополнительно включают введение по меньшей мере одного дополнительного терапевтического агента, выбранного из группы, состоящей из аналогов нуклеотида/нуклеозида, ингибиторов проникновения, ингибиторов слияния и любой комбинации этих или других противовирусных механизмов.

В другом аспекте в настоящем документе предложен способ лечения инфекции ВГВ у нуждающегося в этом субъекта, включающий снижение вирусной нагрузки ВГВ посредством введения субъекту терапевтически эффективного количества описанного соединения в виде монотерапии или в комбинации с ингибитором обратной транскриптазы и дополнительного введения субъекту терапевтически эффективного количества вакцины против ВГВ. Ингибитор обратной транскриптазы может представлять собой по меньшей мере один из зидовудина, диданозина, залцитабина, ddA, ставудина, ламивудина, абакавира, эмтрицитабина, энтекавира, априцитабина, атевирапина, рибавирина, ацикловира, фамцикловира, валацикловира, ганцикловира, валганцикловира, тенофовира, адефовира, PMPA, цидофовира, эфавиренза, невирапина, делавирдина или этравирина.

В другом аспекте в настоящем документе предложен способ лечения инфекции ВГВ у нуждающегося в этом субъекта, включающий снижение вирусной нагрузки ВГВ посредством введения субъекту терапевтически эффективного количества описанного соединения в виде монотерапии или в комбинации с антисмысловым олигонуклеотидом или РНК-интерферирующим агентом, нацеленным на нуклеиновые кислоты ВГВ; и дополнительного введения субъекту терапевтически эффективного количества вакцины против ВГВ. Антисмысловой олигонуклеотид или РНК-интерферирующий агент обладает достаточной комплементарностью к целевым нуклеиновым кислотам ВГВ, чтобы ингибировать репликацию вирусного генома, транскрипцию вирусных РНК или трансляцию вирусных белков.

В другом варианте осуществления описанное соединение и по меньшей мере один дополнительный терапевтический агент относятся к одному составу. В еще одном варианте осуществления описанное соединение и по меньшей мере один дополнительный терапевтический агент вводят совместно. Для любой комбинированной терапии, описанной в настоящем документе, синергетический эффект может быть рассчитан, например, с применением приемлемых способов, таких как уравнение Sigmoid-E_макс (Holford & Scheiner, 19981, Clin. Pharmacokinet. 6: 429-453), уравнение аддитивности Лоэва (Loewe & Muischnek, 1926, Arch. Exp. Pathol Pharmacol. 114: 313-326) и уравнение медианного эффекта (Chou & Talalay, 1984, Adv. Enzyme Regul. 22: 27-55). Каждое из упомянутых выше уравнений можно применять для обработки экспериментальных данных для построения соответствующего графика, с помощью которого можно оценивать эффекты комбинации лекарственных средств. К соответствующим графикам, связанным с упомянутыми выше уравнениями, относятся кривая зависимости эффекта от концентрации, изоболограмма и кривая показателей аддитивности соответственно.

В варианте осуществления любого из способов введения комбинированных терапий, предложенных в настоящем изобретении, способ может дополнительно включать контроль или обнаружение вирусной нагрузки ВГВ у пациента, где способ осуществляют в течение периода времени, включающий период времени до момента, пока вирус ВГВ не перестанет обнаруживаться.

Описанные соединение формулы (I) можно использовать в комбинации с одним или более дополнительными соединениями, используемыми для лечения рака. Эти дополнительные соединения могут содержать другие описанные соединения или соединения, с помощью которых, как известно, можно лечить, предотвращать или уменьшать симптомы или эффекты указанного рака.

В одном варианте осуществления нацеливание на STING активационных или ингибирующих агентов может представлять собой перспективный подход для лечения заболеваний и состояний, при которых полезной является модуляция пути ИФН типа I, включая воспалительные, аллергические и аутоиммунные заболевания, инфекционные заболевания, рак, предраковые синдромы, а также возможно применение в качестве адъювантов вакцин (Dubensky et al., Therapeutic Advances in Vaccines 1(2013)131-143).

В одном варианте осуществления соединения настоящего изобретения можно использовать в качестве адъювантов в терапевтической стратегии, в которой используются противораковые вакцины. В варианте осуществления противораковая вакцина включает инактивированные или ослабленные бактерии или вирусы, содержащие интересующие антигены, очищенные антигены, живые вирусные доставочные векторы, сконструированные для экспрессии и секреции интересующего антигена. Доставочные векторы могут также включать в себя ослабленные бактериальные доставочные векторы, экспрессирующие антигены.

Дополнительный вариант осуществления настоящего изобретения включает способ лечения или уменьшения тяжести раковых заболеваний путем активации иммунной системы с помощью противораковой вакцины, включая, без ограничений, антигенные вакцины, цельноклеточные вакцины, вакцины для активации дендритных клеток, ДНК-вакцины, вакцины на основе бациллы Кальметта - Герена (БЦЖ), Sipuleucel-T (Provenge), талимоген лагерпарепвек (T-Vec; Imlygic™), вакцины на основе онколитического вируса и вакцины на основе аденовируса.

Антигены и адъюванты, которые можно использовать в комбинации с соединениями общей формулы (I) или их фармацевтически приемлемыми солевыми формами, включают костимуляторную молекулу B7, интерлейкин-2, интерферон-y, GM-CSF, антагонисты CTLA-4, OX-40/лиганд OX-40, CD40/лиганд CD40, сарграмостим, левамизол, вирус осповакцины, бацилла Кальметта - Герена (БЦЖ), липосомы, квасцы, полный или неполный адъювант Фрейнда, детоксифицированные эндотоксины, минеральные масла, поверхностно-активные вещества, такие как липолецитин, полиолы-плюроники, полианионы, пептиды и масляные или углеводородные эмульсии. Можно добавлять адъюванты, такие как гидроксид алюминия или фосфат алюминия, для повышения способности вакцины инициировать, усиливать или продлевать иммунный ответ. Дополнительные материалы, такие как цитокины, хемокины и бактериальные нуклеотидные последовательности, такие как CpG, агонист толл-подобного рецептора (TLR) 9, а также дополнительные агонисты TLR 2, TLR 4, TLR 5, TLR 7, TLR 8, TLR9, включая липопротеин, LPS, монофосфориллипид A, липотейхоевая кислота, имиквимод, ресиквимод и дополнительно агонисты индуцируемого ретиноевой кислотой гена I (RIG-I), такие как poly I:C, используемые отдельно или в комбинации с нужными композициями, также представляют собой потенциальные адъюванты.

Пути CTLA-4 и PD-I представляют собой важные отрицательные регуляторы иммунного ответа. В активированных T-клетках увеличивается экспрессия CTLA-4, связывающегося с антигенпредставляющими клетками и ингибирующего стимуляцию T-клеток, экспрессию гена IL-2 и пролиферацию T-клеток; эти противоопухолевые эффекты наблюдались в мышиных моделях карциномы толстой кишки, метастатического рака предстательной железы и метастатической меланомы. Молекула PD-1 связывается с активными T-клетками и подавляет T-клеточную активацию; у антагонистов PD-1 также были отмечены противоопухолевые эффекты.

К антагонистам CTLA-4 и PD-1, которые можно применять в комбинации с соединениями формулы (I) или формулы (Ia) или их фармацевтически приемлемыми солевыми формами, описанными в настоящем документе, включают ипилимумаб, тремелимумаб, ниволумаб, пембролизумаб, CT-OII, AMP-224, и MDX-II06.

«Антагонист PD-1» или «антагонист пути PD-1» означает любое химическое соединение или биологическую молекулу, которая блокирует связывание PD-L1, экспрессируемого на раковой клетке, с PD-1, экспрессируемой на иммунной клетке (T-клетке, B-клетке или NKT-клетке), и предпочтительно также блокирует связывание PD-L2, экспрессируемого на раковой клетке, с экспрессированной на иммунной клетке PD-1. Альтернативные названия или синонимы PD-1 и его лигандов включают: PDCD I, PD1, CD279 и SLEB2 для PD-1; PDCDILI, PDL1, B7HI, B7-4, CD274 и B7-H для PD-L1; и PDCD IL2, PDL2, B7-DC, Btdc и CD273 для PD-L2. В любом из способов лечения, лекарственных средств и вариантов применения настоящего описания, в которых рассматривается человеческий индивидуум, антагонист PD-1 блокирует связывание человеческого PD-L1 с человеческим PD-1, и предпочтительно блокирует связывание как человеческого PD-L1, так и PD-L2 с человеческим PD-1. Аминокислотные последовательности PD-1 человека можно найти в локусе NCBI №: NP_005009. Аминокислотные последовательности человеческого PD-L1 и PD-2 можно найти в локусе NCBI №: NP_054862 и NP_0795 I5 соответственно.

Аминокислотные последовательности PD-1 человека можно найти в локусе NCBI №: NP_305009. Аминокислотные последовательности PD-L1 и PD-L2 можно найти в локусе NCBI №: NP_054862 и NP_1795 I5 соответственно.

Антагонисты PD-1, используемые в любом из способов лечения, лекарственных средств и вариантах применения настоящего описания, включают моноклональное антитело (mAb) или его антигенсвязывающий фрагмент, который специфически связывается с PD-1 или PD-L1, и предпочтительно специфически связывается с человеческим PD-1 или человеческим PD-L1. mAb может представлять собой человеческое антитело, гуманизированное антитело или химерное антитело, и может включать в себя человеческую константную область. В некоторых вариантах осуществления человеческая константная область выбрана из группы, состоящей из константных областей IgG1, IgG2, IgG3 и IgG4, а в предпочтительных вариантах осуществления человеческая константная область представляет собой константную область IgG1 или IgG4. В некоторых вариантах осуществления антигенсвязывающий фрагмент выбран из группы, состоящей из Fab, Fab’-SH, F(ab’)2, scFv и Fv-фрагментов.

Примеры mAb, связывающиеся с человеческим PD-L1 и используемые в способе лечения, лекарственных средствах и вариантах применения настоящего описания, описаны в международных заявках на патент PCT № W02013/019906 и W02010/077634 A1 и в патенте США № US8383796. К специфическим mAb к человеческому PD-L1, используемым в качестве антагониста PD-1 в способе лечения, лекарственных средствах и вариантах применения настоящего описания, относятся MPDL3280A, BMS-936559, MEDI4736, MSB0010718C и антитело, которое содержит вариабельные участки тяжелой и легкой цепей SEQ ID N0:24 и SEQ ID N0:21 соответственно, из публикации W02013/019906.

К другим антагонистам PD-1, используемым в любом из способов лечения, лекарственных средств и вариантах применения настоящего описания, относятся иммуно-адгезионные молекулы, которые специфически связываются с PD-1 или PD-L1, и предпочтительно специфически связываются с человеческим PD-1 или человеческим PD-L1, например гибридный белок, содержащий внеклеточный или PD-1-связывающий участок PD-L1 или PD-L2, слитый с константной областью молекулы иммуноглобулина. Примеры иммуно-адгезионных молекул, которые специфически связываются с PD-1, описаны в опубликованных международных заявках на патенты PCT № W02010/027827 и W02011/066342. Специфические гибридные белки, используемые в качестве антагониста PD-1 в способе лечения, лекарственных средствах и вариантах применения настоящего описания, включают в себя AMP-224 (также известный как B7-DCig), который представляет собой гибридный белок PD-L2-FC и связывается с человеческим PD-1.

Примеры цитотоксических агентов, которые можно использовать в комбинации с соединениями общей формулы (I) или их фармацевтически приемлемыми солями, включают, без ограничений, триоксид мышьяка (продаваемый под торговым названием TRISENox®), аспарагиназу (также известную как L аспарагиназа и Erwinia L-аспарагиназа, продаваемая под торговыми марками ELSPAR® и KIDROLASE®).

К химиотерапевтическим препаратам, которые можно применять в комбинации с соединениями формулы (I) или их фармацевтически приемлемыми солями, описанными в настоящем документе, относятся: ацетат абиратерона, алтретамин, ангидровинбластин, ауристатин, бексаротен, бикалутамид, BMS 184476, сульфонамид 2,3,4,5,6-пентафтор-N-(3-фтор-4-метоксифенил)бензола, блеомицин, N, N-диметил-L-валил-L-валил-N-метил-L-валил-L-пролил-1-L-пролин-трет-бутиламид, кахектин, цемадотин, хлорамбуцил, циклофосфамид, 3',4'-дидегидро-4'деокси-8'-норвин-калейкобластин, доцетаксол, доксетаксел, циклофосфамид, карбоплатин, кармустин, цисплатин, криптофицин, циклофосфамид, цитарабин, дакарбазин (DTIC), дактиномицин, даунорубицин децитабин, доластатин, доксорубицин (адриамицин), этопозид, 5-фторурацил, финастерид, флутамид, гидроксимочевина и гидроксимочевина и таксаны, ифосфамид, лиарозол, лонидамин, ломустин (CCNU), MDV3100, мехлоретамин (азотистый иприт), мелфалан, изетионат мивобутила, ризоксин, сертенеф, стрептозоцин, митомицин, метотрексат, таксаны, нилутамид, ниволумаб, онапристон, паклитаксел, пембролизумаб, преднимустин, прокарбазин, RPR109881, фосфат страмустина, тамоксифен, тасонермин, таксол, третиноин, винбластин, винкристин, виндезин сульфат и винфлунин.

Примеры ингибиторов рецепторов фактора роста эндотелия сосудов (VEGF) включают, без ограничений, бевацизумаб (продаваемый под торговым знаком AVASTIN), акситиниб (описанный в международной патентной публикации PCI № WO01/002369), бриваниб аланинат ((S)-((R)-1-(4-(4-фтор-2-метил-1H-индол-5-илокси)-5-метилпирроло[2,1-f][1,2,4]триазин-6-илокси)пропан-2-ил)2-аминопропаноат, также известный как BMS-582664), мотесаниб (N-(2,3-дигидро-3,3-диметил-1H-индол-6-ил)-2-[(4-пиридинилметил)амино]-3-пиридинкарбоксамид и описанный в опубликованной заявке на международный патент PCT № WO02/068470), пасиреотид (также известный как SO 230 и описанный в опубликованной заявке на международный патент PCT № WO02/010192), и сорафениб (продаваемый под торговым наименованием NEXAVAR).

Примеры ингибиторов топоизомеразы II включают, без ограничений, этопозид (также известный как VP-16 и фосфат этопозида, продаваемый под торговыми наименованиями TOPOSAR, VEPESID и ETOPOPHOS) и тенипозид (также известный как VM 26, продаваемый под торговым наименованием VUMON).

Примеры алкилирующих агентов включают, без ограничений, 5-азацитидин (продаваемый под торговым наименованием VIDAZA), децитабин (продаваемый под торговым наименованием DACOGEN), темозоломид (продаваемый под торговыми наименованиями TEMCAD, TEMODAR и TEMODAL), дактиномицин (также известный как актиномицин-D и продаваемый под торговым наименованием COSMEGEN), мелфалан (также известный как L-PAM, L-сарколизин и фенилаланин-иприт, продаваемый под торговым наименованием ALKERAN), алтретамин (также известный как гексаметилмеламин (HMM), продаваемый под торговым наименованием HEXALEN), кармустин (продаваемый под торговым наименованием BCNU), бендамустин (продаваемый под торговым наименованием TREANDA), бусульфан (продаваемый под торговыми наименованиями BUSULFEx® и MYLERAN®), карбоплатин (продаваемый под торговым наименованием PARAPLATIN®), ломустин (также известный как CCNU, продаваемый под торговым наименованием CEENU®), цисплатин (также известный как CDDP, продаваемый под торговыми наименованиями PLATINOL® и PLATINOL®-AQ), хлорамбуцил (продаваемый под торговым наименованием LEUKERAN®), циклофосфамид (продаваемый под торговыми наименованиями CYTOXAN® и NEOSAR®), дакарбазин (также известный как DTIC, DIC и карбоксамид имидазола, продаваемый под торговым наименованием DTI C-DoME®), алтретамин (также известный как гексаметилмеламин (HMM) продаваемый под торговым наименованием HEXALEN®), ифосфамид (продаваемый под торговым наименованием IFEx®), прокарбазин (продаваемый под торговым наименованием MATULANE®), мехлоретамин (также известный как азотистый иприт, мустин и гидрохлорид мехлорэтамина, продаваемый под торговым наименованием MUSTARGEN®), стрептозоцин (продаваемый под торговым наименованием ZANOSAR®), тиотепа (также известный как тиофосфамид, TESPA и TSPA и продаваемый под торговым наименованием THIORLEx®.

Примеры антиопухолевых антибиотиков включают, без ограничений, доксорубицин (продаваемый под торговым названием ADRIAMYCIN® и RUBEx®), блеомицин (продаваемый под торговым наименованием LENOXANE®), даунорубицин (также известный как гидрохлорид даунорубицина, дауномицин и гидрохлорид рубидомицина, продаваемый под торговым наименованием CERUBIDINE®), даунорубицин липосомальный (липосомы цитрата даунорубицина, продаваемого под торговым наименованием DAUNOXoME®), митоксантрон (также известный как DHAD, продаваемый под торговым наименованием NOVANIRONE®), эпирубицин (продаваемый под торговым наименованием ELLENCE™), идарубицин (продаваемый под торговыми наименованиями EDAMYCIN®, EDAMYCIN PFS®) и митомицин C (продаваемый под торговым наименованием MUTAMYCIN®).

К примерам антиметаболических препаратов относятся, без ограничений, кларибин (2-хлордезоксиаденозин, продаваемый под торговым наименованием LEUSTATIN®), 5-фторурацил (продаваемый под торговым наименованием ADRUCIL®), 6-тиогуанин (продаваемый под торговым наименованием PURINETHOL®), пеметрексед (продаваемый под торговым наименованием ALIMTA®), цитарабин (также известный как арабинозилцитозин (Ara-C), продаваемый под торговым наименованием CYTOSAR-U®), цитарабин липосомальный (также известный как липосомальный Ara-C, продаваемый под торговым наименованием DEPOCYT™), децилабин (продаваемый под торговым наименованием DACOGEN®), гидроксимочевина (продаваемая под торговыми наименованиями HYDREA®, DROXIATM и MYLOCEL™), флударабин (продаваемый под торговым наименованием FLUDARA®), флоксуридин (продаваемый под торговым наименованием FUDR®), кладрибин (также известный как 2-хлордезоксиаденозин (2-CdA), продаваемый под торговым наименованием LEUSTATIN™), метотрексат (также известный как аметоптерин, метотрексат натрия (MTX), продаваемый под торговыми наименованиями RHEUMATREX® и TREXALL™) и пентостатин (продаваемый под торговым наименованием NIPENT®).

К примерам ретиноидов относятся, без ограничений, алетретиноин (продаваемый под торговым наименованием PANRETIN®), третиноин (полностью транс-ретиноевая кислота, также известный как ATRA, продаваемый под торговым наименованием VESANom®), изотретиноин (13-c/s-ретиноевая кислота, продаваемая под торговыми наименованиями ACCUTANE®, AMNESTEEM®, CLARAvis®, CLARus®, DECUTAN®, ISOTANE®, IzoTEcH®, ORATANE®, ISOTRET® и SOTRET®) и бексаротен (продаваемый под торговым наименованием TARGRETIN®).

В настоящем описании, в частности в схемах и примерах, используют следующие сокращения:

ACN - ацетонитрил;

AcOH - ледяная уксусная кислота;

ADDP - азодикарбоновый дипиперидид;

водн. - водный;

Ar. - аргон;

Bn или Bzl - бензил;

Bz - бензоил;

BINAP - 2,2'-бис(дифенилфосфино)-1,1'-бинафтил;

Boc - трет-бутилоксикарбонил;

CH₃CN - ацетонитрил;

конц. - концентрированный;

CV - объем колонки;

dba - дибензилиденацетон;

DBU - 1,8-диазабицикло[5.4.0]ундец-7-ен;

DCA - дихлоруксусная кислота;

DCC - N, N'-дициклогексилкарбодиимид;

DCE - 1,2-дихлорэтан;

DCM - дихлорметан;

DDTT - 3-[(диметиламинометилен)амино]-3H-1,2,4-дитиазол-5-тион;

DEAD - диэтилазодикарбоксилат;

DIBAL - гидрид диизобутилалюминия;

DIPEA или DIEA - диизопропилэтиламин;

DMA - диметиланилин;

DMAP - 4-диметиламинопиридин;

DME - диметоксиэтан;

DMF - N, N-диметилформамид;

DMP - периодинан Десса - Мартина;

DMSO - диметилсульфоксид;

DMTr - 4,4’-диметокситритил;

DPPA - дифенилфосфорилазид;

dppf - 1,1'-бис(дифенилфосфино)ферроцен;

EA - этилацетат;

EDCI - 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимид;

ИЭР - ионизация электрораспылением;

EtOAc или EA - этилацетат;

EtOH - этанол;

ГХМС - газовая хроматография с масс-спектрометрией;

ч - час или часы;

HEK - человеческий мезонефрос;

ВЭЖХ - высокоэффективная жидкостная хроматография;

LAH - алюмогидрид лития;

LDA - диизопропиламид лития;

LHMDS - бис(триметилсилил)амид лития;

Me - метил;

MEK - метилэтилкетон;

MeOH - метанол;

MeCN - ацетонитрил;

Мгц - мегагерц;

мин - минута или минуты;

MS - масс-спектрометрия или молекулярные сита;

Ms - метансульфонил;

NBS - N-бромсукцинимид;

NIS - N-йодосукцинимид;

NMM - N-метилморфолин;

NMP - N-метилпирролидон;

ЯМР - ядерный магнитный резонанс;

PADS - дисульфид фенилацетила;

PCC - хлорхромат пиридиния;

PE - петролейный простой эфир;

ОФ - обращенная фаза;

кт или КТ - комнатная температура;

R₁ - время удержания;

с - секунда или секунды;

SEM-C1 - хлорид 2-(триметсилил)-этоксиметила;

TBAF - фторид тетрабутиламмония;

TBS или TBDMS - трет-бутилдиметилсилил;

TBP - фосфат трибутила;

TEA или Et₃N - триэтиламин;

TEAA - ацетат триэтиламмония;

TFA - трифторуксусная кислота;

THF - тетрагидрофуран;

TIPS - триизопропилсилил;

ТСХ - тонкослойная хроматография;

TMS - тетраметилсилан;

Ts - 4-толуолсульфонил.

Определенные соединения формулы (I) можно получать в соответствии с процессом, представленным ниже на схеме 1.

Следовательно, соответственно замещенное соединение формулы (II), в котором PG₁ и PG₂ представляют собой защитные группы, известные специалистам в данной области, где PG₁ может быть выбрана из ацетила, триметилсилила, силила трет-бутилдиметила, бензила, тритила, диметокситритила или т. п., а PG₂ может быть выбрана из ацила, бензоила, изобутилила или т. п., известное соединение или соединение, полученное известными способами, может быть введено в реакцию с трифенилфосфином, азидом натрия в присутствии йодида тетрабутиламмония и тетрабромида углерода в соответственно выбранном растворителе или смеси растворителей, таких как DMF, THF, толуол, и т. п., при температуре в диапазоне от около 0°C до около 130°C с получением соответствующего соединения формулы (III). В альтернативном варианте осуществления соответственно замещенное соединение формулы (II), известное соединение или соединение, полученное известными способами, может быть введено в реакцию с хлоридом метансульфонила, хлоридом трифторметилсульфонила или т. п. в присутствии соответственно выбранного основания, такого как Et₃N, DIPEA, DMAP и т. п., в соответственно выбранном растворителе или смеси растворителей, таких как CHCl₃, CH₂Cl₂, THF, пиридин и т. п., при температуре в диапазоне от около 0°C до около 130°C с получением соответствующего мезилового или тритилового аналога, который можно дополнительно вводить в реакцию с азидом натрия в соответственно выбранном растворителе или смеси растворителей, таких как DMF, THF, толуол и т. п., при температуре в диапазоне от около 0°C до около 130°C с получением соответствующего соединения формулы (III).

Еще один способ может включать в себя обработку соответственно замещенного соединения формулы (II), комбинацией йода, фосфина трифенила и имидазола, в приемлемом растворителе, таком как пиридин, DMF, или т. п.; при температуре в диапазоне от около 0°C до около 30 °C, с получением соответствующего йодного аналога, который можно дополнительно вводить в реакцию с азидом натрия в соответственно выбранном растворителе или смеси растворителей, таких как DMF, THF, толуол, и т. п., при температуре от около 0°C до около 130 °C, с получением соответствующего соединения формулы (III).

Соединение формулы (III) можно впоследствии вводить в реакцию с источником водорода в условиях гидрирования в присутствии соответственно выбранного катализатора или каталитической системы, например Pd/C, Pt и т. п., в растворителе, таком как MeOH, EtOH, EtOAc и т. п., с получением соответствующего соединения формулы (IV). В альтернативном варианте осуществления соединение формулы (III) может быть введено в реакцию с фосфином трифенила в приемлемом растворителе, таком как THF, DMF, или т. п., при температуре в диапазоне от около 20°C до около 60 °C, с последующей обработкой водой при той же температуре с получением соответствующего соединения формулы (IV).

Соединение формулы (IV) может быть введено в реакцию с соединением формулы (V), таким как хлорид сульфурила, хлорсульфат 4-нитрофенила или т. п., в присутствии соответственно выбранного основания, такого как Et₃N, DIPEA и т. п., в соответственно выбранном растворителе или смеси растворителей, таких как CHCl₃, CH₂Cl₂, THF, пиридин, и т. п., при температуре в диапазоне от около -78°C до около 50 °C, с получением соответствующего соединения формулы (VI).

Соединение формулы (VI) можно впоследствии вводить в реакцию с соответственно замещенным соединением формулы (VII), в котором PG₃ и PG₄ представляют собой защитные группы, известные специалистам в данной области, где PG₃ может быть выбран из ацетила, триметилсилила, трет-бутилдиметилсилила, бензила, тритила, диметокситритила или т. п., а PG₂ может быть выбран из ацила, бензоила, изобутирила или т. п., известное соединение или соединение, полученное известными способами, в присутствии соответственно выбранного основания, такого как Et₃N, DIPEA, DMAP, Cs₂CO₃ или т. п., в соответственно выбранном растворителе или смеси растворителей, таких как CHCl₃, CH₂Cl₂, THF, MeCN, пиридин, и т. п., при температуре в диапазоне от около -10°C до около 80 °C, с получением соответствующего соединения формулы (VIII).

Защитные группы PG₁ и PG₃ для спиртов в соединении формулы (VIII) можно впоследствии отщеплять способами, хорошо известными специалистам в данной области, при наличии основных или кислых условий, с получением соответствующего соединения формулы (IX).

Соединение формулы (IX) можно впоследствии вводить в реакцию с соответственно замещенным соединением формулы (X), в котором Rs представляет собой галоген, диизопропиламино или т. п., известное соединение или соединение, полученное известными способами, в присутствии приемлемого активатора, такого как тетразол, DMAP, 5-этилтио-1H-тетразол или т. п., в соответственно выбранном растворителе или смеси растворителей, таких как MeCN, CH₂Cl₂, THF, диоксан, и т. п., при температуре в диапазоне от около -10°C до около 60 °C, с получением соответствующего фосфитного соединения формулы (XI).

Соединение формулы (XI) можно впоследствии вводить в реакцию с окислителем, таким как йод, пероксид водорода, трет-бутилпероксид, реагент Бокажа, DDTT, 3-амино-1,2,4-дитиазол-5-тион, PADS и т. п. или BH₃.SMe₂, комплекс BH₃.THF или т. п., в соответственно выбранном растворителе или смеси растворителей, таких как CHCl₃, CH₂Cl₂, THF, MeCN, диоксан и т. п., при температуре в диапазоне от около -10°C до около 80°C с получением соединения формулы (XII), где R₄ представляет собой O, S или BH₃.

Из соединения формулы (XII) могут быть впоследствии удалены защитные группы с использованием щелочных условий, например MeNH₂, tBuNH₂, гидроксид аммония, Et₃N·3HF и т. п., в соответственно выбранном растворителе или смеси растворителей, таких как EtOH, вода, iPrOH и т. п., при температуре в диапазоне от около -10°C до около 120°C или способами, хорошо известными специалистам в данной области, при наличии основных или кислых условий с получением соответствующего соединения формулы (I-a).

В альтернативном варианте осуществления соединения формулы (I) могут быть получены в соответствии с процессом, представленным ниже на общей схеме 2.

Общая схема 2

Следовательно, соответственно замещенное соединение формулы (XIII), в котором PG₁ и PG₄ представляют собой защитные группы, известные специалистам в данной области, PG₁ может быть выбрана из ацетила, триметилсилила, трет-бутилдиметилсилила, бензила, тритила, диметокситритила или т. п., а PG₄ может быть выбрана из ацила, бензоила, изобутирила или т. п., известное соединение, или соединение, полученное известными способами, может быть введено в реакцию с трифенилфосфином, азидом натрия в присутствии йодида тетрабутиламмония и тетрабромистого углерода в соответственно выбранном растворителе или смеси растворителей, таких как DMF, THF, толуол, и т. п., при температуре в диапазоне от около 0°C до около 130°C с получением соответствующего соединения формулы (XIV).

В альтернативном варианте осуществления соответственно замещенное соединение формулы (XIII), известное соединение или соединение, полученное известными способами, может быть введено в реакцию с хлоридом метансульфонила, хлоридом трифторметилсульфонила или т. п., в присутствии соответственно выбранного основания, такого как Et₃N, DIPEA, DMAP или т. п., в соответственно выбранном растворителе или смеси растворителей, таких как CHCl₃, CH₂Cl₂, THF, пиридин и т. п., при температуре в диапазоне от около 0°C до около 130°C с получением соответствующего мезилового или тритилового аналога, который можно впоследствии дополнительно вводить в реакцию с азидом натрия в соответственно выбранном растворителе или смеси растворителей, таких как DMF, THF, толуол и т. п., при температуре в диапазоне от около 0°C до около 130°C с получением соответствующего соединения формулы (XIV). Еще один способ может включать в себя обработку соответственно замещенного соединения формулы (XIII) комбинацией йода, фосфина трифенила и имидазола в приемлемом растворителе, таком как пиридин, DMF, или т. п., при температуре в диапазоне от около 0°C до около 30 °C, с получением соответствующего йодного аналога, который можно дополнительно вводить в реакцию с азидом натрия в соответственно выбранном растворителе или смеси растворителей, таких как DMF, THF, толуол, и т. п., при температуре в диапазоне от около 0°C до около 130 °C, с получением соответствующего соединения формулы (XIV).

Соединение формулы (XIV) можно впоследствии вводить в реакцию с источником водорода в условиях гидрирования в присутствии соответственно выбранного катализатора или каталитической системы, например Pd/C, Pt и т. п., в растворителе, таком как MeOH, EtOH, EtOAc и т. п., с получением соответствующего соединения формулы (XV). В альтернативном варианте осуществления соединение формулы (XIV) может быть введено в реакцию с фосфином трифенила в приемлемом растворителе, таком как THF, DMF или т. п., при температуре в диапазоне от около 20°C до около 60°C с последующей обработкой водой при той же температуре с получением соответствующего соединения формулы (XV).

Соединение формулы (XV) может быть введено в реакцию с соединением формулы (V), таким как хлорид сульфурила, хлорсульфат 4-нитрофенила или т. п., в присутствии соответственно выбранного основания, такого как Et₃N, DIPEA или т. п., в соответственно выбранном растворителе или смеси растворителей, таких как CHCl₃, CH₂Cl₂, THF, пиридин и т. п., при температуре в диапазоне от около -78°C до около 50°C с получением соответствующего соединения формулы (XVI).

Соединение формулы (XVI) можно впоследствии вводить в реакцию с соответственно замещенным соединением формулы (XVII), в котором PG₂ и PG₃ представляют собой защитные группы, известные специалистам в данной области, при этом PG₃ может быть выбран из ацетила, триметилсилила, трет-бутилдиметилсилила, бензила, тритила, диметокситритила или т. п., а PG₂ может быть выбрана из ацила, бензоила, изобутирила или т. п., а также известное соединение, или соединение, полученное известными способами, в присутствии соответственно выбранного основания, такого как EtaN, DIPEA, DMAP, Cs₂CO₃ или т. п., в соответственно выбранном растворителе или смеси растворителей, таких как CHCl₃, CH₂Cl₂, THF, MeCN, пиридин, и т. п., при температуре в диапазоне от около -10°C до около 80°C с получением соответствующего соединения формулы (XVIII). Защитные группы PG₁ и PG₃ для спирта в соединении формулы (XVIII) можно впоследствии отщеплять способами, хорошо известными специалистам в данной области, при наличии основных или кислых условий с получением соответствующего соединения формулы (XIX).

Соединение формулы (XIX) можно впоследствии вводить в реакцию с соответственно замещенным соединением формулы (X), в котором R₈ представляет собой галоген, диизопропиламино и т. п., а также известное соединение или соединение, полученное известными способами, в присутствии приемлемого активатора, такого как тетразол, DMAP, 5-этилтио-1H-тетразол или т. п., в соответственно выбранном растворителе или смеси растворителей, таких как MeCN, CH₂Cl₂, THF, диоксан и т. п., при температуре в диапазоне от около -10°C до около 60°C с получением соответствующего фосфитного соединения формулы (XX).

Соединение формулы (XX) можно впоследствии вводить в реакцию с окислителем, таким как йод, пероксид водорода, трет-бутилпероксид, реагент Бокажа, DDTT, 3-амино-1,2,4-дитиазол-5-тион, PADS и т. п. или BH₃. SMe₂, комплекс BH₃·THF или т. п. в соответственно выбранном растворителе или смеси растворителей, таких как CHCl₃, CH₂Cl₂, THF, MeCN, диоксан и т. п., при температуре в диапазоне от около -10°C до около 80°C с получением соединения формулы (XXI), в котором R₄ представляет собой O, S или BH₃.

Из соединения формулы (XXI) могут быть впоследствии удалены защитные группы в щелочных условиях, например MeNH₂, tBuNH₂, гидроксид аммония, Et₃N·3HF и т. п., в соответственно выбранном растворителе или смеси растворителей, таких как EtOH, вода, iPrOH и т. п., при температуре в диапазоне от около -10°C до около 120°C или способами, хорошо известными специалистам в данной области, при наличии основных или кислых условий с получением соответствующего соединения формулы (I-b).

В альтернативном варианте осуществления соединения формулы (I) могут быть получены в соответствии с процессом, представленным ниже на общей схеме 3.

Общая схема 3

Следовательно, соответственно замещенное соединение формулы (XXII), в котором PG₁ и PG₄ представляют собой защитные группы, известные специалистам в данной области, PG₁ может быть выбрана из ацетила, триметилсилила, трет-бутилдиметилсилила, бензила, тритила, диметокситритила или т. п., а PG₄ может быть выбрана из ацила, бензоила, изобутирила или т. п., а также известное соединение или соединение, полученное известными способами, может быть введено в реакцию с источником водорода в условиях, обеспечивающих гидрогенизацию, в присутствии соответственно выбранного катализатора или системы катализаторов, таких как Pd/C, Pt и т. п., в растворителе, таком как MeOH, EtOH, EtOAc и т. п., с получением соответствующего соединения формулы (XXIII). В альтернативном варианте осуществления соединение формулы (XXII) может быть введено в реакцию с фосфином трифенила в приемлемом растворителе, таком как THE, DMF или т. п., при температуре в диапазоне от около 20°C до около 60°C с последующей обработкой водой при той же температуре с получением соответствующего соединения формулы (XXIII).

Соединение формулы (XXIII) может быть введено в реакцию с соединением формулы (V), таким как хлорид сульфурила, хлорсульфат 4-нитрофенила или т. п., в присутствии соответственно выбранного основания, такого как Et₃N, DIPEA или т. п., в соответственно выбранном растворителе или смеси растворителей, таких как CHCl₃, CH₂Cl₂, THE, пиридин и т. п., при температуре в диапазоне от около -78°C до около 50°C с получением соответствующего соединения формулы (XXIV).

Соединение формулы (XXIV) можно впоследствии вводить в реакцию с соответственно замещенным соединением формулы (XXV), в котором PG₂ и PG₃ представляют собой защитные группы, известные специалистам в данной области, где PG₃ может быть выбрана из ацетила, триметилсилила, трет-бутилдиметилсилила, бензила, тритила, диметокситритила или т. п., а PG₂ может быть выбрана из ацила, бензоила, изобутирила или т. п., а также известное соединение или соединение, полученное известными способами, в присутствии соответственно выбранного основания, такого как Et₃N, DIPEA, DMAP, Cs₂CO₃ или т. п., в соответственно выбранном растворителе или смеси растворителей, таких как CHCl₃, CH₂Cl₂, THF, MeCN, пиридин и т. п., при температуре в диапазоне от около -10°C до около 80°C с получением соответствующего соединения формулы (XXVI).

Защитные группы PG₁ и PG₃ для спирта в соединении формулы (XXVI) можно впоследствии отщеплять способами, хорошо известными специалистам в данной области, при наличии щелочных или кислотных условий, с получением соответствующего соединения формулы (XXVII).

Соединение формулы (XXVII) можно впоследствии вводить в реакцию с соответственно замещенным соединением формулы (X), в котором R₈ представляет собой галоген, диизопропиламино или т. п., а также известное соединение или соединение, полученное известными способами, в присутствии приемлемого активатора, такого как тетразол, DMAP, 5-этилтио-1H-тетразол или т. п., в соответственно выбранном растворителе или смеси растворителей, таких как MeCN, CH₂Cl₂, THE, диоксан и т. п., при температуре в диапазоне от около -10°C до около 60°C с получением соответствующего фосфитного соединения формулы (XXVIII).

Соединение формулы (XXVIII) можно впоследствии вводить в реакцию с окислителем, таким как йод, пероксид водорода, трет-бутилпероксид, реагент Бокажа, DDTT, 3-амино-1,2,4-дитиазол-5-тион, PADS или т. п. или BH₃·SMe₂, комплекс BH₃·THF или т. п., в соответственно выбранном растворителе или смеси растворителей, таких как CHCl₃, CH₂Cl₂, THF, MeCN, диоксан и т. п., при температуре в диапазоне от около -10°C до около 80°C с получением соединения формулы (XXIX), в котором R₄ представляет собой O, S или BH₃.

Из соединения формулы (XXIX) могут быть впоследствии удалены защитные группы в щелочных условиях, например MeNH₂, tBuNH₂, гидроксид аммония, Et₃N·3HF или т. п., в соответственно выбранном растворителе или смеси растворителей, таких как EtOH, вода, iPrOH и т. п., при температуре в диапазоне от около -10°C до около 120°C или способами, хорошо известными специалистам в данной области, при наличии основных или кислых условий с получением соответствующего соединения формулы (I-c).

В альтернативном варианте осуществления соединения формулы (I) могут быть получены в соответствии с процессом, представленным ниже на общей схеме 4.

Общая схема 4

Следовательно, соответственно замещенное соединение формулы (XXX), в котором PG₁ и PG₂ представляют собой защитные группы, известные специалистам в данной области, PG₁ может быть выбрана из ацетила, триметилсилила, трет-бутилдиметилсилила, бензила, тритила, диметокситритила или т. п., а PG₂ может быть выбрана из ацила, бензоила, изобутирила или т. п., а также известное соединение или соединение, полученное известными способами, может быть введено в реакцию с источником водорода в условиях, обеспечивающих гидрогенизацию, в присутствии соответственно выбранного катализатора или системы катализаторов, таких как Pd/C, Pt и т. п., в растворителе, таком как MeOH, EtOH, EtOAc и т. п., с получением соответствующего соединения формулы (XXXI).

В альтернативном варианте осуществления соединение формулы (XXX) может быть введено в реакцию с фосфином трифенила в приемлемом растворителе, таком как THF, DMF или т. п., при температуре в диапазоне от около 20°C до около 60°C с последующей обработкой водой при той же температуре с получением соответствующего соединения формулы (XXXI).

Соединение формулы (XXXI) может быть введено в реакцию с соединением формулы (V), таким как хлорид сульфурила, хлорсульфат 4-нитрофенила или т. п., в присутствии соответственно выбранного основания, такого как Et₃N, DIPEA или т. п., в соответственно выбранном растворителе или смеси растворителей, таких как CHCl₃, CH₂Cl₂, THF, пиридин и т. п., при температуре в диапазоне от около -78°C до около 50°C с получением соответствующего соединения формулы (XXXII).

Соединение формулы (XXXII) можно впоследствии вводить в реакцию с соответственно замещенным соединением формулы (XXXIII), в котором PG₃ и PG₄ представляют собой защитные группы, известные специалистам в данной области, где PG₃ может быть выбрана из ацетила, триметилсилила, трет-бутилдиметилсилила, бензила, тритила, диметокситритила или т. п., а PG₂ может быть выбрана из ацила, бензоила, изобутирила или т. п., а также известное соединение или соединение, полученное известными способами, в присутствии соответственно выбранного основания, такого как Et₃N, DIPEA, DMAP, Cs₂CO₃ или т. п., в соответственно выбранном растворителе или смеси растворителей, таких как CHCl₃, CH₂Cl₂, THF, MeCN, пиридин и т. п., при температуре в диапазоне от около -10°C до около 80 °C, с получением соответствующего соединения формулы (XXXIV).

Защитные группы PG₁ и PG₃ для спирта в соединении формулы (XXXIV) можно впоследствии отщеплять способами, хорошо известными специалистам в данной области, при наличии основных или кислых условий с получением соответствующего соединения формулы (XXXV).

Соединение формулы (XXXV) можно впоследствии вводить в реакцию с соответственно замещенным соединением формулы (X), в котором R₈ представляет собой галоген, диизопропиламино и т. п., а также известное соединение или соединение, полученное известными способами, в присутствии приемлемого активатора, такого как тетразол, DMAP, 5-этилтио-1H-тетразол или т. п., в соответственно выбранном растворителе или смеси растворителей, таких как MeCN, CH₂Cl₂, THF, диоксан и т. п., при температуре в диапазоне от около -10°C до около 60°C с получением соответствующего фосфитного соединения формулы (XXXVI).

Соединение формулы (XXXVI) можно впоследствии вводить в реакцию с окислителем, таким как йод, пероксид водорода, трет-бутилпероксид, реагент Бокажа, DDTT, 3-амино-1,2,4-дитиазол-5-тион, PADS или т. п. или BH₃·SMe₂, комплекс BH₃·THF или т. п., в соответственно выбранном растворителе или смеси растворителей, таких как CHCl₃, CH₂Cl₂, THF, MeCN, диоксан и т. п., при температуре в диапазоне от около -10°C до около 80°C с получением соединения формулы (XXXVII), в котором R₄ представляет собой O, S или BH₃.

Из соединения формулы (XXXVII) могут быть впоследствии удалены защитные группы в щелочных условиях, например MeNH₂, tBuNH₂, гидроксид аммония, Et₃N·3HF или т. п., в соответственно выбранном растворителе или смеси растворителей, таких как EtOH, вода, iPrOH и т. п., при температуре в диапазоне от около -10°C до около 120°C или способами, хорошо известными специалистам в данной области, при наличии основных или кислых условий с получением соответствующего соединения формулы (I-d).

Общая схема 5

Следовательно, защитная группа PG₃ для спирта в соединении формулы (XVIII), в котором PG₁, PG₂, PG₃ и PG₄ представляют собой защитные группы, известные специалистам в данной области, PG₁ и PG₃ могут быть выбраны из ацетила, триметилсилила, трет-бутилдиметилсилила, бензила, тритила, диметокситритила или т. п., а PG₂ и PG₄ могут быть выбраны из ацила, бензоила, изобутирила или т. п., а также известное соединение или соединение, полученное известными способами, можно избирательно отщеплять в присутствии защитной группы PG₁ для спирта способами, хорошо известными специалистам в данной области, при наличии основных или кислых условий, с получением соответствующего соединения формулы (XXXVIII).

Соединение формулы (XXXVIII) может быть введено в реакцию с трифенилфосфином, азидом натрия в присутствии йодида тетрабутиламмония и тетрабромистого углерода в соответственно выбранном растворителе или смеси растворителей, таких как DMF, THF, толуол и т. п., при температуре в диапазоне от около 0°C до около 130 °C, с получением соответствующего соединения формулы (XXXIX). В альтернативном варианте осуществления, соответственно замещенное соединение формулы (XVIII), известное соединение или соединение, полученное известными способами, может быть введено в реакцию с хлоридом метансульфонила, хлоридом трифторметилсульфонила или т. п., в присутствии соответственно выбранного основания, такого как Et₃N, DIPEA, DMAP или т. п., в соответственно выбранном растворителе или смеси растворителей, таких как CHCl₃, CH₂Cl₂, THF, пиридин и т. п., при температуре в диапазоне от около 0°C до около 130°C с получением соответствующего мезилового или тритилового аналога, который можно дополнительно вводить в реакцию с азидом натрия в соответственно выбранном растворителе или смеси растворителей, таких как DMF, THF, толуол, и т. п., при температуре в диапазоне от около 0°C до около 130 °C, с получением соответствующего соединения формулы (XXXIX).

Еще один способ может включать в себя обработку соответственно замещенного соединения формулы (XVIII) комбинацией йода, фосфина трифенила и имидазола в приемлемом растворителе, таком как пиридин или DMF, или т. п., при температуре в диапазоне от около 0°C до около 30°C с получением соответствующего йодного аналога, который можно дополнительно вводить в реакцию с азидом натрия в соответственно выбранном растворителе или смеси растворителей, таких как DMF, THF, толуол и т. п., при температуре в диапазоне от около 0°C до около 130°C с получением соответствующего соединения формулы (XXXIX).

Соединение формулы (XXXIX) можно впоследствии вводить в реакцию с источником водорода в условиях гидрирования в присутствии соответственно выбранного катализатора или каталитической системы, например Pd/C, Pt и т. п., в растворителе, таком как MeOH, EtOH, EtOAc или т. п., с получением соответствующего соединения формулы (XXXX). В альтернативном варианте осуществления соединение формулы (XXXIX) может быть введено в реакцию с фосфином трифенила в приемлемом растворителе, таком как THF, DMF или т. п., при температуре в диапазоне от около 20°C до около 60°C с последующей обработкой водой при той же температуре с получением соответствующего соединения формулы (XXXX).

Соединение формулы (XXXX) может быть введено в реакцию с соединением формулы (V), таким как хлорид сульфурила, хлорсульфат 4-нитрофенила или т. п., в присутствии соответственно выбранного основания, такого как Et₃N, DIPEA или т. п., в соответственно выбранном растворителе или смеси растворителей, таких как CHCl₃, CH₂Cl₂, THF, пиридин и т. п., при температуре в диапазоне от около -78°C до около 50°C с получением соответствующего соединения формулы (XXXXI). Защитную группу PG₁ для спирта в соединении формулы (XXXIV) можно впоследствии отщеплять способами, хорошо известными специалистам в данной области, при наличии основных или кислых условий с получением соответствующего соединения формулы (XXXXII).

Соединение формулы (XXXXII) можно вводить в реакцию в присутствии соответственно выбранного основания, такого как Et₃N, DIPEA, DMAP, Cs₂CO₃ или т. п., в соответственно выбранном растворителе или смеси растворителей, таких как CHCl₃, CH₂Cl₂, THF, MeCN, пиридин и т. п., при температуре в диапазоне от около -10°C до около 80°C с получением соответствующего соединения формулы (XXXXIII).

Из соединения формулы (XXXXIII) могут быть впоследствии удалены защитные группы в щелочных условиях, например MeNH₂, tBuNH₂, гидроксид аммония, Et₃N·3HF и т. п., в соответственно выбранном растворителе или смеси растворителей, таких как EtOH, вода, iPrOH и т. п., при температуре в диапазоне от около -10°C до около 120°C или способами, хорошо известными специалистам в данной области, при наличии основных или кислых условий с получением соответствующего соединения формулы (I-e).

Общая схема 6

Следовательно, защитные группы PG₂ и PG₄ для спирта в соединении формулы (VIII), в котором PG₁, PG₂, PG₃ и PG₄ представляют собой защитные группы, известные специалистам в данной области, PG₁ и PG₃ могут быть выбраны из ацетила, триметилсилила, трет-бутилдиметилсилила, бензила, тритила, диметокситритила или т. п., а PG₂ и PG₄ могут быть выбраны из ацила, бензоила, изобутирила или т. п., а также известное соединение или соединение, полученное известными способами, можно избирательно отщеплять в присутствии защитных групп PG₁ и PG₃ для спирта способами, хорошо известными специалистам в данной области, при наличии основных или кислых условий с получением соответствующего соединения формулы (XXXXIV).

Соединение формулы (XXXXIV) может быть введено в реакцию с соединением формулы (XXXXV), таким как йодметан или бромэтан, где R₉ представляет собой необязательно замещенный C_1-3 алкил или т. п., в присутствии соответственно выбранного основания, такого как NaHCO₃, K₂CO₃, Et₃N, DIPEA или т. п., в выбранном соответственно растворителе или смеси растворителей, таких как CHCl₃, CH₂Cl₂, THF, DMF и т. п., при температуре в диапазоне от около -78°C до около 80°C с получением соответствующего соединения формулы (XXXXVI). Защитные группы PG₂ и PG₄ впоследствии снова вводят в (XXXXVI), используя защитные группы, известные специалистам в данной области, выбранные из ацила, бензоила, изобутирила или т. п., а также известное соединение или соединение, полученное известными способами, в присутствии соответственно выбранного основания, такого как Et₃N, DIPEA, DMAP, Cs₂CO₃ или т. п., в соответственно выбранном растворителе или смеси растворителей, таких как CHCl₃, CH₂Cl₂, THF, MeCN, пиридин и т. п., при температуре в диапазоне от около -10°C до около 80 °C, с получением соответствующего соединения формулы (XXXXVII).

Защитные группы PG₁ и PG₃ для спирта в соединении формулы (XXXXVII) можно впоследствии выборочно отщеплять в присутствии защитных групп PG₂ и PG₄ способами, хорошо известными специалистам в данной области, при наличии основных или кислых условий с получением соответствующего соединения формулы (XXXXVIII). Соединение формулы (XXXXVIII) можно впоследствии вводить в реакцию с соответственно замещенным соединением формулы (X), в котором R₈ представляет собой галоген, диизопропиламино или т. п., а также известное соединение или соединение, полученное известными способами, в присутствии приемлемого активатора, такого как тетразол, DMAP, 5-этилтио-1H-тетразол или т. п., в соответственно выбранном растворителе или смеси растворителей, таких как MeCN, CH₂Cl₂, THF, диоксан и т. п., при температуре в диапазоне от около -10°C до около 60 °C, с получением соответствующего фосфитного соединения формулы (XXXXIX).

Соединение формулы (XXXXIX) можно впоследствии вводить в реакцию с окислителем, таким как йод, пероксид водорода, трет-бутилпероксид, реагент Бокажа, DDTT, 3-амино-1,2,4-дитиазол-5-тион, PADS или т. п. или BH₃·SMe₂, комплекс BH₃·THF или т. п., в соответственно выбранном растворителе или смеси растворителей, таких как CHCl₃, CH₂Cl₂, THF, MeCN, диоксан и т. п., при температуре в диапазоне от около -10°C до около 80°C с получением соединения формулы (L), в котором R₄ представляет собой O, S или BH₃.

Из соединения формулы (L) могут быть впоследствии удалены защитные группы в щелочных условиях, например MeNH₂, tBuNH₂, гидроксид аммония, Et₃N·3HF или т. п., в соответственно выбранном растворителе или смеси растворителей, таких как EtOH, вода, iPrOH и т. п., при температуре в диапазоне от около -10°C до около 120°C или способами, хорошо известными специалистам в данной области, при наличии основных или кислых условий с получением соответствующего соединения формулы (I-f).

В альтернативном варианте осуществления соединения формулы (I) можно получать в соответствии с процессом, представленным ниже на общей схеме 7.

Схема 7

Следовательно, защитные группы PG₁ для спирта в соединении формулы (III), в котором PG₁ и PG₂ представляют собой защитные группы, известные специалистам в данной области, где PG₁ может быть выбрана из ацетила, триметилсилила, трет-бутилдиметилсилила, бензила, тритила, диметокситритила или т. п., а PG₂ может быть выбрана из ацила, бензоила, изобутирила или т. п., а также известное соединение или соединение, полученное известными способами, можно избирательно отщеплять при наличии защитных групп PG₂ для спирта способами, хорошо известными специалистам в данной области, при наличии основных или кислых условий с получением соответствующего соединения формулы (L1).

Соединение формулы (XIII), в котором PG₁ и PG₄ представляют собой защитные группы, известные специалистам в данной области, где PG₁ может быть выбрана из ацетила, триметилсилила, трет-бутилдиметилсилила, бензила, тритила, диметокситритила или т. п., а PG₄ может быть выбрана из ацила, бензоила, изобутирила или т. п., а также известное соединение или соединение, полученное известными способами, можно впоследствии вводить в реакцию с соответственно замещенным соединением формулы (X), в котором R₈ представляет собой галоген, диизопропиламино или т. п., а также известное соединение или соединение, полученное известными способами, в присутствии подходящего активатора, такого как тетразол, DMAP, 5-этилтио-1H-тетразол или т. п., в соответственно выбранном растворителе или смеси растворителей, таких как MeCN, CH₂Cl₂, THF, диоксан и т. п., при температуре в диапазоне от около -10°C до около 60°C с получением соответствующего фосфитного соединения формулы (LII).

Соединение формулы (LI) можно впоследствии вводить в реакцию с соединением формулы (LII) в присутствии или в отсутствие приемлемого активатора, такого как тетразол, DMAP, 5-этилтио-1H-тетразол или т. п., в соответственно выбранном растворителе или смеси растворителей, таких как MeCN, CH₂Cl₂, THF, DMF, диоксан и т. п., при температуре в диапазоне от около -10°C до около 60°C с получением соответствующего фосфита, который окисляют in situ окислителем, таким как йод, пероксид водорода, трет-бутилпероксид, реагент Бокажа, DDTT, 3-амино-1,2,4-дитиазол-5-тион, PADS или т. п. или BH₃· SMe₂, комплексом BH₃· THF или т. п., в соответственно выбранном растворителе или смеси растворителей, таких как CHCl₃, CH₂Cl₂, THF, MeCN, диоксан и т. п., при температуре в диапазоне от около -10°C до около 80°C с получением соединения формулы (LIII), где R₄ представляет собой O, S или BH₃.

Защитную группу PG₁ для спирта в соединении формулы (LIII) выборочно отщепляют в присутствии группы защиты спирта PG₂ и PG₄ способами, хорошо известными специалистам в данной области, при наличии основных или кислых условий с получением соответствующего соединения формулы (LIV).

Соединение формулы (LIV) можно впоследствии вводить в реакцию с источником водорода в условиях гидрирования в присутствии соответственно выбранного катализатора или каталитической системы, например Pd/C, Pt и т. п., в растворителе, таком как MeOH, EtOH, EtOAc или т. п., с получением соответствующего соединения формулы (XXXX). В альтернативном варианте осуществления соединение формулы (LIV) может быть введено в реакцию с фосфином трифенила в приемлемом растворителе, таком как THF, DMF или т. п., а затем с водой при температуре в диапазоне от около 20°C до около 60°C с последующей обработкой водой при той же температуре с получением соответствующего соединения формулы (LV).

Соединение формулы (LV) может быть введено в реакцию с реагентом или известным реагентом, таким как хлорид сульфурила, 1,1’-сульфонилдиимидазол, хлорсульфат 4-нитрофенила или т. п., в присутствии или в отсутствие соответственно выбранного основания, такого как Et₃N, DIPEA или т. п., в соответственно выбранном растворителе или смеси растворителей, таких как CHCl₃, CH₂Cl₂, THF, пиридин и т. п., при температуре в диапазоне от около -78°C до около 50°C с получением соответствующего соединения формулы (XII).

Из соединения формулы (XII) могут быть впоследствии удалены защитные группы с использованием кислотных или щелочных условий или способами, хорошо известными специалистам в данной области, с получением соответствующего соединения формулы (I-a).

Конкретные примеры

Пример 1

Стадия 1. Получение соединения 1b

Соединение 1a (5,48 г, 14,7 ммоль, совместно выпаренное с безводным толуолом (2x)) растворяли в безводном DMF (87 мл). Добавляли трифенилфосфин (5,77 г, 22,0 ммоль), азид натрия (3,06 г, 47,1 ммоль), йодид тетрабутиламмония (1,08 г, 2,94 ммоль) и тетрабромистый углерод (7,30 г, 22,0 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи с последующим концентрированием при пониженном давлении. Полученный остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-10% MeOH в DCM) с получением соединения 1b в виде твердого порошка белого цвета (5,09 г, выход: 87%). ИЭР-МС: m/z 399,0 [M+H]⁺.

Стадия 2. Получение соединения 1c

Имидазол (0,51 г, 7,5 ммоль) и TBSCl (0,76 г, 5,0 ммоль) добавляли к раствору соединения 1b (1,0 г, 2,5 ммоль) в DMF (15 мл), перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение ночи. Смесь выливали в воду и экстрагировали с помощью EtOAc, промывали объединенные органические слои солевым раствором, высушивали безводным Na₂SO₄ и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-50% EtOAc в петролейном эфире) с получением соединения 1c в виде белого твердого вещества (1,2 г, выход: 93%). ¹H ЯМР (400 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) δ м. д. 0,18 (с, 6H), 0,95 (с, 9H), 3,52 (дд, J=13,6, 4,3 Гц, 1H), 3,78 (дд, J=13,6, 3,0 Гц, 1H), 4,25 (м, J=7,2, 3,5, 3,5 Гц, 1H), 4,85 (ддд, J=18,8, 7,5, 4,5 Гц, 1H), 5,53 (ддд, J=53,0, 4,5, 1,8 Гц, 1H), 6,24 (дд, J=18,2, 1,9 Гц, 1H), 7,50-7,58 (м, 2H), 7,59-7,67 (м, 1H), 7,99-8,08 (м, 2H), 8,23 (с, 1H), 8,80 (с, 1H), 9,04 (уш. с, 1H); ИЭР-МС: m/z 513,1 [M+H]⁺.

Стадия 3. Получение соединения 1d

Раствор соединения 1c (1,15 г, 2,24 ммоль) в EtOAc (50 мл) гидрогенизировали при атмосферном давлении при комнатной температуре на Pd/C (20% на угле, 132 мг, 0,224 ммоль) в качестве катализатора. После захвата водорода катализатор удаляли фильтрацией и выпаривали фильтрат с получением соединения 1d (1,1 г) в виде белого твердого вещества. Неочищенный продукт использовали в том виде на следующем шаге. ИЭР-МС: m/z 509,1 [M+Na]⁺.

Стадия 4. Получение соединения 1e

Соединение 1d (710 мг, 1,16 ммоль), 4-нитрофенол (485 мг, 3,49 ммоль) и Et₃N (965 мкл, 6,98 ммоль) растворяли в DCM (30 мл) с последующим добавлением молекулярных сит калибра 4Å (500 мг). Полученную смесь охлаждали до -78°C с последующим добавлением хлорсульфата 4-нитрофенила (830 мг, 3,49 ммоль) в DCM (4 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 2,5 ч при -78 °C. Добавляли водный NaHCO₃, отделяли водный слой и экстрагировали с помощью DCM. Объединенные органические слои высушивали над водным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-50% EtOAc в петролейном эфире) с получением соединения 1e в виде белого твердого вещества (546 мг, чистота: 89%, выход: 56%, начиная от соединения 1d). ¹H ЯМР (400 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) δ м. д. 0,17 (с, 3H), 0,18 (с, 3H), 0,96 (с, 9H), 3,64-3,75 (м, 2H), 4,43 (уш. с, 1H), 4,67-4,74 (м, 1H), 5,51 (дт, J=51,8, 5,4 Гц, 1H), 6,14 (дд, J=13,1, 5,5 Гц, 1H), 7,41 (м, J=9,0 Гц, 2H), 7,56 (т, J=7,8 Гц, 2H), 7,65 (т, J=7,5 Гц, 1H), 8,05 (д, J=7,3 Гц, 2H), 8,09 (с, 1H), 8,15 (м, J=9,0 Гц, 2H), 8,54 (с, 1H), 8,99 (уш. с, 1H), 9,40 (уш. дд, J=6,5, 2,5 Гц, 1H); ¹⁹F ЯМР (376 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) δ м. д. -207,51 (уш. с, 1 F); ИЭР-МС: m/z 688,1 [M+H]⁺.

Стадия 5. Получение соединения 1f

Смесь соединения 1e (546 мг (чистота 92%), 0,73 ммоль), 5'-O-(4,4'-диметокситритил)-N2-изобутирил-3'-O-метил]-D-гуанозин([103285-33-2], 753 мг (чистота 97%), 1,09 ммоль) и молекулярных сит 4Å (500 мг) в DCM (8 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч в азотной атмосфере. Добавляли Et₃N (503 мкл, 3,64 ммоль) и продолжали перемешивание в течение ночи. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении, полученный остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-90% EtOAc в петролейном эфире) с получением соединения 1f, которое использовали в таком виде на следующей стадии. ¹H ЯМР (400 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) δ м. д. 0,14 (с, 3H), 0,15 (с, 3H), 0,75 (д, J=7,0 Гц, 3H), 0,89 (д, J=6,8 Гц, 3H), 0,93 (с, 9H), 1,94 (спт, J=6,8 Гц, 1H), 3,15 (дд, J=10,9, 3,4 Гц, 1H), 3,45 (с, 3H), 3,48-3,63 (м, 3H), 3,75 (с, 3H), 3,76 (с, 3H), 4,12-4,21 (м, 1H), 4,28 (т, J=5,3 Гц, 1H), 4,36 (уш. с, 1H), 4,63-4,72 (м, 1H), 5,49 (дт, J=52,0, 5,1 Гц, 1H), 5,75 (т, J=4,8 Гц, 1H), 6,07 (д, J=4,5 Гц, 1H), 6,12 (дд, J=13,4, 5,1 Гц, 1H), 6,79 (м, J=8,4, 8,4 Гц, 4H), 7,15-7,22 (м, 1H), 7,25 (т, J=7,5 Гц, 2H), 7,34 (м, J=8,3 Гц, 4H), 7,43-7,55 (м, 4H), 7,61 (т, J=7,3 Гц, 1H), 7,72 (с, 1H), 8,08 (д, J=8,3 Гц, 2H), 8,09 (с, 1H), 8,83 (с, 1H), 9,14 (м, J=8,3 Гц, 2H), 9,54 (уш. с, 1H), 12,06 (уш. с, 1H); ¹⁹F ЯМР (376 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) δ м. д. -207,07 (уш. с, 1F); ИЭР-МС: m/z 1240,6 [M+Na]⁺.

Стадия 6. Получение соединения 1g

К раствору неочищенного соединения 1f в MeCN (20 мл) добавляли 80% уксусную кислоту (20 мл, 279,5 ммоль) и триэтилсилан (2 мл, 12,5 ммоль), перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение ночи. Добавляли EtOAc и водный Na₂CO₃, отделяли органический слой, высушивали над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировала фильтрат при пониженном давлении. Полученный остаток растворяли в пиридине (10 мл), к которому добавляли триэтиламин (1,0 г, 10,0 ммоль) и Et₃N·3HF (807 мг, 5,0 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 12 ч. С помощью последующего концентрирования при пониженном давлении получали неочищенный продукт, который очищали посредством препаративной обращенно-фазной ВЭЖХ (неподвижная фаза: Phenomenex Gemini C18, 10 мкм, 250×50 мм; подвижная фаза: 10 мМ водный бикарбонат аммония (A) - MeCN (B); градиентное элюирование 22-52% B в A в течение 11,2 мин; скорость потока: 22 мл/мин) с получением соединения 1g (выход: 27%, начиная от соединения 1f). ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ м. д. 1,11 (д, J=6,5 Гц, 6H), 2,75 (спт, J=6,8 Гц, 1H), 3,11-3,24 (м, 2H), 3,39 (с, 3H), 3,51-3,59 (м, 1H), 3,59-3,69 (м, 1H), 3,95 (м, J=3,7 Гц, 1H), 4,09 (д, J=3,3 Гц, 1H), 4,17 (дд, J=4,9, 3,3 Гц, 1H), 4,57 (ддд, J=19,5, 7,3, 4,5 Гц, 1H), 5,22 (уш. с, 1H), 5,37 (т, J=5,5 Гц, 1H), 5,57 (ддд, J=52,5, 4,5, 2,4 Гц, 1H), 6,07 (д, J=6,5 Гц, 1H), 6,33 (дд, J=19,3, 2,2 Гц, 1H), 7,50-7,60 (м, 2H), 7,61-7,70 (м, 1H), 7,99-8,10 (м, 2H), 8,22 (с, 1H), 8,62 (с, 1H), 8,73 (с, 1H) (NH и OH при обмене с D₂O); ¹⁹F ЯМР (376 МГц, МЕТАНОЛ-d4) δ м. д. -205,32 (уш. с, 1F); ИЭР-МС: m/z 802,2 [M+H]⁺

Стадия 7. Получение соединения 1h

Раствор соединения 1g (100 мг, 0,12 ммоль) и 1H-тетразола (2,2 мл 0,45 M в MeCN, 0,93 ммоль) в смеси 1 : 1 MeCN/THF (14 мл) обрабатывали молекулярными ситами 4Å в течение 30 мин, после чего добавляли 2-цианоэтил-N, N,N',N'-тетра(изопропил)фосфородиамидит (70 мг, 0,23 ммоль) в MeCN (6 мл). Полученную реакционную смесь перемешивали в течение 2 ч, после чего добавляли дополнительное количество тетразола (0,55 мл 0,45 M в MeCN, 0,25 ммоль) с последующим перемешиванием в течение еще 30 мин. Добавляли I₂ (0,5 M в смеси 8 : 1 : 1 THF/пиридин/вода, 695 мкл, 0,357 ммоль) и продолжали перемешивание в течение ночи. Реакционную смесь гасили добавлением насыщенного водного Na₂S₂O₃ и фильтровали, концентрировали фильтрат при пониженном давлении. Остаток очищали посредством обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (неподвижная фаза: Phenomenex Gemini C18, 10 мкм, 250×50 мм; подвижная фаза: 10 мМ водный бикарбонат аммония (A) - MeCN (B); градиентное элюирование 20-50% B в A в течение 11,2 мин; скорость потока: 22 мл/мин) с получением соединения 1h, которое использовали в таком виде на следующей стадии удаления защитных групп. ИЭР-МС: m/z 917,4 [M+H]⁺.

Стадия 8. Получение соединения 1 (натриевая соль)

Раствор соединения 1h в смеси водного раствора аммония (25%, 9 мл) и EtOH (3 мл) перемешивали при 50°C в течение ночи. Неочищенный продукт, полученный после концентрирования при пониженном давлении очищали посредством препаративной обращенно-фазной ВЭЖХ (неподвижная фаза: Syneri Polar-RP, 5 мкм, 100×30 мм; подвижная фаза: 10 мМ водный бикарбонат аммония (A) - MeCN (B); градиентное элюирование 0-25% B в A в течение 12 мин; скорость потока: 25 мл/мин) с получением соединения 1 в виде аммонийной соли. Соединение 1 превращали в натриевую соль элюированием колонки, заполненной натриевой катионообменной смолой, с помощью водного раствора с получением 12,9 мг соединения 1 (натриевая соль) в виде белого твердого вещества после лиофилизации (выход: 13%, начиная от соединения 1g). ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆, спектр записан при 80 °C) δ м. д. 3,31 (дд, J=13,2. 2,2 Гц, 1H), 3,50 (с, 3H), 3,60 (дд, J=13,5, 3,6 Гц, 1H), 3,91-3,98 (м, 1H), 4,20 (д, J=4,2 Гц, 1H), 4,23-4,28 (м, 1H), 4,28-4,31 (м, 1H), 4,31-4,37 (м, 1H), 5,22-5,34 (м, 1H), 5,43 (дд, J=51,7, 4,4 Гц, 1H), 5,99 (д, J=8,3 Гц, 1H), 6,19 (уш. с, 1H), 6,33 (д, J=19,5 Гц, 1H), 6,58 (уш. с, 2H), 7,08 (с, 2H), 7,69 (с, 1H), 7,87 (с, 1H), 8,34 (уш. с, 1H), 9,70 (уш. с, 1H); ³¹P ЯМР (162 МГц, DMSO-d₆) δ м. д. 56,05 (с, 1P), 94,05 (уш. с, 1P); ИЭР-МС: m/z 690,2 [M+H]⁺.

Пример 2

Стадия 1. Получение соединения 2a

Раствор соединения 1g (230 мг, 0,28 ммоль) и 1H-тетразола (1,67 мл 3-4% в MeCN) в смеси 1 : 1 MeCN/THF (12 мл) обрабатывали молекулярными ситами 4Å в течение 2 часов, после чего добавляли 2-цианоэтил-N, N,N',N'-тетра(изопропил)фосфородиамидит (78 мг, 0,26 ммоль). Полученную реакционную смесь перемешивали в течение 30 мин, после чего добавляли дополнительное количество 2-цианоэтил-N, N,N’,N’-тетра(изопропил)фосфородиамидита (8,6 мг, 0,03 ммоль), а затем перемешивали в течение еще 15 мин. Добавляли пиридин (15 мл) и дисульфид фенилацетила (PADS, 217 мг, 0,72 ммоль) и продолжали перемешивание в течение 40 мин. После удаления молекулярных сит фильтрацией к реакционной смеси добавляли EtOAc с последующим тщательным промыванием солевым раствором и насыщенным водным NaHCO₃. Органическую фазу высушивали над безводным MgSO₄, фильтровали, а фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт использовали в таком виде на следующей стадии удаления защитных групп. ИЭР-МС: m/z 933,2 [M+H]⁺.

Стадия 2. Получение соединения (*R) 2A (натриевая соль)

Неочищенное соединение 2a перемешивали в 33% растворе метиламина в этаноле (20 мл) при 50°C в течение 4 ч. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Полученный неочищенный продукт растворяли в воде, промывали EtOAc, лиофилизировали и очищали посредством препаративной обращенно-фазной ВЭЖХ (неподвижная фаза: XBridge C18 OBD, 5 мкм, 250×30 мм; подвижная фаза: водный 0,25% бикарбонат аммония (A) - MeCN (B); градиентное элюирование: 0-15% B в A в течение 29 мин, скорость потока: 30 мл/мин) с получением соединения (*R) 2A в виде одного диастереомера. Превращение в натриевую соль выполняли как описано в примере 1, стадия 8 (23 мг, выход: 10%, начиная от соединения 1g). ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆, спектр записан при 80 °C) δ м. д. 3,31-3,43 (м, 1H), 3,49 (с, 3H), 3,62-3,75 (м, 1H), 3,92-4,00 (м, 1H), 4,00-4,09 (м, 1H), 4,20 (уш. с, 1H), 4,31 (уш. с, 2H), 5,33-5,50 (м, 2H), 5,64 (уш. д, J=52,0 Гц, 1H), 5,68 (дд, J=8,7, 4,1 Гц, 1H), 6,03 (д, J=8,6 Гц, 1H), 6,26 (с, 2H), 6,33 (д, J=18,4 Гц, 1H), 7,07 (с, 2H), 7,88 (уш. с, 1H), 8,29 (уш. с, 2H), 8,66 (уш. с, 1H), 10,30 (уш. с, 1H); ³¹P ЯМР (162 МГц, DMSO-d₆) δ м. д. 52,18 (с, 1P); ИЭР-МС: m/z 706,0 [M+H]⁺.

Пример 3

Стадия 1. Получение соединения 3c

К раствору соединения 3b (2,0 г, 4,99 ммоль, CAS № 153186-10-8) в пиридине (8 мл) медленно добавляли MsCl (1,14 г, 9,99 ммоль) при 0°C в атмосфере N₂; после перемешивания в течение 1 ч при комнатной температуре реакционную смесь разбавляли с помощью EtOAc (20 мл) и промывали водой (3×20 мл). Водную фазу отделяли и экстрагировали с помощью EtOAc (3×15 мл).

Объединенные органические слои последовательно высушивали над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением соединения 3c в виде желтого масла (3,1 г).

¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ м. д. 7,38-7,31 (м, 7H), 7,21-7,14 (м, 3H), 5,79 (д, J=3,8 Гц, 1H), 4,87 (д, J=11,8 Гц, 1H), 4,74 (д, J=12,0 Гц, 1H), 4,67-4,62 (м, 1H), 4,57-4,38 (м, 4H), 4,30 (д, J=5,3 Гц, 1H), 3,63-3,58 (м, 1H), 3,53-3,48 (м, 1H), 3,63-3,47 (м, 1H), 3,07 (с, 3H), 2,36 (с, 3H), 1,71-1,67 (м, 3H), 1,35 (с, 3H); ИЭР-МС: m/z=501,2 [M+Na]⁺.

Стадия 2. Получение соединения 3d

Раствор 3c (1,0 г, 2,1 ммоль) в 80% водном растворе трифторуксусной кислоты (10 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. После удаления растворителя при пониженном давлении остаток растворяли в DCM (20 мл) и промывали насыщенным водным NaHCO₃ (2×20 мл). Органический слой последовательно высушивали над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением бесцветного масла (876 мг). Масло совместно выпаривали с безводным пиридином (2×15 мл), растворяли в безводном пиридине (15 мл) и обрабатывали с помощью Ac₂O (815,8 мг, 7,99 ммоль). После перемешивания в течение ночи при 50°C реакционную смесь гасили водным насыщенным NaHCO₃ (25 мл) и разделяли с EtOAc (2×20 мл). Органические слои объединяли, последовательно промывали солевым раствором (15 мл), высушивали над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (0-30% EtOAc в петролейном эфире) с получением 3d в виде бесцветного сиропа (786 мг).

¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ м. д. 7,42-7,18 (м, 12H), 6,38 (д, J=4,5 Гц, 1H), 6,15 (с, 1H), 5,36 (д, J=5,0 Гц, 1H), 5,30 (с, 1H), 5,17 (дд, J=4,8, 6,3 Гц, 1H), 2,99 (с, 3H), 2,96 (с, 1H), 2,19-2,10 (м, 4H), 2,06 (д, J=7,8 Гц, 1H), 1,90 (с, 3H). ИЭР-МС: m/z=545 [M+Na]⁺.

Стадия 3. Получение соединения 3f

К суспензии соединения 3d (200 мг, 0,38 ммоль) и 6-N-бензоиладенина (3e, 109,8 мг, 0,46 ммоль) в безводном 1,2-дихлорэтане (5 мл) добавляли бис(триметилсилил)ацетамид (BSA, 202,4 мг, 0,99 ммоль). Смесь нагревали с обратным холодильником в течение 1 ч и охлаждали до кт. Добавляли TMSOTf (170 мг, 0,76 ммоль) и нагревали раствор при 110°C в течение 16 ч. Реакционную смесь разбавляли с помощью DCM (15 мл), впоследствии выливали в ледяной насыщенный водный NaHCO₃ (20 мл), перемешивали в течение 0,5 ч и фильтровали. После разделения двух слоев органический слой последовательно промывали насыщенным водным NaHCO₃ (3×15 мл), высушивали над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. С помощью очистки остатка посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (1-1,5% об./об. MeOH/CH₂Cl₂) получали соединение 3f (208 мг) в виде светло-желтого твердого вещества. ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ м. д. 8,80 (с, 1H), 8,59 (с, 1H), 8,04 (с, 1H), 7,87 (уш. д, J=7,3 Гц, 2H), 7,54-7,44 (м, 1H), 7,44-7,34 (м, 2H), 7,29-7,03 (м, 10H), 6,18 (уш. д, J=4,4 Гц, 1H), 5,96-5,84 (м, 1H), 4,70 (уш. д, J=5,6 Гц, 1H), 4,56-4,29 (м, 1H), 4,55-4,22 (м, 4H), 4,21 (с, 1H), 3,63-3,53 (м, 1H), 3,46 (уш. д, J 10,0 Гц, 1H), 2,84-2,75 (м, 1H), 2,86-2,75 (м, 1H), 2,87-2,71 (м, 1H), 1,99-1,92 (м, 1H), 1,91 (уш. С, 1H); ИЭР-МС: m/z=702 [M+H]⁺.

Стадия 4. Получение соединения 3g

К раствору соединения 3f (5,86 г, 8,35 ммоль) в смеси THF (50 мл) и воды (35 мл) добавляли LiOH·H₂O (1,75 г, 41,8 ммоль) при 0 °C. После перемешивания смеси в течение при комнатной температуре 5 ч реакционную смесь разбавляли EtOAc (30 мл). Органическую фазу промывали солевым раствором (30 мл x 2) и экстрагировали водный слой с помощью EtOAc (50 мл x 3). Объединенные органические слои последовательно промывали насыщенным водным NaHCO₃ (3×15 мл), высушивали над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (EtOAc: PE=0 ~ 70%) с получением соединения 3g (4,25 г) в виде бледно-желтого твердого вещества. ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ м. д. 9,00 (уш. с, 2H), 8,74 (с, 2H), 8,23 (с, 2H). 8,02 (уш. д, J=7,3 Гц, 3H), 7,60 (уш. д, J=7,3 Гц, 2H), 7,52 (уш. т, J=7,5 Гц, 3H), 7,38-7,16 (м, 15H), 6,09 (с, 2H), 4,79 (с, 2H), 4,66-4,49 (м, 6H), 4,24 (с, 2H), 4,18-4,05 (м, 3H), 3,99 (уш. д, J=7,8 Гц, 2H), 3,90-3,70 (м, 3H), 2,03 (с, 2H), 1,75 (уш. с, 3H), 1,24 (уш. т, J=7,1 Гц, 2H); ИЭР-МС: m/z=564,1 [M+H]⁺.

Стадия 5. Получение соединения 3h

К перемешанному раствору соединения 3g (3,3 г, 5,85 ммоль) в DCM (50 мл) добавляли метансульфоновую кислоту при 0 °C (28,9 г, 0,3 моль). После перемешивания при 0°C в течение 2,5 ч реакционную смесь объединяли с предыдущей партией и добавляли суспензию NaHCO₃ (75 г, 0,90 моль) в DCM (180 мл) с использованием капельной воронки с выравниванием давления. После перемешивания реакционной смеси в течение 1,5 ч добавляли MeOH (10 мл) и перемешивали смесь в течение еще 0,5 ч (pH ~ 7-8). Реакционную смесь фильтровали и концентрировали фильтрат при пониженном давлении с получением светло-желтого твердого вещества, очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (0-10% MeOH в DCM, 25 мл/мин) с получением соединения 3h в виде грязно-белого твердого вещества (3,75 г). ¹H ЯМР (400 МГц, CD₃OD) δ м. д. 8,73 (с, 1H), 8,56 (с, 1H), 8,13-8,06 (м, 2H), 7,71-7,62 (м, 1H), 7,61-7,53 (м, 2H), 6,14 (с, 1H), 4,63 (с, 1H), 4,38 (с, 1H), 4,09 (д, J=7,8 Гц, 1H), 3,97 (с, 2H), 3,92 (д, J=7,8 Гц, 1H).

Стадия 6. Получение соединения 3i

К смеси соединения 3h (4,3 г, 11,2 ммоль) в пиридине (50 мл) добавляли раствор DMTrCl (4,56 г, 13,4 ммоль) в пиридине (20 мл)) по каплям при 0 °C. После перемешивания при кт в течение 2 ч реакционную смесь разбавляли этилацетатом (100 мл), впоследствии последовательно промывали насыщенным водным NaHCO₃ (80 мл x 3) и солевым раствором (80 мл x 2). Органические слои объединяли и последовательно высушивали над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (0-100% EtOAc в петролейном эфире) с получением соединения 3i в виде белого твердого вещества (7,8 г). ¹H ЯМР (400 МГц, CD₃OD) δ м. д. 8,74 (с, 1H), 8,50 (с, 1H), 8,09 (д, J=7,3 Гц, 2H), 7,70-7,62 (м, 1H), 7,60-7,53 (м, 2H), 7,48 (д, J=7,5 Гц, 2H), 7,36 (дд, J=3,0, 9,0 Гц, 4H), 7,33-7,27 (м, 1H), 7,26-7,18 (м, 1H), 6,87 (д, J=8,8 Гц, 4H), 6,17 (с, 1H), 4,65 (с, 1H), 4,49 (с, 1H), 4,10 (к, J=7,3 Гц, 1H), 4,05-3,98 (м, 2H), 3,77 (с, 6H), 3,65-3,58 (м, 1H), 3,54-3,48 (м, 1H); ИЭР-МС: m/z=686 [M+H]⁺.

Стадия 7. Получение соединения 3k

К перемешанной суспензии соединения 3j (5,0 г, 13,61 ммоль, CAS № 160107-07-3), трифенилфосфина (4,28 г, 16,33 ммоль), TBAI (502 мг, 1,36 ммоль) и NaN₃ (3,3 г, 50,76 ммоль) в DMF (60 мл) за раз добавляли CBr₄ (5,41 г, 16,33 ммоль). После перемешивания при 20°C в течение 12 ч реакционную смесь разделяли с 80 мл насыщенного водного NaHCO₃ и DCM (100 мл x 3). Органические слои объединяли и последовательно высушивали над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (0-100% EtOAc в петролейном эфире для вымывания Ph₃PO, впоследствии переходили на 0-10% MeOH в DCM) с получением 3k в виде белого твердого вещества (4,26 г). ¹H ЯМР (400 МГц, CD₃OD) δ м. д. 8,16 (с, 1H), 5,96 (д, J=4,9 Гц, 1H), 4,82 (т, J=5,3 Гц, 1H), 4,27-4,21 (м, 1H), 3,97 (т, J=4,9 Гц, 1H), 3,66 (д, J=4,4 Гц, 2H), 3,52 (с, 3H), 2,78-2,69 (м, 1H), 1,24 (д, J=6,8 Гц, 6H); ИЭР-МС: m/z=393,1 [M+H]⁺.

Стадия 8. Получение соединения 3l

К раствору 3k (4,07 г, 10,37 ммоль), 2,4,6-триметилпиридина (1,63 г, 13,48 ммоль) и AgNO₃ (2,29 г, 13,48 ммоль) в DCM (40 мл) добавляли DMTrCl (4,57 г, 13,48 ммоль) при 0 °C. После перемешивания при 25 °C в течение 3 ч красную суспензию разбавляли DCM (50 мл) и фильтровали через слой диатомитовой земли. Фильтрат разделяли между DCM и водой (50/30 мл) и промывали солевым раствором (30 мл). Органические слои объединяли и последовательно высушивали над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (0-5% MeOH в DCM) с получением 3l в виде белого твердого вещества (7,0 г). ¹H ЯМР (400 МГц, CD₃OD) δ 7,94 (с, 1H), 7,35-7,28 (м, 1H), 7,22 (д, J=8,8 Гц, 1H), 7,18-7,12 (м, 2H), 7,09 (д, J=8,811=Гц, 1H), 6,72 (д, J=8,8 Гц, 1H), 6,61 (д, J=8,8 Гц, 1H), 6,03 (д, J=7,7 Гц, 1H), 4,94 (уш. дд, J=5,2, 7,2 Гц, 1H), 4,87 (с, 7H), 4,16 (т, J=5,7 Гц, 1H), 4,07 (к, J=7,1 Гц, 1H), 3,71 (д, J=13,7 Гц, 4H), 3,61 (дд, J=6,6. 12,8 Гц, 1H), 3,29 (с, 3H), 3,21 (с, 2H), 2,75 (кв., J=6,8 Гц, 1H), 2,68 (д, J=4,6 Гц, 1H), 1,99 (с, 2H), 1,28-1,17 (м, 6H); ИЭР-МС: m/z=695,3 [M+H]⁺.

Стадия 9. Получение соединения 3m

Суспензию 3l (1,2 г, 1,72 ммоль) и 10% влажного Pd/C (1,0 г, 0,49 ммоль) в этилацетате (100 мл) гидрогенизировали при 20°C при 15 фунтов на кв. дюйм в течение 4 ч. Реакционную смесь фильтровали через слой диатомитовой земли и концентрировали фильтрат при пониженном давлении с получением остатка, очищенного посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (0-10% MeOH в DCM) с получением 3m в виде белого твердого вещества (682 мг). ¹H ЯМР (400 МГц, CD₃OD) δ 7,89 (с, 1H), 7,33 (дд, J=1,5, 7,8 Гц, 1H), 7,30-7,29 (м, 1H), 7,36-7,29 (м, 1H), 7,21 (д, J=8,8 Гц, 2H), 7,18-7,10 (м, 3H), 7,08 (д, J=8,8 Гц, 2H), 6,71 (д, J=8,8 Гц, 2H), 6,59 (д, J=8,8 Гц, 2H), 5,98 (д, J=7,5 Гц, 1H), 5,03 (дд, J=4,8, 7,5 Гц, 1H), 4,21 (дд, J=3,4, 9,9 Гц, 1H), 3,69 (д, J=16,3 Гц, 6H), 3,26 (с, 3H), 3,16 (дд, J=10,0, 13,1 Гц, 1H), 2,88-2,75 (м, 3H), 1,31-1,21 (м, 8H); ИЭР-МС: m/z=669,3 [M+H]⁺.

Стадия 10. Получение соединения 3o

Раствор хлорсульфата 4-нитрофенила 3n (2,45 г, 10,31 ммоль, J. Chem. Soc., Perkin Trans. 1, 2002, 485-495) в безводном DCM (5 мл) быстро добавляли к смеси 3m (2,3 г, 3,44 ммоль), 4-нитрофенола (1,43 г, 10,31 ммоль), Et₃N (2,09 г, 20,63 ммоль) и активированных молекулярных сит 4Å (≈ 4 г) в безводном DCM (50 мл) в атмосфере N₂ при -78 °C. После подогревания до комнатной температуры (12 °C) и перемешивания в течение 2 ч реакционную смесь разбавляли с помощью DCM (20 мл) и фильтровали через слой диатомитовой земли. Фильтрат объединяли с двумя предыдущими партиями и разделяли между DCM/насыщенный водный NaHCO₃ (100, 3×70 мл). Органические слои объединяли и последовательно высушивали над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (0-100% этилацетат в петролейном эфире) с получением 3o в виде желтого твердого вещества (4,8 г). ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 12,18 (уш. с, 1H), 9,18 (с, 1H), 8,32-8,26 (м, 3H), 7,74 (с, 1H), 7,37-7,28 (м, 4H), 7,25-7,11 (м, 6H), 7,08 (д, J=8,8 Гц, 1H), 6,73 (д, J=9,0 Гц, 2H), 6,63 (д, J=8,8 Гц, 2H), 5,89 (д, J=8,8 Гц, 1H), 4,99 (дд, J=5,0, 8,5 Гц, 1H), 4,29 (с, 1H), 3,80-3,74 (м, 4H), 3,72 (с, 1H), 3,50-3,44 (м, 1H), 3,38-3,29 (м, 1H), 3,20 (с, 3H), 2,77 (д, J=5,0 Гц, 1H), 2,55-2,43 (м, 1H), 1,31-1,27 (м, 4H), 1,15 (д, J=6,8 Гц, 3H). ИЭР-МС: m/z=870 [M+H]⁺.

Стадия 11. Получение соединения 3p

Смесь 3o и 3i перед использованием совместно выпаривали с THF (30 мл x 3). Смесь 3o (4,12 г, 4,74 ммоль), 3i (2,5 г, 3,64 ммоль) и активированных молекулярных сит 4Å (~ 2 г) в безводном THF (50 мл) перемешивали в атмосфере N₂ при кт в течение 1 ч. DMAP (2,22 г, 18,22 ммоль) добавляли в один прием и перемешивали реакционную смесь при 40°C в течение 12 ч Смесь разбавляли с помощью DCM (40 мл), фильтровали через слой диатомитовой земли и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (0-2% MeOH в DCM) с получением 3p в виде светло-желтого твердого вещества (4,6 г). ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 12,31 (с, 1H), 9,25 (s, 1H), 9,11 (уш. с, 1H), 8,78 (с, 1H), 8,52-8,29 (м, 2H), 8,16-8,01 (м, 5H), 7,77 (с, 1H), 6,69 (д, J=8,8 Гц, 2H), 6,60 (д, J=9,0 Гц, 2H), 6,21 (с, 1H), 5,84 (д, J=8,8 Гц, 1H), 5,36 (с, 1H), 5,06 (с, 1H), 4,86 (дд, J=4,9, 8,7 Гц, 1H), 4,06-3,93 (м, 2H), 3,73 (д, J=2,8 Гц, 9H), 3,70 (с, 3H), 3,67-3,58 (м, 1H), 3,34 (д, J=11,0 Гц, 1H), 3,15 (с, 3H), 3,06 (дд, J=2,3, 12,5 Гц, 1H), 2,96-2,84 (м, 1H), 2,62-2,49 (м, 2H), 1,28-1,24 (м, 5H), 1,18 (д, J=6,8 Гц, 3H); ИЭР-МС: m/z=1417 [M+H]⁺.

Стадия 12. Получение соединения 3q

К перемешанному раствору 3p (4,6 г, 3,25 ммоль) в DCM (84 мл) добавляли 6% DCA в DCM (44 мл, 32,3 ммоль, 10,0 экв.) при кт в атмосфере N₂. После перемешивания при кт в течение 30 мин, реакционную смесь гасили пиридином (2,8 г, 11 экв.) и концентрировали полученный бесцветный раствор при пониженном давлении с получением бесцветного остатка, очищенного посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (0-7% MeOH в DCM) с получением 3q в виде белого твердого вещества (1,9 г). Вышеуказанное твердое вещество дополнительно очищали посредством обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (колонка: Phenomenex Synergi Max-RP 250×50 мм x 10 мкм; подвижная фаза: вода (10 мМ NH₄HCO₃)-MeCN, начало B 15, конец B 45; скорость потока: 90 мл/мин, время градиентного элюирования: 18 мин, затем B 100 в течение 3 мин) с получением 2 фракций 3q в виде белого твердого вещества после лиофилизации. Фракция 1: 876 мг и фракция 2: 743 мг. ¹H ЯМР (400 МГц, CD₃OD) δ 8,52 (с, 1H), 8,36 (с, 1H), 8,01 (д, J=7,1 Гц, 2H), 7,86 (с, 1H), 7,65 (д, J=7,3 Гц, 1H), 7,60-7,54 (м, 2H), 6,20 (с, 1H), 5,71 (д, J=4,9 Гц, 1H), 5,22 (д, J=14,4 Гц, 2H), 4,67-4,59 (м, 1H), 4,06 (д, J=3,7 Гц, 2H), 4,02 (уш. д, J=4,6 Гц, 3H), 4,10-3,99 (м, 1H), 3,99-3,93 (м, 1H), 3,51-3,44 (м, 4H), 3,40 (д, J=4,6 Гц, 1H), 2,73-2,65 (м, 1H), 1,21 (дд, J=5,4, 6,6 Гц, 6H); ИЭР-МС: m/z=812,2 [M+H]⁺.

Стадия 13. Получение соединения 3r

THF непосредственно перед работой перегоняли над Na/бензофеноном, а CH₃CN перегоняли над CaH₂ непосредственно перед работой.

Высушенный в вакууме диол 3q (300 мг, 0,37 ммоль) совместно выпаривали со смесью CH₃CN/THF (10/6 мл x 3) и растворяли в смеси CH₃CN/THF (10/6 мл). Добавляли 800 мг активированных молекулярных сит 4Å и раствор 1H-тетразола в CH₃CN (6,56 мл, 0,45 M, полученный путем растворения 945 мг тетразола в 30 мл безводного CH₃CN, после чего добавляли 800 мг молекулярных сит 4Å и впоследствии перемешивали в течение 1 ч в аргоновой атмосфере перед использованием) и барботировали смесь аргоном в течение 15 мин. После перемешивания белой суспензии в течение 1 ч при 8°C в аргоновой атмосфере по каплям добавляли раствор 2-цианоэтил-N, N,N',N'-тетраизопропилфосфородиамидита в CH₃CN (5,62 мл, 0,59 ммоль, 0,105 M в CH₃CN, полученный путем растворения 759 мг фосфородиамидитного реагента в 24 мл CH₃CN, с последующим добавлением 800 мг молекулярных сит 4Å и последующим перемешиванием в течение 1 ч в аргоновой атмосфере перед использованием) в течение 60 мин. Полученную белую суспензию перемешивали в течение 1 ч при 8 °C в аргоновой атмосфере. Добавляли еще CH₃CN (6 мл) и добавляли еще тетразола (1,64 мл, 0,74 ммоль, 0,45 M в CH₃CN) после перемешивания при 30 °C в течение 1 ч. После перемешивания в течение еще 2 ч быстро добавляли раствор DDTT (380 мг, 1,84 ммоль) в пиридине (10 мл). После перемешивания в течение 30 мин смесь фильтровали через слой диатомитовой земли; фильтрат объединяли с другой порцией и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка, растворенного в DCM (8 мл) и очищенного посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (12 г, 0-6% MeOH в DCM, 25 мл/мин) с получением 3r (275 мг) в виде светло-желтого твердого вещества, используемого на следующей стадии без дополнительной очистки. ИЭР-МС: m/z=943,5 [M+H]⁺.

Стадия 14. Получение соединений (*R) 4Å и (*S) 4B

Раствор соединения 3r (275 мг, 0,292 ммоль) в MeNH₂ (27-30% в EtOH, 5 мл) перемешивали при 80 °C в течение 4 ч. Реакционную смесь объединяли с другой порцией и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка; остаток растворяли в смеси CH₃CN/H₂O (1/8 мл) и промывали DCM (8 мл x 3). Водный слой лиофилизировали с получением желтой камеди (382 мг), впоследствии растворенной в смеси CH₃CN/H₂O (4/1). Очистка посредством обращенно-фазной препаративной ВЭЖХ (колонка: Agela Durashell C18 150×25 x 5 мкм; подвижная фаза: вода (0,04% NH3 вода+10 мМ NH₄HCO₃) - CH₃CN; начало B 12, конец B 25; скорость потока: 25 мл/мин, время градиентного элюирования: 12 мин, а затем B 100 в течение 3 мин); нужные фракции собирали и лиофилизировали с получением соединения (*R) 4A (аммонийная соль) (39,8 мг, первый элюируемый изомер) в виде белого твердого вещества и соединения (*S) 4B (аммонийная соль) (65,9 мг, второй элюируемый изомер) в виде белого твердого вещества.

Заключительное превращение в натриевую соль проводили элюированием водным раствором колонки, заполненной Na-ионообменной смолой Dowex 50WX8, с получением соединения (*R) 4A (натриевая соль) и соединения (*S) 4B (натриевая соль) в виде рыхлого белого твердого вещества после лиофилизации.

Соединение (*R) 4A. ¹H ЯМР (400 МГц, 60 °C, DMSO-d₆) δ м. д. 3,34-3,44 (м, 1H), 3,45-3,56 (м, 1H), 3,52 (с, 3H), 3,83 (дд, J=10,7, 2,0 Гц, 1H), 3,98 (д, J=8,3 Гц, 1H), 4,09 (уш. с, 1H), 4,16 (уш. с, 1H), 4,23 (д, J=8,3 Гц, 1H), 4,67 (дд, J=11,1, 7,8 Гц, 1H), 4,98 (уш. с, 1H), 5,14 (уш. с, 1H), 5,31 (ддд, J=13,4, 9,0, 4,4 Гц, 1H), 5,78 (д, J=8,8 Гц, 1H), 6,07 (с, 1H), 6,13 (уш. с, 2H), 7,15 (уш. с, 2H), 7,92 (с, 1H), 8,16 (с, 1H), 8,17 (с, 1H). ³¹P ЯМР (162 МГц, DMSO-d₆) δ 55,83 (с, 1P); ИЭР-МС: m/z=716,2 [M+H]⁺.

Соединение (*S) 4B. ¹H ЯМР (400 МГц, 80 °C, DMSO-d₆) δ м. д. 3,21-3,39 (м, 2H), 3,54 (с, 3H), 3,87 (дд, J=11,5, 4,3 Гц, 1H), 3,92 (д, J=8,1 Гц, 1H), 3,99 (уш. с, 1H), 4,14 (д, J=8,1 Гц, 1H), 4,30 (уш. с, 1H), 4,37 (дд, J=11,6, 5,0 Гц, 1H), 4,84 (уш. с, 1H), 5,06 (уш. с, 1H), 5,31 (ддд, J=12,3, 9,0, 4,2 Гц, 1H), 5,79 (д, J=9,0 Гц, 1H), 6,03 (с, 1H), 6,12 (уш. с, 2H), 6,99 (уш. с, 2H), 7,99 (с, 1H), 8,18 (с, 1H), 8,20 (с, 1H); ³¹P ЯМР (162 МГц, DMSO-d₆) δ 52,88 (с, 1P); ИЭР-МС: m/z=716,2 [M+H]⁺.

Пример 4

Стадия 1. Получение соединения 4a

К раствору соединения 3j (9,6 г, 26,13 ммоль, CAS № 160107-07-3) в DMF (80 мл) добавляли имидазол (3,56 г, 52,26 ммоль) и TBSCL (4,73 г, 31,36 ммоль) при 0 °C. После перемешивания смеси при 25°C в течение 2 ч реакционную смесь разбавляли с помощью EtOAc (200 мл) и H₂O (100 мл); органический слой последовательно высушивали над безводным Na₂SO₄, фильтровали и выпаривали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-5% MeOH в DCM) с получением соединения 4a (9,7 г, 76%) в виде белого твердого вещества. ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) δ=12,12 (уш. с, 1H), 9,48 (уш. с, 1H), 8,05 (с, 1H), 5,89 (д, J=4,8 Гц, 1H), 4,56 (т, J=4,9 Гц, 1H), 4,21 (к, J=3,4 Гц, 1H), 3,98 (т, J=4,6 Гц, 1H), 3,93 (дд, J=3,5, 11,5 Гц, 1H), 3,79 (дд, J=2,8, 11,5 Гц, 1H), 3,47 (с, 3H), 2,75 (тд, J=6,9, 13,6 Гц, 1H), 1,27 (с, 3H), 1,25 (с, 3H), 0,91 (с, 9H), 0,10 (с, 6H); ИЭР-МС: m/z=482,3 [M+H]⁺.

Стадия 2. Получение соединения 4b

К раствору соединения 4a (10 г, 20,76 ммоль) в DCM (200 мл) добавляли периодинан Десса - Мартина (14,97 г, 35,29 ммоль) при 0 °C. После перемешивания смеси при 30°C в течение 12 часов реакционную смесь разбавляли с помощью DCM (300 мл); органический слой промывали водным насыщенным Na₂S₂O₃ (100 мл) и водным насыщенным NaHCO₃ (50 мл). Органический слой концентрировали под давлением с получением остатка. Остаток (объединенный с силикагелем: 15 г) очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-100% EtOAc в петролейном эфире) с получением соединения 4b (9,0 г, 80%) в виде белого твердого вещества. ИЭР-МС: m/z=498,3 [M+H7]⁺.

Стадия 3. Получение соединения 4c

К раствору соединения 4b (9 г, 18,77 ммоль) в EtOH (200 мл) добавляли NaBH₄ (1,06 г, 28,15 ммоль) при 0 °C. После перемешивания раствора при 0°C в течение 0,5 часа смесь разбавляли EtOAc (500 мл) и водным насыщенным NH₄Cl (100 мл). Органический слой концентрировали при пониженном давлении с получением остатка (9,0 г). Остаток (объединенный с силикагелем: 15 г) очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-2% MeOH в DCM, об./об.) с получением соединения 4c (4,8 г, 53%) в виде белого твердого вещества и соединения 4a (1,5 г, 17%) в виде белого твердого вещества. Соединение 4d. ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) δ=12,06 (с, 1H), 11,70 (с, 1H), 8,00 (с, 1H), 6,05 (д, J=4,6 Гц, 1H), 5,85 (д, J=5,5 Гц, 1H), 4,31-4,26 (м, 1H), 3,91-3,77 (м, 4H), 3,39 (с, 3H), 2,80-2,70 (м, 1H), 1,11 (д, J=6,8 Гц, 6H), 0,89 (с, 9H), 0,07 (с, 6H); ИЭР-МС: m/z=482,3 [M+H]⁺.

Стадия 4. Получение соединения 4d

К раствору соединения 4c (1,8 г, 3,74 ммоль) в пиридине (20 мл) добавляли DIEA (1,45 г, 11,21) и хлорид дифенилкарбамина (1,12 г, 4,86 ммоль) при 25 °C. Смесь перемешивали при 25°C в течение 3 ч. Реакционную смесь объединяли с 2 другими порциями и собирали. Смесь разделяли между этилацетатом (150 мл) и H₂O (100 мл). Органический слой промывали солевым раствором (100 мл) и выпаривали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (0-100% EA/PE, об./об.) с получением соединения 4d (6 г, 70% из 4,8 г соединения 4c) в виде желтого твердого вещества. ¹H ЯМР (400 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) δ=8,34 (с, 1H), 8,00 (с, 1H), 7,44 (уш. д, J=7,3 Гц, 4H), 7,37 (т, J=7,8 Гц, 4H), 7,25 (уш. с, 2H), 6,22 (д, J=3,0 Гц, 1H), 4,38 (уш. с, 1H), 4,16-4,12 (м, 1H), 4,00-3,93 (м, 2H), 3,83 (дд, J=2,5, 11,0 Гц, 1H), 3,51 (с, 3H), 2,94 (уш. с, 1H), 1,27 (дд, J=1,0, 6,8 Гц, 6H), 0,94 (с, 9H), 0,14 (с, 6H); ИЭР-МС: m/z=677,4 [M+H]⁺.

Стадия 5. Получение соединения 4e

К раствору соединения 4d (5 г, 7,39 ммоль) в пиридине (100 мл) добавляли Tf₂O (16,67 г, 59,1 ммоль) при 0 °C. После перемешивания смеси при 0°C в течение 1,5 ч реакционную смесь разделяли между DCM (200 мл) и H₂O (100 мл). Органический слой отделяли, а водную фазу экстрагировали с помощью DCM (100 мл). Впоследствии органические слои объединяли и последовательно высушивали безводным Na₂SO₄, фильтровали и выпаривали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток объединяли с другой порцией и очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (0-30% EtOAc/петролейный эфир, об./об.) с получением соединения 4e (4,0 г, в виде белого твердого вещества. ИЭР-МС: m/z=809,5 [M+H]⁺.

Стадия 6. Получение соединения 4f

К раствору соединения 4e (4,0 г, 4,94 ммоль) в DMF (40 мл) добавляли NaN₃ (3,5 г, 54,15 ммоль) при 25 °C. После перемешивания реакционной смеси при 25 °C в течение 12 часов смесь разбавляли водным насыщенным NaHCO₃ (30 мл) для доведения до pH > 9 и экстрагировали этилацетатом (100 мл x 3). Органические слои объединяли и последовательно промывали солевым раствором (100 мл), высушивали безводным Na₂SO₄, фильтровали и выпаривали при пониженном давлении с получением желтого твердого вещества. Остаток (объединенный с силикагелем: 10 г) очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-100% этилацетата в петролейном эфире) с получением соединения 4f (1,8 г, 67%) в виде желтого твердого вещества. ¹H ЯМР (400 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) δ=11,99 (уш. с, 1H), 8,20 (уш. с, 1H), 8,05 (с, 1H), 5,96 (уш. д, J=4,4 Гц, 1H), 4,25-4,11 (м, 3H), 3,99 (уш. д, J=11,7 Гц, 1H), 3,82 (уш. д, J=11,7 Гц, 1H), 3,53 (д, J=2,4 Гц, 3H), 2,70-2,58 (м, 1H), 1,30 (уш. д, J=6,8 Гц, 6H), 0,94 (с, 9H), 0,13 (с, 6H); ИЭР-МС: m/z=507,3 [M+H]⁺.

Стадия 7. Получение соединения 4g

К раствору соединения 4f (1,8 г, 3,55 ммоль) в THF (20 мл) добавляли трифенилфосфин (1,3 г, 4,97 ммоль) при 25 °C. После перемешивания реакционной смеси при 40°C в течение 2 часов к раствору добавляли воду (10 мл) при 40°C и перемешивали смесь в течение 12 часов. Впоследствии смесь разбавляли с помощью DCM (50 мл) и промывали солевым раствором (2 × 50 мл). Органические слои объединяли и концентрировали при пониженном давлении с получением желтого твердого вещества (2,0 г). Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-10% MeOH в DCM) с получением соединения 4g (1,5 г, 81%) в виде белого твердого вещества. ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ=8,15 (с, 1H), 5,57 (д, J=8,0 Гц, 1H), 4,07-4,00 (м, 1H), 3,91 (дд, J=5,3, 8,0 Гц, 1H), 3,75-3,63 (м, 3H), 3,37 (с, 3H), 2,77-2,69 (м, 1H), 1,10 (д, J=6,8 Гц, 6H), 0,86 (c, 9H), 0,04 (c, 6H); ИЭР-МС: m/z 481,3 [M+H]⁺.

Стадия 8. Получение соединения 4h

К раствору соединения 4g (1,5 г, 2,81 ммоль) в DCM (100 мл) добавляли 4-нитрофенол (3,12 г, 22,47 ммоль), триэтиламин (1,7 г, 16,8 ммоль) и молекулярные сита 4Å (2,0 г). После перемешивания смеси при -78°C в течение 0,5 ч к раствору добавляли хлорсульфат 4-нитрофенила 3n (2 г, 8,42 ммоль) в DCM (20 мл) при -78 °C. После перемешивания при -78°C в течение 15 мин и перемешивания при 0°C в течение 1 часа смесь фильтровали и разбавляли с помощью DCM (100 мл). Органический слой промывали водным насыщенным NaHCO₃ (3×50 мл) и концентрировали при пониженном давлении с получением желтого твердого вещества (2,5 г). Остаток объединяли с другой порцией (объединенной с силикагелем: 6 г) и очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-100% этилацетат в DCM) с получением соединения 4h (1,68 г, 75% из 2,4 г соединения 74) в виде желтого твердого вещества. ¹H ЯМР (400 МГц, CD3CN) δ 11,89 (уш. с, 1H), 9,27 (уш. с, 1H). 8,15 (уш. д, J=9,3 Гц, 2H), 7,94-7,90 (м, 1H), 7,23 (уш. д, J=9,0 Гц, 2H), 5,80 (уш. д, J=8,3 Гц, 1H), 4,81 (уш. д, J=7,3 Гц, 1H), 4,24 (уш. с, 1H), 3,97 (уш. д, J=4,5 Гц, 1H), 3,83 (уш. с, 2H), 3,48-3,39 (м, 3H), 2,73-2,58 (м, 1H), 1,19 (уш. дд, J=3,3, 6,0 Гц, 6H), 0,94 (с, 9H), 0,12 (с, 6H); ИЭР-МС: m/z=682,3 [M+H]⁺.

Стадия 9. Получение соединения 4j

Раствор соединения 4h (1,68 г, 2,47 ммоль), соединения 4i (731 мг, 1,9 ммоль) и молекулярных сит 4Å (2,0 г) в DCE (135 мл) перемешивали в атмосфере N₂ в течение 30 мин при 25°C с последующим добавлением DMAP (1,16 г, 9,49 ммоль). После перемешивания при 55 °C (температура масла) в течение 12 часов смесь фильтровали и разделяли раствор с DCM (100 мл) и солевым раствором (50 мл). Органический слой промывали насыщенным водным раствором NaHCO₃ (3 × 100 мл); органический слой высушивали над безводным Na₂SO₄, фильтровали и выпаривали растворитель при пониженном давлении с получением неочищенного продукта (2,5 г). Неочищенный продукт (2,5 г, неочищенный) (объединенный с силикагелем: 5 г) очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-10% MeOH в DCM) с получением соединения 4j (1,2 г, 52%) в виде светло-желтого твердого вещества, ИЭР-МС: m/z 927,4 [M+H]⁺.

Стадия 10. Получение соединения 4k

К раствору соединения 4j (1,2 г, 1,29 ммоль) в пиридине (24 мл) добавляли TEA (1,31 г, 12,94 ммоль) и Et₃N-3HF (1,0, 6,47 ммоль) при 15 °C. После перемешивания раствора при 35°C в течение 12 часов добавляли THF (20 мл) и триметил(пропокси)силан (3,4 г, 25,89 ммоль) при 25 °C и перемешивали реакционную смесь в течение еще 3 часов. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении с получением остатка (2 г). Остаток (объединенный с силикагелем: 4 г) очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-10% MeOH в DCM) с получением неочищенного соединения 4k (900 мг). Неочищенный продукт очищали посредством обращенно-фазной препаративной ВЭЖХ (способ: колонка: Waters Xbridge Prep OBD 5 мкм C18 150×30, условия: вода (10 мМ NH₄HCO₃)-ACN B: 5, конец B 35, время градиентного элюирования (мин): 7, 100% B, время удержания (мин): 1, скорость потока (мл/мин): 25) с получением очищенного соединения 4k (0,57 г, 70%) в виде белого твердого вещества. ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ=8,17 (д, J=4,4 Гц, 2H), 8,08 (с, 1H), 6,21 (д, J=19,6 Гц, 1H), 5,84 (д, J=8,6 Гц, 1H), 5,51-5,26 (м, 1H), 5,13 (уш. с, 1H), 4,72 (дд, J=5,4, 8,8 Гц, 1H), 4,53-4,38 (м, 1H), 4,22-4,16 (м, 1H), 4,14-4,10 (м, 1H), 4,09-4,00 (м, 2H), 3,86 (д, J=5,4 Гц, 1H), 3,63-3,46 (м, 2H), 3,25 (с, 3H), 2,75 (тд, J=6,8, 13,6 Гц, 1H), 1,11 (дд, J=2,1, 6,7 Гц, 6H), ^l9F ЯМР (376 МГц, DMSO-d6) -201,424 (с, 1F); ИЭР-МС: m/z=699,3 [M+H]⁺.

Стадия 11. Получение соединения 4l

CH₃CN перед работой перегоняли над CaH₂ до применения. Соединение 4l (152 мг, 0,218 ммоль) растворяли в DMF (2 мл) и CH₃CN (6 мл), к нему добавляли 0,3 г молекулярных сит 4A (порошок) и раствор 1H-тетразола (3,87 мл, 0,45 M, полученный путем растворения 472,5 мг тетразола в 15 мл безводного CH₃CN с последующим добавлением 1 г молекулярных сит 4Å и впоследствии перемешивали в течение 0,5 ч в атмосфере N₂ до применения). Раствор фосфородиамидита 2-цианоэтил N, N,N’,N’-тетраизопропила (131,15 мг, 0,43 ммоль) в CH₃CN (0,8 мл) добавляли по каплям посредством шприца в течение 20 мин. Полученную белую суспензию дополнительно перемешивали в течение 2 ч при 25°C в атмосфере N₂. Впоследствии к вышеуказанному раствору добавляли TBHP (0,218 мл, 1,09 ммоль, 5 M в декане) при 25 °C. После перемешивания реакционной смеси при 25°C в течение 1 ч смесь разбавляли с помощью DCM (20 мл) и CH₃OH (3 мл), фильтровали через слой диатомитовой земли и концентрировали в вакууме с получением бесцветного масла; масло очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (4 г, 0-11,5% MeOH в DCM) с получением соединения 4l (151 мг, 68%) в виде белого твердого вещества. ИЭР-МС: m/z=814,3 [M+H]⁺.

Стадия 12. Получение соединения 52 (натриевая соль)

Раствор соединения 4l (150 мг, 0,18 ммоль) в EtOH (2 мл) обрабатывали с помощью MeNH₂ (5 мл, 30% в EtOH). После перемешивания реакционной смеси при 25°C в течение 2 ч и при 35°C в течение 1 ч растворитель концентрировали при пониженном давлении с получением бесцветного масла. Остаток растворяли в H₂O (20 мл) и CH₃CN (5 мл), впоследствии промывали DCM (20 мл x 2). Затем водную фазу лиофилизировали с получением неочищенного продукта (80 мг, неочищенный) в виде светло-желтого твердого вещества. Неочищенный продукт (80 мг, неочищенный) очищали посредством обращенно-фазной препаративной ВЭЖХ (способ: колонка, Waters Xbridge Prep OBD 5 мкм C18 150×30; условия: вода (10 мМ NH₄HCO₃) (A)-ACN (B); начало B 0, конец B 25; время градиентного элюирования (мин) 7; 100% B; время удержания (мин) 1; скорость потока (мл/мин) 25; инъекций 12) с получением соединения 52 (аммонийная соль) (35 мг, 26%) в виде белого твердого вещества. ¹H ЯМР (400 МГц, D₂O) δ=8,29 (с, 1H), 8,19 (уш. д, J=9,5 Гц, 2H), 6,61 (уш. д, J=18,6 Гц, 1H), 6,08 (уш. д, J=8,8 Гц, 1H), 5,90-5,72 (м, 1H), 5,39 (уш. д, J=19 6 Гц, 1H), 5,20 (уш. с, 1H), 4,76 (уш. с, 1H) 4,72 (уш. с, 1H), 4,49 (уш. д, J=10,3 Гц, 3H), 4,35 (уш. д, J=4,3 Гц, 1H), 4,17 (к, J=6,2 Гц, 1H), 3,67 (с, 3H); ¹⁹F ЯМР (376,5 МГц, D₂O) -199,859; ³¹P ЯМР (162 МГц, D₂O) -1,639; ИЭР-МС: m/z=691,1 [M+H]⁺.

Превращение в натриевую соль

Смолу Dowex 50W × 8, 200-400 (5 мл, H - форма) помещали в стакан и промывали деионизированной водой H₂O (20 мл). Впоследствии к смоле добавляли 15% H₂SO₄ в деионизированной воде H₂O (20 мл), смесь осторожно перемешивали в течение 15 мин и декантировали (15 мл). Смолу переносили на колонку с 15% H₂SO₄ в деионизированной H₂O и промывали 15% H₂SO₄ (по меньшей мере 4 объема колонки) и впоследствии деионизированной H₂O до нейтральной реакции. Смолу переносили обратно в стакан, добавляли раствор 15% NaOH в деионизированной H₂O (20 мл) и смесь осторожно перемешивали в течение 15 мин и декантировали (1 ×). Смолу переносили на колонку и промывали 15% NaOH в H₂O (по меньшей мере 4 объема колонки) и впоследствии деионизированной H₂O до нейтральной реакции. CDN (соединение 52, 35 мг, 0,049 ммоль)) растворяли в деионизированной H₂O (8 мл), добавляли в верхнюю часть колонки и элюировали деионизированной H₂O. Соответствующие фракции объединяли и лиофилизировали с получением натриевой солевой формы (30 мг, чистота: 91%) в виде белого твердого вещества. Солевую форму (30 мг) очищали посредством обращенно-фазной препаративной ВЭЖХ (способ: колонка, Waters Xbridge Prep OBD 5 мкм C18 150×30; условия: вода (10 мМ NH₄HCO₃) (A)-ACN(B); начало B 0, конец B 30; время градиентного элюирования (мин) 7; 100% B; время удержания(мин) 1; скорость потока (мл/мин) 25) с получением продукта (25 мг) в виде белого твердого вещества. Продукт (25 мг, чистота: 97,07%) очищали второй раз посредством обращенно-фазной препаративной ВЭЖХ (способ: колонка, Waters Xbridge Prep OBD 5 мкм C18 150×30; условия: вода (10 мМ NH₄HCO₃) (A)-ACN(B); начало B 0, конец B 30; время градиентного элюирования (мин) 7; 100% B время удержания (мин) 1; скорость потока (мл/мин) 25) с получением соединения 52 (аммонийная соль), которое обрабатывали ионообменной смолой DOWEX 50W x 8, 200-400 с получением соединения 52 (натриевая соль) (16,1 мг, 65%) в виде белого твердого вещества. ¹H ЯМР (400 МГц, D₂O) δ=8,01 (с, 1H), 7,93 (с, 1H), 7,85 (с, 1H), 6,37 (уш. д, J=17,3 Гц, 1H), 5,83 (д, J=9,0 Гц, 1H), 5,59 (уш. д, J=3,5 Гц, 0,5H), 5,46 (уш. д, J=3,5 Гц, 0,5H), 5,15-5,02 (м, 1H), 4,97 (уш. д, J=4,5 Гц, 1H), 4,62-4,52 (м, 2H), 4,49 (уш. с, 1H), 4,29-4,19 (м, 3H), 4,10 (уш. д, J=4,5 Гц, 1H), 3,43 (с, 3H); ¹⁹F ЯМР (376,5 МГц, D₂O) -200,863; ³¹P ЯМР (162 МГц, D₂O) -1,676; ИЭР-МС: m/z=691,2 [M+H]⁺.

Пример 5

Стадия 1. Получение соединения 5a

Раствор 5’-O-(4,4’-диметокситритил)-N2-изобутирил-3’-O-метил-D-гуанозина [CAS 103285-33-2] (5,2 г, 7,76 ммоль) в DMF (50 мл), к которому добавляли имидазол (2,38 г, 34,94 ммоль) и TBSCl (3,51 г, 23,29 ммоль), перемешивали в течение 6 ч при 35 °C. Реакционную смесь гасили насыщенным водным раствором NaHCO₃ и экстрагировали с помощью DCM. Объединенные органические слои промывали солевым раствором, высушивали над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали. Неочищенный продукт очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-15% MeOH в DCM) с получением соединения 5a, которое использовали в таком виде на следующей стадии. ИЭР-МС: m/z 784,4 [M+H]⁺.

Стадия 2. Получение соединения 5b

TFA (2 мл, 26,12 ммоль) и Et₃SiH (8 мл, 50,03 ммоль) добавляли к раствору вышеуказанного соединения 5a в DCM (160 мл) при 0 °C. Полученную смесь перемешивали при 0°C в течение 30 мин, после чего перемешивание продолжали при комнатной температуре в течение 4 ч. Реакционный раствор гасили водным NaHCO₃ и экстрагировали с использованием DCM. Объединенные органические слои промывали солевым раствором, высушивали над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали. Неочищенный продукт очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-5% MeOH в DCM) с получением соединения 5b в виде белого твердого вещества (2,9 г). ¹H ЯМР (400 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) δ м. д. 12,12 (уш. с, 1H), 8,36 (уш. с, 1H), 7,71 (с, 1H), 5,72 (д, J=7,5 Гц, 1H), 5,41 (уш. с, 1H), 4,78 (дд, J=7,5, 5,1 Гц, 1H), 4,30 (уш. с, 1H), 3,98 (дд, J=12,6, 2,2 Гц, 1H), 3,84 (д, J=5,1 Гц, 1H), 3,71 (уш. с, 1H), 3,54 (с, 3H), 2,68 (спт, J=6,9 Гц, 1H), 1,28 (д, J=6,8 Гц, 3H), 1,29 (д, J=6,8 Гц, 3H), 0,81 (с, 9H), -0,07 (с, 3H), -0,29 (с, 3H); ИЭР-МС: m/z 482,1 [M+H]⁺.

Стадия 3. Получение соединения 5d

Раствор 5c [CAS 2241580-02-7] (2 г, 5,02 ммоль) в DMF (10 мл), к которому добавляли имидазол (1,02 г, 15,06 ммоль) и TBSCl (1,51 г, 10,04 ммоль), перемешивали в течение 2 ч при комнатной температуре. Реакционную смесь разбавляли EtOAc и промывали водой. Водный слой экстрагировали с помощью EtOAc. Объединенные органические слои промывали насыщенным водным NaHCO₃ и солевым раствором, высушивали над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали. Неочищенный продукт очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-15% MeOH в DCM) с получением соединения 5d в виде желтого твердого вещества (2,57 г, выход: 100%). ИЭР-МС: m/z=513,2 [M+H]⁺.

Стадия 4. Получение соединения 5e

Раствор соединения 5d (1,285 г, 2,51 ммоль) в EtOAc (150 мл) гидрогенизировали при комнатной температуре при атмосферном давлении в течение 2 ч, используя 10% Pd/C (2,95 г) в качестве катализатора. Реакционную смесь фильтровали, а фильтрат концентрировали при пониженном давлении. Реакцию повторяли в том же масштабе, неочищенный продукт обеих реакций объединяли для очистки посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-5% MeOH в DCM) с получением соединения 5e (1,69, выход: 69%) в виде белого твердого вещества. ИЭР-МС: m/z 487,1 [M+H]⁺.

Стадия 5. Получение соединения 5f

Раствор соединения 5e (1,05 г, 2,16 ммоль) в DCM (40 мл), к которому добавляли 4-нитрофенол (900 мг, 6,47 ммоль), Et₃N (1,79 мл, 12,95 ммоль) и активированные молекулярные сита, перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин. Смесь охлаждали до -78 °C, после чего добавляли хлорсульфат 4-нитрофенила (1,54 г, 6,47 ммоль) в DCM (10 мл), перемешивание продолжали в течение 2,5 ч при -78 °C. Реакционную смесь фильтровали и промывали водным NaHCO₃, экстрагировали водные слои после промывки с помощью DCM. Объединенные органические слои сушили с помощью Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-100% EtOAc в петролейном эфире) с получением соединения 5f в виде белого твердого вещества (1,24 г, выход: 83,5%). ИЭР-МС: m/z 688,2 [M+H]⁺.

Стадия 6. Получение соединения 5g

Активированные молекулярные сита добавляли к раствору соединения 5b (105 мг, 0,218 ммоль) и сульфамата 5f (180 мг, 0,262 ммоль) в безводном THF (2 мл), полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч в атмосфере N₂. Далее добавляли DMAP (133 мг, 1,09 ммоль) для инициирования реакции, перемешивали реакционную смесь при комнатной температуре в течение 18 ч. Молекулярные сита удаляли фильтрованием и концентрировали фильтрат при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-5% MeOH в DCM) с получением соединения 5g в виде желтого твердого вещества (157 мг, выход: 70%). ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ м. д. 12,18 (с, 1H), 9,07 (с, 1H), 8,78 (с, 1H), 8,39 (с, 1H), 8,05 (д, J=7,3 Гц, 2H), 7,66-7,59 (м, 1H), 7,58-7,49 (м, 3H), 7,19 (уш. с, 1H), 6,32 (д, J=17,8 Гц, 1H), 5,60-5,42 (м, 2H), 5,60-5,42 (м, 1H), 4,80-4,63 (м, 2H), 4,49 (дд, J=3,8, 11,0 Гц, 1H), 4,36-4,27 (м, 2H), 4,17-4,02 (м, 2H), 3,80 (дд, J=2,3, 4,8 Гц, 1H), 3,51 (с, 3H), 2,75-2,63 (м, 1H), 1,33 (д, J=6,8 Гц, 3H), 1,27 (д, J=6,8 Гц, 3H), 0,91 (с, 9H), 0,77 (с, 9H), 0,89 (с, 3H), 0,91 (с, 3H), -0,08 (с, 3H), -0,28 (с, 3H); ИЭР-МС: m/z 1030,5 [M+H]⁺.

Стадия 7. Получение соединения 5h

Et₃N (2,62 г, 25,92 ммоль) и тригидрофторид триэтиламина (6,28 г, 51,83 ммоль) добавляли к раствору соединения 5g (890 мг, 0,864 ммоль) в пиридине (10 мл), полученную реакционную смесь перемешивали в атмосфере N₂ при комнатной температуре в течение 18 ч. Смесь фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-10% MeOH в DCM) с последующей очисткой посредством препаративной обращенно-фазной ВЭЖХ (неподвижная фаза: Phenomenex Synergi Max-RP, 10 мкМ, 250×50 мм; подвижная фаза: вода (A)-MeCN (B); градиентное элюирование) с получением соединения 5h в виде белого твердого вещества (397 мг, выход: 57%). ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ м. д. 12,07 (с, 1H), 11,60 (с, 1H), 11,20 (с, 1H), 8,89 (уш. д, J=9,0 Гц, 1H), 8,71 (д, J=22,8 Гц, 2H), 8,14 (с, 1H), 8,05 (д, J=7,3 Гц, 2H), 7,60-7,72 (м, 1H), 7,47-7,60 (м, 2H), 6,46 (д, J=19,9 Гц, 1H), 5,84 (д, J=5,7 Гц, 1H), 0,00 (д, J=6,1 Гц, 1H), 5,66 (дд, J=52,1, 4,5 Гц, 1H), 5,22 (уш. т, J=5,1 Гц, 1H), 4,50-4,69 (м, 2H), 4,22-4,42 (м, 3H), 4,05-4,16 (м, 1H), 3,93 (т, J=4,1 Гц, 1H), 3,82 (уш. дд, J=12,2, 4,4 Гц, 1H), 3,54-3,68 (м, 1H), 3,42 (с, 3H), 2,75 (спт, J=6,9 Гц, 1H), 1,12 (д, J=6,9 Гц, 6H); ИЭР-МС: m/z 802,3 [M+H]⁺.

Стадия 8. Получение соединения 5i

Раствор соединения 5h (200 мг, 0,25 ммоль) и 1H-тетразола (1,82 мл 3-4% в MeCN, высушенный на молекулярных ситах 3Å до применения) в безводном THF/MeCN (1 : 1, 12 мл, высушенный на молекулярных ситах 3Å до применения) обрабатывали активированными молекулярными ситами 3Å в течение 2 ч в атмосфере N₂, после чего в один прием добавляли 2-цианоэтил-N, N,N',N'-тетра(изопропил)фосфородиамидит (75 мг, 0,25 ммоль). Реакционную смесь встряхивали в течение ночи. Добавляли дополнительное количество 2-цианоэтил-N, N,N',N'-тетра(изопропил)фосфородиамидита (22,5+15 мг, 0,075+0,05 ммоль) двумя порциями с интервалом 2 ч, после чего продолжали встряхивание в течение 90 мин. Добавляли раствор tBuOOH (68 мкл 5,5 M раствора в декане, 0,37 ммоль), встряхивали реакционную смесь в течение 30 мм. Молекулярные сита удаляли фильтрованием и промывали дихлорметаном. Фильтрат промывали солевым раствором и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-10% MeOH в DCM) с получением соединения 5i (30 мг, выход: 13%). ИЭР-МС: m/z 917,5 [M+H]⁺.

Стадия 9. Получение соединения 6 (натриевая соль)

Вышеуказанное соединение 5i (30 мг, 0,033 ммоль) перемешивали в 33% растворе метиламина в этаноле (1 мл) при комнатной температуре до полного превращения (прибл. 2 ч). Неочищенный продукт, полученный после концентрирования при пониженном давлении, растирали в MeCN. Заключительное превращение в натриевую соль проводили элюированием водным раствором колонки, заполненной катионной Na-ионообменной смолой, с получением соединения 6 (натриевая соль) в виде рыхлого белого твердого вещества (14 мг, выход: 60%). ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆, 61 °C) δ м. д. 10,39 (уш. с, 1H), 8,32 (с, 1H), 8,19 (с, 1H), 7,97 (с, 1H), 7,07 (уш. с, 2H), 6,31 (уш. с, 2H), 6,24 (дд, J=15,7, 2,7 Гц, 1H), 5,78 (д, J=9,0 Гц, 1H), 5,44 (уш. д, J=53,9 Гц, 1H), 5,11 (тд, J=9,3, 4,0 Гц, 1H), 4,42-4,57 (м, 1H), 4,13-4,25 (м, 4H), 4,11 (д, J=3,9 Гц, 1H), 3,90-4,03 (м, 1H), 3,79-3,88 (м, 1H), 3,53 (c, 3H); ³¹P ЯМР (162 МГц, DMSO-d₆) δ м. д. -1,45 (с, 1P); ИЭР-МС: m/z 690,3 [M+H]⁺.

Пример 6

Стадия 1. Получение соединения 6a

Соединение 3h (1,0 г, 2,61 ммоль) совместно выпаривали со смесью безводный толуол : CH₃CN (об. : об. = 1:1, 6 мл x 2) и далее растворяли в безводном DMF (18,8 мл). Впоследствии добавляли трифенилфосфин (1,02 г, 3,91 ммоль), NaN₃ (0,63 г, 9,73 ммоль), йодид тетрабутиламмония (192,7 мг, 0,52 ммоль) и CBr₄ (1,3 г, 3,91 ммоль) при кт. После перемешивания реакционной смеси при кт в течение 12 ч реакционную смесь гасили солевым раствором (10 мл) и разделяли с EtOAc (20 мл). К смеси добавляли насыщенный водный раствор NaHCO₃ (20 мл) с последующей экстракцией с помощью EtOAc (20 мл x 3). Впоследствии органические слои объединяли и последовательно высушивали над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (EtOAc: петролейный эфир=0-100%, затем MeOH : DCM=0-5%) с получением 6a в виде желтого порошка. ИЭР-МС: m/z=408,9 [M+H]⁺.

Стадия 2. Получение соединения 6b

К раствору 6a (1,24 г, 3,04 ммоль) в DCM (16 мл) добавляли 2,4,6-коллидин (1,4 г, 11,56 ммоль), AgNO₃ (1,96 г, 11,56 ммоль) и DMTrCl (1,54 г, 4,56 ммоль) при 15 °C. После перемешивания при 15°C в течение 5 ч реакционную смесь гасили с использованием MeOH (20 мл) и разбавляли DCM (40 мл). Органический слой последовательно промывали солевым раствором (20 мл x 2), высушивали над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (EtOAc: петролейный эфир=0-100%) с получением 6b (1,99 г) в виде белого твердого вещества. ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 7,17-7,00 (м, 6H), 6,93 (с, 4H), 6,73-6,49 (м, 4H), 5,28 (с, 2H), 4,10 (д, J=7,3 Гц, 3H), 3,79-3,56 (м, 5H), 3,47 (уш. д, J=4,6 Гц, 1H), 3,37-3,11 (м, 2H), 2,94 (с, 1H), 2,87 (с, 1H), 2,61 (с, 6H), 2,31 (с, 3H), 2,03 (с, 1H), 1,72-1,56 (м, 5H), 1,53-1,35 (м, 2H), 1,24 (т, J=7,2 Гц, 1H), 0,99 (т, J=7,3 Гц, 3H), ИЭР-МС: м/z=711,2 [M+H]⁺.

Стадия 3. Получение соединения 6c

Суспензию 6b (1,99 г, 2,8 ммоль) с влажным 10% Pd/C (3,3 г, 2,8 ммоль) в качестве катализатора в EtOAc (100 мл) гидрогенизировали (15 фунтов на кв. дюйм) при кт (~ 15 °C) в течение 5 ч Катализатор удаляли фильтрованием и выпаривали фильтрат при пониженном давлении с получением неочищенного продукта 6c (1,31 г) в виде белого твердого вещества, использованного на следующей стадии без дополнительной очистки. ИЭР-МС: m/z=685,2 [M+H]⁺.

Стадия 4. Получение соединения 6d

Соединение 6c (213 мг, 0,31 ммоль) совместно выпаривали со смесью безводный толуол : CH₃CN (об. : об. = 1:1, 3×2 мл) и растворяли в безводном DCM (8 мл); впоследствии добавляли 4-нитрофенол (129,8 мг, 0,93 ммоль), Et₃N (188,8 мг, 1,86 ммоль) и активированные молекулярные сита 4Å (~ 3 г) в атмосфере N₂ при кт (~ 10 °C); смесь охлаждали до -78 °C с последующим быстрым добавлением хлорсульфата 4-нитрофенила 3n (221,74 мг, 0,93 ммоль) в атмосфере N₂ при -78 °C. После перемешивания при -78 °C в течение 3 ч реакционную смесь разбавляли с помощью DCM (30 мл) и фильтровали через слой диатомитовой земли. Фильтрат разделяли между DCM/насыщенный водный NaHCO₃ (30/45 мл) и экстрагировали водный слой с помощью DCM (15 мл x 3). Органические слои объединяли и последовательно промывали солевым раствором (20 мл х 2), высушивали над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (EtOAc: Петролейный эфир=0-90%) с получением 6d (142 мг) в виде желтого твердого вещества. ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 9,25-9,05 (м, 2H), 8,35-8,26 (м, 1H), 8,05-7,94 (м, 4H), 7,76-7,64 (м, 1H), 7,58 (уш. т, J=6,7 Гц, 1H), 7,50 (т, J=7,5 Гц, 2H), 7,38-7,27 (м, 4H), 7,24 (с, 1H), 7,20-7,10 (м, 7H), 6,65 (уш. д, J=8,8 Гц, 2H), 6,62 (уш. д, J=7,9 Гц, 2H), 5,86 (с, 1H), 4,53 (с, 1H), 4,41 (д, J=7,6 Гц, 1H), 4,09 (к, J=7,3 Гц, 2H), 4,02-3,93 (м, 2H), 3,79 (уш. д, J=12,5 Гц, 1H), 3,71 (с, 3H), 3,70 (с, 3H), 2,88 (с, 1H), 2,01 (с, 3H), 1,22 (т, J=7,2 Гц, 3H); ИЭР-МС: m/z=886,2 [M+H]⁺.

Стадия 5. Получение соединения 6f

Соединение 6d совместно выпаривали со смесью безводный толуол : CH₃CN (1 : 1, 6 мл x 2) до применения. Смесь 6d (699 мг, 0,79 ммоль), 6e (739,81 мг, 1,1 ммоль, CAS № 103285-33-2) и активированных молекулярных сит 4Å (~ 5 г) в безводном THF (20 мл) перемешивали при кт в течение 1 ч в атмосфере N₂. Добавляли DMAP в один прием (481,97 мг, 3,94 ммоль) и перемешивали реакционную смесь при 40 °C (температура масла) в течение 5 ч в атмосфере N₂. Реакционную смесь разбавляли с помощью DCM (15 мл) и фильтровали через слой диатомитовой земли. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением желтого остатка. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (MeOH : DCM=0-10%) с получением 6f (969 мг) в виде бледно-желтого твердого вещества. ИЭР-МС: m/z=1416,2 [M+H]⁺.

Стадия 6. Получение соединения 6g

DCA (6% в DCM, 10,8 мл) добавляли к раствору соединения 6f (1,1 г, 0,78 ммоль) в DCM (22 мл) в атмосфере N₂, полученный красный раствор перемешивали при кт в течение 30 мин, впоследствии гасили пиридином (12 мл). Прозрачную реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении с получением бесцветного остатка, который очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (MeOH : DCM=0-10%) с получением соединения 6g (740 мг) в виде белого твердого вещества. ¹H ЯМР (400 МГц, CD₃OD) δ 8,67 (с, 1H), 8,40 (с, 1H), 8,14-8,09 (м, 3H), 7,71-7,65 (м, 1H), 7,62-7,56 (м, 2H), 6,19 (д, J=5,3 Гц, 1H), 6,03 (с, 1H), 5,53 (т, J=5,4 Гц, 1H), 4,84 (уш. с, 1H), 4,48 (с, 1H), 4,43 (с, 1H), 4,32 (т, J=4,8 Гц, 1H), 4,14 (уш. д, J=3,8 Гц, 1H), 3,99 (д, J=8,0 Гц, 1H), 3,83-3,77 (м, 1H), 3,73-3,66 (м, 2H), 3,60 (с, 3H), 3,54 (д, J=13,3 Гц, 1H), 3,30-3,23 (м, 2H), 2,67 (тд, J=6,7, 13,7 Гц, 1H), 1,17 (дд, J=2,4, 6,9 Гц, 6H); ИЭР-МС: m/z=812,2 [M+H]⁺.

Стадия 7. Получение соединения 6i

Соединение 6g (105 мг, 0,129 ммоль) совместно выпаривали со смесью безводный толуол : ацетонитрил (1 : 1, об./об., 3×30 мл), впоследствии растворяли в безводном THF (12 мл), добавляли порошок молекулярных сит 4Å (0,3 г) и 0,45 M тетразол в CH₃CN (2,3 мл, 1,03 ммоль) и полученную гетерогенную смесь барботировали аргоном в течение 4 мин. После перемешивания данной смеси при кт в течение 10 мин добавляли раствор 2-цианоэтил-N, N,N',N'-тетра(изопропил)фосфородиамидита в CH₃CN (59 мг, 0,19 ммоль, 3,0 мл CH₃CN) в течение 30 мин при кт. После перемешивания реакционной смеси в течение 1,5 ч смесь фильтровали, впоследствии промывали THF (15 мл). (Соединение 6h. МС: m/z 911 [M+H]⁺). Полученную смесь использовали непосредственно на следующей стадии. Добавляли 0,5 M раствор йода (в смеси THF : вода : Py 8 : 1 : 1, об./об./об.) до получения устойчивого цвета. После перемешивания реакционной смеси при кт в течение 30 мин смесь разбавляли с помощью EtOAc (30 мл) и гасили избыток йода насыщенным водным раствором Na₂S₂O₃ (пока раствор не обесцветился). Слои разделяли; органический слой промывали водным насыщенным раствором NaHCO3 (1 × 20 мл) и солевым раствором (1 × 20 мл). Водный слой подвергали обратной экстракции с помощью EtOAc (1 × 20 мл). Объединенные органические слои выпаривали досуха, очищали полученный неочищенный материал посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (MeOH в DCM: 0-15%, об./об.) с получением соединения 6i (75 мг); ИЭР-МС: m/z=927 [M+H]⁺.

Стадия 8. Получение соединения 9

Раствор соединения 6i (75 мг, 0,08 ммоль) в MeNH₂ (33% в EtOH, 6 мл) перемешивали при 40 °C в течение 2 ч 30 мин, концентрировали при пониженном давлении. Полученное неочищенное твердое вещество промывали DCM (15 мл) и осадок фильтровали и очищали посредством обращенно-фазной препаративной ВЭЖХ (колонка: Synergi 4мк, Hydro RP, 250 мм x 30 мм x 10 мкМ, подвижная фаза: буфер A: 50 мМ ацетата триэтиламмония в воде; буфер B: 50 мМ ацетат триэтиламмония в CH₃CN; градиент: 0-40% B в течение 30 мин, скорость потока: 24 мл/мин) с получением соединения 9 (18,2 мг) в виде соли TEAA. Заключительное превращение в натриевую соль проводили элюированием водным раствором колонки, заполненной натриевой катионообменной смолой, с получением соединения 9 (натриевая соль) (17,3 мг). ¹H ЯМР (400 МГц, D₂O): δ 7,96 (с, 1H), 7,72 (с, 1H), 7,12 (с, 1H), 5,90-6,12 (м, 3H), 4,97 (с, 1H), 4,79 (с, 1H), 4,60 (м, 1H), 4,41 (т, J=5,6 Гц, 1H), 4,25 (д, J=4,0 Гц, 1H), 4,05 (д, J=8,0 Гц, 1H), 3,90-4,01 (м, 1H), 3,85 (д, J=8,0 Гц, 1H), 3,55 (д, J=12,8 Гц, 1H), 3,41 (с, 3H), 3,31 (д, J=12,8 Гц); ³¹P ЯМР (162 МГц, D₂O): δ -1,46 (с, 1P); ИЭР-МС: m/z: 698 [M+1]^-.

Пример 7

Стадия 1. Получение соединения 7b

Соединение 1g (80 мг, 0,099 ммоль) совместно выпаривали со смесью безводный толуол : ацетонитрил (1 : 1, об./об., 3×15 мл), впоследствии растворяли в безводном THF (10 мл), добавляли порошок молекулярных сит 4 Å (0,3 г) и 0,45 M тетразола в CH₃CN (1,3 мл, 0,598 ммоль) и барботировали полученную гетерогенную смесь аргоном в течение 4 мин. После перемешивания этой смеси при кт в течение 10 мин, добавляли раствор 2-цианоэтил-N, N,N',N' -тетра(изопропил)фосфородиамидита в CH₃CN (48 мг, 0,16 ммоль, в 3,0 мл CH₃CN) в течение 30 мин при кт. После перемешивания реакционной смеси в течение 1,5 ч смесь фильтровали и промывали THF (15 мл). (Соединение 7a. МС: m/z 901 [M+H]⁺). Полученную смесь использовали непосредственно на следующей стадии.

Очень медленно добавляли раствор бороводород-диметилсульфидного комплекса (2,0 M в THF, BH₃-DMS, 180 мкл, 0,35 ммоль) в течение 5 мин при 0 °C. После перемешивания реакционной смеси в течение 20 мин при кт реакционную смесь быстро фильтровали, разбавляли EtOAc (50 мл) и гасили водой (20 мл). Слои разделяли; органический слой промывали водой (1 × 20 мл) и солевым раствором (1 × 20 мл); водный слой подвергали обратной экстракции с помощью EtOAc (1×20 мл). Впоследствии органические слои объединяли и выпаривали досуха. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (0-15% MeOH в DCM, об./об.) с получением 7b (48 мг). ИЭР-МС: m/z=915 [M+H]⁺.

Стадия 2. Получение соединения (*R) 14A

Раствор соединения 7b (48 мг) в MeNH₂ (33% в EtOH, 6 мл) перемешивали при 40°C в течение 2 ч и концентрировали при пониженном давлении. Полученное неочищенное твердое вещество промывали DCM (15 мл) и осадок фильтровали и очищали посредством обращенно-фазной препаративной ВЭЖХ (колонка: Synergi 4 мкм, Hydro RP, 250 мм x 4,6 мм, подвижная фаза: буфер A: 50 мМ ацетата триэтиламмония в воде; буфер B: 50 мМ ацетата триэтиламмония в CH₃CN, градиент: 0-40% B в течение 30 мин, скорость потока 24 мл/мин) с получением соединения 14 (20,2 мг) в виде соли TΈAA. Заключительное превращение в натриевую соль проводили элюированием водным раствором колонки, заполненной натриевой катионообменной смолой, с получением соединения (*R) 14A (натриевая соль) (18,8 мг). ¹H ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 7,92 (с, 1H), 7,81 (с, 1H), 7,08 (с, 1H), 6,17-6,24 (д, J=20,8 Гц, 1H), 5,95 (д, J=7,2 Гц, 1H), 5,45 (с, 1H), 5,29 (с, 0,5H), 5,16 (с, 0,5H), 4,70-4,85 (м, 1H), 4,49 (с, 1H), 4,33 (д, J=8 Гц, 1H), 4,27 (с, 1H), 4,05-4,15 (м, 1H), 3,96 (д, J=10,8 Гц, 1H), 3,64 (д, J=12,4 Гц, 1H), 3,44 (с, 1H), 3,30-3,44 (м, 2H), 0,3 (уш. с., 3H); ³¹P ЯМР (162 МГц, D₂O) δ 95,57 м. д. (с, 1 P). ¹⁹F ЯМР (379 МГц, D₂O) δ широкий пик, -196,84 м. д. (с, 1F); ИЭР-МС: m/z: 686,8 [M+H]^-.

Пример 8

Стадия 1. Получение соединений 8b и 8c

NaH (60% в минеральном масле, 4,864 г, 121,61 ммоль) добавляли к раствору аденозина 8a (25 г, 93,549 ммоль) в DMF (800 мл) при -5 °C. После перемешивания смеси в течение 1,5 ч при -5 °C по каплям добавляли раствор хлорида 4-метоксибензила (15,15 г, 112,26 ммоль) в DMF (50 мл) в течение 2 ч. После завершения добавления реакционную смесь подогревали до кт и перемешивали в течение 18 ч. К реакционной смеси добавляли воду (15 мл) и перемешивали смесь при 15 °C в течение 10 мин. Полученную смесь объединяли с другими реакционными смесями и выпаривали DMF в высоком вакууме. Суспензию разбавляли с помощью MeOH, фильтровали и концентрировали фильтрат при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (DCM: MeOH=100 : 0 ~ 20 : 1) с получением 8b и 8c; смесь разделяли обращенно-фазной препаративной ВЭЖХ (колонка: Phenomenex Synergi Max-RP 250×50 мм x 10 мкм; условия: вода-MeCN, начало B 2%, конец B 36%; время градиентного элюирования: 18 мин; 100% B, время удержания: 14 мм; скорость потока: 100 мл/мин) с получением 8b (75 г) и 8c (15,5 г), оба в виде белого твердого вещества (общий выход 66%).

Соединение 8b. ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ 8,31 (с, 1H), 8,09 (с, 1H), 7,36 (с, 2H), 7,06 (д, J=8,4 Гц, 2H), 6,72 (д, J=8,8 Гц, 2H), 6,03 (д, J=6,4 Гц, 1H), 5,51 (дд, J=4,4, 7,2 Гц, 1H), 5,32 (д, J=4,8 Гц, 1H), 4,71-4,46 (м, 2H), 4,43-4,30 (м, 2H), 4,03 (уш. д, J=2,8 Гц, 1H), 3,74-3,61 (м, 4H), 3,61-3,49 (м, 1H); ИЭР-МС: m/z=388,1 [M+H]⁺.

Соединение 8c: ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ 8,35 (с, 1H), 8,13 (с, 1H), 7,49-7,30 (м, 4H), 6,93 (д, J=8,4 Гц, 2H), 5,92 (д, J=6,4 Гц, 1H), 5,57 (д, J=6,4 Гц, 1H), 5,51 (дд, J=4,4, 7,3 Гц, 1H), 5,64-5,40 (м, 1H), 5,56-5,37 (м, 1H), 4,89-4,73 (м, 1H), 4,72-4,62 (м, 1H), 4,62-4,49 (м, 1H), 4,60-4,48 (м, 1H), 4,15-3,98 (м, 2H), 3,75 (с, 3H), 3,70-3,60 (м, 1H), 3,53 (ддд, J=3,6, 7,6, 11,8 Гц, 1H); ИЭР-МС: m/z=388,1 [M+H]⁺.

Стадия 2. Получение соединения 8d

К раствору соединения 8c (10 г, 25,81 ммоль) в пиридине (200 мл) по каплям добавляли хлортриметилсилан (14,74 мл, 116,162 ммоль) при 0 °C. После перемешивания реакционной смеси в течение 2 ч ее охлаждали до 0°C и добавляли по каплям хлорид бензоила (6 мл) при 0°C в течение 30 мин. Реакционную смесь перемешивали при кт в течение ночи и осторожно гасили водой (30 мл) при 0 °C, впоследствии по каплям добавляли водный раствор аммиака (60 мл) при 0 °C. После перемешивания смеси в течение 1,5 ч реакцию разбавляли с помощью DCM (800 мл). Органический слой последовательно промывали солевым раствором (200 мл × 3), высушивали над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток растирали с EtOAc (100 мл) с получением соединения 8d (9,8 г) в виде белого твердого вещества, ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ 11,21 (с, 1H), 8,72 (д, J=13,2 Гц, 2H), 8,06-7,89 (м, 2H), 7,71-7,58 (м, 1H), 7,57-7,46 (м, 2H), 7,31 (д, J=8,8 Гц, 2H), 6,90 (д, J=8,8 Гц, 2H), 6,05 (д, J=6,0 Гц, 1H), 5,67 (д, J=6,4 Гц, 1H), 5,18 (т, J=5,6 Гц, 1H), 4,91-4,76 (м, 1H), 4,73-4,59 (м, 1H), 4,53 (д, J=11,6 Гц, 1H), 4,17-4,04 (м, 2H), 3,72 (с, 3H), 3,66 (тд, J=4,4, 12,0 Гц, 1H), 3,53 (ддд, J=3,6, 6,0, 12,0 Гц, 1H); ИЭР-МС: m/z=388,1 [M−H]⁺.

Стадия 3. Получение соединения 8e

К перемешиваемой суспензии соединения 8d (7 г, 14,24 ммоль), трифенилфосфина (5,6 г, 21,36 ммоль), TBAI (1,05 г, 2,85 ммоль) и NaN₃ (6,67 г, 102,54 ммоль) в DMF (90 мл) частями добавляли CBr₄ (7,085 г, 21,363 ммоль) при 0 °C с получением желтой суспензии. После перемешивания ON при 35 °C смесь выливали в водный насыщенный раствор NaHCO₃ (500 мл) в условиях перемешивания. Смесь экстрагировали с помощью DCM (200 мл x 3). Впоследствии органические слои объединяли и последовательно высушивали над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-2% MeOH в DCM) с получением 8e (6,4 г) в виде белого твердого вещества. ИЭР-МС: m/z=517,2 [M+H]⁺.

Стадия 4. Получение соединения 8f

К раствору 8e (6,0 г, 11,61 ммоль, двукратно выпаренному совместно с пиридином до применения) в пиридине (100 мл) добавляли DMTrCl (7,87 г, 23,23 ммоль). После перемешивания реакционной смеси при 80°C в течение ночи ее разбавляли с помощью EA (800 мл) и промывали насыщенным NaHCO₃ (200 мл х 2) и солевым раствором (200 мл х 2). Органический слой высушивали над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (петролейный эфир/EtOAc) с получением 8f в виде желтого твердого вещества (6,8 г). ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ11,21 (с, 1H), 8,64 (с, 1Н), 8,55 (с, 1Н), 8,58-8,45 (м, 1Н), 8,04 (д, J=7,2 Гц, 2H), 7,74-7,59 (м, 1H), 7,58-7,47 (м, 2H), 7,28 (д, J=8,8 Гц, 2H), 7,22 (дд, J=2,8, 6,8 Гц, 2H), 7,15-7,07 (м, 5H), 6,98 (д, J=8,8 Гц, 2H), 6,91 (д, J=8,8 Гц, 2H), 6,72 (д, J=8,8 Гц, 2H), 6,60 (д, J=8,8 Гц, 2H), 6,27 (д, J=7,6 Гц, 1H), 5,24 (дд, J=4,4, 7,6 Гц, 1H), 4,30 (д, J=10,4 Гц, 1H), 4,22 (дд, J=4,8, 7,8 Гц, 1H), 4,05-3,99 (м, 1H), 3,80-3,58 (м, 10H), 3,21 (дд, J=4,8, 12,8 Гц, 1H), 2,56 (д, J=4,4 Гц, 1H); ИЭР-МС: m/z=819,4 [M+H]⁺.

Стадия 5. Получение соединения 8g

К смеси 8f (6,8 г, 8,3 ммоль) в THF (80 мл) в один прием добавляли PPh₃ (3,27 г, 12,46 ммоль); смесь перемешивали при 40 °C в течение 2 ч в атмосфере N₂ с последующим добавлением воды (30 мл), впоследствии дополнительно перемешивали в течение еще 12 ч с получением бесцветного раствора. Смесь объединяли с другой для увеличения масштаба. Большую часть летучих соединений удаляли при пониженном давлении и разделяли оставшийся водный слой между DCM/водой. Слой собирали и экстрагировали с помощью DCM (200 мл х 3). Впоследствии органические слои объединяли, высушивали над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-5% MeOH в DCM) с получением 8g (6,4 г, общий выход 89%) в виде белого твердого вещества. ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ м. д. 8,74-8,65 (м, 1H), 8,54 (с, 1H), 8,13-8,01 (м, 2H), 7,74-7,63 (м, 1H), 7,62-7,51 (м, 2H), 7,31 (д, J=8,8 Гц, 2H), 7,24 (дд, J=3,2, 6,4 Гц, 2H), 7,19-7,07 (м, 5H), 6,97 (дд, J=8,8, 18,0 Гц, 4H), 6,73 (д, J=8,8 Гц, 2H), 6,62 (д, J=9,2 Гц, 2H), 6,25 (д, J=7,6 Гц, 1H), 5,16 (дд, J=4,4, 7,6 Гц, 1H), 4,30 (д, J=10,8 Гц, 1H), 4,16-4,04 (м, 2H), 4,01-3,95 (м, 1H), 3,84-3,59 (м, 9H), 2,72 (д, J=4,8 Гц, 1H), 2,67-2,58 (м, 1H), 2,67-2,58 (м, 1H); ИЭР-МС: m/z=794,4 [M+H]⁺.

Стадия 6. Получение соединения 8h

Раствор хлорсульфата 4-нитрофенила (5,57 г, 23,46 ммоль) в безводном DCM (5 мл) быстро добавляли к смеси 8g (6,2 г, 7,82 ммоль), 4-нитрофенола (3,26 г, 23,46 ммоль), Et₃N (4,75 г, 46,92 ммоль) в безводном DCM (20 мл) в атмосфере N₂ при -78 °C, впоследствии нагревали до комнатной температуры в течение 1,5 ч. Смесь переносили в разделительную воронку, промывали водным насыщенным NaHCO3 (200 мл x 4). Органический слой высушивали над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-100% EtOAc в петролейном эфире) с получением 8h (6,2 г) в виде белого твердого вещества. ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ 11,32 (уш. с, 1H), 9,29 (уш. т, J=5,6 Гц, 1H), 8,72 (с, 1H), 8,33-8,24 (м, 2H), 8,13 (с, 1H), 8,07 (д, J=7,2 Гц, 2H), 7,72-7,63 (м, 1H), 7,60-7,46 (м, 4H), 7,31 (д, J=8,4 Гц, 2H), 7,27-7,19 (м, 2H), 7,18-7,06 (м, 5H), 6,95 (д, J=8,0 Гц, 4H), 6,73 (д, J=9,2 Гц, 2H), 6,60 (д, J=9,2 Гц, 2H), 6,30 (д, J=7,8 Гц, 1H), 5,11 (дд, J=4,8, 7,8 Гц, 1H), 4,39-4,22 (м, 2H), 4,10-3,93 (м, 2H), 3,83-3,59 (м, 10H), 2,84 (д, J=4,8 Гц, 1H); ИЭР-МС: m/z=994,2 [M+H]⁺.

Стадия 7. Получение соединения 8j

Суспензию 39h (1,3 г, 1,92 ммоль), 8h (2,48 г, 2,5 ммоль) и молекулярных сит (1,5 г) в безводном THF (20 мл) перемешивали в атмосфере N₂ в течение 30 мин при комнатной температуре с последующим добавлением DMAP (0,94 г, 7,7 ммоль). После перемешивания в течение ночи при 45°C в атмосфере N₂ реакционную смесь фильтровали через слой диатомитовой земли и концентрировали фильтрат при пониженном давлении с получением желтого остатка; его растворяли в DCM (300 мл) и промывали водным насыщенным NaHCO₃ (100 мл x 3). Органический слой высушивали над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-70% EtOAc в PE) с получением 8j (2,7 г) в виде белого твердого вещества. ИЭР-МС: m/z=766,2 [M+H]⁺.

Стадия 8. Получение соединения 8k

К смеси 8j (2,7 г, 1,76 ммоль) в DCM (80 мл) добавляли воду (318 мг, 17,64 ммоль) и DCA (335 мг, 4,06 ммоль) с получением желтого раствора. После перемешивания смеси при кт в течение 1,5 часа к ней добавляли MeOH (2 мл) с последующим добавлением пиридина (558,1 мг) с получением бесцветного раствора, который дополнительно перемешивали в течение 15 мин. Растворитель концентрировали при пониженном давлении и очищали остаток посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-2% MeOH в DCM) с получением соединения 8k (1,28 г) в виде белого твердого вещества. ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ 11,26 (уш. д, J=10,8 Гц, 2H), 9,02-8,50 (м, 5H), 8,05 (д, J=7,6 Гц, 4H), 7,79-7,62 (м, 2H), 7,61-7,48 (м, 4H), 7,36 (д, J=8,4 Гц, 2H), 6,93 (д, J=8,4 Гц, 2H), 6,50 (дд, J=2,4, 16,8 Гц, 1H), 6,09 (д, J=5,6 Гц, 1H), 5,99-5,83 (м, 1H), 5,79 (уш. д, J=6,4 Гц, 1H), 5,53-5,27 (м, 2H), 5,11-4,93 (м, 1H), 4,79-4,53 (м, 2H), 4,42-4,29 (м, 1H), 4,27-4,03 (м, 2H), 3,89-3,71 (м, 4H), 3,68-3,56 (м, 1H), 3,55-3,38 (м, 2H); ¹⁹F ЯМР (376 МГц, DMSO-d₆) = -202,67 (с, 1F); ИЭР-МС: m/z=926,3 [M+H]⁺.

Стадия 9. Получение соединения 8l

THF перед работой перегоняли над смесью натрий/бензофенон, а CH₃CN перед работой перегоняли над CaH₂ до применения. К раствору 8k (200 мг, 0,21 ммоль, высушен лиофилизацией) в THF (6 мл) добавляли молекулярные сита 4Å (800 мг, порошок) и раствор 1H-тетразола (4,8 мл, 0,45 M, 945 мг тетразола (высушен лиофилизацией) в 30 мл безводного CH₃CN с последующим добавлением молекулярных сит 4,4 (1 г, порошок), перемешивали в течение 1 ч в атмосфере N₂ перед использованием). После продувки колбы с помощью N₂ посредством шприца по каплям добавляли раствор 2-цианоэтил-N, N,N',N'-тетра(изопропил)фосфородиамидита (117 мг, 0,39 ммоль) в THF (0,8 мл) в течение 25 мин; после перемешивания реакционной смеси при кт в течение 1,5 ч добавляли раствор TBHP (0,34 мл, 1,73 ммоль, 5 M). После перемешивания смеси в течение еще 30 мин концентрировали реакционную смесь при пониженном давлении и очищали остаток посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-5% DCM в MeOH) с получением 8l в виде белого твердого вещества (153 мг, 0,14 ммоль). ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 9,85 (уш. с, 1H), 9,79-9,72 (м, 1H), 8,89 (с, 1H), 8,87-8,84 (м, 1H), 8,64-8,59 (м, 1H), 8,20-8,14 (м, 1H), 8,10-8,04 (м, 4H), 8,02-7,95 (м, 3H), 7,65-7,56 (м, 3H), 7,55-7,45 (м, 6H), 6,05-5,94 (м, 1H), 4,81-4,71 (м, 2H), 4,66 (уш. д, J=11,6 Гц, 1H), 4,52-4,47 (м, 1H), 4,36-4,21 (м, 4H), 4,01 (уш. дд, J=4,4, 8,8 Гц, 1H), 3,92-3,80 (м, 6H), 2,67 (т, J=6,0 Гц, 1H), 2,43-2,28 (м, 2H); ¹⁹F ЯМР (376 МГц, CDCl₃) δ -196,54 - -197,10 (м, 1F); ³¹P ЯМР (162 МГц, CDCl₃) δ -2,49 (с, 1P), -4,38 (с, 1P); ИЭР-МС: m/z=780,2 [M/2+H]⁺.

Стадия 10. Получение соединения 8m

Раствор 8l (153 мг, 0,14 ммоль) в MeNH₂/EtOH (5 мл) перемешивали при кт в течение 2 ч. Летучие вещества выпаривали при пониженном давлении с получением белого твердого вещества, растворенного в воде (20 мл); водный слой промывали с помощью DCM (10 мл x 3). Водный слой лиофилизировали с получением 114 мг 8m в виде белого твердого вещества.

Стадия 11. Получение соединения 41 (аммонийная соль)

Раствор анизола (158 мг, 1,46 ммоль) в TFA (1,57 мл, 20,47 ммоль) охлаждали до 0°C и добавляли к 8m (114 мг). После перемешивания реакционной смеси при 0°C в течение 2,5 ч TFA удаляли продувкой потоком газообразного азота при 0 °C. Оставшуюся реакционную смесь гасили с помощью MeNH₂ (33% раствор в EtOH, 1,6 мл) при 0 °C и выпаривали досуха при пониженном давлении. Остаток разделяли между DCM/водой (15 мл x 3/15 мл). Водный слой лиофилизировали с получением белого остатка, дополнительно очищенного посредством обращенно-фазной препаративной ВЭЖХ (колонка: Xbridge 150×30 мм x 10 мкм, условия: A: вода (10 мМ NH₄HCO₃)-ACN: MeCN, начало: B 5%, конец B: 35%; скорость потока (мл/мин) 25.) с получением соединения 41 (аммонийная соль) в виде белого твердого вещества (45 мг). ^‘1H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ м. д. 10,63 (уш. с, 1H), 8,44-8,37 (м, 1H), 8,25 (уш. с, 1H), 8,04 (уш. с, 2H), 7,38-6,89 (м, 2H), 6,41 (уш. д, J=19,6 Гц, 1H), 6,13(д, J=8,4 Гц, 1H), 6,01-5,83 (м, 1H), 5,60 (уш. с, 1H), 5,31 (уш. с, 1H), 4,45 (уш. д, J=5,2 Гц, 1H), 4,28 (уш. с, 2H), 4,12-4,04 (м, 1H), 3,99 (уш. д, J=11,2 Гц, 1H); ¹⁹F ЯМР (376 МГц, DMSO-d₆) δ -198,36 - -200,33 (м, 1F); ³¹P ЯМР (162 МГц, DMSO-d₆) δ м. д. -3,40 (уш. с, 1P); ИЭР-МС: m/z=659,9 [M+H]⁺.

Стадия 12. Получение соединения 41 (натриевая соль)

Смолу Dowex 50W x 8, 200-400 (9 мл, H-форма) добавляли в стакан (на 45 мг соединения 41 (аммонийная соль)) и промывали деионизированной водой (50 мл). Впоследствии к смоле добавляли 15% H₂SO₄ в деионизированной воде, смесь осторожно перемешивали в течение 5 мин и декантировали (50 мл). Смолу переносили на колонку с 15% H₂SO₄ в деионизированной воде и промывали 15% H₂SO₄ (по меньшей мере 4 CV [объема колонки]) и впоследствии деионизированной водой до нейтральной реакции. Смолу переносили обратно в стакан, добавляли раствор 15% NaOH в деионизированной воде (20 мл) и смесь осторожно перемешивали в течение 5 мин и декантировали (1 ×). Смолу переносили на колонку и промывали 15% NaOH в воде (по меньшей мере 4 объема колонки) и впоследствии деионизированной водой до нейтральной реакции, соединение 41 (аммонийная соль) (45 мг) растворяли в минимальном количестве деионизированной воды, добавляли в верхнюю часть колонки и элюировали деионизированной водой. Нужные фракции объединяли и лиофилизировали с получением соединения 41 (натриевая соль) (31,4 мг) в виде белого твердого вещества. ¹H ЯМР (D₂O, 400 МГц) δ 8,06 (с, 1H), 8,00 (с, 1H), 7,62-7,87 (м, 1H), 7,28 (уш. с, 1H), 6,24 (уш. д, J=12,8 Гц, 1H), 6,03 (уш. д, J=8,0 Гц, 1H), 5,49-5,74 (м, 1H), 5,22-5,31 (м, 1H), 5,11 (уш. д, J=16,4 Гц, 1H), 4,53 (уш. с, 1H), 4,44 (уш. д, J=4,4 Гц, 1H), 4,39 (уш. с, 1H), 4,34 (уш. д, J=10,4 Гц, 1H), 3,98 (уш. δ, J=8,8 Гц, 1H), 3,71-3,79 (м, 1H), 3,60-3,70 (м, 1H); ¹⁹F ЯМР (376 МГц, D₂O) δ -201,23 (уш. с, 1F), ³¹P ЯМР (162 МГц, D₂O) δ -2,76 (уш. с, 1P); ИЭР-МС: m/z=660,1 [M+H]⁺.

Пример 9

Стадия 1. Получение соединения 9b

Раствор соединения 9a (8,3 г, 27,27 ммоль, CAS № 2086765-82-2) в безводном пиридине (160 мл) при 0 °C, к которому по каплям добавляли хлортриметилсилан (14,8 г, 136,36 ммоль), перемешивали при 0°C в течение 1,5 ч. Добавляли по каплям хлорид бензоила (19,2 г, 136,36 ммоль) и продолжали перемешивание при комнатной температуре в течение 3 ч. Реакционный раствор, охлажденный на ледяной бане, гасили добавлением воды (50 мл) и перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Добавляли водный раствор аммиака (70 мл 25% раствора) и продолжали перемешивание в течение еще одного часа. Реакционный раствор экстрагировали с помощью EtOAc, объединенные органические слои промывали солевым раствором, сушили над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Очистку проводили колоночной хроматографией на силикагеле (градиентное элюирование: 0-90% EtOAc в петролейном эфире) с получением соединения 9b в виде желтого твердого вещества (9,1 г, выход: 80%). ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ м. д. 11,11 (с, 1H), 8,60 (с, 1H), 8,07 (д, J=7,3 Гц, 2H), 7,69 (д, J=3,8 Гц, 1H), 7,66-7,61 (м, 1H), 7,57-7,51 (м, 2H), 6,68 (д, J=3,5 Гц, 1H), 5,13 (тд, J=6,3, 12,0 Гц, 1H), 4,92 (т, J=6,8 Гц, 1H), 4,80 (т, J=5,3 Гц, 1H), 4,55 (дд, J=4,4, 7,2 Гц, 1H), 3,59-3,46 (м, 2H), 2,32-2,20 (м, 2H), 2,16-2,03 (м, 1H), 1,49 (с, 3H), 1,23 (с, 3H); ИЭР-МС: m/z=409,1 [M+H]⁺.

Стадия 2. Получение соединения 9c

DMAP (448 мг, 3,76 ммоль) и хлорид тозила (2,80 г, 14,69 ммоль) добавляли к раствору соединения 9b (3,0 г, 7,35 ммоль) и Et₃N (2,33 г, 22,04 ммоль) в DCM (60 мл) при охлаждении льдом. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4 ч. Смесь гасили водой и экстрагировали с помощью DCM. Органический слой промывали солевым раствором, высушивали безводным Na₂SO₄ и выпаривали при пониженном давлении с получением тозилированного соединения. Неочищенный продукт растворяли в DMF (30 мл), добавляли азид натрия (2,34 г, 36,00 ммоль) и перемешивали полученную реакционную смесь при 30°C в течение ночи. Реакционный раствор охлаждали до комнатной температуры, разбавляли насыщенным водным Na₂CO₃ и экстрагировали с помощью EtOAc. Органический слой отделяли, промывали солевым раствором, высушивали безводным Na₂SO₄ и выпаривали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-40% EtOAc в петролейном эфире) с получением соединения 9c в виде желтого твердого вещества (2,1 г, выход: 62%). ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ м. д. 11,13 (с, 1H), 8,60 (с, 1H), 8,10-8,03 (м, 2H), 7,69 (д, J=3,8 Гц, 1H), 7,67-7,61 (м, 1H), 7,57-7,51 (м, 2H), 6,69 (д, J=3,8 Гц, 1H), 5,16 (тд, J=6,3, 12,0 Гц, 1H), 4,99-4,89 (м, 1H), 4,55 (дд, J=5,1, 7,2 Гц, 1H), 3,63-3,46 (м, 2H), 2,41-2,27 (м, 2H), 2,20-2,07 (м, 1H), 1,50 (с, 3H), 1,24 (с, 3H); ИЭР-МС: m/z 434,1 [M+H]⁺.

Стадия 3. Получение соединения 9d

TFA (40 мл) добавляли к раствору соединения 9c (5,4 г, 12,46 ммоль) в DCM (100 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Остаток, полученный после концентрирования при пониженном давлении повторно растворяли в MeOH (20 мл) с последующим добавлением насыщенного водного K₂CO₃ (40 мл). Полученную смесь перемешивали в течение 20 мин, после чего экстрагировали с помощью DCM. Объединенные органические слои промывали солевым раствором, высушивали безводным Na₂SO₄ и выпаривали при пониженном давлении с получением соединения 9d, которое использовали в таком виде на следующей стадии. ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ м. д. 11,08 (с, 1H), 8,57 (с, 1H), 8,07 (уш. д, J=7,5 Гц, 2H), 7,67-7,61 (м, 2H), 7,57-7,51 (м, 2H), 6,66 (д, J=3,5 Гц, 1H), 5,10-5,01 (м, 1H), 4,97 (д, J=6,5 Гц, 1H), 4,89 (д, J=4,8 Гц, 1H), 4,27 (тд, J=6,1, 8,1 Гц, 1H), 3,84-3,80 (м, 1H), 3,60-3,48 (м, 2H), 2,34-2,25 (м, 1H), 2,23-2,12 (м, 1H), 1,67-1,55 (м, 1H); ИЭР-МС: m/z 394,0 [M+H]⁺.

Стадия 4. Получение соединения 9e

Вышеуказанное соединение 9d растворяли в DCM (90 мл) с последующим добавлением имидазола (2,42 г, 35,52 ммоль) и TBSCl (2,68 г, 17,76 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи, после чего ее выливали в воду и экстрагировали с помощью DCM. Объединенные органические слои промывали солевым раствором, высушивали безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением 9e и его 3’-региоизомера. Разделение проводили препаративной обращенно-фазной ВЭЖХ (неподвижная фаза: Phenomenex Synergi, 10 мкм Max-RP, 250×50 мм; подвижная фаза: вода (A)-MeCN (B); градиентное элюирование) с получением соединения 9e (2,3 г, выход: 50% из 9c) в виде первого элюируемого изомера. ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ м. д. 11,05 (уш. с, 1H), 8,56 (с, 1H), 8,07 (д, J=7,8 Гц, 2H), 7,60-7,68 (м, 2H), 7,47-7,59 (м, 2H), 6,68 (д, J=3,5 Гц, 1H), 5,10-5,23 (м, 1H), 4,63 (д, J=5,5 Гц, 1H), 4,37 (дд, J=8,0, 5,8 Гц, 1H), 3,74-3,84 (м, 1H), 3,48-3,62 (м, 2H), 2,10-2,30 (м, 2H), 1,66-1,85 (м, 1H), 0,64 (с, 9H), -0,16 (с, 3H), -0,37 (с, 3H); ИЭР-МС: m/z 508,1 [M+H]⁺.

Стадия 5. Получение соединения 9f

DMTrCl (3,87 г, 11,43 ммоль), AgNO3 (4,85 г, 28,56 ммоль) и 2,4,6-коллидин (3,46 г, 28,56 ммоль) добавляли к раствору соединения 9e (2,9 г, 5,71 ммоль) в DCM (50 мл), полученную смесь перемешивали при 35°C в течение ночи. Реакционный раствор фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-20% EtOAc в петролейном эфире) с последующей очисткой посредством препаративной обращенно-фазной ВЭЖХ (неподвижная фаза: Phenomenex Synergi Max-RP, 10 мкм, 250×50 мм, подвижная фаза: 0,1% водный TEA (A)-MeCN (B); градиентное элюирование) с получением соединения 9f (3,6 г, выход 78%). ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ м. д. 11,04 (с, 1H), 8,59 (с, 1H), 8,08 (д, J=7,4 Гц, 2H), 7,66 (д, J=3,5 Гц, 1H), 7,61-7,65 (м, 1H), 7,55 (к, J=7,3 Гц, 4H), 7,40 (т, J=8,6 Гц, 4H), 7,27-7,35 (м, 2H), 7,18-7,26 (м, 1H), 6,85-6,96 (м, 4H), 6,68 (д, J=3,5 Гц, 1H), 5,50 (к, J=9,1 Гц, 1H), 4,42 (дд, J=9,1, 4,1 Гц, 1H), 3,74 (с, 3H), 3,73 (с, 3H), 3,64 (уш. д, J=3,9 Гц, 1H), 3,27-3,37 (м, 1H), 3,20 (дд, J=12,3, 5,5 Гц, 1H), 2,26-2,37 (м, 1H), 1,71-1,84 (м, 1H), 1,59-1,71 (м, 1H), 0,60-0,78 (м, 9H), -0,27 - -0,18 (м, 3H), -0,59 - -0,51 (м, 3H); ИЭР-МС: m/z=810,1 [M+H]⁺.

Стадия 6. Получение соединения 9g

Раствор соединения 9f (2,3 г, 2,84 ммоль) в EtOAc (80 мл) перемешивали в атмосфере H₂ (50 фунтов на кв. дюйм) при 35°C в течение ночи в присутствии Pd/C (10% на угле, 2,0 г). Катализатор удаляли фильтрованием через диатомитовую землю и остаток на фильтре промывали EtOAc. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением соединения-амина, которое использовали сразу в таком виде на следующей стадии. Неочищенный продукт растворяли в DCM (90 мл), с последующим добавлением 4-нитрофенола (2,81 г, 20,21 ммоль), Et₃N (1,23 г, 12,12 ммоль) и активированных молекулярных сит. Полученную смесь охлаждали до -78°C в атмосфере N₂ , после чего по каплям добавляли хлорсульфат 4-нитрофенила (2,88 г, 12,12 ммоль) в DCM (10 мл), реакционному раствору позволяли прогреться до комнатной температуры и перемешивали в течение ночи. Молекулярные сита удаляли фильтрованием. Фильтрат промывали насыщенным водным NaHCO₃, высушивали над Na₂SO₄ и концентрировали. Неочищенный продукт очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-20% EtOAc в петролейном эфире) с получением соединения 9g (1,4 г, выход: 80% (чистота по данным ЖХ-УФ: 76%)). ИЭР-МС: m/z 986,6 [M+H]⁺.

Стадия 7. Получение соединения 9h

В реакционную колбу помещали DMAP (0,55 г, 4,47 ммоль), безводный THF (6 мл) и активированные молекулярные сита 3Å. Полученную смесь встряхивали при комнатной температуре в инертной атмосфере в течение 2 ч. Одновременно раствор 5'-O-(4,4'-диметокситритил)-N2-изобутирил-3'-O-метил-D-гуанозина [103285-33-2], (0,33 г, 0,46 ммоль) и раствор соединения 9g (1,16 г, 0,89 ммоль), каждый в безводном THF (2×6 мл), высушивали на активированных молекулярных ситах 3Å (прибл. 2 ч). Оба раствора 5'-O-(4,4'-диметокситритил) -N2-изобутирил-2'-O-метилгуанозина и соединения 9g соответственно) последовательно переносили в реакционную колбу. Реакционную смесь перемешивали при 50°C в течение 18 ч, после чего ее охлаждали до комнатной температуры и разбавляли с помощью DCM. Молекулярные сита удаляли фильтрованием и тщательно промывали с помощью DCM. Фильтрат промывали насыщенным водным NaHCO₃ и солевым раствором, высушивали с помощью MgSO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-10% MeOH в DCM) с получением соединения 9h (1,17 г, выход: 86%). ИЭР-МС: m/z 1515,9 [M+H]⁺.

Стадия 8. Получение соединения 9i

Раствор соединения 9h (1,13 г, 0,75 ммоль) в DCM (20 мл) обрабатывали с помощью DCA (250 мкл, 2,98 ммоль) в присутствии воды (67 мкл, 3,73 ммоль) в течение 2,5 ч. Реакционную смесь гасили добавлением пиридина (360 мкл, 4,47 ммоль). Полученный раствор наносили в таком виде на силикагелевую колонку для очистки (градиентное элюирование: 0-10% MeOH в DCM) с получением соединения 9i в виде белого твердого вещества (595 мг, выход: 87%). ¹H ЯМР (400 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) δ м. д. 12,01 (уш. с, 1H), 9,70 (уш. с, 1H), 8,71 (уш. с, 1H), 8,53 (с, 1H), 8,02-8,07 (м, 2H), 7,87 (с, 1H), 7,57-7,63 (м, 1H), 7,49-7,57 (м, 2H), 7,13 (д, J=3,7 Гц, 1H), 7,00 (д, J=3,6 Гц, 1H), 6,12 (д, J=4,0 Гц, 1H), 5,49 (т, J=4,5 Гц, 1H), 4,74-4,83 (м, 2H), 4,39 (уш. т, J=5,3 Гц, 1H), 4,12-4,27 (м, 1H), 4,04-4,10 (м, 1H), 3,97-4,04 (м, 1H), 3,74-3,82 (м, 1H), 3,57 (с, 3H), 3,37-3,46 (м, 1H), 3,17-3,26 (м, 1H), 2,65 (спт, J=7,0 Гц, 1H), 2,45-2,54 (м, 1H), 2,39-2,49 (м, 1H), 1,96-2,03 (м, 1H), 1,17 (д, J=6,6 Гц, 3H), 1,18 (д, J=6,6 Гц, 3H), 0,75 (с, 9H), -0,23 (с, 3H), -0,44 (с, 3H); ИЭР-МС: m/z 911,6 [M+H]⁺.

Стадия 9. Получение соединения 9j

Раствор соединения 9i (530 мг, 0,58 ммоль) в безводном THF/MeCN (1 : 1, 108 мл, высушен на активированных молекулярных ситах 3Å до применения) обрабатывали активированными молекулярными ситами 3Å в инертной атмосфере (прибл. 2 ч встряхивание), добавляли 1H-тетразол (5,0 мл 3-4% в MeCN, 1,73 ммоль, высушен на активированных молекулярных ситах 3Å до применения) и встряхивали смесь в течение 1 ч при комнатной температуре. Далее за раз добавляли 2-цианоэтил-N, N,N',N'-тетра(изопропил)фосфородиамидит (180 мкл, 0,58 ммоль) и продолжали встряхивание в течение 18 ч. В заключение добавляли две равные порции tBuOOH (2×120 мкл 5,5 M раствора в декане, 2×0,63 ммоль) с интервалом 30 мин, после чего реакционную смесь встряхивали в течение еще 2 ч. Молекулярные сита удаляли фильтрованием и промывали с помощью DCM. Фильтрат промывали смесью насыщенного водного Na₂S₂O₃ и насыщенного водного NaHCO₃ и солевым раствором, высушивали с помощью MgSO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-10% MeOH в DCM) с получением соединения 9j (130 мг, выход: 21%). ¹H ЯМР (400 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) δ м. д. -0,04 (уш. с, 3H), 0,11 (с, 3H), 0,85 (с, 9H), 0,93 (уш. д, J=6,9 Гц, 3H), 1,10 (д, J=6,9 Гц, 3H), 2,42-2,52 (м, 1H), 2,52-2,69 (м, 2H), 2,89 (тд, J=5,9, 2,8 Гц, 2H), 2,93 (уш. д, J=5,7 Гц, 1H), 3,37-3,50 (м, 1H), 3,56-3,67 (м, 4H), 4,35 (д, J=2,8 Гц, 1H), 4,37-4,48 (м, 4H), 4,53 (дт, J=5,3, 3,7 Гц, 1H), 4,80 (уш. с, 1H), 4,99 (ддд, J=11,0, 5,3, 3,7 Гц, 1H), 5,27-5,32 (м, 1H), 5,95-6,02 (м, 2H), 7,03 (д, J=3,7 Гц, 1H), 7,12 (д, J=3,7 Гц, 1H), 7,52-7,58 (м, 2H), 7,58-7,65 (м, 1H), 7,59-7,67 (м, 1H), 8,04 (с, 1H), 8,12 (д, J=7,3 Гц, 2H), 8,93 (уш. с, 1H), 9,10 (уш. с, 1H), 10,66 (уш. с, 1H), 12,10 (уш. с, 1H); ³¹P ЯМР (162 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) δ м. д. -3,52 (с, 1P); ИЭР-МС: m/z 1026,6 [M+H]⁺.

Стадия 10. Получение соединения 8 (натриевая соль)

Соединение 9j (118 мг, 0,11 ммоль) перемешивали в растворе 33% метиламина в этаноле (5,9 мл) при 40°C до полного превращения (прибл. 3 ч), после чего реакционный раствор охлаждали до комнатной температуры и концентрировали при пониженном давлении. Остаток растворяли в пиридине (6 мл) с последующим добавлением Et₃N (460 мкл, 3,31 ммоль) и тригидрофторида триэтиламина (280 мкл, 1,66 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 45°C в течение 18 ч. Добавляли изопропокситриметилсилан (1,17 мл, 6,62 ммоль) и продолжали перемешивание при комнатной температуре в течение 2 дней. Остаток, полученный после концентрирования при пониженном давлении, растирали в безводном ацетонитриле, полученный осадок дополнительно очищали посредством препаративной обращенно-фазной ВЭЖХ (неподвижная фаза: RP XBridge C18 OBD, 10 мкм, 150×50 мм, подвижная фаза: 0,25% водный бикарбонат аммония (A) -MeOH (B); градиентное элюирование) с получением соединения 8. Заключительное превращение в натриевую соль проводили элюированием водным раствором колонки, заполненной натриевой катионообменной смолой, с получением соединения 8 (натриевая соль) в виде рыхлого белого твердого вещества (32 мг, выход: 41%). ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ м. д. 10,31 (уш. с, 1H), 8,04 (с, 1H), 7,94 (с, 1H), 7,76 (уш. с, 1H), 7,21 (д, J=3,3 Гц, 1H), 6,74 (д, J=3,1 Гц, 1H), 6,48-6,60 (м, 5H), 6,02 (д, J=8,4 Гц, 1H), 5,92 (дд, J=8,4, 4,3 Гц, 1H), 4,80-4,93 (м, 1H), 4,63 (уш. с, 1H), 4,34-4,43 (м, 1H), 4,30 (д, J=3,8 Гц, 2H), 4,18 (дд, J=12,2, 3,6 Гц, 1H), 4,08 (дд, J=12,5, 2,8 Гц, 1H), 3,50 (с, 3H), 3,16 (уш. д, J=6,1 Гц, 2H), 2,25-2,37 (м, 2H), 1,45-1,57 (м, 1H); ³¹P ЯМР (162 МГц, DMSO-d₆) δ м. д. 1,42 (с, 1P); ИЭР-МС: m/z=685,3 [M+H]⁺.

Пример 10

Стадия 1. Получение соединения 10b

К раствору соединения 10a (0,8 г, 2,15 ммоль) в DMF (6 мл) добавляли имидазол (439,98 мг, 6,46 ммоль) и TBSCl (616,94 мг, 4,09 ммоль). После перемешивания при кт в течение 1,5 ч смесь объединяли с другой порцией и разбавляли с помощью EA (800 мл). Органический слой последовательно промывали водным насыщенным NaHCO₃ (200 мл х 2), солевым раствором (200 мл х 2), высушивали над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (элюирование 0-70% EA в PE) с получением соединения 10b (5,5 г) в виде белого твердого вещества. 1H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ 11,44 (уш. с, 1H), 8,66 (уш. с, 1H), 8,17-7,92 (м, 2H), 7,85 (уш. с, 1H), 7,69-7,59 (м, 1H), 7,57-7,33 (м, 2H), 5,44-5,09 (м, 2H), 5,02 (уш. д, J=5,4 Гц, 1H), 4,30 (уш. с, 1H), 4,01 (уш. д, J=4,0 Гц, 1H), 3,87 (уш. д, J=3,6 Гц, 1H), 3,80-3,61 (м, 2H), 0,84 (с, 9H). 0,01 (д, J=4,4 Гц, 6H); ИЭР-МС: m/z=486,2 [M+H]⁺.

Стадия 2. Получение соединения 10c1 и 10c2

Соединение 10b перед использованием дважды совместно выпаривали с пиридином (10 мл). К раствору соединения 10b (1,7 г, 0,88 ммоль) в пиридине (15 мл) добавляли DMTrCl (41,78 г, 5,25 ммоль). После перемешивания при кт в течение 2 ч смесь объединяли с другой порцией и разбавляли с помощью EtOAc (500 мл). Органический слой последовательно промывали водным насыщенным NaHCO₃ (150 мл х 2), солевым раствором (150 мл х 2), высушивали над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (элюирование 0-70% EtOAc в PE) с получением смеси 10c1 и 10c2 (3,9 г). ИЭР-МС: m/z=788,4 [M+H]⁺.

Стадия 3. Получение соединения 10d1 и 10d2

К раствору 10c1 и 10c2 (2,5 г, 3,17 ммоль) в DMF (25 мл) добавляли NaH (60% в минеральном масле, 482,3 мг, 12,05 ммоль) при 0 °C. Смесь перемешивали в течение 1 ч при 0°C и по каплям добавляли раствор хлорид 4-метоксибензила (745,31 мг, 4,76 ммоль) в DMF (5 мл) в течение 10 мин. После перемешивания при кт в течение 2 ч смесь гасили добавляемой по каплям водой (5 мл) и разбавляли с помощью EA (500 мл). Органический слой последовательно промывали водным насыщенным NaHCO₃ (150 мл х 2), солевым раствором (150 мл х 2), высушивали над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (элюирование 0-40% EA в PE) с получением смеси 10d1 и 10d2 (1,9 г). ИЭР-МС: m/z=908,4 [M+H]⁺.

Стадия 3. Получение соединений 10e1 и 10e2

Раствор 10e1 и 10e2 (1,9 г, 2,09 ммоль) в DCM (30 мл) обрабатывали водой (0,38 мл, 20,92 ммоль) и DCA (0,69 мл, 8,37 ммоль). Полученный желтый раствор перемешивали при кт в течение 2 ч. Впоследствии добавляли к MeOH (0,15 мл) с последующим добавлением пиридина (662 мг) с получением бесцветного раствора, который дополнительно перемешивали в течение 15 мин. Смесь выпаривали при пониженном давлении с получением остатка, очищенного посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле с получением смеси соединений 10e1 и 10e2 (1,05 г) в виде желтого твердого вещества. ИЭР-МС: m/z=606,1 [M+H]⁺.

Стадия 4. Получение соединений 10f1 и 10f2

Смесь соединений 10e1 и 10e2 (1,2 г, 1,98 ммоль) в THF (12 мл) обрабатывали в один прием с помощью TBAF (3 мл, 1 M). Смесь перемешивали при кт в течение 3 ч и гасили водным насыщенным NaHCO₃ (150 мл). Органический слой высушивали (безводным Na₂SO₄), фильтровали и выпаривали при пониженном давлении с получением остатка, который очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (5% MeOH в DCM) с получением смеси соединений 10f1 и 10f2. Смесь 10f1 и 10f2 объединяли с другой порцией и растирали с MeOH; в MeOH образовался осадок; после фильтрования и промывки небольшим количеством MeOH его идентифицировали как главный чистый изомер соединения 10f2 (659 мг); остаточную жидкость концентрировали и очищали посредством обращенно-фазной препаративной ВЭЖХ (колонка: Waters Xbridge Prep OBD 10 мкм C18 150×30, условия: A: вода (10 мМ NH₄HCO₃)-ACN: MeCN, начало: B 25%, конец B: 45%; скорость потока (мл/мин) 25) с получением дополнительного количества соединения 10f2 (97 мг) и побочного изомера соединения 10f1 (200 мг), каждый - в виде белого твердого вещества.

Соединение 10f1. ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ 8,51 (с, 1H). 8,03 (уш. д, J=8,0 Гц, 2H), 7,81 (с, 1H), 7,67-7,63 (м, 1H), 7,57-7,53 (м, 2H), 7,17 (д, J=8,0 Гц, 2H), 6,80 (д, J=8,0 Гц, 2H), 5,28 (д, J=8,0 Гц, 1H), 5,09 (уш. д, J=4,0 Гц, 1H), 4,83 (уш. т, J=4,0 Гц, 1H), 4,64 (д, J=12 Гц, 1H), 4,47 (д, J=12 Гц, 1H), 4,28 (т, J=4,0 Гц, 1H), 4,20 (к, J=4,0 Гц, 1H), 3,91 (к, J=4,0 Гц, 1H), 3,70 (с, 3H), 3,61-3,58 (м, 1H), 3,51-3,47 (м, 1H); ИЭР-МС: m/z=492,2 [M+H]⁺.

Соединение 10f2. ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ 8,61 (уш. с, 1H), 8,03 (уш. д, J=8,0 Гц, 2H), 7,92 (уш. с, H), 7,69-7,65 (м, 1H), 7,58-7,54 (м, 2H), 7,33 (д, J=8,0 Гц, 2H), 6,92 (д, J=8,0 Гц, 2H), 5,33 (д, J=8,0 Гц, 1H), 5,21 (уш. д, J=8,0 Гц, 1H), 4,87 (т, J=8,0 Гц, 1H), 4,66 (д, J=8,0 Гц, 1H), 4,57-4,49 (м, 2H), 4,01 (к, J=4,0 Гц, 1H), 3,95 (т, J=4,0 Гц, 1H), 3,75 (с, 3H), 3,60-3,55 (м, 1H), 3,50-3,45 (м, 1H); ИЭР-МС: м/z=492,3 [M+H]⁺.

Стадия 5. Получение соединения 10g

К раствору N-(7-((2S,3S,4S,5R)-3-гидрокси-5-(гидроксиметил)-4-((4-метоксибензил)окси)тетрагидрофуран-2-ил)имидазо[2,1-f] [1,2,4]триазин-4-ил)бензамид, соединение 10f2 (400 мг, 0,81 ммоль), в пиридине (6 мл) добавляли DMTrCl (496 мг, 1,46 ммоль) при кт. После перемешивания при кт в течение ночи смесь объединяли с другой порцией неочищенного материала и разбавляли с помощью DCM (50 мл). Органический слой последовательно промывали водным насыщенным NaHCO₃ (50 мл x 3), высушивали безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали с получением остатка. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (0-100% EtOAc в петролейном эфире и 0-10% MeOH в DCM) с получением соединения 10g (450 мг) в виде белого твердого вещества. Непрореагировавшее соединение 10f2 (160 мг) извлекали в виде белого твердого вещества. ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) 11,50 (уш. с, 1H), 8,67 (уш. с, 1H), 7,99 (уш. д, J=6,0 Гц, 1H), 7,86 (уш. с, 1H), 7,65 (уш. д, J=6,4 Гц, 1H), 7,54 (уш. т, J=7,6 Гц, 2H), 7,29-7,35 (м, 2H), 7,23-7,29 (м, 2H), 7,17-7,23 (м, 7H), 6,83 (тд, J=6,0, 3,2 Гц, 6H), 5,45 (уш. д, J=4,8 Гц, 1H), 5,30 (уш. с, 1H), 4,63 (уш. д, J=11,6 Гц, 1H), 4,43 (уш. д, J=12,0 Гц, 1H), 4,12 (уш. с, 1H), 4,07 (уш. с, 1H), 3,72 (с, 9H), 3,20 (уш. д, J=7,6 Гц, 1H), 3,01 (уш. д, J=5,6 Гц, 1H); ИЭР-МС: m/z=794,2 [M+H]⁺.

Стадия 5. Получение соединения 10h

Перемешанную суспензию соединения 10g (450 мг, 0,56 ммоль), сульфамата 17a (744,735 мг, 0,850 ммоль) и молекулярных сит 4Å (1 г) в безводном THF (6 мл) обрабатывали с помощью DMAP (277 мг, 2,27 ммоль) при 25 °C. После перемешивания желтой суспензии при 45°C в течение 18 ч в атмосфере N₂ реакционную смесь фильтровали через слой диатомитовой земли и концентрировали фильтрат при пониженном давлении с получением желтого остатка; остаток растворяли в DCM (100 мл) и промывали водным насыщенным NaHCO₃ (100 мл x 4). Органический слой сушили безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали с получением остатка. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-100% EtOAc в PE) с получением соединения 10h (604 мг) в виде желтого твердого вещества. ИЭР-МС: m/z=766,8 [M+H]⁺.

Стадия 6. Получение соединения 10i

Раствор соединения 10h (704 мг, 0,46 ммоль) в воде (0,08 мл) и DCM (15 мл) обрабатывали с помощью DCA (118,6 мг, 0,92 ммоль) при комнатной температуре в течение 4 ч, впоследствии гасили пиридином (0,5 мл). После перемешивания при кт в течение 10 мин смесь концентрировали in vacuo с получением остатка. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-100% EtOAc в PE) с получением соединения 10i (370 мг) в виде твердого вещества, ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ 11,46 (уш. с, 1H), 11,24 (с, 1H), 8,70 (с, 1H), 8,62 (с, 1H), 8,45 (уш. т, J=4,0 Гц, 1H), 8,03 (уш. т, J=8,0 Гц, 6H), 7,67-7,63 (м, 2H), 7,57-7,53 (м, 4H), 7,30 (уш. д, J=8,0 Гц, 2H), 6,91 (уш. д, J=8,0 Гц, 2H), 6,38-6,33 (м, 1H), 5,89 (уш. д, J=8,0 Гц, 1H), 5,65 (уш. с, 1H), 5,51 (уш. с, 1H), 5,38 (уш. с, 1H), 4,95 (уш. с, 1H), 4,63-4,50 (м, 4H), 4,32 (уш. т, J=4,0 Гц, 1H), 4,04-3,99 (м, 3H), 3,74 (с, 3H), 3,59 (уш. д, J=12,0 Гц, 2H), 3,29-3,22 (м, 1H); ¹⁹F ЯМР (376 МГц, DMSO-d₆;) δ -202,69 (тд, J=18,8, 52,6 Гц, 1F); ИЭР-МС: m/z=926,5 [M+H]⁺.

Стадия 7. Получение соединения 10j

ПРИМЕЧАНИЕ. THF перед работой перегоняли над Na/бензофеноном, а CH₃CN перед работой перегоняли над CaH₂ до применения. К раствору соединения 10i (220 мг, 0,24 ммоль, высушен лиофилизацией) растворенного в THF (4 мл) добавляли молекулярные сита 4A (порошок, 800 мг) и раствор 1H-тетразола (5,28 мл, 0,45 M, полученный путем растворения 945 мг тетразола (высушенного лиофилизацией) в 30 мл безводного CH₃CN с последующим добавлением 1 г молекулярных сит 4A и впоследствии перемешивали в течение 1 ч в атмосфере N₂ до применения). Колбу несколько раз продували с помощью N₂. Раствор 2-цианоэтил-N, N,N',N'-тетраизопропилфосфородиамидита (129 мг, 0,43 ммоль) в THF (2 мл) добавляли по каплям посредством шприца в течение 20 мин. После перемешивания при кт в течение 1,5 ч добавляли раствор TBHP (0,38 мл, 1,9 ммоль, 5 M) и смесь перемешивали в течение еще 30 мин и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-10% DCM в MeOH, R_f=0,6) с получением соединения 10j в виде белого твердого вещества (308 мг). ИЭР-МС: m/z=1041,4 [M+H]⁺.

Стадия 8. Получение соединения 10k

Соединение 10j (308 мг) обрабатывали с помощью MeNH₂/EtOH (2 мл) и перемешивали при кт в течение 2,5 ч. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и очищали остаток посредством обращенно-фазной препаративной ВЭЖХ (колонка: Waters Xbridge Prep OBD 5 мкм C18 150×30, условия: A: вода (10 мМ NH₄HCO₃)-ACN: MeCN, начало: B 5%, конец B: 35%; скорость потока (мл/мин) 25) с получением соединения 10k (32 мг) в виде белого твердого вещества. ИЭР-МС: m/z=780,3 [M+H]⁺.

Стадия 9. Получение соединения 48 (натриевая соль)

Раствор анизола (43,43 мг, 0,4 ммоль) в TEA (0,31 мл, 4,02 ммоль) охлаждали до 0 °C. Раствор добавляли к соединению 10k (32 мг, 0,04 ммоль). После перемешивания смеси при 0° C в течение 2,5 ч большую часть TEA удаляли продувкой потоком газообразного азота при 0 °C. Оставшуюся реакционную смесь гасили MeNH₂, 33% раствор в EtOH (0,31 мл) при 0 °C. Реакционную смесь выпаривали при пониженном давлении и разделяли остаток между DCM/водой (30 мл x 3/15 мл) и промывали водный слой с помощью DCM (30 мл x 2). Водный слой лиофилизировали с получением остатка. Остаток очищали обращенно-фазной препаративной ВЭЖХ (Waters Xbridge Prep OBD C18 5 мкм C18 150×30, условия: A: вода (10 мМ NH₄HCO₃)-ACN: ACN, начало: B 5%, конец B: 35%; скорость потока (мл/мин) 25) с получением соединения 48 (аммонийная соль) (19,2 мг) в виде белого твердого вещества. ¹H ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,32 (с, 1H), 8,00 (д, J=3,2 Гц, 2H), 7,49 (с, 1H), 6,57-6,50 (м, 1H), 5,81-5,75 (м, 1H), 5,73-5,65 (м, 2H), 5,54 (уш. д, J=4,4 Гц, 1H), 5,39-5,27 (м, 1H), 4,80 (д, J=4,2 Гц, 1H), 4,46 (уш. с, 1H), 4,42-4,34 (м, 1H), 4,24-4,17 (м, 1H), 3,82 (уш. дд, J=3,2, 13,4 Гц, 1H), 3,61 (уш. д, J=13,2 Гц, 1H); ¹⁹F ЯМР (376 МГц, D₂O) δ -197,15-197,29 (м, 1F); ³¹P ЯМР (162 МГц, D₂O) δ-1,83 (с, 1P); ИЭР-МС: m/z=660,1 [M+H]⁺.

Превращение в натриевую соль

Смолу Dowex 50W x 8, 200-400 (5 мл, H-форма) добавляли в стакан и промывали деионизированной водой (25 мл). Впоследствии к смоле добавляли 15% H₂SO₄ в деионизированной воде, смесь осторожно перемешивали в течение 5 мин и декантировали (25 мл). Смолу переносили на колонку с 15% H₂SO₄ в деионизированной воде и промывали 15% H₂SO₄ (по меньшей мере 4 объема колонки) и впоследствии деионизированной водой до нейтральной реакции. Смолу переносили обратно в стакан, добавляли раствор 15% NaOH в деионизированной воде и смесь осторожно перемешивали в течение 5 мин и декантировали (1 ×). Смолу переносили на колонку и промывали 15% NaOH в воде (по меньшей мере 4 объема колонки) и впоследствии деионизированной водой до нейтральной реакции. Соединение 48 (аммонийная соль) (19,2 мг) растворяли в деионизированной воде (2 мл), и добавляли в верхнюю часть колонки, и элюировали деионизированной водой. Соответствующие фракции объединяли и лиофилизировали с получением соединения 48 (натриевая соль) (16 мг) в виде белого твердого вещества. ¹H ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,04 (уш. с, 1H), 7,73 (с, 1H), 7,56 (с, 1H), 6,83 (уш. с, 1H), 6,33-6,25 (м, 1H), 5,68-5,60 (м, 1H), 5,46 (уш. д, J=9,6 Гц, 1H), 5,32 (уш. д, J=4,0 Гц, 1H), 5,20 (уш. д, J=4,4 Гц, 1H), 5,06-4,90 (м, 1H), 4,38 (уш. д, J=9,2 Гц, 1H), 4,30 (уш. с, 1H), 4,17 (уш. дд, J=6,0, 10,4 Гц, 1H), 4,02 (уш. д, J=11,6 Гц, 1H), 3,67 (уш. д, J=12,8 Гц, 1H), 3,41 (уш. д, J=13,2 Гц, 1H); ³¹P ЯМР (162 МГц, D₂O) δ -2,02 (с, 1P); ¹⁹F ЯМР (376 МГц, D₂O) δ -196,74 (уш. с, 1F); ИЭР-МС: m/z=660,1 [M+H]⁺.

Пример 11

Стадия 1. Получение соединения 11a

TIPDSCl₂ (6,70 г, 21,23 ммоль) добавляли к раствору SM 11, N-изобутирилгуанозин (5,0 г, 14,15 ммоль) в пиридине (50 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 12 ч, после чего концентрировали при пониженном давлении. Остаточный продукт очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-10% MeOH в DCM) с получением соединения 11a в виде белой пены (5,5 г, выход: 65%). ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ м. д. 12,12 (с, 1H), 11,76 (с, 1H), 8,05 (с, 1H), 5,79 (с, 1H), 5,71 (д, J=4,9 Гц, 1H), 4,28-4,39 (м, 2H), 4,13 (уш. дд, J=12,9, 2,6 Гц, 1H), 4,00-4,07 (м, 1H), 3,94 (уш. дд, J=12,9, 2,7 Гц, 1H), 2,78 (спт, J=6,8 Гц, 1H), 1,11 (д, J=6,6 Гц, 6H), 0,93-1,08 (м, 28H); ИЭР-МС: m/z 596,2 [M+H]⁺.

Стадия 2. Получение соединения 11b

Активированные молекулярные сита добавляли к раствору соединения 11a (1,28 г, 1,92 ммоль) и соединения 1e (1,0 г, 1,28 ммоль) в безводном THF (60 мл); Полученную смесь перемешивали в течение 1 ч в атмосфере N₂. Далее добавляли DMAP (783 мг, 6,41 ммоль) для инициирования реакции. Реакционную смесь перемешивали в течение ночи при температуре 50 °C. Молекулярные сита удаляли фильтрованием и прополаскивали с помощью DCM, фильтрат промывали насыщенным водным NaHCO₃. Водную фазу экстрагировали с помощью DCM, а комбинированный органический слой высушивали с помощью Na₂SCN, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Соединение 11b (520 мг, выход: 36%) получали в виде желтого твердого вещества после очистки посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-100% EtOAc в петролейном эфире, а затем 0-2% MeOH в DCM). ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ м. д. 12,08 (уш. с, 1H), 11,56 (уш. с, 1H), 11,28 (уш. с, 1H), 8,70 (с, 1H), 8,61 (с, 1H), 8,54 (уш. с, 1H), 8,09 (с, 1H), 8,04 (с, 2H), 7,61-7,73 (м, 1H), 7,49-7,59 (м, 2H), 6,31-6,44 (м, 1H), 6,06 (д, J=1,5 Гц, 1H), 5,73 (уш. д, J=53,5 Гц, 1H), 5,31 (уш. д, J=5,8 Гц, 1H), 4,79-4,95 (м, 1H), 4,64 (т, J=6,9 Гц, 1H), 3,84-4,10 (м, 4H), 3,41 (м, J=13,3 Гц, 1H), 3,11-3,25 (м, 1H), 2,75 (спт, J=6,5 Гц, 1H), 0,85-1,15 (м, 43H), 0,15 (с, 3H), 0,14 (с, 3H); ИЭР-МС: m/z 1144,4 [M+H]⁺.

Стадия 3. Получение соединения 11c

Раствор соединения 11b (1,3 г, 0,98 ммоль) в безводном MeOH (55 мл, высушен на молекулярных ситах) обрабатывали с помощью HCl (0,19 мл 2M раствора в Et₂O, 13,7 ммоль) в течение 4 ч. Реакционную смесь гасили добавлением насыщенного водного NaHCO₃ с последующей экстракцией с помощью DCM. Органическую фазу высушивали безводным MgSO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-5% MeOH в DCM) с получением соединения 11c (670 мг, выход: 65%). ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ м. д. 1,01-1,08 (м, 28H), 1,12 (д, J=6,8 Гц, 3H), 1,67-1,75 (м, 1H), 2,20-2,32 (м, 1H), 2,43-2,54 (м, 1H), 2,62 (уш. д, J=14,3 Гц, 1H), 2,79 (спт, J=6,9 Гц, 1H), 2,85-2,96 (м, 1H), 3,51 (с, 3H), 3,52-3,57 (м, 2H), 3,75-3,83 (м, 1H), 4,39-4,48 (м, 1H), 4,50 (д, J=4,2 Гц, 1H), 5,02 (к, J=9,6 Гц, 1H), 5,09 (т, J=4,5 Гц, 1H), 5,25 (дд, J=9,8, 4,1 Гц, 1H), 5,52 (ддд, J=52,4, 4,4, 2,6 Гц, 1H), 5,68 (уш. д, J=5,9 Гц, 1H), 6,30 (дд, J=18,5, 2,6 Гц, 1H), 7,56 (т, J=7,7 Гц, 2H), 7,61-7,69 (м, 1H), 8,02-8,07 (м, 2H), 8,11 (уш. с, 1H), 8,14 (с, 1H), 8,57 (с, 1H), 8,71 (с, 1H), 11,22 (уш. с, 1H), 11,33 (уш. с, 1H), 12,09 (уш. с, 1H); ИЭР-МС: m/z=1060,7 [M+H]⁺.

Стадия 4. Получение соединения 11d

Раствор соединения 11c (340 мг, 0,32 ммоль) и 1H-тетразола (4,48 мл, 3-4% в MeCN, высушен на молекулярных ситах 3Å до применения) в безводной смеси THF/MeCN (1 : 1, 11 мл, высушен на молекулярных ситах 3Å до применения) обрабатывали активированным 3Å молекулярными ситами в течение 2 ч в атмосфере N₂, после чего в один прием добавляли 2-цианоэтил-N, N,N',N'-тетра(изопропил)фосфородиамидит (96 мг, 0,32 ммоль). Реакционную смесь встряхивали в течение 2 ч. Добавляли дополнительное количество 2-цианоэтил-N, N,N',N'-тетра(изопропил)фосфородиамидита (19 мг, 0,064 ммоль) и встряхивание продолжали в течение 2 ч. Добавляли раствор tBuOOH (93 мкл 5,5 M раствора в декане, 0,51 ммоль), встряхивали реакционную смесь в течение 30 мин. Молекулярные сита удаляли фильтрованием и промывали дихлорметаном. Фильтрат промывали солевым раствором и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-5% MeOH в DCM) с получением соединения 11d (100 мг, выход: 26,5%). ИЭР-МС: m/z 1177,6 [M+H]⁺.

Стадия 5. Получение соединения 11 (натриевая соль)

Вышеуказанное соединение 11d (100 мг, 0,085 ммоль) перемешивали в 33% растворе метиламина в этаноле (2 мл) при комнатной температуре до полного превращения (прибл. 3 ч), после чего реакционный раствор концентрировали при пониженном давлении и растирали в MeCN. Осадок растворяли в смеси пиридина (684 мкл мл) и Et₃N (590 мкл). Добавляли тригидрофторид триэтиламина (57 мг, 0,34 ммоль), полученную реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре до полного превращения (Примечание. Наблюдали выпадение нужного продукта в осадок). Остаток, полученный после концентрирования при пониженном давлении, растирали в MeCN, полученный осадок дополнительно очищали посредством препаративной обращенно-фазной ВЭЖХ (неподвижная фаза: XBridge C18 OBD, 5 мкм, 250×30 мм, подвижная фаза: 0,25% бикарбонат аммония (A)-MeCN (B); градиентное элюирование) с получением соединения 11. Заключительное превращение в натриевую соль проводили элюированием водным раствором колонки, заполненной катионной Na-ионообменной смолой, с получением соединения 11 (натриевая соль) в виде рыхлого белого твердого вещества (24,5 мг, выход: 41%). ¹H ЯМР (600 МГц, DMSO-d₆) δ м. д. 10,03 (уш. с, 1H), 9,49 (уш. с, 1H), 8,27 (уш. с, 1H), 7,85 (с, 1H), 7,60 (уш. с, 1H), 7,25 (уш. с, 2H), 6,41-6,79 (м, 2H), 6,36 (уш. д, J=200 Гц, 1H), 6,08-6,22 (м, 1H), 6,04 (уш. д, J=7,9 Гц, 1H), 5,72 (уш. с, 1H), 5,43 (уш. дд, J=51,7, 4,3 Гц, 1H), 5,25-5,34 (м, 1H), 4,54 (уш. т, J=4,0 Гц, 1H), 4,33-4,43 (м, 1H), 4,29-4,33 (м, 1H), 4,11 (уш. т, J=3,9 Гц, 1H), 3,85-3,94 (м, 1H), 3,56 (уш. дд, J=13,0, 2,6 Гц, 1H), 3,34 (уш. д, J=12,6 Гц, 1H); ³¹P ЯМР (162 МГц, DMSO-d₆) δ м. д. -2,34 (с, 1P); ИЭР-МС: m/z 675,1 [M+H]⁺.

Пример 12

Стадия 1. Получение соединения 12b

Соединение 12a (300 мг, 0,38 ммоль) растворяли в смеси безводного ACN (33 мл) и безводного THF (33 мл), добавляли 1H-тетразол (3,3 мл, 1,13 ммоль) и 3Å молекулярные сита. Смесь встряхивали при кт в течение 2 ч и впоследствии посредством шприца за раз добавляли 2-цианоэтил- N, N,N',N'-тетраизопропилфосфородиамидит (0,16 мл, 0,49 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при кт в течение 4 часов. Добавляли дополнительное количество 2-цианоэтил-N, N,N',N'-тетраизопропилфосфородиамидита (0,078 мл, 0,25 ммоль). Реакционную смесь встряхивали при кт в течение 1 часа и впоследствии добавляли раствор гидропероксида трет-бутила 5,5 M в декане (0,075 мл, 0,41 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при кт в течение 30 минут и впоследствии фильтровали. Молекулярные сита трижды промывали дихлорметаном. Объединенный фильтрат промывали смесью насыщенного раствора Na₂S₂O₃ и насыщенного раствора NaHCO₃, промывали солевым раствором, высушивали с помощью MgSO₄, фильтровали и выпаривали растворители фильтрата. Остаток очищали на колонке с SiO₂, используя градиент от 100% DCM до 10% MeOH в DCM. Фракции, содержащие продукт, объединяли и выпаривали растворители с получением 12b (47 мг, выход 12%), ИЭР-МС: m/z 905,4 [M+H]⁺.

Стадия 2. Получение соединения 29 (натриевая соль)

Соединение 12b (47 мг, 0,045 ммоль) в метиламине, 33% раствор в этаноле (2,5 мл, 20,2 ммоль) перемешивали при 40 °C в течение 3 ч. Реакционную смесь выпаривали досуха при пониженном давлении. Остаток растирали в 10 мл безводного ацетонитрила. Осадок собирали фильтрованием и промывали безводным ацетонитрилом. Остаток очищали обращенно-фазной препаративной ВЭЖХ (неподвижная фаза; RP XBridge Prep C18 OBD-10 мкм, 50×150 мм, подвижная фаза; 0,25% раствор NH₄HCO₃ в воде, MeOH). Растворители чистой фракции удаляли лиофилизацией. Остаток растворяли в воде и очищали на предварительно промытой (водой) колонке, заполненной ионообменной смолой. Растворители полученного раствора удаляли лиофилизацией с получением соединения 29 (натриевая соль) в виде белого твердого вещества (27 мг, выход 87%). ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ м. д. 3,18-3,28 (м, 1H), 3,29-3,40 (м, 1H), 4,02-4,10 (м, 2H), 4,17-4,25 (м, 1H), 4,29-4,48 (м, 1H), 4,36 (уш. с, 1H), 5,09 (уш. дд, J=13,6, 7,1 Гц, 1H), 5,23-5,49 (м, 2H), 5,86-6,00 (м, 2H), 6,34-6,42 (м, 1H), 6,61 (уш. с, 2H), 6,96 (уш. с, 2H), 7,92 (с, 1H), 8,11 (д, J=2,4 Гц, 1H), 8,15 (с, 1H); ИЭР-МС: m/z 678,2 [M+H]⁺.

Пример 13

Стадия 1. Получение соединения 13b

Соединение 13a (355 мг, 0,46 ммоль) растворяли в смеси безводного ACN (40 мл) и безводного THF (40 мл), добавляли 1H-тетразол (4,1 мл, 1,4 ммоль) и 3Å молекулярные сита. Смесь встряхивали при кт в течение 2 часов и впоследствии посредством шприца за раз добавляли 2-цианоэтил-N, N,N',N'-тетраизопропилфосфородиамидит (0,19 мл, 0,61 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при кт в течение 4 часов. Добавляли дополнительное количество 2-цианоэтил-N, N,N',N'-тетраизопропилфосфородиамидита (0,18 мл, 0,57 ммоль). Реакционную смесь встряхивали при кт в течение 1 часа и впоследствии добавляли раствор гидропероксида трет-бутила 5,5 M в декане (0,093 мл, 0,51 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при кт в течение 30 минут. Реакционную смесь фильтровали. Молекулярные сита трижды промывали дихлорметаном. Объединенный фильтрат промывали смесью насыщенного раствора Na₂S₂O₃ и водного насыщенного раствора NaHCO₃, промывали солевым раствором, сушили с помощью MgSO₄, фильтровали и выпаривали растворители фильтрата. Остаток очищали на колонке с SiO₂, используя градиент от 100% DCM до 10% MeOH в DCM. Фракции, содержащие продукт, объединяли и выпаривали растворители с получением 13b (34 мг, выход 5%). ИЭР-МС: m/z=888,4 [M+H]⁺.

Стадия 2. Получение соединения 15 (натриевая соль)

Соединение 13b (34 мг, 0,023 ммоль) в метиламине, 33% раствор в этаноле (2 мл, 16 ммоль) перемешивали при 40 °C в течение 3 часов. Реакционную смесь выпаривали досуха при пониженном давлении. Остаток растирали в 10 мл безводного ацетонитрила. Осадок фильтровали и промывали безводным ацетонитрилом. Очистку выполняли посредством обращенно-фазной препаративной ВЭЖХ (неподвижная фаза: RP XBridge Prep C18 OBD-10 мкм, 50×150 мм, подвижная фаза: 0,25% раствор NH₄HCO₃ в воде, MeOH). Растворители чистой фракции удаляли лиофилизацией. Остаток растворяли в воде и фильтровали на предварительно промытой (водой) колонке, заполненной натриевой катионообменной смолой. Растворители полученного раствора удаляли лиофилизацией с получением соединения 15 (натриевая соль) (23 мг, выход 100%) в виде белого твердого вещества. ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ м. д. 2,00-2,13 (м, 1H), 2,49 (м, J=3,9, 1,7, 1,7 Гц, 1H), 3,29-3,37 (м, 1H), 3,57 (дд, J=13,6, 2,6 Гц, 1H), 3,85-3,97 (м, 1H), 4,03-4,17 (м, 1H), 4,27 (уш. д, J=9,0 Гц, 1H), 4,45-4,55 (м, 1H), 4,73-4,88 (м, 1H), 5,10 (уш. д, J=22,4 Гц, 1H), 5,42 (дд, J=51,1, 4,1 Гц, 1H), 6,11 (уш. д, J=4,1 Гц, 1H), 6,32 (д, J=18,7 Гц, 1H), 6,86-7,03 (м, 2H), 7,07 (уш. с, 2H), 7,85 (уш. с, 1H), 8,15 (с, 1H), 8,35 (с, 1H), 8,40-8,87 (м, 1H); ИЭР-МС: m/z=661,3 [M+H]⁺.

Пример 14

Стадия 1. Получение соединения 14b

Соединение 14a (275 мг, 0,26 ммоль) растворяли в безводном ACN (40 мл), добавляли 1H-тетразол (2,3 мл, 1,8 ммоль) и молекулярные сита 3Å. Смесь встряхивали при кт в течение 1 часа и впоследствии посредством шприца за раз добавляли 2-цианоэтил-N, N,N',N'-тетраизопропилфосфородиамидит (0,084 мл, 0,26 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при кт в течение 4 часов. Добавляли дополнительное количество 2-цианоэтил-N, N,N',N'-тетраизопропилфосфородиамидита (0,084 мл, 0,26 ммоль). Реакционную смесь встряхивали при кт в течение 1 часа и впоследствии добавляли раствор гидропероксида трет-бутила 5,5 M в декане (0,062 мл, 0,34 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при кт в течение 18 часов. Реакционную смесь фильтровали. Молекулярные сита трижды промывали дихлорметаном. Объединенный фильтрат промывали смесью насыщенного раствора Na₂S₂O₃ и водного насыщенного раствора NaHCO₃, промывали солевым раствором, сушили с помощью MgSO₄, фильтровали и выпаривали растворители фильтрата. Остаток очищали на колонке с SiO₂, используя градиент от 100% DCM до 10% MeOH в DCM. Фракции, содержащие продукт, объединяли и выпаривали растворители с получением 14b (30 мг, выход 5%). ИЭР-МС: m/z=1159,6 [M+H]⁺.

Стадия 2. Получение соединения 14c (метиламмонийная соль)

Соединение 14b (30 мг, 0,014 ммоль) в метиламине, 33% раствор в этаноле (3 мл, 24,3 ммоль) перемешивали при 45 °C в течение 1 часа. Реакционную смесь выпаривали досуха при пониженном давлении. Остаток растирали в 10 мл безводного ацетонитрила. Осадок фильтровали и промывали безводным ACN с получением соединения 14c (метиламмонийная соль) в виде белого твердого вещества (11 мг, выход 71%). ИЭР-МС: m/z=898,5 [M+H]⁺.

Стадия 3. Получение соединения 30 (натриевая соль)

Раствор анизола (0,011 мл, 0,1 ммоль) в TFA (0,076 мл, 1 ммоль) охлаждали до 0 °C. Холодный раствор добавляли к соединению 14c (11 мг, 0,01 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при температуре 0 °C в течение 75 минут. Большую часть TFA удаляли продувкой потоком газообразного азота при 0 °C. Оставшуюся реакционную смесь гасили добавлением метиламина, 33% раствора в этаноле (0,12 мл, 1 ммоль) при 0 °C. Реакционную смесь выпаривали досуха. Остаток очищали посредством обращенно-фазной препаративной ВЭЖХ (неподвижная фаза: RP XBridge Prep C18 OBD-10 мкм, 50×250 мм, подвижная фаза: 0,25% раствор NH₄HCO₃ в воде, CH₃CN). Растворители чистой фракции удаляли лиофилизацией. Остаток растворяли в воде и фильтровали на предварительно промытой (водой) колонке, заполненной натриевой катионообменной смолой. Фракции, содержащие продукт, объединяли. Растворители полученного раствора удаляли лиофилизацией с получением соединения 30 (натриевая соль) в виде белого твердого вещества (3 мг, выход 45%). ³¹P ЯМР (162 МГц, D2O) δ м. д. -1,27 (с, 1P); ИЭР-МС: m/z 658,3 [M+H]⁺.

Пример 15

Получение соединения 15b

Диол 15a (210 мг, 0,272 ммоль) совместно выпаривали со смесью безводный толуол : ацетонитрил (1 : 1, об./об., 3×30 мл), впоследствии растворяли в безводном THF (20 мл), добавляли порошок молекулярных сит 4 Å (0,8 г) и 0,45 M тетразола в MeCN (4,8 мл, 2. 17 ммоль). Полученную гетерогенную смесь барботировали аргоном в течение 4 мин. После перемешивания этой смеси при кт в течение 10 мин к ней добавляли раствор 2-цианоэтил-N, N,N',N'-тетра(изопропил)фосфородиамидита (131 мг, 0,43 ммоль) в MeCN (3 мл) при кт в течение 30 мин. После перемешивания в течение 90 мин реакционную смесь фильтровали, впоследствии промывали THF (15 мл). Добавляли 0,5 M йода (в смеси THF : вода : Py 8 : 1 : 1, об./об./об.) до получения устойчивого цвета. После перемешивания реакционной смеси при кт в течение 30 мин реакционную смесь разбавляли с помощью EtOAc (30 мл), излишек йода гасили водным насыщенным Na₂S₂O₃ (до обесцвечивания). Фазы разделяли; органическую фазу промывали водным насыщенным NaHCO₃ (1 × 20 мл), водным насыщенным NaCl (1 × 20 мл). Водную фазу подвергали обратной экстракции с помощью EtOAc (1 × 20 мл). Объединенную органическую фазу выпаривали досуха, полученный неочищенный материал очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (0-15% MeOH в дихлорметане) с получением 15b (120 мг). ИЭР-МС: m/z=873 [M+H]⁺.

Получение соединения 38 (натриевая соль)

Соединение 15b (120 мг) подвергали воздействию 33% раствора метиламина в этаноле (15 мл) при кт. После перемешивания реакционной смеси при 40°C в течение 2 ч смесь концентрировали при пониженном давлении. Полученное неочищенное твердое вещество промывали DCM (15 мл) и осадок собирали фильтрованием и очищали посредством обращенно-фазной препаративной ВЭЖХ (колонка: Synergi 4 мкм, Hydro RP, 250 мм x 30 мм, подвижная фаза: буфер A: 50 мМ ацетата триэтиламмония в воде; буфер B: 50 мМ ацетат триэтиламмония [TEAA] в CH₃CN, градиент: 0-40% B в течение 30 мин, скорость потока 24 мл/мин) с получением соединения 38 (7,1 мг) в виде соли TEAA. ИЭР-МС: m/z: 658 [M-1]^-.

Превращение соли. Смолу Dowex 50W × 8, 200-400 (5 мл, H-форма) помещали в стакан и промывали деионизированной водой (30 мл). Впоследствии к смоле добавляли 15% H₂SO₄ в деионизированной воде, смесь осторожно перемешивали в течение 5 мин и декантировали (30 мл). Смолу переносили на колонку с 15% H₂SO₄ в деионизированной воде и промывали 15% H₂SO₄ (по меньшей мере 4 объема колонки) и впоследствии деионизированной водой до нейтральной реакции. Смолу переносили обратно в стакан, добавляли раствор 15% NaOH в деионизированной воде и смесь осторожно перемешивали в течение 5 мин и декантировали (1 ×). Смолу переносили на колонку и промывали 15% NaOH в воде (по меньшей мере 4 объема колонки) и впоследствии деионизированной водой до нейтральной реакции. Соединение 38 (соль TEAA) (24,2 мг) растворяли в минимальном количестве деионизированной воды и CH₃CN (1 : 1, об./об.), добавляли в верхнюю часть колонки и элюировали деионизированной водой. Соответствующие фракции объединяли и лиофилизировали с получением соединения 38 (натриевая соль) (6,3 мг) в виде белого твердого вещества. ¹H ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 7,98 (с, 1H), 7,82 (с, 1H), 7,49 (с, 1H), 6,37 (дд, J=5,2 Гц, 11,6 Гц, 1H), 5,75-5,90 (м, 2H), 5,49 (т, J=4,8 Гц, 0,5H), 5,37 (т, J=4,8 Гц, 0,5H), 5,01-5,15 (м, 1H), 4,51 (с, 1H), 4,26 (д, J=3,6 Гц, 1H), 4,00-4,10 (м, 2H), 3,35-3,50 (м, 2H), 2,45-2,70 (м, 2H); ³¹P ЯМР (162 МГц, D₂O) δ -1,416 м. д. (с, 1P); ¹⁹F ЯМР (379 МГц, D₂O) δ -196 м. д. (широкий пик, 1F); ИЭР-МС: m/z: 658,4 [M-1]^-.

Пример 16

Получение соединения 16b

Соединение 16a (140 мг, 0,174 ммоль) совместно выпаривали со смесью безводный толуол : ацетонитрил (1 : 1, об./об., 3 × 30 мл), впоследствии растворяли в безводном THF (15 мл). Добавляли порошок молекулярных сит 4Å (0,5 г) и 0,45 M тетразола в ацетонитриле (2,32 мл, 1,04 ммоль). Полученную гетерогенную смесь барботировали с помощью Ar в течение 4 мин. После перемешивания смеси при кт в течение 10 мин к ней добавляли раствор 2-цианоэтил-N, N,N',N'-тетра(изопропил)фосфородиамидита (84 мг, 0,28 ммоль, 1,6 экв) в CH₃CN (3,0 мл) при кт в течение 30 мин.

После перемешивания реакционной смеси в течение 90 мин смесь фильтровали, впоследствии промывали THF (15 мл). Полученное фосфитное соединение (MS: m/z 901 [M+H]⁺) использовали напрямую на следующей стадии. К смеси добавляли 0,5 M йод (в смеси THF : вода : Py 8 : 1 : 1, об./об./об.) до получения устойчивого цвета. После перемешивания смеси при кт в течение 30 мин реакционную смесь разбавляли с помощью EtOAc (30 мл); избыток йода гасили водным насыщенным Na₂S₂O₃ (до обесцвечивания). Фазы разделяли; органическую фазу промывали водным насыщенным NaHCO₃ (1 × 20 мл) и солевым раствором (1 × 20 мл). Водный слой подвергали обратной экстракции с помощью EtOAc (1 × 20 мл). Объединенные органические слои выпаривали досуха с получением остатка. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (0-15% MeOH в дихлорметане, об./об.) с получением соединения 16b (80 мг). ИЭР-МС: m/z 917 [M+H]⁺.

Получение соединения 28 (натриевая соль)

Соединение 16b (80 мг) подвергали воздействию 33% раствора метиламина в этаноле (6 мл) при кт. После перемешивания смеси при 40°C в течение 2 ч реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении с получением твердого вещества. Полученное неочищенное твердое вещество промывали DCM (15 мл) и осадок собирали фильтрованием и очищали посредством обращенно-фазной препаративной ВЭЖХ (колонка: Synergi 4 мкм, Hydro RP, 250 мм × 30 мм, подвижная фаза: буфер A: 50 мМ ацетата триэтиламмония в воде; буфер B: 50 мМ ацетата триэтиламмония в CH₃CN, градиент: 0-40% B в течение 30 мин, скорость потока 24 мл/мин) с получением соединения 28 (22,4 мг) в виде соли TEAA. Заключительное превращение в натриевую соль проводили элюированием водным раствором колонки, заполненной натриевой катионообменной смолой с получением соединения 28 (натриевая соль) в виде рыхлого белого твердого вещества после лиофилизации (21,9 мг). ¹H ЯМР (400 МГц, D₂O) δ м. д. 7,87 (с, 1H), 7,80 (с, 1H), 7,19 (с, 1H), 6,32 (т, J=5,6 Гц, 1H), 5,97 (д, J=8,0 Гц, 1H), 5,91 (с, 1H), 5,50 (с, 0,5H), 5,37 (с, 0,5H), 4,98-5,10 (м, 1H), 4,49 (с, 1H), 4,10-4,30 (м, 4H), 3,52 (д, J=11,6 Гц, 1H), 3,44 (с, 3H), 3,34 (д, J=12,4 Гц); ¹⁹F ЯМР (379 МГц, D₂O) δ широкий пик -196,61 м. д.; ³¹P ЯМР (162 МГц, D₂O) δ -1,38 м. д.; ИЭР-МС: m/z: 688,8 [M-1]^-.

Пример 17

Стадия 1. Получение соединения 17-1

ПРИМЕЧАНИЕ. Соединение 1b до применения дважды совместно выпаривали с пиридином (60 мл). К раствору соединения 1b (6 г, 15,06 ммоль) в пиридине (60 мл) добавляли DMTrCl (10,2 г, 30,12 ммоль) и DMAP (920 мг, 7,53 ммоль) при 5 °C. Реакционную смесь перемешивали при 80 °C в течение 18 ч, вследствие чего получали желтый раствор. Реакционную смесь объединяли с другой порцией и собирали. Летучие соединения удаляли в вакууме и остаток растворяли в DCM (150 мл), впоследствии медленно выливали в водный насыщенный NaHCO₃ (100 мл) при интенсивном перемешивании. Водный слой экстрагировали с помощью DCM (100 мл × 2). Органические слои объединяли, высушивали над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением желтого остатка. Остаток очищали флэш-хроматографией на силикагеле (0-100% EtOAc в петролейном эфире) с получением соединения 17-1 (12,6 г, 88% из 7,9 г соединения 1b) в виде желтого твердого вещества. ИЭР-МС: m/z=701,1 [M+H]⁺.

Стадия 2. Получение соединения 17-2

PPh₃ (6,6 г, 25,1 ммоль) в один прием добавляли к раствору соединения 17-1 (12,6 г, 17,98 ммоль) в THF (100 мл); смесь перемешивали при 40°C в течение 2 ч в атмосфере N₂ с последующим добавлением H₂O (50 мл); смесь перемешивали в течение 12 ч с получением бесцветного раствора. Растворитель концентрировали при пониженном давлении и разделяли оставшийся водный слой между DCM/H₂O (80/30 мл). Водный слой экстрагировали с помощью DCM (40 мл × 2). Впоследствии органические слои объединяли, высушивали над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением белого твердого вещества, очищенного посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (0-5% MeOH в DCM) с получением соединения 17-2 (11,6 г) в виде белого твердого вещества. ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 8,93 (уш. с, 1H), 8,71 (с, 1H), 8,31 (с, 1H), 8,01 (уш. д, J=7,3 Гц, 2H), 7,33-7,19 (м, 4H), 6,82 (дд, J=6,9, 8,9 Гц, 4H), 6,17 (дд, J=1,5, 17,6 Гц, 1H), 4,64 (ддд, J=4,4, 7,6, 19,4 Гц, 1H), 4,57-4,36 (м, 1H), 4,18-4,08 (м, 1H), 3,77 (д, J=5,3 Гц, 6H), 2,94 (дд, J=2,4, 14,2 Гц, 1H), 2,64 (дд, J=4,3, 14,3 Гц, 1H); ¹⁹F ЯМР (376 МГц, CDCl₃) δ -197,03 (уш. с, 1F); ИЭР-МС: m/z=675,1 [M+H]⁺.

Стадия 3. Получение соединения 17a

Раствор хлорсульфата 4-нитрофенила (768 мг, 3,23 ммоль) в безводном CH₂Cl₂ (5 мл) быстро добавляли к смеси соединения 17-2 (727 мг, 1,07 ммоль), 4-нитрофенола (449 мг, 3,23 ммоль), Et₃N (654 мг, 6,46 ммоль) и активированных молекулярных сит 4Å (~ 1 г)в безводном CH₂Cl₂ (15 мл) в атмосфере N₂ при -78 °C. Смесь постепенно нагревали до кт в течение 1,5 ч. Реакционную смесь объединяли с другими партиями и фильтровали через слой диатомитовой земли. Фильтрат переносили в разделительную воронку, промывали водным насыщенным NaHCO₃ (200 мл х 4). Органический слой высушивали над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением желтого остатка, очищенного посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (0-100% EtOAc в петролейном эфире) с получением соединения 17a (16 г) в виде светло-желтого твердого вещества. ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 8,93-8,81 (м, 2H), 8,41 (с, 1H), 8,11-7,92 (м, 5H), 7,67-7,58 (м, 1H), 6,86 (уш. т, J=7,7 Гц, 4H), 6,20 (уш. дд, J=5,1, 13,7 Гц, 1H), 5,34-5,23 (м, 2H), 5,16 (уш. т, J=5,1 Гц, 1H), 4,73 (уш. с, 1H), 3,90 (уш. с, 1H), 3,79 (д, J=6,4 Гц, 6H), 3,23 (уш. д, J=13,2 Гц, 1H), 2,89 (уш. дд, J=8,7, 12,6 Гц, 1H); ¹⁹F ЯМР (376 МГц, CDCl₃) δ -199,28 - -205,90 (м, 1F); ИЭР-МС: m/z=876,1 [M+H]⁺.

Стадия 4. Получение соединения 17c

Раствор соединения 17a (2053 мг, 2,34 ммоль), соединения 17b (1000 мг, 1,56 ммоль) и молекулярных сит (6 г) в THF (30 мл) перемешивали в атмосфере N₂ при кт в течение 30 мин; добавляли DMAP (954,8 мг, 7,81 ммоль) и перемешивали смесь при 45 °C (температура масла) в течение 12 ч. Реакционную смесь фильтровали и добавляли к ней DCM (50 мл) и солевой раствор (20 мл). Органический слой промывали водным насыщенным NaHCO₃ (3×50 мл), высушивали над безводным Na₂SO₄, фильтровали и выпаривали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток объединяли с силикагелем (6 г), очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (PE/EA от 10% до 100% и DCM/MeOH=0-5%) с получением 17c (1,8 г) в виде светло-желтого твердого вещества. ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ 12,10 (с, 1H), 11,46 (с, 1H), 11,23 (с, 1H), 11,05 (с, 1H), 8,65 (с, 1H), 8,47 (с, 1Н), 8,13-8,10 (м, 1Н), 8,02 (д, J=73 Гц, 2H), 7,68-7,63 (м, 1H), 7,58-7,46 (м, 4H), 7,41-7,31 (м, 6H), 7,29-7,23 (м, 3H), 7,20-7,11 (м, 7H), 6,91 (дд, J=6,4, 8,3 Гц, 4H), 6,75 (дд, J=8,9, 12,3 Гц, 4H), 6,39-6,30 (м, 1H), 6,16 (с, 1H), 5,34 (уш. д, J=5,9 Гц, 1H), 4,91 (уш. с, 1H), 4,86-4,73 (м, 2H), 4,45 (уш. д, J=5,4 Гц, 1H), 3,69 (с, 12H), 3,21-3,08 (м, 2H), 2,96-2,88 (м, 1H), 2,73 (м, 2H), 2,07 (м, 1H), 1,02 (м, 6H); ¹⁹F ЯМР (376 МГц, DMSO-d₆) δ -197,64 (с, 1F); ИЭР-МС: m/z=689,1 [M/2+H]⁺.

Стадия 5. Получение соединения 17d

К раствору 17c (1,8 г, 1,31 ммоль) в DCM (30 мл) добавляли воду (235,5 мг, 13,08 ммоль) и DCA (337,233 мг, 2,615 ммоль) с получением красного раствора. Раствор перемешивали при 25°C в течение 12 часов при кт. Впоследствии добавляли MeOH (5 мл) до получения прозрачного раствора, а затем пиридин (1034,4 мг, 13,08 ммоль). После перемешивания смеси при 25°C в течение 2 часов раствор концентрировали при пониженном давлении с получением остатка (3,0 г). Остаток объединяли с силикагелем (6,0 г) и очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (0-8% DCM в MeOH) с получением 17d (0,9 г) в виде белого твердого вещества. ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ 12,12 (с, 1H), 11,57 (с, 1H), 11,26 (с, 1H), 8,75 (с, 1H), 8,60 (с, 1H), 8,47 (т, J=5,9 Гц, 1H), 8,21 (с, 1H), 8,07-8,02 (м, 2H), 7,69-7,63 (м, 1H), 7,60-7,52 (м, 2H), 6,33 (дд, J=2,0, 19,3 Гц, 1H), 6,08 (д, J=1,7 Гц, 1H), 5,92 (д, J=6,4 Гц, 1H), 5,70-5,50 (м, 1H), 5,30 (уш. д, J=6,1 Гц, 1H), 5,02 (т, J=5,4 Гц, 1H), 4,67-4,53 (м, 1H), 4,27 (уш. д, J=3,9 Гц, 1H), 4,11 (к, J=5,1 Гц, 1H), 4,05-3,99 (м, 1H), 3,66-3,55 (м, 1H), 3,46 (тд, J=4,9, 12,2 Гц, 1H), 2,78 (тд, 1H), 2,24 (тд, 1H), 1,12 (д, 6H); ¹⁹F ЯМР (376 МГц, DMSO-d₆) δ -202,156 (с, 1F); ИЭР-МС: m/z=772,1 [M+H]⁺.

Стадия 5. Получение соединения 17e

THE перед работой перегоняли над Na/бензофеноном, а CH₃CN перед работой перегоняли над CaH₂ до применения.

К раствору 17e (100 мг, 0,130 ммоль) в тетрагидрофуране (3 мл) добавляли молекулярные сита 4Å (порошок, 1 г) и перемешивали смесь в течение 20 мин. Через 20 мин добавляли раствор 1H-тетразола (0,45 M в ацетонитриле, 2,3 мл) при 25°C с последующим добавлением раствора 2-цианоэтил-N, N,N',N'-тетра(изопропил)фосфородиамидита (78,1 мг, 0,26 ммоль, разведенного в 1 мл THE) при 25 °C. После перемешивания при кт в течение 1,5 ч добавляли гидропероксид трет-бутила (0,12 мл, 0,65 ммоль) при 25°C и перемешивали раствор в течение 1,5 ч. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении с получением желтого остатка. Остаток объединяли с силикагелем (2 г) и очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (0-15% MeOH в DCM) с получением 17e (80 мг) в виде светло-желтого твердого вещества. ИЭР-МС: m/z=887,5 [M+H]⁺.

Стадия 4. Получение соединения 33 (натриевая соль)

Соединение 17e (80 мг, 0,090 ммоль) обрабатывали с помощью MeNH₂ (50% в EtOH, 5,0 мл). После перемешивания при 25°C в течение 4 часов раствор концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали посредством обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (колонка: Agela Durashell 5 мкм C18 150×25, условия: вода (10 мМ NH₄HCO₃)-CH₃CN; начало B: 5, конец B 35, время градиентного элюирования (мин): 9, 100% B; время удержания (мин): 0, скорость потока (мл/мин): 25) с получением соединения 33 (аммонийная соль) (15 мг) в виде белого твердого вещества. Заключительное превращение в натриевую соль проводили элюированием водным раствором колонки, заполненной натриевой катионообменной смолой с получением натриевой соли соединения 33 (натриевая соль) в виде рыхлого белого твердого вещества после лиофилизации (25,5 мг). ¹H ЯМР (400 МГц, D₂O) δ м. д. 8,16 (уш. с, 1H), 7,88 (с, 1H), 7,15 (уш. с, 1H), 6,45 (уш. д, J=19,8 Гц, 1H), 6,19 (уш. д, J=7,3 Гц, 1H), 6,00 (уш. д, J=7,1 Гц, 1H), 5,43-5,29 (м, 1H), 5,28-5,18 (м, 1H), 4,63-4,51 (м, 2H), 4,31-4,22 (м, 1H), 4,16-4,04 (м, 1H), 3,78 (уш. д, J=13,2 Гц, 1H), 3,45 (уш. д, J=13,2 Гц, 1H), 2,80-2,60 (м, 2H); ¹⁹F ЯМР (376 МГц, D₂O) δ м. д. -196,95 (с, 1F); ³¹P ЯМР (162 МГц, D₂O) δ м. д. -1,422 (с, 1P); ИЭР-МС: m/z=660,2 [M+H]⁺.

Пример 18

Стадия 1. Получение соединения 18b

THF перед работой перегоняли над Na/бензофеноном, а CH₃CN перед работой перегоняли над CaH₂ до применения.

К раствору 18a (100 мг, 0,127 ммоль) в THF (2 мл) добавляли молекулярные сита 4Å (порошок, 0,5 г) и раствор 1H-тетразола (2,25 мл, 0,45 M, полученный до применения путем растворения 945 мг тетразола в 30 мл безводного CH₃CN, с последующим добавлением 1 г молекулярных сит 4A и впоследствии перемешивали в течение 1 ч в атмосфере N₂ перед применением); впоследствии несколько раз продували с помощью N₂. По каплям добавляли раствор 2-цианоэтил-N, N,N’,N’-тетра(изопропил)фосфородиамидита (61 мг, 0,203 ммоль) в THF (0,6 мл) в течение 5 мин. После перемешивания в при кт в течение 4 ч добавляли раствор TBHP (124 мкл, 0,62 ммоль, 5 M в декане) в атмосфере N₂. После перемешивания в течение 30 мин реакционную смесь объединяли с предыдущей партией, фильтровали через слой диатомитовой земли и концентрировали фильтрат при пониженном давлении с получением бесцветного масла. Масло очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (12 г, 35 мл/мин, сначала элюировали с помощью 50-80% TBF в петролейном эфире, впоследствии переходили на 0-2% MeOH в DCM) с получением 18b в виде белого твердого вещества (89 мг). ¹H ЯМР (400 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) δ 8,82 (с, 2H), 8,60 (с, 1H), 8,08 (с, 1H), 7,95 (уш. д, J=7,5 Гц, 2H), 7,81 (уш. с, 2H), 7,60-7,50 (м, 1H), 7,47-7,37 (м, 3H), 7,37-7,28 (м, 2H), 6,95 (с, 1H), 6,36 (уш. д, J=17,6 Гц, 2H), 6,23-5,80 (м, 2H), 5,67-5,39 (м, 1H), 4,87-4,56 (м, 3H), 4,53-4,37 (м, 3H), 3,84-3,67 (м, 2H), 3,48-3,32 (м, 1H), 2,87 (уш. т, J=5,9 Гц, 4H); ³¹P ЯМР (162 МГц, ХЛОРОФОРМ-d) δ -5,30 (с, 1P); ИЭР-МС: m/z=923,4 [M+H]⁺.

Стадия 2. Получение соединения 34 (натриевая соль)

Соединение 18b (98 мг, 0,096 ммоль) обрабатывали раствором метиламина в EtOH (30% в EtOH, 5 мл). После перемешивания при 40 °C в течение 1 ч летучие растворители выпаривали при пониженном давлении. Полученное белое твердое вещество растворяли в смеси вода/CH₃CN (15/4 мл), впоследствии промывали DCM (10 мл x 3). Водный слой лиофилизировали с получением соединения 34 (61 мг) в виде белого твердого вещества. ИЭР-МС: m/z=662,2 [M+H]⁺.

Твердое вещество очищали посредством обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (колонка: Xbridge 10 мкм 150×30 мм, условия: вода (10 мМ NH₄HCO₃)-CH₃CN; начало B: 8, конец B 38, время градиентного элюирования (мин): 7, 100% B, время удержания (мин): 0, скорость потока (мл/мин): 25) с получением соединения 34 (аммонийная соль) в виде белого твердого вещества. ИЭР-МС: m/z=662,3 [M+H]⁺; ¹H ЯМР (400 МГц, D2O) δ 8,50-8,11 (м, 1H), 8,08-7,86 (м, 1H), 7,81-7,56 (м, 1H), 6,95-6,58 (м, 1H), 6,41-6,01 (м, 2H), 5,76-5,05 (м, 4H), 5,01-4,76 (м, 1H), 4,45-3,93 (м, 3H), 3,81-3,23 (м, 2H); ¹⁹F ЯМР (376 МГц, D2O) δ -196,50-197,49, -197,63, -198,85; ³¹P ЯМР (162 МГц, D2O) δ -2,25 (1 с, 1P).

Получение соединения 34 (натриевая соль)

Превращение соли. Смолу Dowex 50W × 8, 200-400 (6 мл, H-форма) помещали в стакан и промывали деионизированной водой (30 мл). Впоследствии к смоле добавляли 15% H₂SO₄ в деионизированной воде, смесь осторожно перемешивали в течение 5 мин и декантировали (30 мл). Смолу переносили на колонку с 15% H₂SO₄ в деионизированной воде и промывали 15% H₂SO₄ (по меньшей мере 4 объема колонки) и впоследствии деионизированной водой до нейтральной реакции. Смолу переносили обратно в стакан, добавляли раствор 15% NaOH в деионизированной воде и смесь осторожно перемешивали в течение 5 мин и декантировали (1 ×). Смолу переносили на колонку и промывали 15% NaOH в воде (по меньшей мере 4 объема колонки) и впоследствии деионизированной водой до нейтральной реакции. Соединение 34 (соль TEAA) (44 мг) растворяли в смеси деионизированная вода : CH₃CN (4 : 1), добавляли в верхнюю часть колонки и элюировали деионизированной водой. Соответствующие фракции объединяли и лиофилизировали с получением соединения 34 (натриевая соль) (43,5 мг) в виде белого твердого вещества. ¹H ЯМР (400 МГц, D2O) δ м. д. 8,29 (с, 1H), 7,98 (с, 1H), 7,68 (с, 1H), 6,75 (уш. с, 1H), 6,31-6,17 (м, 2H), 5,73-5,58 (м, 1H), 5,57-5,39 (м, 1H), 5,31-5,12 (м, 1H), 4,96-4,82 (м, 1H), 4,68 (уш. д, J=2,4 Гц, 1H), 4,33 (уш. д, J=9,0 Гц, 1H), 4,25-4,06 (м, 2H), 3,62 (дд, J=2,4, 13,4 Гц, 1H), 3,43 (уш. д, J=13,0 Гц, 1H); ³¹P ЯМР (162 МГц, D2O) δ м. д. -2,15 (с, 1P); ¹⁹F ЯМР (376 МГц, D2O) δ м. д. -196,86 (с, 1F), -198,50 (с, 1F); ИЭР-МС: m/z=662,2 [M+H]⁺.

Пример 19

Стадия 1. Получение соединения 19b

Имидазол (31 г, 456,1 ммоль) и TBSCl (45,8 г, 304,0 ммоль) последовательно добавляли в раствор N6-бензоил-5'-O-(4,4'-диметокситритил)-2'-дезоксиаденозина (19a, [64325-78-6], 50,0 г, 76,0 ммоль) в безводном DMF (750 мл). Смесь перемешивали при комнатной температуре до полного превращения (прибл. 3 ч), после чего реакционный раствор разбавляли EtOAc и промывали водой. Органический слой высушивали над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Полученный неочищенный остаток повторно осаждали с DCM и гексаном с получением соединения 19b в виде белой пены (68 г, неочищенный). ИЭР-МС: m/z 771,0 [M+H]⁺.

Стадия 2. Получение соединения 19c

Соединение 19b (68,0 г, 88,3 ммоль) растворяли в CHCl₃ (1564 мл) и охлаждали до 0° C. Добавляли раствор pTSA моногидрата (20,1 г, 105,9 ммоль) в метаноле. Реакционную смесь перемешивали в течение 30 мин, после чего добавляли насыщенный водный NaHCO₃ для гашения. Водный слой экстрагировали с помощью DCM. Объединенные органические фазы высушивали над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Очистку проводили колоночной хроматографией на силикагеле (градиентное элюирование: 0-1% MeOH в DCM) с получением соединения 19c в виде пены грязно-белого цвета (27 г). ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ м. д.: 11,20 (с, 1H), 8,75 (с, 1H), 8,69 (с, 1H), 8,05 (д, J=7,6 Гц, 2H), 7,65 (т, J=7,6 Гц, 1H), 7,55 (т, J=7,6 Гц, 2H), 6,47 (т, J=6,9 Гц, 1H), 5,06, (т, J=5,5 Гц, 1H), 4,65 (м, 1H), 3,90 (к, J=4,1 Гц, 1H), 3,63 (м, 1H), 3,53 (м, 1H), 2,92 (м, 1H), 2,36 (кд, J=6,4, 2,8 Гц, 1H), 0,92 (с, 9H), 0,13 (с, 6H); ИЭР-МС: m/z 470,0 [M+H]⁺.

Стадия 3. Получение соединения 19d

Хлорид мезила (5,1 мл, 66,7 ммоль) добавляли по каплям к раствору соединения 19c (27,0 г, 57,5 ммоль) в безводном пиридине (135 мл) при 0° C. Реакционную смесь перемешивали при 0° C до полного превращения (прибл. 3 ч), после чего гасили метанолом и концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток растворяли в EtOAc и промывали насыщенным водным NaHCO₃. Органический слой высушивали над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением мезилированного продукта. Неочищенный продукт растворяли в безводном DMF (256 мл) с последующим добавлением азида натрия (30,5 г, 468,0 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 60° C в течение 5 ч, после чего ее охлаждали до комнатной температуры, разбавляли EtOAc и промывали насыщенным водным NaHCO₃ и водой. Органический слой высушивали над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Очистку проводили колоночной хроматографией на силикагеле (градиентное элюирование: 0-1% MeOH в DCM) с получением соединения 19d в виде пены (24 г, выход: 84%). ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ м. д.: 11,19 (с, 1H), 8,77 (с, 1H), 8,70 (с, 1H), 8,05 (д, J=6,9 Гц, 2H), 7,65 (т, J=7,2 Гц, 1H), 7,55 (т, J=7,6 Гц, 2H), 6,51 (т, J=6,9 Гц, 1H), 4,71 (м, 1H), 4,01 (м, 1H), 3,65 (к, J=6,4 Гц, 1H), 3,57 (дд, J=13,1, 4,8 Гц, 1H), 3,06 (м, 1H), 2,41 (кд, J=6,7, 4,0 Гц, 1H), 0,92 (с, 9H), 0,14 (с, 6H); ИЭР-МС: m/z=495,0 [M+H]⁺.

Стадия 4. Получение соединения 19e

Раствор соединения 19d (10,0 г, 20,2 ммоль) в MeOH (100 мл) гидрогенизировали при атмосферном давлении при комнатной температуре на Pd/C (20% на угле, 1 г). Реакционную смесь фильтровали через диатомитовую землю, промывали диатомитовую землю с помощью MeOH. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением соединения-амина в виде белой пены (9,4 г, неочищенный продукт). Неочищенный продукт (9,4 г) растворяли в DCM (395 мл) с последующим добавлением 4-нитрофенола (8,38 г, 60,2 ммоль), Et₃N (16,9 мл, 120,4 ммоль) и активированных молекулярных сит. Полученную смесь охлаждали до -78 °C в атмосфере N₂, после чего добавляли по каплям раствор хлорсульфата 4-нитрофенила (14,28 г, 60,2 ммоль) в DCM (45 мл) и продолжали перемешивание до полного превращения (прибл. 2 ч). Реакционную смесь нагревали до комнатной температуры и промывали насыщенным водным NaHCO₃ и водой. Органическую фазу сушили безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-50% EtOAc в гексане) с получением соединения 19e в виде пены (6,4 г, выход: 47%). ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ м. д.: 11,20 (с, 1H), 9,09 (т, J=5,9 Гц, 1H), 8,70 (д, J=2,1 Гц, 2H), 8,29 (тд, J=6,2, 3,9 Гц, 2H), 8,05 (д, J=7,6 Гц, 2H), 7,65 (т, J=7,2 Гц, 1H), 7,54 (м, 4H), 6,50 (т, J=6,9 Гц, 1H), 4,66 (м, 1H), 4,01 (м, 1H), 3,51 (дт, J=14,2, 5,7 Гц, 1H), 3,39 (м, 1H), 3,05 (м, 1H), 2,38 (кд, J=6,7, 2,8 Гц, 1H), 0,91 (c, 9H), 0,13 (c, 6H); ИЭР-МС: m/z 670,0 [M+H]⁺.

Стадия 5. Получение соединения 19f

Каждое из 5'-O-(4,4'-диметокситритил)-N2-изобутирил-3'-O-метил-D-гуанозина ([103285-33-2], 2,5 г, 3,73 ммоль), соединения 19e (2,9 г, 4,48 ммоль) и DMAP (2,27 г, 18,6 ммоль) по отдельности растворяли в безводном DCM (3×10,0 мл) и высушивали на активированных молекулярных ситах 3Å в течение по меньшей мере 2 ч в инертной атмосфере. Далее растворы 5'-O-(4,4'-диметокситритил)-N2-изобутирил-3'-O-метил-D-гуанозина и соединения 22c последовательно переносили в реакционную колбу, содержащую раствор DMAP. Реакционную смесь перемешивали в течение 22 ч. Молекулярные сита удаляли фильтрованием и тщательно промывали дихлорметаном. Фильтрат промывали насыщенным водным NaHCO₃, солевым раствором и насыщенным водным NH₄Cl. Объединенные органические фазы высушивали над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-1% MeOH в DCM) с получением соединения 19f (2,04 г, выход: 45,5%). ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ м. д.: 12,10 (c, 1H), 11,54 (c, 1H), 11,20 (c, 1H), 8,70 (с, 1H), 8,65 (с, 1H), 8,18 (с, 1H), 8,05 (д, J=6,9 Гц, 2H), 7,65 (т, J=7,2 Гц, 1H), 7,56 (т, J=7,6 Гц, 2H), 7,29 (д, J=7,6 Гц, 2H), 7,24 (т, J=7,6 Гц, 2H), 7,18 (т, J=9,6 Гц, 5H), 6,81 (дд, J=8,3, 6,2 Гц, 4H), 6,46 (т, J=6,9 Гц, 1H), 6,16 (д, J=4,1 Гц, 1H), 5,55 (т, J=4,8 Гц, 1H), 4,63 (м, 1H), 4,38 (т, J=5,2 Гц, 1H), 4,12 (q, J=4,6 Гц, 1H), 3,86 (дд, J=9,0, 6,2 Гц, 1H), 3,71 (с, 6H), 3,37 (с, 3H), 3,23 (м, 5H), 2,97 (м, 1H), 2,74 (м, 1H), 1,09 (м, 6H), 0,88 (с, 9H), 0,11 (с, 6H); ИЭР-МС: m/z=1201,0 [M+H]⁺.

Стадия 6. Получение соединения 19g

Et₃N (11,61 мл, 83,3 ммоль) и Et₃N·3HF (1,35 мл, 8,33 ммоль) добавляли к раствору соединения 19f (2,5 г, 2,08 ммоль) в пиридине (16,5 мл). Реакционную смесь перемешивали при 45°C до полного превращения (прибл. 5 ч) и впоследствии охлаждали до комнатной температуры. Добавляли изопропокситриметилсилан (5,9 мл, 33,28 ммоль) и продолжали перемешивание в течение ночи. Посредством концентрирования при пониженном давлении получали неочищенное соединение с удаленными 5’-защитными группами, которое повторно растворяли в DCM (59,0 мл). Добавляли воду (0,17 мл, 9,65 ммоль) и дихлоруксусную кислоту (6,3 мл 10% в DCM, 7,72 ммоль), полученную реакционную смесь перемешивали в течение 1 ч (полное превращение), после чего ее гасили добавлением пиридина (0,77 мл, 9,65 ммоль) и нескольких капель метанола. Остаток, полученный после концентрирования при пониженном давлении, очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-9% MeOH в DCM) с получением соединения 19g (1,4 г, выход: 86%). ¹H ЯМР (500 МГц DMSO-d₆) δ м. д.: 12,08 (c, 1H), 11,62 (c, 1H), 11,19 (c, 1H), 8,70 (c, 1H), 8,60 (c, 1H), 8,25 (с, 1H), 8,05 (д, J=7,6 Гц, 2H), 7,65 (т, J=7,2 Гц, 1H), 7,56 (т, J=7,6 Гц, 2H), 6,42 (т, J=6,9 Гц, 1H), 6,08 (д, J=6,2 Гц, 1H), 5,45 (д, J=4,1 Гц, 1H), 5,38 (дд, J=6,5, 5,2 Гц, 1H), 5,26 (т, J=5,2 Гц, 1H), 4,36 (д, J=2,1 Гц, 1H), 4,18 (к, J=2,5 Гц, 1H), 4,10 (м, 1H), 3,79 (тд, J=5,9, 3,2 Гц, 1H), 3,61 (дтд, J=37,3, 8,3, 3,8 Гц, 2H), 3,41 (с, 3H), 3,09 (д, J=15,1 Гц, 3H), 2,83 (м, 1H), 2,74 (тд, J=13,4, 6,7 Гц, 1H), 2,33 (кд, J=6,7, 3,6 Гц, 1H), 1H (к, J=3,4 Гц, 6H); ИЭР-МС: m/z 784,0 [M+H]⁺.

Стадия 7. Получение соединения 19h

Раствор соединения 19g (500 мг, 0,638 ммоль) и 1H-тетразола (5,59 мл 3-4% в MeCN) в безводном THF (26 мл) обрабатывали молекулярными ситами 3 Å в течение 2 ч в инертной атмосфере. 2-цианоэтил-N, N,N’N’,-тетра(изопропил)фосфородиамидит (250 мг, 0,829 ммоль) добавляли в один прием и реакционную смесь встряхивали в течение ночи. Добавляли t-BuOOH (174 мкл 5,5 M раствора в декане, 0,96 ммоль) и продолжали встряхивание в течение 1 ч. Молекулярные сита удаляли фильтрованием и обильно промывали с помощью DCM. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного соединения 19h, которое использовали напрямую на следующей стадии. ИЭР-МС: m/z=899,5 [M+H]⁺.

Стадия 8. Получение соединения 12 (натриевая соль)

Неочищенное соединение 19h перемешивали в 33% растворе метиламина в этаноле (10 мл) при комнатной температуре в течение 2 ч. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт растирали в MeCN с последующей очисткой посредством препаративной обращенно-фазной ВЭЖХ (неподвижная фаза: XBridge C18 OBD, 5 мкм, 250×30 мм; подвижная фаза: водный 0,25% бикарбонат аммония (A)-MeOH (B); градиентное элюирование) с получением соединения 12 (аммонийная соль). Превращение в натриевую соль осуществляли элюированием водным раствором колонки, заполненной натриевой катионообменной смолой с получением соединения 12 (натриевая соль) в виде рыхлого белого твердого вещества после лиофилизации (43 мг, выход: 10%). ¹H ЯМР (600 МГц, DMSO-d₆, 60 °C) δ м. д. 10,36 (уш. с, 1H), 8,54 (уш. с, 1H), 8,33 (с, 1H), 7,99 (с, 1H), 7,98 (с, 1H), 7,11 (с, 2H), 6,76 (уш. с, 2H), 6,35 (т, J=6,9 Гц, 1H), 5,98 (уш. с, 2H), 5,14 (уш. с, 1H), 4,28 (уш. с, 2H), 4,19 (с, 1H), 4,09 (с, 1H), 3,86-3,95 (м, 1H), 3,48 (с, 3H), 3,34-3,46 (м, 1H), 3,09-3,26 (м, 1H), 2,87-2,99 (м, 1H), 2,56-2,65 (м, 1H); ³¹P ЯМР (162 МГц, DMSO-d₆) δ м. д. -1,88 (с, 1P); ИЭР-МС: m/z 670,2 [M-H]^-.

Пример 20

Стадия 1. Получение соединения 20b

Раствор N-бензоил-3’-дезокси-3'-фтор-аденозина 20a [CAS 129054-67-7] (7,4 г, 18,5 ммоль) в безводном пиридине (138 мл), к которому добавляли DMAP (1,13 г, 9,2 ммоль) и DMTrCl (10 г, 29,7 ммоль) (частями), перемешивали при комнатной температуре до полного превращения (5 ч). Реакционную смесь гасили метанолом (15 мл) и концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток растворяли в этилацетате и промывали водой. Органический слой высушивали над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Очистку проводили колоночной хроматографией на силикагеле (градиентное элюирование: 0-2% MeOH в DCM) с получением соединения 20b в виде белой пены (9,8 г, выход: 78%). ¹H ЯМР (500 МГц DMSO-d₆) δ м. д.: 3,31 (к, J=5,0 Гц, 1H), 3,36 (т, J=5,2 Гц, 1H), 3,73 (с, 6H), 4,41 (дт, J=26,4, 4,6 Гц, 1H), 5,19 (м, 1H), 5,28 (дд, J=11,7, 7,6 Гц, 1H), 6,09 (дд, J=6,9, 4,8 Гц, 2H), 6,87 (м, 4H), 7,24 (м, 7H), 7,39 (д, J=6,9 Гц, 2H), 7,56 (т, J=7,6 Гц, 2H), 7,65 (м, 1H), 8,06 (д, J=6,9 Гц, 2H), 8,62 (д, J=3,4 Гц, 2H), 11,27 (с, 1H); ИЭР-МС: m/z 676,1 [M+H]⁺.

Стадия 2. Получение соединения 20c

В реакционную колбу помещали DMAP (2,62 г, 21,4 ммоль), безводный DCM (50 мл) и активированные молекулярные сита 3Å. Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение по меньшей мере 2 ч в инертной атмосфере. Одновременно раствор соединения 20b (2,9 г, 4,29 ммоль) и раствор соединения 19e (3,4 г, 5,15 ммоль) (каждый в безводном DCM (2×50 мл)), сушили на активированных молекулярных ситах 3Å (прибл. 2 ч). Оба раствора (соединения 20b и соединения 19c соответственно) последовательно переносили в реакционную колбу. Полученную реакционную смесь перемешивали в течение 24 ч. Молекулярные сита удаляли фильтрованием и тщательно промывали дихлорметаном. Фильтрат промывали насыщенным водным NaHCO₃, солевым раствором и насыщенным водным NH₄Cl, высушивали над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-1% MeOH в DCM) с получением соединения 20c (4,2 г, выход: 81%). ¹H ЯМР (500 МГц DMSO -d₆) δ м. д.: 11,23 (д, J=36,5 Гц, 2H), 8,70 (с, 1H), 8,63 (д, J=20,0 Гц, 2H), 8,53 (с, 1H), 8,04 (к, J=3,4 Гц, 4H), 7,65 (м, 2H), 7,55 (тд, J=7,6, 4,8 Гц, 4H), 7,35 (д, J=7,6 Гц, 2H), 7,22 (м, 7H), 6,83 (м, 4H), 6,43 (к, J=7,1 Гц, 2H), 6,05 (тд, J=11,0, 6,2 Гц, 1H), 5,64 (д, J=54,4 Гц, 1H), 4,53 (м, 2H), 3,88 (т, J=3,1 Гц, 1H), 3,70 (с, 6H), 3,37 (м, 2H), 3,20 (м, 2H), 2,97 (м, 1H), 0,88 (с, 9H), 0,09 (д, J=2,1 Гц, 6H); ИЭР-МС: m/z=1206 [M+H]⁺.

Стадия 3. Получение соединения 20d

Et₃N (19,4 мл, 139,4 ммоль) и Et₃N·3HF (2,2 мл, 13,9 ммоль) добавляли к раствору соединения 20d (4,2 г, 3,4 ммоль) в пиридине (70 мл). Реакционную смесь перемешивали при 45°C до полного превращения (прибл. 5 ч) и впоследствии охлаждали до комнатной температуры. Добавляли изопропокситриметилсилан (9,9 мл, 55,7 ммоль) и продолжали перемешивание в течение ночи. В заключение реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-4% MeOH в DCM) с получением соединения 20d в виде пены (3,0 г, выход: 78%). ¹H ЯМР (500 МГц DMSO-d₆) δ м. д.: 11,21 (с, 1H), 8,70 (с, 1H), 8,62 (д, J=9,6 Гц, 2H), 8,53 (с, 1H), 8,04 (м, 4H), 7,65 (м, 2H), 7,55 (тд, J=7,7, 3,7 Гц, 4H), 7,36 (д, J=7,6 Гц, 2H), 7,21 (м, 7H), 6,83 (м, 4H), 6,43 (дд, J=16,2, 6,5 Гц, 2H), 6,04 (тд, J=11,0, 6,2 Гц, 1H), 5,66 (дт, J=53,5, 3,4 Гц, 1H), 5,46 (с, 1H), 4,49 (дд, J=24,1, 2,8 Гц, 1H), 4,39 (с, 1H), 3,88 (м, 1H), 3,71 (с, 6H), 3,40 (к, J=5,3 Гц, 2H), 3,20 (м, 2H), 2,85 (к, J=6,9 Гц, 1H); ИЭР-МС: m/z 1090 [M+H]⁺.

Стадия 4. Получение соединения 20e

Соединение 20d (3,0 г, 2,7 ммоль) растворяли в DCM (84 мл), воде (250 мкл, 13,7 ммоль) и добавляли дихлоруксусную кислоту (9,1 мл 10% в DCM, 10,9 ммоль). Полученную реакционную смесь перемешивали в течение 1 ч (до полного превращения), после чего ее гасили добавлением пиридина (1,1 мл, 13,7 ммоль) и нескольких капель метанола. Остаток, полученный после концентрирования при пониженном давлении, очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-6% MeOH в DCM) с получением соединения 20e (1,9 г, выход: 87%). ¹H ЯМР (500 МГц DMSO-d₆) δ м. д.: 11,28 (с, 1H), 11,21 (с, 1H), 8,72 (д, J=4,1 Гц, 3H), 8,62 (с, 1H), 8,04 (д, J=8,3 Гц, 4H), 7,64 (м, 2H), 7,55 (к, J=6,9 Гц, 4H), 6,40 (м, 2H), 5,53 (т, J=5,9 Гц, 1H), 5,42 (т, J=5,2 Гц, 1H), 4,45 (дт, J=26,9, 3,4 Гц, 1H), 4,35 (с, 1H), 3,79 (т, J=7,2 Гц, 1H), 3,68 (д, J=20,0 Гц, 2H), 3,10 (м, 3H), 2,84 (м, 1H), 2,32 (к, J=3,4 Гц, 1H); ИЭР-МС: m/z 790 [M+H]⁺.

Стадия 5. Получение соединения 20f

Раствор соединения 20e (500 мг, 0,63 ммоль) и 1 H-тетразола (5,54 мл 3-4% в MeCN) в безводном THF (31 мл) обрабатывали активированными молекулярными ситами 3Å в течение 2 ч в инертной атмосфере, после чего в один прием добавляли 2-цианоэтил-N, N,N',N',-тетра(изопропил)фосфородиамидит (210 мг, 0,70 ммоль). Реакционную смесь затем встряхивали в течение 2 ч. Добавляли дополнительное количество 2-цианоэтил-N, N,N',N',-тетра(изопропил)фосфородиамидита (95 мг, 0,32 ммоль) и продолжали встряхивание в течение ночи. Добавляли tBuOOH (196 мкл 5,5 M раствора в декане, 1,08 ммоль) и встряхивали реакционную смесь в течение еще одного часа. Молекулярные сита удаляли фильтрованием и тщательно промывали с помощью DCM. Фильтрат промывали солевым раствором и насыщенным водным NaHCO₃, высушивали с помощью MgSO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-10% MeOH в DCM) с получением соединения 20f (56 мг, выход: 10%). ИЭР-МС: m/z=905,5 [M+H]⁺.

Стадия 6. Получение соединения 36 (натриевая соль)

Соединение 20f (56 мг, 0,062 ммоль) перемешивали в 33% растворе метиламина в этаноле (10 мл) при комнатной температуре в течение 2 ч. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт растирали в MeCN с последующей очисткой посредством препаративной обращенно-фазной ВЭЖХ (неподвижная фаза: XBridge C18 OBD, 5 мкм, 250×30 мм; подвижная фаза: водный 0,25% бикарбонат аммония (A) - MeCN (B); градиентное элюирование) с получением соединения 36 (аммонийная соль). Превращение в натриевую соль проводили элюированием водным раствором колонки, заполненной Na-катионообменной смолой с получением соединения 36 (натриевая соль) в виде рыхлого белого твердого вещества после лиофилизации (17,5 мг, выход: 42%). ¹H ЯМР (600 МГц, DMSO-d₆, 81 °C) δ м. д. 8,71 (уш. с, 1H), 8,34 (уш. с, 1H), 8,14 (с, 1H), 8,07 (с, 1H), 6,94 (уш. с, 2H), 6,90 (уш. с, 2H), 6,32 (т, J=7, 1 Гц, 1H), 6,22 (уш. с, 1H), 5,68 (уш. д, J=26,8 Гц, 1H), 5,42 (уш. д, J=51,9 Гц, 1H), 5,10 (уш. с, 1H), 4,46 (уш. д, J=25,5 Гц, 1H), 4,10-4,19 (м, 1H), 4,04 (уш. с, 1H), 3,79 (уш. с, 1H), 3,18 (м, J=11,4 Гц, 1H), 2,92 (с, 1H), 2,53 (уш. с, 1H); ³¹P ЯМР (162 МГц, DMSO-d₆) δ м. д. -1,74 (с, 1P); ИЭР-МС: m/z 644,4 [M+H]⁺.

Пример 21

Стадия 1. Получение соединения 21b

Раствор 3'-дезокси-3'-фторинозина 21a [CAS 117517-20-1] (2,2 г, 8,14 ммоль) в безводном пиридине (33 мл), к которому добавляли DMAP (0,49 г, 4,0 ммоль) и DMTrCl (4,4 г, 13 ммоль) (порциями), перемешивали при комнатной температуре до полного превращения (прибл. 2,5 ч). Реакционную смесь гасили метанолом (10 мл) и концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток растворяли в этилацетате и промывали водой. Органический слой высушивали над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Очистку проводили колоночной хроматографией на силикагеле (градиентное элюирование: 0-2% MeOH в DCM) с получением соединения 21b в виде пены грязно-белого цвета (3,3 г, выход: 71%). ¹H ЯМР (500 МГц DMSO-d₆) δ м. д.: 8,22 (д, J=2,1 Гц, 1H), 7,93 (д, J=1,4 Гц, 1H), 7,36 (д, J=8,3 Гц, 2H), 7,28 (т, J=7,6 Гц, 2H), 7,23 (м, 5H), 6,86 (дд, J=8,3, 6,2 Гц, 4H), 5,92 (д, J=7,6 Гц, 1H), 5,14 (дд, J=54,1, 4,5 Гц, 1H), 5,02 (дк, J=23,2, 3,9 Гц, 1H), 4,35 (дт, J=25,9, 4,3 Гц, 1H), 3,74 (с, 6H), 3,29 (дк, J=37,5, 5,2 Гц, 2H); ИЭР-МС: m/z 572,0 [M+H]⁺.

Стадия 2. Получение соединения 21c

Каждое из соединения 21b (0,66 г, 1,15 ммоль), сульфамата 17a (1,21 г, 1,38 ммоль) и DMAP (0,704 г, 5,76 ммоль) по отдельности растворяли в безводном DCM (3×20,0 мл) и высушивали на активированных молекулярных ситах 3Å в течение по меньшей мере 2 ч в инертной атмосфере. Далее растворы соединения 21b и сульфамата 17a последовательно переносили в реакционную колбу, содержащую раствор DMAP. Полученную реакционную смесь перемешивали в течение 24 ч. Молекулярные сита удаляли фильтрованием и тщательно промывали дихлорметаном. Фильтрат последовательно промывали насыщенным водным NaHCO₃ и насыщенным водным NH₄Cl, высушивали над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-2% MeOH в DCM) с получением соединения 21c в виде пены грязно-белого цвета (0,475 г, выход: 31%). ¹H ЯМР (500 МГц DMSO-d₆) δ м. д.: 12,47 (c, 1H), 11,23 (c, 1H), 8,66 (c, 1H), 8,56 (c, 1H), 8,48 (с, 1H), 8,19 (с, 1H), 8,03 (д, J=7,6 Гц, 2H), 7,84 (с, 1H), 7,65 (т, J=7,2 Гц, 1H), 7,55 (т, J=7,6 Гц, 2H), 7,48 (д, J=7,6 Гц, 2H), 7,36 (к, J=4,8 Гц, 4H), 7,32 (м, 4H), 7,23 (т, J=7,6 Гц, 4H), 7,19 (т, J=7,9 Гц, 5H), 6,90 (дд, J=9,0, 6,9 Гц, 4H), 6,81 (дд, J=9,0, 6,2 Гц, 4H), 6,34 (м, 1H), 6,23 (д, J=6,2 Гц, 1H), 5,78 (м, 2H), 5,50 (д, J=53,7 Гц, 1H), 4,72 (м, 2H), 4,43 (д, J=24,1 Гц, 1H), 4,01 (т, J=7,9 Гц, 1H), 3,74 (с, 1H), 3,70 (т, J=2,4 Гц, 12H), 3,25 (дд, J=10,7, 3,8 Гц, 1H), 2,99 (д, J=13,1 Гц, 1H), 2,70 (дд, J=14,5, 9,0 Гц, 1H); ИЭР-МС: m/z 1310,0 [M+H]⁺.

Стадия 3. Получение соединения 21d

Раствор соединения 21c (0,453 г, 0,34 ммоль) в DCM (12,6 мл), к которому добавляли DCA (1,14 мл, 10% в DCM, 1,38 ммоль) и воду (31 мкл, 1,72 ммоль), перемешивали при комнатной температуре до полного удаления защитных групп (прибл. 2 ч). Реакционную смесь гасили добавлением пиридина (0,14 мл, 1,72 ммоль) и нескольких капель метанола. Полученную суспензию перемешивали в течение 20 мин, фильтровали и высушивали с получением соединения 21d (0,21 г, выход: 86%). ¹H ЯМР (500 МГц DMSO-d₆) δ м. д.: 12,5 (д, J=3,4 Гц, 1H), 11,25 (с, 1H), 8,75 (с, 1H), 8,69 (т, J=6,0 Гц, 1H), 8,61 (с, 1H), 8,35 (с, 1H), 8,09 (д, J=3,4 Гц, 1H), 8,05 (д, 7,6 Гц, 2H), 7,66 (т, J=7,2 Гц, 1H), 7,56 (т, J=7,6 Гц, 2H), 6,32 (дд, J=20,0, 2,1 Гц, 1H), 6,21 (д, J=7,6 Гц, 1H), 5,85 (д, J=6,2 Гц, 1H), 5,60 (м, 1H), 5,49 (м, 3H), 5,34 (д, J=4,8 Гц, 1H), 4,57 (м, 1H), 4,40 (дт, J=26,9, 3,4 Гц, 1H), 3,92 (к, J=6,0 Гц, 1H), 3,65 (т, J=4,1 Гц, 2H), 3,17 (т, J=6,2 Гц, 2H); ИЭР-МС: m/z 706,0 [M+H]⁺.

Стадия 4. Получение соединения 21e

Раствор соединения 21d (260 мг, 0,37 ммоль) и 1H-тетразола (2,15 мл 3-4% в MeCN, высушены на активированных молекулярных ситах 3Å) в DMF/THF (1 : 2, 30 мл, высушены на активированных молекулярных ситах 3Å) обрабатывали молекулярными ситами 3Å в течение 2 ч в инертной атмосфере, после чего в один прием добавляли 2-цианоэтил-N, N,N',N'-тетра(изопропил) фосфородиамидит (129 мкл, 0,41 ммоль). Полученную реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Добавляли дополнительное количество 2-цианоэтил-N, N,N',N'-тетра(изопропил)фосфородиамидита (23 мкл, 0,074 ммоль) и продолжали встряхивание в течение еще одного дня для достижения полного превращения. Добавляли tBuOOH (134 мкл 5,5 M раствора в декане, 0,74 ммоль) и встряхивали реакционную смесь в течение еще одного часа. Молекулярные сита удаляли фильтрованием и промывали дихлорметаном. Фильтрат тщательно промывали водой, высушивали с помощью MgSO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-5% MeOH в DCM) с получением соединения 21e (20 мг, выход: 7%). ИЭР-МС: m/z 820,4 [M+H]⁺.

Стадия 5. Получение соединения 29 (натриевая соль)

Соединение 21e (20 мг, 0,024 ммоль) перемешивали в 33% растворе метиламина в этаноле (10 мл) при комнатной температуре до полного превращения (~ 1 ч). Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Полученный неочищенный продукт растирали в MeCN с последующей очисткой посредством препаративной обращенно-фазной ВЭЖХ (неподвижная фаза: XBridge C18 OBD, 5 мкм, 250×30 мм; подвижная фаза: водный 0,25% бикарбонат аммония (A) - MeCN (B); градиентное элюирование) с получением соединения 29 (аммонийная соль). Заключительное превращение в натриевую соль проводили элюированием водным раствором колонки, заполненной натриевой катионообменной смолой с получением соединения 29 (натриевая соль) в виде рыхлого белого твердого вещества после лиофилизации (13,5 мг, выход: 80%). ³¹P ЯМР (162 МГц, DMSO-d₆) δ м. д. -2,06 (с, 1P); ИЭР-МС: m/z 663,3 [M+H]⁺.

Пример 22

Стадия 1. Получение соединения 22b

Раствор рибозида 6-хлорпурина 22a (10,0 г, 34,88 ммоль, CAS № 5399-87-1) в THF (200 мл) гидрогенизировали при атмосферном давлении при комнатной температуре на Pd/C (10% на угле, 8 г) в присутствии K₂CO₃ (9,64 г, 69,77 ммоль). Реакционную смесь фильтровали через диатомитовую землю, диатомитовую землю последовательно промывали с помощью THF и 5 : 1 THF/MeOH. Объединенные фильтраты концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного соединения 22b (6,3 г), которое использовали в таком виде на следующей стадии. ИЭР-МС: m/z 253,1 [M+H]⁺.

Стадия 2. Получение соединения 22c

Раствор неочищенного соединения 22b (6,1 г) и DMTrCl (11,93 г, 35,20 ммоль) в безводном пиридине (300 мл) перемешивали при комнатной температуре до полного превращения (прибл. 2 ч). Реакционную смесь разбавляли с помощью DCM и промывали солевым раствором. Водный слой повторно экстрагировали с помощью DCM. Объединенные органические слои высушивали над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Очистку проводили колоночной хроматографией на силикагеле (градиентное элюирование: 1-5% MeOH в DCM) с получением соединения 22c в виде белого твердого вещества (11,7 г). ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ м. д. 9,21 (с, 1H), 8,89 (с, 1H), 8,74 (с, 1H), 7,33 (д, J=6,8 Гц, 2H), 7,15-7,26 (м, 7H), 6,80 (т, J=9,3 Гц, 4H), 6,07 (д, J=4,5 Гц, 1H), 5,62 (д, J=5,6 Гц, 1H), 5,29 (д, J=5,8 Гц, 1H), 4,78 (к, J=5,1 Гц, 1H), 4,34 (к, J=5,3 Гц, 1H), 4,11 (к, J=4,8 Гц, 1H), 3,72 (с, 3H), 3,71 (с, 3H), 3,21-3,25 (м, 2H); ИЭР-МС: m/z 555,1 [M+H]⁺.

Стадия 3. Получение соединений 22d и 22e

Раствор соединения 22c (6,7 г, 12,1 ммоль) в DMF (70 мл), к которому добавляли имидазол (2,47 г, 14,5 ммоль) и TBSCl (2,19 г, 2,39 ммоль), перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь разбавляли с помощью EtOAc и промывали солевым раствором. Органическую фазу сушили безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали под вакуумом. Неочищенный продукт очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 10-33% EtOAc в петролейном эфире) с получением соединения 22d (3,3 г, выход: 40%) в виде первого элюируемого изомера и соединения 22e (3,5 г, выход: 43%) в виде второго элюируемого изомера. Соединение 22d. ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ м. д. 9,22 (с, 1H), 8,87 (с, 1H), 8,74 (с, 1H), 7,38 (д, J=7,5 Гц, 2H), 7,16-7,29 (м, 7H), 6,83 (дд, J=8,5, 4,9 Гц, 4H), 6,09 (д, J=4,8 Гц, 1H), 5,23 (д, J=6,0 Гц, 1H), 4,89 (т, J=4,9 Гц, 1H), 4,27 (к, J=5,2 Гц, 1H), 4,14 (к, J=4,5 Гц, 1H), 3,72 (с, 6H), 3,29 (уш. д, J=4,6 Гц, 2H), 0,72 (с, 10H), -0,05 (с, 3H), -0,17 (с, 3H); ИЭР-МС: m/z 669,2, 1 [M+H]⁺. Соединение 22e. ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ м. д. 9,20 (с, 1H), 8,87 (с, 1H), 8,80 (с, 1H), 7,29-7,40 (м, 2H), 7,12-7,27 (м, 7H), 6,82 (м, J=8,8, 6,8 Гц, 4H), 6,04 (д, J=5,0 Гц, 1H), 5,48 (д, J=6,0 Гц, 1H), 4,92 (к, J=5,2 Гц, 1H), 4,52 (т, J=4,6 Гц, 1H), 4,05-4,13 (м, 1H), 3,72 (с, 6H), 3,36 (дд, J=10,5, 4,5 Гц, 1H), 3,15 (дд, J=10,5, 5,0 Гц, 1H), 0,84 (с, 9H), 0,09 (с, 3H), 0,05 (с, 3H); ИЭР-МС: m/z 669,2 [M+H]⁺.

Стадия 4. Получение соединения 22f

Активированные молекулярные сита 3Å добавляли в реакционную колбу с помещенным в нее соединением 22e (1,31 г, 1,96 ммоль) и сульфаматом 17a (1,88 г, 2,14 ммоль) в безводном THF (85 мл). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение по меньшей мере 2 ч в инертной атмосфере. Одновременно раствор DMAP (1,2 г, 9,82 ммоль) в безводном THF (15 мл) сушили на активированных молекулярных ситах 3Å, после чего его переносили в реакционную колбу. Полученную реакционную смесь перемешивали при температуре 50°C в течение ночи. Молекулярные сита удаляли фильтрованием и тщательно промывали дихлорметаном. Фильтрат промывали водой и насыщенным водным NaHCO₃, высушивали над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-2% MeOH в DCM) с получением соединения 22f.

Стадия 5. Получение соединения 22g

Раствор соединения 22f (2,4 г, 1,71 ммоль) в DCM (80 мл), к которому добавляли DCA (0,563 мл, 6,83 ммоль) и воду (154 мкл, 8,54 ммоль), перемешивали при комнатной температуре до полного удаления защитных групп (прибл. 1 ч). Реакционную смесь гасили добавлением пиридина (688 мкл, 8,54 ммоль) в метаноле (1 мл) и промывали водой. Органический слой сушили безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-10% MeOH в DCM) с получением соединения 22g. ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ м. д. 11,26 (с, 1H), 9,17 (с, 1H), 8,89 (с, 1H), 8,83 (с, 1H), 8,71 (с, 1H), 8,57 (с, 1H), 8,44 (т, J=5,8 Гц, 1H), 8,00-8,08 (м, 2H), 7,61-7,75 (м, 1H), 7,49-7,59 (м, 2H), 6,34 (д, J=6,0 Гц, 1H), 6,28 (дд, J=19,2, 2,1 Гц, 1H), 5,79 (д, J=6,1 Гц, 1H), 5,39-5,61 (м, 2H), 5,21-5,32 (м, 1H), 4,69 (дд, J=4,8, 2,8 Гц, 1H), 4,39-4,55 (м, 1H), 4,02 (к, J=3,5 Гц, 1H), 3,78-3,87 (м, 1H), 3,66-3,76 (м, 1H), 3,54-3,62 (м, 1H), 2,95-3,14 (м, 2H), 0,91 (с, 9H), 0,13 (с, 3H), 0,13 (с, 3H); ИЭР-МС: m/z 801,3 [M+H]⁺.

Стадия 6. Получение соединения 22h

Раствор соединения 22g (100 мг, 0,129 ммоль) и 1H-тетразола (2,22 мл 0,45 M раствор в MeCN, 0,99 ммоль) в безводном THF (3 мл) обрабатывали молекулярными ситами 4Å в течение 5 мин в атмосфере N₂, после чего по каплям посредством шприца добавляли 2-цианоэтил-N, N,N',N'-тетра(изопропил)фосфородиамидит (75 мг, 0,25 ммоль) в безводном THF (1 мл) в течение 10 мин (Примечание. THF перед работой перегоняли над Na/бензофеноном и MeCN перед работой перегоняли над CaH₂ до применения). Полученную реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Раствор tBuOOH (114 мкл 5 ~ 6 M раствора в декане, 0,624 ммоль) добавляли посредством шприца и продолжали перемешивание в течение еще 30 мин. Смесь разбавляли с помощью DCM (20 мл), фильтровали через слой диатомитовой земли и концентрировали. Неочищенный продукт очищали посредством флэш-хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-6% MeOH в DCM) с получением соединения 22h (66 мг, выход 57%) в виде белого твердого вещества. ИЭР-МС: m/z=916,3 [M+H]⁺.

Стадия 7. Получение соединения 22i

Соединение 22h (66 мг, 0,072 ммоль) перемешивали в 30% растворе метиламина в этаноле (5 мл) при комнатной температуре в течение 4 ч. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Остаток растворяли в воде, промывали DCM и лиофилизировали. Неочищенный продукт очищали посредством препаративной обращенно-фазной ВЭЖХ (неподвижная фаза: Agela Durashell C18, 5 мкм, 150×25 мм; подвижная фаза: 10 мМ водный бикарбонат аммония (A) - MeCN (B); градиентное элюирование) с получением соединения 22i (11,6 мг, выход: 14,5%). ¹H ЯМР (400 МГц, D₂O) δ м. д, 9,57 (д, J=1,5 Гц, 1H), 9,35 (дд, J=1,5, 9,5 Гц, 2H), 8,71 (д, J=1,3 Гц, 1H), 8,09 (д, J=1,8 Гц, 1H), 7,04 (д, J=8,3 Гц, 1H), 6,86 (уш. д, J=19,6 Гц, 1H), 6,18-5,91 (м, 2H), 5,84-5,65 (м, 1H), 5,24 (уш. с, 1H), 4,88-4,80 (м, 3H), 4,74-4,59 (м, 1H), 4,05 (уш. дд, J=5,4, 14,4 Гц, 1H), 3,96-3,81 (м, 1H), 1,44 (д, J=1,3 Гц, 9H), 0,73-0,60 (м, 6H); ¹⁹F ЯМР (376 МГц, D₂O) δ м. д. -198,496 (с, 1F); ³¹P ЯМР (162 МГц, D₂O) δ м. д. -198,496 (с, 1F); ИЭР-МС: m/z=759,2 [M+H]⁺.

Стадия 8. Получение соединения 49 (натриевая соль)

Раствор соединения 22i (40 мг, 0,053 ммоль) в пиридине (3 мл), к которому добавляли Et₃N (320 мг, 3,16 ммоль) и тригидрофторид триэтиламина (254 мг, 1,58 ммоль), перемешивали при 50°C в течение 4 ч. Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и разбавляли с помощью THF (2 мл). Добавляли изопропокситриэтилсилан (697 мг, 5,27 ммоль) и перемешивание продолжали при комнатной температуре в течение 1,5 ч. Остаток, полученный после концентрирования при пониженном давлении, очищали посредством препаративной обращенно-фазной ВЭЖХ (неподвижная фаза: XBridge C18 OBD, 5 мкм, 150×25 мм; подвижная фаза: 10 мМ водный бикарбонат аммония (A) - MeCN (B); градиентное элюирование) с получением соединения 49 (аммонийная соль). Заключительное превращение в натриевую соль проводили элюированием водным раствором колонки, заполненной натриевой катионообменной смолой, с получением соединения 49 (натриевая соль) в виде белого твердого вещества после лиофилизации (22,5 мг, выход: 58%). ¹H ЯМР (400 МГц, D₂O) δ м. д. 8,95 (с, 1H), 8,76 (с, 1H), 8,53 (с, 1H), 8,13 (с, 1H), 6,73-6,58 (м, 1H), 6,53 (д, J=8,0 Гц, 1H), 6,42-6,33 (м, 1H), 5,93 (уш. дд, J=4,3, 7,8 Гц, 1H), 5,50-5,30 (м, 1H), 5,19-5,04 (м, 1H), 4,88-4,81 (м, 1H), 4,55-4,44 (м, 2H), 4,39-4,32 (м, 1H), 4,25 (ддд, J=2,3, 4,9, 12,2 Гц, 1H), 3,71 (уш. д, J=13,1 Гц, 1H), 3,46 (уш. д, J=12,8 Гц, 1H). ¹⁹F ЯМР (376 МГц, D₂O) δ м. д. -197, 119 (с, 1F); ³¹P ЯМР (162 МГц, D₂O) δ м. д. -1,984 (с, 1P); ИЭР-МС: m/z=645,2 [M+H]⁺.

Пример 23

Стадия 1. Получение соединения 23a

Соединение 13a (900 мг, 1,16 ммоль) растворяли в смеси безводного ACN (103 мл) и безводного THF (103 мл), добавляли 1H-тетразол (10,2 мл, 3-4% в MeCN, высушенный на молекулярных ситах 3Å до применения) и молекулярные сита 3Å. Смесь встряхивали при кт в течение 2 часов и впоследствии посредством шприца за раз добавляли 2-цианоэтил-N, N,N',N'- тетраизопропилфосфородиамидит (0,48 мл, 1,51 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при кт в течение 4 часов. Добавляли дополнительное количество 2-цианоэтил-N, N,N',N'-тетраизопропилфосфородиамидита (0,48 мл, 1,51 ммоль). Реакционную смесь встряхивали при кт в течение 1 часа и впоследствии добавляли дисульфид фенилацетила (0,7 г, 2,33 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при кт в течение 30 минут. Реакционную смесь фильтровали. Молекулярные сита трижды промывали дихлорметаном. Объединенный фильтрат промывали смесью насыщенного раствора Na₂S₂O₃ и насыщенного раствора NaHCO₃, промывали солевым раствором, высушивали с помощью MgSO₄, фильтровали и выпаривали растворители фильтрата. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-100% MeOH в DCM) с получением соединения 23a (152 мг, выход: 11%). ИЭР-МС: m/z=904,3 [M+H]⁺.

Стадия 2. Получение соединения (*R) 16A и соединения (*S) 16B

Соединение 23a (152 мг, 0,12 ммоль) в метиламине, 33% раствор в этаноле (7 мл, 56 ммоль), перемешивали при 40 °C в течение 3 часов. Реакционную смесь выпаривали досуха при пониженном давлении. Остаток растирали в 10 мл безводного ацетонитрила. Осадок собирали фильтрованием и промывали безводным ацетонитрилом. Очистку/разделение двух эпимеров выполняли обращенно-фазной препаративной ВЭЖХ (неподвижная фаза: RP XBridge Prep C18 OBD-10 мкм, 50×150 мм, подвижная фаза: 0,25% раствор NH₄HCO₃ в воде, MeOH). Растворители из двух чистых фракций удаляли лиофилизацией. Остатки растворяли в воде и фильтровали на предварительно промытой (водой) колонке, заполненной натриевой катионообменной смолой, с получением соединения (*R) 16A (натриевая соль) (37 мг, выход 29%) и соединения (*S) 16B (натриевая соль) (5 мг, выход 6%), оба в виде белых твердых веществ.

Соединение (*R) 16A (натриевая соль) ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ м. д. 2,58-2,69 (м, 1H), 2,95-3,07 (м, 1H), 3,41 (дд, J=13,2, 2,6 Гц, 1H), 3,58-3,68 (м, 1H), 4,01 (тд, J=11,8, 6,5 Гц, 1H), 4,18 (ддд, J=13,5, 11,3, 4,1 Гц, 1H), 4,36 (уш. д, J=8,1 Гц, 1H), 4,47-4,56 (м, 1H), 5,18-5,29 (м, 1H), 5,75-5,94 (м, 1H), 5,79 (м, J=9,0, 4,1 Гц, 1H), 6,13 (д, J=3,7 Гц, 1H), 6,37 (д, J=19,1 Гц, 1H), 6,78 (уш. с, 2H), 7,15 (уш. с, 2H), 7,99 (с, 1H), 8,38 (с, 1H), 9,65 (уш. с, 1H); ИЭР-МС: m/z=677,0 [M+H]⁺.

Соединение (*S) 16B (натриевая соль) ³¹P ЯМР (162 МГц, D2O) δ м. д. 55,80 (с, 1 P); ИЭР-МС: m/z=677,3 [M+H]⁺.

Пример 24

Стадия 1. Получение соединения 24a

Соединение 19g (0,6 г, 0,77 ммоль) растворяли в смеси безводного ACN (55 мл) и безводного THF (55 мл), добавляли 1H-тетразол (8,94 мл, 3-4% в MeCN, высушенный на молекулярных ситах 3Å до применения) и молекулярные сита 3Å. Смесь встряхивали при кт в течение 1 часа и впоследствии посредством шприца за раз добавляли 2-цианоэтил-N, N,N',N’-тетраизопропил-фосфородиамидит (0,24 мл, 0,77 ммоль). Реакционную смесь встряхивали при кт в течение 2,5 ч и впоследствии добавляли дисульфид фенилацетила (PADS, 0,46 г, 1,53 ммоль). Реакционную смесь встряхивали при комнатной температуре в течение 18 ч. Молекулярные сита удаляли фильтрованием и промывали дихлорметаном. Объединенный фильтрат промывали смесью насыщенного раствора Na₂S₂O₃ и насыщенного раствора NaHCO₃, промывали солевым раствором, высушивали с помощью MgSO₄, фильтровали и выпаривали растворители фильтрата. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-100% MeOH в DCM) с получением соединения 24a (184 мг, выход: 26%). ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ м. д. 1,13 (дд, J=6,7, 1,4 Гц, 6H), 2,69-2,87 (м, 2H), 3,07 (т, J=5,9 Гц, 2H), 3,25-3,30 (м, 1H), 3,35-3,47 (м, 2H), 3,53 (с, 3H), 3,55-3,65 (м, 1H), 4,31-4,48 (м, 4H), 4,51-4,61 (м, 2H), 5,14 (дд, J=8,5, 4,1 Гц, 1H), 5,38-5,52 (м, 1H), 6,20 (д, J=8,5 Гц, 1H), 6,60 (дд, J=8,5, 6,1 Гц, 1H), 7,56 (т, J=7,4 Гц, 2H), 7,65 (т, J=7,0 Гц, 1H), 8,05 (д, J=7,5 Гц, 2H), 8,35 (с, 1H), 8,44 (уш. с, 1H), 8,73 (с, 1H), 8,76 (с, 1H), 11,22 (уш. с, 1H), 11,73 (с, 1H), 12,11 (уш. с, 1H); ³¹P ЯМР (162 МГц, DMSO-d₆) δ м. д. 65,02 (с, 1P); ИЭР-МС: m/z=915,5 [M+H]⁺.

Стадия 2. Получение соединения (*R) 13A (натриевая соль)

Соединение 24a (184 мг, 0,2 ммоль) в 33% растворе метиламина в этаноле (10 мл, 81 ммоль) перемешивали при 45 °C в течение 1 ч. Реакционную смесь выпаривали досуха при пониженном давлении. Остаток растирали в 3 мл безводного ацетонитрила. Осадок собирали фильтрованием и промывали безводным ацетонитрилом. Очистку выполняли посредством обращенно-фазной препаративной ВЭЖХ (неподвижная фаза: RP XBridge Prep C18 OBD-10 мкм, 50×150 мм, подвижная фаза: 0,25% раствор NH₄HCO₃ в воде, MeOH). Растворители чистых фракций удаляли лиофилизацией. Остаток растворяли в воде и фильтровали на предварительно промытой (водой) колонке, заполненной ионообменной смолой IR120 в форме Na⁺. Растворители полученного раствора удаляли лиофилизацией с получением соединения (*R) 13Å (натриевая соль) (93 мг, выход 66%) в виде рыхлого белого твердого вещества.¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ м. д. 10,59 (уш. с, 1H), 8,42 (с, 1H), 8,37 (с, 1H), 8,05 (с, 1H), 7,23-7,33 (м, 2H), 7,28 (уш. с, 2H), 6,52 (уш. с, 2H), 6,35 (дд, J=8,4, 6,0 Гц, 1H), 6,02 (д, J=8,5 Гц, 1H), 5,48 (уш. дд, J=8,6, 4,0 Гц, 1H), 5,17 (уш. с, 1H), 4,36 (уш. с, 1H), 4,12 (с, 2H), 3,95-4,04 (м, 1H), 3,88-3,95 (м, 1H), 3,48-3,59 (м, 1H), 3,47 (с, 3H), 3,18 (дд, J=14,0, 4,3 Гц, 1H), 3,06 (ддд, J=13,9, 8,2, 5,9 Гц, 1H), 2,53-2,68 (м, 1H); ³¹P ЯМР (162 МГц, DMSO-d₆) δ м. д. 52,21 (с, 1 P); ИЭР-МС: m/z 688,3 [M+H]⁺.

Пример 25

Стадия 1. Получение соединения 25a

Соединение 12a (300 мг, 0,38 ммоль) растворяли в смеси безводного ACN (33 мл) и безводного THF (33 мл), добавляли 1H-тетразол (4,4 мл, 3-4% в MeCN, высушенный на молекулярных ситах 3Å до применения) и молекулярные сита 3Å. Смесь встряхивали при кт в течение 1 часа и впоследствии посредством шприца за раз добавляли 2-цианоэтил-N, N,N',N'-тетраизопропилфосфородиамидит (0,12 мл, 0,38 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4,5 часов. Добавляли дополнительное количество 2-цианоэтил-N, N,N',N'-тетраизопропилфосфородиамидита (0,06 мл, 0,19 ммоль). Реакционную смесь встряхивали при кт в течение 18 часов и впоследствии добавляли дисульфид фенилацетила (0,23 г, 0,75 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при кт в течение 2 часов. Реакционную смесь фильтровали. Молекулярные сита трижды промывали дихлорметаном. Объединенный фильтрат промывали смесью насыщенного раствора Na₂S₂O₃ и насыщенного раствора NaHCO₃, промывали солевым раствором, высушивали с помощью MgSO₄, фильтровали и выпаривали растворители фильтрата. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-10% MeOH в DCM) с получением 25a (103 мг, выход 27%). ИЭР-МС: m/z=921,4 [M+H]⁺.

Стадия 2. Получение соединения (*R) 31A (натриевая соль) и соединения (*S) 31B (натриевая соль)

Соединение 25a (103 мг, 0,1 ммоль) помещали в метиламин, 33% раствор в этаноле (6 мл, 58,4 ммоль), перемешивали при 45 °C в течение 1 часа. Реакционную смесь выпаривали досуха при пониженном давлении. Остаток растирали в 10 мл безводного ацетонитрила. Осадок собирали фильтрованием и промывали безводным ацетонитрилом. Очистку/разделение двух эпимеров выполняли обращенно-фазной препаративной ВЭЖХ (неподвижная фаза: RP XBridge Prep C18 OBD-10 мкм, 50×150 мм, подвижная фаза: 0,25% раствор NH₄HCO₃ в воде, MeOH). Растворители из двух чистых фракций удаляли лиофилизацией. Остатки растворяли в воде и фильтровали на предварительно промытой (водой) колонке, заполненной натриевой катионообменной смолой. Растворители оставшихся растворов удаляли лиофилизацией с получением соединений 31A и 31B, каждое в виде белого твердого вещества.

Соединение (*R) 31A (натриевая соль) (42 мг, выход 57%). ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ м. д. 3,36-3,51 (м, 2H), 3,88 (м, J=9,8 Гц, 1H), 4,12-4,23 (м, 2H), 4,55 (д, J=1,0 Гц, 1H), 5,19 (уш. т, J=13,0 Гц, 1H), 5,26-5,61 (м, 3H), 6,04 (уш. д, J=8,1 Гц, 1H), 6,37-6,48 (м, 1H), 6,53 (уш. с, 2H), 7,35 (уш. с, 2H), 8,16 (с, 1H), 8,22 (д, J=2,8 Гц, 1H), 8,34 (с, 1H), ³¹P ЯМР (162 МГц, DMSO-d₆) δ м. д. 52,43 (с, 1P); ИЭР-МС: m/z 694,3 [M+H]⁺.

Соединение (*S) 31B (натриевая соль) (3 мг, выход 4%). ³¹P ЯМР (162 МГц, D2O) δ м. д. 55,20 (с, 1P); ИЭР-МС: m/z=694,3 [M+H]⁺.

Пример 26

Стадия 1. Получение соединения 26b

Хлортриметилсилан (5,53 мл, 43,7 ммоль) по каплям добавляли к раствору 26a [CAS 847648-20-8] (2,6 г, 8,74 ммоль) в безводном пиридине (26 мл) при 0 °C. Реакционный раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин, после чего снова охлаждали до 0 °C. Добавляли по каплям хлорид изобутирила (4,58 мл, 43,7 ммоль) в течение 15 мин и продолжали перемешивание при комнатной температуре до полного превращения. Реакционную смесь охлаждали до 0 °C, добавляли воду с последующим добавлением водного раствора аммиака (26%, 18 мл) через 20 мин, продолжали перемешивание при комнатной температуре в течение 2 ч. Реакционный раствор нейтрализовали уксусной кислотой и концентрировали при пониженном давлении. Очистку выполняли колоночной хроматографией на силикагеле (градиентное элюирование: 0-7% MeOH в DCM) с получением соединения 26b в виде грязно-белого твердого вещества (1,3 г, выход: 40%). ¹H ЯМР (500 МГц DMSO-d₆) δ м. д.: 12,10 (с, 1H), 11,71 (с, 1H), 7,96 (с, 1H), 5,93 (д, J=4,1 Гц, 1H), 4,80 (т, J=5,5 Гц, 1H), 4,50 (т, J=2,1 Гц, 1H), 4,23 (к, J=5,0 Гц, 1H), 3,78 (к, J=2,1 Гц, 1H), 3,71 (м, 1H), 3,63 (м, 1H), 3,37 (с, 3H), 2,78 (м, 1H), 1,23 (д, J=4,8 Гц, 1H), 1,12 (д, J=6,9 Гц, 6H); ИЭР-МС: m/z=367,9 [M+H]⁺.

Стадия 2. Получение соединения 26c

Раствор соединения 26b (1,75 г, 4,76 ммоль) в безводном пиридине (35 мл), к которому добавляли DMAP (0,29 г, 2,38 ммоль) и DMTrCl (2,41 г, 7,14 ммоль) (порциями), перемешивали при комнатной температуре до полного превращения (прибл. 1,5 ч). Реакционную смесь гасили метанолом (15 мл) и концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток растворяли в этилацетате и промывали водой. Органический слой высушивали над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Очистку выполняли колоночной хроматографией на силикагеле (градиентное элюирование: 0-2,5% MeOH в DCM) с получением соединения 26c в виде бледно-коричневой пены (3,1 г, выход: 96%), ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ м. д.: 11,89 (д, J=177,0 Гц, 2H), 7,75 (с, 1H), 7,39 (д, J=7,6 Гц, 2H), 7,25 (м. 7H), 6,86 (м, 4H), 5,98 (д, J=4,1 Гц, 1H), 5,83 (д, J=2,1 Гц, 1H), 4,49 (м, 2H), 3,82 (к, J=2,1 Гц, 1H), 3,73 (д, J=2,8 Гц, 6H), 3,27 (с, 3H), 3,22 (м, 1H), 2,78 (м, 1H), 1,12 (дд, J=6,9, 2,1 Гц, 6H); ИЭР-МС: m/z 669 [M+H]⁺.

Стадия 3. Получение соединения 26d

В реакционную колбу помещали DMAP (0,35 г, 2,9 ммоль), безводный DCM (10 мл) и активированные молекулярные сита 3Å. Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение по меньшей мере 2 ч в инертной атмосфере. Одновременно раствор соединения 26c (0,38 г, 0,57 ммоль) и раствор сульфамата 17a (0,6 г, 0,69 ммоль) (каждый в безводном DCM (2×10 мл)) сушили на активированных молекулярных ситах 3Å (прибл. 2 ч). Оба раствора (соединения 26c и сульфамата 17a соответственно) последовательно переносили в реакционную колбу. Полученную реакционную смесь перемешивали в течение 24 ч. Молекулярные сита удаляли фильтрованием и тщательно промывали дихлорметаном. Фильтрат промывали насыщенным водным NaHCO₃, солевым раствором и насыщенным водным NH₄Cl, высушивали над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-1% MeOH в DCM) с получением соединения 26d в виде пены (0,44 г, выход: 55%). ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ м. д.: 12,12 (с, 1H), 11,69 (с, 1H), 11,22 (с, 1H), 8,63 (с, 1H), 8,45 (с, 1H), 8,02 (д, J=6,9 Гц, 2H), 7,64 (к, J=7,3 Гц, 2H), 7,55 (т, J=7,6 Гц, 2H), 7,49 (д, J=7,6 Гц, 2H), 7,36 (м, 8H), 7,23 (м, 8H), 6,92 (т, J=9,6 Гц, 4H), 6,84 (дд, J=13,8, 9,0 Гц, 4H), 6,28 (д, J=19,3 Гц, 1H), 6,05 (д, J=1,0 Гц, 1H), 5,15 (с, 1H), 4,97 (м, 1H), 4,85 (д, J=22,0 Гц, 1H), 4,40 (к, J=5,0 Гц, 1H), 3,98 (м, 2H), 3,70 (т, J=3,1 Гц, 12H), 3,23 (д, J=6,9 Гц, 2H), 3,13 (с, 3H), 2,79 (м, 2H), 2,65 (м, 2H), 1,10 (д, J=5,5 Гц, 6H); ИЭР-МС: m/z 1406 [M+H]⁺.

Стадия 4. Получение соединения 26e

Раствор соединения 26d (430 мг, 0,3 ммоль) в DCM (12 мл), к которому добавляли DCA (1,0 мл 10% в DCM, 1,2 ммоль) и воду (27 мкл, 1,5 ммоль), перемешивали при комнатной температуре до полного удаления защитных групп (прибл. 1 ч). Реакционную смесь гасили добавлением пиридина (120 мкл, 1,5 ммоль) и нескольких капель метанола. Остаток, полученный после концентрирования при пониженном давлении, очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-8% MeOH в DCM) с получением соединения 26e в виде белого порошка (225 мг, выход: 92%). ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ м. д.: 12,11 (с, 1H), 11,67 (с, 1H), 11,25 (с, 1H), 8,73 (с, 1H), 8,57 (с, 1H), 8,04 (д, J=6,9 Гц, 2H), 7,87 (с, 1H), 7,65 (т, J=7,6 Гц, 1H), 7,55 (т, J=7,9 Гц, 2H), 6,29 (дд, J=19,6, 1,7 Гц, 1H), 6,04 (с, 1H), 5,92 (с, 1H), 5,58 (м, 1H), 5,22 (с, 1H), 4,92 (д, J=10,3 Гц, 1H), 4,62 (м, 1H), 4,17 (к, J=5,0 Гц, 1H), 4,10 (т, J=2,1 Гц, 1H), 4,02 (тд, J=7,2, 2,5 Гц, 1H), 3,70 (м, 1H), 3,61 (м, 1H), 3,45 (м, 1H), 3,37 (с, 3H), 3,06 (к, J=7,3 Гц, 1H), 2,77 (м, 1H), 1,12 (дд, J=6,9, 2,1 Гц, 6H); ИЭР-МС: m/z 801,0 [M+H]⁺.

Стадия 5. Получение соединения 26f

Раствор соединения 26e (220 мг, 0,27 ммоль) и 1H-тетразола (3,2 мл, 3-4% в MeCN, высушен на молекулярных ситах 3Å до применения) в смеси MeCN/THF (1 : 1, 48 мл, предварительно высушены на активированных молекулярных ситах 3Å) обрабатывали молекулярными ситами 3Å в течение 1 ч, после чего в один прием добавляли 2-цианоэтил-N, N,N',N'-тетра(изопропил)фосфородиамидит (87 мкл, 0,27 ммоль). Полученную реакционную смесь встряхивали при комнатной температуре в течение 22 часов. Добавляли дисульфид фенилацетила (PADS, 0,45 г, 1,5 ммоль) и продолжали встряхивание в течение еще одного часа. Молекулярные сита удаляли фильтрованием и промывали дихлорметаном. Объединенные фильтраты последовательно промывали смесью 1 : 1 насыщенного водного Na₂S₂O₃ и насыщенного водного NaHCO₃ и солевым раствором, высушивали с помощью MgSO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-10% MeOH в DCM) с получением соединения 26f (55 мг, выход: 21%). ИЭР-МС: m/z 933,5 [M+H]⁺.

Стадия 6. Получение соединения (*R) 7A (натриевая соль) и соединения (*S) 7B (натриевая соль)

Соединение 26e (55 мг, 0,059 ммоль) перемешивали в 33% растворе метиламина в этаноле (4 мл) при 45 °C до полного превращения (прибл. 1 ч), после чего реакционный раствор охлаждали до комнатной температуры и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт растирали в MeCN, полученный осадок дополнительно очищали посредством препаративной обращенно-фазной ВЭЖХ (неподвижная фаза: XBridge C18 OBD, 5 мкм, 250×30 мм; подвижная фаза: водный 0,25% бикарбонат аммония (A)-MeOH (B); градиентное элюирование), вследствие чего были разделены оба P-эпимера: соединения (*R) 7 A (аммонийная соль) в виде первого элюируемого изомера и соединения (*S) 7B (аммонийная соль) в виде второго элюируемого изомера. Заключительное превращение в натриевую соль проводили элюированием водным раствором колонки, заполненной натриевой катионообменной смолой, с получением соединения (*R) 7 A (натриевая соль) (выход: 7 мг, 16%) в виде белого твердого вещества и соединения (*S) 7B (натриевая соль) (выход: 4 мг, 9%) в виде белого твердого вещества.

Соединение (*R) 7A (натриевая соль). ¹H ЯМР (400 МГц, D₂O) δ м. д. 3,31 (уш. д, J=12,2 Гц, 1H), 3,50 (с, 3H), 3,52-3,57 (м, 1H), 4,28-4,50 (м, 4H), 4,74 (с, 1H), 4,97-5,08 (м, 1H), 5,29 (с, 1H), 5,72 (дд, J=50,5, 3,7 Гц, 1H), 6,15 (с, 1H), 6,30 (д, J=18,7 Гц, 1H), 7,76 (с, 1H), 8,10 (с, 1H), 8,21 (с, 1H); ³¹P ЯМР (162 МГц, D₂O) δ м. д. 55,05 (с, 1P); ИЭР-МС: m/z 706,0 [M+H]⁺.

Соединение (*S) 7B (натриевая соль). ¹H ЯМР (400 МГц, D₂O) δ м. д. 8,43 (уш. с, 1H). 8,18 (с, 1H). 7,84 (с, 1H), 6,37 (д, J=19,1 Гц, 1H), 6,14 (с, 1H), 5,52 (дд, J=50,7, 4,3 Гц, 1H), 5,26 (уш. с, 1H), 4,87-4,99 (м, 2H), 4,64-4,70 (м, 1H), 4,49 (ддд, J=10,5, 4,9, 2,7 Гц, 1H), 4,39 (уш. д, J=8,8 Гц, 1H), 4,23 (дт, J=23,8, 10,7 Гц, 1H), 3,57 (уш. дд, J=14,1, 3,5 Гц, 1H), 3,47 (с, 3H), 3,33 (уш. д, J=13,9 Гц, 1H); ³¹P ЯМР (162 МГц, D₂O) δ м. д. 56,94 (с, 1P); ИЭР-МС: m/z 706,1 [M+H]⁺.

Пример 27

Стадия 1. Получение соединения 27a

Примечание. THF перед работой перегоняли над Na/бензофеноном, а CH₃CN перед работой перегоняли над CaH₂ до применения.

К раствору 17d (400 мг, 0,518 ммоль) в тетрагидрофуране (14 мл) добавляли молекулярные сита 4Å (порошок, 2 г) и перемешивали смесь в течение 20 мин. Через 20 мин добавляли раствор 1H-тетразола (0,45 M в ацетонитриле, 9,2 мл) при 25°C с последующим добавлением раствора 2-цианоэтил-N, N,N',N'-тетра(изопропил)фосфородиамидита (0,31 г, 1,037 ммоль, разведенный в 2 мл THF) при 25 °C. После перемешивания в течение 1,5 ч при кт добавляли (E)-N, N-диметил-N'-(3-тиоксо-3H-1,2,4-дитиазол-5-ил)формимидамид (DDTT, 0,453 г, 2,205 ммоль, разведенный в 10 мл Py) при 25°C и перемешивали раствор в течение 1,5 ч. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (0-15% MeOH в DCM) с получением 27a (80 мг) в виде светло-желтого твердого вещества. ИЭР-МС: m/z=902,9 [M+H]⁺.

Стадия 2. Получение соединения (*R) 44A (натриевая соль) и соединения (*S) 44B (натриевая соль)

Раствор соединения 27a (80 мг, 0,09 ммоль) в метиламине (50% в EtOH, 5,0 мл) перемешивали при 25°C в течение 4 часов. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. За счет разделения посредством обращенно-фазной препаративной ВЭЖХ (колонка: Xbridge 150×30 мм x 10 мкм, условия: вода (10 мМ NH₄HCO₃)-VCH₃CN; начало B: 5, конец B 20, время градиентного элюирования (мин): 7, 100% B, время удержания (мин): 0, скорость потока (мл/мин): 25) получали соединение (*R) 44A (аммонийную соль) (19 мг) и соединение (*S) 44B (аммонийная соль) (1,5 мг), обе в виде белого твердого вещества. Заключительное превращение обоих соединений в натриевые соли проводили элюированием водным раствором колонки, заполненной натриевой катионообменной смолой. Соединение (*R) 44A (натриевая соль) (27 мг). ¹H ЯМР (400 МГц, D₂O) δ м. д. 8,22 (уш. с, 1H), 8,09 (с, 1H), 7,29 (уш. с, 1H), 6,57-6,50 (м, 1H), 6,05-5,98 (м, 2H), 5,94-5,78 (м, 1H), 5,31-5,13 (м, 1H), 4,70 (уш. д, J=7,5 Гц, 1H), 4,60 (уш. д, J=8,8 Гц, 1H), 4,26 (уш. дд, J=4,3, 11,5 Гц, 1H), 4,19-4,11 (м, 1H), 3,85 (уш. д, J=13,3 Гц, 1H), 3,56 (уш. д, J=13,3 Гц, 1H), 2,81-2,63 (м, 2H); ¹⁹F ЯМР (376 МГц, D₂O) δ -195,872 (с, 1F) м. д.; ³¹P ЯМР (162 МГц, D₂O) δ 52,528 (с, 1P) м. д.; ИЭР-МС: m/z=676,0 [M+H].

Соединение (*S), 44B (натриевая соль) (1,8 мг). ¹H ЯМР (400 МГц, D₂O) δ м. д. 8,20 (с, 1H), 7,87 (с, 1H), 7,28 (с, 1H), 6,59-6,46 (м, 1H), 6,22-6,14 (м, 1H), 5,97 (д, J=7,5 Гц, 1H), 5,53-5,34 (м, 2H), 4,66-4,54 (м, 2H), 4,34 (уш. т, J=11,5 Гц, 1H), 4,11 (уш. дд, J=4,6, 11,9 Гц, 1H), 3,77 (уш. д, J=13,3 Гц, 1H), 3,45 (уш. д, J=13,3 Гц, 1H), 3,02 (к, J=7,3 Гц, 1H), 2,76-2,66 (м, 1H), 2,78-2,65 (м, 1H), 2,58 (уш. дд, J=7,8, 12,5 Гц, 1H), 1,26-1,18 (м, 1H), 1,27-1,17 (м, 1H), 1,22 (уш. т. J=7,3 Гц, 1H), 1,32-1,10 (м, 1H); ¹⁹F ЯМР (376 МГц, D₂O) δ м. д. -195,902 (с, 1F); ³¹P ЯМР (162 МГц, D₂O) δ м. д. 56,151 (с, 1P); ИЭР-МС: m/z=677,0 [M+H]⁺.

Пример 28

Стадия 1. Получение соединения 28a

К раствору 18a (430 мг, 0,532 ммоль, высушен лиофилизацией) в тетрагидрофуране (9 мл) добавляли молекулярные сита 4Å (порошок, 2 г) и перемешивали смесь в течение 20 мин. Через 20 мин добавляли раствор 1H-тетразола (0,45 M в ацетонитриле, 9,46 мл, получен путем растворения 945 мг тетразола (высушен лиофилизацией) в 30 мл безводного CH₃CN с последующим добавлением 1,5 г молекулярных сит 4Å и перемешиванием впоследствии в течение 1 ч в атмосфере N₂ до применения) при 25 °C, продували несколько раз с использованием N₂ с последующим добавлением раствора 3-((бис(диизопропиламино)фосфино)окси)пропаненитрил (0,288 мг, 0,958 ммоль, разведен в 2 мл THF) по каплям в течение 30 мин при 25°C с получением белой суспензии. После перемешивания при кт в течение 1,5 ч добавляли раствор DDTT (655 мг, 3,19 ммоль) в пиридине (10 мл) при 25°C и перемешивали раствор в течение 30 мин. Реакционную смесь объединяли с другой порцией, фильтровали через слой диатомитовой земли, концентрировали при пониженном давлении с получением желтого остатка. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (0-2% MeOH в DCM) с получением 28a (260 мг) в виде белого твердого вещества. ИЭР-МС: m/z=939,1 [M+H]⁺.

Стадия 2. Получение соединения (*R) 42A (аммонийная соль) и соединения (*S) 42B (аммонийная соль)

Раствор соединения 28a (130 мг, 0,138 ммоль) в метиламине (от 27 до 32% в EtOH, 5,0 мл) перемешивали при кт в течение 2 ч. Реакционную смесь объединяли с другой порцией и выпаривали смесь при пониженном давлении с получением белого твердого вещества; твердое вещество растворяли в воде (30 мл), впоследствии промывали DCM (20 мл x 4). Водный слой лиофилизировали с получением белого твердого вещества (190 мг). Белое твердое вещество очищали посредством обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (колонка: Xbridge 150×30 мм x 5 мкм, условия: вода (10 мМ NH₄HCO₃)-CH₃CN, начало B: 5, конец B 35, время градиентного элюирования (мин): 7, 100% B, время удержания (мин): 0, скорость потока (мл/мин): 25) с получением соединения (*R) 42A (аммонийная соль) (70 мг) в виде белого твердого вещества и соединения (*S) 42B (аммонийная соль) (12 мг) в виде белого твердого вещества.

Соединение (*R) 42A (аммонийная соль). ¹H ЯМР (400 МГц, D2O) δ 8,96 (с, 1H), 8,23 (д, J=7,1 Гц, 2H), 7,25 (с, 1H), 6,58-6,41 (м, 2H), 5,90-5,58 (м, 3H), 5,33-5,12 (м, 1H), 4,93-4,77 (м, 1H), 4,41-4,24 (м, 2H), 3,86 (уш. дд, J=2,8, 13,1 Гц, 1H), 3,66 (уш. д, J=13,2 Гц, 1H); ¹⁹F ЯМР (376 МГц, D2O) δ7 м. д. -196,52 (с, 1F), -198,72 (с, 1F); ³¹P ЯМР (162 МГц, D20) δ м. д. 54,24 (с, 1P); ИЭР-МС: m/z=678,2 [M+H]⁺.

Соединение (*S) 42B (аммонийная соль). ¹H ЯМР (400 МГц, D2O) δ 8,54 (уш. с, 1H), 8,15 (уш. с, 1H), 7,97 (уш. с, 1H), 7,14 (уш. с, 1H), 6,40 (уш. с, 2H), 5,95-5,71 (м, 1H), 5,94-5,69 (м, 1H), 5,68-5,33 (м, 1H), 5,70-5,32 (м, 1H), 5,19 (уш. с, 1H), 4,13 (уш. с, 2H), 3,72 (уш. с, 1H), 3,57 (уш. д, J=12,7 Гц, 1H); ¹⁹F ЯМР (376 МГц, D2O) δ м. д. -195,66 (с, 1F), -198,44 (с, 1F); ³¹P ЯМР (162 МГц, D2O) δ м. д. 55,09 (с, 1P); ИЭР-МС: m/z=678,1 [M+H]⁺.

Превращение в натриевую соль

Смолу Dowex 50W × 8, 200-400 (12 мл, H-форма) помещали в стакан и промывали деионизированной водой (30 мл). Впоследствии к смоле добавляли 15% H₂SO₄ в деионизированной воде, смесь осторожно перемешивали в течение 5 мин и декантировали (30 мл). Смолу переносили на колонку с 15% H₂SO₄ в деионизированной воде и промывали 15% H₂SO₄ (по меньшей мере 4 объема колонки) и впоследствии деионизированной водой до достижения нейтрального pH. Смолу переносили обратно в стакан, добавляли раствор 15% NaOH в деионизированной воде и смесь осторожно перемешивали в течение 5 мин и декантировали (1 ×). Смолу переносили на колонку и промывали 15% NaOH в воде (по меньшей мере 4 объема колонки) и впоследствии деионизированной водой до достижения нейтрального pH. Соединение (*R) 42A (аммонийная соль) (92 мг в 20 мл/9 мл) растворяли в минимальном количестве деионизированной воды и CH₃CN (1 : 1, об./об.), добавляли в верхнюю часть колонки и элюировали деионизированной водой. Соответствующие фракции объединяли и лиофилизировали с получением соединения (*R) 42A (натриевая соль) (72,4 мг) в виде белого твердого вещества. ¹H ЯМР (400 МГц, D2O) δ м. д. 8,96 (уш. с, 1H), 8,24 (уш. д, J=13,2 Гц, 2H), 7,13 (с, 1H), 6,62-6,41 (м, 2H), 5,95-5,64 (м, 3H), 5,27-5,06 (м, 1H), 5,02-4,89 (м, 1H), 4,63 (уш. д, J=8,3 Гц, 1H), 4,39 (уш. с, 2H), 3,92 (уш. д, J=11,5 Гц, 1H), 3,72 (уш. д, J=13,2 Гц, 1H); ¹⁹F ЯМР (376 МГц, D2O) δ м. д. -196,32 (с, 1F), -198,94 (с, 1F); ³¹P ЯМР (162 МГц, D2O) δ м. д. 54,05 (с, 1P); ИЭР-МС: m/z=678,1 [M+H]⁺.

С использованием приведенной выше процедуры превращения в натриевую соль получали соединения (*S) 42B (натриевой соли) (6,9 мг) в виде белого твердого вещества. ¹H ЯМР (400 МГц, D2O) δ м. д. 8,63 (с, 1H), 8,23 (с, 1H), 8,08 (с, 1H), 7,29 (с, 1H), 6,56-6,39 (м, 2H), 5,95-5,77 (м, 1H), 5,73-5,58 (м, 1H), 5,58-5,45 (м, 1H), 5,58-5,44 (м, 1H), 5,36-5,22 (м, 1H), 4,91-4,78 (м, 1H), 4,53 (уш. дд, J=6,1, 11,0 Гц, 1H), 4,19 (уш. д, J=11,7 Гц, 1H), 4,25-4,13 (м, 1H), 3,79 (дд, J=4,0, 13,6 Гц, 1H), 3,71-3,70 (м, 1H), 3,66-3,66 (м, 1H), 3,68-3,59 (м, 1H); ¹⁹F ЯМР (376 МГц, D2O) δ м. д. -195,10-196,43 (м, 1F), -198,17 (тд, J=25,9, 52,5 Гц, 1F); ³¹P ЯМР (162 МГц, D2O) δ 55,26 (с, 1P); ИЭР-МС: m/z=678,1 [M+H]⁺.

Пример 29

Стадия 1. Получение соединения 29b

К раствору соединения 29a (13 г, 49,94 ммоль) в пиридине (10,06 мл, 124,86 ммоль) и дихлорметане (300 мл) по каплям добавляли трифлатный ангидрид (10,92 мл, 64,93 ммоль) при 0 °C. После перемешивания реакционной смеси при 0°C в течение около 1 ч смесь разбавляли с помощью DCM (100 мл), промывали водой (200 мл), солевым раствором (200 мл), высушивали безводным MgSO₄, фильтровали и выпаривали досуха с получением 29b (20,4 г) в виде желтого масла, использованного на следующей стадии без какой-либо дополнительной очистки. ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 6,07 (д, J=3,6 Гц, 1H), 5,35 (д, J=1,6 Гц, 1H), 4,85 (д, J=3,8 Гц, 1H), 4,32-4,19 (м, 3H), 4,06 (дд, J=3,90, 8,8 Гц, 1H), 1,61 (с, 3H), 1,51 (с, 3H), 1,42 (д, J=2,6 Гц, 6H).

Стадия 2. Получение соединения 29c

К раствору соединения 29b (20,4 г, 51,99 ммоль) в толуоле (500 мл) по каплям добавляли n-BU₄NBH₄ (40,13 г, 155,98 ммоль) при 25 °C. После перемешивания при 80°C в течение 6 ч реакционную смесь промывали водой (200 мл), солевым раствором (200 мл), высушивали безводным MgSO₄, фильтровали и выпаривали досуха с получением желтого масла. Полученное масло очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (0-20% EA в PE) с получением соединения 29c (6,4 г) в виде бесцветного масла. ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 5,83 (д, J=3,8 Гц, 1H), 4,77 (т, J=4,1 Гц, 1H), 4,23-4,08 (м, 3H), 3,89-3,76 (м, 1H), 2,19 (дд, J=3,9, 13,4 Гц, 1H), 1,82-1,73 (м, 1H), 1,52 (с, 3H), 1,43 (с, 3H), 1,35 (д, J=15,3 Гц, 6H).

Стадия 3. Получение соединения 29d

Раствор соединения 29c (13,4 г, 54,85 ммоль) в смеси AcOH/вода (об./об., 1 : 1, 200 мл) перемешивали в течение 12 ч при 25 °C. Реакционный раствор концентрировали и совместно выпаривали с толуолом (2×40 мл) с получением соединения 29d (11,4 г) в виде бесцветного масла, использованного на следующей стадии без дополнительной очистки.

Стадия 4. Получение соединения 29e

К раствору соединения 29d (11,4 г, 8,81 ммоль) в MeOH (200 мл) и воде (100 мл) добавляли перйодат натрия (17,91 г, 83,73 ммоль). После перемешивания в течение 2 ч при 25°C фильтровали реакционную смесь и разбавляли фильтрат водным насыщенным Na₂S₂O₃ (50 мл); впоследствии концентрировали смесь для удаления MeOH. Остаток разделяли с 2-Me-THF (200 мл), экстрагировали водный слой с помощью 2-Me-THF (5×100 мл). Органические слои впоследствии объединяли, промывали солевым раствором, высушивали (безводный Na₂SO₄), фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением соединения 29e (11 г) в виде желтого масла, использованного на следующей стадии без дополнительной очистки.

Стадия 5. Получение соединения 29f

К раствору соединения 29e (11 г, 9,29 ммоль) в MeOH (200 мл) добавляли боргидрид натрия (2,9 г, 76,66 ммоль). После перемешивания в течение 1 ч при 0°C реакционную смесь гасили водным насыщенным NH₄Cl (60 мл) и концентрировали смесь для удаления MeOH. Остаток лиофилизировали с получением неочищенного продукта 29f. Неочищенный продукт смешивали с MeOH/DCM (об./об., 10 : 1, 200 мл), впоследствии фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка, очищенного посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (0-60% PE в EA) с получением соединения 29f (5,3 г) в виде желтого твердого вещества. ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ 5,83 (д, J=3,7 Гц, 1H), 4,77 (т, J=4,2 Гц, 1H), 4,41-4,30 (м, 1H), 3,90 (уш. д, J=12,0 Гц, 1H), 3,57 (уш. д, J=12,0 Гц, 1H), 2,01 (дд, J=4,5, 13,3 Гц, 1H), 1,89-1,81 (м, 2H), 1,33 (с, 3H).

Стадия 6. Получение соединения 29g

Уксусный ангидрид (6,51 мл, 68,9 ммоль) и концентрированную серную кислоту (36,91 мкл, 0,69 ммоль) добавляли к перемешанному раствору соединения 29f (1,2 г, 6,89 ммоль) в уксусной кислоте (39,4 мл, 688,89 ммоль) при 0 °C. После перемешивания при кт в течение 1 ч реакционную смесь гасили холодной водой (100 мл), перемешивали в течение при кт 30 мин и экстрагировали этилацетатом (3×60 мл). Органический слой последовательно промывали насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (3×90 мл), солевым раствором (2×90 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток (объединенный с силикагелем: 4 г) очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (0-40% EA в PE, об./об.) с получением соединения 29g (870 мг) в виде бесцветного масла. ¹H ЯМР (400 МГц, CD₃CN) δ 6,03 (с, 1H), 5,11 (д, J=4,6 Гц, 1H), 4,49 (дтд, J=3,3, 6,5, 9,6 Гц, 1H), 4,19 (дд, J=3,3, 11,9 Гц, 1H), 4,00 (дд, J=6,6, 12,0 Гц, 1H), 2,03-1,99 (м, 11H). Ту же реакцию повторяли несколько раз и объединяли все партии.

Стадия 7. Получение соединения 29i

Раствор соединения 29h (0,672 г, 4,42 ммоль) и BSA (3,13 г, 15,37 ммоль) в безводном CH₃CN (12 мл) перемешивали при 85°C в течение 1 ч и впоследствии охлаждали до 0 °C. Затем его по каплям добавляли к соединению 29g (1 г, 3,84 ммоль) и SnCl₄ (3,003 г, 11,53 ммоль) при 0°C с перемешиванием; после перемешивания смеси при 26°C в течение 24 ч неочищенную смесь объединяли с другой порцией, охлаждали и разбавляли с помощью EA (300 мл). Органический слой последовательно промывали водным насыщенным NaHCO₃ (4×200 мл), солевым раствором (2×150 мл), высушивали над безводным сульфатом натрия, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток (объединенный с силикагелем: 10 г) очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле: 20 г) (0%-10% MeOH в DCM, об./об.) с получением соединения 29i (3,52 г) в виде белой пены. ¹H ЯМР (400 МГц, CD₃OD-d₄) δ 6,22 (с, 1H), 5,75 (уш. д, J=5,5 Гц, 1H), 4,65 (уш. дд, J=3,6, 9,7 Гц, 1H), 4,31 (дд, J=3,3, 12,0 Гц, 1H), 4,12 (дд, J=5,6, 11,9 Гц, 1H), 3,35 (с, 3H), 2,80 (ддд, J=5,8, 10,0, 14,1 Гц, 1H), 2,33 (уш. дд, J=6,0, 13,8 Гц, 1H), 2,12 (с, 3H), 1,97-1,93 (м, 3H); ИЭР-МС: m/z=352,9 [M+H]⁺.

Стадия 8. Получение соединения 29j

К раствору соединения 29i (2 г, 5,677 ммоль) в DCM (20 мл) добавляли по каплям Et₃N (1,72 г, 17,03 ммоль) и хлорид изобутирила (1,21 г, 11,35 ммоль) при кт. После перемешивания при 25°C в течение 2 ч реакционную смесь гасили водой (50 мл), промывали солевым раствором (2×50 мл), высушивали над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением соединения 29j (2,39 г), используемого на следующей стадии без дополнительной очистки.

Стадия 9. Получение соединения 29k

К раствору соединения 29j (2,39 г, 5,67 ммоль) в THF (25 мл) добавляли по каплям метанолат натрия (1,23 г, 22,71 ммоль) при 0 °C. После перемешивания при 25°C в течение 2 ч добавляли по каплям дополнительное количество метанолата натрия (1,23 г, 22,71 ммоль). После перемешивания при 25°C в течение 0,5 ч смесь разбавляли насыщенной смесью вода/CH₃COOH (1 : 1, 4 мл) с доведением до pH 7, впоследствии концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток (объединенный с силикагелем: 10 г) очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (0-10% MeOH в DCM, об./об.) с получением соединения 29k (770 мг) в виде белой пены. ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ 12,09 (уш. с, 2H), 5,99 (с, 1H), 5,75 (уш. д, J=2,9 Гц, 1H), 4,80-4,70 (м, 2H), 4,49-4,36 (м, 1H), 3,51-3,40 (м, 2H), 2,79 (тд, J=6,8, 13,6 Гц, 1H), 2,43-2,30 (м, 1H), 2,07 (дд, J=6,7, 12,6 Гц, 1H), 1,13 (д, J=6,6 Гц, 6H); ИЭР-МС: m/z=339,1 [M+H]⁺.

Стадия 10. Получение соединения 29l

DMTrC1 (1,20 г, 3,54 ммоль) добавляли к раствору соединения 29k (1 г, 2,95 ммоль) в Py (10 мл). После перемешивания при 25°C в течение 12 ч смесь разделяли между EA (150 мл) и водой (100 мл). Смесь фильтровали и последовательно промывали органический слой солевым раствором (100 мл), высушивали над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали досуха с получением неочищенного остатка (масла). Остаток (объединенный с силикагелем, 5 г) очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (0-10% MeOH в DCM, об./об.) с получением соединения 29l (1,52 г) в виде желтой пены. ¹H ЯМР (400 МГц, CD3CN) δ7,32 (дд, J=1,6, 7,9 Гц, 2H), 7,22-7,10 (м, 7H), 6,73 (дд, J=8,8, 13,9 Гц, 4H), 6,13 (с, 1H), 4,93 (уш. с, 1H), 4,77-4,57 (м, 1H), 3,77 (уш. с, 1H), 3,73 (д, J=3,9 Гц, 6H), 3,23-3,04 (м, 2H), 2,70 (спт, J=6,9 Гц, 1H), 2,57 (ддд, J=5,3, 9,8, 13,3 Гц, 1H), 2,08 (дд, J=6,4, 13,4 Гц, 1H), 1,19 (д, J=6,8 Гц, 6H). ИЭР-МС: m/z=663,3 [M+Na]⁺.

Стадия 11. Получение соединения 29n

Йодид тетрабутиламмония (0,89 г, 2,41 ммоль), трифенилфосфин (4,74 г, 18,08 ммоль), тетрабромистый углерод (5,996 г, 18,080 ммоль), NaN₃ (3,330 г, 51,223 ммоль) добавляли к раствору соединения 29m (4,5 г, 12,05 ммоль, CAS № 144924-99-2cb) в DMF (70 мл) при 30 °C. После перемешивания при 30°C в течение 24 ч к раствору добавляли дополнительное количество йодида тетрабутиламмония (0,89 г, 2,41 ммоль), трифенилфосфина (4,74 г, 18,00 ммоль) и тетрабромистого углерода (5,99 г, 18,08 ммоль). После перемешивания в течение еще 24 ч смесь разбавляли водным насыщенным Na₂CO₃ (150 мл) для доведения смеси до pH 9 и экстрагировали смесь этилацетатом (200 мл x 3). Органические слои впоследствии объединяли и последовательно промывали солевым раствором (100 мл), сушили безводным Na₂SO₄, фильтровали и выпаривали при пониженном давлении с получением желтого твердого вещества. Реакцию повторяли несколько раз и объединяли все партии. Остаток (объединенный с силикагелем: 30 г) очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (силикагель: 120 г) (градиентное элюирование: 0-100% этилацетата в петролейном эфире, затем 0-20% метанола в этилацетате) с получением соединения 29n (9,5 г) в виде желтого твердого вещества. ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ м. д. 11,28 (уш. с, 1H), 8,78 (с, 1H), 8,54 (д, J=2,4 Гц, 1H), 8,08-8,02 (м, 2H), 7,68-7,62 (м, 1H), 7,58-7,52 (м, 2H), 6,66-6,58 (м, 1H), 6,18 (уш. с, 1H), 5,46-5,24 (м, 1H), 4,56 (тд, J=4,4, 19,1 Гц, 1H), 4,08-4,04 (м, 1H), 3,72-3,68 (м, 1H); ¹⁹F ЯМР (376 МГц, DMSO-d₆) δ м. д. -197,05 (с, 1H); ИЭР-МС: m/z=398,9 [M+H]⁺.

Стадия 12. Получение соединения 29o

К раствору соединения 29n (8,5 г, 21,33 ммоль) и DMAP (1,3 г, 10,67 ммоль) в пиридине (90 мл) добавляли DMTrCl (14,46 г, 42,67 ммоль) при 25 °C. После перемешивания при 80°C в течение 14 ч смесь разделяли между DCM (200 мл) и водой (50 мл). Органический слой промывали солевым раствором (100 мл), высушивали над безводным Na₂SO₄, фильтровали и выпаривали растворитель при пониженном давлении с получением неочищенного продукта 29o. Его объединяли с другой порцией и очищали; остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (PE/(EA/DCM=1/1) от 10% до 100%) с получением соединения 29o (9,5 г) в виде светло-желтого твердого вещества. ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ9,00 (уш. с, 1H), 8,84 (уш. с, 1H), 8,20 (уш. с, 1H), 8,02 (уш. д, J=7,6 Гц, 2H), 7,64-7,58 (м, 1H), 7,54 (уш. т, J=7,5 Гц, 2H), 7,46 (уш. д, J=7,1 Гц, 2H), 7,40-7,34 (м, 5H), 7,30 (уш. д, J=7,3 Гц, 1H), 6,94-6,84 (м, 4H), 6,58-6,48 (м, 1H), 4,48-4,34 (м, 2H), 4,18-4,06 (м, 1H), 3,38 (уш. д, J=13,0 Гц, 1H), 3,18 (уш. дд, J=5,9, 13,9 Гц, 1H); ¹⁹F ЯМР (376 МГц, CDCl₃) δ -196,176 (с, 1F); ИЭР-МС: m/z 701,2 [M+H]⁺.

Стадия 13. Получение соединения 29p

К раствору соединения 29o (10,0 г, 14,27 ммоль) в THF (100 мл) добавляли трифенилфосфин (5,24 г, 1,99 ммоль) при 25 °C. После перемешивания раствора при 40°C в течение 2 ч к раствору добавляли воду (50 мл) при 40°C и перемешивали смесь в течение 12 ч. Реакционную смесь разделяли между DCM (200 мл) и солевым раствором (2×50 мл). Органический слой концентрировали при пониженном давлении с получением желтого твердого вещества (10,0 г). Желтое твердое вещество (объединенное с силикагелем: 20 г) очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (DCM/MeOH=0-20%) с получением соединения 29p (6,6 г) в виде белого твердого вещества. ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ м. д. 8,74 (с, 1H), 8,46 (д, J=2,7 Гц, 1H), 8,06-7,98 (м, 2H), 7,64 (д, J=7,3 Гц, 1H), 7,58-7,50 (м, 2H), 7,48 (д, J=7,6 Гц, 2H), 7,38-7,32 (м, 6H), 7,30-7,26 (м, 1H), 6,94 (дд, J=3,4, 8,8 Гц, 4H), 6,50-6,40 (м, 1H), 4,38-4,32 (м, 1H), 4,24-4,08 (м, 2H), 3,74 (д, J=2,9 Гц, 6H), 2,68-2,54 (м, 2H); ¹⁹F ЯМР (376 МГц, DMSO-d₆) δ м. д. -195,79 (с, 1F); ИЭР-МС: m/z=675,3 [M+H]⁺.

Стадия 14. Получение соединения 29q

4-Нитрофенол (0,92 г, 6,67 ммоль) и триэтиламин (1,35, 13,34 ммоль) добавляли к раствору соединения 29p (1,5 г, 2,22 ммоль) в DCM (40 мл). Полученный раствор перемешивали при -78°C и добавляли раствор хлорсульфата 4-нитрофенил (1,58 г, 6,67 ммоль) в DCM (5 мл) при -78 °C. После перемешивания при -78°C в течение 1 ч реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток (объединенный с силикагелем: 4 г) очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (0-100% PE в EA) с получением соединения 29q (1,4 г) в виде светло-желтого твердого вещества, хранимого при -20 °C. ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ м. д. 8,94 (уш. с, 1H), 8,64 (с, 1H), 8,48 (уш. с, 1H), 8,18-8,08 (м, 2H), 8,00 (уш. д, J=7,8 Гц, 2H), 7,96 (с, 1H), 7,66-7,60 (м, 1H), 7,58-7,52 (м, 2H), 7,44 (уш. д, J=7,8 Гц, 2H), 7,38-7,28 (м, 7H), 6,92-6,84 (м, 4H), 6,40-6,26 (м, 1H), 4,48-4,42 (м, 2H), 4,28 (уш. с, 1H), 3,86-3,76 (м, 6H), 3,56 (уш. д, J=13,2 Гц, 1H), 3,32 (уш. д, J=13,7 Гц, 1H); ¹⁹F ЯМР (376 МГц, CDCl₃) δ м. д. -193,08 (с, 1F); ИЭР-МС: m/z 876,6 [M+H]⁺.

Стадия 15. Получение соединения 29r

Раствор соединения 29l (800 мг, 1,25 ммоль), соединения 29q (1,64 г, 1,87 ммоль) и активированные молекулярные сита 4Å (3 г) в THF (24 мл) перемешивали в атмосфере N₂ при комнатной температуре в течение 0,5 ч Впоследствии в один прием добавляли DMAP (762,73 мг, 6,24 ммоль). После перемешивания при кт в течение 2 ч в атмосфере N₂ и впоследствии при 45°C в течение 12 ч в атмосфере N₂ реакционную смесь разбавляли с помощью EA (100 мл), затем фильтровали через слой диатомитовой земли. Фильтрат промывали водным насыщенным NaHCO₃ (6×50 мл). Органический слой последовательно промывали солевым раствором (50 мл), высушивали над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток (объединенный с силикагелем: 5 г) очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (0-10% MeOH в DCM, об./об.) с получением соединения 29r (1,4 г) в виде белого твердого вещества. ИЭР-МС: m/z=1377,1 [M+H]⁺.

Стадия 16. Получение соединения 29s

К раствору соединения 29r (1,4 г, 1,01 ммоль) в DCM (24 мл) добавляли дихлоруксусную кислоту (262 мг, 2,03 ммоль) и воду (0,183 мл) при кт. После перемешивания в атмосфере N₂ при кт в течение 3 ч к раствору добавляли пиридин (0,8 г, 10,16 ммоль). После перемешивания в течение 2 ч смесь концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток (объединенный с силикагелем: 6 г) очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (MeOH/DCM=0-10%) с получением соединения 29s (570 мг) в виде белого твердого вещества. ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ м. д. 12,15-11,97 (м, 2H), 11,22 (с, 1H), 8,78 (т, J=5,9 Гц, 1H), 8,67 (с, 1H), 8,41 (д, J=1,5 Гц, 1H), 8,09-8,00 (м, 2H), 7,69-7,61 (м, 1H), 7,60-7,51 (м, 2H), 6,51 (дд, J=3,8, 17,6 Гц, 1H), 6,34 (с, 1H), 6,23 (д, J=4,0 Гц, 1H), 5,95 (с, 1H), 5,33-5,13 (м, 1H), 4,76 (т, J=5,5 Гц, 1H), 4,51-4,33 (м, 2H), 4,18-4,02 (м, 2H), 3,54-3,36 (м, 3H), 2,90-2,73 (м, 1H), 2,69-2,56 (м, 1H), 2,40 (уш. дд, J=6,0, 14,3 Гц, 1H), 1,13 (дд, J=6,9, 10,2 Гц, 6H); ¹⁹F ЯМР (376 МГц, DMSO-d6) δ м. д. -197,57 (с, 1F); ИЭР-МС: m/z=773,3 [M+H]⁺.

Стадия 17. Получение соединения 29t

THF перед работой перегоняли над Na/бензофеноном, а CH₃CN перед работой перегоняли над CaH₂ до применения.

Высушенное в вакууме соединение 29s (100 мг, 0,13 ммоль) выпаривали со смесью CH₃CN и THF (2/2 мл x 3), впоследствии растворяли в смеси THF (5 мл). Впоследствии добавляли молекулярные сита 4Å (500 мг) и раствор 1H-тетразола (2,301 мл, 0,45 M, полученный путем растворения 315 мг тетразола в 10 мл безводного CH₃CN, с последующим добавлением 500 мг молекулярных сит 4Å и перемешиванием в течение 1 ч в атмосфере N₂ до применения). Полученную белую суспензию перемешивали в течение 5 мин при кт в атмосфере N₂. Впоследствии по каплям добавляли раствор 2-цианоэтилтетраизопропилфосфородиамидита (78,01 мг, 0,26 ммоль) в THF (1 мл) в течение 5 мм посредством шприца. Полученную белую суспензию дополнительно перемешивали в течение 1 ч при 35°C в атмосфере N₂. Раствор TBHP (0,118 мл, 0,65 ммоль, 5 ~ 6M в декане) добавляли посредством шприца и перемешивали в течение еще 30 мин. Смесь разбавляли с помощью DCM (20 мл), впоследствии фильтровали через слой диатомитовой земли и концентрировали с получением неочищенного продукта в виде бесцветного масла. Неочищенный продукт (объединенный с силикагелем: 2 г) очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (0-6% MeOH в DCM, об./об.) с получением соединения 29t (72 мг) в виде белого твердого вещества. ИЭР-МС: m/z=887,9 [M+H]⁺.

Стадия 18. Получение соединения 45 (натриевая соль)

Соединение 29t (72 мг, 0,082 ммоль) объединяли с метиламином (5,0 мл); после перемешивания при кт в течение 4 ч реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного продукта. Неочищенный продукт очищали посредством обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (колонка: Xbridge 10 мкм=150×30 мм, условия: вода (10 мМ NH₄HCO₃)-ACN B: 0, конец B 25, время градиентного элюирования (мин): 7, 100% B, время удержания (мин): 0, скорость потока (мл/мин): 25) с получением соединения 45 (аммонийная соль) (6,9 мг) в виде белого твердого вещества. ¹H ЯМР (400 МГц, D₂O) δ м. д. 8,12 (с, 1H), 7,67 (уш. с, 1H), 6,52 (уш. дд, J=4,9, 11,7 Гц, 1H), 6,31 (уш. д, J=7,0 Гц, 1H), 6,18-6,04 (м, 1H), 5,64-5,43 (м, 1H), 5,32-5,20 (м, 1H), 4,37 (уш. д, J=3,5 Гц, 1H), 4,15-4,03 (м, 2H), 3,57-3,46 (м, 2H), 2,83-2,71 (м, 1H), 2,67-2,56 (м, 1H); ¹⁹F ЯМР (376 МГц, D₂O) δ м. д. -195,88 (с, 1F); ³¹P ЯМР (162 МГц, D₂O) δ м. д. -1,513 (с, 1P); ИЭР-МС: m/z=661,1101 [M+H]⁺.

Превращение в натриевую соль. Смолу Dowex 50W × 8, 200-400 (8 мл, H-форма) помещали в стакан и промывали деионизированной водой (30 мл). Впоследствии к смоле добавляли 15% H₂SO₄ в деионизированной воде, смесь осторожно перемешивали в течение 5 мин и декантировали (30 мл). Смолу переносили на колонку с 15% H₂SO₄ в деионизированной воде и промывали 15% H₂SO₄ (по меньшей мере 4 объема колонки) и впоследствии деионизированной водой до достижения нейтрального pH. Смолу переносили обратно в стакан, добавляли раствор 15% NaOH в деионизированной воде и смесь осторожно перемешивали в течение 5 мин и декантировали (1 ×). Смолу переносили на колонку и промывали 15% NaOH в воде (по меньшей мере 4 объема колонки) и впоследствии деионизированной водой до достижения нейтрального pH. Соединение 45 (аммонийная соль) (6,9 мг) растворяли в минимальном количестве деионизированной воды и CH₃CN (1 : 1, об./об., 5 мл), помещали в верхнюю часть колонки и элюировали деионизированной водой. Соответствующие фракции объединяли и лиофилизировали с получением соединения 45 (натриевая соль) (2 мг) в виде белого твердого вещества. ¹H ЯМР (400 МГц, D₂O) δ м. д. 8,20 (с, 1H), 7,74 (уш. с, 1H), 6,58 (дд, J=5,1, 11,7 Гц, 1H), 6,37 (д, J=7,1 Гц, 1H), 6,24-6,13 (м, 1H), 5,69-5,51 (м, 1H), 5,42-5,29 (м, 1H), 4,85-4,83 (м, 1H), 4,70 (уш. дд, J=2,3, 6,2 Гц, 1H), 4,43 (уш. д, J=3,4 Гц, 1 H), 4,23-4,10 (м, 2H), 3,64-3,50 (м, 2H), 2,91-2,78 (м, 1H), 2,73-2,64 (м, 1H); ¹⁹F ЯМР (376 МГц, D₂O) δ м. д. -195,902 (с, 1F); ³¹P ЯМР (162 МГц, D₂O) δ м. д. -1,54 (с, 1P); ИЭР-МС: m/z=661,2 [M+H]⁺.

Пример 30

Стадия 1. Получение соединения 30a

Примечание. THF перед работой перегоняли над Na/бензофеноном, а CH₃CN перед работой перегоняли над CaH₂ перед применением.

Соединение 29s (200 мг, 0,26 ммоль) растворяли в THF (6 мл) и CH₃CN (10 мл), к которому добавляли 0,3 г молекулярных сит 4Å (порошок) и раствор 1H-тетразола (4,6 мл, 0,45 M, высушен на активированных молекулярных ситах до применения). Добавляли по каплям посредством шприца раствор 2-цианоэтил-N, N,N',N'-тетра(изопропил)фосфородиамидита (156 мг, 0,52 ммоль) в THF (0,9 мл) в течение 10 мм. Полученную белую суспензию дополнительно перемешивали в течение 2 ч при 35°C в аргоновой атмосфере. Впоследствии к вышеуказанному раствору добавляли раствор DDTT (264,9 мг, 1,29 ммоль) в пиридине (10 мл) при 35 °C. После перемешивания реакционной смеси при 35°C в течение 1 ч смесь разбавляли с помощью EtOAc (20 мл), фильтровали через слой диатомитовой земли, слой промывали EtOAc и выпаривали фильтрат при пониженном давлении с получением неочищенного продукта. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (MeOH в DCM=0-7%) с получением соединения 30a (80 мг) в виде белого твердого вещества. ИЭР-МС: m/z=904,2 [M+H]⁺.

Стадия 2. Получение соединения (*R) 50A (натриевая соль)

Соединение 30a (80 мг) обрабатывали MeNH₂ (5 мл, в EtOH, 30%) при 25 °C. После перемешивания реакционной смеси при 25°C в течение 3 ч растворитель выпаривали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток растворяли в смеси H₂O/CH₃CN (30 мл) и промывали DCM (3×15 мл). Водную фазу лиофилизировали с получением неочищенного продукта (71 мг) в виде желтого твердого вещества. Остаток очищали посредством обращенно-фазной препаративной ВЭЖХ (способ: колонка Waters Xbridge Prep OBD 5 мкм C18 150×30; условия: вода (10 мМ NH₄HCO₃)(A)-ACN(B), начало B 0, конец B 23; время градиентного элюирования (мин) 7; 100% B; время удержания (мин) 0; скорость потока (мл/мин) 25) с получением соединения (*R) 50A (аммонийная соль) (8 мг, 9%) в виде белого твердого вещества. ¹H ЯМР (400 МГц, D2O) δ 8,63 (уш. с, 1H), 8,51 (д, J=1,7 Гц, 1H), 6,94 (уш. д, J=18,8 Гц, 1H), 6,65 (уш. д, J=3,4 Гц, 1H), 6,39 (уш. д, J=2,9 Гц, 1H), 6,20-6,00 (м, 1H), 5,71 (уш. т, J=11,4 Гц, 1H), 5,06 (уш. с, 1H), 4,70-4,60 (м, 1H), 4,56-4,47 (м, 1H), 4,04-3,96 (м, 1H), 3,94-3,85 (м, 1H), 3,27-3,17 (м, 1H), 3,16-3,03 (м, 1H); ¹⁹F ЯМР (376 МГц, D2O) δ м. д. -195,682; ³¹P ЯМР (162 МГц, D2O) δ м. д. 54,318; ИЭР-МС: m/z 677,2 [M+H]⁺.

Превращение в натриевую соль

Смолу Dowex 50W × 8, 200-400 (2 мл, H-форма) помещали в стакан и промывали деионизированной водой (10 мл). Впоследствии к смоле добавляли 15% H₂SO₄ в деионизированной воде, смесь осторожно перемешивали в течение 5 мин и декантировали (15 мл). Смолу переносили на колонку с 15% H₂SO₄ в деионизированной воде и промывали 15% H₂SO₄ (по меньшей мере 4 объема колонки) и впоследствии деионизированной водой до достижения нейтрального pH. Смолу переносили обратно в стакан, добавляли раствор 15% NaOH в деионизированной воде и смесь осторожно перемешивали в течение 5 мин и декантировали (1 ×). Смолу переносили на колонку и промывали 15% NaOH в воде (по меньшей мере 4 объема колонки) и впоследствии деионизированной водой до достижения нейтрального pH. Соединение (*R) 50A (аммонийная соль) (4 мг) растворяли в минимальном количестве смеси деионизированная вода : CH₃CN (3 : 1, об./об., 8 мл), добавляли в верхнюю часть колонки и элюировали деионизированной водой. Соответствующие фракции объединяли и лиофилизировали с получением соединения (*R) 5QA (натриевая соль) (2,4 мг, 58%) в виде белого твердого вещества. ¹H ЯМР (400 МГц, D2O) δ м. д. 8,25 (с, 1H), 7,88 (с, 1H), 6,59 (дд, J=4,3, 15,5 Гц, 1H), 6,33 (д, J=6,8 Гц, 1H), 6,15-6,01 (м, 1H), 5,86-5,66 (м, 1H), 5,54-5,41 (м, 1H), 4,47 (уш. д, J=3,9 Гц, 1H), 4,29-4,12 (м, 2H), 3,65-3,54 (м, 2H), 2,88-2,79 (м, 1H), 2,76-2,69 (м, 1H); ¹⁹F ЯМР (376 МГц, D2O) δ м. д. -194,41; ³¹P ЯМР (162 МГц, D2O) δ м. д. 53,83; ИЭР-МС: m/z=677,1 [M+H]⁺.

Пример 31

Стадия 1. Получение соединения 31b

Бис(триметилсилил)ацетамид (BSA, 93,95 г, 461,9 ммоль) добавляли по каплям к суспензии 8-азагуанина (11,71 г, 77,0 ммоль) в безводном MeCN (340 мл) при 25 °C. Реакционную смесь перемешивали при 80°C в течение 3 ч и впоследствии охлаждали до комнатной температуры. Добавляли раствор 1,2-ди-O-ацетил-5-бензоил-3-O-метил-D-рибофуранозы 31a [CAS 10300-21-7] (13,56 г, 38,5 ммоль) в безводном MeCN (65 мл) с последующим добавлением SnCl4 (80,21 г, 307,9 ммоль) по каплям. Гомогенный раствор перемешивали при 80 °C в течение 30 мин, впоследствии охлаждали до комнатной температуры и выливали в ледяной 5% водный раствор NaHCO₃ (800 мл). Добавляли EtOAc (800 мл) и продолжали перемешивание в течение 10 мин. Реакционную смесь фильтровали и переносили фильтрат в разделительную воронку. Два слоя разделяли и экстрагировали водный слой с помощью EtOAc (200 мл × 2). Объединенные органические слои промывали 5% водным NaHCO₃ (600 мл x 2), высушивали над Na₂SO₄ и выпаривали досуха in vacuo с получением неочищенного соединения 31b (11,50 г). Неочищенный продукт использовали непосредственно в следующей реакции без дополнительной очистки. ¹H ЯМР (600 МГц, DMSO-d₆) δ м. д. 11,09 (уш. с, 1H), 7,88 (д, J=7,2 Гц, 2H), 7,61-7,68 (м, 1H), 7,44-7,52 (м, 2H), 7,04 (уш. с, 2H), 6,17 (д, J=1,7 Гц, 1H), 5,90 (дд, J=5,0, 2,1 Гц, 1H), 4,66 (дд, J=7, 1, 4,9 Гц, 1H), 4,53-4,58 (м, 1H), 4,35-4,42 (м, 2H), 3,41 (с, 3H), 2,14 (с, 3H); ИЭР-МС: m/z 445,5 [M+H]⁺.

Стадия 2. Получение соединения 31c

К раствору вышеуказанного неочищенного соединения 31b (11,50 г) в безводном диметилацетамиде (57,5 мл) добавляли по каплям изомасляный ангидрид (6,14 г, 38,8 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 140°C в течение 2 ч впоследствии охлаждали до комнатной температуры и разбавляли с помощью EtOAc (300 мл). Полученный раствор промывали 10% водным NH₄Cl (300 мл x 3) и солевым раствором (300 мл). Органический слой высушивали над Na₂SO₄ и концентрировали досуха in vacuo с получением неочищенного соединения 31c (13,30 г). Неочищенный продукт использовали непосредственно в следующей реакции без дополнительной очистки.

Стадия 3. Получение соединения 31d

К раствору неочищенного соединения 31c (11,98 г, со стадии 2) в THF (42 мл), MeOH (35 мл) и H₂O (11 мл), добавляли 5 N NaOH (11 мл, 55 ммоль) при 0 °C. Реакционную смесь перемешивали при 0°C в течение 4 ч. pH реакционной смесь доводили до 6,5 муравьиной кислотой. Полученный раствор концентрировали in vacuo досуха и несколько раз растирали остаток с MeCN и H₂O с получением соединения 31d (1,55 г, выход: 14% из 31b). ¹H ЯМР (600 МГц, DMSO-d₆) δ м. д. 12,07 (уш. с, 2H), 5,97 (д, J=4,4 Гц, 1H), 5,68 (уш. с, 1H), 4,92 (уш. с, 1H), 4,84 (уш. с, 1H), 4,01-4,08 (м, 2H), 3,52-3,59 (м, 1H), 3,44-3,50 (м, 1H), 3,43 (с, 3H), 2,79 (спт, J=6,8 Гц, 1H), 1,13 (д, J=6,8 Гц, 6H); ИЭР-МС: m/z=369,5 [M+H]⁺.

Стадия 4. Получение соединения 31e

К раствору соединения 31d (1,10 г, 3,0 ммоль) в безводном пиридине (20,0 мл) добавляли раствор DMTrCl (1,32 г, 3,9 ммоль) в пиридине (3,0 мл) при 0 °C. Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 12 ч, после чего разбавляли EtOAc и промывали насыщенным NaHCO₃, водой и солевым раствором. Органический слой высушивали над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали досуха при 40 °C. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 20-50% EtOAc в гептане) с получением соединения 31e в виде белого твердого вещества (1,52 г, выход: 76%). ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ м. д. 11,87 (уш. с, 1H), 7,24-7,28 (м, 2H), 7,10-7,24 (м, 7H), 6,76-6,82 (м, 4H), 6,06 (д, J=2,7 Гц, 1H), 5,79 (уш. д, J=4,6 Гц, 1H), 5,01 (уш. с, 1H), 4,18-4,24 (м, 2H), 3,71 (с, 6H), 3,36 (с, 3H), 3,15-3,20 (м, 1H), 3,05 (уш. дд, J=10,0, 3,9 Гц, 1H), 2,80 (спт, J=6,8 Гц, 1H), 1,13 (д, J=6,9 Гц, 6H); ИЭР-МС: m/z 671,4 [M+H]⁺.

Стадия 5. Получение соединения 31f

Соединение 31e (1,30 г, 1,94 ммоль), DMAP (546 мг, 4,47 ммоль) и сульфамат 17a (1,18 г, 1,33 ммоль) растворяли по отдельности в безводном DCE (3×3 мл). Каждый раствор высушивали с помощью активированных молекулярных сит 3Å путем перемешивания в атмосфере N₂ в течение ночи. К раствору сульфамата 17a в DCE были соответственно добавлены раствор DMAP в DCE и раствор соединения 31e в DCE (посредством шприца). Реакционную смесь перемешивали при 60°C в атмосфере N₂ в течение 4 ч. Эту смесь разбавляли DCM и фильтровали, фильтрат промывали последовательно 2% водным раствором уксусной кислоты, 5% водным NaHCO₃ и солевым раствором и впоследствии выпаривали досуха при пониженном давлении. Остаток растворяли в DCM и очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0,6-1% EtOH в DCM) с получением соединения 31f в виде желтого твердого вещества (0,53 г, выход: 28%). ИЭР-МС: m/z 1407,6 [M+H]⁺.

Стадия 5. Получение соединения 31g

Раствор соединения 31f (480 мг, 0,34 ммоль) в DCM (5 мл), к которому добавляли воду (30,8 мг, 1,71 ммоль) и DCA (220 мг, 1,71 ммоль), перемешивали в течение 4 ч при комнатной температуре. Далее реакционную смесь промывали 5% водным NaHCO₃ и солевым раствором. Органическую фазу высушивали над Na₂SO₄ и концентрировали досуха при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 1-5% EtOH в DCM) с получением соединения 31g в виде белого твердого вещества (150 мг, выход: 55%). ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ м. д. 11,90 (уш. с, 1H), 11,27 (уш. с, 1H), 8,74 (с, 1H), 8,62 (с, 1H), 8,04 (д, J=7,6 Гц, 2H), 7,61-7,70 (м, 1H), 7,51-7,59 (м, 2H), 6,38 (д, J=19,5 Гц, 1H), 6,29 (д, J=2,3 Гц, 1H), 5,51-5,69 (м, 2H), 4,90 (уш. с, 1H), 4,63 (ддд, J=20,4, 7,6, 4,6 Гц, 1H), 4,47 (уш. т, J=5,5 Гц, 1H), 4,00-4,12 (м, 2H), 3,55-3,61 (м, 1H), 3,42-3,47 (м, 2H), 3,39 (с, 3H), 3,21-3,29 (м, 1H), 2,77 (спт, J=6,7 Гц, 1H), 1,11 (д, J=6,9 Гц, 6H); ИЭР-МС: m/z 803,7 [M+H]⁺.

Стадия 6. Получение соединения 31h

Раствор соединения 31g (100 мг, 0,125 ммоль) и 1H-тетразола (2,22 мл, 0,45 M раствор в MeCN, 0,998 ммоль) в безводном THF (2 мл) обрабатывали молекулярными ситами 4Å в атмосфере N₂ в течение 1 ч, после чего по каплям добавляли 2-цианоэтил-N, N,N',N'-тетра(изопропил)-фосфородиамидит (67,5 мг, 0,22 ммоль) в безводном MeCN (0,6 мл) в течение 15 мин (Примечание. THF перед работой перегоняли над Na/бензофеноном, а MeCN перед работой перегоняли над CaH₂ до применения). Полученную реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 90 мин. Добавляли раствор tBuOOH (199 мкл, 0,99 ммоль) и продолжали перемешивание в течение еще 30 мин. Реакционную смесь фильтровали через слой диатомитовой земли и концентрировали. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-10% MeOH в DCM) с получением соединения 31h в виде белого твердого вещества (595 мг, выход: 30%). ИЭР-МС: m/z=918,4 [M+H]⁺.

Стадия 7. Получение соединения 51 (натриевая соль)

Соединение 31h (32 мг, 0,035 ммоль) перемешивали в 33% растворе метиламина в этаноле (12 мл) при 40°C в течение 2,5 ч. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Остаток растворяли в воде, промывали DCM и лиофилизировали. Неочищенный продукт очищали посредством препаративной обращенно-фазной ВЭЖХ (неподвижная фаза: Xbridge OBD C18, 5 мкм, 150×30 мм; подвижная фаза: 10 мМ водный бикарбонат аммония (A) - MeCN (B); градиентное элюирование). Заключительное превращение в натриевую соль проводили элюированием водным раствором колонки, заполненной натриевой катионообменной смолой, с получением соединения 51 (натриевая соль) в виде рыхлого белого твердого вещества после лиофилизации (14 мг, выход: 55%). ¹H ЯМР (400 МГц, D₂O) δ м. д. 8,15 (уш. с, 1H), 7,10 (уш. с, 1H), 6,51-6,45 (м, 1H), 6,41 (уш. с, 1H), 6,16 (уш. с, 1H), 5,36-5,12 (м, 2H), 4,61 (уш. д, J=2,4 Гц, 1H), 4,52 (уш. д, J=8,8 Гц, 1H), 4,38 (д, J=4,8 Гц, 1H), 4,23 (дд, J =2,4, 4,8 Гц, 2H), 3,77 (уш. д, J=13,2 Гц, 1H), 3,57 (с, 3H), 3,42 (уш. д, J=12,8 Гц, 1H); ³¹P ЯМР (162 МГц, D₂O) δ м. д. -1,81 (с, 1P); ¹⁹F ЯМР (376 МГц, D₂O) δ м. д. -196,87-197,38 (м, 1F); ИЭР-МС: m/z 691,0 [M+H]⁺.

Пример 32

Получение соединения 32a

Высушенный в вакууме диол 3q (250 мг, 0,307 ммоль) совместно выпаривали со смесью CH₃CN/THF (8/5 мл x 3) и растворяли в смеси CH₃CN/THF (7,5/5 мл). Добавляли 600 мг активированных молекулярных сит 4Å и раствор 1H-тетразола в CH₃CN (5,47 мл, 0,45 M, полученный до применения путем растворения 630 мг тетразола в 20 мл безводного CH₃CN с последующим добавлением 600 мг молекулярных сит 4Å и впоследствии перемешивали в течение 1 ч в аргоновой атмосфере). После перемешивания белой суспензии в течение 1 ч при 8 °C в аргоновой атмосфере добавляли по каплям раствор 2-цианоэтил-N, N,N',N'-тетраизопропилфосфородиамидита CH₃CN (4,69 мл, 0,49 ммоль, 0,105 M в CH₃CN, получен до применения путем растворения 506 мг амидита в 16 мл CH₃CN с последующим добавлением 600 мг молекулярных сит 4Å и впоследствии перемешиванием в течение 1 ч в аргоновой атмосфере) в течение 60 мин. Полученную белую суспензию перемешивали в течение 1 ч при 8 °C в аргоновой атмосфере. Добавляли дополнительное количество CH₃CN (5 мл) и после перемешивания при 30 °C в течение 1 ч добавляли дополнительное количество тетразола (1,36 мл, 0,61 ммоль). После перемешивания в течение еще 2 ч быстро добавляли TBHP (0,5 мл, 2,5 ммоль, 5 M в декане). После перемешивания в течение 30 мин смесь фильтровали через слой диатомитовой земли; фильтрат объединяли с другой порцией и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка, растворенного в DCM (8 мл) и очищенного посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (0-6% MeOH в DCM, 25 мл/мин) с получением 32a (136 мг) в виде белого твердого вещества. ИЭР-МС: m/z=927 [M+H]⁺.

Вышеуказанное твердое вещество объединяли с другой порцией и дополнительно очищали посредством обращенно-фазной препаративной ВЭЖХ (колонка: Xtimate 5 мкм C18 150×25; подвижная фаза: вода (10 мМ NH₄HCO₃)-ACN, начало B 23, конец B 53; скорость потока: 25 мл/мин, время градиентного элюирования: 9 мин, затем B 100 в течение 3 мин); нужные фракции собирали и лиофилизировали с получением 36a в виде белого твердого вещества. ¹H ЯМР (400 МГц, CD₃CN) δ 9,36 (тд, J=3,7, 7,2 Гц, 2H), 8,72-8,60 (м, 1H), 8,73-8,56 (м, 1H), 8,18 (с, 1H), 8,12-7,96 (м, 3H) 7,86 (с, 1H), 7,82 (с, 1H), 7,71-7,62 (м, 1H), 7,62-7,51 (м, 2H), 6,21 (с, 1H), 6,06-5,94 (м, 1H), 5,46-5,37 (м, 1H), 5,37-5,29 (м, 1H), 5,28-5,21 (м, 1H), 4,82 (дд, J=6,2, 11,1 Гц, 1H), 4,63 (дд, J=3,9, 11,2 Гц, 1H), 4,48 (дд, J=2,8, 11,4 Гц, 1H), 4,45-4,38 (м, 1H), 4,35-4,19 (м, 2H), 4,17-4,07 (м, 2H), 4,03-3,93 (м, 1H), 3,89-3,79 (м, 1H), 3,68-3,58 (м, 2H), 3,59-3,50 (м, 1H), 2,80 (т, J=5,9 Гц, 1H), 2,54 (тд, J=5,2, 17,2 Гц, 1H), 2,42-2,27 (м, 1H), 1,10-1,02 (м, 3H), 0,88 (д, J=6,8 Гц, 1H), 0,83 (д, J=6,8 Гц, 1H);

³¹P ЯМР (162 МГц, CD₃CN) = 3,07 (с, 1P), 3,15 (с, 1P); ИЭР-МС: m/z=927,3 [M+H]⁺.

Получение соединения 25 (натриевая соль)

Раствор соединения 32a (30,5 мг, 0,033 ммоль) в MeNH₂ (27-30% в EtOH, 5 мл) перемешивали при 5 °C в течение 4 ч. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении с получением остатка; остаток разделяли между DCM/водой (10/15 мл). Водный слой промывали с помощью DCM (8 мл x 3) и лиофилизировали. Неочищенное соединение суспендировали в 6 мл этилацетата, подвергали ультразвуковой обработке (3 мин) и центрифугировали (5 мин). Вышеуказанный супернатант собирали и повторяли указанную выше процедуру дважды. Осадок разделяли между DCM/водой (10/15 мл). Водный слой экстрагировали с помощью DCM (10 мл x 2) и лиофилизировали с получением твердого вещества. Заключительное превращение в натриевую соль проводили элюированием водным раствором колонки, заполненной натриевой катионообменной смолой, с получением соединения 25 (натриевая соль) в виде рыхлого белого твердого вещества после лиофилизации (60,1 мг). ¹H ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,15-7,90 (м, 1H), 7,83 (уш. с, 2H), 7,69 (уш. с, 1H), 6,90-6,72 (м, 1H), 6,08-5,82 (м, 1H), 4,45-4,15 (м, 3H), 4,16-3,88 (м, 1H), 3,28 (т, J=6,8 Гц, 1H), 2,87 (т, J=6,7 Гц, 1H), 2,68-2,59 (м, 1H), 2,46 (с, 4H); ³¹P ЯМР (162 МГц, D₂O) δ-2,4 (с, 1P); ИЭР-МС: m/z=700 [M+H]⁺.

Пример 33

Стадия 1. Получение соединений 33b и 33c

Раствор соединения 33a (600 мг, 0,75 ммоль) и 1H-тетразола (8,97 мл 3-4% в MeCN, высушен на молекулярных ситах 3Å до применения) в смеси 1 : 1 MeCN/THF (110 мл, высушен на молекулярных ситах 3Å до применения) обрабатывали активированными молекулярными ситами 3Å в атмосфере N₂ в течение 1 ч, после чего в один прием добавляли 2-цианоэтил-N, N,N',N'-тетра(изопропил)фосфородиамидит (240 мкл, 0,75 ммоль). Реакционную смесь встряхивали при комнатной температуре в течение 3,5 ч. Добавляли дополнительное количество 2-цианоэтил-N, N,N',N'-тетраизопропилфосфородиамидита (0,12 мл, 0,37 ммоль) и продолжали встряхивание в течение ночи. Далее добавляли дисульфид фенилацетила (PADS, 0,45 г, 1,5 ммоль), встряхивали реакционную смесь в течение еще 18 часов. Молекулярные сита удаляли фильтрованием и промывали дихлорметаном. Объединенные фильтраты последовательно промывали смесью насыщенного водного Na₂S₂O₃ и насыщенного водного NaHCO₃ (1 : 1) и солевым раствором, высушивали с помощью MgSO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-10% MeOH в DCM) с получением соединения 33b (122 мг, выход: 17%) в виде первого элюируемого изомера и соединения 33c (39 мг, выход: 5%) в виде второго элюируемого изомера. Соединение 33b. ИЭР-МС: m/z 933,5 [M+H]⁺. Соединение 33c. ИЭР-МС: m/z 933,6 [M+H]⁺.

Стадия 2. Получение соединения (R*) 23A (натриевая соль) и соединения (S*) 23B (натриевая соль)

Соединение 33b (122 мг, 0,13 ммоль) перемешивали в 33% растворе метиламина в этаноле (7 мл) при 45°C до полного превращения (прибл. 1 ч). Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и концентрировали при пониженном давлении. Полученный неочищенный продукт растирали в MeCN с последующей очисткой посредством препаративной обращенно-фазной ВЭЖХ (неподвижная фаза: XBridge C18 OBD, 5 мкм, 150×50 мм; подвижная фаза: водный 0,25% бикарбонат аммония (A)-MeOH (B); градиентное элюирование) с получением соединения (R*) 23A. Заключительное превращение в натриевую соль проводили элюированием водным раствором колонки, заполненной натриевой катионообменной смолой, с получением соединения (R*) 23A (натриевая соль) в виде рыхлого белого твердого вещества после лиофилизации (13 мг, выход: 14%). ¹H ЯМР (400 МГц, D₂O) δ м. д. 8,23 (с, 1H), 8,19 (с, 1H), 7,82 (уш. с, 1H), 6,44 (д, J=15,5 Гц, 1H), 5,92 (д, J=8,5 Гц, 1H), 5,65 (дд, J=50,6, 3,4 Гц, 1H), 5,42 (уш. с, 1H), 5,17 (ддд, J=21,8, 9,2, 3,4 Гц, 1H), 4,66-4,71 (м, 1H), 4,46-4,58 (м, 2H), 4,15 (уш. с, 1H), 4,00 (уш. дд, J=12,2, 4,1 Гц, 1H), 3,69-3,90 (м, 2H), 3,60 (с, 3H); ³¹P ЯМР (162 МГц, D₂O) δ м. д. 52,18 (с, 1P); ИЭР-МС: m/z 706,4 [M+H]⁺.

Соединение 33c (39 мг, 0,035 ммоль) перемешивали в 33% растворе метиламина в этаноле (2 мл) при 45°C до полного превращения (прибл. 1 ч). Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и концентрировали при пониженном давлении. Полученный неочищенный продукт растирали в MeCN с последующей очисткой посредством препаративной обращенно-фазной ВЭЖХ (неподвижная фаза: XBridge C18 OBD, 10 мкм, 150×50 мм; подвижная фаза: водный 0,25% бикарбонат аммония (A)-MeOH (B); градиентное элюирование) с получением соединения (S*) 23B. Заключительное превращение в натриевую соль проводили элюированием водным раствором колонки, заполненной натриевой катионообменной смолой с получением соединения (S*) 23B (натриевая соль) в виде рыхлого белого твердого вещества после лиофилизации (18 мг, выход: 70%). ¹H ЯМР (400 МГц, D₂O) δ м. д. 8,43 (с, 1H), 8,20 (с, 1H), 7,88 (уш. с, 1H), 6,52 (д, J=15,9 Гц, 1H), 5,97 (д, J=8,5 Гц, 1H), 5,81 (дд, J=50,5, 3,7 Гц, 1H), 5,45-5,60 (м, 1H), 5,33-5,44 (м, 1H), 4,67-4,73 (м, 1H), 4,49-4,53 (м, 1H), 4,43 (дт, J=11,7, 3,7 Гц, 1H), 4,17 (уш. с, 1H), 4,05-4,11 (м, 1H), 3,78 (м, J=9,8 Гц, 2H), 3,62 (с, 3H); ³¹P ЯМР (162 МГц, D₂O) δ м. д. 56,24 (с, 1P); ИЭР-МС: m/z 706,4 [M+H]⁺.

Пример 34

Стадия 1. Получение соединения 34b и соединения 34c

Соединение 34a (0,8 г, 0,99 ммоль) растворяли в смеси безводного ACN (85 мл) и безводного THF (85 мл), добавляли 1H-тетразол (11,5 мл, 3,96 ммоль) и молекулярные сита 3Å. Смесь встряхивали при кт в течение 1 часа и впоследствии посредством шприца за раз добавляли 2-цианоэтил-N, N,N',N'-тетраизопропилфосфородиамидит (0,31 мл, 0,99 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4,5 часа. Добавляли дополнительное количество 2-цианоэтил-N, N,N',N'-тетраизопропилфосфородиамидита (0,16 мл, 0,5 ммоль). Реакционную смесь встряхивали при кт в течение 2 дней и впоследствии добавляли дисульфид фенилацетила (PADS, 0,6 г, 1,98 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при кт в течение 18 часов. Реакционную смесь фильтровали. Молекулярные сита трижды промывали дихлорметаном. Объединенный фильтрат промывали смесью насыщенного раствора Na₂S₂O₃ и насыщенного раствора NaHCO₃, промывали солевым раствором, высушивали с помощью MgSO₄, фильтровали и выпаривали растворители фильтрата. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-10% MeOH в DCM) с получением соединения 34b (224 мг, выход: 16%) в виде первого элюируемого изомера и соединения 34c (265 мг, выход: 11%) в виде второго элюируемого изомера.

Соединение 34a. ИЭР-МС: m/z 939,5 [M+H]⁺;

соединение 34b. ИЭР-МС: m/z 939,5 [M+H]⁺.

Стадия 2. Получение соединения (*R), 33A (натриевая соль) и соединения 33b (натриевая соль). Соединение 34a (224 мг, 0,16 ммоль) перемешивали в 33% растворе метиламина в этаноле (6,5 мл) при 45°C до полного превращения (прибл. 1 ч). Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и концентрировали при пониженном давлении. Полученный неочищенный продукт растирали в MeCN с последующей очисткой посредством препаративной обращенно-фазной ВЭЖХ (неподвижная фаза: XBridge C18 OBD, 5 мкм, 150×50 мм; подвижная фаза: водный 0,25% бикарбонат аммония (A)-MeOH (B); градиентное элюирование) с получением соединения (*R), 32A (аммонийная соль). Заключительное превращение в натриевую соль проводили элюированием водным раствором колонки, заполненной натриевой катионообменной смолой, с получением соединения (*R) 32A (натриевая соль) в виде рыхлого белого твердого вещества после лиофилизации (31 мг, выход: 27%). ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ м. д. 8,77 (уш. с, 1H), 8,32 (с, 1H), 8,18 (с, 1H), 8,13 (с, 1H), 7,34 (уш. с, 2H), 7,18 (уш. с, 2H), 6,22 (дд, J=15,3, 2,4 Гц, 1H), 6,01 (д, J=8,6 Гц, 1H), 5,70-5,84 (м, 1H), 5,59 (уш. д, J=51,7 Гц, 1H), 5,30 (дд, J=54,9, 3,3 Гц, 1H), 5,03 (уш. д, J=17,1 Гц, 1H), 4,15-4,29 (м, 3H), 3,70-3,79 (м, 1H), 3,20 (д, J=15,4 Гц, 1H), 3,00-3,11 (м, 1H); ³¹P ЯМР (162 МГц, DMSO-d₆) δ м. д. 52,83 (с, 1P); ИЭР-МС: m/z 678,4 [M+H]⁺.

Соединение 34b (265 мг, 0,11 ммоль) перемешивали в 33% растворе метиламина в этаноле (2 мл) при 45 C до полного превращения (прибл. 1 ч). Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры и концентрировали при пониженном давлении. Полученный неочищенный продукт растирали в MeCN с последующей очисткой посредством препаративной обращенно-фазной ВЭЖХ (неподвижная фаза: XBridge C18 OBD, 5 мкм, 150×50 мм; подвижная фаза: водный 0,25% бикарбонат аммония (A)-MeOH (B); градиентное элюирование) с получением соединения (*S) 32b (аммонийная соль). Заключительное превращение в натриевую соль проводили элюированием водным раствором колонки, заполненной натриевой катионообменной смолой с получением соединение (*S) 32b (натриевая соль) в виде рыхлого белого твердого вещества после лиофилизации (20 мг, выход: 25%). ¹H ЯМР (400 МГц, D₂O) δ м. д. 8,22 (с, 1H), 8,20 (с, 1H), 8,04 (с, 1H), 7,83 (с, 1H), 6,45 (уш. д, J=15,7 Гц, 1H), 6,27 (уш. д, J=8,2 Гц, 1H), 5,91 (уш. д, J=51,3 Гц, 1H), 5,52-5,74 (м, 1H), 5,23-5,51 (м, 2H), 4,50-4,80 (перекрытие с пиком растворителя, 4H), 4,00-4,43 (м, 1H), 3,59-3,98 (м, 1H); ³¹P ЯМР (162 МГц, D₂O) δ м. д. 56,05 (с, 1P); ИЭР-МС: m/z 678,1 [M+H]⁺.

Пример 35

Стадия 1. Получение соединения 35b

Соединение 35a дважды выпаривали с пиридином (30 мл) до применения. К перемешиваемой суспензии соединения 35a (3 г, 11,22 ммоль) в пиридине (50 мл) по каплям при 0°C добавляли TMSCl (7,2 мл, 56,73 ммоль) посредством капельной воронки с выравниванием давления в течение 30 мин с получением белой суспензии, впоследствии дополнительно перемешанной при кт в течение 1 ч. Впоследствии к реакционной смеси посредством шприца добавляли хлорид изобутирила (2,4 г, 22,52 ммоль) при 0°C в атмосфере N₂ в течение 15 мин. Полученную суспензию перемешивали при кт в атмосфере N₂ в течение ночи. К реакционной смеси добавляли воду (15 мл) при 0 °C, впоследствии добавляли гидроксид аммония (17,3 мл, 25%) посредством капельной воронки с выравниванием давления при 0°C в течение 10 мин.

Полученный прозрачный раствор дополнительно перемешивали при кт в течение 1 ч. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (0-20% MeOH в DCM) с получением 35b в виде желтого твердого вещества, ¹H ЯМР (DMSO-d₆, 400 МГц) δ м. д. 12,12 (с, 1H), 11,71 (с, 1H), 8,30 (с, 1H), 5,79 (д, J=1,6 Гц, 1H), 4,46-4,50 (м, 1H), 4,30-4,38 (м, 1H), 3,68 (уш. дд, J=12,0, 3,2 Гц, 3H), 3,52 (уш. дд, J=12,0, 3,6 Гц, 1H), 2,73-2,84 (м, 1H), 2,18-2,28 (м, 1H), 1,90 (ддд, J=13,2, 6,0, 2,0 Гц, 1H), 1,11 (д, J=6,8 Гц, 6H); ИЭР-МС: m/z=338,1 [M+H]⁺.

Стадия 2. Получение соединения 35c

К перемешанному раствору соединения 35b (3,4 г, неочищенный продукт) добавляли трифенилфосфин (7,93 г, 30,23 ммоль) и имидазол (2,75 г, 40,4 ммоль) в THF (35 мл) при 0°C и раствор I₂ (7,68 г, 30,26 ммоль) в THF (20 мл). После перемешивания реакционной смеси при 35°C в течение ночи смесь фильтровали и концентрировали фильтрат, впоследствии разбавляли с помощью DCM (150 мл) и промывали водным насыщенным Na₂SO₃ (100 мл x 2). Органический слой сушили с помощью Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (DCM : MeOH=1 : 0 ~ 10: 1) с получением соединения 35c (1,55 г) в виде желтого твердого вещества. ¹H ЯМР (DMSO-d₆, 400 МГц) δ м. д. 12,11 (с, 1H), 11,66 (с, 1H), 8,17 (с, 1H), 5,82 (д, J=2,4 Гц, 1H), 5,74-5,76 (м, 1H), 4,65-4,70 (м, 1H), 4,30-4,39 (м, 1H), 3,43-3,55 (м, 2H), 2,78 (кв., J=6,8 Гц, 1H), 2,12-2,25 (м, 2H), 1,12 (д, J=6,8 Гц, 6H); ИЭР-МС: m/z=447,9 [M+H]⁺.

Стадия 3. Получение соединения 35d

NaN₃ (800 мг, 12,3 ммоль) добавляли к перемешанному раствору соединения 35c (1,73 г, 3,87 ммоль) в DMF (25 мл) в атмосфере N₂. После перемешивания реакционной смеси при 80°C в течение 3 ч смесь разбавляли с помощью DCM (100 мл) и промывали солевым раствором (50 мл x 2). Органический слой высушивали безводным Na₂SO₄ и выпаривали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (DCM : MeOH=1 : 0-10 : 1) с получением соединения 35d (1,27 г) в виде желтого твердого вещества. ИЭР-МС: m/z=363,1 [M+H]⁺.

Стадия 4. Получение соединения 35e

Соединение 35d дважды совместно выпаривали с пиридином (20 мл) до применения. К раствору соединения 35d (1,27 г) в пиридине (15 мл) добавляли DMAP (215 мг, 1,76 ммоль) и DMTrCl (1,781 г, 5,257 ммоль) при 0 °C. После перемешивания реакционной смеси при кт в течение ночи смесь разбавляли CH₂Cl₂ (80 мл), впоследствии промывали последовательно водным насыщенным NaHCO₃ (50 мл x 3). Органический слой собирали, сушили с помощью Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (0-85% EtOAc в петролейном эфире) с получением соединения 35e (1,61 г) в виде желтого твердого вещества. ¹H ЯМР (DMSO-d₆, 400 МГц) δ 12,05 (с, 1H), 11,59 (с, 1H), 7,96 (с, 1H), 7,36 (д, J=7,2 Гц, 2H), 7,22-7,29 (м, 2H), 7,12-7,22 (м, 5H), 6,76 (д, J =8,8 Гц, 2H), 6,69 (д, J=8,8 Гц, 2H), 5,55 (д, J=2,4 Гц, 1H), 4,72 (уш. д, J=6,4 Гц, 1H), 4,42-4,51 (м, 1H), 3,64 (д, J=12,4 Гц, 6H), 3,47-3,54 (м, 1H), 3,37 (уш. д, J=6,4 Гц, 1H), 2,79 (кв., J=6,8 Гц, 1H), 2,03-2,14 (м, 1H), 1,85-1,94 (м, 1H), 1,13 (т, J=6,8 Гц, 6H); ИЭР-МС: m/z=665,2 [M+H]⁺.

Стадия 5. Получение соединения 35f

К раствору соединения 35e (1,61 г, 2,42 ммоль) в THF (16 мл) в один прием добавляли Ph₃P (889 мг, 3,39 ммоль), впоследствии смесь перемешивали при 40 °C в атмосфере N₂ в течение 2 ч. К смеси добавляли воду (8 мл), впоследствии дополнительно перемешивали при 40 °C в течение ночи. Смесь объединяли с другой порцией неочищенного материала и разбавляли CH₂Cl₂ (100 мл), водой (80 мл) и экстрагировали CH₂Cl₂ (100 мл x 2). Органические слои объединяли, высушивали с помощью Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (0-8% MeOH в DCM) с получением соединения 35f (1,5 г, 2,34 ммоль) в виде белого твердого вещества. ¹H ЯМР (DMSO-d₆, 400 МГц) δ7,92 (с, 1H), 7,36 (д, J=7,2 Гц, 2H), 7,13-7,28 (м, 7H), 6,76 (д, J=8,8 Гц, 2H), 6,70 (д, J=9,2 Гц, 2H), 5,59 (д, J =1,6 Гц, 1H), 4,56-4,87 (м, 5H), 4,26 (дк, J=10,0, 5,2 Гц, 1H), 3,65 (д, J=11,6 Гц, 6H), 2,78 (спт, J=6,8 Гц, 1H), 2,58-2,72 (м, 2H), 1,99-2,11 (м, 1H), 1,73 (уш. дд, J=13,2, 5,6 Гц, 1H), 1,13 (т, J=6,8 Гц, 6H); ИЭР-МС: m/z=639,2 [M+H]⁺.

Стадия 6. Получение соединения 35g

Раствор хлорсульфата 4-нитрофенила 3n (1,67 г, 7,04 ммоль) в безводном CH₂Cl₂ (3 мл) быстро добавляли к смеси соединения 35f (1,5 г, 2,35 ммоль), 4-нитрофенола (980,1 мг, 7,04 ммоль), Et₃N (1,96 мл, 14,14 ммоль) в безводном CH₂Cl₂ (27 мл) в атмосфере N₂ при -78 °C, впоследствии естественным путем нагревали до кт в течение 2 ч. Смесь объединяли с другой порцией неочищенного материала, разбавляли с помощью CH₂C1₂ (100 мл) и промывали водным насыщенным NaHCO₃ (100 мл х 5). Органический слой собирали, сушили безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (0-90% EtOAc в петролейном эфире) с получением соединения 35g (1,6 г) в виде желтого твердого вещества. ¹H ЯМР (DMSO-d₆, 400 МГц) δ12,05 (с, 1H), 11,55 (с, 1H), 8,91 (т, J=5,6 Гц, 1H), 8,20-8,27 (м, 2H), 7,93 (с, 1H), 7,43-7,51 (м, 2H), 7,34 (д, J=7,2 Гц, 2H), 7,21-7,28 (м, 2H), 7,11-7,21 (м, 5H), 7,11-7,21 (м, 1H), 6,75 (д, J=8,8 Гц, 2H), 6,68 (д, J=8,8 Гц, 2H), 5,55 (д, J=2,0 Гц, 1H), 4,67 (уш. д, J=6,4 Гц, 1H), 4,34-4,44 (м, 1H), 3,64 (д, J=12,4 Гц, 6H), 3,30-3,37 (м, 1H), 3,18-3,27 (м, 1H), 2,78 (спт, J=6,8 Гц, 1H), 1,99-2,10 (м, 1H), 1,89 (уш. дд, J=12,4, 5,6 Гц, 1H), 1,10-1,15 (м, 6H); ИЭР-МС: m/z 840,3 [M+H]⁺.

Стадия 7. Получение соединения 35i

Суспензию соединения 35h (910 мг, 1,347 ммоль), соединения 35g (1,6 г, 1,905 ммоль) и молекулярных сит (3 г) в THF (40 мл) перемешивали при кт в атмосфере N₂ в течение 30 мин, после чего добавляли DMAP (659 мг, 5,39 ммоль) с последующим добавлением при 45°C в атмосфере N₂ в течение ночи. Реакционную смесь фильтровали через слой диатомитовой земли и концентрировали фильтрат при пониженном давлении с получением желтого остатка, который растворяли в DCM (60 мл), впоследствии промывали водным насыщенным NaHCO₃ (40 мл х 3). Органический слой собирали, сушили безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением желтого остатка. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (петролейный эфир : EtOAc=1 : 0 ~ 1 : 4) с получением соединения 35i (1,13 г) в виде белого твердого вещества, что было подтверждено данными ЖХМС, ИЭР-МС: m/z 1377,3 [M+H]⁺.

Стадия 8. Получение соединения 35j

К перемешанному раствору соединения 35i (1,13 г, 0,77 ммоль) в DCM (30 мл) добавляли воду (140 мг, 7,77 ммоль) и DCA (220 мг, 1,7 ммоль). Желтую смесь перемешивали при кт в течение ночи. Впоследствии добавляли MeOH (5 мл) с последующим добавлением пиридина (244,5 мг, 4 экв) с получением желтого раствора, который дополнительно перемешивали в течение 15 мин; раствор собирали вместе с другой партией неочищенного вещества и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (DCM : MeOH=1 : 0 ~ 10 : 1) с получением соединения 35j (630 мг) в виде белого твердого вещества. ¹H ЯМР (DMSO-d₆, 400 МГц) δ 12,11 (с, 1H), 11,64 (с, 1H), 11,28 (с, 1H), 8,77 (с, 1H), 8,70 (с, 1H), 8,62 (уш. т, J=6,0 Гц, 1H), 8,14 (с, 1H), 8,04 (д, J=7,2 Гц, 2H), 7,62-7,69 (м, 1H), 7,52-7,59 (м, 2H), 6,48 (дд, J=16,8, 2,8 Гц, 1H), 5,76-5,96 (м, 2H), 5,72 (д, J=4,0 Гц, 1H), 5,30-5,43 (м, 2H), 4,60 (уш. с, 1H), 4,36-4,45 (м, 1H), 4,28-4,34 (м, 1H), 3,74-3,84 (м, 1H), 3,58-3,68 (м, 1H), 3,23-3,35 (м, 2H), 2,71-2,83 (м, 1H), 2,17-2,28 (м, 1H), 2,00-2,09 (м, 1H), 1,11 (дд, J=6,8, 1,6 Гц, 6H); ¹⁹F ЯМР (DMSO-d₆, 376 МГц) δ-202,81 (дт, J=52,1, 16,5 Гц, 1F); ИЭР-МС: m/z=772,3 [M+H]⁺.

Стадия 9. Получение соединения 35k

THF перед работой перегоняли над Na/бензофеноном, а CH₃CN перед работой перегоняли над CaH₂ перед применением. К раствору соединения 35j (120 мг, 0,15 ммоль) в THF (3 мл), добавляли 800 мг молекулярных сит 4A (порошок) и раствор 1H-тетразола (3,45 мл, 0,45 M, полученный до применения путем растворения 945 мг тетразола (высушен лиофилизацией) в 30 мл безводного CH₃CN, с последующим добавлением 1 г молекулярных сит 4A и перемешиванием в атмосфере N₂ в течение 1 ч); смесь продували с помощью N₂. Добавляли по каплям раствор 2-цианоэтил-N, N,N',N'-тетраизопропилфосфородиамидита (84,36 мг, 0,28 ммоль) в THF (0,8 мл) в течение 25 мин посредством шприца, впоследствии перемешивали при комнатной температуре в течение 1,5 ч. Добавляли раствор TBHP (0,25 мл, 1,24 ммоль, 5 M) и перемешивали в течение еще 30 мин. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (DCM : MeOH=1 : 0 ~ 10 : 1) с получением 39k в виде белого твердого вещества (68 мг). ИЭР-МС: m/z=887,4 [M+H]⁺.

Стадия 10. Получение соединения 26 (аммонийная соль)

Раствор соединения 35k (68 мг, 0,077 ммоль) в MeNH₂/EtOH (5 мл) перемешивали при кт в течение 2 ч. После перемешивания реакционной смеси при 40 °C в течение 1 ч летучие соединения выпаривали и полученное белое твердое вещество растворяли водой (20 мл), впоследствии экстрагировали с помощью DCM (10 мл x 4). Водный слой лиофилизировали и очищали посредством обращенно-фазной препаративной ВЭЖХ (колонка: Xbridge 150×30 мм x 10 мкм, условия: A: вода (10 мМ NH₄HCO₃)-ACN: MeCN, начало: B 0%, конец B: 30%; скорость потока 25 мл/мин) с получением соединения 26 (аммонийная соль) в виде белого твердого вещества (18,8 мг). ¹H ЯМР (DMSO-d₆, 400 МГц) δ м. д. 10,78 (уш. с, 1H), 8,84 (уш. д, J=6,8 Гц, 1H), 8,45 (с, 1H), 8,25 (с, 1H), 7,86 (с, 1H), 6,67 (уш. с, 1H), 6,44 (уш. д, J=18,0 Гц, 1H), 5,91 (с, 1H), 5,62 (уш. с, 1H), 5,49 (уш. д, J=3,2 Гц, 1H), 5,30-5,16 (м, 2H), 4,72 (уш. с, 1H), 4,44 (уш. д, J=9,4 Гц, 1H), 4,48-4,40 (м, 1H), 4,29 (уш. д, J=12,4 Гц, 1H), 4,21 (уш. т, J=10,8 Гц, 1H), 3,89 (уш. д, J=12,0 Гц, 1H), 3,45-3,33 (м, 1H), 2,92 (уш. д, J=11,2 Гц, 1H), 1,94 (уш. т, J=10,8 Гц, 1H); ¹⁹F ЯМР (376 МГц, DMSO-d₆) δ м. д. -198,95 (уш. с, 1F); ³¹P ЯМР (162 МГц, DMSO-d₆) δ м. д. -4,86 (уш. с, 1P); ИЭР-МС: m/z=660,3 [M+H]⁺.

Превращение в натриевую соль

Смолу Dowex 50W × 8, 200-400 (5 мл, H-форма) помещали в стакан и промывали деионизированной водой (30 мл). Впоследствии к смоле добавляли 15% H₂SO₄ в деионизированной воде, смесь осторожно перемешивали в течение 5 мин и декантировали (30 мл). Смолу переносили на колонку с 15% H₂SO₄ в деионизированной воде и промывали 15% H₂SO₄ (по меньшей мере 4 объема колонки) и впоследствии деионизированной водой до нейтральной реакции. Смолу переносили обратно в стакан, добавляли раствор 15% NaOH в деионизированной воде и смесь осторожно перемешивали в течение 5 мин и декантировали (1 ×). Смолу переносили на колонку и промывали 15% NaOH в воде (по меньшей мере 4 объема колонки) и впоследствии деионизированной водой до нейтральной реакции. Соединение 26 (аммонийная соль) (10 мг) растворяли в минимальном количестве смеси деионизированной воды и CH₃CN (1 : 1, об./об., 3 мл), добавляли в верхнюю часть колонки и элюировали деионизированной водой. Соответствующие фракции объединяли и лиофилизировали с получением соединения 26 (натриевая соль) (6,1 мг) в виде белого твердого вещества. ¹H ЯМР (400 МГц, D₂O) δ м. д. 8,22 (уш. с, 1H), 8,11 (уш. с, 1H), 7,75 (с, 1H), 6,40 (уш. д, J=16,8 Гц, 1H), 5,88 (уш. с, 1H), 5,73 (уш. с, 1H), 5,60 (уш. с, 1H), 5,24-5,04 (м, 1H), 4,59 (уш. д, J=8,8 Гц, 1H), 4,49 (уш. с, 1H), 4,42 (уш. д, J=12,0 Гц, 1H), 4,13 (уш. д, J=11,8 Гц, 1H), 3,69 (уш. д, J=13,6 Гц, 1H), 3,41 (уш. д, J=8,0 Гц, 1H), 2,76 (уш. с, 1H), 2,26-2,19 (м, 1H), 2,22 (уш. д, J=6,8 Гц, 1H); ¹⁹F ЯМР (376 МГц, D₂O) δ м. д. -200,45 (уш. с, 1F); ³¹P ЯМР (162 МГц, D₂O) δ м. д. -2,84 (с, 1P); ИЭР-МС: m/z=660,0 [M+H]⁺.

Пример 36

Стадия 1. Получение соединения 36b

К раствору соединения 36a (4,2 г, 24,11 ммоль) в DCM (40 мл) по каплям добавляли TEA (4,88 г, 48,22 ммоль) и MsCl (4,97 г, 43,4 ммоль) в течение 10 мин. После перемешивания при 25°C в течение 2 ч смесь разделяли между DCM (100 мл) и водой (50 мл). Органический слой промывали солевым раствором (3×50 мл), высушивали над безводным Na₂SO₄, фильтровали и выпаривали растворитель при пониженном давлении с получением остатка. Остаток (объединенный с силикагелем: 10 г) очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (PE/EA от 10% до 100% и DCM/MeOH=от 0% до 5%) с получением соединения 36b (5,6 г) в виде светло-желтого твердого вещества. ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ м. д. 5,84 (д, J=2,4 Гц, 1H), 4,78 (т, J=3,4 Гц, 1H), 4,51-4,40 (м, 2H), 4,29-4,22 (м, 1H), 3,09-3,05 (м, 3H), 2,18-2,09 (м, 1H), 1,84-1,73 (м, 1H), 1,52 (с, 3H), 1,33 (с, 3H).

Стадия 2. Получение соединения 36c

К раствору соединения 36b (5,6 г, 22,19 ммоль) в DMF (55 мл) добавляли NaN₃ (4,25 г, 65,37 ммоль) при 25 °C. После перемешивания при 100°C в течение 3 ч смесь разбавляли водным насыщенным NaHCO₃ (100 мл) и экстрагировали этилацетатом (3×100 мл). Органический слой промывали солевым раствором (100 мл), высушивали над безводным Na₂SO₄, фильтровали и выпаривали при пониженном давлении с получением желтого твердого вещества. Твердое вещество (объединенное с силикагелем: 10 г) очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (силикагель: 20 г) (градиентное элюирование: 0-100% этилацетат в петролейном эфире, впоследствии 0-20% метанол в этилацетате) с получением соединения 36c (3,8 г) в виде желтого твердого вещества. ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ м. д. 5,85 (д, J=3,4 Гц, 1H), 4,77 (т, J=4,2 Гц, 1H), 4,45-4,35 (м, 1H), 3,59 (дд, J=3,7, 13,2 Гц, 1H), 3,28 (дд, J=4,6, 13,2 Гц, 1H), 2,09 (дд, J=4,4, 13,4 Гц, 1H), 1,79 (ддд, J=4,8, 10,7, 13,4 Гц, 1H), 1,52 (с, 3H), 1,33 (с, 3H).

Стадия 3. Получение соединения 36d

Уксусный ангидрид (18,03 мл, 190,75 ммоль) и концентрированную серную кислоту (0,104 мл, 1,91 ммоль) добавляли к перемешанному раствору соединения 36c (3,8 г, 19,08 ммоль) в уксусной кислоте (109,1 мл, 1907,56 ммоль) при 0 °C. После перемешивания в течение 2 ч при 25°C реакционную смесь гасили холодной водой (100 мл) и перемешивали в течение 30 мин при 25 °C. Смесь экстрагировали этилацетатом (3×200 мл). Органические слои объединяли и последовательно промывали насыщенным водным раствором бикарбоната натрия (3×300 мл), солевым раствором (2×200 мл), высушивали над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток (объединенный с силикагелем: 10 г) очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (0-100% PE в EA) с получением соединения 36d (3,2 г) в виде желтого масла. ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ м. д. 6,21-6,14 (м, 1H), 5,22 (д, J=5,0 Гц, 1H), 4,58-4,50 (м, 1H), 3,57 (дд, J=4,0, 13,1 Гц, 1H), 3,25 (дд, J=4,6, 13,2 Гц, 1H), 2,29-2,19 (м, 1H), 2,12-2,10 (м, 1H), 2,09 (с, 6H).

Стадия 4. Получение соединения 36e

Раствор 5-амино-3H-[1,2,3]триазоло[4,5-d]пиримидин-7(6H)-она (2,37 г, 15,6 ммоль) и BSA (11,041 г, 54,273 ммоль) в безводном CH₃CN (200 мл) перемешивали при 80°C в течение 1 ч и впоследствии охлаждали до 0 °C. Далее добавляли раствор соединения 36d (3,3 г, 13,57 ммоль) в безводном CH₃CN (80 мл), а затем SnCl₄ (10,6 г, 40,7 ммоль). После перемешивания при 26°C в течение 48 часов смесь охлаждали и разбавляли с помощью EtOAc (100 мл), впоследствии по каплям добавляли в водный насыщенный NaHCO₃ (500 мл) при 0 °C. Органический слой промывали солевым раствором (2×100 мл), высушивали над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток (объединенный с силикагелем: 10 г) очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (2-10% MeOH в DCM, об./об.) с получением соединения 36e (6,4 г) в виде желтой пены. ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ м. д. 11,08 (уш. с, 1H), 7,28 (уш. с, 1H), 6,68 (уш. с, 1H), 6,10 (с, 1H), 5,68 (д, J=5,5 Гц, 1H), 4,61-4,50 (м, 1H), 3,58 (дд, J=3,1, 13,4 Гц, 1H), 3,34-3,29 (м, 1H), 2,71-2,59 (м, 1H), 2,33-2,24 (м, 1H), 2,09 (с, 3H); ИЭР-МС: m/z=336,1 [M+H]⁺.

Стадия 5. Получение соединения 36f

К раствору соединения 36e (4,8 г, 14,32 ммоль) в DCM (48 мл) добавляли триэтиламин (4,34 г, 42,95 ммоль) и DMAP (504,37 мг, 4,13 ммоль) при 25 °C. После перемешивания в течение 5 мин смесь охлаждали при 0°C и добавляли к раствору хлорид изобутирила (3,05 г, 28,63 ммоль) в течение 10 мин. После перемешивания при 25°C в течение 2 часов смесь разбавляли с помощью EtOAc (100 мл), промывали солевым раствором (3×100 мл), высушивали над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением соединения 36f (4,8 г) в виде желтого твердого вещества, которое непосредственно использовали на следующей стадии без какой-либо дополнительной очистки.

Стадия 6. Получение соединения 36g

К раствору соединения 36f (6,5 г) в смеси THF/MeOH/вода (240/150/45 мл) добавляли NaOH (0,5 M в воде, 64,14 мл) при 0 °C. Впоследствии раствор перемешивали при 0°C в течение 1 часа. Раствор подкисляли уксусной кислотой (~ 2 мл) до pH 7. Раствор концентрировали при пониженном давлении с получением желтого твердого вещества (6 г). Остаток (объединенный с силикагелем: 10 г) очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (силикагель: 40 г) (DCM/MeOH=1/0-5/1) с получением соединения 36g (4,5 г) в виде светло-желтого твердого вещества. ¹H ЯМР (400 МГц, CD₃OD) δ м. д. 6,20 (с, 1H), 4,94 (д, J=5,0 Гц, 1Н;·. 4,73-4,65 (м, 1H), 3,52-3,46 (м, 1H), 3,38-3,33 (м, 1H), 2,78-2,61 (м, 2Н), 2,20 (ддд, J=1,3, 6,0, 13,3 Гц, 1H), 1,23 (д, J=7,0 Гц, 6H); ИЭР-МС: m/z=364,2 [M+H]⁺.

Стадия 7. Получение соединения 36h

Раствор соединения 36g (5 г, 13,76 ммоль) в Py (50 мл) обрабатывали с помощью DMAP (841 мг, 6,88 ммоль) при 0°C в течение 10 мин. Через 10 мин добавляли DMTrCl (9,3 г, 27,52 ммоль) и впоследствии перемешивали раствор при 80°C в течение 12 часов. Реакционную смесь разбавляли EA (50 мл) и промывали солевым раствором (3 × 80 мл). Органический слой высушивали над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением желтого твердого вещества (10 г). Желтое твердое вещество (объединенное с силикагелем: 15 г) очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (0-100% PE в EA) с получением соединения 36h (8,0 г) в виде светло-желтого твердого вещества. ¹H ЯМР (400 МГц, CDCl₃) δ м. д. 12,01 (уш. с, 1H), 8,35 (уш. с, 1H), 7,45-7,42 (м, 2H), 7,28-7,24 (м, 7H), 6,73-6,66 (м, 4H), 5,10 (д, J=5,8 Гц, 1H), 4,84-4,74 (м, 1H), 3,83-3,77 (м, 1H), 3,71 (д, J=6,3 Гц, 6H), 3,43-3,35 (м, 1H), 3,29-3,23 (м, 1H), 2,68-2,56 (м, 2H), 2,40 (дд, J=5,9, 13,2 Гц, 1H), 1,31 (дд, J=6,9, 11,7 Гц, 6H). ИЭР-МС: m/z 688,1 [M+Na]⁺.

Стадия 8. Получение соединения 36i

Раствор соединения 36h (8,0 г, 12,02 ммоль) в EA/EtOH (1/1, 350 мл) обрабатывали Pd/C (4,5 г); после перемешивания смеси в атмосфере H₂ (15 фунтов на кв. дюйм) в течение 2 ч раствор фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток (объединенный с силикагелем: 10 г) очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (силикагель: 40 г) (DCM-MeOH от 1/0 до 5/1) с получением соединения 36i (6,0 г) в виде светло-желтого твердого вещества. ИЭР-МС: m/z=640,4 [M+H]⁺.

Стадия 9. Получение соединения 36j

Раствор соединения 36i (6,0 г, 8,44 ммоль) в DCM (130 мл) обрабатывали 4-нитрофенолом (3,52 г, 25,32 ммоль) и триэтиламином (5,12 г, 50,65 ммоль). После охлаждения до -78 °C, добавляли раствор хлорсульфата 4-нитрофенила (6,02 г, 25,32 ммоль) в DCM (20 мл) при -78 °C. После перемешивания при -78°C в течение 1 ч смесь фильтровали и разбавляли фильтрат с помощью DCM (300 мл). Органический слой промывали водным насыщенным NaHCO₃ (3×150 мл) и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка (10 г). Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-100% этилацетат в петролейном эфире) с получением соединения 36j (5,9 г) в виде желтого твердого вещества. ¹H ЯМР (400 МГц, CD₃CN) δ м. д. 12,07 (уш. с, 1H), 9,39 (уш. с, 1H), 8,22-8,17 (м, 2H), 7,40-7,36 (м, 4H), 7,24-7,14 (м, 7H), 6,76-6,66 (м, 4H), 5,76 (д, J=3,8 Гц, 1H), 4,97-4,90 (м, 1H), 4,68-4,60 (м, 1H), 3,68 (д, J=8,3 Гц, 6H), 3,46-3,39 (м, 1H), 3,32-3,25 (м, 1H), 2,65 (тд, J=7,0, 13,7 Гц, 1H), 2,40-2,32 (м, 1H), 2,22-2,19 (м, 1H), 1,22 (д, J=7,0 Гц, 3H), 1,21-1,18 (м, 3H). ИЭР-МС: m/z 863,2 [M+Na]⁺.

Стадия 10. Получение соединения 36k

Раствор соединения 36j (1,18 г, 1,40 ммоль), соединения 35h (0,73 г, 1,08 ммоль) и 4A MS (1 г) в DCE (21 мл) перемешивали при кт в атмосфере N₂ в течение 30 мин с последующим добавлением DMAP (660,41 мг, 5,41 ммоль). После перемешивания реакционной смеси при 45 °C (температура масла) в течение 12 ч смесь фильтровали и разделяли фильтрат между DCM (100 мл) и солевым раствором (100 мл). Органический слой последовательно промывали водным насыщенным NaHCO₃ (3×100 мл), высушивали над безводным Na₂SO₄, фильтровали и выпаривали при пониженном давлении с получением остатка (4 г). Остаток (объединенный с силикагелем: 6 г) очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (PE/EA от 10% до 100% и DCM/MeOH=0-5%) с получением соединения 36k (1,2 г) в виде светло-желтого твердого вещества. ¹H ЯМР (400 МГц, CD₃CN) δ 11,88 (уш. с, 1H), 9,42 (уш. с, 1H), 9,09 (уш. с, 1H), 8,38 (с, 1H), 8,05 (с, 1H), 7,98-7,85 (м, 1H), 7,76 (уш. д, J=7,6 Гц, 1H), 7,47-7,39 (м, 1H), 7,35-7,27 (м, 2H), 7,12 (уш. д, J=7,3 Гц, 2H), 7,07 (уш. д, J=6,4 Гц, 2H), 7,02-6,86 (м, 11H), 6,72 (уш. д, J=8,6 Гц, 1H), 6,59-6,40 (м, 8H), 6,13-6,03 (м, 1H), 5,83 (уш. с, 0,5H), 5,73-5,62 (м, 1H), 5,46 (уш. с, 1H), 4,67 (уш. с, 1H), 4,33 (уш. с, 1H), 3,99 (уш. с, 1H), 3,67-3,38 (м, 11H), 3,25 (уш. д, J=11,2 Гц, 1H), 3,10 (уш. д, J=14,4 Гц, 1H), 3,00 (уш. д, J=8,1 Гц, 1H), 2,89 (уш. д, J=6,1 Гц, 1H), 2,51-2,41 (м, 1H), 2,14-2,05 (м, 1H), 1,75-1,72 (м, 6H); ¹⁹F ЯМР (376 МГц, CD₃CN) δ м. д. -200,072 (с, 1F); ИЭР-МС: m/z 1377,8 [M+H]⁺.

Стадия 11. Получение соединения 36l

Раствор соединения 36k (1,2 г, 0,78 ммоль) в DCM (30 мл) обрабатывали водой (141,25 мг, 7,84 ммоль) и DCA (202,19 мг, 1,57 ммоль) с получением красного раствора. После перемешивания при 25°C в течение 12 ч к смеси добавляли MeOH (5 мл), пока она не стала прозрачной, с последующим добавлением пиридина (620,19 мг, 7,84 ммоль). Смесь перемешивали при кт в течение 2 ч, впоследствии концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток (объединенный с силикагелем: 2 г) очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (0-8% DCM в MeOH) с получением соединения 36l (0,54 г) в виде белого твердого вещества. ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ 12,26 (с, 1H), 11,92 (с, 1H), 11,27 (с, 1H), 8,77 (с, 1H), 8,69 (с, 1H), 8,53 (уш. т, J=5,8 Гц, 1H), 8,05 (уш. д, J=7,5 Гц, 2H), 7,69-7,63 (м, 1H), 7,60-7,53 (м, 2H), 6,46 (дд, J=2,6, 16,7 Гц, 1H), 6,04 (с, 1H), 5,92 (уш. с, 0,5H), 5,86 (уш. д, J=3,8 Гц, 1H), 5,79 (уш. д, J=3,3 Гц, 0,5H), 5,37-5,26 (м, 2H), 4,75 (уш. с, 1H), 4,60-4,49 (м, 1H), 4,27 (уш. с, 1H), 4,10 (уш. с, 1H), 3,77 (уш. д, J=12,5 Гц, 1H), 3,60 (уш. дд, J=4,8, 8,0 Гц, 1H), 2,79 (тд, J=6,7, 13,7 Гц, 1H), 2,19 (уш. дд, J=6,3, 12,5 Гц, 1H), 1,13 (д, J=6,8 Гц, 6H); ¹⁹F ЯМР (376 МГц, DMSO-d6) δ м. д. -202,787 (с, 1F); ИЭР-МС: m/z=773,3 [M+H]⁺.

Стадия 12. Получение соединения 36m

Раствор соединения 36l (100 мг, 0, 13 ммоль) в THF (2 мл) обрабатывали с помощью молекулярных сит 4A (порошок) (1 г); после перемешивания в течение 20 мин добавляли раствор 1H-тетразола (0,45 M) в CH₃CN (2,3 мл) при 25 °C. Добавляли раствор 2-цианоэтил-N, N,N’,N’-тетра(изопропил)фосфородиамидита (0,078 г, 0,26 ммоль, разведен в 2 мл THF) при 25°C и перемешивали смесь в течение 1,5 ч с последующим добавлением гидропероксида трет-бутила (0,12 мл, 0,65 ммоль) при 25 °C. После перемешивания в течение 1,5 ч смесь разбавляли с помощью DCM (20 мл), фильтровали через слой диатомитовой земли и концентрировали с получением неочищенного продукта в виде желтого твердого вещества (1,0 г). Неочищенный продукт (объединенный с силикагелем: 2 г) очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (0-15% MeOH in CH₂Cl₂) с получением соединения 36m (50 мг) в виде светло-желтого твердого вещества. ИЭР-МС: m/z=888,3 [M+H]⁺.

Стадия 13. Получение соединения 37 (натриевая соль)

Раствор соединения 36m (50 мг, 0,056 ммоль) в EtOH (2,5 мл) обрабатывали метиламином (2,5 мл, 33% в EtOH). После перемешивания при 25°C в течение 3 ч раствор концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали посредством обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (колонка: Waters Xbridge Prep OBD C18 5 мкм 150×30, условия: вода (10 мМ NH₄HCO₃)-ACN B: 0, конец B 30, время градиентного элюирования (мин): 7, 100% B, время удержания (мин): 1, скорость потока (мл/мин): 25) с получением соединения 37 (аммонийная соль) (12,2 мг) в виде белого твердого вещества. ¹H ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,58 (с, 1H), 8,45 (с, 1H), 6,66 (д, J=18,1 Гц, 1H), 6,46 (с, 1H), 5,94-5,75 (м, 1H), 5,51-5,41 (м, 1H), 5,37 (уш. с, 1H), 4,63 (уш. д, J=12,5 Гц, 1H), 4,35 (уш. д, J=13,4 Гц, 1H), 3,92 (уш. дд, J=3,7, 14,4 Гц, 1H), 3,50-3,36 (м, 1H), 3,16 (уш. д, J=12,0 Гц, 1H), 2,65-2,55 (м, 1H); ¹⁹F ЯМР (376 МГц, D₂O) δ м. д. -199,359 (с, 1F); ³¹P ЯМР (162 МГц, D₂O) δ м. д. -3,307 (с, 1P); ИЭР-МС: m/z=661,3 [M+H]⁺.

Превращение в натриевую соль

Смолу Dowex 50W × 8, 200-400 (10 мл, H-форма) помещали в стакан и промывали деионизированной водой (30 мл). Впоследствии к смоле добавляли 15% H₂SO₄ в деионизированной воде, смесь осторожно перемешивали в течение 5 мин и декантировали (30 мл). Смолу переносили на колонку с 15% H₂SO₄ в деионизированной воде и промывали 15% H₂SO₄ (по меньшей мере 4 объема колонки) и впоследствии деионизированной водой до нейтральной реакции. Смолу переносили обратно в стакан, добавляли раствор 15% NaOH в деионизированной воде и смесь осторожно перемешивали в течение 5 мин и декантировали (1 ×). Смолу переносили на колонку и промывали 15% NaOH в воде (по меньшей мере 4 объема колонки) и впоследствии деионизированной водой до нейтральной реакции. Соединение 37 (аммонийная соль) (28 мг) растворяли в деионизированной воде/MeCN (20 мл/5 мл), добавляли в верхнюю часть колонки и элюировали деионизированной водой. Соответствующие фракции объединяли и лиофилизировали с получением соединения 37 (натриевая соль) (24,5 мг) в виде белого твердого вещества. ¹H ЯМР (400 МГц, D₂O) = 8,63 (уш. с, 1H), 8,48 (уш. с, 1H), 6,71 (уш. д, J=17,6 Гц, 1H), 6,51 (уш. с, 1H), 5,97-5,79 (м, 1H), 5,54-5,40 (м, 2H), 4,69 (уш. д, J=13,3 Гц, 1H), 4,41 (уш. д, J=13,1 Гц, 1H), 3,97 (уш. д, J=13,8 Гц, 1H), 3,54-3,41 (м, 1H), 3,22 (уш. д, J=12,5 Гц, 1H), 2,66 (уш. с, 1H); ¹⁹F ЯМР (376 МГц, D₂O) м. д. -199,443 (с, 1F); ³¹P ЯМР (162 МГц, D₂O) м. д. -3,283 (с, 1P); ИЭР-МС: m/z=661,2 [M+H]⁺.

Пример 37

Стадия 1. Получение соединения 37b

К перемешанному раствору соединения 37a (10 г, 28,3 ммоль), трифенилфосфина (22,27 г, 84,91 ммоль), имидазола (7,71 г, 113,25 ммоль) в THF (100 мл) добавляли раствор йода (21,55 г, 84,91 ммоль) в THF (100 мл) при 0 °C. После перемешивания при 35 °C в течение ночи реакционную смесь фильтровали, концентрировали при пониженном давлении и разбавляли с помощью DCM (400 мл). Органический слой промывали водным насыщенным Na₂SO₃ (200 мл x 2), высушивали безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (DCM: MeOH=1 : 0-10 : 1) с получением соединения 37b (6 г) в виде белого твердого вещества. ¹H ЯМР (DMSO-d₆, 400 МГц) δ 12,10 (с, 1H), 11,65 (с, 1H), 8,26 (с, 1H), 5,83 (д, J=6,0 Гц, 1H), 5,66 (уш. д, J=5,6 Гц, 1H), 5,45 (уш. д, J=4,4 Гц, 1H), 4,68 (к, J=5,6 Гц, 1H), 4,11 (уш. д, J=3,2 Гц, 1H), 3,92-4,02 (м, 1H), 3,58 (уш. дд, J=10,4, 6,0 Гц, 1H), 3,43 (уш. дд, J=10,4, 6,8 Гц, 1H), 2,76 (дт, J=13,6, 6,8 Гц, 1H), 1,12 (уш. д, J=6,8 Гц, 6H); ИЭР-МС: m/z=463,9 [M+H]⁺.

Стадия 2. Получение соединения 37c

Раствор соединения 37b (6 г, 12,95 ммоль) в DMF (100 мл) обрабатывали с помощью NaN₃ (2,47 г, 37,99 ммоль) в атмосфере N₂. После перемешивания при 80°C в течение 3 ч смесь разбавляли с помощью DCM (400 мл) и промывали солевым раствором (300 мл x 2). Органический слой сушили безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (DCM : MeOH=1 : 0-10 : 1) с получением соединения 37c (4 г) в виде белого твердого вещества. ¹H ЯМР (DMSO-d₆, 400 МГц) δ 12,10 (с, 1H), 11,64 (с, 1H), 8,26 (с, 1H), 5,84 (д, J=6,0 Гц, 1H), 5,65 (д, J=6,0 Гц, 1H), 5,38 (д, J=4,8 Гц, 1H), 4,60 (к, J=5,6 Гц, 1H), 4,09-4,11 (м, 1H), 4,02 (дт, J=7,2, 3,6 Гц, 1H), 3,62-3,72 (м, 1H), 3,52-3,60 (м, 1H), 2,77 (септ, J=6,8 Гц, 1H), 1,12 (д, J=6,8 Гц, 6H); ИЭР-МС: m/z=379,0 [M+H]⁺.

Стадия 3. Получение соединения 37d

Соединение 37c дважды совместно выпаривали с пиридином (80 мл) до применения. К раствору соединения 37c (4 г, 10,57 ммоль) в пиридине (40 мл) добавляли DMAP (646 мг, 5,29 ммоль) и DMTrCl (5,38 г, 15,88 ммоль) при 0 °C. После перемешивания при кт в течение ночи реакционную смесь разбавляли с помощью CH₂Cl₂ (200 мл). Органический слой последовательно промывали водным насыщенным NaHCO₃ (150 мл x 3), высушивали безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (0-90% EtOAc в петролейном эфире) с получением неочищенного продукта в виде желтого. Неочищенный продукт очищали посредством обращенно-фазной препаративной ВЭЖХ (Phenomenex Synergi Max-RP 10 мкм 250×50 мм; подвижная фаза: вода - ACN от 30% до 70%; скорость потока: 100 мл/мин) с получением соединения 37d (4,15 г) в виде белого твердого вещества. ¹H ЯМР (DMSO-d₆, 400 МГц) δ 12,02 (с, 1H), 11,43 (уш. с, 1H), 7,97 (с, 1H), 7,42 (д, J=6,8 Гц, 2H), 7,28 (д, J=8,8 Гц, 2H), 7,11-7,22 (м, 5H), 6,71 (д, J=9,2 Гц, 2H), 6,63 (д, J=9,2 Гц, 2H), 5,66 (д, J=5,2 Гц, 1H), 5,48 (д, J=5,6 Гц, 1H), 4,80 (уш. т, J=4,8 Гц, 1H), 4,05 (дт, J=7,2, 4,0 Гц, 1H), 3,65 (д, J=11,6 Гц, 6H), 3,56 (уш. дд, J=13,2, 7,2 Гц, 1H), 3,44-3,51 (м, 1H), 3,39 (дд, J=13,2, 4,0 Гц, 1H), 2,79 (кв., J=6,8 Гц, 1H), 1,14 (дд, J=6,8, 2,3 Гц, 6H); ИЭР-МС: m/z=681,4 [M+H]⁺.

Стадия 4. Получение соединения 37e

NaH (60% в минеральном масле, 189,5 мг, 4,74 ммоль) добавляли к суспензии соединения 37d (2,15 г, 3,16 ммоль) в DMF (20 мл) при 0 °C. После перемешивания при 0°C в течение 0,5 ч по каплям добавляли раствор хлорида 4-метоксибензила (0,512 мл, 3,8 ммоль) в DMF (10 мл). После завершения добавления реакционную смесь перемешивали при 0°C в течение 1 ч, гасили водой (80 мл) и экстрагировали EtOAc (100 мл x 2). Органический слой сушили безводным Na₂SO₄, фильтровали и выпаривали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток объединяли с другой порцией и очищали посредством обращенно-фазной препаративной ВЭЖХ (YMC Triart C18, 7 мкм 250×50 мм; подвижная фаза: вода (10 мМ NH₄HCO₃)-ACN от 55% до 90%; скорость потока: 90 мл/мин) с получением соединения 37e (1,5 г, 1,83 ммоль) в виде белого твердого вещества и соединения 37d (2,16 г, 3,09 ммоль) в виде желтого твердого вещества. ¹H ЯМР (DMSO-d₆, 400 МГц) δ 12,04 (с, 1H), 11,42 (уш. с, 1H), 8,11 (с, 1H), 7,32 (д, J=8,4 Гц, 2H), 7,22-7,28 (м, 2H), 7,14-7,20 (м, 5H), 7,05 (д, J =9,2 Гц, 2H), 6,96 (д, J=8,8 Гц, 2H), 6,74 (д, J=8,8 Гц, 2H), 6,66 (д, J=8,8 Гц, 2H), 6,02 (д, J=7,6 Гц, 1H) 4,87 (уш. с, 1H), 4,34 (д, J=10,4 Гц, 1H), 4,22 (дд, J=7,2, 5,2 Гц, 1H), 4,00 (уш. д, J=10,4 Гц, 1H), 3,78 (с, 3H), 3,69 (д, J=9,6 Гц, 7H), 3,27 (дд, J=12,8, 4,8 Гц, 1H), 2,76 (спт, J=6,8 Гц, 1H), 2,61 (уш. д, J=3,6 Гц, 1H), 1,09-1,17 (м, 6H); ИЭР-МС: m/z 801,4 [M+H]⁺.

Стадия 5. Получение соединения 37f

Ph₃P (673 мг, 2,566 ммоль) в один прием добавляли к раствору соединения 37e (1,5 г, 1,83 ммоль) в THF (15 мл). Смесь перемешивали при 40 °C в течение 2 ч в атмосфере N2 с последующим добавлением воды (7,5 мл). После перемешивания при 40 °C смесь разбавляли DCM (50 мл), водой (40 мл) и экстрагировали с помощью DCM (50 мл x 2). Впоследствии органические слои объединяли, высушивали безводным Na₂SO₄, фильтровали и выпаривали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (0-8% MeOH в DCM) с получением соединения 37f (1,27 г) в виде белого твердого вещества. ¹H ЯМР (DMSO-d₆, 400 МГц) δ 8,06 (с, 1H), 7,31 (д, J=8,4 Гц, 2H), 7,22-7,27 (м, 2H), 7,13-7,22 (м, 5H), 7,04 (д, J=8,8 Гц, 2H), 6,96 (д, J=8,4 Гц, 2H), 6,74 (д, J=9,2 Гц, 2H), 6,66 (д, J=8,8 Гц, 2H), 5,99 (д, J=7,6 Гц, 1H), 4,78 (уш. с, 1H), 4,30 (д, J=10,4 Гц, 1H), 4,04 (т, J=5,6 Гц, 1H), 3,96 (д, J=10,4 Гц, 1H), 3,75-3,80 (м, 3H), 3,69 (д, J=8,4 Гц, 6H), 2,73-2,85 (м, 1H), 2,66 (уш. д, J=4,4 Гц, 1H), 2,62 (уш. д, J=6,0 Гц, 2H), 1,12 (т, J=6,4 Гц, 6H); ИЭР-МС: m/z=775,3 [M+H]⁺.

Стадия 6. Получение соединения 37g

Раствор хлорсульфата 4-нитрофенила (1,17 г, 4,92 ммоль) в безводном DCM (3 мл) добавляли к смеси соединения 37f (1,27 г, 1,64 ммоль), 4-нитрофенола (685 мг, 4,92 ммоль), Et3N (1,37 мл, 9,88 ммоль) в безводном DCM (27 мл) в атмосфере N₂ при -78 °C, впоследствии естественным путем нагревали до комнатной температуры в течение 2 ч. Реакционную смесь объединяли с другой партией, разбавляли с помощью DCM (100 мл) и промывали водным насыщенным NaHCO₃ (100 мл x 5). Органический слой собирали, сушили безводным Na₂SO₄, фильтровали и выпаривали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (0-90% EtOAc в PE) с получением соединения 37g (1,55 г, 1,59 ммоль) в виде желтого твердого вещества. ¹H ЯМР (DMSO-d₆, 400 МГц) 12,05 (с, 1H), 11,49 (уш. с, 1H), 8,88 (т, J=6,0 Гц, 1H), 8,26-8,31 (м, 2H), 8,13 (с, 1H), 7,47-7,53 (м, 2H), 7,29 (д, J=8,8 Гц, 2H), 7,20-7,25 (м, 2H), 7,14-7,20 (м, 5H), 7,03 (д, J=8,8 Гц, 2H), 6,95 (д, J=8,8 Гц, 2H), 6,74 (д, J=8,8 Гц, 2H), 6,67 (д, J=8,8 Гц, 2H), 5,95 (д, J=7,2 Гц, 1H), 4,72 (уш. с, 1H), 4,25 (д, J=10,4 Гц, 1H), 4,18 (уш. т, J=5,6 Гц, 1H), 3,96 (уш. д, J=10,4 Гц, 1H), 3,77 (с, 3H), 3,69 (д, J=6,8 Гц, 6H), 3,24-3,44 (м, 2H), 2,91 (уш. д, J=3,6 Гц, 1H), 2,69-2,79 (м, 1H), 1,12 (т, J=6,4 Гц, 6H); ИЭР-МС: m/z=976,3 [M+H]⁺.

Стадия 7. Получение соединения 37h

Суспензию соединения 37g (766 мг, 1,13 ммоль), соединения 35h (1,55 г, 1,59 ммоль) и молекулярных сит (3 г) в THF (40 мл) перемешивали при кт в атмосфере N₂ в течение 30 мин, после чего добавляли DMAP (554 мг, 4,53 ммоль), впоследствии перемешивали при 45°C ON в атмосфере N₂. Реакционную смесь фильтровали через слой диатомитовой земли и концентрировали фильтрат при пониженном давлении с получением желтого остатка; остаток растворяли в 60 мл DCM и промывали водным насыщенным NaHCO₃ (40 мл x 3). Органический слой сушили безводным Na₂SO₄, фильтровали и выпаривали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (PE : EtOAc=1 : 0 ~ 0 : 1) с получением соединения 37h (360 мг) в виде желтого твердого вещества. ИЭР-МС: m/z=757,4 [M/2+H]⁺.

Стадия 8. Получение соединения 37i

Раствор соединения 37h (360 мг, 0,24 ммоль) в DCM (10 мл) обрабатывали водой (43 мг, 2,39 ммоль) и DCA (67,5 мг, 0,52 ммоль) с получением желтого раствора. После перемешивания при кт в течение 6 ч к смеси добавляли MeOH (2 мл) с последующим добавлением пиридина (75,5 мг, 4 экв); полученный раствор перемешивали в течение 15 мин и концентрировали с получением остатка. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (DCM: MeOH=1 : 0 ~ 10 : 1) с получением соединения 37i (130 мг) в виде белого твердого вещества. ИЭР-МС: m/z=908,4 [M+H]⁺.

Стадия 9. Получение соединения 37j

ПРИМЕЧАНИЕ. THF перед работой перегоняли над Na/бензофеноном, а CH₃CN перед работой перегоняли над CaH₂ до применения. К раствору соединения 37i (130 мг, 0,14 ммоль, высушен лиофилизацией) в THF (3 мл) добавляли молекулярные сита 4A (порошок, 800 мг), а затем раствор 1H-тетразола (3,18 мл, 0,45 M, получен перед использованием путем растворения 945 мг тетразола (высушен лиофилизацией) в 30 мл безводного CH₃CN с последующим добавлением 1 г молекулярные сита 4Å и впоследствии перемешиванием в течение 1 ч в атмосфере N₂); после продувки резервуара несколько раз с помощью N₂ посредством шприца добавляли по каплям раствор 2-цианоэтил-N, N.N',N'-тетра(изопропил)фосфородиамидита (77,69 мг, 0,26 ммоль) в THF (0,8 мл) в течение 25 мин, впоследствии перемешивали при комнатной температуре в течение 1,5 ч с последующим добавлением гидропероксида трет-бутила (0,23 мл, 1,13 ммоль, 5 M). После перемешивания в течение еще 30 мин реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (DCM: MeOH=1 : 0 ~ 10 : 1, R_f=0,4) с получением соединения 37j (46 мг) в виде белого твердого вещества. ИЭР-МС: m/z=1023,5 и 1023,4 [M+H]⁺.

Стадия 10. Получение соединения 37k

Раствор соединения 37j (46 мг, 0,045 ммоль) обрабатывали смесью MeNH₂/EtOH (5 мл) при 40 °C в течение 2,5 ч. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали посредством обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (колонка: Waters Xbridge Prep OBD C18 5 мкм 150×30, условия: A: вода (10 мМ NH₄HCO₃)-ACN: MeCN, начало: B 5%, конец B: 25%; скорость потока (мл/мин) 25) с получением соединения 37k (12 мг) в виде белого твердого вещества. ИЭР-МС: m/z=796,3 [M+H]⁺.

Стадия 11. Получение соединения 48 (натриевая соль)

Раствор анизола (15,9 мг, 0,14 ммоль) в TFA (0,113 мл, 57,3 ммоль) охлаждали до 0°C и добавляли к соединению 37k (12 мг, 0,015 ммоль). После перемешивания при 0°C в течение 2,5 ч TEA удаляли продувкой газообразным азотом при 0 °C. Оставшуюся реакционную смесь гасили 33% раствором метиламина в EtOH (0,113 мл) при 0 °C. Реакционную смесь выпаривали досуха и разделяли между DCM и водой (20 мл x 3/10 мл). Водный слой лиофилизировали с получением белого остатка, очищенного посредством обращенно-фазной препаративной ВЭЖХ (колонка: Waters Xbridge Prep OBD 5 мкм C18 150×30, условия: A: вода (10 мМ NH₄HCO₃)-ACN: MeCN, начало: B 5%, конец B: 35%; скорость потока (мл/мин) 25) с получением соединения 47 (аммонийная соль) (7,1 мг, 0,010 ммоль) в виде белого твердого вещества. ¹H ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,59 (с, 1H), 8,47 (с, 1H), 8,16 (с, 1H), 6,76 (д, J=16,8 Гц, 1H), 6,28 (д, J=8,4 Гц, 1H), 6,07 (уш. д, J=3,6 Гц, 1H), 5,94 (уш. д, J=4,4 Гц, 1H), 5,63 (уш. дд, J=3,2, 8,8 Гц, 1H), 5,58 (уш. дд, J=4,4, 8,8 Гц, 1H), 5,49 (уш. д, J=5,6 Гц, 1H), 4,93 (уш. д, J=8,8 Гц, 1H), 4,67 (уш. с, 1H), 4,39 (уш. д, J=15,6 Гц, 1H), 4,13-4,07 (м, 1H), 3,96 (уш. д, J=14,4 Гц, 1H); ³¹P ЯМР (162 МГц, D₂O) δ м. д. -2,21 (с, 1P); ¹⁹F ЯМР (376 МГц, D₂O) δ 200,3-200,4 (м, 1F); ИЭР-МС: m/z=676,0 [M+H]⁺.

Превращение в натриевую соль

Смолу Dowex 50W × 8, 200-400 (3 мл, H-форма) помещали в стакан и промывали деионизированной водой (30 мл). Впоследствии к смоле добавляли 15% H₂SO₄ в деионизированной воде, смесь осторожно перемешивали в течение 5 мин и декантировали (30 мл). Смолу переносили на колонку с 15% H₂SO₄ в деионизированной воде и промывали 15% H₂SO₄ (по меньшей мере 4 объема колонки) и впоследствии деионизированной водой до нейтральной реакции. Смолу переносили обратно в стакан, добавляли раствор 15% NaOH в деионизированной воде и смесь осторожно перемешивали в течение 5 мин и декантировали (1 ×). Смолу переносили на колонку и промывали 15% NaOH в воде (по меньшей мере 4 объема колонки) и впоследствии деионизированной водой до нейтральной реакции. Соединение 47 (аммонийная соль) (7,1 мг) растворяли в деионизированной воде/MeCN (3 мл/3 мл), добавляли в верхнюю часть колонки и элюировали деионизированной водой. Соответствующие фракции объединяли и лиофилизировали с получением соединения 47 (натриевая соль) (3,4 мг) в виде белого твердого вещества. ¹H ЯМР (400 МГц, D₂O) δ м. д. 8,57 (с, 1H), 8,44 (с, 1H), 8,13 (с, 1H), 6,73 (д, J=16,6 Гц, 1H), 6,25 (д, J=8,8 Гц, 1H), 6,04 (уш. д, J=3,6 Гц, 1H), 5,91 (уш. д, J=4,0 Гц, 1H), 5,60 (уш. дд, J=3,6, 9,2 Гц, 1H), 5,55 (уш. дд, J=4,0, 9,2 Гц, 1H), 5,49-5,42 (м, 1H), 4,90 (уш. д, J=9,2 Гц, 1H), 4,67-4,64 (м, 1H), 4,39-4,33 (м, 1H), 4,08 (уш. д, J=14,4 Гц, 1H), 3,93 (уш. д, J=14,8 Гц, 1H); ³¹P ЯМР (162 МГц, D₂O) δ м. д. -2,26 (с, 1P); ¹⁹F ЯМР (376 МГц, D₂O) δ м. д. -200,34-200,47 (м, 1F); ИЭР-МС: m/z=676,1 [M+H]⁺.

Пример 38

Стадия 1. Получение соединения 38a

ПРИМЕЧАНИЕ. THF перед работой перегоняли над Na/бензофеноном, а CH₃CN перед работой перегоняли над CaH₂ до применения. К раствору соединения 35j (300 мг, 0,39 ммоль, высушен лиофилизацией) в THF (6 мл) добавляли молекулярные сита 4A (порошок, 800 мг) и раствор 1H-тетразола (8,64 мл, 0,45 M, получен до применения путем растворения 945 мг тетразола (высушен лиофилизацией) в 30 мл безводного CH₃CN с последующим добавлением 1 г молекулярных сит 4A и перемешивания в атмосфере N₂ в течение 1 ч); после продувания реакционной колбы несколько раз с помощью N₂ добавляли по каплям раствор 2-цианоэтил-N, N,N',N'-тетра(изопропил)фосфородиамидита (210,9 мг, 0,7 ммоль) в THF (2 мл) в течение 20 мин посредством шприца, впоследствии перемешивали при комнатной температуре в течение 1,5 ч. Затем добавляли DDTT (638,53 мг, 3,11 ммоль) и перемешивали смесь в течение еще 30 мин. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении с получением остатка. Остаток очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (DCM : MeOH=1 : 0-10 : 1) с получением соединения 38a в виде белого твердого вещества (372 мг). ИЭР-МС: m/z 903,2 и 903,4 [M+H]⁺.

Стадия 2. Получение соединения (*R) 46A (натриевая соль) и соединения 46B (*S) (натриевая соль)

Соединение 38a (372 мг) обрабатывали с помощью MeNH₂/EtOH (15 мл) при 40°C в течение 2,5 ч. После перемешивания при 40 °C в течение 1 ч реакционную смесь концентрировали с получением белого твердого вещества, объединенного с другой партией. Твердое вещество растворяли в воде (40 мл) и промывали DCM (20 мл x 4). Водный слой лиофилизировали и очищали посредством обращенно-фазной препаративной ВЭЖХ (Xtimate C18 5 мкм 150×25 мм, условия: A: вода (10 мМ NH₄HCO₃)-ACN: MeCN, начало B: 12%, конец B 42%; скорость потока (мл/мин) 25.) с получением белого твердого соединения (*R) 46A (аммонийная соль) в виде белого твердого вещества (18,5 мг) и соединения (*S) (аммонийная соль) 46B в виде белого твердого вещества (35,2 мг).

Соединение (*R) 46A (аммонийная соль). ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ м. д. 8,69 (с, 1H), 8,30 (с, 1H), 7,89 (с, 1H), 6,46 (д, J=16,0 Гц, 1H), 5,95 (с, 1H), 5,48 (уш. д, J=2,8 Гц, 1H), 5,35 (уш. д, J=2,8 Гц, 1H), 5,10 (уш. дд, J=3,2, 9,4 Гц, 1H), 5,04 (уш. дд, J=3,2, 9,2 Гц, 1H), 4,67 (уш. с, 1H), 4,47 (уш. д, J=9,2 Гц, 1H), 4,36 (уш. д, J=12,8 Гц, 1H), 4,19 (уш. т, J=10,8 Гц, 1H), 3,85 (уш. д, J=13,6 Гц, 1H), 3,62 (уш. д, J=3,6 Гц, 1H), 3,02 (уш. д, J=10,4 Гц, 1H), 1,89 (уш. т, J=10,8 Гц, 1H); ³¹P ЯМР (162 МГц, DMSO-d₆) δ м. д. 50,5 (уш. с, 1P); ¹⁹F ЯМР (376 МГц, DMSO-d₆) δ м. д. -199,86 (тд, J=19,6, 49,6 Гц, IF).

Соединение (*S) 46B (аммонийная соль). ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ м. д. 8,48 (с, 1H), 8,30 (с, 1H), 7,88 (с, 1H), 6,45 (д, J=17,2 Гц, 1H), 5,90 (с, 1H), 5,58 (уш. д, J=3,2 Гц, 1H), 5,45 (уш. д, J=3,2 Гц, 1H), 5,17 (уш. д, J=6,4 Гц, 1H), 5,12 (уш. д, J=9,2 Гц, 1H), 4,75 (уш. с, 1H), 4,54-4,45 (м, 2H), 4,25-4,16 (м, 1H), 3,78 (уш. д, J=13,6 Гц, 1H), 3,38 (уш. дд, J=11,2, 13,6 Гц, 1H), 3,01 (уш. д, J=10,4 Гц, 1H), 1,93 (уш. т, J=10,8 Гц, 1H); ³¹P ЯМР (162 МГц, DMSO-d₆) δ м. д. 52,02 (уш. с, 1P); ¹⁹F ЯМР (376 МГц, DMSO-d₆) δ м. д. -199,30-199,90 (м, 1F).

Превращение в соединение (натриевая соль) (*R) 46A

Смолу Dowex 50W × 8, 200-400 (4 мл, H-форма) помещали в стакан и промывали деионизированной водой (30 мл). Впоследствии к смоле добавляли 15% H₂SO₄ в деионизированной воде, смесь осторожно перемешивали в течение 5 мин и декантировали (15 мл). Смолу переносили на колонку с 15% H₂SO₄ в деионизированной воде и промывали 15% H₂SO₄ (по меньшей мере 4 объема колонки) и впоследствии деионизированной водой до нейтральной реакции. Смолу переносили обратно в стакан, добавляли раствор 15% NaOH в деионизированной воде и смесь осторожно перемешивали в течение 5 мин и декантировали (1 ×). Смолу переносили на колонку и промывали 15% NaOH в воде (по меньшей мере 4 объема колонки) и впоследствии деионизированной водой до нейтральной реакции. Соединение (*R) 46A (аммонийная соль) (18,5 мг) растворяли в деионизированной воде/MeCN (8 мл/2 мл), добавляли в верхнюю часть колонки и элюировали деионизированной водой. Соответствующие фракции объединяли и лиофилизировали с получением соединения (*R) 46A (натриевая соль) (13,7 мг) в виде белого твердого вещества. ¹H ЯМР (400 МГц, D₂O) δ м. д. 8,27 (уш. с, 1H), 7,97 (уш. с, 1H), 7,72 (уш. с, 1H), 6,35 (уш. д, J=16,4 Гц, 1H), 5,77 (уш. с, 1H), 5,70-5,49 (м, 1H), 5,26 (уш. с, 2H), 4,59-4,44 (м, 2H), 4,36 (уш. д, J=11,2 Гц, 1H), 4,05 (уш. с, 1H), 3,60-3,38 (м, 2H), 2,71 (уш. с, 1H), 2,28 (уш. с, 1H); ³¹P ЯМР (162 МГц, D₂O) δ 54,42 (уш. с, 1P); ¹⁹F ЯМР (376 МГц, D₂O) δ -200,41 (уш. с, 1F); ИЭР-МС: m/z=676,0 [M+H]⁺.

Превращение в соединение (*S) 46B (натриевая соль)

Соответствующие фракции объединяли и лиофилизировали с получением соединения(*S) 46B (натриевая соль) (33,1 мг) в виде белого твердого вещества. ¹H ЯМР (400 МГц, D₂O) δ м. д. 8,72 (уш. с, 1H), 8,73-8,68 (м, 1H), 8,58 (уш. с, 1H), 8,14 (уш. с, 1H), 6,81 (уш. д, J=17,6 Гц, 1H), 6,26 (уш. с, 1H), 6,07-5,89 (м, 1H), 5,67-5,53 (м, 2H), 4,94 (уш. д, J=6,8 Гц, 2H), 4,82 (уш. с, 1H), 4,42 (уш. д, J=12,4 Гц, 1H), 4,09 (уш. д, J=14,4 Гц, 1H), 4,14-4,04 (м, 1H) 3,82-3,69 (м, 1H), 3,23 (уш. с, 1H), 2,58 (уш. с, 1H), 2,37 (уш. с, 1H); ³¹P ЯМР (162 МГц, D₂O) δ м. д. 53,58 (уш. с, 1P); ¹⁹F ЯМР (376 МГц, D₂O) δ м. д. -199,69 (уш. с, 1F); ИЭР-МС: m/z=676,0 [M+H]⁺.

Пример 39

Стадия 1. Получение соединения 39b

Имидазол (2,36 г, 34,6 ммоль) и TBSCl (3,48 г, 23,1 ммоль) последовательно добавляли к раствору соединения 20b [CAS 170871-87-1] (7,8 г, 11,5 ммоль) в безводном DCM (101 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре до полного превращения (прибл. 3 ч), после чего реакционный раствор разбавляли DCM и промывали водой. Органический слой высушивали над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного соединения 39b в виде белой пены (9,2 г, неочищенный). ¹H ЯМР (500 МГц DMSO-d₆) δ м. д.: 0,20 (с, 3H), 0,24 (с, 3H), 0,96 (с, 9H), 3,60 (д, J=5,5 Гц, 2H), 3,97 (д, J=2,1 Гц, 6H), 4,69 (м, 1H), 5,4 (дд, J=54,4, 4,1 Гц, 1H), 5,63 (дк, J=21,3, 3,9 Гц, 1H), 6,35 (д, J=7,6 Гц, 1H), 7,10 (м, 4H), 7,47 (к, J=7,3 Гц, 1H), 7,52 (м, 6H), 7,66 (д, J=7,6 Гц, 2H), 7,80 (т, J=7,6 Гц, 2H), 7,89 (т, J=7,6 Гц, 1H), 8,29 (д, J=6,9 Гц, 2H), 8,83 (с, 1H), 8,89 (с, 1H), 11,49 (с, 1H); ИЭР-МС: m/z 790,4 [M+H]⁺.

Стадия 2. Получение соединения 39c

Раствор неочищенного соединения 39b (9,2 г) в DCM (250 мл), к которому добавляли воду (1 мл, 57,6 ммоль) и DCA (38 мл 10% раствор в DCM, 46,1 ммоль), перемешивали при комнатной температуре до полного превращения (прибл. 1 ч). Реакционную смесь гасили пиридином (4,6 мл, 57,6 ммоль) и метанолом (5 мл) и затем концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-5% MeOH в DCM) с получением соединения 39c в виде белой пены (4,4 г). ¹H ЯМР (500 МГц DMSO-d₆) δ м. д.: -0,26 (с, 3H), -0,06 (с, 3H), 0,72 (с, 9H), 3,72 (м, 2H), 4,36 (дт, J=26,6, 4,0 Гц, 1H), 5,10 (м, 2H), 5,22 (д, J=4,1 Гц, 1H), 5,39 (с, 1H), 6,13 (д, J=7,6 Гц, 1H), 7,55 (т, J=7,6 Гц, 2H), 7,65 (т, J=7,6 Гц, 1H), 8,05 (д, J=6,9 Гц, 2H), 8,77 (д, J=9,6 Гц, 2H), 11,24 (с, 1H); ИЭР-МС: m/z 488,2 [M+H]⁺.

Стадия 3. Получение соединения 39d

Хлорид мезила (1,04 мл, 13,55 ммоль) по каплям добавляли к раствору соединения 39c (4,4 г, 9,03 ммоль) в безводном пиридине (44 мл) при 0° C. Реакционную смесь перемешивали при 0° C до полного превращения (прибл. 3 ч), после чего гасили метанолом и концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток растворяли в EtOAc и промывали насыщенным водным NaHCO₃. Органический слой высушивали над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением мезилированного продукта. Неочищенный продукт растворяли в безводном DMF (50 мл) с последующим добавлением азида натрия (4,51 г, 69,38 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 60° C в течение 5 ч, после чего ее охлаждали до комнатной температуры, разбавляли EtOAc и промывали насыщенным водным NaHCO₃ и водой. Органический слой высушивали над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Очистку проводили колоночной хроматографией на силикагеле (градиентное элюирование: 0-2% MeOH в DCM) с получением соединения 39d в виде белой пены (4 г, выход: 86,5%). ¹H ЯМР (500 МГц DMSO-d₆) δ м. д.: -0,25 (с, 3H), -0,02 (с, 3H), 0,72 (с, 9H), 3,65 (дд, J=13,1, 4,1 Гц, 1H), 3,92 (к, J=6,9 Гц, 1H), 4,50 (дк, J=25,3, 3,7 Гц, 1H), 5,20 (дд, J=53,7, 4,8 Гц, 1H), 5,35 (дк, J=22,0, 3,9 Гц, 1H), 6,15 (д, J=7,6 Гц, 1H), 7,56 (т, J=7,9 Гц, 2H), 7,65 (т, J=7,2 Гц, 1H), 8,05 (д, J=6,9 Гц, 2H), 8,80 (д, J=2,4 Гц, 2H), 11,24 (с, 1H); ИЭР-МС: m/z 513,2 [M+H]⁺.

Стадия 4. Получение соединения 39e

Раствор соединения 39d (4 г, 7,8 ммоль) в MeOH (40 мл) гидрогенизировали при атмосферном давлении при комнатной температуре на Pd/C (20% на угле, 0,4 г). Реакционную смесь фильтровали через диатомитовую землю, промывали диатомитовую землю с помощью MeOH. Фильтрат выпаривали при пониженном давлении с получением соединения-амина в виде белой пены. Неочищенный продукт (высушенный выпариванием с безводным толуолом) растворяли в DCM (59 мл) с последующим добавлением 4-нитрофенола (3,2 г, 24 ммоль), Et₃N (6,5 мл, 46,8 ммоль) и активированных молекулярных сит. Полученную смесь охлаждали до -78 °C в атмосфере N₂, после чего по каплям добавляли раствор хлорсульфата 4-нитрофенила (5,5 г, 23,4 ммоль) в DCM (20 мл), продолжали перемешивание до полного превращения (прибл. 3 ч). Реакционную смесь нагревали до комнатной температуры и промывали насыщенным водным NaHCO₃ и водой. Органическую фазу сушили безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-50% EtOAc в гексане) с получением соединения 39e в виде желтой пены (3,5 г, выход: 65%). ¹H ЯМР (500 МГц DMSO-d₆) δ м. д.: -0,28 (д, J=15,8 Гц, 3H), -0,05 (д, J=6,2 Гц, 3H), 0,71 (с, 9H), 3,66 (т, J=5,9 Гц, 2H), 4,42 (д, J=26,2 Гц, 1H), 5,29 (м, 2H), 6,14 (т, J=7,2 Гц, 1H), 7,55 (м, 4H), 7,65 (т, J=7,2 Гц, 1H), 8,05 (д, J=7,6 Гц, 2H), 8,30 (м, 2H), 8,69 (с, 1H), 8,76 (д, J=7,6 Гц, 1H), 9,22 (т, J=5,9 Гц, 1H), 11,27 (с, 1H); ИЭР-МС: m/z 688,29 [M+H]⁺.

Стадия 5. Получение соединения 39g

В реакционную колбу помещали DMAP (2,59 г, 21,2 ммоль), безводный DCM (60 мл) и активированные молекулярные сита 3Å. Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение по меньшей мере 2 ч в инертной атмосфере. Одновременно раствор соединения 39f (2,05 г, 4,2 ммоль) и раствор сульфамата 39e (3,5 г, 5,1 ммоль) (каждый в безводном DCM) (2×60 мл), сушили на активированных молекулярных ситах 3Å (прибл. 2 ч). Оба раствора (соединения 39f и сульфамата 39e соответственно) последовательно переносили в реакционную колбу. Полученную реакционную смесь перемешивали в течение 24 ч. Молекулярные сита удаляли фильтрованием и тщательно промывали дихлорметаном. Фильтрат промывали насыщенным водным NaHCO₃ и насыщенным водным NH₄Cl. Объединенные органические фазы высушивали над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-2% MeOH в DCM) с получением соединения 39g в виде пены грязно-белого цвета (2,9 г, выход: 66%). ¹H ЯМР (500 МГц DMSO-d₆) δ м. д.: -0,26 (с, 3H), -0,05 (т, J=11,0 Гц, 9H), 0,71 (с, 9H), 0,77 (с, 9H), 3,56 (м, 2H), 3,85 (дд, J=12,4, 3,4 Гц, 1H), 3,98 (д, J=9,6 Гц, 1H), 4,33 (т, J=3,4 Гц, 1H), 4,46 (дт, J=25,2, 6,0 Гц, 1H), 5,18 (д, J=4,1 Гц, 1H), 5,31 (м, 2H), 5,55 (дк, J=17,9, 4,1 Гц, 1H), 5,98 (дд, J=51,0, 2,8 Гц, 1H), 6,15 (д, J=7,6 Гц, 1H), 6,51 (дд, J=18,9, 1,7 Гц, 1H), 7,55 (т, J=7,6 Гц, 4H), 7,65 (т, J=7,6 Гц, 2H), 8,04 (дд, J=7,9, 1,7 Гц, 4H), 8,59 (с, 1H), 8,75 (д, J=8,3 Гц, 3H), 8,86 (т, J=6,2 Гц, 1H), 11,26 (д, J=4,1 Гц, 2H); ИЭР-МС: m/z 1036,5 [M+H]⁺.

Стадия 6. Получение соединения 34a

Раствор соединения 39g (2,9 г, 2,8 ммоль) в пиридине (55 мл), к которому добавляли Et₃N (19,5 мл, 140 ммоль) и Et₃N·3HF (4,5 мл, 28 ммоль), перемешивали при 45°C до полного превращения (прибл. 5 ч). Реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, добавляли изопропоксиметилсилан (19,8 мл, 112 ммоль) и продолжали перемешивание в течение ночи. Остаток, полученный после концентрирования при пониженном давлении, суспендировали в DCM, добавляли несколько капель метанола. Суспензию перемешивали в течение 20 мин, после чего осадок собирали фильтрованием и высушивали под высоким вакуумом с получением соединения 34a в виде порошка грязно-белого цвета (1,8 г, выход: 79%). ¹H ЯМР (500 МГц DMSO-d₆) δ м. д.: 3,51 (дд, J=46,1, 13,8 Гц, 2H), 3,65 (тд, J=9,0, 3,4 Гц, 1H), 3,81 (к, J=4,1 Гц, 1H), 4,34 (т, J=3,12 Гц, 1H), 4,41 (дт, J=25,9, 6,0 Гц, 1H), 5,21 (м, 2H), 5,40 (м, 2H), 5,92 (дт, J=51,2, 3,8 Гц, 1H), 6,11 (д, J=8,3 Гц, 1H), 6,15 (д, J=6,2 Гц, 1H), 6,50 (дд, J=17,2, 2,8 Гц, 1H), 7,55 (т, J=7,6 Гц, 4H), 7,65 (т, J=7,6 Гц, 2H), 8,04 (дд, J=7,6, 2,1 Гц, 4H), 8,70 (с, 1H), 8,76 (д, J=7,6 Гц, 3H), 8,85 (с, 1H), 11,27 (с, 2H); ИЭР-МС: m/z=808,3 [M+H]⁺.

Стадия 7. Получение соединения 39h

Раствор соединения 34a (890 мг, 1,10 ммоль) и 1H-тетразола (12,86 мл 3-4% раствора в MeCN, высушен на молекулярных ситах 3Å до применения) в безводном THF (50 мл) предварительно обрабатывали активированными молекулярными ситами 3Å в атмосфере N₂ в течение 2 ч. Добавляли в один прием 2-цианоэтил-N, N,N',N'-тетра(изопропил)фосфородиамидит (365 мг, 1,21 ммоль). Реакционную смесь встряхивали в течение 1 ч, после чего добавляли дополнительную порцию 2-цианоэтил-N, N,N',N'-тетра(изопропил)фосфородиамидита (166 мг, 0,55 ммоль). Встряхивание продолжали в течение ночи. После введения дополнительного количества 2-цианоэтил-N, N,N',N'-тетра(изопропил)фосфородиамидита (33 мг, 0,11 ммоль) выполняли встряхивание в течение еще одного дня для достижения полного превращения. Добавили tBuOOH (341 мкл 5,5 M раствора в декане, 1,87 ммоль) и встряхивание продолжали в течение 1 ч. Молекулярные сита удаляли фильтрованием и тщательно промывали с помощью DCM. Фильтрат промывали солевым раствором, насыщенным NaHCO₃ и солевым раствором соответственно, высушивали с помощью MgSO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-5% MeOH в DCM) с получением соединения 39h (168 мг, выход: 16,5%). ИЭР-МС: m/z=923,4 [M+H]⁺.

Стадия 8. Получение соединения 35 (натриевая соль)

Соединение 39h (168 мг, 0,182 ммоль) перемешивали в 33% растворе метиламина в этаноле (10 мл) при комнатной температуре в течение 2 ч. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт растирали в MeCN с последующей очисткой посредством препаративной обращенно-фазной ВЭЖХ (неподвижная фаза: XBridge C18 OBD, 5 мкм, 250×30 мм; подвижная фаза: водный 0,25% бикарбонат аммония (A)-MeCN (B): градиентное элюирование) с получением соединения 35 (аммонийная соль). Превращение в натриевую соль проводили элюированием водным раствором колонки, заполненной натриевой катионообменной смолой с получением соединения 35 (натриевая соль) в виде рыхлого белого твердого вещества после лиофилизации (25 мг, выход: 20%). ¹H ЯМР (600 МГц, DMSO-d₆, 67 °C) δ м. д. 10,60 (уш. с, 1H), 8,32 (уш. с, 1H), 8,27 (с, 1H), 8,14 (с, 1H), 8,13 (с, 1H), 7,32 (уш. с, 2H), 7,14 (уш. с, 2H), 6,29 (дд, J=15,4, 4,4 Гц, 1H), 6,05 (д, J=8,8 Гц, 1H), 6,00-6,14 (м, 1H), 5,48-5,59 (м, 2H), 5,27 (дд, J=53,0, 3,6 Гц, 1H), 4,46-4,53 (м, 1H), 4,42-4,46 (м, 1H), 4,08 (дт, J=11,7, 7,5 Гц, 1H), 3,73 (ддд, J=11,7, 6,0, 3,3 Гц, 1H), 3,69 (уш. д, J=14,7 Гц, 1H), 3,49 (уш. д, J=14,4 Гц, 1H); ³¹P ЯМР (162 МГц, DMSO-d₆) δ м. д. -1,33 (с, 1P); ИЭР-МС: m/z 660,3 [M+H]⁺.

Пример 40

Соединение 53

Стадия 1. Получение соединения 40b

В реакционную колбу помещали DMAP (1,43 г, 11,7 ммоль), безводный DCM (9 мл) и активированные молекулярные сита 4Å. Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч в инертной атмосфере. Одновременно раствор 5'-O-DMTr-2'-F-дезоксиинозина [CAS 51424-83-1] (1,47 г, 2,57 ммоль) и раствор сульфамата 40a (2,0 г, 2,34 ммоль) (каждый в безводном DCM) (2×9 мл) высушивали на активированных молекулярных ситах 4Å (прибл. 3 ч). Оба раствора последовательно переносили в реакционную колбу. Полученную реакционную смесь перемешивали при температуре 40°C в течение ночи. Молекулярные сита удаляли фильтрованием и тщательно промывали с помощью DCM. Фильтрат промывали насыщенным водным NaHCO₃, впоследствии экстрагировали водную фазу с помощью DCM. Объединенные органические фазы высушивали над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 1-3% MeOH в DCM) с получением очищенного соединения 40b (2,01 г, 65,9%). ИЭР-МС: m/z 1303,8 [M+H]⁺.

Стадия 2. Получение соединения 40c

Соединение 40b (2,0 г, 1,53 моль) растворяли в DCM (77 мл), к которому добавляли воду (140 мкл, 7,65 ммоль) и DCA (490 мкл, 5,98 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч, после чего добавляли пиридин (620 мкл, 7,65 ммоль) и небольшое количество MeOH. Полученную смесь частично концентрировали при пониженном давлении и переносили на силикагелевую колонку для очистки (градиентное элюирование: 0-18% MeOH в DCM) с получением соединения 40c (0,92 г, 86%). ¹H ЯМР (300 МГц, DMSO-d₆) δ м. д. 12,48 (уш. с, 1H), 12,08 (уш. с, 1H), 11,60 (уш. с, 1H), 8,63 (уш. т, J=5,6 Гц, 1H), 8,34 (с, 1H), 8,23 (с, 1H), 8,09 (д, J=3,2 Гц, 1H), 6,31 (дд, J=16,4, 2,9 Гц, 1H), 5,58-5,88 (м, 3H), 5,37 (уш. т, J=5,0 Гц, 1H), 5,18-5,30 (м, 1H), 4,65 (к, J=5,9 Гц, 1H), 4,23-4,33 (м, 1H), 4,05 (к, J=5,0 Гц, 1H), 3,84 (т, J=4,1 Гц, 1H), 3,70-3,81 (м, 1H), 3,54-3,68 (м, 1H), 3,42 (с, 3H), 3,20-3,40 (м, 2H), 2,75 (спт, J=6,9 Гц, 1H), 1,12 (уш. д, J=7,0 Гц, 3H), 1,11 (уш. д, J=7,0 Гц, 3H); ИЭР-МС: m/z=699,4 [M+H]⁺.

Стадия 3. Получение соединения 40d

Раствор соединения 40c (200 мг, 0,286 ммоль) и 1H-тетразола (5,09 мл, мл 0,45 M раствор в MeCN, 2,29 ммоль) в безводном MeCN (8 мл) обрабатывали молекулярными ситами 4Å в атмосфере N₂ в течение 1 ч, после чего добавляли по каплям 2-цианоэтил-N, N,N',N'-тетра(изопропил)-фосфородиамидит (173 мг, 0,57 ммоль) в безводном MeCN (1,0 мл) в течение 10 мин (Примечание. THF перед работой перегоняли над Na/бензофеноном и MeCN перед работой перегоняли над CaH₂ до применения). Полученную реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 ч. Добавляли раствор tBuOOH (300 мкл, 1,5 ммоль) и продолжали перемешивание в течение еще 30 мин. Реакционную смесь фильтровали через слой диатомитовой земли и концентрировали. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-10% MeOH в DCM) с получением соединения 40d в виде белого твердого вещества (206 мг, 71%). ИЭР-МС: m/z 814,4 [M+H]⁺.

Стадия 4. Получение соединения 53 (натриевая соль)

Соединение 40d (206 мг, 0,253 ммоль) перемешивали в 33% растворе метиламина в этаноле (10 мл) при 40°C в течение 3 ч. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Остаток растворяли в воде, промывали DCM и лиофилизировали. Неочищенный продукт очищали посредством препаративной обращенно-фазной ВЭЖХ (неподвижная фаза: Xbridge OBD C18, 5 мкм, 150×30 мм; подвижная фаза: 10 мМ водный бикарбонат аммония (A) - MeCN (B); градиентное элюирование). Заключительное превращение в натриевую соль проводили элюированием водным раствором колонки, заполненной натриевой ионообменной смолой Dowex 50WX8 с получением соединения 53 (натриевая соль) в виде рыхлого белого твердого вещества после лиофилизации (13 мг, 8%). ¹H ЯМР (400 МГц, D₂O) δ м. д. 8,39 (с, 1H), 8,18 (с, 1H), 8,06 (с, 1H), 6,63 (д, J=19,1 Гц, 1H), 6,12 (д, J=8,5 Гц, 1H), 6,01-5,84 (м, 1H), 5,66 (ддд, J=4,1, 8,7, 19,1 Гц, 1H), 5,54-5,44 (м, 1H), 4,75-4,69 (м, 1H), 4,66 (с, 1H), 4,51 (уш. д, J=11,5 Гц, 1H), 4,26 (д, J=4,8 Гц, 1H), 4,24-4,17 (м, 1H), 4,03-3,94 (м, 1H), 3,91-3,81 (м, 1H), 3,77 (с, 3H); ³¹P ЯМР (162 МГц, D₂O) δ м. д. -2,020 (с, 1P); ¹⁹F ЯМР (376,5 МГц, D₂O) δ м. д. -198,634 (с, 1F); ИЭР-МС: m/z=691,2 [M+H]⁺.

Пример 41

Стадия 1. Получение соединения 41b

Реагент Selectfluor (34,6 г, 97,7 ммоль) и AcOH (100 мл) добавляли к раствору 4-хлор-7H-пирроло[2,3-d]пиримидина [CAS 3680-69-1] (41a, 10,0 г, 65,1 ммоль) в безводном MeCN (500 мл), смесь перемешивали при 70°C до полного превращения (прибл. 16 ч). После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и выпаривали с безводным толуолом. Полученное твердое вещество растворяли в смеси растворителей DCM/EtOAc (1 : 1), полученный раствор фильтровали через слой диатомитовой земли, который тщательно промывали. Объединенные фильтраты концентрировали при пониженном давлении. Очистку проводили колоночной хроматографией на силикагеле (градиентное элюирование: 0-1% MeOH в DCM) с получением соединения 41b в виде грязно-белого твердого вещества (5,2 г, выход: 47%). ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ м. д. 12,49 (с, 1H), 8,63 (с, 1H), 7,73 (т, J=2,8 Гц, 1H); ИЭР-МС: m/z 169,8 [M-H]^-.

Стадия 2. Получение соединения 41c

Бис(триметилсилил)ацетамид (BSA, 3,15 мл, 12,8 ммоль) добавляли к суспензии соединения 41b (2,0 г, 11,6 ммоль) в безводном MeCN (80 мл). После перемешивания в течение 10 мин последовательно добавляли 1,2-ди-O-ацетил-3-O-метил-5-O-бензоил-D-рибофуранозу ([10300-21-7], 4,53 г, 12,8 ммоль) и трифторметансульфонат триметилсилила (TMSOTf, 2,34 мл, 12,8 ммоль). Реакционную смесь перемешивали 15 мин при комнатной температуре и впоследствии переносили на подогретую масляную баню 80 °C, перемешивание продолжали в течение 90 мин. После охлаждения до комнатной температуры реакционную смесь разбавляли с помощью EtOAc и последовательно промывали насыщенным водным NaHCO₃ и солевым раствором. Органический слой высушивали над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Очистку проводили колоночной хроматографией на силикагеле (градиентное элюирование: 0-10% EtOAc в гексане) с получением соединения 41c в виде порошка грязно-белого цвета (1,6 г, выход: 30%). ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ м. д. 8,66 (с, 1H), 7,99 (д, J=1,4 Гц, 1H), 7,95 (д, J=7,6 Гц, 2H), 7,65-7,71 (м, 1H), 7,47-7,56 (м, 2H), 6,42 (д, J=4,1 Гц, 1H), 5,78 (т, J=4,8 Гц, 1H), 4,65 (дд, J=12,2, 3,5 Гц, 1H), 4,51 (дд, J=12,2, 5,1 Гц, 1H), 4,41-4,45 (м, 1H), 4,35-4,40 (м, 1H), 3,41 (с, 3H), 2,09 (с, 3H); ИЭР-МС: m/z 464,0 [M+H]⁺.

Стадия 3. Получение соединения 41d

2M водный NaOH (16 мл) добавляли к раствору соединения 41c (1,6 г, 3,4 ммоль) в диоксане (16 мл). Реакционную смесь перемешивали при 110°C до полного превращения (прибл. 3 ч), после чего охлаждали до комнатной температуры и нейтрализовали 1M водным раствором HCl. Остаток, полученный после концентрирования при пониженном давлении, очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-7% MeOH в DCM) с получением соединения 41d в виде порошка грязно-белого цвета (0,32 г, выход: 45%). ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ м. д. 12,11 (уш. с, 1H), 7,92 (с, 1H), 7,34 (д, J=2,1 Гц, 1H), 6,04 (дд, J=6,2, 1,4 Гц, 1H), 5,42 (д, J=6,2 Гц, 1H), 5,08 (уш. т, J=5,2 Гц, 1H), 4,33-4,43 (м, 1H), 3,96 (к, J=3,8 Гц, 1H), 3,77 (дд, J=5,0, 3,4 Гц, 1H), 3,56-3,65 (м, 1H), 3,49-3,55 (м, 1H), 3,39 (с, 3H); ИЭР-МС: m/z 299,9 [M+H]⁺.

Стадия 4. Получение соединения 41e

Раствор соединения 41d (0,51 г, 1,7 ммоль) в безводном пиридине (8 мл), к которому добавляли DMAP (0,1 г, 0,8 ммоль) и DMTrCl (0,92 г, 2,7 ммоль) (порциями) добавляли, перемешивали при комнатной температуре в течение 16 ч. Реакционную смесь гасили метанолом (5 мл) и концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток растворяли в EtOAc и промывали водой. Органический слой высушивали над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Очистку проводили колоночной хроматографией на силикагеле (градиентное элюирование: 0-2% MeOH в DCM) с получением соединения 41e в виде пены грязно-белого цвета (0,75 г, выход: 74%). ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ м. д. 12,13 (уш. с, 1H), 7,93 (с, 1H), 7,35-7,41 (м, 2H), 7,26-7,32 (м, 2H), 7,22-7,26 (м, 5H), 7,18 (д, J=2,1 Гц, 1H), 6,83-6,90 (м, 4H), 6,06 (дд, J=4,8, 1,4 Гц, 1H), 5,54 (д, J=6,2 Гц, 1H), 4,47 (к, J=5,4 Гц, 1H), 4,05 (к, J=4,4 Гц, 1H), 3,87 (т, J=5,2 Гц, 1H), 3,74 (с, 6H), 3,33 (с, 3H), 3,20 (д, J=4,1 Гц, 2H); ИЭР-МС: m/z 602,3 [M+H]⁺.

Стадия 5. Получение соединения 41f

Каждое из соединения 41e (1,2 г, 2,03 ммоль), сульфамата 17a (2,1 г, 2,43 ммоль) и DMAP (1,2 г, 10,14 ммоль) по отдельности растворяли в безводном DCM (3×30,0 мл). Каждый раствор высушивали с помощью активированных молекулярных сит 3Å путем перемешивания в атмосфере N₂ в течение по меньшей мере 2 ч К раствору DMAP соответственно добавляли раствор соединения 41e в DCM и раствор сульфамата 17a в DCM. Полученную реакционную смесь перемешивали в течение 36 ч Молекулярные сита удаляли фильтрованием и тщательно промывали дихлорметаном. Фильтрат промывали насыщенным водным NaHCO₃, солевым раствором и насыщенным водным NH₄Cl. Объединенные органические фазы высушивали над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-1% MeOH в DCM) с получением соединения 41f (1,3 г, выход: 49%). ИЭР-МС: m/z=1338,77 [M+H]⁺.

Стадия 6. Получение соединения 41g

Раствор соединения 41f (1,3 г, 0,9 ммоль) в DCM (36,5 мл), к которому добавляли DCA (3,2 мл 10% в DCM, 3,8 ммоль) и воду (90 мкл, 4,8 ммоль), перемешивали при комнатной температуре до полного удаления защитных групп. Реакционную смесь гасили добавлением пиридина (0,4 мл, 4,8 ммоль) и нескольких капель метанола. Остаток, полученный после концентрирования при пониженном давлении, суспендировали в дихлорметане, фильтровали и высушивали с получением соединения 41g в виде порошка грязно-белого цвета (0,56 г, выход: 78%). ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ м. д. 12,18 (уш. с, 1H), 11,26 (уш. с, 1H), 8,75 (с, 1H), 8,62 (с, 1H), 8,49 (уш. т, J=5,9 Гц, 1H), 8,06 (д, J=7,6 Гц, 2H), 7,93 (уш. д, J=2,1 Гц, 1H), 7,63-7,70 (м, 1H), 7,53-7,60 (м, 2H), 7,34 (с, 1H), 6,37 (уш. д, J=19,3 Гц, 1H), 6,31 (уш. д, J=5,5 Гц, 1H), 5,86 (уш. с, 1H), 5,59 (уш. д, J=53,7 Гц, 1H), 5,25 (уш. с, 1H), 5,20 (уш. т, J=5,5 Гц, 1H), 4,59 (уш. д, J=18,6 Гц, 1H), 4,03-4,15 (м, 2H), 3,98 (м, J=2,1 Гц, 1H), 3,60-3,67 (м, 1H), 3,53-3,59 (м, 1H), 3,38 (с, 3H), 3,11-3,27 (м, 2H); ИЭР-МС: m/z 734,2 [M+H]⁺.

Стадия 7. Получение соединения 41h

Раствор соединения 41g (100 мг, 0,136 ммоль) в безводном MeCN/DMF (4 мл, 1 : 3) обрабатывали молекулярными ситами 4Å в течение 20 мин в атмосфере N₂, после чего добавляли раствор 1H-тетразола (2,42 мл 0,45 M в MeCN, 1,09 ммоль) и 2-цианоэтил-N, N,N',N'-тетра(изопропил)-фосфородиамидит (82 мг, 0,27 ммоль) в безводном MeCN (1,0 мл) (Примечание. MeCN перед работой перегоняли над CaH₂ перед применением). Полученную реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1,5 ч. Добавляли раствор tBuOOH (126 мкл, 0,69 ммоль) и продолжали перемешивание в течение еще 30 мин. Реакционную смесь разбавляли DCM, впоследствии фильтровали через слой диатомитовой земли и концентрировали. Остаток очищали посредством колоночной флеш-хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-10% MeOH в DCM) с получением соединения 41h (50 мг, чистота 77%). ИЭР-МС: m/z 849,3 [M+H]⁺.

Стадия 8. Получение соединения 54 (натриевая соль)

Вышеуказанное соединение 41h перемешивали в 30% растворе метиламина в этаноле (5 мл) при комнатной температуре в течение 3 ч. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Остаток растворяли в воде, промывали DCM и лиофилизировали. Неочищенный продукт очищали посредством препаративной обращенно-фазной ВЭЖХ (неподвижная фаза: Xbridge OBD C18, 5 мкм, 150×30 мм; подвижная фаза: 10 мМ водный бикарбонат аммония (A) - MeCN (B); градиентное элюирование). Заключительное превращение в натриевую соль проводили элюированием водным раствором колонки, заполненной натриевой ионообменной смолой Dowex 50WX8 с получением соединения 54 (натриевая соль) в виде рыхлого белого твердого вещества после лиофилизации (24 мг, выход: 25% из 41g). ¹H ЯМР (400 МГц, D2O) δ м. д. 8,22 (уш. с, 1H), 7,94 (с, 1H), 7,40 (с, 1H), 7,30 (уш. с, 1H), 6,46-6,34 (м, 2H), 5,39 (уш. дд, J=4,6, 8,1 Гц, 2H), 5,23 (уш. с, 1H), 5,08-4,93 (м, 1H), 4,63 (уш. с, 1H), 4,48 (уш. д, J=8,6 Гц, 1H), 4,41 (уш. д, J=3,9 Гц, 1H), 4,32-4,25 (м, 1H), 4,25-4,18 (м, 1H), 3,77 (уш. д, J=11,7 Гц, 1H), 3,59 (с, 3H), 3,54 (уш. д, J=13,0 Гц, 1H); ¹⁹F ЯМР (376 МГц, D2O) δ м. д. -164,506 (с, 1F), -197,262 (с, 1F); ³¹P ЯМР (162 МГц, D2O) δ м. д. -1,850 (с, 1P); ИЭР-МС: m/z=692,1 [M+H]⁺.

Пример 42

Стадия 1. Получение соединения 42b

Смесь соединения 4h (520 мг, 0,76 ммоль), соединения 42a (372 мг, 0,76 ммоль) и молекулярных сит 4Å (1 г) в THF (20 мл) перемешивали в атмосфере N₂ при 20°C в течение 1 ч. Впоследствии добавляли DMAP (466 мг, 3,81 ммоль). Полученную желтую суспензию перемешивали при 20 °C в течение 17 ч в атмосфере N₂. Реакционную смесь фильтровали и концентрировали при пониженном давлении (< 40 °C) с получением остатка, очищенного посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентный элюент: петролейный эфир/этилацетат от 100/0 до 0/100, впоследствии дихлорметан/метанол от 100/0 до 100/10) с получением соединения 42b (460 мг) в виде бледно-желтого твердого вещества. ¹H ЯМР (400 МГц, CD₃OD) δ м. д. 8,69 (с, 1H), 8,40 (с, 1H), 8,08-8,13 (м, 3H), 7,64-7,71 (м, 1H), 7,54-7,62 (м, 2H), 6,28 (дд, J=19,07, 1,47 Гц, 1H), 5,94 (д, J=8,07 Гц, 1H), 5,57 (д, J=4,40 Гц, 1H), 5,44 (д, J=2,93 Гц, 1H), 4,92-5,00 (м, 1H), 4,61 (дд, J=8,07, 5,38 Гц, 1H), 4,22 (уш. дд, J=8,19, 2,81 Гц, 2H), 4,13-4,17 (м, 1H), 4,06 (уш. дд, J=7,09, 3,18 Гц, 1H), 3,84-3,91 (м, 2H), 3,77-3,82 (м, 1H), 3,37 (с, 3H), 2,69 (дт, J=13,69, 6,85 Гц, 1H), 1,20 (т, J=6,60 Гц, 6H), 0,87-0,96 (м, 17H), 0,17-0,21 (м, 6H), 0,08 (д, J=11,00 Гц, 6H); ИЭР-МС: m/z=1031,2 [M+H]⁺.

Стадия 2. Получение соединения 42c

Раствор соединения 42b (660 мг, 0,64 ммоль), триэтиламина (648,2 мг, 6,4 ммоль) и тригидрофторида триэтиламина (516,3 мг, 3,20 ммоль) в пиридине (20 мл) перемешивали при 10 °C в течение 17 часов. Реакционную смесь фильтровали и концентрировали при пониженном давлении при 30 °C с получением неочищенного масла, очищаемого посредством обращенно-фазной препаративной ВЭЖХ (колонка: Agela DuraShell 5 мкм, 150 мм x 25 мм; подвижная фаза: A: вода (10 мМ NH₄HCO₃) - B: MeCN; градиентное элюирование: A (93%): B (7%) до A (63%) и B (37%) в течение 9 мин; скорость потока 25 мл/мин). Чистые фракции собирали и лиофилизировали досуха с получением соединения 42c (230 мг) в виде белого твердого вещества. ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) δ м. д. 12,08 (с, 1H), 11,63 (с, 1H), 11,26 (с, 1H), 8,69-8,81 (м, 2H), 8,56 (с, 1H), 8,18 (с, 1H), 8,05 (д, J=7,28 Гц, 2H), 7,62-7,71 (м, 1H), 7,50-7,61 (м, 2H), 6,38 (д, J=19,83 Гц, 1H), 5,99 (д, J=6,53 Гц, 1H), 5,84 (д, J=8,78 Гц, 1H), 5,46-5,68 (м, 1H), 5,15 (т, J=5,27 Гц, 1H), 4,59-4,79 (м, 2H), 4,21-4,32 (м, 1H), 4,13-4,19 (м, 1H), 4,03-4,11 (м, 2H), 3,85 (д, J=5,52 Гц, 1H), 3,55-3,63 (м, 1H), 3,45-3,53 (м, 1H), 3,19 (с, 3H), 2,75 (кв., J=6,71 Гц, 1H), 1,11 (дд, J=6,78, 2,76 Гц, 5H), 1,08-1,14 (м, 1H); ИЭР-МС: m/z=801,9 [M+H]⁺.

Стадия 3. Получение соединения 42d

К раствору соединения 42c (310 мг, 0,38 ммоль) в CH₃CN/THF (1 : 1, об./об., 18 мл) добавляли молекулярные сита 4Å (1 г) и 1H-тетразол в CH₃CN (7 мл, 3,15 ммоль, 0,45 M в CH3CN). После перемешивания смеси при 25°C в течение 0,5 ч к смеси добавляли 2-цианоэтил N, N,N',N’-тетраизопропилфосфородиамидит (190 мг, 0,63 ммоль) в CH₃CN. После перемешивания смеси при 30 °C в течение 2 ч к смеси добавляли 1H-тетразол в CH₃CN (1,8 мл, 0,81 ммоль, 0,45 M в CH₃CN). После перемешивания смеси при 30 °C в течение 0,5 ч к реакционной смеси добавляли TBHP (0,4 мл, 2 ммоль, 5 M в декане). После перемешивания смеси при 30 °C в течение 2 ч реакционную смесь фильтровали и концентрировали при пониженном давлении с получением неочищенного соединения 42d (850 мг); ИЭР-МС: m/z=917,1 [M+H]⁺.

Стадия 3. Получение соединения 5 (аммонийная соль)

Соединение 42d (1000 мг, неочищенный) обрабатывали метанамином в EtOH (33%) (10 мл) при кт. После перемешивания реакционной смеси при 20 °C в течение 2 ч смесь фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток растворяли в воде (30 мл) и экстрагировали этилацетатом (10 мл x 2). Водную фазу лиофилизировали досуха с получением остатка, очищенного посредством обращенно-фазной препаративной ВЭЖХ (колонка: Agela DuraShell 5 мкм, 150 мм x 25 мм; подвижная фаза: A: вода (0,04% NH₃ - H₂O+10 мМ NH₄HCO₃) - B : MeCN; градиентное элюирование: A (100%): B (0%) до A (90%) и B (10%) в течение 10 мин; скорость потока 25 мл/мин). Чистые фракции собирали и лиофилизировали досуха с получением соединения 5 (аммонийная соль) (111 мг). ¹H ЯМР (400 МГц, D₂O) δ м. д. 7,98 (с, 1H), 7,56-7,70 (м, 2H), 6,20 (уш. д, J=14,92 Гц, 1H), 5,71 (уш. д, J=9,05 Гц, 1H), 5,18-5,40 (м, 2H), 4,98 (уш. с, 1H), 4,85 (уш. д, J=4,89 Гц, 1H), 4,55 (уш. д, J=10,27 Гц, 1H), 4,44-4,52 (м, 1H), 4,39 (уш. с, 1H), 4,19 (уш. д, J=11,25 Гц, 1H), 4,05-4,16 (м, 2H), 4,01 (уш. д, 1=4,40 Гц, 1H), 3,34-3,43 (м, 1H), 3,35 (с, 3H); ³¹P ЯМР (162 МГц, D₂O)) δ м. д. -2,37 - -0,06 (м, 1P); ⁱ⁹F ЯМР (376 МГц, D₂O) δ м. д. -202,54 (уш. с, 1F); ИЭР-МС: m/z=689,9 [M+H]⁺.

Пример 43

Соединение 20

Стадия 1. Получение соединения 43c

5-[3,5-Бис(трифторметил)фенил]тетразол (9,65 мл 0,25 M раствор в MeCN, 2,41 ммоль, высушен на молекулярных ситах до применения) добавляли к раствору L-бензоил-2',3'-дидезокси-3'-[(трифенилметил)амино]-аденозина 43a [CAS 195375-63-4] (720 мг, 1,21 ммоль) в MeCN (8 мл). Добавляли активированные молекулярные сита и перемешивали полученную смесь в течение 1 ч в атмосфере N₂. Далее в вышеуказанную смесь переносили раствор 5'-O-(4,4-диметокситритил)-N2-изобутирил-3'-O-метилгуанозин-2'-(2-цианоэтил-N, N-диизопропил-фосфорамидита) 43b [CAS 179479-04-0] (2201 мг, 2,53 ммоль) в MeCN (25 мл), высушенный на активированных молекулярных ситах. Полученный реакционный раствор перемешивали в течение 1 ч при комнатной температуре, после чего добавляли tBuQOH (1,10 мл 5,5 M раствор в декане, 6,03 ммоль) и продолжали перемешивание в течение еще одного часа. Реакционную смесь фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Добавляли воду и этилацетат, водную фазу отделяли и экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические фазы сушили безводным Na₂SO₄ и концентрировали при пониженном давлении. Очистку проводили колоночной хроматографией на силикагеле (градиентное элюирование: 0-100% EtOAc в петролейном эфире, затем 0-10% MeOH в EtOAc) с получением соединения 43c (2,3 г). ИЭР-МС: m/z 1381,4 [M+H]⁺.

Стадия 2. Получение соединения 43d

Раствор вышеуказанного соединения 43e (1,3 г, неочищенный) в MeCN (15 мл), к которому добавляли AcOH (80% в воде, 15 мл) и триэтилсилан (4,8 мл, 30,22 ммоль), перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством препаративной обращенно-фазной ВЭЖХ (неподвижная фаза: Xtimate C18, 5 мкм, 150×25 мм; подвижная фаза: 10 мМ водный бикарбонат аммония (A) - MeCN (B); градиентное элюирование) с получением смеси продуктов (260 мг): соединения 43d и его аналога с удаленными цианоэтиловыми защитными группами. ИЭР-МС: m/z 838,2 [M+H]⁺ и 784,2 [M+H]⁺ (соединение с удаленными цианоэтиловыми защитными группами).

Стадия 3. Получение соединения 43e

Смесь соединения 43d и его аналог с удаленными цианоэтиловыми защитными группами (400 мг, ~ 0,49 ммоль) растворяли в пиридине/DCM (1 : 1, мл) с последующим добавлением Et₃N (403 мг, 3,98 ммоль), 4-нитрофенола (346 мг, 2,49 ммоль) и активированных молекулярных сит 4Å. Полученный раствор охлаждали до -78 ºC и перемешивали в инертной атмосфере в течение 1 ч. К этому раствору добавляли раствор хлорсульфата 4-нитрофенила (592 мг, 2,49 ммоль) в DCM (5 мл), высушенный на активированных молекулярных ситах 4Å (1 ч) до применения. Реакционную смесь перемешивали при -78 °C в течение 2 ч после чего ее нагревали до комнатной температуры и перемешивали в течение еще 1,5 ч. Растворитель удаляли при пониженном давлении. Добавляли воду и этилацетат, водную фазу отделяли и экстрагировали этилацетатом. Объединенные органические слои сушили безводным Na₂SO₄ и концентрировали при пониженном давлении. Очистку проводили колоночной хроматографией на силикагеле (градиентное элюирование: 0-100% EtOAc в петролейном эфире, затем 0-10% MeOH в EtOAc) с получением неочищенного соединения 43e, которое использовали в таком виде без какой-либо дополнительной очистки. ИЭР-МС: m/z 899,3 [M+H]⁺.

Стадия 4. Получение соединения 43f

Трет-бутиламин (200 мкл, 1,88 ммоль) добавляли к раствору соединения 43e (100 мг, неочищенное) в этаноле (1 мл). Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и очищали неочищенный продукт посредством препаративной обращенно-фазной ВЭЖХ (неподвижная фаза: Agela Durashell C18, 5 мкм, 150×25 мм, подвижная фаза: 10 мМ водный бикарбонат аммония (A) - MeCN (B); градиентное элюирование) с получением очищенного соединения 43f (7 мг). ИЭР-МС: m/z=846,2 [M+H]⁺.

Стадия 5. Получение соединения 20

Соединение 43f (6 мг, 7,09 мкмоль) перемешивали в 33% растворе метиламина в этаноле (1 мл) при комнатной температуре в течение 1 ч. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении и растирали остаток в MeCN с получением соединения 20 (2 мг, выход: 33%). ¹H ЯМР (600 МГц, DMSO-d₆) δ м. д. 8,37 (с, 1H), 8,17 (с, 1 B), 7,89 (с, 1H), 7,29 (уш. с, 2H), 6,53 (уш. с, 2H), 6,36 (дд, J=9,7, 5,4 Гц, 1H), 5,76 (д, J=9,1 Гц, 1H), 5,08 (тд, J=9,7, 4,3 Гц, 1H), 4,73 (уш. д, J=5,1 Гц, 1H), 4,37 (д, J=11,2 Гц, 1H), 4,29 (с, 1H), 4,16-4,22 (м, 2H), 4,15 (уш. дд, J=11,8, 2 Гц, 1H), 3,94 (д, J=4,1 Гц, 1H), 3,52-3,57 (м, 1H), 3,50 (с, 3H), 3,12-3,19 (м, 1H), 2,44-2,49 (м, 1H); ³¹P ЯМР (162 МГц, DMSO-d₆) δ м. д. 0,97 (с, 1P); ИЭР-МС: m/z 672,3 [M+H]⁺.

Пример 44

Соединение (*R) 10A

Стадия 1. Получение соединения 44a

Соединение 6g (95 мг, 0,117 ммоль) совместно выпаривали со смесью безводный толуол : ацетонитрил (1 : 1, об./об., 3×30 мл), впоследствии растворяли в безводном THF (10 мл), добавляли порошок молекулярных сит 4 Å (0,3 г) и 0,45 M тетразол в CH₃CN (2,0 мл, 0,936 ммоль) и барботировали полученную гетерогенную смесь аргоном в течение 4 мин. После перемешивания этой смеси при кт в течение 10 мин добавляли раствор 2-цианоэтил N, N-диизопропил-хлорфосфорамидит в CH₃CN (57 мг, 0,18 ммоль, в 3,0 мл CH₃CN) при кт в течение 30 мин. После перемешивания реакционной смеси в течение 1,5 ч молекулярные сита удаляли фильтрованием и промывали THF (15 мл). Фильтрат использовали непосредственно на следующей стадии. Добавляли раствор DDTT (119 мг, 0,585 ммоль растворяли в 5 мл пиридина). После перемешивания реакционной смеси при кт в течение 30 мин смесь разбавляли с помощью EtOAc (30 мл) и промывали насыщенным водным NaHCO3 (1 × 20 мл) и солевым раствором (1 × 20 мл). Водный слой подвергали обратной экстракции с помощью EtOAc (1 × 40 мл). Объединенные органические слои выпаривали досуха, очищали полученный неочищенный материал посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (MeOH в DCM: 0-15%, об./об.) с получением соединения 44a (58 мг); ИЭР-МС: m/z 943 [M+H]⁺.

Стадия 2. Получение соединения (*R) 10A (натриевая соль)

Раствор соединения 44a (58 мг, 0,06 ммоль) в MeNH₂ (33% в EtOH, 10 мл) перемешивали при 40 °C в течение 2 ч 30 мин, концентрировали при пониженном давлении. Полученное неочищенное твердое вещество промывали DCM (15 мл) и осадок фильтровали и очищали посредством обращенно-фазной препаративной ВЭЖХ (колонка: Synergi 4 мкм, Hydro RP, 250 мм x 4,6 мм, подвижная фаза: буфер A: 50 мМ ацетата триэтиламмония в воде; буфер B: 50 мМ ацетата триэтиламмония в CH₃CN; градиент: 0-40% B в течение 30 мин, скорость потока: 24 мл/мин) с получением соединения (*R) 10A (15,9 мг) в виде соли TEAA. Заключительное превращение в натриевую соль проводили элюированием водным раствором колонки, заполненной натриевой катионообменной смолой, с получением

Стадия 3. Получение соединения (*R) 10A (натриевая соль)

Смолу Dowex 50W x 8, 200-400 (5 мл, H-форма) помещали в стакан и промывали деионизированной водой (30 мл), к смоле добавляли 15% H₂SO₄ в деионизированной воде; смесь осторожно перемешивали в течение 5 мин и декантировали (30 мл). Смолу переносили на колонку с 15% H₂SO₄ в деионизированной воде и промывали 15% H₂SO₄ (по меньшей мере 4 CV [объема колонки]) и впоследствии деионизированной водой до достижения нейтрального pH (pH бумаги). Смолу переносили обратно в стакан, добавляли раствор 15% NaOH в деионизированной воде и смесь осторожно перемешивали в течение 5 мин и декантировали (1 ×). Смолу переносили на колонку и промывали 15% NaOH в воде (по меньшей мере 4 объема колонки) и впоследствии деионизированной водой до достижения нейтрального pH. Соединение 16 (15,9 мг) растворяли в минимальном количестве деионизированной воды, добавляли в верхнюю часть колонки и элюировали деионизированной водой. Соответствующие фракции объединяли (UV) и лиофилизировали с получением соединения (*R) 10A (натриевая соль) (15,1 мг). ¹H ЯМР (400 МГц, D₂O): δ 8,33 (с, 1H), 7,99 (с, 1H), 7,71 (с, 1H), 6,30-6,42 (м, 2H), 6,22 (д, J=8,0 Гц, 1H), 5,43 (с, 1H), 5,27 (с, 1H), 4,84-4,98 (м, 1H), 4,60-4,70 (м, 1H), 4,56 (д, J=3,6 Гц, 1H), 4,32 (д, J=8,4 Гц, 1H), 4,12 (д, J=8,0 Гц, 1H), 4,01-4,11 (м, 1H), 3,81 (д, J=11,6 Гц, 1H), 3,69 (с, 3H), 3,55 (д, J=11,6 Гц, 1H); ³¹P ЯМР (162 МГц, D₂O): δ 54,07 (с, 1P); ИЭР-МС: m/z: 714,7 [M-1]^-.

Пример 45

Получение соединения 45b

Соединение 45a (200 мг, 0,216 ммоль) выпаривали со смесью безводный толуол : MeCN (1 : 1, об./об., 3×30 мл), впоследствии растворяли в безводном THF (20 мл), добавляли порошок молекулярных сит 4 Å (0,8 г) и 0,45 M тетразол в MeCN (3,8 мл, 1,72 ммоль). Полученную гетерогенную смесь барботировали аргоном в течение 4 мин. После перемешивания данной смеси при кт в течение 10 мин к ней добавляли раствор 2-цианоэтил-N, N,N',N'-тетра-(изопропил)фосфородиамидита (105 мг, 0,345 ммоль) в MeCN (3 мл) при кт в течение 30 мин. После перемешивания реакционной смеси в течение 90 мин ее фильтровали, впоследствии промывали THF (15 мл). Полученную смесь (MS: m/z 1007 [M+H]⁺) использовали напрямую на следующей стадии. К смеси добавляли 0,5 M йод (в смеси THF : вода : Py 8 : 1 : 1, об./об./об.) до получения устойчивого цвета. После перемешивания при кт в течение 30 мин реакционную смесь впоследствии разбавляли с помощью EtOAc (30 мл), избыток йода гасили водным насыщенным Na₂S₂O₃ (до обесцвечивания). Фазы разделяли; органическую фазу промывали водным насыщенным NaHCO₃ (1 × 20 мл), водным насыщенным NaCl (1 × 20 мл). Водную фазу подвергали обратной экстракции с помощью EtOAc (1 × 20 мл). Объединенную органическую фазу выпаривали досуха, полученный неочищенный материал очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (0-15% MeOH в DCM, об./об.) с получением 45b (135 мг). ИЭР-МС: m/z=1023 [M+H]⁺.

Получение соединения 45c

Соединение 45b (135 мг) обрабатывали 33% раствором метиламина в этаноле (10 мл) при кт. После перемешивания при 40°C в течение 2 ч реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Полученное неочищенное твердое вещество промывали DCM (15 мл) и осадок фильтровали с получением 45c (98 мг) в виде твердого вещества. ИЭР-МС: m/z=796 [M+H]⁺.

Получение соединения 17 (натриевая соль)

Соединение 45c (98 мг) обрабатывали 80% водным раствором TEA (4 мл) при 0 C. После перемешивания при 0 C в течение 1 ч реакционную смесь концентрировали в вакууме с получением неочищенного продукта в виде бесцветного масла. Неочищенный продукт очищали посредством обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (колонка: Synergi 4 мкм, Hydro RP, 250 мм × 30 мм, подвижная фаза: буфер A: 50 мМ ацетат триэтиламмония в воде; буфер B: 50 мМ ацетат триэтиламмония в CH₃CN, градиент: 0-40% B в течение 30 мин, скорость потока 24 мл/мин) с получением соединения 17 (24,2 мг) в виде соли TEAA. ИЭР-МС: m/z: 674 [M-1]^-.

Получение натриевой соли

Смолу Dowex 50W × 8, 200-400 (5 мл, H-форма) помещали в стакан и промывали деионизированной водой (30 мл). Впоследствии к смоле добавляли 15% H₂SO₄ в деионизированной воде, смесь осторожно перемешивали в течение 5 мин и декантировали (30 мл). Смолу переносили на колонку с 15% H₂SO₄ в деионизированной воде и промывали 15% H₂SO₄ (по меньшей мере 4 объема колонки) и впоследствии деионизированной водой до нейтральной реакции. Смолу переносили обратно в стакан, добавляли раствор 15% NaOH в деионизированной воде и смесь осторожно перемешивали в течение 5 мин и декантировали (1 ×). Смолу переносили на колонку и промывали 15% NaOH в воде (по меньшей мере 4 объема колонки) и впоследствии деионизированной водой до нейтральной реакции. TEAA-соль соединения 17 (1 : 1, об./об.) растворяли в минимальном количестве деионизированной воды и MeCN (1 : 1, об./об.), добавляли в верхнюю часть колонки и элюировали деионизированной водой. Соответствующие фракции объединяли и лиофилизировали с получением соединения 17 (натриевая соль) (22,9 мг). ¹H ЯМР (400 МГц, D₂O) δ м. д. 8,31 (с, 1H), 7,95 (с, 1H), 7,76 (с, 1H), 6,74 (с, 1H), 6,15-6,25 (м, 2H), 5,45-5,55 (м, 1H), 5,25 (д, J=4,8 Гц, 0,5H), 5,13 (д, J=4,8 Гц, 0,5H), 4,75-4,90 (м, 1H), 4,65 (с, 1H), 4,35-4,45 (м, 1H), 4,33 (д, J=9,6 Гц, 1H), 4,10-4,25 (м, 2H), 3,55-3,70 (дд, J=3,2, 13,2 Гц, 1H), 3,38 (д, J=12 Гц, 1H); ³¹P ЯМР (162 МГц, D₂O) δ -1,895 м. д. (с, 1P); ¹⁹F ЯМР (379 МГц, D₂O) δ -196,91 м. д. (широкий пик, 1F); ИЭР-МС: m/z: 658,5 [M-1]^-.

Пример 46

Получение соединения 46b

Соединение 46a (110 мг, 0,123 ммоль) выпаривали со смесью безводный толуол : ацетонитрил (1 : 1, об./об., 3×30 мл), впоследствии растворяли в безводном THF (14 мл), добавляли порошок молекулярных сит 4 Å (0,5 г) и 0,45 M тетразол в MeCN (2,1 мл, 0,989 ммоль). Полученную гетерогенную смесь барботировали с помощью Ar в течение 4 мин. После перемешивания смеси при кт в течение 10 мин добавляли раствор 2-цианоэтил-N, N,N',N'-тетра(изопропил)фосфородиамидита (60 мг, 0,197 ммоль) в MeCN (3,0 мл) при кт в течение 30 мин. После перемешивания при кт в течение 90 мин реакционную смесь фильтровали, впоследствии промывали THF (15 мл). Полученную смесь (MS: m/z 989 [M+H]⁺) использовали напрямую на следующей стадии. К смеси добавляли 0,5 M йод (в смеси THF : вода : Py 8 : 1 : 1, об./об./об.) до получения устойчивого цвета. После перемешивания при кт в течение 30 мин реакционную смесь разбавляли с помощью EtOAc (30 мл), избыток йода гасили водным насыщенным Na₂SiO₃ (до обесцвечивания). Фазы разделяли; органическую фазу промывали водным насыщенным Na₂S₂O₃ (до обесцвечивания). Фазы разделяли; органическую фазу промывали водным насыщенным NaHCO3 (1 × 20 мл), водным насыщенным NaCl (1 × 20 мл). Водную фазу подвергали обратной экстракции с помощью EtOAc (1 × 20 мл). Объединенную органическую фазу выпаривали досуха, полученный неочищенный материал очищали посредством колоночной флэш-хроматографии на силикагеле (0-15% MeOH в дихлорметане, об./об.) с получением соединения 46b (77 мг). ИЭР-МС: m/z=1005,8 [M+H]⁺.

Получение соединения 46c

Соединение 46b (77 мг) подвергали воздействию 33% раствора метиламина в этаноле (6 мл) при кт. После перемешивания при 40°C в течение 2 ч реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Полученное неочищенное твердое вещество промывали DCM (15 мл) и осадок фильтровали с получением соединения 46c (43 мг). ИЭР-МС: m/z=778 [M+H]⁺.

Получение соединения 18 (натриевая соль)

Соединение 46c (43 мг) обрабатывали 80% водным TEA (2 мл). После перемешивания при кт в течение 1 ч реакционную смесь концентрировали в вакууме с получением остатка в виде бесцветного масла. Остаток очищали посредством обращенно-фазовой препаративной ВЭЖХ (колонка: Synergi 4 мкм, Hydro RP, 250 мм x 30 мм, подвижная фаза: буфер A: 50 мМ ацетата триэтиламмония в воде; буфер B: 50 мМ ацетата триэтиламмония в CH₃CN, градиент: 0-40% B в течение 30 мин, скорость потока 24 мл/мин) с получением соединения 18 (6,4 мг) в виде соли TEAA.

Смолу Dowex 50W × 8, 200-400 (5 мл, H-форма) помещали в стакан и промывали деионизированной водой (30 мл). Впоследствии к смоле добавляли 15% H₂SO₄ в деионизированной воде, смесь осторожно перемешивали в течение 5 мин и декантировали (30 мл). Смолу переносили на колонку с 15% H₂SO₄ в деионизированной воде и промывали 15% H₂SO₄ (по меньшей мере 4 объема колонки) и впоследствии деионизированной водой до нейтральной реакции. Смолу переносили обратно в стакан, добавляли 15% раствор NaOH в деионизированной воде, смесь осторожно перемешивали в течение 5 мин и декантировали (1 ×). Смолу переносили на колонку и промывали 15% NaOH в воде (по меньшей мере 4 объема колонки) и впоследствии деионизированной водой до нейтральной реакции, соединение 18 (TEAA-соль) (6,4 мг) растворяли в минимальном количестве деионизированной воды и MeCN (1 : 1, об./об.), добавляли в верхнюю часть колонки и элюировали деионизированной водой. Соответствующие фракции объединяли и лиофилизировали с получением соединения 18 (натриевая соль) (5,9 мг). ¹H ЯМР (400 МГц, D₂O) δ м. д. 7,93 (с, 1H), 7,84 (с, 1H), 7,21 (с, 1H), 6,32 (дд, J=2,8; 4,8 Гц, 1H), 6,05 (д, J=8,4 Гц, 1H), 5,92-6,01 (м, 1H), 5,15-5,25 (м, 1H), 4,61 (д, J=12 Гц, 1H), 4,30-4,36 (м, 1H), 3,90-4,20 (м, 3H), 3,50-3,58 (дд, J=3,2, 13,2 Гц, 1H), 3,20-3,33 (дд, J=2, 13,2 Гц, 1H), 2,60-2,75 (м, 2H); ³¹P ЯМР (162 МГц, D₂O) δ м. д. -0,838 (с, 1P); ИЭР-МС: m/z: 656,8 [M-1]^-.

Пример 47

Стадия 1. Получение соединения 47b

Хлортриметилсилан (2,08 мл, 16,38 ммоль) по каплям добавляли к раствору соединения 47a [CAS 174171-97-2] (1 г, 3,28 ммоль) в безводном пиридине (60 мл) при 0 °C. Реакционную смесь перемешивали при 0°C в течение 2 ч, после чего добавляли по каплям хлорид бензоила (1,89 мл, 16,38 ммоль). Перемешивание продолжали при комнатной температуре в течение 3 ч. Реакционный раствор охлаждали до 0 °C, добавляли воду (30 мл) с последующим добавлением водного раствора аммиака (30 мл 25% раствора), перемешивание продолжали в течение 90 мин при 0 °C. Реакционный раствор экстрагировали с помощью EtOAc, объединенные органические слои высушивали с помощью Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Очистку проводили колоночной хроматографией на силикагеле (градиентное элюирование: 50-100% EtOAc в петролейном эфире) с получением соединения 47b в виде белого твердого вещества (1,1 г, выход: 82%). ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ м. д. 11,17 (с, 1H), 8,75 (с, 1H), 8,64 (с, 1H), 8,05 (д, J=7,3 Гц, 2H), 7,61-7,68 (м, 1H), 7,46-7,59 (м, 2H), 5,02-5,09 (м, 1H), 4,90-5,01 (м, 1H), 4,83 (т, J=5,3 Гц, 1H), 4,59 (дд, J=7,2, 3,9 Гц, 1H), 3,53 (уш. т, J=5,0 Гц, 2H), 2,17-2,41 (м, 3H), 1,50 (с, 3H), 1,25 (с, 3H); ИЭР-МС: m/z 410,2 [M+H]⁺.

Стадия 2. Получение соединения 47c

DMAP (448 мг, 3,66 ммоль) и хлорид тозила (2,79 г, 14,65 ммоль) добавляли к раствору соединения 47b (3 г, 7,32 ммоль) и Et₃N (3,07 мл, 21,98 ммоль) в DCM (6 мл) при охлаждении льдом. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 4 ч. Смесь гасили водой и экстрагировали с помощью DCM. Органический слой промывали солевым раствором, высушивали безводным Na₂SO₄ и выпаривали при пониженном давлении с получением тозилированного продукта. Неочищенный продукт растворяли в DMF (15 мл) с последующим добавлением азида натрия (1,88 г, 28,91 ммоль), полученную реакционную смесь перемешивали при 35°C в течение 16 ч. Далее реакционную смесь охлаждали до комнатной температуры, разбавляли насыщенным водным Na₂CO₃ и экстрагировали EtOAc. Органический слой отделяли, промывали солевым раствором, высушивали безводным Na₂SO₄ и выпаривали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-25% EtOAc в петролейном эфире) с получением соединения 47c в виде желтого твердого вещества (2, 1 г, выход: 61%). ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ м. д. 1,25 (с, 3H), 1,51 (с, 3H), 2,24-2,48 (м, 3H), 3,53 (дд, J=12,3, 6,3 Гц, 1H), 3,60 (дд, J=12,3, 5,3 Гц, 1H), 4,02 (к, J=7,2 Гц, 1H), 4,58 (дд, J=7,2, 4,6 Гц, 1H), 4,93-5,03 (м, 1H), 5,03-5,11 (м, 1H), 7,51-7,59 (м, 2H), 7,60-7,71 (м, 1H), 8,04 (д, J=7,5 Гц, 2H), 8,64 (с, 1H), 8,75 (с, 1H), 11,19 (уш. с, 1H); ИЭР-МС: m/z 435,1 [M+H]⁺.

Стадия 3. Получение соединения 47d

TFA (100 мл, 75% в воде) добавляли к раствору соединения 47c (3,47 г, 7,99 ммоль) в DCM (20 мл), полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении, полученный остаток растворяли в EtOAc и промывали насыщенным водным K₂CO₃, водный слой отделяли и экстрагировали EtOAc. Объединенные органические слои высушивали безводным Na₂SO₄ и выпаривали в вакууме с получением соединения 47d в виде белого твердого вещества (3,25 г, неочищенный продукт), которое использовали в таком виде на следующей стадии. ИЭР-МС: m/z 395,0 [M+H]⁺.

Стадия 4. Получение соединения 47e

Соединение 47d (3,25 г) растворяли в DMF (22 мл) с последующим добавлением имидазола (1,57 г, 23,0 ммоль) и TBSCl (1,39 г, 9,20 ммоль). Параллельно в тех количествах проводили вторую реакцию. Обе реакционные смеси перемешивали при комнатной температуре в течение ночи, после чего добавляли EtOAc и солевой раствор. Органическую фазу отделяли и экстрагировали водный слой с помощью EtOAc. Объединенные органические слои высушивали безводным Na₂SO₄, фильтровали и выпаривали при пониженном давлении с получением неочищенной смеси региоизомеров. Разделение проводили препаративной обращенно-фазной ВЭЖХ (неподвижная фаза: Phenomenex Synergi, 10 мкм Max-RP, 250×50 мм; подвижная фаза: вода (A) - MeCN (B); градиентное элюирование) с получением соединения 47e (2,0 мг, выход: 24%) в виде первого элюируемого изомера и 3’-TBS-защищенного региоизомера (47ea, структура не показана, 2,5 г, выход: 31%) в виде второго элюируемого изомера. ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ м. д. 11,13 (с, 1H), 8,72 (с, 1H), 8,61 (с, 1H), 8,04 (уш. д, J=7,5 Гц, 2H), 7,61-7,68 (м, 1H), 7,51-7,58 (м, 2H), 4,91-5,01 (м, 1H), 4,78 (д, J=5,3 Гц, 1H), 4,52 (дд, J=8,5, 5,5 Гц, 1H), 3,79-3,86 (м, 1H), 3,54-3,64 (м, 2H), 2,34 (дт, J=12,6, 8,5 Гц, 1H), 2,16-2,28 (м, 1H), 1,94-2,04 (м, 1H), 0,64 (с, 9H), -0,16 (с, 3H), -0,38 (с, 3H); ИЭР-МС: m/z=509,2 [M+H]⁺.

Стадия 5. Получение соединения 47f

DMTrCl (394 мг, 1,16 ммоль), AgNO₃ (492 мг, 2,90 ммоль) и 2,4,6-коллидин (351 мг, 2,90 ммоль) добавляли к раствору соединения 47e (300 мг, 0,59 ммоль) в DCM (6 мл), полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Реакционную смесь гасили солевым раствором, водный слой отделяли и экстрагировали с помощью DCM. Объединенные органические слои высушивали безводным Na₂SO₄, фильтровали и выпаривали в вакууме. Неочищенный продукт очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-100% EtOAc в петролейном эфире) с получением соединения 47f (430 мг, выход: 90%) в виде желтого твердого вещества. ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ м. д. -0,68 (с, 3H), -0,22 (с, 3H), 0,67-0,75 (м, 9H), 0,80-0,89 (м, 1H), 1,54-1,66 (м, 1H), 2,00-2,08 (м, 1H), 2,29-2,39 (м, 1H), 3,21 (дд, J=12,0, 5,9 Гц, 1H), 0,00 (уш. дд, J=3,9, 1,0 Гц, 1H), 3,74 (с, 3H), 3,75 (с, 3H), 4,58 (дд, J=9,3, 3,9 Гц, 1H), 5,37 (к, J=9,3 Гц, 1H), 6,83-6,96 (м, 4H), 7,20-7,27 (м, 1H), 7,28-7,35 (м, 2H), 7,36-7,44 (м, 4H), 7,50-7,60 (м, 4H), 7,61-7,67 (м, 1H), 8,05 (уш. д, J=7,6 Гц, 2H), 8,62-8,69 (м, 1H), 8,71 (с, 1H), 11,12 (уш. с, 1H); ИЭР-МС: m/z 811,3 [M+H]⁺.

Стадия 6. Получение соединения 47g

Суспензию соединения 47f (3,23 г, 3,98 ммоль) в EtOAc (150 мл) перемешивали в атмосфере H₂ (15 фунтов на кв. дюйм) при 30°C в течение ночи в присутствии Pd/C (10% на угле, 3,0 г). Катализатор удаляли фильтрованием через диатомитовую землю, фильтрат концентрировали при пониженном давлении с получением соединения-амина, которое использовали сразу в таком виде на следующей стадии. Неочищенный продукт растворяли в DCM (110 мл) с последующим добавлением 4-нитрофенола (3,53 г, 25,38 ммоль), Et3N (2,12 мл, 15,23 ммоль) и активированных молекулярных сит. Полученную смесь охлаждали до -78°C в атмосфере N₂, после чего добавляли по каплям хлорсульфат 4-нитрофенила (3,62 г, 15,23 ммоль) в DCM (20 мл), реакционному раствору позволяли нагреться до комнатной температуры и перемешивали в течение ночи. Смесь разбавляли DCM и фильтровали через слой диатомитовой земли. Фильтрат промывали насыщенным водным NaHCO₃, высушивали над Na₂SO₄ и концентрировали. Неочищенный продукт очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-50% EtOAc в петролейном эфире) с получением соединения 47g (2,6 г, выход: 67%). ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ м. д. -0,62 (с, 3H), -0,30 (с, 3H), 0,65 (с, 9H), 1,92-2,11=1 (м, 2H), 2,44 (уш. дд, J=9,9, 3,5 Гц, 1H), 2,85-3,01 (м, 1H), 3,04-3,15 (м, 1H), 3,45 (уш. д, J=3,9 Гц, 1H), 3,72 (с, 3H), 3,72 (с, 3H), 4,68 (уш. дд, J=9,5, 3,9 Гц, 1H), 5,47 (к, J=9,5 Гц, 1H), 6,87 (с, 3H), 7,19-7,25 (м, 1H), 7,26-7,34 (м, 2H), 7,35-7,48 (м, 5H), 7,51-7,60 (м, 3H), 7,62-7,70 (м, 1H), 8,05 (уш. д, J=7,3 Гц, 2H), 8,33 (д, J=9,0 Гц, 2H), 8,67 (д, J=7,1 Гц, 1H), 8,80 (уш. т, J=5,7 Гц, 1H), 11,15 (с, 1H); ИЭР-МС: m/z 986,6 [M+H]⁺.

Стадия 7. Получение соединения 47h

Активированные молекулярные сита добавляли к раствору соединения 47g (1 г, 1,07 ммоль) и 5'-O-(4,4'-диметокситритил)-N2-изобутирил-3'-O-метил-D-гуанозина [CAS 103285-33-2] (717 мг, 1,01 ммоль) в безводном THF (25 мл) и перемешивали полученную смесь в азотной атмосфере при комнатной температуре в течение 2 ч. Далее для инициирования реакции добавляли раствор DMAP (619 мг, 5,07 ммоль) в THF (10 мл), полученный путем перемешивания в течение 2 ч в присутствии активированных молекулярных сит. Полученную реакционную смесь перемешивали при температуре 50°C в течение ночи. Молекулярные сита удаляли фильтрованием и промывали фильтрат насыщенным водным NaHCO₃. Водную фазу экстрагировали с помощью DCM. Объединенные органические слои сушили с помощью Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-2% MeOH в DCM) с получением соединения 47h (875 мг, выход: 54%). ИЭР-МС: m/z 759,2 [M+2H]/2⁺.

Стадия 8. Получение соединения 47i

Раствор соединения 47h (875 мг, 0,56 ммоль) в DCM (40 мл) обрабатывали DCA (0,19 мл, 2,25 ммоль) в присутствии воды (0,05 мл, 2,81 ммоль) в течение 1 ч. Реакционную смесь гасили добавлением пиридина (0,23 мл, 2,81 ммоль) в метаноле (2 мл) с последующим концентрированием при пониженном давлении. Полученный остаток растворяли в DCM, полученный раствор промывали водой и солевым раствором, высушивали безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-5% MeOH в DCM) с получением соединения 47i в виде белого твердого вещества (465 мг, выход: 91%). ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ м. д. 12,11 (уш. с, 1H), 11,58 (уш. с, 1H), 11,09 (уш. с, 1H), 8,70 (с, 1H), 8,57 (с, 1H), 8,44 (уш. с, 1H), 8,29 (с, 1H), 8,05 (д, J=7,3 Гц, 2H), 7,59-7,70 (м, 1H), 7,47-7,58 (м, 2H), 6,10 (д, J=6,5 Гц, 1H), 5,41 (дд, J=6,5, 5,3 Гц, 1H), 5,29 (т, J=5,3 Гц, 1H), 4,91 (к, J=9,3 Гц, 1H), 4,54 (уш. д, J=3,7 Гц, 1H), 4,48 (дд, J=8,7, 5,5 Гц, 1H), 4,22 (дд, J=4,9, 2,4 Гц, 1H), 4,15 (к, J=3,3 Гц, 1H), 3,76 (уш. с, 1H), 3,54-3,73 (м, 2H), 3,49 (с, 3H), 2,97 (дд, J=13,4, 7,7 Гц, 1H), 2,81-2,90 (м, 1H), 2,75 (спт, J=6,8 Гц, 1H), 2,18-2,29 (м, 1H), 2,02-2,15 (м, 1H), 1,74-1,87 (м, 1H), 1,11 (д, J=6,5 Гц, 3H), 1,08 (д, J=6,9 Гц, 3H), 0,63 (с, 9H), -0,17 (с, 3H), -0,41 (с, 3H); ИЭР-МС: m/z 912,7 [M+H]⁺.

Стадия 9. Получение соединения 47j

Раствор соединения 47i (280 мг, 0,31 ммоль) и 1H-тетразола (3,58 мл 3-4% в MeCN, предварительно высушен на активированных молекулярных ситах 3Å) в MeCN/THF (1 : 1, 44 мл, предварительно высушен на активированных молекулярных ситах 3Å) обрабатывали активированными молекулярными ситами 3Å в течение 2 ч в атмосфере N₂, после чего в один прием добавляли 2-цианоэтил-N, N,N',N'-тетра(изопропил)фосфородиамидит (97 мкл, 0,31 ммоль). Полученную реакционную смесь встряхивали при комнатной температуре в течение 3 ч. Добавляли PADS (0,19 г, 0,61 ммоль) и продолжали встряхивание в течение еще одного часа. Молекулярные сита удаляли фильтрованием и промывали дихлорметаном. Объединенные фильтраты промывали насыщенным водным NaHCO₃ и солевым раствором, высушивали с помощью MgSO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-10% MeOH в DCM) с получением соединения 47j (91 мг, выход: 26%) в виде одного диастереомера. ³¹P ЯМР (162 МГц, DMSO-d₆) δ м. д. 66,65 (с, 1P); ИЭР-МС: m/z 1043,7 [M+H]⁺.

Стадия 10. Получение соединения (*R) 21 A (натриевая соль)

Соединение 47j (86 мг, 0,077 ммоль) перемешивали в 33% растворе метиламина в этаноле (4 мл) при 45°C до полного превращения (прибл. 1 ч), после чего реакционный раствор охлаждали до комнатной температуры и концентрировали при пониженном давлении. Остаток растворяли в пиридине (4 мл) с последующим добавлением Et₃N (320 мкл, 2,32 ммоль) и тригидрофторида триэтиламина (200 мкл, 1,16 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 45°C в течение 18 ч. Добавляли изопропокситриметилсилан (0,82 мл, 4,65 ммоль) и продолжали перемешивание при комнатной температуре в течение 18 ч. Остаток, полученный после концентрирования при пониженном давлении, растирали в безводном ацетонитриле, полученный осадок дополнительно очищали посредством препаративной обращенно-фазной ВЭЖХ (неподвижная фаза: XBridge C18 OBD, 10 мкм, 150×50 мм, подвижная фаза: 0,25% водный бикарбонат аммония (A) - MeOH (B); градиентное элюирование) с получением соединения (*R) 21A в виде одного диастереомера. Заключительное превращение в натриевую соль проводили элюированием водным раствором колонки, заполненной натриевой катионообменной смолой, с получением соединения (*R) 21 A (натриевая соль) в виде рыхлого белого твердого вещества (27 мг, выход: 46%). ¹H ЯМР (400 МГц, D₂O) δ м. д. 8,36 (с, 1H), 8,18 (с, 1H), 7,87 (с, 1H), 6,10 (д, J=8,1 Гц, 1H), 5,68 (дд, J=8,3, 4,3 Гц, 1H), 4,83-4,95 (м, 2H), 4,67-4,72 (м, 1H), 4,61 (м, J=2,0 Гц, 1H), 4,39 (д, J=4,5 Гц, 1H), 4,27 (ддд, J=11,8, 6,5, 2,4 Гц, 1H), 4,18 (ддд, J=12,2, 4,5, 1,6 Гц, 1H), 3,55 (с, 3H), 3,36 (уш. д, J=4,8 Гц, 2H), 2,55-2,65 (м, 2H), 1,92-2,03 (м, 1H); ³¹P ЯМР (162 МГц, D₂O) δ ч/млн 54,55 (с, 1P); ИЭР-МС: m/z 702,4 [M+H]⁺.

Пример 48

Стадия 1. Получение соединения 48b

TEPDSCb (765 мкл, 2,39 ммоль) добавляли к раствору соединения 48a [CAS 1834500-50-3] (0,6 г, 1,71 ммоль) в пиридине (25 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 2 ч, после чего выливали в насыщенный водный NaHCO₃ и экстрагировали с помощью EtOAc. Объединенные органические слои сушили безводным Na₂SO₄ и концентрировали при пониженном давлении. Остаточный продукт очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-100% EtOAc в петролейном эфире, а затем 0-10% MeOH в EtOAc) с получением соединения 48b в виде белого твердого вещества (550 мг, выход: 54%). ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ м. д. 12,06 (уш. с, 1H), 11,56 (уш. с, 1H), 8,05 (с, 1H), 4,85 (д, J=7,3 Гц, 1H), 4,51-4,64 (м, 1H), 4,29 (к, J=7,2 Гц, 1H), 4,14-4,23 (м, 1H), 3,90 (дд, J=11,5, 3,0 Гц, 1H), 3,76 (дд, J=11,6, 8,1 Гц, 1H), 2,78 (спт, J=6,7 Гц, 1H), 2,10-2,29 (м, 2H), 1,42-1,58 (м, 1H), 1,13 (д, J=7,0 Гц, 6H), 0,99-1,10 (м, 28H); ИЭР-МС: m/z 594,4 [M+H]⁺.

Стадия 2. Получение соединения 48c

Активированные молекулярные сита добавляли к раствору соединения 48b (350 мг, 0,59 ммоль) и сульфамата 17a (745 мг, 0,85 ммоль) в безводном THF (20 мл), полученную смесь перемешивали в азотной атмосфере при комнатной температуре в течение 2 ч. Далее для инициирования реакции добавляли раствор DMAP (347 мг, 2,84 ммоль) в THF (5 мл), предварительно высушенный путем перемешивания в присутствии активированных молекулярных сит. Реакционную смесь перемешивали в течение ночи при температуре 50 °C. Молекулярные сита удаляли фильтрованием и промывали фильтрат насыщенным водным NaHCO₃. Водную фазу экстрагировали с помощью DCM. Объединенные органические слои сушили с помощью Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Соединение 48c (401 мг, выход: 51%) получали в виде желтого твердого вещества после двух раундов очистки посредством колоночной хроматографии на силикагеле (цикл 1: градиентное элюирование: 0-2% MeOH в DCM, цикл 2: 0-100% EtOAc в петролейном эфире, а затем 0-10% MeOH в EtOAc).

¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ м. д. 12,00 (с, 1H), 11,44 (с, 1H), 11,25 (с, 1H), 8,59 (с, 1H), 8,51 (с, 1H), 8,20 (уш. т, J=5,4 Гц, 1H), 8,03 (д, J=7,3 Гц, 2H), 8,00 (с, 1H), 7,62-7,70 (м, 1H), 7,55 (т, J=7,5 Гц, 2H), 7,46 (д, J=7,5 Гц, 2H), 7,28-7,39 (м, 6H), 7,18-7,26 (м, 1H), 6,84-6,92 (м, 4H), 6,30 (дд, J=17,9, 3,0 Гц, 1H), 4,98-5,04 (м, 1H), 4,84-4,95 (м, 1H), 4,56-4,72 (м, 1H), 4,55 (уш. с, 1H), 4,39 (т, J=5,5 Гц, 1H), 3,73-3,93 (м, 3H), 3,71 (с, 3H), 3,70 (с, 3H), 2,88-3,00 (м, 1H), 2,73 (спт, J=6,8 Гц, 1H), 2,57-2,68 (м, 1H), 2,20-2,34 (м, 2H), 1,54-1,66 (м, 1H), 1,09 (д, J=6,8 Гц, 6H), 0,86-1,07 (м, 28H); ИЭР-МС: m/z 1329,8 [M+2H]/2⁺.

Стадия 3. Получение соединения 48d

Раствор соединения 48c (1,3 г, 0,98 ммоль) в безводном MeOH (55 мл, высушен на молекулярных ситах) обрабатывали HCl (0,19 мл 2M раствора в Et₂O, 13,7 ммоль) в течение 4 ч. Реакционную смесь гасили добавлением насыщенного водного NaHCO₃ с последующим экстрагированием с помощью DCM. Органическую фазу высушивали безводным MgSO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-5% MeOH в DCM) с получением соединения 48d (670 мг, выход: 65%).

¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ м. д. 1,01-1,08 (м, 28H), 1,12 (д, J=6,8 Гц, 3H), 1,67-1,75 (м, 1H), 2,20-2,32 (м, 1H), 2,43-2,54 (м, 1H), 2,62 (уш. д, J=14,3 Гц, 1H), 2,79 (спт, J=6,9 Гц, 1H), 2,85-2,96 (м, 1H), 3,51 (с, 3H), 3,52-3,57 (м, 2H), 3,75-3,83 (м, 1H), 4,39-4,48 (м, 1H), 4,50 (д, J=4,2 Гц, 1H), 5,02 (к, J=9,6 Гц, 1H), 5,09 (т, J=4,5 Гц, 1H), 5,25 (дд, J=9,8, 4,1 Гц, 1H), 5,52 (ддд, J=52,4, 4,4, 2,6 Гц, 1H), 5,68 (уш. д, J=5,9 Гц, 1H), 6,30 (дд, J=18,5, 2,6 Гц, 1H), 7,56 (т, J=7,7 Гц, 2H), 7,61-7,69 (м, 1H), 8,02-8,07 (м, 2H), 8,11 (уш. с, 1H), 8,14 (с, 1H), 8,57 (с, 1H), 8,71 (с, 1H), 11,22 (уш. с, 1H), 11,33 (уш. с, 1H), 12,09 (уш. с, 1H); ИЭР-МС: m/z 1060,7 [M+H]⁺.

Стадия 4. Получение соединения 48e

Раствор соединения 48d (640 мг, 0,60 ммоль) и 1H-тетразола (7,05 мл 3-4% в MeCN, высушен на молекулярных ситах 3Å до применения) в безводном THF (47,5 мл, высушен на молекулярных ситах 3Å до применения) обрабатывали активированными молекулярными ситами 3Å в атмосфере N₂ в течение 2 ч, после чего в один прием добавляли 2-цианоэтил-N, N,N',N'-тетра(изопропил)фосфородиамидит (200 мг, 0,66 ммоль). Реакционную смесь встряхивали в течение 3 ч. Добавляли дополнительное количество 2-цианоэтил-N, N,N',N'-тетра(изопропил)фосфородиамидита (73 мг, 0,24 ммоль) и продолжали встряхивание в течение ночи. Добавляли пиридин (19,5 мл) и PADS (456 мг, 1,53 ммоль), встряхивали реакционную смесь в течение еще одного часа. Молекулярные сита удаляли фильтрованием и промывали дихлорметаном. Фильтрат промывали солевым раствором и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-15% MeOH в DCM) с получением соединения 48e (250 мг, выход: 35%). ИЭР-МС: m/z 1138,7 [M+H]⁺.

Стадия 5. Получение соединения (*R) 43 A (натриевая соль)

Соединение 48e (250 мг, 0,21 ммоль) перемешивали в 33% растворе метиламина в этаноле (10 мл) при комнатной температуре до полного превращения (прибл. 4 ч), после чего реакционный раствор концентрировали при пониженном давлении и растирали в MeCN. Осадок растворяли в смеси пиридина (1,7 мл) и Et3N (1,5 мл). Добавляли тригидрофторид триэтиламина (141 мкл, 0,84 ммоль), полученную реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре до полного превращения (Примечание. Наблюдали выпадение нужного продукта в осадок). Добавляли изопропокситриметилсилан (596 мкл, 3,36 ммоль) и перемешивали в течение ночи. Остаток, полученный после концентрирования при пониженном давлении, растирали в MeCN, полученный осадок дополнительно очищали посредством препаративной обращенно-фазной ВЭЖХ (неподвижная фаза: XBridge C18 OBD, 10 мкм, 150×50 мм, подвижная фаза: 0,25% бикарбонат аммония (A)-MeCN (B); градиентное элюирование) с получением соединения (*R) 43A (аммонийная соль) в виде одного P-эпимера. Заключительное превращение в натриевую соль проводили элюированием водным раствором колонки, заполненной натриевой катионообменной смолой, с получением соединения (*R) 43A (натриевая соль) в виде рыхлого белого твердого вещества (56 мг, выход: 37,5%). ¹H ЯМР (600 МГц, DMSO-d₆, 61 °C) δ м. д. 10,24 (уш. с, 1H), 8,34 (уш. с, 1H), 8,07 (с, 1H), 7,87 (с, 1H), 7,26 (с, 3H), 6,34 (дд, J=18,6, 2,2 Гц, 1H), 6,23 (уш. с, 2H), 5,69 (д, J=51,8 Гц, 1H), 5,44-5,54 (м, 1H), 5,39 (дддд, J=17,3, 9,8, 7,2, 4,7 Гц, 1H), 5,18 (уш. с, 1H), 5,06 (к, J=9,8 Гц, 1H), 4,30-4,38 (м, 1H), 4,29 (уш. с, 1H), 3,99-4,10 (м, 1H), 3,86 (дт, J=11,0, 4,0 Гц, 1H), 3,63 (дд, J=13,2, 4,5 Гц, 1H), 3,36 (дд, J=13,6, 3,7 Гц, 1H), 2,45 (дт, J=13,5, 10,2 Гц, 1H), 2,20 (м, J=9,1, 4,5 Гц, 1H), 1,80-1,91 (м, 1H); ^3lP ЯМР (162 МГц, DMSO-d₆) δ м. д. 51,63 (с, 1P); ИЭР-МС: m/z 690,1 [M+H]⁺.

Пример 49

Соединение 24

Стадия 1. Получение соединения 49a

К раствору N2-изобутирил-3'-O-метил-гуанозина 3j (50 г, 136 ммоль) в безводном пиридине (500 мл) добавляли имидазол (18,52 г, 272 ммоль), трифенилфосфин (53,51 г, 204 ммоль) и йод (51,78 г, 204 ммоль). Реакционную смесь перемешивали в атмосфере N2 при 0 ~ 5 °C в течение 3 ч. Раствор впоследствии выпаривали досуха и растворяли остаток в DCM (500 мл). Добавляли насыщенный водный NaHCO₃ и перемешивали смесь в течение 30 мин. Осадок фильтровали и сушили в вакууме с получением соединения 49a в виде белого порошка (56 г, выход: 86%). ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ м. д. 11,94 (уш. с, 2H), 8,24 (с, 1H), 5,82 (д, J=6,5 Гц, 1H), 5,69 (уш. с, 1H), 4,84 (дд, J=5,0, 6,5 Гц, 1H), 4,10 (м, 1H), 3,83 (дд, J=3,0, 4,5 Гц, 1H), 3,58 (дд, J=7,0, 10,5 Гц, 1H), 3,47 (дд, J=7,0, 10,5 Гц, 1H), 3,46 (с, 3H), 2,74 (спт, J=6,5 Гц, 1H), 1,12 (д, J=6,5 Гц, 6H); ИЭР-МС: m/z 477,8 [M+H]⁺.

Стадия 2. Получение соединения 3k

Азид натрия (22,48 г, 345,8 ммоль) добавляли к раствору соединения 49a (55 г, 115,2 ммоль) в безводном DMF (100 мл) и перемешивали в атмосфере N₂ при 85°C в течение 4 ч. Реакционный раствор впоследствии охлаждали до 25 °C, выливали в воду (2 л) и перемешивали в течение 30 мин. Осадок собирали фильтрованием и высушивали с получением соединения 3k (41 г, выход: 91%). ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ м. д. 12,09 (уш. с, 1H), 11,63 (уш. с, 1H), 8,26 (с, 1H), 5,84 (д, J=6,0 Гц, 1H), 5,68 (д, J=5,0 Гц, 1H), 4,76 (м, 1H), 4,14 (м, 1H), 3,84 (т, J=4,5 Гц, 1H), 3,69 (дд, J=8,0, 13,0 Гц, 1H), 3,57 (дд, J=4,0, 13,0 Гц, 1H), 3,43 (с, 3H), 2,77 (спт, J=7,0 Гц, 1H), 1,13 (д, J=7,0 Гц, 6H); ИЭР-МС: m/z 393,0 [M+H]⁺.

Стадия 3. Получение соединения 49b

Смесь соединения 3k (40,00 г, 101,94 ммоль), имидазола (10,41 г, 152,9 ммоль) и TBSCl (18,44 г, 122,4 ммоль) в безводном DMF (100 мл) перемешивали в атмосфере N₂ при 25 °C в течение 17 ч. Реакционный раствор выпаривали досуха при 55°C при пониженном давлении. Осадок растворяли в EtOAc и промывали водой. Органическую фазу высушивали с помощью Na₂SO₄, фильтровали и выпаривали фильтрат. Неочищенный продукт очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 20-40% EtOAc в гептане) с получением соединения 49b (45 г, выход: 87%). ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ м. д. 12,08 (уш. с, 1H), 11,59 (уш. с, 1H), 8,29 (с, 1H), 5,87 (д, J=7,5 Гц, 1H), 4,86 (дд, J=4,5, 7,5 Гц, 1H), 4,17 (м, 1H), 3,84-3,79 (м, 2H), 3,56 (дд, J=4,5, 13,0 Гц, 1H), 3,45 (с, 3H), 2,77 (спт, J=7,0 Гц, 1H), 1,12 (д, J=6,5 Гц, 6H), 0,74 (с, 9H), -0,02 (с, 3H), -0,23 (с, 3H); ИЭР-МС: m/z 507,6 [M+H]⁺.

Стадия 4. Получение соединения 49c

Трифенилфосфин (31,06 г, 118,4 ммоль) добавляли к раствору соединения 49b (40 г, 78,95 ммоль) в THF (400 мл). Реакционную смесь перемешивали при 25°C в течение 10 мин, после чего добавляли по каплям воду (5,68 г, 315,2 ммоль) в течение 30 мин. Добавляли TsOH (27,19 г, 157,9 ммоль) и продолжали перемешивание в течение 10 мин. Реакционный раствор выпаривали при пониженном давлении. Остаток растворяли в DCM (400 мл) и промывали водой (3×400 мл). Органическую фазу высушивали с помощью Na₂SO₄, фильтровали и выпаривали. Неочищенный материал очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 1-5% MeOH в DCM) с получением соединения 49c в виде тозилированной соли (35 г, выход: 68%). ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d6) δ м. д. 9,38 (уш. с, 5H), 8,33 (с, 1H), 7,49 (д, J=8,5 Гц, 2H), 7,12 (д, J=8,5 Гц, 2H), 5,88 (д, J=7,0 Гц, 1H), 4,85 (дд, J=5,0 и 7,0 Гц, 1H), 4,20 (м, 1H), 3,92 (дд, J=2,0 и 4,5 Гц, 1H), 3,46 (с, 3H), 3,31-3,17 (м, 2H), 2,77 (спт, J=7,0 Гц, 1H), 2,29 (с, 3H), 1,12 (д, J=7,0 Гц, 6H), 0,74 (с, 9H), -0,01 (с, 3H), -0,25 (с, 3H); ИЭР-МС: m/z 481,6 [M+H]⁺.

Стадия 5. Получение соединения 49d

Соединение 49c (соль TsOH, 34 г, 52,1 ммоль), 4-нитрофенол (72,48 г, 521 ммоль) и Et₃N (63,21 г, 625 ммоль) растворяли в DCM (800 мл) и охлаждали до -78 °C. Раствор хлорсульфата 4-нитрофенила (24,76 г, 104,2 ммоль) в DCM (50 мл) добавляли по каплям в течение 30 мин. Реакционную смесь нагревали до 0 °C, разбавляли с помощью DCM (800 мл) и промывали 1 M водным NaH₂PO₄ (3×800 мл). Органическую фазу высушивали с помощью Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный материал очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 1-5% DCM в MTBE) с получением соединения 49d (19 г, выход: 53,5%). ¹H ЯМР (500 МГц, CDCl3) δ м. д. 9,49 (уш. с, 1H), 8,32 (д, J=9,0 Гц, 2H), 7,63 (с, 1H), 7,47 (д, J=9,0 Гц, 2H), 5,64 (д, J=8,0 Гц, 1H), 4,95 (дд, J=5,5, 8,0 Гц, 1H), 4,38 (с, 1H), 3,84 (д, J=5,5 Гц, 1H), 3,64 (с, 2H), 3,55 (с, 3H), 2,51 (спт, J=7,0 Гц, 1H), 1,18 (д, J=7,0 Гц, 3H), 1,12 (д, J=7,0 Гц, 1H), 0,77 (с, 9H), -0,10 (с, 3H), -0,31 (с, 3H); ИЭР-МС: m/z 682,7 [M+H]⁺.

Стадия 6. Получение соединения 49e

Соединение 49d (18 г, 26,4 ммоль), N₆-бензоил-5'-O-(4,4'-диметокситритил)-2'-дезоксиаденозин (34,56 г, 52,55 ммоль) и Et₃N (13,32 г, 131,6 ммоль) по отдельности растворяли в безводном DCM (3×72 мл). Каждый раствор высушивали на активированных молекулярных ситах 3Å путем перемешивания в атмосфере N₂ в течение 4 ч. Далее раствор Et₃N добавляли к раствору N6-бензоил-5'-O-(4,4'-диметокситритил)-2'-дезоксиаденозина (49d1) с последующим добавлением раствора сульфамата 49d (переносили посредством шприца). Полученную реакционную смесь перемешивали при 25°C в течение 17 ч Молекулярные сита удаляли фильтрованием, фильтрат выпаривали при пониженном давлении. Неочищенный продукт 49e использовали в таком виде на следующей стадии.

Стадия 7. Получение соединения 49f

Вышеуказанный неочищенный продукт 49e растворяли в THF (190 мл) и обрабатывали TBAF (14,57 г, 55,73 ммоль) при 25°C в течение 16 ч. Реакционную смесь выпаривали досуха при пониженном давлении. Остаток растворяли в DCM, промывали 2% водным раствором уксусной кислоты (3×190 мл) и выпаривали. Неочищенный продукт растворяли в DCM (190 мл) и обрабатывали с использованием DCA (17,97 г, 139,4 ммоль) и водой (2,5 мл, 138,7 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при 25°C до полного удаления защитных групп и впоследствии промывали 5% водным NaHCO₃. Остаток, полученный после выпаривания при пониженном давлении, очищали посредством обращенно-фазной хроматографии, используя MeOH и воду в качестве элюента, с получением соединения 49f (4 г) в виде твердого вещества грязно-белого цвета. ¹H-ЯМР (500 МГц, DMSO-d6) δ (м. д.) 12,07 (с, 1H), 11,59 (с, 1H), 11,19 (с, 1H), 8,75 (с, 1H), 8,68 (с, 1H), 8,47 (т, J=5,5 Гц, 1H), 8,26 (с, 1H), 8,05 (д, J=7,5 Гц, 2H), 7,65 (т, J=7,0 Гц, 1H), 7,55 (т, J=7,5 Гц, 2H), 6,51 (т, J=6,5 Гц, 1H), 5,83 (д, J=6,0 Гц, 1H), 5,64 (д, J=6,0 Гц, 1H), 5,27-5,23 (м, 2H), 4,67 (к, J=5,5 Гц, 1H), 4,24 (м, 1H), 4,08 (м, 1H), 3,87 (м, 1H), 3,60 (м, 2H), 3,44 (с, 3H), 3,44-3,28 (м, 2H), 3,10 (м, 1H), 2,76 (м, 2H), 1,12 (д, J=3,0 Гц, 6H); ИЭР-МС: m/z 784,1 [M+H]⁺.

Стадия 8. Получение соединения 49g

Раствор соединения 49f (387 мг, 0,49 ммоль) в безводном MeCN/THF (1 : 1, 24 мл, высушен на молекулярных ситах 3Å до применения) обрабатывали молекулярными ситами 3Å в течение 2 ч, после чего его переносили в реакционную колбу, добавляли 1H-тетразол (4,32 мл, 3-4% раствор в MeCN, высушен на молекулярных ситах 3Å до применения) с последующим добавлением 2-цианоэтил-N, N,N',N'-тетра(изопропил)фосфородиамидита (172 мкл, 0,54 ммоль). Полученную реакционную смесь перемешивали в течение 2 ч, после чего добавляли дополнительное количество 2-цианоэтил-N, N,N',N'-тетра(изопропил)фосфородиамидита (78 мкл, 0,25 ммоль), продолжали перемешивание в течение ночи. Добавляли tBuOOH (161 мкл 5,5 M раствора в декане, 0,89 ммоль), перемешивали реакционный раствор в течение еще 90 мин, после чего фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Очистку проводили посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-7,5% MeOH в DCM) с получением соединения 49g (158 мг, выход: 31%). ИЭР-МС: m/z=899,5 [M+H]⁺.

Стадия 9. Получение соединения 24 (натриевая соль)

Соединение 49g (158 мг, 0,155 ммоль) перемешивали в 33% растворе метиламина в этаноле (2 мл) при комнатной температуре до полного превращения (прибл. 2 ч). Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Полученный неочищенный продукт растирали в MeCN с последующей очисткой посредством препаративной обращенно-фазной ВЭЖХ (неподвижная фаза: XBridge C18 OBD, 10 мкм, 150×50 мм; подвижная фаза: водный 0,25% бикарбонат аммония (A)-MeOH (B); градиентное элюирование). Заключительное превращение в натриевую соль проводили элюированием водным раствором колонки, заполненной натриевой катионообменной смолой, с получением соединения 24 (натриевая соль) в виде рыхлого белого твердого вещества после лиофилизации. ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆, 81 °C) δ м. д. 10,19 (уш. с, 1H), 8,24 (с, 1H), 8,17 (с, 1H), 8,19 (уш. с, 1H), 6,92 (с, 1H), 6,33 (дд, J=94, 5,6 Гц, 1H), 6,19 (уш. с, 2H), 5,74 (д, J=8,8 Гц, 1H), 5,36-5,60 (м, 2H), 4,05-4,24 (м, 3H), 3,82 (д, J=4,4 Гц, 1H), 3,53-3,63 (м, 1H), 3,50 (с, 3H), 3,26 (уш. с, 2H), 3,01-3,11 (м, 1H, сигнал под пиком воды), 2,87 (дд, J=14,1, 5,5 Гц, 1H); ³¹P ЯМР (126 МГц, DMSO-d₆) δ м. д. 0,84 (с, 1P); ИЭР-МС: m/z 672,3 [M+H]⁺.

Пример 50

Стадия 1. Получение соединения 50a

Раствор 49f (1 г, 1,3 ммоль) и 1H-тетразола (0,2 г, 3,1 ммоль) в безводном DCM (40 мл) предварительно обрабатывали молекулярными ситами 3Å в течение 3 ч, после чего в один прием добавляли 2-цианоэтил-N, N,N',N'-тетра(изопропил)фосфородиамидит (0,4 г, 1,3 ммоль). Полученную реакционную смесь перемешивали при 35°C в течение 1 ч. Добавляли ксантан-гидрид (0,22 г, 1,43 ммоль) и продолжали перемешивание в течение 30 мин. Реакционный раствор разбавляли с помощью DCM и промывали солевым раствором, 5% водным NaHCO₃ и водой. Органическую фазу сушили с помощью Na₂SO₄ и фильтровали. Фильтрат выпаривали досуха при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 5-10% MeOH в DCM) с получением 600 мг смеси соединения 50a и продукта удаления цианоэтильных защитных групп ИЭР-МС: m/z 916,0 [M+H]⁺.

Стадия 2. Получение соединения (*R) 19A (натриевая соль) и соединения (*S) 19B (натриевая соль)

Вышеуказанный продукт 50a перемешивали в 33% растворе метиламина в этаноле (13 мл) при комнатной температуре до полного превращения. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали обращенно-фазной колонкой C18 с использованием MeOH и воды в качестве подвижной фазы с получением смеси P-эпимеров (60 мг, выход: 7% из соединения 50a). Изомеры разделяли посредством препаративной обращенно-фазной ВЭЖХ (неподвижная фаза: XBridge C18 OBD, 10 мкм, 250×50 мм; подвижная фаза: водный 0,25% бикарбонат аммония (A)-MeOH (B); градиентное элюирование) с получением соединения (*R) 19A (аммонийная соль) в виде первого элюируемого изомера и соединения (*S) 19B (аммонийная соль) в виде второго элюируемого изомера. Заключительное превращение в натриевую соль проводили элюированием водным раствором колонки, заполненной натриевой катионообменной смолой.

Соединение (*R) 19A (натриевая соль) ¹H ЯМР (600 МГц, DMSO-d₆, 81 °C) δ м. д. 9,17 (уш. с, 1H), 8,24 (с, 1H), 8,16 (с, 1H), 7,96 (уш. с, 1H), 6,97 (с, 2H), 6,38 (дд, J=9,1, 5,4 Гц, 1H), 6,20 (уш. с, 2H), 5,77 (д, J=8,9 Гц, 2H), 5,51 (уш. с, 1H), 4,44-4,51 (м, 1H), 4,26 (уш. с, 1H), 4,18 (уш. с, 1H), 3,78 (д, J=4,6 Гц, 1H), 3,56-3,62 (м, 1H), 3,53 (с, 3H), 3,20-3,50 (м, 3H), 2,90 (дд, J=14,5, 5,4 Гц, 1H); ИЭР-МС: m/z 687,1 [M+H]⁺.

Соединение (*S) 19B (натриевая соль) ¹H ЯМР (600 МГц, DMSO-d₆, 81 °C) δ м. д. 10,03 (уш. с, 1H), 8,29 (с, 1H), 8,18 (с, 1H), 8,00 (уш. с, 1H), 6,97 (уш. с, 2H), 6,38 (дд, J=9,4, 5,4 Гц, 1H), 6,26 (уш. с, 2H), 5,78 (д, J=8,9 Гц, 1H), 5,50 (уш. с, 1H), 5,48 (уш. с, 1H), 4,22-4,34 (м, 1H), 4,15 (уш. с, 1H), 4,09 (к, J=11,2 Гц, 1H), 3,85 (д, J=4,5 Гц, 1H), 3,60-3,71 (м, 1H), 3,55 (с, 3H), 3,41-3,48 (м, 1H), 3,34-3,40 (м, 1H), 3,23-3,34 (м, 1H), 2,87 (дд, J=14,5, 5,4 Гц, 1H); ³¹P ЯМР (162 МГц, DMSO-d₆) δ м. д. 55,50 (с, 1P); ИЭР-МС: m/z 678,1,1 [M+H]⁺.

Пример 51

Стадия 1. Получение соединения 51a

Имидазол (3,94 г, 57 ммоль) и TBSCl (7,18 г, 470 ммоль) добавляли к раствору N6-бензоил-2'-дезокси-2'-фтораденозина 1a [CAS 136834-20-3] (12,7 г, 34,0 ммоль) в DMF (105 мл) при 0 °C. Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре до полного превращения (2 ч). Реакционную смесь разбавляли с помощью EtOAc и промывали насыщенным водным NH₄Cl и водой. Органическую фазу сушили безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Очистку проводили колоночной хроматографией на силикагеле (градиентное элюирование: 0-1% MeOH в DCM) с получением соединения 51a в виде белого твердого вещества (12 г, выход: 71%). ¹H ЯМР (500 МГц DMSO-d₆) δ м. д. -0,04 (с, 3H), -0,02 (с, 3H), 0,82 (с, 9H), 3,81 (дд, J=11,7, 4,1 Гц, 1H), 3,99 (м, 2H), 4,62 (ддд, J=21,7, 11,7, 6,9 Гц, 1H), 5,54 (дк, J=52,8, 2,0 Гц, 1H), 5,77 (м, 1H), 6,38 (дд, J=18,6, 1,4 Гц, 1H), 7,55 (т, J=7,9 Гц, 2H), 7,65 (т, J=7,2 Гц, 1H), 8,04 (д, J=6,9 Гц, 2H), 8,57 (с, 1H), 8,75 (с, 1H); ИЭР-МС: m/z 488,0 [M+H]⁺.

Стадия 2. Получение соединения 51c

В реакционную колбу помещали DMAP (2,03 г, 16,6 ммоль), безводный DCM (40 мл) и активированные молекулярные сита 3Å. Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение по меньшей мере 2 ч в инертной атмосфере. Одновременно раствор соединения 51a (1,6 г, 3,3 ммоль) и раствор сульфамата 51b (2,5 г, 3,66 ммоль) сушили на активированных молекулярных ситах 3Å (прибл. 2 ч), при этом каждый был в безводном DCM (2×40 мл). Оба раствора (соединение 51a и сульфамат 51b соответственно) последовательно переносили в реакционную колбу. Полученную реакционную смесь перемешивали в течение 36 ч. Молекулярные сита удаляли фильтрованием и тщательно промывали дихлорметаном. Фильтрат промывали насыщенным водным NaHCO₃, солевым раствором и насыщенным водным NH₄Cl, высушивали над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-1% MeOH в DCM) с получением соединения 51c в виде пены грязно-белого цвета (1,8 г, выход: 53%). ¹H ЯМР (500 МГц DMSO-d₆) δ м. д. -0,25 (с, 3H), -0,050 (с, 3H), -0,015 (д, J=2,8 Гц, 6H), 0,73 (с, 9H), 0,79 (с, 9H), 1,11 (дд, J=6,9, 1,4 Гц, 6H), 2,75 (м, 1H), 3,40 (к, J=6,9 Гц, 1H), 3,45 (с, 3H), 3,48 (к, J=6,9 Гц, 1H), 3,85 (дд, J=11,7, 3,4 Гц, 2H), 3,98 (дд, J=12,4, 2,1 Гц, 1H), 4,13 (м, 1H), 4,33 (т, J=3,4 Гц, 1H), 4,71 (дд, J=6,9, 4,8 Гц, 1H), 5,49 (дк, J=17,6, 3,9 Гц, 1H), 5,86 (д, J=6,9 Гц, 1H), 6,51 (дд, J=18,6, 2,1 Гц, 1H), 7,56 (т, J=7,6 Гц, 2H), 7,66 (т, J=7,2 Гц, 1H), 8,05 (д, J=7,6 Гц, 2H), 8,30 (с, 1H), 8,59 (с, 1H), 8,71 (т, J=6,2 Гц, 1H), 8,75 (с, 1H), 11,26 (с, 1H), 11,65 (с, 1H), 12,08 (с, 1H); ИЭР-МС: m/z 1030,4 [M+H]⁺.

Стадия 3. Получение соединения 33a

Et₃N (12,1 мл, 87,37 ммоль) и Et₃N·3HF (2,84 мл, 17,4 ммоль) добавляли к раствору соединения 51c (1,8 г, 1,74 ммоль) в пиридине (34 мл). Реакционную смесь перемешивали при 45°C до полного превращения (прибл. 5 ч) и впоследствии охлаждали до комнатной температуры. Добавляли изопропокситриметилсилан (12,4 мл, 69,9 ммоль) и продолжали перемешивание в течение ночи. Неочищенный продукт, полученный после концентрирования при пониженном давлении очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-7% MeOH в DCM) с получением соединения 33a в виде пены грязно-белого цвета (1,2 г, выход: 86%). ¹H ЯМР (500 МГц DMSO-d₆) δ м. д. 1,11 (к, J=3,2 Гц, 6H), 2,75 (м, 1H), 3,40 (с, 1H), 3,43 (с, 3H), 3,64 (д, J=12,4 Гц, 1H), 3,80 (д, J=12,4 Гц, 1H), 3,86 (т, J=4,5 Гц, 1H), 4,07 (м, 1H), 4,32 (т, J=3,1 Гц, 1H), 4,67 (к, J=5,7 Гц, 1H), 5,36 (тд, J=10,7, 4,6 Гц, 2H), 5,66 (д, J=6,2 Гц, 1H), 5,88 (м, 2H), 6,49 (дд, J=16,5, 2,8 Гц, 1H), 7,56 (т, J=7,9 Гц, 2H), 7,66 (т, J=7,6 Гц, 1H), 8,05 (д, J=7,6 Гц, 2H), 8,25 (с, 1H), 8,66 (с, 1H), 8,74 (д, J=32,4 Гц, 2H), 11,27 (с, 1H), 11,62 (с, 1H), 12,08 (с, 1H); ИЭР-МС: m/z 802,1 [M+H]⁺.

Стадия 4. Получение соединения 51d

Раствор соединения 33a (500 мг, 0,624 ммоль) и 1H-тетразола (5,46 мл 3-4% в MeCN, высушен на молекулярных ситах 3Å до применения) в безводном THF (25 мл, высушен на молекулярных ситах 3Å до применения) обрабатывали молекулярными ситами 3Å в течение 2 ч, после чего в один прием добавляли 2-цианоэтил-N, N,N',N'-тетра(изопропил)фосфородиамидит (206 мг, 0,686 ммоль). Полученную реакционную смесь перемешивали в течение ночи. Добавляли дополнительное количество 2-цианоэтил-N, N,N',N'-тетра(изопропил)фосфородиамидита (94 мг+38 мг, 0,312 ммоль+0,125 ммоль) двумя порциями с интервалом 5 ч, продолжали встряхивание в течение еще одного дня для достижения полного превращения. Добавляли tBuOOH (227 мкл 5,5 M раствора в декане, 1,25 ммоль) и встряхивали реакционную смесь в течение еще одного часа. Молекулярные сита удаляли фильтрованием и тщательно промывали с помощью DCM. Фильтрат концентрировали и очищали полученный остаток посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-7,5% MeOH в DCM) с получением соединения 51d (110 мг, выход: 19%). ИЭР-МС: m/z 917,5 [M+H]⁺.

Стадия 5. Получение соединения 22 (натриевая соль)

Соединение 51d (110 мг, 0,12 ммоль) перемешивали в 33% растворе метиламина в этаноле (10 мл) при комнатной температуре до полного превращения (прибл. 2 ч). Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Полученный неочищенный продукт растирали в MeCN с последующей очисткой посредством препаративной обращенно-фазной ВЭЖХ (неподвижная фаза: XBridge C18 OBD, 5 мкм, 250×30 мм; подвижная фаза: водный 0,25% бикарбонат аммония (A) - MeCN (B); градиентное элюирование) с получением соединения 22 (аммонийная соль). Превращение в натриевую соль проводили элюированием водным раствором колонки, заполненной натриевой катионообменной смолой, с получением соединения 22 (натриевая соль) в виде рыхлого белого твердого вещества после лиофилизации (52 мг, выход: 60%). ¹H ЯМР (600 МГц, DMSO-d₆, 60 °C) δ м. д. 10,67 (уш. с, 1H), 9,13 (уш. с, 1H), 8,37 (с, 1H), 8,18 (с, 1H), 7,99 (уш. с, 1H), 7,24 (уш. с, 2H), 6,33 (дд, J=15,9, 3,3 Гц, 1H), 6,29 (уш. с, 2H), 5,95 (уш. д, J=50,9 Гц, 1H), 5,76 (д, J=8,9 Гц, 1H), 5,59 (уш. с, 1H), 5,18-5,25 (м, 1H), 4,47 (уш. с, 1H), 4,20 (дт, J=11,9, 6,1 Гц, 1H), 4,14 (уш. с, 1H), 3,94 (уш. д, J=4,4 Гц, 1H), 3,75-3,81 (м, 1H), 3,52 (c, 3H), 3,47-3,55 (м, 1H), 3,42 (с, 1H); ³¹P ЯМР (162 МГц, DMSO-d₆) δ м. д. -1,28 (с, 1P); ИЭР-МС: m/z 690,3 [M+H]⁺.

Пример 52

Стадия 1. Получение соединения 52a

Карбонат калия (0,32 г, 2,3 ммоль) добавляли к раствору соединения 41d (0,55 г, 1,8 ммоль) в безводном DMF (6 мл). Полученную суспензию охлаждали до 0 °C, после чего добавляли метан йода (0,15 мл, 2,3 ммоль). Реакционную смесь нагревали до комнатной температуры и перемешивали до полного превращения (прибл. 2,5 ч). Остаток, полученный после концентрирования при пониженном давлении, очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-4% MeOH в DCM) с получением соединения 52a в виде белого порошка (0,45 г, выход: 79%). ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ м. д. 8,25 (с, 1H), 7,36 (с, 1H), 6,02 (д, J=5,5 Гц, 1H), 5,43 (д, J=6,9 Гц, 1H), 5,09 (т, J=5,5 Гц, 1H), 4,39 (к, J=6,0 Гц, 1H), 3,97 (к, J=3,4 Гц, 1H), 3,73-3,80 (м, 1H), 3,57-3,64 (м, 1H), 3,50-3,55 (м, 1H), 3,45 (с, 3H), 3,40 (с, 3H); ИЭР-МС: m/z 314 [M+H]⁺.

Стадия 2. Получение соединения 52b

Раствор соединения 52a (0,85 г, 2,7 ммоль) в безводном пиридине (12,7 мл), к которому добавляли DMAP (0,16 г, 1,3 ммоль) и DMTrCl (1,46 г, 4,3 ммоль) (порциями), перемешивали при комнатной температуре в течение 4 ч. Реакционную смесь гасили метанолом (9 мл) и концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток растворяли в EtOAc и промывали водой. Органический слой высушивали над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Очистку проводили колоночной хроматографией на силикагеле (градиентное элюирование: 0-0,2% MeOH в DCM) с получением соединения 52b в виде пены грязно-белого цвета (1,4 г, выход: 85%). ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ м. д.: 8,24 (с, 1H), 7,37 (д, J=7,6 Гц, 2H), 7,29 (т, J=7,6 Гц, 2H), 7,22 (м, 6H), 6,87 (дд, J=9,0, 2,1 Гц, 4H), 6,04 (д, J=4,8 Гц, 1H), 5,53 (д, J=6,2 Гц, 1H), 4,47 (к, J=5,5 Гц, 1H), 4,05 (к, J=4,4 Гц, 1H), 3,85 (т, J=4,8 Гц, 1H), 3,72 (д, J=9,6 Гц, 6H), 3,45 (с, 3H), 3,35 (с, 3H), 3,20 (д, J=4,8 Гц, 2H); ИЭР-МС: m/z 638,2 [M+Na]⁺.

Стадия 3. Получение соединения 52c

Каждое из соединения 52b (0,9 г, 1,46 ммоль), сульфамата 17a (1,53 г, 1,75 ммоль) и DMAP (0,9 г, 7,31 ммоль) по отдельности растворяли в безводном DCM (3×25,0 мл). Каждый раствор высушивали с помощью активированных молекулярных сит 3Å путем перемешивания в атмосфере N₂ в течение по меньшей мере 2 ч. К этому раствору DMAP соответственно добавляли раствор соединения 52b в DCM и раствор сульфамата 17a в DCM. Полученную реакционную смесь перемешивали в течение 36 ч. Молекулярные сита удаляли фильтрованием и тщательно промывали дихлорметаном. Фильтрат промывали насыщенным водным NaHCO₃, солевым раствором и насыщенным водным NH₄Cl. Объединенные органические фазы высушивали над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-0,4% MeOH в DCM) с получением соединения 52c (0,38 г, выход: 19%) и более полярной фракции (0,8 г), содержащий продукт с удаленной одной или двумя защитными группами DMTr.

Стадия 4. Получение соединения 52d

Раствор соединения 52c (0,38 г, 0,28 ммоль) в DCM (10,6 мл), к которому добавляли DCA (0,9 мл 10% в DCM, 1,1 ммоль) и воду (30 мкл, 1,4 ммоль), перемешивали при комнатной температуре до полного удаления защитных групп. Реакционную смесь гасили добавлением пиридина (0,1 мл, 1,4 ммоль) и нескольких капель метанола и концентрировали при пониженном давлении. Сходный протокол реакции применяли для вышеуказанных 0,8 г полярной фракции. Остаток обеих реакций объединяли для очистки посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-6% MeOH в DCM) с получением соединения 52d в виде белого порошка (0,4 г, выход: 62%). ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ м. д. 11,27 (уш. с, 1H), 8,74 (с, 1H), 8,62 (с, 1H), 8,54 (уш. т, J=5,9 Гц, 1H), 8,23 (с, 1H), 8,06 (д, J=7,6 Гц, 2H), 7,64-7,70 (м, 1H), 7,52-7,59 (м, 2H), 7,36 (уш. с, 1H), 6,36 (дд, J=19,3, 2,1 Гц, 1H), 6,28 (д, J=6,2 Гц, 1H), 5,90 (уш. с, 1H), 5,58 (уш. д, J=52,7 Гц, 1H), 5,22 (т, J=5,5 Гц, 1H), 4,52-4,64 (м, 1H), 4,07-4,14 (м, 2H), 3,95-4,01 (м, 1H), 3,64 (дд, J=12,4, 3,4 Гц, 1H), 3,56 (дд, J=11,7, 2,8 Гц, 1H), 3,43 (с, 3H), 3,38 (с, 3H), 3,12-3,24 (м, 2H); ИЭР-МС: m/z 748,5 [M+H]⁺.

Стадия 5. Получение соединения 52e

Раствор соединения 52d (100 мг, 0,134 ммоль) и 1H-тетразола (2,38 мл 0,45 M раствора в MeCN, 1,14 ммоль) в смеси безводного MeCN/DMF (5 мл, 4 : 1) обрабатывали молекулярными ситами 4Å в атмосфере N₂ в течение 10 мин, после чего добавляли раствор 2-цианоэтил-N, N,N',N'-тетра(изопропил)фосфородиамидита (80 мг, 0,27 ммоль) в безводном MeCN (1,0 мл) (Примечание. MeCN перед работой перегоняли над CaH₂ перед применением). Полученную реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1,5 ч. Далее добавляли раствор tBuOOH (126 мкл 5 ~ 6 M раствора в декане, 0,67 ммоль) и продолжали перемешивание в течение еще 30 мин. Реакционную смесь разбавляли DCM, фильтровали через слой диатомитовой земли и концентрировали. Остаток очищали посредством колоночной флеш-хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-7% MeOH в DCM) с получением соединения 52e. ИЭР-МС: m/z 863,1 [M+H]⁺.

Стадия 6. Получение соединения 55 (натриевая соль)

Вышеуказанное соединение 52e перемешивали в 30% растворе метиламина в этаноле (10 мл) при комнатной температуре в течение 2,5 ч. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Остаток растворяли в смеси вода/MeCN (4 : 1), промывали DCM и концентрировали. Неочищенный продукт очищали посредством препаративной обращенно-фазной ВЭЖХ (неподвижная фаза: Xbridge OBD C18, 5 мкм, 150×30 мм; подвижная фаза: 10 мМ водный бикарбонат аммония (A) - MeCN (B); градиентное элюирование) с получением соединения 55 (аммонийная соль) (25 мг, выход: 26% из 52d). Заключительное превращение в натриевую соль проводили элюированием водным раствором на колонке, заполненной натриевой ионообменной смолой Dowex 50WX8. ¹H ЯМР (400 МГц, D₂O) δ 8,13 (уш. с, 1H). 8,00 (уш. д, J=5,6 Гц, 1H), 7,42 (уш. с, 1H), 7,06 (уш. с, 1H), 6,42-6,33 (м, 2H), 5,41 (уш. с, 1H), 5,35-5,16 (м, 1H), 5,05-4,88 (м, 1H), 4,65 (уш. с, 1H), 4,53-4,40 (м, 2H), 4,33-4,20 (м, 2H), 3,88-3,76 (м, 1H), 3,60 (с, 4H), 3,48 (с, 3H); ¹⁹F ЯМР (376 МГц, D₂O) δ -165,090 (с, 1F), -196,605 (с, 1F); ³¹P ЯМР (162 МГц, D₂O) δ -1,899 (с, 1P); ИЭР-МС: m/z 706,0 [M+H]⁺.

Пример 53

Стадия 1. Получение соединения 53b

Реакционную колбу, в которую помещали метил 5-(диэтоксиметил)-1H-имидазол-4-карбоксилат 53a [CAS 85109-99-5] (3,24 г, 14,1 ммоль) и безводный MeCN (120 мл) охлаждали на ледяной бане. Добавили гидрид натрия (1,23 г 55% дисперсии в минеральном масле, 28,5 ммоль), полученную смесь перемешивали при кт в течение 45 мин. В отдельной колбе йодтриметилсилан (3,23 мл, 22,6 ммоль) добавляли к раствору 1,2-ди-O-ацетил-3-O-метил-5-O-бензоил-D-рибофуранозы ([10300-21-7], 5 г, 14,1 ммоль) в безводном толуоле (50 мл). Полученный раствор перемешивали при кт в течение 20 мин, после чего медленно переносили в вышеуказанную реакционную колбу, охлажденную на ледяной бане. Полученную реакционную смесь перемешивали при 50°C до полного превращения (прибл. 3,5 ч). После охлаждения до кт добавляли EtOAc. Органическую фазу промывали водой и солевым раствором, высушивали безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Очистку проводили колоночной хроматографией на силикагеле (градиентное элюирование: 0-40% EtOAc в гексане) с получением соединения 53b в виде бесцветной камеди (4,3 г, выход: 58%). ¹H ЯМР (500 МГц DMSO-d₆) δ м. д. 8,0 (м, 3H), 7,70 (т, J=7,6 Гц, 1H,), 7,56 (м, 2H), 6,36 (м, 1H), 6,23 (с, 1H), 5,49 (дд, J=4,1, 2,8 Гц, 1H), 4,63 (м, 2H), 4,26 (м, 2H), 3,78 (с, 3H), 3,68 (м, 1H), 3,47 (м, 1H), 2,11 (с, 2H), 1,11 (м, 6H); ИЭР-МС: m/z 521,2 [M+H]⁺.

Стадия 2. Получение соединения 53c

Раствор соединения 53b (4,3 г, 8,25 ммоль) в 80% водном растворе AcOH (50 мл) перемешивали при кт в течение 16 ч. Далее реакционный раствор выливали в ледяную воду и экстрагировали с помощью DCM. Органический слой промывали водой, высушивали над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Очистку проводили колоночной хроматографией на силикагеле (градиентное элюирование: 0-30% EtOAc в гексане) с получением соединения 58c в виде белого твердого вещества (1,7 г, выход: 52%). ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆), δ м. д. -10,27 (с, 1H), 8,34 (с, 1H), 8,00 (м, 2H), 7,70 (м, 1H), 7,55 (т, J=7,9 Гц, 2H), 6,40 (д, J=2,1 Гц, 1H), 5,54 (к, J=2,3 Гц, 1H), 4,65 (т, J=4,1 Гц, 2H), 4,34 (м, 1H), 4,19 (дд, J =7,9, 5,2 Гц, 1H), 3,87 (с, 1H).

Стадия 3. Получение соединения 53d

Гидразин (1 M в THF, 362 мл, 362 ммоль) добавляли к раствору соединения 53c (8,1 г, 18,12 ммоль) в безводном EtOH (200 мл). Реакционную смесь перемешивали при температуре кипения с обратным холодильником, при этом позволяли THF полностью испариться (реакция идет очень медленно в присутствии THF). После завершения реакции (прибл. 72 ч) растворитель удаляли при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-10% MeOH в DCM). Полученный продукт растворяли в воде и доводили pH до 5 добавлением водородной формы смолы Amberlite® IR120. Смолу удаляли фильтрацией и промывали водой, фильтрат выпаривали и высушивали в высоком вакууме с получением соединения 53d в виде бледно-желтого твердого вещества (3,5 г, 68%). ¹H ЯМР (500 МГц DMSO-d₆) δ м. д. 12,75 (с, 1H), 8,65 (с, 1H), 8,54 (с, 1H), 5,92 (д, J=6,9 Гц, 1H), 5,75 (с, 1H), 4,39 (т, J=5,9 Гц, 1H), 4,11 (к, J=3,0 Гц, 1H), 3,83 (к, J=2,8 Гц, 2H), 3,69 (дд, J=12,1, 3,1 Гц, 2H), 3,64 (дд, J=12,1, 3,1 Гц, 2H), 3,42 (с, 3H), 3,16 (с, 1H); ИЭР-МС: m/z 283,1 [M+H]⁺.

Стадия 4. Получение соединения 53e

DMAP (0,75 г, 6, 18 ммоль) и DMTrCl (6,6 г, 19,7 ммоль) (порциями) добавляли к раствору соединения 53d (3,5 г, 12,3 ммоль, высушен выпариванием с безводным толуолом и безводным пиридином) в безводном пиридине (52 мл). Полученную реакционную смесь перемешивали в течение 4 ч, после чего ее гасили добавлением метанола (10 мл) и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-2% MeOH в DCM) с получением соединения 53e в виде бледно-розовой пены (4,8 г, выход: 67%). ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆,) δ м. д.: 12,76 (с, 1H), 8,50 (д, J=16,5 Гц, 2H), 7,28 (м, 4H), 7,20 (м, 5H), 6,84 (д, J=9,0 Гц, 4H), 5,99 (д, J=4,8 Гц, 1H), 5,82 (д, J=5,5 Гц, 1H), 4,67 (д, J=5,5 Гц, 1H), 4,19 (к, J=4,1 Гц, 1H), 3,94 (т, J=14,8 Гц, 1H), 3,73 (с, 6H), 3,37 (с, 3H), 3,23 (к, J=3,4 Гц, 2H); ИЭР-МС: m/z 585,3 [M+H]⁺.

Стадия 5. Получение соединения 53f

Соединение 53e (0,53 г, 0,9 ммоль), сульфамат 17a (0,876 г, 1,08 ммоль) и DMAP (0,55 г, 4,5 ммоль) по отдельности растворяли в безводном DCM (3×20 мл). Каждый раствор высушивали с помощью 3Å активированных молекулярных сит путем перемешивания в атмосфере N₂ в течение по меньшей мере 2 ч. К раствору DMAP соответственно добавляли раствор соединения 53e и раствор сульфамата 17a. Полученную реакционную смесь перемешивали в течение 36 ч. Молекулярные сита удаляли фильтрованием и тщательно промывали с помощью DCM. Фильтрат промывали насыщенным водным NaHCO₃ и насыщенным водным NH₄Cl, высушивали над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-2% MeOH в DCM) с получением соединения 53f в виде бледно-желтой пены (0,45 г, выход: 38%). ИЭР-МС: m/z 1321,5 [M+H]⁺.

Стадия 5. Получение соединения 53g

Раствор соединения 53f (0,75 г, 0,52 ммоль) в DCM (20 мл), к которому добавляли DCA (1,75 мл 10% раствора в DCM, 2,1 ммоль) и воду (47 мл, 2,6 ммоль) перемешивали при кт до полного удаления защитных групп (прибл. 2 ч). Реакционную смесь гасили добавлением пиридина (0,2 мл, 2,6 ммоль) и нескольких капель метанола и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-7% MeOH в DCM) с получением соединения 53g в виде порошка грязно-белого цвета (0,33 г, выход: 82%). ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ м. д. 12,77 (с, 1H), 11,24 (с, 1H), 8,75 (с, 1H), 8,60-8,64 (м, 3H), 8,60 (с, 1H), 8,04 (д, J=7,6 Гц, 2H), 7,63-7,67 (м, 1H), 7,53-7,58 (м, 2H), 6,34 (д, J=4,8 Гц, 1H), 6,37 (дд, J=20,0, 2,1 Гц, 1H), 5,89 (д, J=6,2 Гц, 1H), 5,59 (ддд, J=52,3, 4,8, 2,1 Гц, 1H), 5,46 (т, J=4,8 Гц, 1H), 5,18 (т, J=4,8 Гц, 1H), 4,56-4,65 (м, 1H), 4,13-4,18 (м, 2H), 4,00 (тд, J=7,4, 3,1 Гц, 1H), 3,76 (с, 1H), 3,60-3,69 (м, 1H), 3,36 (с, 3H), 3,26-3,31 (м, 1H), 3,15-3,23 (м, 1H); ИЭР-МС: m/z 717,3 [M+H]⁺.

Стадия 6. Получение соединения 53h

Примечание. THF перед работой перегоняли над Na/бензофеноном, а MeCN перед работой перегоняли над CaH₂ перед применением.

Раствор соединения 53g (100 мг, 0,14 ммоль) и 1H-тетразола (2,48 мл 0,45 M раствор в MeCN, 1,12 ммоль) в безводном DMF (7 мл) обрабатывали молекулярными ситами 4Å в атмосфере N₂ в течение 30 мин. Впоследствии по каплям добавляли раствор 2-цианоэтил-N, N,N',N'-тетра(изопропил)фосфородиамидита (75 мг, 0,25 ммоль) в безводном THF (1,0 мл). После перемешивания смеси при кт в течение 3 ч добавляли дополнительное количество раствора 2-цианоэтил-N, N,N',N'-тетра(изопропил)фосфородиамидита (21 мг, 0,07 ммоль) в безводном THF (0,5 мл). Полученную суспензию дополнительно перемешивали в течение 16 ч. Добавляли tBuOOH (140 мкл 5 ~ 6 M раствора в декане, 0,70 ммоль) и перемешивали реакционную смесь в течение еще 30 мин. Смесь частично концентрировали при пониженном давлении. Фильтровали остаток и выливали фильтрат при перемешивании в H₂O (20 мл) с получением суспензии. Твердое вещество собирали, растворяли в DCM/MeOH (3 мл/1 мл) и очищали посредством препаративной тонкослойной хроматографии (DCM : MeOH=8 : 1). Нужные фракции собирали и растирали в MeCN/DMSO (10 мл/2 мл) в течение 2 ч с получением суспензии. После фильтрования фильтрат выпаривали досуха с получением неочищенного соединения 53h в виде раствора в DMSO (2 мл), который напрямую использовали в следующей стадии. ИЭР-МС: m/z=832,1 [M+H]⁺.

Стадия 7. Получение соединения 27 (натриевая соль)

Предыдущий раствор соединения 53h в DMSO (2 мл) обрабатывали с помощью MeNH₂ (30% в EtOH, 3 мл) и перемешивали при кт в течение 2 ч. Смесь выпаривали досуха, объединяли с другой партией и очищали посредством обращенно-фазной препаративной ВЭЖХ (колонка Waters Xbridge Prep OBD 5 мкм C18 150×30; условия: вода (10 мМ NH₄HCO₃) (A)-ACN (B); начало B 0, Конец B 30; время градиентного элюирования (мин) 7, 100% B; время удержания (мин) 1; скорость потока (мл/мин) 25) с получением после лиофилизации соединения 27 (аммонийная соль) (5 мг) в виде белого твердого вещества. ¹H ЯМР (400 МГц, D2O) δ м. д. 8,63 (с, 1H), 8,45 (с, 1H), 7,98 (с, 1H), 6,77 (с, 1H), 6,24-6,33 (м, 2H), 5,11-5,34 (м, 3H), 4,55 (уш. с, 1H), 4,28-4,42 (м, 2H), 4,23 (уш. с, 1H), 4,08-4,20 (м, 1H), 3,61 (уш. д, J=12,96 Гц, 1H), 3,44 (с, 3H), 3,33 (уш. д, J=13,69 Гц, 1H); ¹⁹F ЯМР (376 МГц, D2O) δ м. д. -198,29 - -197,44 (м, 1F); ³¹P ЯМР (162 МГц, D2O) δ м. д. -2,34 (с, 1P); ИЭР-МС: m/z=6153 [M+H]⁺.

Превращение в натриевую соль

Смолу Dowex 50W × 8, 200-400 (10 мл, H-форма) помещали в стакан и промывали деионизированной водой H₂O (30 мл). Впоследствии к смоле добавляли 15% H₂SO₄ в деионизированной воде H₂O (30 мл), смесь осторожно перемешивали в течение 15 мин и декантировали (30 мл). Смолу переносили на колонку с 15% H₂SO₄ в деионизированной H₂O и промывали 15% H₂SO₄ (по меньшей мере 4 объема колонки) и впоследствии деионизированной H₂O до нейтральной реакции. Смолу переносили обратно в стакан, добавляли раствор 15% NaOH в деионизированной H₂O (30 мл) и смесь осторожно перемешивали в течение 15 мин и декантировали (1 ×). Смолу переносили на колонку и промывали 15% NaOH в H₂O (по меньшей мере 4 объема колонки) и впоследствии деионизированной H₂O до нейтральной реакции, соединение 27 (аммонийная соль) (5 мг) растворяли в деионизированной H₂O (3 мл), добавляли в верхнюю часть колонки и элюировали деионизированной H₂O. Нужные фракции объединяли и лиофилизировали с получением соединения 27 (натриевая соль) (2,1 мг) в виде белого твердого вещества. ¹H ЯМР (400 МГц, D2O) δ м. д. 8,75 (с, 1H), 8,52 (уш. с, 1H), 7,84-8,36 (м, 1H), 6,65-7,24 (м, 1H), 6,38 (уш. д, J=19,07 Гц, 2H), 5,28-5,46 (м, 1H), 5,26 (уш. дд, J=8,53, 4,77 Гц, 1H), 4,81-4,93 (м, 1H), 4,63 (уш. с, 1H), 4,42 (уш. дд, J=10,54, 7,78 Гц, 2H), 4,19-4,34 (м, 2H), 3,58-3,75 (м, 1H), 3,54 (с, 3H), 3,30-3,48 (м, 1H); ¹⁹F ЯМР (377 МГц, D2O) δ м. д. -197,75 (уш. с, 1F); ³¹P ЯМР (162 МГц, D2O) δ м. д. -2,15 (уш. с, 1 P); ИЭР-МС: m/z=675,2 [M+H]⁺.

Пример 54

Стадия 1. Получение соединения 54b

Соединение 54a (1 г, 1,5 ммоль) и сульфамат 3o (1,3 г, 1,5 ммоль) растворяли в DCE (10 мл), добавляли молекулярные сита 4Å (порошок) и перемешивали реакционную смесь в атмосфере N₂ при комнатной температуре в течение 2 ч. Смесь DMAP (913 мг, 7,5 ммоль) и порошка молекулярных сит 4Å (0,5 г) в DCE (2 мл) перемешивали в атмосфере N₂ при комнатной температуре в течение 6 ч и впоследствии добавляли к вышеуказанной смеси. (Примечание. DCE высушивали на активированных молекулярных ситах 3Å до применения). Реакционную смесь перемешивали в течение ночи при температуре 50 °C. Молекулярные сита удаляли фильтрованием и промывали с помощью DCM. Фильтрат промывали насыщенным водным NaHCO₃, водную фазу экстрагировали с помощью DCM. Объединенные органические слои высушивали с помощью Na₂SO₄, фильтровали и выпаривали в вакууме. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 1-2% MeOH в DCM) с получением 1,8 г (выход: 83%) смеси соединения 54b и его 2’-связанного региоизомера (структура не показана), где последний получен в результате частичного 2'→3’ TBS-перехода соединения 54a. ИЭР-МС: m/z 1097,5 [M-DMTr+H]⁺.

Стадия 2. Получение соединения 54c

Вышеуказанную смесь продуктов (2,6 г, 1,84 ммоль) растворяли в DCM (30 мл), к которому добавляли DCA (610 мкл, 7,40 ммоль) и воду (330 мкл, 1,84 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре до полного удаления защитных групп (прибл. 1 ч), после чего ее гасили добавлением пиридина (1,5 мл, 18,4 ммоль) в метаноле (4 мл) и затем промывали водой. Органический слой сушили безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством препаративной обращенно-фазной ВЭЖХ (неподвижная фаза: XBridge C18 OBD, 5 мкм, 150×30 мм; подвижная фаза: LEG (A) - MeCN (B); градиентное элюирование) с получением очищенного соединения 54c в виде белого твердого вещества (600 мг, выход: 40%). ¹H ЯМР (400 МГц, DMSO-d₆) δ м. д. 12,09 (уш. с, 1H), 11,62 (уш. с, 1H), 9,26 (с, 1H), 8,99 (с, 1H), 8,89 (с, 1H), 8,45 (уш. с, 1H), 8,24 (с, 1H), 6,10 (д, J=6,0 Гц, 1H), 5,82 (д, J=6,0 Гц, 1H), 5,71 (д, J=6,3 Гц, 1H), 5,48 (уш. с, 1H), 4,91-5,00 (м, 2H), 4,72 (к, J=5,8 Гц, 1H), 4,29-4,40 (м, 1H), 4,03-4,12 (м, 1H), 3,87 (уш. т, J=4,3 Гц, 1H), 3,60-3,74 (м, 2H), 3,44 (с, 3H), 3,35-3,42 (м, 1H), 3,29 (дд, J =14,1, 7,8 Гц, 1H), 2,75 (спт, J =6,8 Гц, 1H), 1,11 (д, J =6,8 Гц, 3H), 1,09 (д, J=6,9 Гц, 3H), 0,63 (с, 9H), -0,08 (с, 3H), -0,34 (с, 3H); ИЭР-МС: m/z=795,4 [M+H]⁺.

Стадия 3. Получение соединения 54d

Раствор соединения 54c (400 мг, 0,5 ммоль) и 1H-тетразола (8,9 мл 0,45 M раствора в MeCN, 4,03 ммоль) в смеси безводного THF (48 мл) и безводного DMF (4 мл) обрабатывали молекулярными ситами 4Å в атмосфере N₂ в течение 30 мин, после чего по каплям добавляли 2-цианоэтил-N, N,N',N'-тетра(изопропил)фосфородиамидит (273 мг, 0,91 ммоль) в безводном THF (4 мл) в течение 10 мин. (Примечание. THF перед работой перегоняли над Na/бензофеноном, а MeCN перед работой перегоняли над CaH₂ до применения). Полученную реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. Далее добавляли раствор tBuOOH (500 мкл 5 ~ 6 M раствор в декане, 2,5 ммоль) и продолжали перемешивание в течение еще 30 мин. Реакционную смесь фильтровали через слой целита и концентрировали. Осадок растворяли в DCM и промывали водой. Объединенный органический слой сушили на Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Неочищенный продукт очищали посредством флэш-хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 1-10% MeOH в DCM) с получением соединения 54d (130 мг, выход 23%) в виде белого твердого вещества. ИЭР-МС: m/z 910,5 [M+H]⁺.

Стадия 3. Получение соединения 3 (аммонийная соль)

Соединение 54d (58 мг) перемешивали в 30% растворе метиламина в этаноле (2 мл) при комнатной температуре в течение 2 ч. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Остаток растворяли в пиридине (2 мл), после чего добавляли Et₃N (30 мг, 0,27 ммоль) и тригидрофторид триэтиламина (21,7 мг, 0,13 ммоль), полученную смесь перемешивали при 50°C в течение 1 дня. Реакционный раствор охлаждали до комнатной температуры, добавляли изопропокситриэтилсилан (0,1 мл, 0,54 ммоль) и продолжали перемешивание в течение ночи. Остаток, полученный после концентрирования при пониженном давлении, очищали посредством препаративной обращенно-фазной ВЭЖХ (неподвижная фаза: XBridge C18 OBD, 5 мкм, 150×25 мм; подвижная фаза: 10 мМ водный бикарбонат аммония (A) - MeCN (B); градиентное элюирование) с получением соединения 3 (аммонийная соль) (4 мг). ¹H ЯМР (400 МГц, D2O) δ м. д. 9,26 (с, 1H), 9,02 (с, 1H), 8,74 (с, 1H), 7,94 (с, 1H), 6,40 (д, J=1,5 Гц, 1H), 6,01 (д, J=8,5 Гц, 1H), 5,39 (тд, J=9,1, 5,3 Гц, 1H), 5,25 (дд, J=7,9, 4,5 Гц, 1H), 5,06-5,11 (м, 1H), 4,55 (с, 1H), 4,48 (уш. д, J=12,0 Гц, 1H), 4,09-4,18 (м, 2H), 3,86 (уш. д, J=14,6 Гц, 1H), 3,72 (уш. д, J=14,3 Гц, 1H), 3,65 (с, 3H); ³¹P ЯМР (162 МГц, D2O) δ ч/млн -2,22 (с, 1P); ИЭР-МС: m/z 673,2 [M+H]⁺.

Пример 55

Стадия 1. Получение соединения 55b

Раствор 3'-дезокси-3’-фторинозина 55a [CAS 117517-20-1] (2,2 г, 8,14 ммоль) в безводном пиридине (33 мл), к которому добавляли DMAP (0,49 г, 4,0 ммоль) и DMTrCl (4,4 г, 13 ммоль) (порциями), перемешивали при комнатной температуре до полного превращения (прибл. 2,5 ч). Реакционную смесь гасили метанолом (10 мл) и концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток растворяли в этилацетате и промывали водой. Органический слой высушивали над безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Очистку проводили колоночной хроматографией на силикагеле (градиентное элюирование: 0-2% MeOH в DCM) с получением соединения 55b в виде пены грязно-белого цвета (3,3 г, выход: 71%). ¹H ЯМР (500 МГц DMSO-d₆) δ м. д.: 8,22 (д, J=2,1 Гц, 1H), 7,93 (д, J=1,4 Гц, 1H), 7,36 (д, J=8,3 Гц, 2H), 7,28 (т, J=7,6 Гц, 2H), 7,23 (м, 5H), 6,86 (дд, J=8,3, 6,2 Гц, 4H), 5,92 (д, J=7,6 Гц, 1H), 5,14 (дд, J =54,1, 4,5 Гц, 1H), 5,02 (дк, J =23,2, 3,9 Гц, 1H), 4,35 (дт, J =25,9, 4,3 Гц, 1H), 3,74 (с, 6H), 3,29 (дк, J =37,5, 5,2 Гц, 2H); ИЭР-МС: m/z 572,0 [M+H]⁺.

Стадия 2. Получение соединения 55c

Каждое из соединения 55b (0,66 г, 1,15 ммоль), сульфамата 17a (1,21 г, 1,38 ммоль) и DMAP (0,704 г, 5,76 ммоль) по отдельности растворяли в безводном DCM (3×20,0 мл) и высушивали на активированных молекулярных ситах 3Å в инертной атмосфере в течение по меньшей мере 2 ч. Далее растворы соединения 55b и сульфамата 17a последовательно переносили в реакционную колбу, содержащую раствор DMAP. Полученную реакционную смесь перемешивали в течение 24 ч. Молекулярные сита удаляли фильтрованием и тщательно промывали дихлорметаном. Фильтрат последовательно промывали насыщенным водным NaHCO₃ и насыщенным водным NH₄Cl, высушивали над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-2% MeOH в DCM) с получением соединения 55c в виде пены грязно-белого цвета (0,475 г, выход: 31%). ¹H ЯМР (500 МГц DMSO-d₆) δ м. д.: 12,47 (c, 1H), 11,23 (c, 1H), 8,66 (с, 1H), 8,56 (с, 1H), 8,48 (с, 1H), 8,19 (с, 1H), 8,03 (д, J=7,6 Гц, 2H), 7,84 (с, 1H), 7,65 (т, J=7,2 Гц, 1H), 7,55 (т, J=7,6 Гц, 2H), 7,48 (д, J=7,6 Гц, 2H), 7,36 (к, J=4,8 Гц, 4H), 7,32 (м, 4H), 7,23 (т, J=7,6 Гц, 4H), 7,19 (т, J=7,9 Гц, 5H), 6,90 (дд, J=9,0, 6,9 Гц, 4H), 6,81 (дд, J=9,0, 6,2 Гц, 4H), 6,34 (м, 1H), 6,23 (д, J=6,2 Гц, 1H), 5,78 (м, 2H), 5,50 (д, J=53,7 Гц, 1H), 4,72 (м, 2H), 4,43 (д, J =24,1 Гц, 1H), 4,01 (т, J=7,9 Гц, 1H), 3,74 (с, 1H), 3,70 (т, J=2,4 Гц, 12H), 3,25 (дд, J=10,7, 3,8 Гц, 1H), 2,99 (д, J=13,1 Гц, 1H), 2,70 (дд, J=14,5, 9,0 Гц, 1H). ИЭР-МС: m/z 1310,0 [M+H]⁺.

Стадия 3. Получение соединения 55d

Раствор соединения 55c (0,453 г, 0,34 ммоль) в DCM (12,6 мл), к которому добавляли DCA (1,14 мл 10% раствора в DCM, 1,38 ммоль) и воду (31 мкл, 1,72 ммоль), перемешивали при комнатной температуре до полного удаления защитных групп (прибл. 2 ч). Реакционную смесь гасили добавлением пиридина (0,14 мл, 1,72 ммоль) и нескольких капель метанола. Полученную суспензию перемешивали в течение 20 мин, фильтровали и сушили с получением соединения 55d (0,21 г, выход: 86%). ¹H ЯМР (500 МГц DMSO-d₆) δ м. д.: 12,5 (д, J=3,4 Гц, 1H), 11,25 (с, 1H), 8,75 (с, 1H), 8,69 (т, J=6,0 Гц, 1H), 8,61 (с, 1H), 8,35 (с, 1H), 8,09 (д, J=3,4 Гц, 1H), 8,05 (д, 7,6 Гц, 2H), 7,66 (т, J=7,2 Гц, 1H), 7,56 (т, J=7,6 Гц, 2H), 6,32 (дд, J=20,0, 2,1 Гц, 1H), 6,21 (д, J=7,6 Гц, 1H), 5,85 (д, J=6,2 Гц, 1H), 5,60 (м, 1H), 5,49 (м, 3H), 5,34 (д, J=4,8 Гц, 1H), 4,57 (м, 1H), 4,40 (дт, J=26,9, 3,4 Гц, 1H), 3,92 (к, J=6,0 Гц, 1H), 3,65 (т, J=4,1 Гц, 2H), 3,17 (т, J=6,2 Гц, 2H); ИЭР-МС: m/z=706,0 [M+H]⁺.

Стадия 4. Получение соединения 55e

Раствор соединения 55d (260 мг, 0,37 ммоль) и 1H-тетразола (2,15 мл 3-4% в MeCN, высушен на активированных молекулярных ситах 3Å) в DMF/THF (1 : 2, 30 мл, высушен на активированных молекулярных ситах 3Å) обрабатывали молекулярными ситами 3Å в течение 2 ч в инертной атмосфере, после чего в один прием добавляли фосфородиамидит 2-цианоэтил-N, N,N',N'-тетра(изопропила) (129 мкл, 0,41 ммоль). Полученную реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение ночи. Добавляли дополнительное количество 2-цианоэтил-N, N,N',N'-тетра(изопропил)фосфородиамидита (23 мкл, 0,074 ммоль) и продолжали встряхивание в течение еще одного дня для достижения полного превращения. Добавляли tBuQOH (134 мкл 5,5 M раствора в декане, 0,74 ммоль) и встряхивали реакционную смесь в течение еще одного часа. Молекулярные сита удаляли фильтрованием и промывали дихлорметаном. Фильтрат тщательно промывали водой, высушивали с помощью MgSO4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-5% MeOH в DCM) с получением соединения 55e (20 мг, выход: 7%). ИЭР-МС: m/z=820,4 [M+H]⁺.

Стадия 5. Получение соединения 39 (натриевая соль)

Соединение 55e (20 мг, 0,024 ммоль) перемешивали в 33% растворе метиламина в этаноле (10 мл) при комнатной температуре до полного превращения (~ 1 ч). Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Полученный неочищенный продукт растирали в MeCN с последующей очисткой посредством препаративной обращенно-фазной ВЭЖХ (неподвижная фаза: XBridge C18 OBD, 5 мкм, 250×30 мм; подвижная фаза: водный 0,25% бикарбонат аммония (A) - MeCN (B); градиентное элюирование) с получением соединения 39 (аммонийная соль). Заключительное превращение в натриевую соль проводили элюированием водным раствором колонки, заполненной натриевой катионообменной смолой, с получением соединения 39 (натриевая соль) в виде рыхлого белого твердого вещества после лиофилизации (13,5 мг, выход: 80%). ³¹P ЯМР (162 МГц, DMSO-d₆) δ м. д. -2,06 (с, 1P); ИЭР-МС: m/z=663,3 [M+H]⁺.

Пример 56

Стадия 1. Получение соединения 56b

Раствор 3’-(O-метил)инозина (56a, 1,5 г, 5,31 ммоль, CAS №75479-64-0) в безводном пиридине (30 мл), к которому добавляли DMAP (0,32 г, 2,65 ммоль) и DMTrCl (2,69 г, 7,97 ммоль) (порциями), перемешивали при комнатной температуре до полного превращения. Реакционную смесь гасили метанолом (15 мл) и концентрировали при пониженном давлении. Полученный остаток растворяли в этилацетате и промывали водой. Органический слой промывали водой, высушивали безводным Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Очистку проводили колоночной хроматографией на силикагеле (градиентное элюирование: 0-2,5% MeOH в DCM) с получением соединения 56b в виде бледно-коричневой пены (2,19 г, выход: 71%). ¹H ЯМР (500 МГц, DMSO-d₆) δ м. д.: 12,35 (с, 1H), 8,22 (с, 1H), 8,00 (с, 1H), 7,34 (д, J=7,6 Гц, 2H), 7,27 (т, J=7,6 Гц, 2H), 7,21 (м, 5H), 6,84 (м, 4H), 5,89 (д, J=4,8 Гц, 1H), 5,62 (д, J=6,2 Гц, 1H), 4,78 (к, J=5,3 Гц, 1H), 4,13 (к, J=4,6 Гц, 1H), 3,99 (т, J=5,2 Гц, 1H), 3,73 (с, 6H), 3,37 (с, 3H), 3,22 (д, J=4,1 Гц, 2H); ИЭР-МС: m/z 585 [M+H]⁺.

Стадия 2. Получение соединения 56d

В реакционную колбу помещали DMAP (0,76 г, 6,2 ммоль), безводный DCM (25 мл) и активированные молекулярные сита 3Å. Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение по меньшей мере 2 ч в инертной атмосфере. Одновременно раствор соединения 56b (0,73 г, 1,24 ммоль) и раствор соединения 56c (1,0 г, 1,49 ммоль) высушивали на активированных молекулярных ситах 3Å (прибл. 2 ч), при этом каждый был в безводном DCM (2×25 мл). Оба раствора (соединения 56b и соединения 56c соответственно) последовательно переносили в реакционную колбу. Полученную реакционную смесь перемешивали в течение 24 ч. Молекулярные сита удаляли фильтрованием и тщательно промывали дихлорметаном. Фильтрат промывали насыщенным водным NaHCO₃, солевым раствором и насыщенным водным NH₄Cl, высушивали над Na₂SO₄, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-2% MeOH в DCM) с получением соединения 56d (0,54 мг, выход: 39%). ¹H ЯМР (500 МГц DMSO -d₆) δ м. д.: 8,72 (с, 1H), 8,66 (с, 1H), 8,27 (с, 1H), 8,09 (м, 1H), 8,05 (м, 2H), 7,99 (с, 1H), 7,65 (м, 1H), 7,56 (т, J=7,6 Гц, 2H), 7,29 (д, J=6,9 Гц, 2H), 7,24 (т, J=7,6 Гц, 2H), 7,18 (м, 5H), 6,87 (д, J=9,0 Гц, 1H), 6,81 (дд, J=9,0, 4,1 Гц, 4H), 6,46 (м, 1H), 6,24 (д, J=3,4 Гц, 1H), 5,66 (м, 1H), 4,63 (т, J=2,8 Гц, 1H), 4,54 (м, 1H), 4,11 (м, 1H), 3,93 (м, 1H), 3,71 (с, 6H), 3,32 (д, J=8,3 Гц, 13H), 3,26 (м, 3H), 3,19 (м, 3H), 2,99 (м, 1H), 2,58 (м, 4H), 2,35 (м, 1H), 0,89 (с, 9H), 0,11 (с, 6H); ИЭР-МС: m/z 1116 [M+H]⁺.

Стадия 3. Получение соединения 56e

Et₃N (2,65 мл, 19,0 ммоль) и Et₃N·3HF (0,31 мл, 1,9 ммоль) добавляли к раствору соединения 56d (0,53 г, 0,47 ммоль) в пиридине (9,5 мл). Реакционную смесь перемешивали при 45°C до полного превращения (прибл. 5 ч) и впоследствии охлаждали до комнатной температуры. Добавляли изопропокситриметилсилан (1,34 мл, 7,6 ммоль) и продолжали перемешивание в течение ночи. Посредством концентрирования при пониженном давлении получали неочищенное соединение со снятой 5’-защитой, которое повторно растворяли в DCM (13,3 мл). Добавляли воду (40 мкл, 2,37 ммоль) и дихлоруксусную кислоту (1,57 мл 10% раствора в DCM, 1,9 ммоль), полученную реакционную смесь перемешивали в течение 1 ч (полное превращение), после чего ее гасили добавлением пиридина (200 мкл, 2,37 ммоль) и нескольких капель метанола. Остаток, полученный после концентрирования при пониженном давлении, очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-9% MeOH в DCM) с получением соединения 56e (220 мг, выход: 66,6% за две стадии). ¹H ЯМР (500 МГц DMSO-d₆) δ м. д.: 12,43 (уш. с, 1H), 11,20 (уш. с, 1H), 8,72 (с, 1H), 8,63 (с, 1H), 8,57 (уш. т, J=5,5 Гц, 1H), 8,33 (с, 1H), 8,04 (м, 3H), 7,65 (т, J=7,2 Гц, 1H), 7,56 (т, J=7,9 Гц, 2H), 6,43 (т, J=6,9 Гц, 1H), 6,17 (д, J=5,5 Гц, 1H), 5,45 (м, 2H), 5,26 (т, J=5,5 Гц, 1H), 4,38 (м, 1H), 4,23 (т, J=4,1 Гц, 1H), 4,12 (к, J=3,7 Гц, 1H), 3,84 (м, 1H), 3,68 (м, 1H), 3,57 (м, 1H), 3,40 (с, 3H), 3,12 (м, 2H), 2,84 (м, 1H), 2,33 (м, 1H); ИЭР-МС: m/z 699 [M+H]⁺.

Стадия 4. Получение соединения 56f

Раствор соединения 56e (200 мг, 0,286 ммоль) и 1H-тетразола (5,09 мл 0,45 M раствор в MeCN, 0,99 ммоль, высушен молекулярных ситах 4Å до применения) в безводном MeCN/THF (1:2,9 мл) обрабатывали молекулярными ситами 4Å в атмосфере N₂ в течение 30 мин, после чего добавляли по каплям 2-цианоэтил-N, N,N',N'-тетра(изопропил)фосфородиамидит (155 мг, 0,52 ммоль) в безводном MeCN (2 мл) в течение 10 мин (Примечание. THF перед работой перегоняли над Na/бензофеноном, а MeCN перед работой перегоняли над CaH₂ до применения). Полученную реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 30 мин. Добавляли раствор tBuOOH (286 мкл 5-6 M раствора в декане, 1,43 ммоль) и продолжали перемешивание в течение еще 30 мин. Смесь разбавляли DCM (20 мл), фильтровали через слой диатомитовой земли и концентрировали. Неочищенный продукт очищали посредством колоночной хроматографии на силикагеле (градиентное элюирование: 0-8% MeOH в DCM) с получением соединения 56f (130 мг, выход: 44% (чистота: ~ 80% ЖХ-УФ)) в виде белого твердого вещества. ИЭР-МС: m/z=814,3 [M+H]⁺.

Стадия 5. Получение соединения 40 (натриевая соль)

Вышеуказанное соединение 22f (130 мг, 0,072 ммоль) перемешивали в 30% растворе метиламина в этаноле (15 мл) при комнатной температуре в течение 2 ч. Реакционную смесь концентрировали при пониженном давлении. Остаток растворяли в воде, промывали DCM и лиофилизировали. Неочищенный продукт очищали посредством препаративной обращенно-фазной ВЭЖХ (неподвижная фаза: Xbridge OBD C18, 5 мкм, 150×30 мм; подвижная фаза: 10 мМ водный бикарбонат аммония (A) - MeCN (B); градиентное элюирование). Заключительное превращение в натриевую соль проводили элюированием водным раствором на колонке, заполненной натриевой катионообменной смолой, с получением соединения 40 (натриевая соль) в виде рыхлого белого твердого вещества после лиофилизации (5,8 мг, выход: 3% из 22f). ¹H ЯМР (400 МГц, D₂O) δ м. д. 8,39 (с, 1H), 7,91 (уш. д, J=13,2 Гц, 2H), 7,24 (уш. с, 1H), 6,26 (уш. с, 1H), 6,18 (уш. д, J=8,3 Гц, 1H), 5,49 (уш. с, 1H), 4,87-5,06 (м, 1H), 4,51 (уш. с, 1H), 4,30 (уш. д, J=3,7 Гц, 1H), 4,10 (уш. с, 3H), 3,42 (с, 3H), 3,38 (уш. с, 2H), 2,53-2,75 (м, 2H); ³¹P ЯМР (162 МГц, D₂O)) м. д. -1,23 (с, 1P); ИЭР-МС: m/z=657,0 [M+H]⁺.

Биологические примеры

Анализы in vitro

Пример 1

Анализ связывания STING методом SPA

В анализе связывания человеческого STING методом сцинтилляционного анализа сближения (SPA) измеряют вытеснение меченного тритием 2’,3’cGAMP (циклического (гуанозин-(2' - > 5')-монофосфата-аденозин-(3' - > 5')-монофосфата) от биотинилированного белка STING. В E.coli экспрессировали растворимый вариант рекомбинантного STING, у которого отсутствовали четыре трансмембранных домена и имелись остатки 139-379 белка Q86WV6 с R в положении 232 (H232R). На основании 58% частоты аллеля в популяции H232R считается диким типом (Yi, et. al., «Single Nucleotide Polymorphisms of Human STING can affect innate immune response to cyclic dinucleotides» PLOS ONE. 2013, 8(10), e77846). Конструкт STING имеет N-концевую гистидиновую метку и следующий за ней сайт расщепления протеазой TEV и метка AVI, благодаря которой возможно прямое биотинилирование биотинлигазой BirA (Beckett et al, A minimal peptide substrate in biotin holoenzyme synthetase-catalyzed biotinylation. (1999) Protein Science 8, 921-929). Гистидиновую метку отщепляли после очистки и до биотинилирования.

Анализ проводили на 1536-луночных планшетах с общим объемом 8 мкл в лунке путем добавления 8 нМ [³H]-2’3’-cGAMP и 40 нМ белка биотин-STING в буфере для анализа [25 мМ HEPES (Corning 25-060-C1) pH 7,5, 150 мМ NaCl (Sigma S5150), 0,5 мг/мл BSA (Gibco 15260-037), 0,001% Tween-20 (Sigma P7949), сверхчистая вода (Corning 46-000-CM)]. Исследуемые соединения (80 нл) добавляли через акустический диспенсер (EDC Biosystems) в 100% DMSO с конечной концентрацией 1% DMSO при анализе. Планшеты центрифугировали в течение 1 мин и инкубировали в течение 60 мин при комнатной температуре. В заключение добавляли (2 мкл) полистироловых гранул для SPA со стрептавидином (PerkinElmer RPNQ0306) и герметизировали и центрифугировали планшеты в течение 1 мин при комнатной температуре. Планшеты адаптировали к темноте в течение 2 ч и считывали на сканере ViewLux (Perkin Elmer) в течение 12 мин на планшет. Кривая насыщения связывания [³H]-2’3’-cGAMP показала K_D 3,6 ± 0,3 нМ для связывания со STING, что сопоставимо с отмеченными значениями для природного лиганда (Zhang et al, Cyclic GMP-AMP containing mixed phosphodiester linkages is an endogenous high-affinity ligand for STING).

С другими природными лигандами в данном анализе, включая циклический ди-GMP, также получали значения в пределах ожидаемого диапазона. Эталонным значением является cGAMP, и результаты приводятся в виде процентного ингибирования и значений IC₅₀. При связывании с мышиным STING использовали конструкт, сходный с вышеописанным и содержащий остатки 138-378 белка Q3TBT3.

Анализ связывания с полноразмерным человеческим STING

Человеческий белок STING, состоящий из остатков 1-379 белка Q86WV6 с R в позиции 232 (H232R) с N-концевой меткой 6HIS, после которой идет метка FLAG, с сайтом расщепления протеазой TEV и меткой AVI для биотинилирования рекомбинантно экспрессировали в клетках HEK293-EXPI. Из этих клеток получали очищенные мембраны и подтверждали экспрессию STING, а также количественно оценивали иммуноблоттингом. STING-содержащие мембраны объединяли с исследуемым соединением на 384-луночном планшете Greiner и инкубировали при комнатной температуре в течение одного часа в том же буфере для анализа, используемом для анализа связывания STING методом SPA. Далее добавляли [³H]-2’3’-cGAMP и инкубировали планшеты при комнатной температуре в течение 30 мин. Реакционные смеси переносили на предварительно промытый фильтрующий планшеты Pall 5073 и 3 раза промывали каждую лунку 50 мкл буфера для анализа. Фильтрующие планшеты высушивали при 50°C в течение 1 ч. В каждую лунку добавляли по 10 мкл сцинтилляционной жидкости Microscint, планшеты герметизировали и считывали на приборе TopCount (Perkin Elmer) в течение 1 мин на лунку.

Анализ связывания STING методом SPR

Соединения анализировали с использованием прибора для измерения поверхностного плазмонного резонанса (SPR) S200 biacore SPR (GE Healthcare). E.coli, продуцирующие урезанный белок STING, иммобилизовали на стрептавидиновом чипе серии S посредством захвата биотина (GE Healthcare #BR100531). Соединения подвергали скринингу с разведениями 1 : 2 от 100 мкМ до 0,195 мкМ в рабочем буфере (10 мМ HEPES, pH 7,4, 150 мМ NaCl, 0,005% P20, 1 мМ TECEP). Оценку стационарной аффинности и кинетики проводили с использованием модели связывания 1 : 1 (STING рассматривали как димер). Применяли следующие параметры прогона: 60 сек асс, 300 сек дисс для соединений IFM, циклический-ди-GMP (60 сек асс/60 сек дисс), тиоловый изомер 1 (60 сек асс/300 сек дисс) и cGAMP (60 сек асс/1200 сек дисс) при скорости потока 50 мкл/мин и сборе данных с частотой 40 Гц при 25 °C.

Анализ STING по гену-репортеру на человеческих клетках

Агонизм в отношении человеческого пути STING оценивали в клетках THP1-ISG (Invivogen, кат № thp-isg), полученных из человеческой моноцитарной клеточной линии THP1 путем стабильного встраивания SEAT-репортерного конструкта, индуцируемого регуляторным фактором интерферонов (IRF). Клетки THP1-Blue ISG экспрессируют репортерный ген секретируемой эмбриональной щелочной фосфатазы (SEAP) под контролем минимального промотора ISG54 в сочетании с пятью элементами отклика, стимулируемыми интерфероном (ИФН). В результате благодаря клеткам THP1-Blue ISG можно отслеживать активацию IRF путем определения активности SEAP. Уровни IRF-индуцированной SEAP в супернатанте клеточной культуры можно легко определять с помощью детекторной среды для щелочной фосфатазы, детекторного реагента SEAP. Эти клетки устойчивы к зеоцину. В качестве положительного контроля в данном анализе используют 2’3’cGAMP. Для проведения анализа 60 000 клеток наносили в 384-луночный планшет в объеме 30 мкл на лунку для культивирования тканей с белым непрозрачным дном.

Исследуемые соединения добавляли в объеме 10 мкл (конечная концентрация DMSO 1%). Соединения первоначального получали в 100% DMSO, наносили на планшет для разведения и впоследствии разводили средой перед нанесением. Анализируемую смесь инкубировали в течение 24 ч при 37 °C, 5% CO₂, впоследствии планшеты центрифугировали при 1200 об/мин (120 x g) в течение 5 мин. После заключительной инкубации в каждую лунку нового 384-луночного планшета с прозрачным дном добавляли по 90 мкл среды-субстрата для обнаружения активности щелочной фосфатазы и переносили по 10 мкл клеточного супернатанта из планшета с анализируемой смесью на этот новый планшет для обнаружения активности щелочной фосфатазы с помощью дозатора Biomek FX и перемешивали 4 раза. Планшеты инкубировали при кт в течение 20 мин, впоследствии определяли поглощение на длине волны 655 нм с помощью сканера Tecan Safire2.

Анализ STING на мышиных репортерных клетках

Агонизм в отношении мышиного пути STING оценивали в клетках RAW Lucia (Invivogen, кат. № rawl-isg)), полученных из мышиной макрофагальной клеточной линии RAW-264.7 путем стабильного встраивания индуцируемого интерфероном репортерного конструкта с люциферазой Lucia. Клетки RAW Lucia экспрессируют репортерный ген секретируемой люциферазы под контролем минимального промотора ISG54 в сочетании с пятью элементами отклика, стимулируемыми интерфероном (ИФН). В результате благодаря клеткам RAW Lucia можно отслеживать активацию IRF путем определения активности люциферазы. Уровни IRF-индуцированной люциферазы в супернатанте клеточной культуры можно легко определять с помощью QUANTI-Luc™ - детекторной среды для люциферазы. Эти клетки устойчивы к зеоцину. В качестве положительного контроля в данном анализе используют 2’3’cGAMP. Для проведения анализа 100 000 клеток наносили в 96-луночный плоскодонный планшет в объеме 90 мкл на лунку для культивирования тканей. Исследуемые соединения добавляли в объеме 10 мкл. Анализируемую смесь инкубировали при 37 °C, 5% CO2 в течение 24 и 48 часов. После инкубации 20 мкл клеточного супернатанта из планшета с анализируемой смесью переносили в новый 96-луночный планшет и добавляли 50 мкл субстрата QUANTI-Luc. Планшет инкубировали при встряхивании при кт в течение 5 минут, впоследствии люминесценцию определяли на сканере EnVision 2104 со временем интегрирования 0,1 с.

Анализ индукции человеческого интерферона-β

Клетки THP1-Blue ISG использовали для измерения секреции ИФН-β в супернатант культуры после активации пути STING. Для проведения анализа иммобилизирующие антитела к ИФН-β наносили на 96-луночные планшеты MultiArray (Mesoscale Discovery). После инкубации в течение часа планшеты промывали и на эти планшеты с покрытием наносили по 50 мкл супернатанта из планшетов для анализа STING с человеческими репортерными клетками или стандартов ИФН-β в смеси с 20 мкл конъюгированного с Sulfotag детекторного антитела. Планшеты инкубировали встряхиванием в течение 2 ч промывали и наносили буфер для считывания. Электрохемилюминесценцию измеряли прибором SectorImager.

Анализ сигнального пути клетки STING.

Агонизм в отношении пути STING измеряли в клетках THP1 BLUE ISG за счет определения фосфорилированного STING(S366), фосфорилированного TBK1(S172) и фосфорилированного IRF3(S396) методом вестерн-блоттинга. Вкратце 5 миллионов клеток в 90 мкл нуклеофекторного буфера смешивали с 10 мкл исследуемого соединения. Эти смеси подвергали электропорации с помощью программы V-001 на приборе Amaxa Nucleofector (Lonza). Клетки переносили в 12-луночные планшеты со свежей средой и позволяли восстановиться при 37 °C, 5% CO₂ в течение одного часа. Впоследствии клетки промывали в холодном BBSS и лизировали буфером RIPA. Образцы нормализовали по общему содержанию белка и разводили либо в буфере для образцов ProteinSimple, либо в нагрузочном буфере LDS. Образцы денатурировали нагреванием при 95 °C в течение 5 мин, впоследствии использовали систему PeggySue (ProteinSimple) для измерения содержания фосфорилированных и общих STING и IRF3, а для измерения TBK1 использовали систему NuPAGE (Invitrogen). Использовали программное обеспечение Compass или Licor Odyssey соответственно для анализа данных.

Активность STING in vivo

Во всех исследованиях использовали самок мышей Balb/c, приобретенных в Charles River Labs (Уилмингтон, штат Массачусетс, США), в возрасте 6-8 недель и с массой около 20 г. Всем животным давали акклиматизироваться и восстановиться после стресса, связанного с транспортировкой, в течение по меньшей мере 5 дней до применения в экспериментах. В свободном доступе предоставляли хлорированную воду, очищенную обратным осмосом, и обработанный облучением корм (Laboratory Autoclavable Rodent Diet 5010, Lab Diet), и животных содержали в 12 ч цикле свет/темнота. Клетки и подстилку автоклавировали перед использованием и меняли еженедельно. Все эксперименты были выполнены в соответствии с руководством по уходу и применению лабораторных животных и утверждены Институциональным комитетом по уходу и применению животных компании Janssen R & D, г. Спринг-Хаус, штат Пенсильвания, США. В каждую экспериментальную группу входило 8 мышей. Для оценки эффективности in vivo на мышиной модели опухоли CT26 мышам Balb/c подкожно имплантировали 500 000 опухолевых клеток карциномы толстой кишки CT26 и позволяли опухоли развиться до объема 100-300 мм³. Соединения вводили внутрь опухоли в фосфатно-солевом буфере в объеме 0,1 мл на инъекцию. Мышам вводили 0,05 мг каждые три дня (всего три дозы). Эффективность измеряли в виде процентного ингибирования роста опухоли (TGI), вычисленного как уменьшение объема опухоли после лечения (T) по сравнению с объемом опухоли в контроле (C) по следующей формуле: ((C - T) / (C)) * 100, когда все контрольные животные еще участвовали в исследовании. Количество излеченных определяли как количество животных без определимой опухоли в течение 10 сроков удвоения объема опухоли (TVDT) после введения последней дозы.

Полученные данные представлены в таблице 2.

Таблица 2

№ соед.	hSTING SPA IC50 (мкМ)*	Человеческие репор терные клетки EC50 (мкМ)*	SPR человеческий STING KD (мкМ)	Человеческий ИФН-β (ранговая величина)	Активность in vivo (% TGI)	Активность in vivo (излечения)**
c-GAMP	0,024	0,53	0,0055	-	-	-
3’,3’c-GAMP	8,62	8,7	3,97	-	-	-
3’,3’c-GAMP	73,06	17,83	5,99	539	-	-
1	0,0046	0,077	0,0012	7930	108,9	6
6	0,011	0,99	0,0012	6762	-	-
8	11,68	2,38	-	5539	-	-
9	2,79	0,11	0,28	8104	-	-
11	0,015	0,03	0,0065	14896	-	-
12	0,22	0,14	-	-	-	-
15	0,36	0,043	-	15611	-
17	21,58	0,25	5,14	17298	-	-
18	1,14	0,11	-	15249	-	-
20	0,047	~ 0,22	0,0082	6045	-	-
22	0,092	0,026	-	-	-	-
24	5	0,011	-	11534	-	-
25	29,2	0,1	3,48	6595	88,9	-
26	28,41	1,02	-	-	-	-
28	0,19	0,099	-	12969	-	-
29	0,29	0,053		16254	-	-
30	> 100	13,05	-	-	-	-
33	0,39	0,17	-	-	-	-
34	4,26	0,025	-	-	-	-
35	> 100	7,08	-	-	-	-
36	> 100	2,46	-	-	-	-
37	12,36	1,35	-	-	-	-
39	0,021	0,065	-	-	-	-
40	0,066	0,038	-	-	-	-
41	> 100	22,53	-	-	-	-
45	76,17	1,84	-	-	-	-
47	1,3	~ 0,039	-	-	-	-
48	> 100	6,66	-	-	-	-
49	37,09	0,26	-	-	-	-
51	0,011	-	-	-	-	-
52	0,32	-	-	18191	-	-
53	4,01	-	-	11036	-	-
54	0,75	-	-	18578	-	-
55	0,22	-	-	25628	-	-

Ранговую величину для человеческого ИФН-β определяли по общей совокупной индукции ИФН-β в пг/мл в диапазоне исследованных доз (0,78-50 мкМ) на клетках THP-1 после 24 часов воздействия

* IC₅₀ и EC₅₀ являются средними для по меньшей мере трех значений

** 8 мышей в группе

(-) не проводилось

Биологический пример 2

Анализ STING на основании индукции выработки цитокинов первичными человеческими клетками PBMC

Агонизм в отношении человеческого пути STING оценивали в первичных человеческих мононуклеарных клетках периферической крови (PBMC), полученных из цельной человеческой крови, для чего 1 пинту (около 420 мл) свежей донорской крови (AliCells Inc, г. Аламида, штат Калифорния, США) разделяли на слои в среде Lymphocyte Separation Medium (1,077-1,080 г/мл, Corning, г. Манассас, штат Виргиния, США), впоследствии центрифугировали с 500 g при кт в течение 20 мин и при этом не применяли тормоз. Собирали PBMC, скопившиеся на границе между сывороткой и средой Lymphocyte Separation Medium, промывали, впоследствии подсчитывали. PBMC состоят из субпопуляций лимфоцитов и моноцитов, таких как B-клетки, T-клетки, и т. п., и эти субпопуляции по литературным данным экспрессируют разные уровни белка STING. В ответ на применение агонистов STING, таких как 2’3’-cGAMP, эти клетки активируются, и в них индуцируется экспрессия различных провоспалительных и противовирусных цитокинов. Кроме того, при стимуляции агонистами STING в этих клетках возрастает экспрессия маркеров активации. Уровни индукции цитокинов можно измерять различными способами, включая ELISA, Luminex и MSD. Повышение экспрессии маркеров активации можно измерять проточной цитометрией.

Для проведения анализа 1 000 000 клеток можно наносить в объеме 225 мкл на лунку на 96-луночные плоскодонные планшеты, обработанные для культивирования тканей. Исследуемые соединения можно добавлять в объеме 25 мкл в концентрации 10x. Некоторые соединения можно солюбилизировать в 100% DMSO, и итоговая концентрация DMSO в культурах, получающих эти соединения, может составлять 1%. Анализируемую смесь можно инкубировать в течение 48 ч при 37 °C, 5% CO₂. Можно собирать 200 мкл супернатанта, не затрагивая клетки на дне планшета, а затем замораживать при -20°C до измерения методом Luminex, где анализы Luminex можно проводить с использованием G-CSF, ИФНα2, ИФНγ, IL-1b, IL-6, IL-10, IL-12 (p40), IL-12 (p70), ФНО-α, которые входят в иммунологический мультиплексный набор MILLIPLEX MAP Human Cytokine/Chemokine Magnetic Bead Panel и аналита IFNβ1 из набора MILLIPLEX MAP Human Cytokine/Chemokine Magnetic Bead Panel IV (EMD Millipore, г. Биллерика, штат Массачусетс, США) в соответствии с протоколом производителя. Индукцию цитокинов можно измерять с использованием прибора Luminex FlexMAP 3D® (Luminex Corporation, г. Раднор, штат Пенсильвания, США). Анализ полученных методом Luminex данных можно выполнять с помощью программного обеспечения MILLIPLEX Analyst (EMD Millipore).

Подавление вируса HBV в клетках PHH с использованием кондиционированной среды от активированных STING первичных человеческих PBMC

Первичные человеческие гепатоциты могут быть инфицированы вирусом гепатита В и при развившейся инфекции будут продуцировать вирусные белки, такие как HBsAg и HBeAg, которые могут быть выявлены методом ELISA. Терапевтическая обработка соединениями, такими как энтекавир, может подавлять размножение HBV, которое можно измерять по снижению продукции вирусных белков. Первичные человеческие гепатоциты (кол-во клеток) 4×10⁵ клеток/лунка (BioReclamation, г. Вестбери, штат Нью-Йорк, США) можно наносить в объеме 500 мкл/лунка на плоскодонные 24-луночные планшеты, обработанные для культивирования тканей. Через 24 ч клетки можно инфицировать с помощью множественности заражения (moi) 30-75 вируса HBV. На следующий день PHH можно 3 раза промывать и можно добавлять к ним свежую среду для поддержания. Параллельно можно выделять PBMC, как описано выше. Для стимуляции PBMC можно наносить 10 000 000 клеток на плоскодонные 24-луночные планшеты, обработанные для культивирования тканей, в объеме 400 мкл на лунку. Исследуемые соединения можно добавлять в объеме 100 мкл, впоследствии можно инкубировать культуры при 37 °C, 5% CO₂, в течение 48 ч. Можно собирать супернатанты. В клетках можно измерять повышение экспрессии маркера активации методом проточной цитометрии. Вкратце клетки можно окрашивать флуоресцентно-меченными антителами к CD56, CD19, CD3, CD8a, CD14, CD69, CD54, CD161, CD4 и CD80. Образцы можно анализировать на проточном цитометре Attune NxT (Thermo Fisher, г. Карлсбад, штат Калифорния, США).

Из стимулированных культур PBMC можно отбирать часть супернатанта для определения цитокинов методом Luminex, как описано выше. Остальной супернатант можно разделять на две части и хранить одну аликвоту при 4 °C для применения на 8 день анализа. Другую аликвоту супернатанта можно разводить 1 : 1 средой 2X для PHH, впоследствии можно добавлять к инфицированным клеткам PHH на 4 день. Через 96 ч можно заменять израсходованную среду и можно добавлять супернатант в разведении средой 2X для PHH 1 : 1. В этот момент можно выполнять промежуточное измерение HBsAg с использованием набора для ИФА HBsAg (Wantai Bio-pharm, г. Пекин, Китай). Через 96 ч можно собирать среду и измерять HBsAg.

Хотя приведенное выше описание содержит сведения о принципах настоящего изобретения с примерами, приведенными для иллюстрации, следует понимать, что практическое применение изобретения охватывает обычные вариации, адаптации и/или модификации, входящие в объем приведенной ниже формулы изобретения и ее эквивалентов.

1. Соединение формулы (I)

в котором B₁ и B₂ независимо выбраны из группы, состоящей из b2, b5, b6, b7, b16, b17, b18, b21, b26, b27 и b28

R_1a независимо представляет собой водород, гидрокси, фтор или C_1-3 алкокси;

R_1b представляет собой водород;

R_1c представляет собой водород;

R_2a независимо представляет собой водород, гидрокси или фтор;

или R_2a представляет собой -O-, а R_2c представляет собой -CH₂- так, что R_2a, R_2c и атомы, к которым они присоединены, формируют 5-членное кольцо;

R_2b независимо представляет собой водород, фтор или гидрокси при условии, что, когда R_2b представляет собой фтор, R_2a представляет собой водород или фтор;

R_2c представляет собой водород;

X₁ и X₂ независимо представляют собой O или CH₂;

Y и Y₁ независимо представляют собой O или NH;

Z и Z₁ независимо представляют собой O или NH;

один из M и M₁ представляет собой , а другой из M и M₁ независимо представляет собой

так, что, когда M представляет собой , один из Y и Z представляет собой NH, а другой из Y и Z представляет собой O;

R₄ независимо представляет собой гидрокси, BH₃ или -SR₅, где R₅ представляет собой водород;

или его энантиомера, диастереомера или фармацевтически приемлемой солевой формы;

при условии, что соединение формулы (I) отличается от соединения, в котором B₂ представляет собой b6, X₂ представляет собой O, R_2a представляет собой OCH₃, R_2b представляет собой H, R_2c представляет собой H, Z-M-Y представляет собой OS(O)₂NH, Y₁-M₁-Z₁ представляет собой OP(O)(OH)O, B₁ представляет собой b7, X_l представляет собой O, R_1a представляет собой OCH₃, R_1b представляет собой H, а R_1c представляет собой H;

при условии, что соединение формулы (I) отличается от соединения, в котором B₂ представляет собой b6, X₂ представляет собой O, R_2a представляет собой F, R_2b представляет собой H, R_2c представляет собой H, Z-M-Y представляет собой (*R)OP(O)(SH)O, Y₁-M₁-Z₁ представляет собой NHS(O)₂O, B₁ представляет собой b21, X₁ представляет собой O, R_1a представляет собой OH, R_1b представляет собой H, а R_1c представляет собой H;

при условии, что соединение формулы (I) отличается от соединения, в котором B₂ представляет собой b30, X₂ представляет собой O, R_2a представляет собой H, R_2b представляет собой H, R_2c представляет собой H, Z-M-Y представляет собой OS(O)₂NH, Y₁-M₁-Z₁ представляет собой OP(O)(OH)O, B₁ представляет собой b7, X₁ представляет собой O, R_1a представляет собой OCH₃, R_1b представляет собой H, и R_1c представляет собой H.

2. Соединение по п. 1, в котором каждый из B₁ и B₂ представляет собой b6

3. Соединение по п. 1, в котором B₁ представляет собой b6, а B₂ представляет собой b7.

4. Соединение по п. 1, в котором Z-M-Y представляет собой OSO₂NH, а Y₁-M₁-Z₁ представляет собой OP(O)(OH)O или OP(O)(SH)O.

5. Соединение по п. 1, в котором Z-M-Y представляет собой OP(O)(OH)O или OP(O)(SH)O, а Y₁-M₁-Z₁ представляет собой NHSO₂O.

6. Соединение, выбранное из группы, состоящей из соединений 1-55

или их фармацевтически приемлемой солевой формы.

7. Соединение по п. 1, выбранное из группы, состоящей из

или их фармацевтически приемлемой солевой формы.

8. Фармацевтическая композиция для лечения заболевания, синдрома или состояния, модулируемого STING, содержащая терапевтически эффективное количество соединения по любому из пп. 1-7 и по меньшей мере один из фармацевтически приемлемого носителя, фармацевтически приемлемого эксципиента и фармацевтически приемлемого разбавителя.

9. Фармацевтическая композиция по п. 8, представленная в твердой дозированной форме для перорального введения.

10. Фармацевтическая композиция по п. 8, представляющая собой сироп, эликсир или суспензию.

11. Способ лечения заболевания, синдрома или состояния, модулируемого STING, включающий введение пациенту терапевтически эффективного количества соединения по любому из пп. 1-7.

12. Способ лечения заболевания, синдрома или состояния, где на указанное заболевание, синдром или состояние влияет агонизм в отношении STING, включающий введение пациенту терапевтически эффективного количества соединения по любому из пп. 1-7.

13. Способ по п. 12, в котором указанное заболевание, синдром или состояние представляет собой рак.

14. Способ по п. 13, в котором указанный рак выбран из группы, состоящей из меланомы, рака толстой кишки, рака молочной железы, рака предстательной железы, рака легкого и фибросаркомы.

15. Способ по п. 12, в котором указанное заболевание, синдром или состояние представляет собой вирусную инфекцию.

16. Способ по п. 15, в котором вирусная инфекция представляет собой гепатит B.

17. Способ по п. 12, дополнительно включающий введение пациенту, нуждающемуся в этом, онколитического вируса или противораковой вакцины.

18. Способ по п. 17, в котором противораковая вакцина независимо выбрана из группы, состоящей из антигенной вакцины, цельноклеточной вакцины, вакцины, активирующей дендритные клетки, ДНК-вакцины, вакцины на основе бациллы Кальметта - Герена (БЦЖ), Sipuleucel-T (Provenge), талимогена лагерпарепвека (T-Vec; Imlygic™), вакцины на основе онколитического вируса и вакцины на основе аденовируса.

19. Применение соединения по любому из пп. 1-7 для получения лекарственного средства для лечения заболевания, синдрома или состояния, модулируемого STING, выбранного из группы, состоящей из вирусной инфекции, меланомы, рака толстой кишки, рака молочной железы, рака предстательной железы, рака легкого и фибросаркомы у пациента.

20. Применение соединения по любому из пп. 1-7 в способе лечения заболевания, синдрома или состояния, модулируемого STING, выбранного из группы, состоящей из вирусной инфекции, меланомы, рака толстой кишки, рака молочной железы, рака предстательной железы, рака легкого и фибросаркомы у пациента.

21. Соединение, представляющее собой соединение 17a

используемое для получения определенных соединений формулы (I).

Изобретение относится к области биотехнологии. Описана группа изобретений, включающая твердую подложку, пригодную для химической лианеризации двухцепочечных полинуклеотидов, и способ линеаризации иммобилизованных двухцепочечных полинуклеотидов.

Кобитолимод для применения при лечении воспалительного заболевания кишечника // 2766356

Изобретение относится к области биотехнологии. Описана группа изобретений, включающая олигонуклеотид для применения для лечения язвенного колита у субъекта, представляющего собой человека, фармацевтическую композицию, содержащую вышеуказанный олигонуклеотид и способ лечения язвенного колита, включающий введение вышеуказанного олигонуклеотида или фармацевтической композиции.

Способы усиления биологической активности рекомбинантного аденоассоциированного вуруса, продуцируемого бакуловирусной системой // 2762948

Изобретение относится к биотехнологии. Описаны нуклеиновые кислоты, кодирующие капсидные белки VP1, VP2 и VP3 аденоассоциированного вируса (AAV), содержащие модифицированную последовательность Козак, выбранную из SEQ ID NO: 2-11, SEQ ID NO: 13-32 или SEQ ID NO: 34-45.

Молекула субстрата // 2755495

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к композициям и способам тестирования активности никующей эндонуклеазы и полимеразы в реакции, включающей использование субстрата в виде молекулы нуклеиновой кислоты, который детектирует активность никующей эндонуклеазы и полимеразы путем высвобождения детектируемого репортера (например, флуорофора).

Способы и композиции для лечения ассоциированного с serpinc1 расстройства // 2754188

Группа изобретений относится к области медицины, а именно к гематологии и наследственным заболеваниям, и предназначена для лечения субъектов, имеющих заболевания, ассоциированные с Serpinc1. Для предотвращения по меньшей мере одного симптома гемофилии у субъекта, у которого имеется гемофилия A или гемофилия B, подкожно вводят субъекту, нуждающемуся в этом, дозу от 50 мг до 90 мг молекулы двухцепочечной рибонуклеиновой кислоты (дцРНК) один раз в месяц.

Варианты ксиланазы и кодирующие их полинуклеотиды // 2752204

Изобретение относится к биотехнологии и представляет собой вариант ксиланазы, предусматривающий замену в одном или более положениях, соответствующих положениям 24, 26, 36, 37, 60, 71, 74, 75, 76, 124, 133, 155, 167, 208, 317 и 321 SEQ ID NO: 1, где указанная замена выбрана из группы, состоящей из H24W, A26E, R36L, R36T, E37T, R60N, K71T, K71I, V74L, V74I, K75N, K75L, H76L, I155M, N167E, V208L, S317D и G321A; где вариант ксиланазы обладает ксиланазной активностью, и где вариант ксиланазы характеризуется последовательностью, на по меньшей мере 90%, на по меньшей мере 95%, на по меньшей мере 96%, на по меньшей мере 97%, на по меньшей мере 98% или на по меньшей мере 99%, но на менее чем 100% идентичной SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5 или 6; и где указанный вариант имеет улучшенную термостабильность по сравнению с SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5 и SEQ ID NO: 6.

Модуляция экспрессии гентингтина // 2751847

Группа изобретений относится к биотехнологии и медицине. Предложены соединения и композиции для ослабления экспрессии мРНК и белка гентингтина у животного.

Праймеры для выявления видов monilinia laxa, monilinia fruticola, monilinia fructigena // 2751248

Изобретение относится к области биохимии, в частности к тест-системе для обнаружения ДНК фитопатогенных грибов рода Monilinia, содержащей олигонуклеотидные праймеры и зонд. Изобретение позволяет оперативно распознавать фитопатогены Monilinia laxa, Monilinia fruticola, Monilinia fructigena и может быть использовано для экспресс-диагностики и фитокарантинного контроля.

Композиции и способы для эффективного нацеливания трансгенов // 2751238

Изобретение относится к области биохимии, в частности к молекуле рекомбинантной ДНК для придания растению толерантности к гербициду дикамбе или ингибитору PPO. Также раскрыты ДНК-конструкция и клетка трансгенного растения, содержащие указанную молекулу ДНК; вектор, содержащий указанную ДНК-конструкцию; трансгенное растение, часть трансгенного растения, трансгенное семя, содержащие указанную молекулу ДНК.

Терапевтический агент для лечения рака крови // 2751233

Изобретение относится к области биотехнологии. Описана группа изобретений, включающая олигонуклеотид, содержащий модифицированную нуклеиновую кислоту, для профилактики, облегчения течения или лечения рака крови с образованием структуры G-квадруплекса, композицию для профилактики, облегчения течения или лечения рака крови, содержащую эффективное количество вышеуказанного олигонуклеотида, композицию для профилактики, облегчения течения или лечения рака крови, резистентного по меньшей мере к одному из цитарабина, децитабина и азацитидина, в качестве ингибиторов ДНК-синтетазы или ДНК-метилтрансферазы, композицию для профилактики, облегчения течения или лечения острого миелоидного лейкоза, имеющую эффекты индукции апоптоза на мононуклеарных клетках костного мозга, полученных от пациентов с рецидивирующим/трудно поддающимся лечению острым миелоидным лейкозом, и композицию для облегчения течения или лечения рака крови, имеющую более высокие эффекты индукции апоптоза в раковых клетках, чем в нормальных клетках.

Композиции и способы ингибирования вирусной полимеразы // 2654482

Изобретение относится к новым соединениям формулы (I), которые обладают свойствами ингибитора активности РНК полимеразы вируса и репликации вирусов РНК-содержащих вирусов, таких как ортомиксовируса, парамиксовируса, аренавируса, буньявируса, флавивируса, филовируса, тогавируса, пикорнавируса и коронавируса, аденовируса, риновируса, вируса гепатита А, вируса гепатита С, вируса полиомиелита, вируса кори, вируса Эбола, вируса Коксаки, вируса лихорадки Западного Нила, вируса оспы, вируса желтой лихорадки, вируса лихорадки Денге, вируса гриппа А, вируса гриппа В, вируса Ласса, вируса лимфоцитарного хориоменингита, вируса Хунин и др.