Режим дозирования соединения pth контролируемого высвобождения

Настоящее изобретение относится к способу лечения, контроля, замедления или профилактики состояния, которое можно лечить, контролировать, замедлять или предупреждать с помощью PTH, причем фармацевтическая композиция содержит по меньшей мере одно соединение PTH контролируемого высвобождения или его фармацевтически приемлемую соль, гидрат или сольват, для применения для лечения, контроля, замедления или профилактики состояния, которое можно лечить, контролировать, замедлять или предупреждать с помощью PTH, где указанная фармацевтическая композиция вводится не чаще, чем один раз каждые 24 часа с дозой соединения PTH контролируемого высвобождения, которая соответствует не более чем 70% молярной эквивалентной дозе PTH 1-84, вводимой каждые 24 часа, необходимой для поддержания уровня кальция в пределах нормальных уровней за указанный 24-часовой период у людей. 8 з.п. ф-лы, 20 пр.

 

Настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей по меньшей мере одного соединение PTH контролируемого высвобождения или его фармацевтически приемлемую соль, гидрат или сольват, для применения для лечения, контроля, замедления или профилактики состояния, которое можно лечить, контролировать, замедлять или предупреждать с помощью PTH, где указанная фармацевтическая композиция вводится не чаще, чем один раз каждые 24 часа с дозой соединения PTH контролируемого высвобождения, которая соответствует не более чем 70% молярной эквивалентной дозе PTH 1-84, вводимой каждые 24 часа, необходимой для поддержания уровня кальция в пределах нормальных уровней за указанный 24-часовой период у людей, и к способам лечения, контроля, замедления или профилактики указанных состояний.

Гипопаратиреоидизм является редким эндокринным нарушением метаболизма кальция и фосфата, которое чаще всего возникает в результате повреждения или удаления паращитовидной железы во время операции на щитовидной железе. Гипопаратиреоидизм отличается от эндокринных расстройств тем, что до недавнего времени его не лечили замещением отсутствующего гормона, паратиреоидного гормона или PTH. Традиционная терапия гипопаратиреоидизма включает большие дозы витамина D и пероральные добавки кальция, которые, хотя часто и эффективны, связаны с заметными колебаниями в крови Ca²⁺, приводящими к гиперкальциемии и гипокальциемии, избыточному выделению кальция с мочой, нефрокальцинозу и эктопической кальцификации, затрагивающими сосудистые, базальные ганглии и хрусталик глаз.

Кальций является наиболее распространенным минералом в организме человека, и его жесткая регуляция необходима для многих важных биологических функций, таких как, например, минерализация костей, сокращение мышц, нервная проводимость, выделение гормонов и свертывание крови. Особенно важно поддерживать концентрацию кальция настолько стабильной, насколько это возможно, из-за высокой чувствительности различных клеточных систем или органов, включая центральную нервную систему, мышцы и экзо/эндокринных желез, к небольшим изменениям в Ca²⁺. PTH является основным регулятором гомеостаза кальция.

Неадекватно низкий уровень PTH по отношению к концентрации Ca²⁺в сыворотке, характерный для гипопаратиреоидизма, приводит к уменьшенной почечной канальцевой реабсорбции Ca²⁺и одновременно к увеличенной почечной канальцевой реабсорбции фосфата. Таким образом, основными биохимическими нарушениями гипопаратиреоидизма являются гипокальциемия и гиперфосфатемия. Клинические признаки заболевания включают симптомы гипокальциемии, например, периоральное онемение, парестезия и мышечные спазмы запястья/стопы. Горловой спазм, тетания и судороги являются серьезными и потенциально опасными для жизни осложнениями. Гиперфосфатемия и повышенный кальций-фосфатный продукт способствуют эктопическому отложению нерастворимых комплексов фосфата кальция в мягких тканях, включая сосудистую сеть, мозг, почки и другие органы.

Стандартной терапией гипопаратиреоидизма является пероральное введение добавок кальция и витамина D. Целями терапии являются: а) улучшение симптомов гипокальциемии; b) поддержание уровня кальция в сыворотке крови натощак в пределах или немного ниже нормы; с) поддержание уровня фосфора в сыворотке натощак в пределах нормального диапазона или только слегка повышенным; d) избегать или минимизировать гиперкальциурию; е) поддерживать содержание фосфатно-кальциевого продукта на уровне значительно ниже верхнего предела нормы; f) избегать эктопической кальцификации почек (камни и нефрокальциноз) и других мягких тканей.

Несколько проблем возникает при длительном применении кальция и активного витамина D в больших дозах, особенно в отношении гиперкальциурии, камней в почках, нефрокальциноза и эктопической кальцификации мягких тканей. Кроме того, традиционная терапия кальцием и активным витамином D не уменьшает жалоб на качество жизни и не устраняет аномалии ремоделирования костной ткани, характерные для этого заболевания. Кратко, существует высокая потребность в улучшенных методах лечения гипопаратиреоидизма.

В 2015, Natpara, PTH(1-84) был одобрен для подкожных инъекций один раз в день ежедневно в качестве дополнения к витамину D и кальцию у пациентов с гипопаратиреоидизмом. Natpara, PTH (1-84), был одобрен для контроля гипокальциемии на основе основного исследования, продемонстрировавшего, что 42 процента участников, принимавших PTH (1-84), достигли нормальных уровней кальция в крови при сниженных дозах добавок кальция и активных форм витамина D, по сравнению с 3 процентами участников, получавших плацебо. После периода времени, в течение которого после инъекции контролировался уровень сывороточного кальция, у 71 процента пациентов, получавших PTH (1–84), развивалась гиперкальциемия при одном или более измерениях в течение 24-часового периода. PTH (1–84) снижал экскрецию кальция с мочой через 2–8 часов после инъекции, но в течение 24-часового периода экскреция кальция с мочой не изменялась. Точно так же экскреция фосфата с мочой увеличивалась только в течение первых 8 часов после инъекции PTH (1–84).

Хотя это представляет собой важный прогресс в лечении этого заболевания, Natpara не продемонстрировал способность снижать частоту случаев гиперкальциемии (повышенный уровень кальция в сыворотке крови), гипокальциемии (низкий уровень кальция в сыворотке крови) или гиперкальциурии (повышенный уровень кальция в моче) по сравнению с традиционной терапией у подлежащих лечению пациентов.

Таким образом, существует высокая потребность в улучшенных методах лечения гипопаратиреоидизма на основе PTH.

PTH (1-34), или терипаратид, был одобрен FDA в 2002 году для лечения остеопороза. Несмотря на то, что он не был одобрен для этого показания, PTH (1-34) исторически использовался для лечения гипопаратиреоидизма у пациентов, получавших инъекции дважды или трижды в день. Чтобы способствовать более физиологическим уровням PTH, были проведены клинические исследования с PTH (1–34), вводимым с помощью насосной системы упаковки, по сравнению с инъекциями дважды в день. Через 6 месяцев доставка с помощью насосной системы упаковки обеспечила нормальный, стабильный уровень кальция с минимальными колебаниями и предотвратила повышение уровня кальция в сыворотке и моче, которое проявляется вскоре после инъекции PTH. Заметное снижение экскреции кальция с мочой, когда PTH (1–34) вводится с помощью насосной системы упаковки, может указывать на то, что PTH должен постоянно подвергаться почечным канальцам для эффекта хранения кальция в почках. Доставка с помощью насосной системы упаковки PTH (1–34) позволила одновременно нормализовать маркеры костного ремоделирования, сывороточный кальций и экскрецию кальция с мочой. Эти результаты были достигнуты при на 65 процентов более низкой суточной дозе PTH (1–34) и сниженной потребности в добавках магния по сравнению с режимом инъекции PTH (1–34) дважды в день.

Однако непрерывная помповая терапия неудобна и сложна для пациентов, и задачей настоящего изобретения является создание более удобного терапевтического варианта обеспечения непрерывного воздействия PTH.

Долгосрочное ежедневное введение PTH связано с прогрессирующей потерей кортикального слоя кости из-за усиления метаболизма костной ткани. В течение 6 лет наблюдения за пациентами, получавшими PTH (1-84) (Rubin, JCEM 2016), маркеры костного ремоделирования оставались более высокими, чем значения до лечения, достигая пика в первые годы после начала PTH (1–84) и снижаясь после этого, но оставаясь значительно выше, чем базовые значения к 6 году. Минеральная плотность костной ткани (BMD) согласно двойной рентгеновской абсорбциометрии (DXA) соответствовала известным сайт-специфическим эффектам PTH, а именно увеличению поясничного отдела позвоночника в дистальном радиусе 1/3. Наблюдаемое уменьшение в радиусе 1/3 согласуется с известными эффектами периодического PTH для увеличения кортикальной пористости и внутрикостной резорбции.

Задача настоящего изобретения состояла в обеспечении способа периодческого введения PTH с улучшенным контролем кальция в сыворотке и моче, сывороточного фосфора и более низким повышением маркеров костного ремоделирования, чем для применяемых в настоящее время методы лечения PTH. Предпочтительно «периодически» означает с ежедневными интервалами или, альтернативно или более предпочтительно, с недельными интервалами.

В программе доклинического развития как Forteo, PTH (1-34), так и Natpara, PTH (1-84), дозозависимое увеличение частоты остеосаркомы наблюдалось у крыс, получавших ежедневные инъекции соединения PTH. В исследовании Natpara дозирование крыс с высокой дозой было прекращено из-за чрезмерной смертности в этой группе, главным образом от метастатической остеосаркомы. Предполагают, что это связано с чувствительностью крыс к анаболическим эффектам прерывающегося PTH. Напротив, при длительном воздействии PTH, как известно, отсутствует значительная костная анаболическая активность. Таким образом, задача данного изобретения состоит в обеспечении периодической заместительной терапии PTH, которая обеспечивает инфузия-подобный профиль PTH, что приводит к улучшенному контролю симптомов при более низкой вводимой дозе. Предпочтительно «периодически» означает с ежедневными интервалами или, альтернативно или более предпочтительно, с недельными интервалами.

Таким образом, существует потребность в более удобном и безопасном лечении гипопаратиреоидизма с уменьшенными побочными эффектами.

Поэтому задача согласно настоящему изобретению состоит в по меньшей мере частичном преодолении описанных выше недостатков.

Эта задача решается с помощью фармацевтической композиции, содержащей по меньшей мере одно соединение PTH контролируемого высвобождения или его фармацевтически приемлемую соль, гидрат или сольват, для применения для лечения, контроля, замедления или профилактики состояния, которое можно лечить, контролировать, замедлять или предупреждать с помощью PTH, где указанная фармацевтическая композиция вводится не чаще, чем один раз каждые 24 часа с дозой соединения PTH контролируемого высвобождения, которая соответствует не более чем 70% молярной эквивалентной дозе PTH 1-84, вводимой каждые 24 часа, необходимой для поддержания уровня кальция в пределах нормальных уровней за указанный 24-часовой период у людей.

Неожиданно было обнаружено, что такое соединение PTH контролируемого высвобождения обладает более высокой эффективностью, чем PTH 1-84, поэтому необходимо вводить меньшее количество молярных эквивалентов за один прием пациенту для достижения полезных уровней кальция в сыворотке крови за по меньшей мере 24 часа, что повышает эффективность и уменьшает риски побочных эффектов.

Понятно, что PTH 1-84 представляет собой полипептид с последовательностью SEQ ID NO:1.

В контексте настоящего изобретения применяемые термины имеют следующие значения.

Как применяется в настоящей заявке, термины “не более часто, чем один раз каждые 24 часа” и “по меньшей мере один раз каждые 24 часа” используются как синонимы и означают, что время между двумя последовательными введениями составляет 24 часа или более, что означает, например, что между двумя последовательными введениями может быть, например, 24 часа, 48 часов, 72 часа, 96 часов, 120 часов, 144 часа или одна неделя.

Как применяется в настоящей заявке, термины “в пределах нормального уровня” и “в пределах нормального диапазона” в отношении уровней кальция в сыворотке, относятся к уровню кальция, обычно обнаруживаемому у субъекта данного вида, пола и возраста, представленному в виде диапазона, определяемого нижним пределом нормы и верхним пределом нормы. У людей нормальный уровень предпочтительно соответствует уровню кальция в сыворотке выше 8,5 мг/дл (с поправкой на альбумин). У людей верхний предел нормы ниже 10,5 мг/дл.

Как применяется в настоящей заявке, термин “сывороточный кальций выше 8.5 мг/дл” относится к альбумин-отрегулированным концентрациям кальция.

Как применяется в настоящей заявке, термин “альбумин-отрегулированные” в отношении уровней кальция означает, что измеренный уровень кальция в сыворотке скорректирован для кальция, связанного с альбумином, согласно следующей формуле:

альбумин-отрегулированный сывороточный кальций (мг/дл)=измеренный общий Ca (мг/дл)+0.8 (4.0 - сывороточный альбумин [г/дл])

Как применяется в настоящей заявке, термин “неотрегулированные” в отношении уровней кальция означает, что измеренная общая концентрация кальция (мг/дл) не отрегулирована в отношении альбумин-связывания кальция.

Термин “молярная эквивалентная доза” относится к дозе, при которой соединение PTH контролируемого высвобождения содержит такое же число PTH молекул или PTH составляющих, сколько конкретная доза PTH 1-84 содержит молекул PTH 1-84. Например, если соединение PTH контролируемого высвобождения содержит одну PTH молекулу или PTH составляющую на соединение PTH контролируемого высвобождения, молярная эквивалентная доза составляет 1 соединение PTH контролируемого высвобождения на каждую 1 молекулу PTH 1-84. Если соединение PTH контролируемого высвобождения содержит две PTH молекулы или составляющие PTH на соединение PTH контролируемого высвобождения, молярная эквивалентная доза составляет 1 соединение PTH контролируемого высвобождения на каждые 2 молекулы PTH 1-84.

Как применяется в настоящей заявке, термин “PTH соединение контролируемого высвобождения” относится к любому соединению, конъюгату, кристаллу или смеси, которая содержит по меньшей мере одну PTH молекулу или PTH составляющую, и из которой по меньшей мере одна PTH молекула или PTH составляющая высвобождается с периодом полувысвобождения по меньшей мере 12 часов.

Как применяется в настоящей заявке, термины “период полувысвобождения” и “период полувыведения” относятся ко времени, требуемому в физиологических условиях (то есть, в водном буфере, pH 7.4, 37°C), до тех пор, пока половина всего PTH или составляющих PTH, соответственно, содержащихся в соединении PTH контролируемого высвобождения, не будет высвобождена из указанного соединения PTH контролируемого высвобождения.

Как применяется в настоящей заявке, термин “PTH” относится ко всем полипептидам PTH, предпочтительно видов млекопитающих, более предпочтительно человека и видов млекопитающих, более предпочтительно человека и видов мышиные, а также их вариантам, аналогам, ортологам, гомологам и производным и фрагментам, которые характеризуются увеличением сывороточного кальция и экскреции фосфора почками, и уменьшением сывороточного фосфора и экскреции кальция почками. Термин “PTH” также относится ко всем PTH-родственным полипептидам (PTHrP), как например полипептид согласно SEQ ID NO:121, который связывается с и активирует общий рецептор PTH/PTHrP1. Предпочтительно, термин “PTH” относится к полипептиду PTH согласно SEQ ID NO:51 а также к его вариантам, гомологам и производным, проявляющим по существу такую же биологическую активность, т.е. увеличивающим сывороточный кальций и экскрецию фосфора почками, и уменьшающим сывороточный фосфор и экскрецию кальция почками.

Предпочтительно, термин “PTH” относится к следующим полипептидным последовательностям:

SEQ ID NO:1 (PTH 1-84)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAPLAPRDAGSQRPRKKEDNVLVESHEKSLGEADKADVNVLTKAKSQ

SEQ ID NO:2 (PTH 1-83)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAPLAPRDAGSQRPRKKEDNVLVESHEKSLGEADKADVNVLTKAKS

SEQ ID NO:3 (PTH 1-82)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAPLAPRDAGSQRPRKKEDNVLVESHEKSLGEADKADVNVLTKAK

SEQ ID NO:4 (PTH 1-81)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAPLAPRDAGSQRPRKKEDNVLVESHEKSLGEADKADVNVLTKA

SEQ ID NO:5 (PTH 1-80)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAPLAPRDAGSQRPRKKEDNVLVESHEKSLGEADKADVNVLTK

SEQ ID NO:6 (PTH 1-79)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAPLAPRDAGSQRPRKKEDNVLVESHEKSLGEADKADVNVLT

SEQ ID NO:7 (PTH 1-78)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAPLAPRDAGSQRPRKKEDNVLVESHEKSLGEADKADVNVL

SEQ ID NO:8 (PTH 1-77)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAPLAPRDAGSQRPRKKEDNVLVESHEKSLGEADKADVNV

SEQ ID NO:9 (PTH 1-76)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAPLAPRDAGSQRPRKKEDNVLVESHEKSLGEADKADVN

SEQ ID NO:10 (PTH 1-75)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAPLAPRDAGSQRPRKKEDNVLVESHEKSLGEADKADV

SEQ ID NO:11 (PTH 1-74)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAPLAPRDAGSQRPRKKEDNVLVESHEKSLGEADKAD

SEQ ID NO:12 (PTH 1-73)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAPLAPRDAGSQRPRKKEDNVLVESHEKSLGEADKA

SEQ ID NO:13 (PTH 1-72)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAPLAPRDAGSQRPRKKEDNVLVESHEKSLGEADK

SEQ ID NO:14 (PTH 1-71)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAPLAPRDAGSQRPRKKEDNVLVESHEKSLGEAD

SEQ ID NO:15 (PTH 1-70)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAPLAPRDAGSQRPRKKEDNVLVESHEKSLGEA

SEQ ID NO:16 (PTH 1-69)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAPLAPRDAGSQRPRKKEDNVLVESHEKSLGE

SEQ ID NO:17 (PTH 1-68)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAPLAPRDAGSQRPRKKEDNVLVESHEKSLG

SEQ ID NO:18 (PTH 1-67)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAPLAPRDAGSQRPRKKEDNVLVESHEKSL

SEQ ID NO:19 (PTH 1-66)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAPLAPRDAGSQRPRKKEDNVLVESHEKS

SEQ ID NO:20 (PTH 1-65)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAPLAPRDAGSQRPRKKEDNVLVESHEK

SEQ ID NO:21 (PTH 1-64)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAPLAPRDAGSQRPRKKEDNVLVESHE

SEQ ID NO:22 (PTH 1-63)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAPLAPRDAGSQRPRKKEDNVLVESH

SEQ ID NO:23 (PTH 1-62)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAPLAPRDAGSQRPRKKEDNVLVES

SEQ ID NO:24 (PTH 1-61)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAPLAPRDAGSQRPRKKEDNVLVE

SEQ ID NO:25 (PTH 1-60)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAPLAPRDAGSQRPRKKEDNVLV

SEQ ID NO:26 (PTH 1-59)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAPLAPRDAGSQRPRKKEDNVL

SEQ ID NO:27 (PTH 1-58)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAPLAPRDAGSQRPRKKEDNV

SEQ ID NO:28 (PTH 1-57)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAPLAPRDAGSQRPRKKEDN

SEQ ID NO:29 (PTH 1-56)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAPLAPRDAGSQRPRKKED

SEQ ID NO:30 (PTH 1-55)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAPLAPRDAGSQRPRKKE

SEQ ID NO:31 (PTH 1-54)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAPLAPRDAGSQRPRKK

SEQ ID NO:32 (PTH 1-53)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAPLAPRDAGSQRPRK

SEQ ID NO:33 (PTH 1-52)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAPLAPRDAGSQRPR

SEQ ID NO:34 (PTH 1-51)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAPLAPRDAGSQRP

SEQ ID NO:35 (PTH 1-50)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAPLAPRDAGSQR

SEQ ID NO:36 (PTH 1-49)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAPLAPRDAGSQ

SEQ ID NO:37 (PTH 1-48)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAPLAPRDAGS

SEQ ID NO:38 (PTH 1-47)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAPLAPRDAG

SEQ ID NO:39 (PTH 1-46)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAPLAPRDA

SEQ ID NO:40 (PTH 1-45)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAPLAPRD

SEQ ID NO:41 (PTH 1-44)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAPLAPR

SEQ ID NO:42 (PTH 1-43)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAPLAP

SEQ ID NO:43 (PTH 1-42)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAPLA

SEQ ID NO:44 (PTH 1-41)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAPL

SEQ ID NO:45 (PTH 1-40)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAP

SEQ ID NO:46 (PTH 1-39)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGA

SEQ ID NO:47 (PTH 1-38)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALG

SEQ ID NO:48 (PTH 1-37)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVAL

SEQ ID NO:49 (PTH 1-36)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVA

SEQ ID NO:50 (PTH 1-35)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFV

SEQ ID NO:51 (PTH 1-34)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNF

SEQ ID NO:52 (PTH 1-33)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHN

SEQ ID NO:53 (PTH 1-32)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVH

SEQ ID NO:54 (PTH 1-31)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDV

SEQ ID NO:55 (PTH 1-30)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQD

SEQ ID NO:56 (PTH 1-29)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQ

SEQ ID NO:57 (PTH 1-28)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKL

SEQ ID NO:58 (PTH 1-27)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKK

SEQ ID NO:59 (PTH 1-26)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRK

SEQ ID NO:60 (PTH 1-25)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLR

SEQ ID NO:61 (амидированный PTH 1-84)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAPLAPRDAGSQRPRKKEDNVLVESHEKSLGEADKADVNVLTKAKSQ; где C-конец амидирован

SEQ ID NO:62 (амидированный PTH 1-83)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAPLAPRDAGSQRPRKKEDNVLVESHEKSLGEADKADVNVLTKAKS; где C-конец амидирован

SEQ ID NO:63 (амидированный PTH 1-82)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAPLAPRDAGSQRPRKKEDNVLVESHEKSLGEADKADVNVLTKAK; где C-конец амидирован

SEQ ID NO:64 (амидированный PTH 1-81)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAPLAPRDAGSQRPRKKEDNVLVESHEKSLGEADKADVNVLTKA; где C-конец амидирован

SEQ ID NO:65 (амидированный PTH 1-80)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAPLAPRDAGSQRPRKKEDNVLVESHEKSLGEADKADVNVLTK; где C-конец амидирован

SEQ ID NO:66 (амидированный PTH 1-79)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAPLAPRDAGSQRPRKKEDNVLVESHEKSLGEADKADVNVLT; где C-конец амидирован

SEQ ID NO:67 (амидированный PTH 1-78)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAPLAPRDAGSQRPRKKEDNVLVESHEKSLGEADKADVNVL; где C-конец амидирован

SEQ ID NO:68 (амидированный PTH 1-77)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAPLAPRDAGSQRPRKKEDNVLVESHEKSLGEADKADVNV; где C-конец амидирован

SEQ ID NO:69 (амидированный PTH 1-76)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAPLAPRDAGSQRPRKKEDNVLVESHEKSLGEADKADVN; где C-конец амидирован

SEQ ID NO:70 (амидированный PTH 1-75)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAPLAPRDAGSQRPRKKEDNVLVESHEKSLGEADKADV; где C-конец амидирован

SEQ ID NO:71 (амидированный PTH 1-74)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAPLAPRDAGSQRPRKKEDNVLVESHEKSLGEADKAD; где C-конец амидирован

SEQ ID NO:72 (амидированный PTH 1-73)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAPLAPRDAGSQRPRKKEDNVLVESHEKSLGEADKA; где C-конец амидирован

SEQ ID NO:73 (амидированный PTH 1-72)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAPLAPRDAGSQRPRKKEDNVLVESHEKSLGEADK; где C-конец амидирован

SEQ ID NO:74 (амидированный PTH 1-71)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAPLAPRDAGSQRPRKKEDNVLVESHEKSLGEAD; где C-конец амидирован

SEQ ID NO:75 (амидированный PTH 1-70)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAPLAPRDAGSQRPRKKEDNVLVESHEKSLGEA; где C-конец амидирован

SEQ ID NO:76 (амидированный PTH 1-69)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAPLAPRDAGSQRPRKKEDNVLVESHEKSLGE; где C-конец амидирован

SEQ ID NO:77 (амидированный PTH 1-68)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAPLAPRDAGSQRPRKKEDNVLVESHEKSLG; где C-конец амидирован

SEQ ID NO:78 (амидированный PTH 1-67)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAPLAPRDAGSQRPRKKEDNVLVESHEKSL; где C-конец амидирован

SEQ ID NO:79 (амидированный PTH 1-66)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAPLAPRDAGSQRPRKKEDNVLVESHEKS; где C-конец амидирован

SEQ ID NO:80 (амидированный PTH 1-65)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAPLAPRDAGSQRPRKKEDNVLVESHEK; где C-конец амидирован

SEQ ID NO:81 (амидированный PTH 1-64)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAPLAPRDAGSQRPRKKEDNVLVESHE; где C-конец амидирован

SEQ ID NO:82 (амидированный PTH 1-63)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAPLAPRDAGSQRPRKKEDNVLVESH; где C-конец амидирован

SEQ ID NO:83 (амидированный PTH 1-62)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAPLAPRDAGSQRPRKKEDNVLVES; где C-конец амидирован

SEQ ID NO:84 (амидированный PTH 1-61)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAPLAPRDAGSQRPRKKEDNVLVE; где C-конец амидирован

SEQ ID NO:85 (амидированный PTH 1-60)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAPLAPRDAGSQRPRKKEDNVLV; где C-конец амидирован

SEQ ID NO:86 (амидированный PTH 1-59)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAPLAPRDAGSQRPRKKEDNVL; где C-конец амидирован

SEQ ID NO:87 (амидированный PTH 1-58)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAPLAPRDAGSQRPRKKEDNV; где C-конец амидирован

SEQ ID NO:88 (амидированный PTH 1-57)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAPLAPRDAGSQRPRKKEDN; где C-конец амидирован

SEQ ID NO:89 (амидированный PTH 1-56)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAPLAPRDAGSQRPRKKED; где C-конец амидирован

SEQ ID NO:90 (амидированный PTH 1-55)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAPLAPRDAGSQRPRKKE; где C-конец амидирован

SEQ ID NO:91 (амидированный PTH 1-54)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAPLAPRDAGSQRPRKK; где C-конец амидирован

SEQ ID NO:92 (амидированный PTH 1-53)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAPLAPRDAGSQRPRK; где C-конец амидирован

SEQ ID NO:93 (амидированный PTH 1-52)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAPLAPRDAGSQRPR; где C-конец амидирован

SEQ ID NO:94 (амидированный PTH 1-51)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAPLAPRDAGSQRP; где C-конец амидирован

SEQ ID NO:95 (амидированный PTH 1-50)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAPLAPRDAGSQR; где C-конец амидирован

SEQ ID NO:96 (амидированный PTH 1-49)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAPLAPRDAGSQ; где C-конец амидирован

SEQ ID NO:97 (амидированный PTH 1-48)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAPLAPRDAGS; где C-конец амидирован

SEQ ID NO:98 (амидированный PTH 1-47)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAPLAPRDAG; где C-конец амидирован

SEQ ID NO:99 (амидированный PTH 1-46)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAPLAPRDA; где C-конец амидирован

SEQ ID NO:100 (амидированный PTH 1-45)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAPLAPRD; где C-конец амидирован

SEQ ID NO:101 (амидированный PTH 1-44)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAPLAPR; где C-конец амидирован

SEQ ID NO:102 (амидированный PTH 1-43)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAPLAP; где C-конец амидирован

SEQ ID NO:103 (амидированный PTH 1-42)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAPLA; где C-конец амидирован

SEQ ID NO:104 (амидированный PTH 1-41)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAPL; где C-конец амидирован

SEQ ID NO:105 (амидированный PTH 1-40)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGAP; где C-конец амидирован

SEQ ID NO:106 (амидированный PTH 1-39)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALGA; где C-конец амидирован

SEQ ID NO:107 (амидированный PTH 1-38)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVALG; где C-конец амидирован

SEQ ID NO:108 (амидированный PTH 1-37)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVAL; где C-конец амидирован

SEQ ID NO:109 (амидированный PTH 1-36)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVA; где C-конец амидирован

SEQ ID NO:110 (амидированный PTH 1-35)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNFV; где C-конец амидирован

SEQ ID NO:111 (амидированный PTH 1-34)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNF; где C-конец амидирован

SEQ ID NO:112 (амидированный PTH 1-33)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHN; где C-конец амидирован

SEQ ID NO:113 (амидированный PTH 1-32)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVH; где C-конец амидирован

SEQ ID NO:114 (амидированный PTH 1-31)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDV; где C-конец амидирован

SEQ ID NO:115 (амидированный PTH 1-30)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQD; где C-конец амидирован

SEQ ID NO:116 (амидированный PTH 1-29)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQ; где C-конец амидирован

SEQ ID NO:117 (амидированный PTH 1-28)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKL; где C-конец амидирован

SEQ ID NO:118 (амидированный PTH 1-27)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKK; где C-конец амидирован

SEQ ID NO:119 (амидированный PTH 1-26)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRK; где C-конец амидирован

SEQ ID NO:120 (амидированный PTH 1-25)

SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLR; где C-конец амидирован

SEQ ID NO:121 (PTHrP)

AVSEHQLLHDKGKSIQDLRRRFFLHHLIAEIHTAEIRATSEVSPNSKPSPNTKNHPVRFGSDDEGRYLTQETNKVETYKEQPLKTPGKKKKGKPGKRKEQEKKKRRTRSAWLDSGVTGSGLEGDHLSDTSTTSLELDSRRH

Более предпочтительно, термин “PTH” относится к последовательности SEQ ID:NO 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 107, 108, 109, 110, 111, 112, 113, 114 и 115. Даже более предпочтительно, термин “PTH” относится к последовательности SEQ ID:NO 50, 51, 52, 110, 111 и 112. В особенно предпочтительном варианте выполнения настоящего изобретения термин “PTH” относится к последовательности SEQ ID NO:51.

Как применяется в настоящей заявке, термин “вариант полипептида PTH ” относится к полипептиду из того же самого вида, который отличается от ссылочного полипептида PTH или PTHrP. Предпочтительно, таким ссылочным полипептидом является PTH полипептидная последовательность SEQ ID NO:51. В общем, различия ограничены таким образом, что аминокислотные последовательности ссылочного полипептида и варианта в общем очень подобны и, во многих областях, идентичны. Предпочтительно, варианты полипептида PTH на по меньшей мере 70%, 80%, 90%, или 95% идентичны ссылочному полипептиду PTH или PTHrP, предпочтительно полипепиду PTH с SEQ ID NO:51. Под полипептидном, имеющим аминокислотную последовательность на по меньшей мере, например, 95% “идентичную” рассматриваемой аминокислотной последовательности понимается, что аминокислотная последовательность данного полипептида идентична рассматриваемой последовательности, за исключением того, что данная полипептидная последовательность может включать вплоть до пяти аминокислотных изменений на каждые 100 аминокислот рассматриваемой аминокислотной последовательности. Эти замены в ссылочной последовательности могут происходить при амино (N-концевое) или карбокси концевых (C-концевое) положениях ссылочной аминокислотной последовательности или в любом мести между этими концевыми положениями, распределяясь либо по отдельности среди остатков в ссылочной последовательности, либо в виде одной или более соприкасающихся групп в ссылочной последовательности. Рассматриваемая последовательность может быть либо полностью аминокислотной последовательностью ссылочной последовательности, либо любым фрагментом, уточненным как описано в настоящей заявке. Предпочтительно, рассматриваемой последовательностью является последовательность SEQ ID NO:51.

Такие варианты полипептида PTH могут быть вариантами, встречающимися в природе, как например встречающиеся в природе аллельные варианты, кодируемые одной из нескольких альтернативных форм PTH или PTHrP, занимающих данный локус на хромосоме или организме, или изоформы, кодируемые встречающимися в природе вариантами сплайсинга, происходящими из одного первичного транскрипта. Альтернативно вариант полипептида PTH может быть вариантом, который, как известно, не встречается в природе, и который может быть получен методиками мутагенеза, известными в данной области техники.

В данной области известно, что одна или более аминокислот могут быть удалены с N-конца или С-конца биоактивного полипептида без существенной потери биологической функции. Такие N- и/или С-концевые делеции также охватываются термином вариант полипептида PTH.

Специалистам в данной области техники также известно, что некоторые аминокислотные последовательности полипептидов PTH или PTHrP могут быть изменены без значительного влияния структуры или функции полипептида. Такие мутанты включают делеции, вставки, инверсии, повторы и замены, выбранные в соответствии с общими правилами, известными в данной области техники, чтобы иметь небольшой эффект на активность. Например, указания относительно того, как сделать фенотипически молчащие аминокислота замены, приведены в Bowie et al. (1990), Science 247:1306-1310, который полностью включен в настоящее описание посредством ссылки, где авторы указывают, что существуют два основных подхода к изучению толерантности аминокислотной последовательности к изменению.

Термин полипептид PTH также охватывает все полипептиды PTH и PTHrP, кодируемые аналогами, ортологами и/или видовыми гомологами PTH и PTHrP. Специалистам в данной области техники также понятно, что аналоги PTHrP и PTHrP связываются с активированием общего рецептора PTH/PTHrP1, поэтому термин PTH полипептид также охватывает все аналоги PTHrP. Как применяется в настоящей заявке, термин “PTH аналог” относится к PTH и PTHrP o различных и не связанных между собой организмов, которые выполняют одни и те же функции в каждом организме, но которые не происходят из родовой структуры, которую имели предки организмов. Вместо этого аналогичные PTH и PTHrP возникали отдельно, а затем эволюционировали для выполнения одних и тех же или подобных функций. Другими словами, аналогичные полипептиды PTH и PTHrP представляют собой полипептиды с совершенно различными аминокислотными последовательностями, но которые имеют одну и ту же биологическую активность, а именно увеличение сывороточного кальция и экскреции фосфора почками, и уменьшение сывороточного фосфора и экскреции кальция почками.

Как применяется в настоящей заявке термин “отртолог PTH” относится к PTH и PTHrP двух различных видов, последовательности которых связаны друг с другом через общий гомологичный PTH в родоначальном виде, но которые в ходе эволюции стали отличными друг от друга.

Как применяется в настоящей заявке, термин “гомолог PTH” относится к PTH и PTHrP различных организмов, которые осуществляют одну и ту же функцию в каждом организме и которые происходят из родоначальной структуры, которую в общем имели предки организмов. Другими словами, гомологичные PTH полипептиды представляют собой полипептиды с совершенно подобными аминокислотными последовательностями, которые имеют одну и ту же биологическую активность, а именно увеличение сывороточного кальция и экскреции фосфора почками, и уменьшение сывороточного фосфора и экскреции кальция почками. Предпочтительно, гомологи полипептида PTH могут определяться как полипептиды, имеющие идентичность по меньшей мере 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% или 95% со ссылочным полипептидом PTH или PTHrP, предпочтительно PTH полипептидом с SEQ ID NO:51.

Таким образом, полипептидом PTH в соответствии с настоящим изобретением может быть, например: (i) полипептид, в котором по меньшей мере один из аминокислотных остатков имеет в качестве заместителя консервативный или неконсервированный аминокислотный остаток, предпочтительно консервативный аминокислотный остаток, и такой замещенный аминокислотный остаток может или не может быть кодирован генетическим кодом; и/или (ii) полипептид, в котором по меньшей мере один из аминокислотных остатков включает группу заместителя; и/или (iii) полипептид, где полипептид PTH слит с другим соединением, как например соединение для увеличения периода полувысвобождения полипептида (например, полиэтилэтенгликоль); и/или (iv) полипептид, в котором дополнительные аминокислоты слиты с полипептидом PTH, как например, полипептидная или лидерная или секреторная последовательность области слияния IgG Fc или последовательность, которая используется для очистки вышеуказанной формы полипептида, или последовательность белка-предшественника.

Как применяется в настоящей заявке, термин “фрагмент полипептида PTH” относится к любому пептиду, содержащему последовательный промежуток части аминокислотной последовательности PTH или PTHrP полипептида, предпочтительно полипептида последовательности SEQ ID NO:51.

Более конкретно, фрагмент полипептида PTH содержит по меньшей мере 6, как например по меньшей мере 8, по меньшей мере 10 или по меньшей мере 17 последовательных аминокислот PTH или PTHrP полипептида, более предпочтительно полипептида последовательности SEQ ID NO:51. Фрагмент полипептида PTH может быть дополнительно описан как подвид PTH или PTHrP полипептидов, содержащих по меньшей мере 6 аминокислот, где “по меньшей мере 6” определяется как целое число между 6 и целым числом, обозначающим C-концевую аминокислоту PTH или PTHrP полипептида, предпочтительно полипептида последовательности SEQ ID No:51. Также включены виды фрагментов полипептида PTH или PTHrP из по меньшей мере 6 аминокислот в длину, как описано выше, которые дополнительно уточнены с точки зрения их N-концевых и C- концевых положений. Также термином “фрагмент полипептида PTH” охватываются в качестве отдельных видов все фрагменты полипептида PTH или PTHrP из по меньшей мере 6 аминокислот в длину, как описано выше, которые могут быть в частности уточнены их N-концевым и C-концевым положением. То есть, каждая комбинация N-концевого и C-концевого положения, которые составляющая из по меньшей мере 6 последовательных аминокислотных остатков в длину может занимать, на любой данной аминокислотной последовательности PTH или PTHrP полипептида, предпочтительно PTH полипептида последовательности SEQ ID:NO51, включена в настоящее изобретение.

Термин “PTH” также включает поли(аминокислотные) конъюгаты, которые имеют последовательность, как описано выше, но имеющие основную цепь, содержит как амидные, так и неамидные связи, как например сложноэфирные связи, как например депсипептиды. Депсипептиды представляют собой цепи аминокислотных остатков, в которых основная цепь содержит как амидные (пептидные), так и сложноэфирные связи. Соответственно, термин “боковая цепь”, как применяется в настоящей заявке, относится либо к составляющей, присоединенной к альфа-атому углерода аминокислотной составляющей, если аминокислотная составляющая соединена через аминные связи, как например в полипептидах, либо к любой составляющей, содержащей атом углерода, присоединенной к основной цепи поли(аминокислотного) конъюгата, как например в случае депсипептидов. Предпочтительно, термин “PTH” относится к полипептидам, имеющим основную цепь, образованную через амидные (пептидные) связи.

Поскольку термин PTH включает вышеописанные варианты, аналоги, ортологи, гомологи, производные и фрагменты PTH и PTHrP, все ссылки на конкретные положения в ссылочной последовательности также включают эквивалентные положения в вариантах, аналогах, ортологах, гомологах, производных и фрагментах PTH или PTHrP составляющей, даже если специально не указано.

Как применяется в настоящей заявке, термин “мицелла” означает агрегат амфифильных молекул, диспергированных в жидком коллоиде. В водном растворе типичная мицелла образует агрегат с гидрофильной частью молекул поверхностно-активного вещества, обращенной к окружающему растворителю, и гидрофобной частью молекулы поверхностно-активного вещества, обращенной внутрь, также называемый «мицеллой нормальной фазы». «Мицеллы Invers» имеют гидрофильную часть, обращенную внутрь, и гидрофобную часть, обращенную к окружающему растворителю.

Как применяется в настоящей заявке, термин “липосома” относится к везикуле, предпочтительно сферической везикуле, имеющей по меньшей мере один липидный бислой. Предпочтительно, липосомы содержат фосфолипиды, даже более предпочтительно фосфатидилхолин. Термин «липосома» относится к различным структурам и размерам, например, к многослойным липосомальным везикулам (MLV), имеющим более одного концентрического липидного бислоя со средним диаметром от 100 до 1000 нм, к небольшие однослойным липосомальным везикулам (SUV), имеющим один липидный бислой и средний диаметр от 25 до 100 нм, к большим однослойным липосомальным везикулам (LUV), имеющим один липидный бислой, и средний диаметр около 1000 мкм, и гигантским однослойным везикулам (GUV), имеющим один липидный бислой и средний диаметр от 1 до 100 мкм. Термин «липосома» также включает эластичные везикулы, такие как, например, трансферосомы и этосомы.

Как применяется в настоящей заявке, термин “аквасома” относится к сферическим наночастицам диаметром от 60 до 300 нм, которые содержат по меньшей мере три слоя самоорганизующейся структуры, а именно твердофазное нанокристаллическое ядро, покрытое олигомерной пленкой, на которой молекулы лекарственного средства адсорбируются с модификацией лекарственного средства или без нее.

Как применяется в настоящей заявке, термин “этосома” относится к липидным везикулам, содержащим фосфолипиды и этанол и/или изопропанол в относительно высокой концентрации и воду, имеющим размер в интервале от десятков нанометров до микрометров.

Как применяется в настоящей заявке, термин “LeciPlex” относится к положительно заряженной везикулярной системе на основе фосфолипидов, которая содержит соевый PC, катионный агент и биосовместимый растворитель, такой как ПЭГ 300, ПЭГ 400, моноэтиловый простой эфир диэтиленгликоля, простой эфир полиэтиленгликоля и тетрагидрофурфурилового спирта или 2-пирролидон или N-метил-2-пирролидон.

Как применяется в настоящей заявке, термин “ниосома” относится к однослойным или многослойным везикулам, содержащим неионные поверхностно-активные вещества.

Как применяется в настоящей заявке, термин “фармакосома” относится к ультрадисперсным везикулярным, мицеллярным или гексагональным агрегатам из липидов, ковалентно связанных с биологически активными составляющими.

Как применяется в настоящей заявке, термин “прониосома” относится к сухим композициям покрытого поверхностно-активным веществом носителя, который при регидратации и умеренном перемешивании дает ниосомы.

Как применяется в настоящей заявке, термин “полимерсома” относится к искусственной сферической везикуле, содержащей мембрану, образованную из амфифильных синтетических блок-сополимеров, и может необязательно содержать водный раствор в своем ядре. Полимерсома имеет диаметр в интервале от 50 нм до 5 мкм и более. Термин также включает синтосомы, которые представляют собой полимерсомы, сконструированные так, чтобы они содержали каналы, которые позволяют определенным химическим веществам проходить через мембрану в везикулу или из нее.

Как применяется в настоящей заявке, термин “сфингосома” относится к концентрической бислойной везикуле, в котором водный объем полностью окружен мембранным липидным бислоем, в основном состоящим из природного или синтетического сфинголипида.

Как применяется в настоящей заявке, термин «трансферосома» относится к ультрагибким липидным везикулам, содержащим водное ядро, которое образовано из смеси обычных полярных и подходящих липидов, активированных по краям, которые облегчают образование сильно искривленных бислоев, которые делают трансферосому весьма деформируемой.

Как применяется в настоящей заявке, термин “уфасома” относится к везикуле, содержащей ненасыщенные жирные кислоты.

Как применяется в настоящей заявке, термин “пелипептид” относится к пептиду, содержащему до и включая 50 аминокислотных мономеров.

Как применяется в настоящей заявке, термин “белок” относится к пептиду из более 50 аминокислотных остатков. Предпочтительно белок содержит самое большее 20000 аминокислотных остатков, как например самое большее 15000 аминокислотных остатков, как например самое большее 10000 аминокислотных остатков, как например самое большее 5000 аминокислотных остатков, как например самое большее 4000 аминокислотных остатков, как например самое большее 3000 аминокислотных остатков, как например самое большее 2000 аминокислотных остатков, как например самое большее 1000 аминокислотных остатков.

Как применяется в настоящей заявке, термин “физиологические состояния” относятся к водному буферу при pH 7.4, 37°C.

Как применяется в настоящей заявке термин “фармацевтическая композиция” относится к композиции, содержащей один или более активных ингредиентов, таких как, например, по меньшей мере одно PTH соединение контролируемого высвобождения, и один или более эксципиентов, а также любой продукт, который, прямо или косвенно, является результатом комбинации, комплексообразования или агрегация любых двух или более ингредиентов композиции, или диссоциации одного или более ингредиентов, или других типов реакций или взаимодействий одного или более ингредиентов. Соответственно, фармацевтическая композиция для применения согласно настоящему изобретению охватывает любую композицию, полученную путем смешивания одного или более PTH соединений контролируемого высвобождения и фармацевтически приемлемого эксципиента.

Как применяется в настоящей заявке термин “жидкая композиция” относится к смеси, содержащей растворимое в воде PTH соединение и один или более растворителей, как например воду.

Термин “композиция в виде суспензии” относится к смеси, содержащей нерастворимое в воде PTH соединение и один или более растворителей, как например воду.

Как применяется в настоящей заявке, термин “сухая композиция” означает, что фармацевтическая композиция обеспечивается в сухой форме. Подходящими способами сушки является распылительная сушка и лиофилизация, т.е. сушка замораживанием. Такая сухая композиция пролекарства имеет остаточное содержание воды, равное максимум 10%, предпочтительно менее 5% и более предпочтительно менее 2%, как определено по методу Карла Фишера. Предпочтительно, фармацевтическая композиция для применения согласно настоящему изобретению высушивается посредством лиофилизации.

Термин “лекарственное средство”, как применяется в настоящей заявке, относится к веществу, такому как PTH, применяемому для лечения, облегчения, профилактики или диагностике заболевания или, в противном случае, для улучшения физического или умственного здоровья. Если лекарственное средство конъюгирована с другой составляющей, составляющая полученного продукта, которая происходит из лекарственного средства, обозначается как “биологически активная составляющая”.

Как применяется в настоящей заявке термин “пролекарство” относится к конъюгату, содержащему биологически активную составляющую, обратимо и ковалентно соединенную со специализированной защитной группой через обратимую линкерную составляющую, также упоминаемую как “обратимая линкерная составляющая пролекарства”, которая содержит обратимую связь с биологически активной составляющей, и где специализированная защитная группа изменяет или уменьшает нежелательные свойства в родоначальной молекуле. Это также включает усиления желательных свойств лекарственного средства и подавление нежелательных свойств. Специализированная нетоксичная защитная группа обозначается как “носитель”. Пролекарство высвобождает обратимо и ковалентно связанную биологически активную составляющую в форме соответствующего ей лекарственного средства. Другими словами, пролекарство представляет собой конъюгат, содержащий биологически активную составляющую, которая обратимо и ковалентно конъюгирована с составляющей-носителем через обратимую линкерную составляющую пролекарства, где ковалентное или обратимое конъюгирование носителя с обратимой линкерной составляющей пролекарства является либо непосредственным, либо через спейсер. Такой конъюгат высвобождает прежде конъюгированную биологически активную составляющую в форме свободного немодифицированного лекарственного средства.

Термины “биодеградируемая связь” или “обратимая связь” означает связь, которая является гидролитически разрушаемой, т.е. расщепляемой, в отсутствии ферментов при физиологических условиях (водный буфер при pH 7.4, 37°C) с периодом полувысвобождения в интервале от одного часа до трех месяцев, предпочтительно от одного часа до двух месяцев, даже более предпочтительно от одного часа до одного месяца, даже более предпочтительно от одного часа до трех недель, наиболее предпочтительно от одного часа до двух недель. Соответственно, стабильная связь представляет собой связь, имеющую период полувысвобождения при физиологических условиях (водный буфер при pH 7.4, 37°C), равный более чем три месяца.

Как применяется в настоящей заявке, термин “бесследный линкер пролекарства” означает обратимый линкер пролекарства, т.e. линкерную составляющую, обратимо и ковалентно соединяющую биологически активную составляющую с носителем, который при расщеплении высвобождает лекарственное средство в его свободной форме. Как применяется в настоящей заявке, термин “свободная форма” лекарственного средства означает лекарственное средство в его немодифицированной, фармакологически активной форме.

Как применяется в настоящей заявке, термин "эксципиент" относится к разбавителю, вспомогательному средству или носителю, совместно с которым вводится терапевтическое средство, как например лекарственное средство или пролекарство. Такой фармацевтический эксципиент может представлять собой стерильную жидкость, такую как вода и масла, включая жидкости нефтяного, животного, растительного или синтетического происхождения, включая, но без ограничения к этому, арахисовое масло, соевое масло, минеральное масло, сезамовое масло и тому подобное. Вода является предпочтительным эксципиентом, когда фармацевтическая композиция вводится перорально. Соляной раствор и водный раствор декстрозы являются предпочтительными наполнителями, когда фармацевтическая композиция вводится внутривенно. Соляные растворы и водные растворы декстрозы и глицерина предпочтительно применяются в качестве жидких эксципиентов для инъецируемых растворов. Подходящие фармацевтические эксципиенты включают крахмал, глюкозу, лактозу, сахарозу, маннит, трегалозу, желатин, солод, рис, муку, мел, силикагель, стеарат натрия, глицерин моностеарат, тальк, хлорид натрия, сухое молоко, глицерин, пропиленгликоль, воду, этанол и тому подобное. Композиция при желании может содержать также небольшие количества увлажняющих или эмульгирующих средств, рН-буферных средств, таких как, например, ацетат, сукцинат, трис, карбонат, фосфат, HEPES (4-(2-гидроксиэтил)-1-пиперазинэтансульфокислота, MES (2-(N-морфолин)этансульфокислота) или может содержать детергенты, такие как Tween, полоксамеры, полоксамины, CHAPS, Igepal, или аминокислоты, такие как, например, глицин, лизин или гистидин. Такие фармацевтические композиции могут иметь форму растворов, суспензий, эмульсий, таблеток, пилюль, капсул, порошков, препаратов с замедленным высвобождением и тому подобное. Фармацевтическая композиция может иметь вид суппозитория, с традиционными связующими средствами и эксципиентами, такими как триглицериды. Препарат для перорального введения может содержать стандартные эксципиенты, такие как фармацевтические марки маннита, лактозы, крахмала, стеарата магния, сахарина натрия, целлюлозы, карбоната магния и т.д. Такие композиции содержат терапевтически эффективное количество лекарственного средства или биологически активной составляющей, вместе с подходящим количеством эксципиента, так чтобы получилась форма, подходящая для введения пациенту. Композиция должна соответствовать способу введения.

Как применяется в настоящей заявке, термин “реагент” означает химическое соединение, которое содержит по меньшей мере одну функциональную группу для реакции с функциональной группой другого химического соединения или лекарственного средства. Понятно, что лекарственное средство, содержащее функциональную группу (как например первичный или вторичный амин или гидроксильная функциональная группа) также представляет собой реагент.

Как применяется в настоящей заявке, термин “составляющая” означает часть молекулы, в которой отсутствует один или более атомов по сравнению с соответствующим реагентов. Если, например, реагент формулы “H-X-H” реагирует с другим реагентом и становится частью продукта реакции, соответствующая составляющая продукта реакции имеет структуру “H–X–“ или “-–X–“, где каждый “-–“обозначает присоединение к другой составляющей. Соответственно, биологически активная составляющая высвобождается из пролекарства в качестве лекарственного средства.

Понятно, что если обеспечивается последовательность или химическая структура группы атомов, где группа атомов присоединяется к двум составляющим или прерывает составляющую, указанная последовательность или структура может быть присоединена к двум составляющим в любой ориентации, если иного не указано. Например, составляющая “-C(O)N(R¹)-“ может быть присоединена к двум составляющим или прерывать составляющую либо как “-C(O)N(R¹)-“, либо как “-N(R¹)C(O)-“. Подобным образом, составляющая

может быть присоединена к двум составляющим или может прерывать составляющую либо как , либо как.

Как применяется в настоящей заявке, термин “функциональная группа” означает группу атомов, которая может реагировать с другими группами атомов. Функциональные группы включают, но без ограничения к этому, следующие группы: карбоновая кислота (–(C=O)OH), первичный и вторичный амин (–NH₂, –NH–), малеимид, тиол (-SH), сульфоновая кислота (–(O=S=O)OH), карбонат, карбамат (–O(C=O)N<), гидроксил (–OH), альдегид (–(C=O)H), кетон (–(C=O)–), гидразин (>N-N<), изоцианат, изотиоцианат, фосфорная кислота (–O(P=O)OHOH), фосфоновая кислота (–O(P=O)OHH), галоацетил, алкилгалогенид, акрилоил, арилфторид, гидроксиламин, дисульфид, сульфонамиды, серная кислота, винилсульфон, винилкетон, диазоалкан, оксиран и азиридин.

В случае, если PTH соединение контролируемого высвобождения для применения согласно настоящему изобретению содержат одну или более кислотных или основных групп, настоящее изобретение включает также их соответствующие фармацевтически или токсикологически приемлемые соли, в частности их фармацевтически применимые соли. Таким образом, PTH соединение контролируемого высвобождения для применения согласно настоящему изобретению, содержащие кислотные группы, могут применяться по настоящему изобретению, например, в виде солей щелочных металлов, солей щелочноземельных металлов или аммониевых солей. Более конкретные примеры таких солей включают соли натрия, соли калия, соли кальция, соли магния или соли аммония или с органическими аминами, такими как, например, этиламин, этаноламин, триэтаноламин или аминокислоты. PTH соединение контролируемого высвобождения для применения согласно настоящему изобретению, содержащие одну или более основных групп, т.е. групп, которые могут быть протонированы, могут присутствовать и использоваться согласно настоящему изобретению в форме их аддитивных солей с неорганическими или органическими кислотами. Примеры подходящих кислот включают хлорид водорода, бромид водорода, фосфорную кислоту, серную кислоту, азотную кислоту, метансульфокислоту, п-толуолсульфокислоту, нафталинсульфокислоту, щавелевую кислоту, уксусную кислоту, винную кислоту, молочную кислоту, салициловую кислоту, бензойную кислоту, муравьиную кислоту, пропионовую кислоту, пивалоиловую кислоту, диэтилуксусную кислоту, малоновую кислоту, янтарную кислоту, пимелиновую кислоту, фумаровую кислоту, малеиновую кислоту, яблочную кислоту, сульфаминовую кислоту, фенилпропионовую кислоту, глюконовую кислоту, аскорбиновую кислоту, изоникотиновую кислоту, лимонную кислоту, адипиновую кислоту и другие кислоты, известные квалифицированным специалистам в данной области. Специалистам в данной области техники известно превращение основной группы в катион, такие как алкилирование аминной группы с получением положительно заряженной аммониевой группы и соответствующего противоиона соли. Если PTH соединение контролируемого высвобождения для применения согласно настоящему изобретению одновременно содержат кислотные и основные группы, настоящее изобретение также включает, в дополнение к упомянутым солевым формам, внутренние соли или бетаины (цвиттерионы). Соответствующие соли могут быть получены обычными методами, известными квалифицированным специалистам в данной области, например путем контакта этих соединений с органической или неорганической кислотой или основанием в растворителе или диспергирующем средстве, или путем анионного обмена или катионного обмена с другими солями. Настоящее изобретение также включает все соли соединений для применения согласно настоящему изобретению, которые, вследствие низкой физиологической совместимости не пригодны непосредственно для применения в фармацевтических продуктах, но которые могут использоваться, например, как промежуточные соединения для химических реакций или для получения фармацевтически приемлемых солей.

Термин "фармацевтически приемлемый" означает вещество, которое не наносит вред при введении пациенту и предпочтительно одобрено надзорным органом, таким как ЕМЕА (Европа) и/или FDA (США) и/или любым другим национальным надзорным органом для применения в отношении животных, предпочтительно человека.

Как применяется в настоящей заявке термин “около” в комбинации с числовым значением применяется для указания на диапазон в интервале и включая числовое значение плюс и минус не более 10% от указанного числового значения, более предпочтительно не более 8% от указанного значения, даже более предпочтительно не более 5% от указанного значения и наиболее предпочтительно не более 2% от указанного значения. Например, фраза “около 200” применяется для обозначения диапазона в интервале и включая 200+/- 10%, т.е. в интервале и включая 180 - 220; предпочтительно 200+/- 8%, т.е. в интервале и включая 184 - 216; даже более предпочтительно в интервале и включая 200+/-5%, т.е. в интервале и включая 190 - 210; и наиболее предпочтительно 200+/- 2%, т.е. в интервале и включая 196 - 204. Понятно, что процент, приведенный как “около 20%” не означает “20%+/- 10%”, т.е. в интервале и включая 10 - 30%, но “около 20%” означает в интервале и включая 18 - 22%, т.е. плюс и минус 10% от числового значения, которое равно 20.

Как применяется в настоящей заявке, термин «полимер» означает молекулу, содержащую повторяющиеся структурные единицы, т.е. мономеры, связанные химическими связями линейным, кольцевым, разветвленным, сшитым или дендримерным образом или их комбинацией, которая может быть синтетического или биологического происхождения или комбинацией обоих. Понятно, что полимер может также содержать одну или более других химических групп и/или составляющих, таких как, например, одна или более функциональные группы. Предпочтительно, растворимый полимер имеет молекулярную массу, равную по меньшей мере 0.5 кДа, например, молекулярную массу, равную по меньшей мере 1 кДа, молекулярную массу, равную по меньшей мере 2 кДа, молекулярную массу, равную по меньшей мере 3 кДа, или молекулярную массу, равную по меньшей мере 5 кДа. Если полимер является растворимым, он предпочтительно имеет молекулярную массу, равную самое большее 1000 кДа, как например самое большее 750 кДа, как например самое большее 500 кДа, как например самое большее 300 кДа, как например самое большее 200 кДа, как например самое большее 100 кДа. Понятно, что для нерастворимых полимеров, как например гидрогели, нет значимых диапазонов молекулярной массы. Понятно также, что белок представляет собой полимер, в котором аминокислоты являются повторяющимися структурными звеньями, даже не смотря на то, что боковые цепи каждой аминокислоты могут быть различными.

Как применяется в настоящей заявке, термин “полимерный” означает реагент или составляющую, содержащую один или более полимеров или полимерных составляющих. Полимерный реагент или составляющая может необязательно также содержать одну или более других составляющих, которые предпочтительно выбирают из группы, состоящей из:

• C_1-50 алкила, C_2-50 алкенила, C_2-50 алкинила, C_3-10 циклоалкила, 3-10-ти членного гетероциклила, 8-11-ти членного гетеробициклила, фенила, нафтила, инденила, инданила и тетралинила; и

• связей, выбранных из группы, содержащей

где

пунктирные линии обозначают присоединение к оставшейся части составляющей или реагента, и

-R и R^a независимо друг от друга выбирают из группы, состоящей из -H, метила, этила, пропила, бутила, пентила и гексила.

Специалист в данной области понимает, что продукты полимеризации, полученные из реакции полимеризации, не все имеют одинаковую молекулярную массу, а скорее имеют молекулярно-массовое распределение. Следовательно, диапазоны молекулярных масс, молекулярные массы, диапазоны количества мономеров в полимере и количества мономеров в полимере, как применяется в настоящей заявке, относятся к среднечисловой молекулярной массе и среднему числу мономеров, т.е. к среднему арифметическому молекулярной массы полимера или полимерного фрагмента и среднему арифметическому числа мономеров полимера или полимерного фрагмента.

Соответственно, в полимерной составляющей, содержащей “x” мономерных единиц, любое целое число, приведенное для “x”, поэтому соответствует арифметическому среднему числу мономеров. Любой диапазон целых чисел, приведенный для “x”, обеспечивает диапазон целых чисел, в котором лежит арифметическое среднее число мономеров. Целое число для “x”, приведенное как “около x”, означает, что арифметические средние числа мономеров лежат в диапазоне целых чисел x+/- 10%, предпочтительно x+/- 8%, более предпочтительно x+/- 5% и наиболее предпочтительно x+/- 2%.

Как применяется в настоящей заявке, термин “среднечисловая молекулярная масса” означает обычное среднее арифметическое молекулярных масс отдельных полимеров.

Как применяется в настоящей заявке, термин “растворимый в воде” со ссылкой на носитель означает, что когда такой носитель является частью PTH соединения контролируемого высвобождения для применения согласно настоящему изобретению по меньшей мере 1 г PTH соединения контролируемого высвобождения, содержащего такой растворимый в воде носитель, может быть растворено в одном литре воды при 20°C с образованием гомогенного раствора. Соответственно, термин “нерастворимый в воде” со ссылкой на носитель означает, что когда такой носитель является частью PTH соединения контролируемого высвобождения для применения согласно настоящему изобретению менее 1 г PTH соединения контролируемого высвобождения, содержащего такой растворимый в воде носитель, может быть растворено в одном литре воды при 20°C с образованием гомогенного раствора.

Как применяется в настоящей заявке, термин “растворимый в воде” со ссылкой на PTH соединение контролируемого высвобождения означает, что по меньшей мере 1 г PTH соединения контролируемого высвобождения может быть растворено в одном литре воды при 20°C с образованием гомогенного раствора. Соответственно, термин “нерастворимый в воде” со ссылкой на PTH соединение контролируемого высвобождения означает, что менее 1 г PTH соединения контролируемого высвобождения может быть растворено в одном литре воды при 20°C с образованием гомогенного раствора.

Как применяется в настоящей заявке, термин “гидрогель” означает гидрофильную или амфифильную полимерную сеть, состоящую из гомополимеров или coполимеров, которая является не растворимой из-за присутствия ковалентных химических поперечных связей. Поперечные связи образуют структуру сети и физическую целостность.

Как применяется в настоящей заявке термин «термогелевое» означает соединение, которое представляет собой жидкость или раствор с низкой вязкостью, имеющий вязкость менее 500 сПз при 25°C при скорости сдвига около 0,1/с при низкой температуре, причем низкая температура находится в интервале от около 0°C до около 10°C, но которое представляет собой соединение с более высокой вязкостью менее 10000 сПз при 25°C со скоростью сдвига около 0,1/с при более высокой температуре, причем более высокая температура находится в интервале от около 30°C до около 40°C, например, при температуре около 37°C.

Как применяется в настоящей заявке, термин “на основе ПЭГ” в отношении составляющей или реагента означает, что указанная составляющая или реагент содержит ПЭГ. Предпочтительно, составляющая или реагент на основе ПЭГ содержит по меньшей мере 10% (мас./мас.) ПЭГ, как например по меньшей мере 20% (мас./мас.) ПЭГ, как например по меньшей мере 30% (мас./мас.) ПЭГ, как например по меньшей мере 40% (мас./мас.) ПЭГ, как например по меньшей мере 50% (мас./мас.), как например по меньшей мере 60 (мас./мас.) ПЭГ, как например по меньшей мере 70% (мас./мас.) ПЭГ, как например по меньшей мере 80% (мас./мас.) ПЭГ, как например по меньшей мере 90% (мас./мас.) ПЭГ, как например по меньшей мере 95%. Оставшиеся массовые проценты составляющей или реагента на основе ПЭГ составляют другие составляющие, предпочтительно выбранные из следующих составляющих и связей:

• C_1-50 алкил, C_2-50 алкенил, C_2-50 алкинил, C_3-10 циклоалкил, 3-10-ти членный гетероциклил, 8-11-ти членный гетеробициклил, фенил, нафтил, инденил, инданил и тетралинил; и

• связей, выбранных из группы, содержащей

где

пунктирные линии обозначают присоединение к оставшейся части составляющей или реагента, и

-R и R^a независимо друг от друга выбирают из группы, состоящей из -H, метила, этила, пропила, бутила, пентила и гексила.

Как применяется в настоящей заявке, термин “на основе ПЭГ, содержащий по меньшей мере X% ПЭГ” в отношении составляющей или реагента означает, что указанная составляющая или реагент содержит по меньшей мере X% (мас./мас.) единиц этиленгликоля (-CH₂CH₂O–), где единицы этиленгликоля могут быть расположены блочным, чередующимся образом или могут быть расположены случайным образом в составляющей или реагента, и предпочтительно все единицы этиленгликоля указанной составляющей или реагента присутствуют в одном блоке; оставшиеся массовые проценты составляющей или реагента на основе ПЭГ составляют другие составляющие, предпочтительно выбранные из следующих составляющих и связей:

• C_1-50 алкил, C_2-50 алкенил, C_2-50 алкинил, C_3-10 циклоалкил, 3-10-ти членный гетероциклил, 8-11-ти членный гетеробициклил, фенил, нафтил, инденил, инданил и тетралинил; и

• связей, выбранных из группы, содержащей

где

пунктирные линии обозначают присоединение к оставшейся части составляющей или реагента, и

-R и R^a независимо друг от друга выбирают из группы, состоящей из -H, метила, этила, пропила, бутила, пентила и гексила.

Термин “на основе гиалуроновой кислоты, содержащая по меньшей мере X% гиалуроновая кислота” применяется соответствующим образом.

Термин “замещенный”, как применяется в настоящей заявке, означает, что один или более атомов водорода молекулы или составляющей замещены другим атомом или группой атомов, которые обозначаются как “заместитель”.

Предпочтительно, одни или более дополнительные необязательные заместители независимо друг от друга выбирают из группы, состоящей из галогена, -CN, -COOR^x1, -OR^x1, -C(O)R^x1, -C(O)N(R^x1R^x1a), -S(O)₂N(R^x1R^x1a), -S(O)N(R^x1R^x1a), -S(O)₂R^x1, -S(O)R^x1, -N(R^x1)S(O)₂N(R^x1aR^x1b), -SR^x1, -N(R^x1R^x1a), -NO₂, -OC(O)R^x1, -N(R^x1)C(O)R^x1a, -N(R^x1)S(O)₂R^x1a, -N(R^x1)S(O)R^x1a, -N(R^x1)C(O)OR^x1a, -N(R^x1)C(O)N(R^x1aR^x1b), -OC(O)N(R^x1R^x1a), -T⁰, C_1-50 алкила, C_2-50 алкенила и C_2-50 алкинила; где -T⁰, C_1-50 алкил, C_2-50 алкенил и C_2-50 алкинил необязательно замещены одним или более -R^x2, которые являются одинаковыми или различными, и где C_1-50 алкил, C_2-50 алкенил и C_2-50 алкинил необязательно прерываются одной или более группами, выбранными из группы, состоящей из -T⁰-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(R^x3)-, -S(O)₂N(R^x3)-, -S(O)N(R^x3)-, -S(O)₂-, -S(O)-, -N(R^x3)S(O)₂N(R^x3a)-, -S-, -N(R^x3)-, -OC(OR^x3)(R^x3a)-, -N(R^x3)C(O)N(R^x3a)- и -OC(O)N(R^x3)-;

-R^x1, -R^x1a, -R^x1b независимо друг от друга выбирают из группы, состоящей из -H, -T⁰, C_1-50 алкила, C_2-50 алкенила и C_2-50 алкинила; где -T⁰, C_1-50 алкил, C_2-50 алкенил, и C_2-50 алкинил необязательно замещены одним или более заместителями -R^x2, которые являются одинаковыми или различными, и где C_1-50 алкил, C_2-50 алкенил и C_2-50 алкинил необязательно прерваны одной или более группами, выбранными из группы, состоящей из -T⁰-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(R^x3)-, -S(O)₂N(R^x3)-, -S(O)N(R^x3)-; -S(O)₂-, -S(O)-, -N(R^x3)S(O)₂N(R^x3a)-, -S-, -N(R^x3)-, -OC(OR^x3)(R^x3a)-, -N(R^x3)C(O)N(R^x3a)- и -OC(O)N(R^x3)-;

каждый T⁰ независимо выбирают из группы, состоящей из фенила, нафтила, инденила, инданила, тетралинила, C_3-10 циклоалкила, 3-10-ти членного гетероциклила и 8-11-ти членного гетеробициклила; где каждый T⁰ независимо необязательно замещен одним или более заместителями -R^x2, которые являются одинаковыми или различными;

каждый -R^x2 независимо выбирают из группы, состоящей из галогена, -CN, оксо (=O), -COOR^x4, -OR^x4, -C(O)R^x4, -C(O)N(R^x4R^x4a), -S(O)₂N(R^x4R^x4a), -S(O)N(R^x4R^x4a), -S(O)₂R^x4, -S(O)R^x4, -N(R^x4)S(O)₂N(R^x4aR^x4b), -SR^x4, -N(R^x4R^x4a), -NO₂, -OC(O)R^x4, -N(R^x4)C(O)R^x4a, -N(R^x4)S(O)₂R^x4a, -N(R^x4)S(O)R^x4a, -N(R^x4)C(O)OR^x4a, -N(R^x4)C(O)N(R^x4aR^x4b), -OC(O)N(R^x4R^x4a) и C_1-6 алкила; где C_1-6 алкил необязательно замещен одним или более заместителями галоген, которые являются одинаковыми или различными;

каждый -R^x3, -R^x3a, -R^x4, -R^x4a, -R^x4b независимо выбирают из группы, состоящей из -H и C_1-6 алкила; где C_1-6 алкил необязательно замещен одним или более заместителями галоген, которые являются одинаковыми или различными.

Более предпочтительно, один или более дополнительных необязательных заместителей независимо друг от друга выбраны из группы, состоящей из галогена, -CN, -COOR^x1, -OR^x1, -C(O)R^x1, -C(O)N(R^x1R^x1a), -S(O)₂N(R^x1R^x1a), -S(O)N(R^x1R^x1a), -S(O)₂R^x1, -S(O)R^x1, -N(R^x1)S(O)₂N(R^x1aR^x1b), -SR^x1, -N(R^x1R^x1a), -NO₂, -OC(O)R^x1, -N(R^x1)C(O)R^x1a, -N(R^x1)S(O)₂R^x1a, -N(R^x1)S(O)R^x1a, -N(R^x1)C(O)OR^x1a, -N(R^x1)C(O)N(R^x1aR^x1b), -OC(O)N(R^x1R^x1a), -T⁰, C_1-10 алкила, C_2-10 алкенила и C_2-10 алкинила; где -T⁰, C_1-10 алкил, C_2-10 алкенил и C_2-10 алкинил необязательно замещены одним или более -R^x2, которые являются одинаковыми или различными, и где C_1-10 алкил, C_2-10 алкенил и C_2-10 алкинил необязательно прерываются одной или более группами, выбранными из группы, состоящей из -T⁰-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(R^x3)-, -S(O)₂N(R^x3)-, -S(O)N(R^x3)-, -S(O)₂-, -S(O)-, -N(R^x3)S(O)₂N(R^x3a)-, -S-, -N(R^x3)-, -OC(OR^x3)(R^x3a)-, -N(R^x3)C(O)N(R^x3a)- и -OC(O)N(R^x3)-;

каждый -R^x1, -R^x1a, -R^x1b, -R^x3, -R^x3a независимо выбран из группы, состоящей из H, галогена, C_1-6 алкила, C_2-6 алкенила и C_2-6 алкинила;

каждый T⁰ независимо выбран из группы, состоящей из фенила, нафтила, инденила, инданила, тетралинила, C_3-10 циклоалкила, 3-10-ти членного гетероциклила, и 8- 11-ти членного гетеробициклила; где каждый T⁰ независимо необязательно замещен одним или более -R^x2, которые являются одинаковыми или различными;

каждый -R^x2 независимо выбран из группы, состоящей из галогена, -CN, оксо (=O), -COOR^x4, -OR^x4, -C(O)R^x4, -C(O)N(R^x4R^x4a), -S(O)₂N(R^x4R^x4a), -S(O)N(R^x4R^x4a), -S(O)₂R^x4, -S(O)R^x4, -N(R^x4)S(O)₂N(R^x4aR^x4b), -SR^x4, -N(R^x4R^x4a), -NO₂, -OC(O)R^x4, -N(R^x4)C(O)R^x4a, -N(R^x4)S(O)₂R^x4a, -N(R^x4)S(O)R^x4a, -N(R^x4)C(O)OR^x4a, -N(R^x4)C(O)N(R^x4aR^x4b), -OC(O)N(R^x4R^x4a), и C_1-6 алкила; где C_1-6 алкил необязательно замещен одним или более галогенами, которые являются одинаковыми или различными;

каждый -R^x4, -R^x4a, -R^x4b независимо выбран из группы, состоящей из H, галогена, C_1-6 алкила, C_2-6 алкенила и C_2-6 алкинила;

Даже более предпочтительно, один или более дополнительных необязательных заместителей независимо друг от друга выбраны из группы, состоящей из галогена, -CN, -COOR^x1, -OR^x1, -C(O)R^x1, -C(O)N(R^x1R^x1a), -S(O)₂N(R^x1R^x1a), -S(O)N(R^x1R^x1a), -S(O)₂R^x1, -S(O)R^x1, -N(R^x1)S(O)₂N(R^x1aR^x1b), -SR^x1, -N(R^x1R^x1a), -NO₂, -OC(O)R^x1, -N(R^x1)C(O)R^x1a, -N(R^x1)S(O)₂R^x1a, -N(R^x1)S(O)R^x1a, -N(R^x1)C(O)OR^x1a, -N(R^x1)C(O)N(R^x1aR^x1b), -OC(O)N(R^x1R^x1a), -T⁰, C_1-6 алкила, C_2-6 алкенила и C_2-6 алкинила; где -T⁰, C_1-6 алкил, C_2-6 алкенил и C_2-6 алкинил необязательно замещены одним или более -R^x2, которые являются одинаковыми или различными, и где C_1-6 алкил, C_2-6 алкенил и C_2-6 алкинил необязательно прерываются одной или более группами, выбранными из группы, состоящей из -T⁰-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(R^x3)-, -S(O)₂N(R^x3)-, -S(O)N(R^x3)-, -S(O)₂-, -S(O)-, -N(R^x3)S(O)₂N(R^x3a)-,-S-, -N(R^x3)-, -OC(OR^x3)(R^x3a)-, -N(R^x3)C(O)N(R^x3a)-, и -OC(O)N(R^x3)-;

каждый -R^x1, -R^x1a, -R^x1b, -R^x2, -R^x3, -R^x3a независимо выбран из группы, состоящей из H, галогена, C_1-6 алкила, C_2-6 алкенила и C_2-6 алкинила;

каждый T⁰ независимо выбран из группы, состоящей из фенила, нафтила, инденила, инданила, тетралинила, C_3-10 циклоалкила, 3-10-ти членного гетероциклила, и 8-11-ти членного гетеробициклила; где каждый T⁰ независимо необязательно замещен одним или более -R^x2, которые являются одинаковыми или различными.

Предпочтительно, максимум 6 -H атомов необязательно замещенной молекулы независимо замещены заместителем, например, 5 -H атомов независимо замещены заместителем, 4 -H атома независимо замещены заместителем, 3 -H атома независимо замещены заместителем, 2 -H атома независимо замещены заместителем, или 1 -H атом замещен заместителем.

Термин “прерванный” означает, что фрагмент вставлен между двумя атомами углерода или – если вставка находится на одном из концов составляющей – между атомом углерода или гетероатомом и атомом водорода, предпочтительно между атомом углерода и атомом водорода.

Как применяется в настоящей заявке, термин “C_1-4 алкил” сам по себе или в комбинации означает неразветвленную или разветвленную алкильную составляющую, имеющую от 1 до 4 атомов углерода. Если присутствует на конце молекулы, примерами неразветвленного или разветвленного C_1-4 алкила являются метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, изобутил, втор.-бутил и трет.-бутил. Когда две составляющие молекулы связаны C_1-4 алкилом, примерами таких C_1-4 алкильных групп являются -CH₂-, -CH₂-CH₂-, -CH(CH₃)-, -CH₂-CH₂-CH₂-, -CH(C₂H₅)-, -C(CH₃)₂-. Каждый водород C_1-4 алкильного углерода может необязательно быть замещен заместителем, как определено выше. Необязательно, C_1-4 алкил может быть прерван одной или более составляющими, как определено далее.

Как применяется в настоящей заявке, термин “C_1-6 алкил” сам по себе или в комбинации означает неразветвленную или разветвленную алкильную составляющую, имеющую от 1 до 6 атомов углерода. Если присутствует на конце молекулы, примерами неразветвленных или разветвленных C_1-6 алкильных групп являются метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, изобутил, втор.-бутил, трет-бутил, н-пентил, 2-метилбутил, 2,2-диметилпропил, н-гексил, 2-метилпентил, 3-метилпентил, 2,2-диметилбутил, 2,3-диметилбутил и 3,3-диметилпропил. Когда две составляющие молекулы связаны C_1-6 алкильной группой, примерами таких C_1-6 алкильных групп являются -CH₂-, -CH₂-CH₂-, -CH(CH₃)-, -CH₂-CH₂-CH₂-, -CH(C₂H₅)- и C(CH₃)₂-. Каждый атом водорода при C_1-6 атоме углерода может необязательно быть замещен заместителем, как определено выше. Необязательно, C_1-6 алкил может быть прерван одной или более составляющими, как определено далее.

Соответственно, “C_1-10 алкил”, “C_1-20 алкил” или “C_1-50 алкил” означает алкильную цепь, имеющую от 1 до 10, от 1 до 20 или от 1 до 50 атомов углерода, соответственно, где каждый атом водорода при C_1-10, C_1-20 или C_1-50 атоме углерода может необязательно быть замещен заместителем, как определено выше. Необязательно, C_1-10 или C_1-50 алкил может быть прерван одной или более составляющими, как определено далее.

Как применяется в настоящей заявке, термин “C_2-6 алкенил” сам по себе или в комбинации означает неразветвленную или разветвленную углеводородную составляющую, содержащую по меньшей мере одну двойную связь углерод-углерод, имеющую от 2 до 6 атомов углерода. Если присутствует на конце молекулы, примерами являются CH=CH₂, -CH=CH-CH₃, -CH₂-CH=CH₂, -CH=CHCH₂-CH₃ и -CH=CH-CH=CH₂. Когда две составляющие молекулы связаны C_2-6 алкенильной группой, тогда примером такого C_2-6 алкенила является -CH=CH-. Каждый атом водорода C_2-6 алкенильной составляющей может необязательно быть замещен заместителем, как определено выше. Необязательно, C_2-6 алкенил может быть прерван одной или более составляющими, как определено далее.

Соответственно, термин “C_2-10 алкенил”, “C_2-20 алкенил” или “C_2-50 алкенил” сам по себе или в комбинации означает неразветвленную или разветвленную углеводородную составляющую, содержащую по меньшей мере одну двойную связь углерод-углерод, имеющую от 2 до 10, от 2 до 20 или от 2 до 50 атомов углерода. Каждый атом водорода C_2-10 алкенильной, C_2-20 алкенильной или C_2-50 алкенильной группы может необязательно быть замещен заместителем, как определено выше. Необязательно, C_2-10 алкенил, C_2-20 алкенил или C_2-50 алкенил может быть прерван одной или более составляющими, как определено далее.

Как применяется в настоящей заявке, термин “C_2-6 алкинил” сам по себе или в комбинации означает неразветвленную или разветвленную углеводородную составляющую, содержащую по меньшей мере одну тройную связь углерод-углерод, имеющую от 2 до 6 атомов углерода. Если присутствует на конце молекулы, примерами являются -C≡CН, -CH₂-C≡СH, CH₂-CH₂-C≡CH и CH₂-C≡C-CH₃. Когда две составляющие молекулы связаны алкинильной группой, тогда примером является -C≡C-. Каждый атом водорода C_2-6 алкинильной группы может необязательно быть замещен заместителем, как определено выше. Необязательно, могут присутствовать одна или более двойных связей. Необязательно, C_2-6 алкинил может быть прерван одной или более составляющими, как определено далее.

Соответственно, как применяется в настоящей заявке, термин “C_2-10 алкинил”, “C_2-20 алкинил” и “C_2-50 алкинил” сам по себе или в комбинации означает неразветвленную или разветвленную углеводородную составляющую, содержащую по меньшей мере одну тройную связь углерод-углерод, имеющую от 2 до 10, от 2 до 20 или от 2 до 50 атомов углерода, соответственно. Каждый атом водорода C_2-10 алкинильной, C_2-20 алкинильной или C_2-50 алкинильной группы может необязательно быть замещен заместителем, как определено выше. Необязательно, могут присутствовать одна или более двойных связей. Необязательно, C_2-10 алкинил, C_2-20 алкинил или C_2-50 алкинил может быть прерван одной или более составляющими, как определено далее.

Как упомянуто выше, C_1-4 алкил, C_1-6 алкил, C_1-10 алкил, C_1-20 алкил, C_1-50 алкил, C_2-6 алкенил, C_2-10 алкенил, C_2-20 алкенил, C_2-50 алкенил, C_2-6 алкинил, C_2-10 алкинил, C_2-20 алкенил или C_2-50 алкинил может необязательно быть прерван одной или более составляющими, которые предпочтительно выбирают из группы, состоящей из

где

пунктирные линии обозначают присоединение к оставшейся части составляющей или реагента; и

-R и R^a независимо друг от друга выбирают из группы, состоящей из -H, метила, этила, пропила, бутила, пентила и гексила.

Как применяется в настоящей заявке, термин "C_3-10 циклоалкил" означает циклическую алкильную цепь, имеющую от 3 до 10 атомов углерода, которая может быть насыщенной или ненасыщенной, например, циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклогексенил, циклогептил, циклооктил, циклононил или циклодецил. Каждый атом водорода C_3-10 циклоалкильного углерода может быть замещен заместителем, как определено выше. Термин "C_3-10 циклоалкил" также включает мостиковые бициклы, такие как норборнан или норборнен.

Термин “8-30-членный карбополициклил” или “8-30-ти членный карбополицикл” означает циклическую составляющую из двух или более колец с 8 - 30 кольцевыми атомами, где два соседних кольца разделяют по мере один кольцевой атом, и которая может содержать до максимального числа двойных связей (ароматическое или неароматическое кольцо, которое является полностью насыщенным, частично ненасыщенным или ненасыщенным). Предпочтительно 8-30-членный карбополициклил означает циклическую составляющую из двух, трех, четырех или пяти колец, более предпочтительно двух, трех или четырех колец.

Как применяется в настоящей заявке, термин "3-10-ти членный гетероциклил" или "3-10-ти членный гетероцикл" означает кольцо с 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10 кольцевыми атомами, которое может содержать до максимального числа двойных связей (ароматическое или неароматическое кольцо, которое является полностью насыщенным, частично ненасыщенным или ненасыщенным), где по меньшей мере от одного кольцевого атома до четырех кольцевых атомов замещены гетероатомом, выбранным из группы, состоящей из серы (включая -S(O)-, -S(O)₂-), кислорода и азота (включая=N(O)-), и где кольцо связано с остатком молекулы через атом углерода или азота. Примеры 3-10-ти членных гетероциклов включают, но без ограничения к этому, азиридин, оксиран, тиран, азирин, оксирен, тиирен, азетидин, оксетан, тиетан, фуран, тиофен, пиррол, пирролин, имидазол, имидазолин, пиразол, пиразолин, оксазол, оксазолин, изоксазол, изоксазолин, тиазол, тиазолин, изотиазол, изотиазолин, тиадиазол, тиадиазолин, тетрагидрофуран, тетрагидротиофен, пирролидин, имидазолидин, пиразолидин, оксазолидин, изоксазолидин, тиазолидин, изотиазолидин, тиадиазолидин, сульфолан, пиран, дигидропиран, тетрагидропиран, имидазолидин, пиридин, пиридазин, пиразин, пиримидин, пиперазин, пиперидин, морфолин, тетразол, триазол, триазолидин, тетразолидин, диазепан, азепин или гомопиперазин. Каждый атом водорода 3-10-ти членного гетероциклила или 3-10-ти членной гетероциклической группы может быть замещен заместителем, как определено далее.

Как применяется в настоящей заявке, термин "8-11-ти членный гетеробициклил" или "8-11-ти членный гетеробицикл" означает гетероциклическую составляющую из двух колец с 8 - 11 кольцевыми атомами, где по меньшей мере один кольцевой атом разделен между двумя кольцами, и которая содержит до максимального числа двойных связей (ароматическое или неароматическое кольцо, которое является полностью насыщенным, частично ненасыщенным или ненасыщенным), где по меньшей мере от одного кольцевого атома до шести кольцевых атомов замещены гетероатомом, выбранным из группы, состоящей из серы (включая -S(O)-, -S(O)₂-), кислорода и азота (включая=N(O)-), и где кольцо связано с остатком молекулы через атом углерода или азота. Примерами 8-11-ти членного гетеробицикла являются индол, индолин, бензофуран, бензотиофен, бензоксазол, бензизоксазол, бензотиазол, бензизотиазол, бензимидазол, бензимидазолин, хинолин, хиназолин, дигидрохиназолин, хинолин, дигидрохинолин, тетрагидрохинолин, декагидрохинолин, изохинолин, декагидроизохинолин, тетрагидроизохинолин, дигидроизохинолин, бензазепин, пурин или птеридин. Термин 8-11-ти членный гетеробицикл также включает спиро-структуры из двух циклов, такие как 1,4-диокса-8-азаспиро[4.5]декан или мостиковые гетероциклы, такие как 8-аза-бицикло[3.2.1]октан. Каждый атом водорода 8-11-ти членного гетеробициклила или 8-11-ти членного гетеробицикла может быть замещен заместителем, как определено далее.

Подобным образом, термин “8-30-ти членный гетерополициклил” или “8-30-членный гетерополицикл” означает гетероциклическую составляющую из более чем двух колец с 8 - 30 кольцевыми атомами, предпочтительно тремя, четырьмя или пятью кольцами, где два соседних кольца разделяют по мере один кольцевой атом, и которая может содержать до максимального числа двойных связей (ароматическое или неароматическое кольцо, которое является полностью насыщенным, частично ненасыщенным или ненасыщенным), где по меньшей мере от одного кольцевого атома до 10 кольцевых атомов замещены гетероатомом, выбранным из группы, состоящей из серы (включая -S(O)-, -S(O)₂-), кислорода и азота (включая=N(O)-), и где кольцо связано с остатком молекулы через атом углерода или азота.

Понятно, что фраза “пара R^x/R^y, соединяется вместе с атомом, к которому они присоединены, с образованием C_3-10 циклоалкила или 3-10-ти членного гетероциклила” в отношении составляющей структуры

означает, что Rx и Ry образуют следующую структуру:

,

где R представляет собой C_3-10 циклоалкил или 3-10-ти членный гетероциклил.

Также понятно, что фраза “пара R^x/R^y, соединяется вместе с атомом, к которому они присоединены, с образованием кольца A” в отношении составляющей структуры

означает, что R^x и R^y образуют следующую структуру:

.

Как применяется в настоящей заявке, "галоген" означает фтор, хлор, бром или иод. В общем предпочтительно, что галогеном является фтор или хлор.

В общем, термин “содержит” или “содержащий” также охватывает “состоит из” или “состоящий из”.

Понятно, что эксперименты с людьми подчиняются строгим правилам. Таким образом, может потребоваться более легкодоступная система тестирования в форме животной модели для определения дозировки PTH 1-84, необходимой для поддержания уровня кальция в пределах нормальных уровней у субъектов с гипокальциемией, который у людей предпочтительно относится к альбумин-отрегулированному уровню кальция выше 8.5 мг/дл и ниже 10.5 мг/дл с оптимальным уровнем 9.5 мг/дл, что соответствует диапазоу от 2.125 до 2.625 нмоль/л, с оптимальным значением 2.375 нмоль/л. Одной такой животной моделью являются подвергнутые тиропаратиреоидэктомизии (TPTX) крысы. Крысы, подвергнутые тиропаратиреоидэктомизии, не способны продуцировать паратиреоидный гормон, PTH, основной регулятор гомеостаза кальция, и следовательно у них будет развиваться гипокальцемия.

Однако, понятно также, что уровни кальция в сыворотке крови могут различаться у разных видов, например у человека и крысы, поэтому для достижения сопоставимых результатов необходимо корректировать значения, чтобы учесть эти межвидовые различия. Поэтому при использовании таких животных моделей необходимо сначала определить нормальные уровни содержания кальция в сыворотке для данного пола и возраста. Например, Watchorn (Biochem J. 1933; 27(6): 1875–1878) обеспечивает нормальный диапазон сывороточного кальция (не скорректированный) для самцов крыс: от 10,29 до 13,16 мг/дл и от 9,61 до 14,04 мг/дл для самок крыс.Предпочтительно нормальный диапазон содержания кальция в сыворотке определяется как концентрация кальция в сыворотке выше нижнего диапазона нормы, например, как выше 9,6 мг/дл (не скорректировано) для самок крыс, даже более предпочтительно для самок крыс в возрасте от 13 до 22 недель. Предпочтительно нормальный диапазон кальция в сыворотке определяется как концентрация кальция в сыворотке ниже верхнего диапазона нормы, например, как ниже 14 мг/дл (не скорректировано) для самок крыс, даже более предпочтительно для самок крыс в возрасте от 13 до 22 недель.

Соответственно, при подвергании самок крыс тиропаратиреоидэктомизии для получения крыс с TPTX нормальный диапазон для целевого воздействия при обработке должен быть выше 9,6 мг/дл (без корректировки) и ниже 14 мг/дл (без корректировки) у таких животных в возрасте от 13 до 22 недель.

Предпочтительно, фармацевтическая композиция согласно настоящему изобретению предназначена для применения для лечения состояния, которое можно лечить посредством PTH.

Фармацевтическая композиция для применения согласно настоящему изобретению вводится не чаще, чем один раз каждые 24 часа, как например каждые 24 часа, каждые 48 часов, каждые 72 часа, каждые 96 часов, каждые 120 часа, каждые 144 часа, один раз в неделю, один раз каждые две недели. Предпочтительно, введение фармацевтической композиции согласно настоящему изобретению происходит кратно 24 часам, т.e. каждые N раз 24 часа, тогда как N представляет собой целое число, выбранное из группы, состоящей из 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 и 14.

В оном варианте выполнения настоящего изобретения фармацевтическая композиция для применения согласно настоящему изобретению вводится один раз каждые 24 часа.

В другом варианте выполнения настоящего изобретения фармацевтическая композиция для применения согласно настоящему изобретению вводится один раз каждые 48 часов.

В другом варианте выполнения настоящего изобретения фармацевтическая композиция для применения согласно настоящему изобретению вводится один раз каждые 72 часа.

В другом варианте выполнения настоящего изобретения фармацевтическая композиция для применения согласно настоящему изобретению вводится один раз каждые 96 часов.

В другом варианте выполнения настоящего изобретения фармацевтическая композиция для применения согласно настоящему изобретению вводится один раз каждые 120 часа.

В другом варианте выполнения настоящего изобретения фармацевтическая композиция для применения согласно настоящему изобретению вводится один раз каждые 144 часа.

В другом варианте выполнения настоящего изобретения фармацевтическая композиция для применения согласно настоящему изобретению вводится один раз каждую неделю.

Согласно настоящему изобретению PTH 1-84 вводится каждые 24 часа. Это означает, что если фармацевтическая композиция, содержащая соединение PTH контролируемого высвобождения, вводится каждые 24 часа, как фармацевтическая композиция, содержащая соединение PTH контролируемого высвобождения, так и PTH 1-84 вводятся с одной и той же частотой. Если фармацевтическая композиция, содержащая соединение PTH контролируемого высвобождения, вводится с интервалами, более длинными, чем 24 часа, PTH 1-84 вводится более чем один раз в интервале между двумя последовательными введениями фармацевтической композиции, содержащей соединение PTH контролируемого высвобождения. В таком случае, общее количество PTH1-84 вычисляют из всех введений, проводимых в указанный интервал между двумя последовательными введениями фармацевтической композиции, содержащей соединение PTH контролируемого высвобождения, согласно настоящему изобретению, с получением основы для определения молярной эквивалентной дозы соединения PTH контролируемого высвобождения.

Фармацевтическая композиция для применения согласно настоящему изобретению вводится посредством инъекции. В оном варианте выполнения настоящего изобретения введение осуществляют посредством внутримышечной инъекции. В другом варианте выполнения настоящего изобретения введение осуществляют посредством внутривенной инъекции. В другом варианте выполнения настоящего изобретения введение осуществляют посредством подкожного введения.

Понятно, что способ введения соединения PTH контролируемого высвобождения и способ введения PTH 1-84 идентичны, то есть, если PTH 1-84 вводят подкожной инъекцией, также соединение PTH контролируемого высвобождения вводят подкожной инъекцией. Если PTH 1-84 вводят посредством внутримышечной инъекции, также соединение PTH контролируемого высвобождения вводят посредством внутримышечной инъекции.

В оном варианте выполнения настоящего изобретения фармацевтическая композиция для применения согласно настоящему изобретению вводится посредством шприца. В другом варианте выполнения настоящего изобретения фармацевтическая композиция для применения согласно настоящему изобретению вводится посредством шприца-ручки. В другом варианте выполнения настоящего изобретения фармацевтическая композиция для применения согласно настоящему изобретению вводится с помощью автоматического медицинского шприца.

В настоящем изобретении фармацевтическая композиция для применения согласно настоящему изобретению вводится не более часто чем каждые 24 часа с дозой соединения PTH контролируемого высвобождения, которая соответствует не более чем 70% молярной эквивалентной дозе PTH 1-84, необходимой для поддержания уровня кальция в пределах нормального диапазона, предпочтительно выше 8.5 мг/дл, у людей за 24-ти часовой период. Предпочтительно, фармацевтическая композиция для применения согласно настоящему изобретению вводится с дозой соединения PTH контролируемого высвобождения, которая соответствует не более чем 65%, более предпочтительно с дозой соединения PTH контролируемого высвобождения, которая соответствует не более чем 60%, даже более предпочтительно с дозой соединения PTH контролируемого высвобождения, которая соответствует не более чем 55%, даже более предпочтительно с дозой соединения PTH контролируемого высвобождения, которая соответствует не более чем 50%, даже более предпочтительно с дозой соединения PTH контролируемого высвобождения, которая соответствует не более чем 45%, даже более предпочтительно с дозой соединения PTH контролируемого высвобождения, которая соответствует не более чем 40%, даже более предпочтительно с дозой соединения PTH контролируемого высвобождения, которая соответствует не более чем 35% и наиболее предпочтительно с дозой соединения PTH контролируемого высвобождения, которая соответствует не более чем 30% молярной эквивалентной дозе PTH 1-84, необходимой для поддержания уровня кальция в пределах нормального диапазона, предпочтительно выше 8.5 мг/дл, у людей за 24-ти часовой период.

Предпочтительно, PTH соединение содержит PTH молекулу или PTH составляющую, имеющую последовательность SEQ ID NO:47, SEQ ID NO:48, SEQ ID NO:49, SEQ ID NO:50, SEQ ID NO:51, SEQ ID NO:52, SEQ ID NO:53, SEQ ID NO:54, SEQ ID NO:55, SEQ ID NO:107, SEQ ID NO:108, SEQ ID NO:109, SEQ ID NO:110, SEQ ID NO:111, SEQ ID NO:112, SEQ ID NO:113, SEQ ID NO:114 или SEQ ID NO:115. Более предпочтительно PTH молекула или PTH составляющая имеет последовательность SEQ ID NO:50, SEQ ID NO:51, SEQ ID NO:52, SEQ ID NO:110, SEQ ID NO:111 или SEQ ID NO:112.

В одном варианте выполнения настоящего изобретения PTH молекула или PTH составляющая имеет последовательность SEQ ID NO:50.

В другом варианте выполнения настоящего изобретения PTH молекула или PTH составляющая имеет последовательность SEQ ID NO:52.

В другом варианте выполнения настоящего изобретения PTH молекула или PTH составляющая имеет последовательность SEQ ID NO:110.

В другом варианте выполнения настоящего изобретения PTH молекула или PTH составляющая имеет последовательность SEQ ID NO:111.

В другом варианте выполнения настоящего изобретения PTH молекула или PTH составляющая имеет последовательность SEQ ID NO:112.

Наиболее предпочтительно PTH молекула или PTH составляющая имеет последовательность SEQ ID NO:51.

В одном варианте выполнения настоящего изобретения PTH соединение контролируемого высвобождения является нерастворимым в воде.

Предпочтительно, нерастворимое в воде PTH соединение контролируемого высвобождения выбрано из группы, состоящей из кристаллов, наночастиц, микрочастиц, наносфер и микросфер.

В одном варианте выполнения настоящего изобретения нерастворимое в воде PTH соединение контролируемого высвобождения представляет собой кристалл, содержащий по меньшей мере одну PTH молекулу или PTH составляющую.

В другом варианте выполнения настоящего изобретения нерастворимое в воде PTH соединение контролируемого высвобождения представляет собой наночастицу, содержащую по меньшей мере одну PTH молекулу или PTH составляющую.

В другом варианте выполнения настоящего изобретения нерастворимое в воде PTH соединение контролируемого высвобождения представляет собой микрочастицу, содержащую по меньшей мере одну PTH молекулу или PTH составляющую.

В другом варианте выполнения настоящего изобретения нерастворимое в воде PTH соединение контролируемого высвобождения представляет собой наносферу, содержащую по меньшей мере одну PTH молекулу или PTH составляющую.

В другом варианте выполнения настоящего изобретения нерастворимое в воде PTH соединение контролируемого высвобождения представляет собой микросферу, содержащую по меньшей мере одну PTH молекулу или PTH составляющую.

В одном варианте выполнения настоящего изобретения нерастворимое в воде PTH соединение контролируемого высвобождения представляет собой везикулу, содержащую по меньшей мере одну PTH молекулу или PTH составляющую. Предпочтительно, такая везикула, содержащая по меньшей мере одну PTH молекулу или PTH составляющую, представляет собой мицеллу, липосому или полимерсому.

В одном варианте выполнения настоящего изобретения нерастворимое в воде PTH соединение контролируемого высвобождения представляет собой мицеллу, содержащую по меньшей мере одну PTH молекулу или PTH составляющую.

В другом варианте выполнения настоящего изобретения нерастворимое в воде PTH соединение контролируемого высвобождения представляет собой липосому, содержащую по меньшей мере одну PTH молекулу или PTH составляющую. Предпочтительно, такая липосома выбрана из группы, состоящей из аквасом; неионных поверхностно-активных везикул, как например ниосомы и прониосомы; катионные липосомы, такие как LeciPlex; трансферсомы; этосомы; уфасомы; сфингосомы; и фармакосомы.

В другом варианте выполнения настоящего изобретения нерастворимое в воде PTH соединение контролируемого высвобождения представляет собой полимерсому, содержащую по меньшей мере одну PTH молекулу или PTH составляющую.

В другом варианте выполнения настоящего изобретения нерастворимое в воде PTH соединение контролируемого высвобождения содержит по меньшей мере одну PTH молекулу, нековалентно внедренную в нерастворимый в воде полимер. Предпочтительно, такой нерастворимый в воде полимер содержит полимер, выбранный из группы, состоящей из 2-метакрилоил-оксиэтила фосфоилхолинов, поли(акриловых кислот), поли(акрилатов), поли(акриламидов), поли(алкилокси) полимеров, поли(амидов), поли(амидоаминов), поли(аминокислот), поли(ангидридов), поли(аспартамидов), поли(масляных кислот), поли(гликолевых кислот), полибутилентерефталатов, поли(капролактонов), поли(карбонатов), поли(цианоакрилатов), поли(диметилакриламидов), поли(сложных эфиров), поли(этиленов), поли(этиленгликолей), поли(этиленоксидов), поли(этилфосфатов), поли(этилоксазолинов), поли(гликолевых кислот), поли(гидроксиэтилакрилатов), поли(гидроксиэтил-оксазолинов), поли(гидроксипропил метакрилатов), поли(гидроксипропилоксазолинов), поли(иминокарбонатов), поли(молочных кислот), поли(сополимеров молочных и гликолевых кислот), поли(метакриламидов), поли(метакрилатов), поли(метилоксазолинов), поли(органофосфазенов), поли(ортосложных эфиров), поли(оксазолинов), поли(пропиленгликолей), поли(силоксанов), поли(уретанов), поли(виниловых спиртов), поли(виниламинов), поли(винилметиловых простых эфиров), поли(винилпирролидонов), силиконов, целлюлоз, карбометилцеллюлоз, гидроксипропил метилцеллюлоз, хитинов, хитозанов, декстранов, декстринов, желатинов, гиалуроновых кислот и производных, функционализированных гиалуроновых кислот, маннанов, пектинов, рамногалактуронанов, крахмалов, гидроксиалкил крахмалов, гидроксиэтил крахмалов и других полимеров на основе углеводов, ксиланов и их сополимеров.

В предпочтительном варианте выполнения настоящего изобретения нерастворимое в воде PTH соединение контролируемого высвобождения содержит по меньшей мере одну PTH молекулу, нековалентно внедренную в поли(сополимер молочной и гликолевой кислоты) (PLGA).

В другом варианте выполнения настоящего изобретения нерастворимое в воде PTH соединение контролируемого высвобождения содержит по меньшей мере одну PTH составляющую, ковалентно и обратимо конъюгированную с нерастворимым в воде полимером. Предпочтительно такой нерастворимый в воде полимер содержит полимер содержит полимер, выбранный из группы, состоящей из 2-метакрилоил-оксиэтила фосфоилхолинов, поли(акриловых кислот), поли(акрилатов), поли(акриламидов), поли(алкилокси) полимеров, поли(амидов), поли(амидоаминов), поли(аминокислот), поли(ангидридов), поли(аспартамидов), поли(масляных кислот), поли(гликолевых кислот), полибутилентерефталатов, поли(капролактонов), поли(карбонатов), поли(цианоакрилатов), поли(диметилакриламидов), поли(сложных эфиров), поли(этиленов), поли(этиленгликолей), поли(этиленоксидов), поли(этилфосфатов), поли(этилоксазолинов), поли(гликолевых кислот), поли(гидроксиэтилакрилатов), поли(гидроксиэтил-оксазолинов), поли(гидроксипропил метакрилатов), поли(гидроксипропилоксазолинов), поли(иминокарбонатов), поли(молочных кислот), поли(сополимеров молочных и гликолевых кислот), поли(метакриламидов), поли(метакрилатов), поли(метилоксазолинов), поли(органофосфазенов), поли(ортосложных эфиров), поли(оксазолинов), поли(пропиленгликолей), поли(силоксанов), поли(уретанов), поли(виниловых спиртов), поли(виниламинов), поли(винилметиловых простых эфиров), поли(винилпирролидонов), силиконов, целлюлоз, карбометилцеллюлоз, гидроксипропил метилцеллюлоз, хитинов, хитозанов, декстранов, декстринов, желатинов, гиалуроновых кислот и производных, функционализированных гиалуроновых кислот, маннанов, пектинов, рамногалактуронанов, крахмалов, гидроксиалкил крахмалов, гидроксиэтил крахмалов и других полимеров на основе углеводов, ксиланов и их сополимеров.

В одном варианте выполнения настоящего изобретения такое нерастворимое в воде PTH соединение контролируемого высвобождения представляет собой соединение, содержащее конъюгат D-L, где

-D представляет собой PTH составляющую; и

-L содержит обратимую линкерную составляющую пролекарства -L¹-, где составляющая -L¹- соединена с PTH составляющей -D через функциональную группу PTH;

где -L¹- замещена -L²-Z’ и необязательно дополнительно замещена; где

-L²- представляет собой простую химическую связь или спейсерную составляющую; и

-Z’ представляет собой нерастворимую в воде составляющую носителя.

Понятно, что множество составляющих -L²-L¹-D соединено с нерастворимым в воде носителем -Z’, и что такие PTH соединения контролируемого высвобождения представляют собой PTH пролекарства, более конкретно связанные с носителем PTH пролекарства.

Предпочтительные варианты для -D, -L¹-, -L²- и -Z' описаны ниже.

В предпочтительном варианте выполнения настоящего изобретения PTH соединение контролируемого высвобождения является растворимым в воде.

В предпочтительном варианте выполнения настоящего изобретения такое растворимое в воде PTH соединение контролируемого высвобождения представляет собой соединение формулы (Ia) или (Ib) или его фармацевтически приемлемую соль

(Ia)

(Ib),

где

-D представляет собой PTH составляющую;

-L¹- представляет собой обратимую линкерную составляющую пролекарства, обратимо или ковалетно соединенную с PTH составляющей -D через функциональную группу PTH;

-L²- представляет собой простую химическую связь или спейсерную составляющую;

-Z представляет собой растворимую в воде составляющую носителя;

x представляет собой целое число, выбранное из группы, состоящей из 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 или 16; и

y представляет собой целое число, выбранное из группы, состоящей из 1, 2, 3, 4 и 5.

Понятно, что соединения формулы (Ia) и (Ib) представляют собой PTH пролекарства, более конкретно растворимые в воде PTH пролекарства.

Предпочтительно, -D имеет последовательность SEQ ID NO:47, SEQ ID NO:48, SEQ ID NO:49, SEQ ID NO:50, SEQ ID NO:51, SEQ ID NO:52, SEQ ID NO:53, SEQ ID NO:54, SEQ ID NO:55, SEQ ID NO:107, SEQ ID NO:108, SEQ ID NO:109, SEQ ID NO:110, SEQ ID NO:111, SEQ ID NO:112, SEQ ID NO:113, SEQ ID NO:114 или SEQ ID NO:115. Более предпочтительно -D имеет последовательность SEQ ID NO:50, SEQ ID NO:51, SEQ ID NO:52, SEQ ID NO:110, SEQ ID NO:111 или SEQ ID NO:112.

В одном варианте выполнения настоящего изобретения -D имеет последовательность SEQ ID NO:50.

В другом варианте выполнения настоящего изобретения -D имеет последовательность SEQ ID NO:52.

В другом варианте выполнения настоящего изобретения -D имеет последовательность SEQ ID NO:110.

В другом варианте выполнения настоящего изобретения -D имеет последовательность SEQ ID NO:111.

В другом варианте выполнения настоящего изобретения -D имеет последовательность SEQ ID NO:112.

Наиболее предпочтительно -D имеет последовательность SEQ ID NO:51.

Составляющая -L¹- либо конъюгирована с функциональной группой боковой цепи остатка аминокислоты -D, с N-концевой аминовой функциональной группой или с C-концевой карбоксильной функциональной группой -D, либо с атомом азота основной полипептидной цепи -D. Присоединение либо к N-концу, либо к C-концу может быть либо непосредственно через соответствующую аминовую или карбоксильную функциональную группу, соответственно, либо не напрямую, когда спейсерная составляющая сначала конъюгируется с аминовой или карбоксильной функциональной группой, с которой коъюгирована спейсерная составляющая -L¹-.

Предпочтительно, аминокислотный остаток PTH, с которым -L¹- конъюгирована, содержит функциональную группу, выбранную из группы, состоящей из карбоновой кислоты, первичного и вторичного амина, малеимида, тиола, сульфоновой кислоты, карбоната, карбамата, гидроксила, альдегида, кетона, гидразина, изоцианата, изотиоцианата, фосфорной кислоты, фосфоновой кислоты, галоацетила, алкилгалогенида, акрилоила, арилфторида, гидроксиламина, сульфата, дисульфида, винилсульфона, винилкетона, диазоалкана, оксирана, гуанидина и азиридина. Даже более предпочтительно аминокислотный остаток PTH, с которым -L¹- конъюгирована, содержит функциональную группу, выбранную из группы, состоящей из гидроксила, первичного и вторичного амина и гуанидина. Даже более предпочтительно аминокислотный остаток PTH, с которым -L¹- конъюгирована, содержит функциональную группу первичного или вторичного амина. Наиболее предпочтительно аминокислотный остаток PTH, с которым -L¹- конъюгирована, содержит функциональную группу первичного амина.

Если составляющая -L¹- конъюгирована с функциональной группой боковой цепи аминокислотного остатка PTH указанный аминокислотный остаток выбран из группы, состоящей из протеогенных аминокислотных остатков и непротеогенных аминокислотных остатков.

В одном варианте выполнения настоящего изобретения -L¹- конъюгирована с функциональной группой боковой цепи непротеогенного аминокислотного остатка PTH. Понятно, что такая непротеогенная аминокислота не обнаруживается в последовательности природного PTH или его фрагментов, и что она может присутствовать только в вариантах и производных PTH.

В другом варианте выполнения настоящего изобретения -L¹- конъюгирована с функциональной группой боковой цепи остатка протеогенной кислоты в PTH. Предпочтительно, указанная аминокислота выбрана из группы, состоящей из состоящей из гистидина, лизина, триптофана, серина, треонина, тирозина, аспарагиновой кислоты, глутаминовой кислоты и аргинина. Даже более предпочтительно указанная аминокислота выбрана из группы, состоящей из состоящей из лизина, аспарагиновой кислоты, аргинина и серина. Даже более предпочтительно указанная аминокислота выбрана из группы, состоящей из состоящей из лизина, аргинина и серина.

В одном варианте выполнения настоящего изобретения -L¹- конъюгирована с функциональной группой боковой цепи гистидина PTH.

В другом варианте выполнения настоящего изобретения -L¹- конъюгирована с функциональной группой боковой цепи лизина PTH.

В другом варианте выполнения настоящего изобретения -L¹- конъюгирована с функциональной группой боковой цепи триптофана PTH.

В другом варианте выполнения настоящего изобретения -L¹- конъюгирована с функциональной группой боковой цепи серина PTH.

В другом варианте выполнения настоящего изобретения -L¹- конъюгирована с функциональной группой боковой цепи треонина PTH.

В другом варианте выполнения настоящего изобретения -L¹- конъюгирована с функциональной группой боковой цепи тирозина PTH.

В другом варианте выполнения настоящего изобретения -L¹- конъюгирована с функциональной группой боковой цепи аспарагиновой кислоты PTH.

В другом варианте выполнения настоящего изобретения -L¹- конъюгирована с функциональной группой боковой цепи глутаминовой кислоты PTH.

В другом варианте выполнения настоящего изобретения -L¹- конъюгирована с функциональной группой боковой цепи аргинина PTH.

Понятно, что не каждая составляющая PTH может содержать все эти аминокислотные остатки.

В предпочтительном варианте выполнения настоящего изобретения -L¹- конъюгирована с N-концевой аминовой функциональной группой PTH, лио непосредственно через соответствующую аминовую функциональную группу, либо не напрямую, когда спейсерная составляющая сначала конъюгирована с аминовой функциональной группой, с которой конъюгирована спейсерная составляющая -L¹-. Даже более предпочтительно, -L¹- напрямую конъюгирована с N-концевой аминовой функциональной группой PTH.

В равно предпочтительном варианте выполнения настоящего изобретения - -L¹- конъюгирована с С-концевой функциональной группой PTH либо непосредственно через соответствующую карбоксильную функциональную группу, либо не напрямую, когда спейсерная составляющая сначала конъюгирована с карбоксильной функциональной группой, с которой конъюгирована спейсерная составляющая -L¹-.

Наиболее предпочтительно L¹- непосредственно конъюгировна с N-концевой аминовой функциональной группой PTH.

Составляющая -L¹- может быть соединена с -D через любой тип связи, при условии, что она является обратимой. Предпочтительно, -L¹- соединена с -D через связь, выбранную из группы, состоящей из амида, сложного эфира, карбамата, ацеталя, аминаля, имина, оксима, гидразона, дисульфида и ацилгуанидина. Даже более предпочтительно -L¹- соединена с -D через связь, выбранную из группы, состоящей из амида, сложного эфира, карбамата и ацилгуанидина. Понятно, что некоторые из этих связей сами по себе не являются обратимыми, но в настоящем изобретении соседние группы, содержащиеся в L¹, делают эти связи обратимыми.

В одном варианте выполнения настоящего изобретения -L¹- соединена с -D через простоэфирную связь.

В другом варианте выполнения настоящего изобретения -L¹- соединена с -D через карбаматную связь.

В другом варианте выполнения настоящего изобретения -L¹- соединена с -D через ацилгуанидиновую связь.

В предпочтительном варианте выполнения настоящего изобретения-L¹- соединена с -D через амидную связь.

Составляющая -L¹- представляет собой обратимый линкер пролекарства, из которого лекарственное средство, т.е. PTH, высвобождается в его свободной форме, т.е. представляет собой бесследный линкер пролекарства. Подходящие пролекарственные линкеры известны в данной области техники, как например обратимые линкерные составляющие пролекарства, раскрываются в WO 2005/099768 A2, WO 2006/136586 A2, WO 2011/089216 A1 и WO 2013/024053 A1, которые включены в настоящую заявку посредством ссылки.

В другом варианте выполнения настоящего изобретения -L¹- представляет собой обратимый пролекарственный линкер, как описано в WO 2011/012722 A1, WO 2011/089214 A1, WO 2011/089215 A1, WO 2013/024052 A1 и WO 2013/160340 A1, которые включены в настоящую заявку посредством ссылки.

Особенно предпочтительная составляющая -L¹- раскрывается в WO 2009/095479 A2. Соответственно, в предпочтительном варианте выполнения настоящего изобретения составляющая -L¹- имеет формулу (II):

,

где пунктирная линия обозначает присоединение к атому азота, гидроксилу или тиолу составляющей -D, которая представляет собой PTH составляющую;

-X- выбран из группы, состоящей из -C(R⁴R^4a)-; -N(R⁴)-; -O-; -C(R⁴R^4a)-C(R⁵R^5a)-; -C(R⁵R^5a)-C(R⁴R^4a)-; -C(R⁴R^4a)-N(R⁶)-; -N(R⁶)-C(R⁴R^4a)-; -C(R⁴R^4a)-O-; -O-C(R⁴R^4a)-; и -C(R⁷R^7a)-;

X¹ выбран из группы, состоящей из C; и S(O);

-X²- выбран из группы, состоящей из -C(R⁸R^8a)-; и -C(R⁸R^8a)-C(R⁹R^9a)-;

=X³ выбран из группы, состоящей из=O;=S; и=N-CN;

-R¹, -R^1a, -R², -R^2a, -R⁴, -R^4a, -R⁵, -R^5a, -R⁶, -R⁸, -R^8a, -R⁹, и -R^9a независимо выбраны из группы, состоящей из -H; и C_1-6 алкила;

-R³, и -R^3a независимо выбраны из группы, состоящей из -H; и C_1-6 алкила, при условии, что в случае, если один из -R³, -R^3a или оба отличны от водорода, они соединены с N, к которому они присоединены через SP³-гибридизованный атом углерода;

-R⁷ выбран из группы, состоящей из -N(R¹⁰R^10a); и -NR¹⁰-(C=O)-R¹¹;

-R^7a, -R¹⁰, -R^10a, и -R¹¹ независимо друг от друга выбраны из группы, состоящей из -H; и C_1-6 алкила;

необязательно, одна или более из пар -R^1a/-R^4a, -R^1a/-R^5a, -R^1a/-R^7a, -R^4a/-R^5a, и -R^8a/-R^9a образуют химическую связь;

необязательно, одна или более из пар -R¹/-R^1a, -R²/-R^2a, -R⁴/-R^4a, -R⁵/-R^5a, -R⁸/-R^8a,

и -R⁹/-R^9a соединяются вместе с атомом, к которому они присоединены, с образованием C_3-10 циклоалкила; или 3-10-ти членного гетероциклила;

необязательно, одна или более из пар -R¹/-R⁴, -R¹/-R⁵, -R¹/-R⁶, -R¹/-R^7a, -R⁴/-R⁵, -R⁴/-R⁶, -R⁸/-R⁹, и -R²/-R³ соединяются вместе с атомами, к которым они присоединены, с образованием кольца A;

необязательно, R³/R^3a соединяются вместе с атомом азота, к которому они присоединены, с образованием 3-10-ти членного гетероцикла;

A выбирают из группы, состоящей из фенила; нафтила; инденила; инданила; тетралинила; C_3-10 циклоалкила; 3-10-ти членного гетероциклила; и 8-11-ти членного гетеробициклила; и

где -L¹- имеет в качестве заместителя -L²-Z или -L²-Z’, и где -L¹- необязательно дополнительно замещена, при условии, что водород, отмеченный звездочкой в формуле (II), не замещен -L²-Z или -L²-Z’ или заместителем;

где

-L²- представляет собой простую химическую связь или спейсер;

-Z представляет собой растворимый в воде носитель; и

-Z’ представляет собой нерастворимый в воде носитель.

Предпочтительно -L¹- формулы (II) имеет в качестве заместителя одну составляющую -L²-Z или -L²-Z’.

В одном варианте выполнения настоящего изобретения -L¹- формулы (II) дополнительно не замещена.

Понятно, что если -R³/-R^3a формулы (II) соединяются вместе с атомом азота, к которому они присоединены, с образованием 3-10-ти членного гетероцикла, только такие 3-10-ти членные гетероциклы могут быть образованы, в которых атомы, непосредственно соединенные с атомом азота, представляют собой SP³-гибридизованные атомы углерода. Другими словами, такой 3-10-ти членный гетероцикл, образованный -R³/-R^3a вместе с атомом азота, с которыми они соединены, имеет следующую структуру:

где

пунктирная линия обозначает присоединение к остатку -L¹-;

кольцо содержит от 3 до 10 атомов, включая по меньшей мере один атом азота; и

R^# и R^## представляют собой SP³-гибридизованный атом углерода.

Также понятно, что 3-10-ти членный гетероцикл может быть дополнительно замещен.

Примерными вариантами выполнения подходящих 3-10-ти членных гетероциклов, образованных -R³/-R^3a формулы (II) вместе с атомом азота, к которому они присоединены, являются следующие:

где

пунктирная линия обозначает присоединение к остатку молекулы; и

-R выбирают из группы, состоящей из -H и C_1-6 алкила.

-L¹- формулы (II) может необязательно быть дополнительно замещенной. В общем, любой заместитель может применяться, до тех пор, пока принцип расщепления не затронут, т.е. водород, помеченный звездочкой в ​​формуле (II), не заменен, а азот составляющей

формулы (II) остается частью первичного, вторичного или третичного амина, т.е. -R³ и R^3a независимо друг от друга представляют собой -H или соединены с –N<через SP³-гибридизованный атом углерода.

В одном варианте выполнения настоящего изобретения -R¹ или R^1a формулы (II) имеет в качестве заместителя -L²-Z или L²-Z’. В другом варианте выполнения настоящего изобретения -R² или R^2a формулы (II) имеет в качестве заместителя -L²-Z или L²-Z’. В другом варианте выполнения настоящего изобретения -R³ или R^3a формулы (II) имеет в качестве заместителя -L²-Z или L²-Z’. В другом варианте выполнения настоящего изобретения -R⁴ формулы (II) имеет в качестве заместителя -L²-Z или L²-Z’. В другом варианте выполнения настоящего изобретения -R⁵ или R^5a формулы (II) имеет в качестве заместителя -L²-Z или L²-Z’. В другом варианте выполнения настоящего изобретения -R⁶ формулы (II) имеет в качестве заместителя -L²-Z или L²-Z’. В другом варианте выполнения настоящего изобретения -R⁷ или R^7a формулы (II) имеет в качестве заместителя -L²-Z или L²-Z’. В другом варианте выполнения настоящего изобретения -R⁸ или R^8a формулы (II) имеет в качестве заместителя -L²-Z или L²-Z’. В другом варианте выполнения настоящего изобретения -R⁹ или R^9a формулы (II) имеет в качестве заместителя -L²-Z или L²-Z’. В другом варианте выполнения настоящего изобретения -R¹⁰ имеет в качестве заместителя -L²-Z или -L²-Z’. В другом варианте выполнения настоящего изобретения -R¹¹ имеет в качестве заместителя -L²-Z или -L²-Z’.

Предпочтительно, -X- формулы (II) выбран из группы, состоящей из -C(R⁴R^4a)-, -N(R⁴)- и -C(R⁷R^7a)-.

В одном варианте выполнения настоящего изобретения -X- формулы (II) представляет собой -C(R⁴R^4a)-.

В одном предпочтительном варианте выполнения настоящего изобретения- X - формулы (II) представляет собой -C(R⁷R^7a)-.

Предпочтительно, -R⁷ формулы (II) представляет собой -NR¹⁰-(C=O)-R¹¹.

Предпочтительно, -R^7a формулы (II) выбран из H, метила и этила. Наиболее предпочтительно -R^7a формулы (II) представляет собой -H.

Предпочтительно, -R¹⁰ выбран из H, метила и этила. Наиболее предпочтительно -R¹⁰ представляет собой метил.

Предпочтительно, -R¹¹ выбран из H, метила и этила. Наиболее предпочтительно -R¹¹ представляет собой -H.

Предпочтительно, -R¹¹ замещен -L²-Z или -L²-Z’.

В другом предпочтительном варианте выполнения настоящего изобретения -X- формулы (II) представляет собой -N(R⁴)-.

Предпочтительно, -R⁴ выбран из группы, состоящей из H, метила и этила. Предпочтительно, -R⁴ представляет собой -H.

Предпочтительно, X¹ формулы (II) представляет собой C.

Предпочтительно,=X³ формулы (II) представляет собой=O.

Предпочтительно, -X²- формулы (II) представляет собой -C(R⁸R^8a)-.

Предпочтительно -R⁸ и -R^8a формулы (II) независимо выбраны из группы, состоящей из H, метила и этила. Более предпочтительно по меньшей мере один из -R⁸ и -R^8a формулы (II) представляет собой -H. Даже более предпочтительно как -R⁸, так и -R^8a формулы (II) представляет собой -H.

Предпочтительно, -R¹ и -R^1a формулы (II) независимо выбраны из группы, состоящей из H, метила и этила.

В одном предпочтительном варианте выполнения настоящего изобретения по меньшей мере один из -R¹ и -R^1a формулы (II) представляет собой -H, более предпочтительно оба -R¹ и -R^1a формулы (II) представляют собой -H.

В другом предпочтительном варианте выполнения настоящего изобретения по меньшей мере один из -R¹ и -R^1a формулы (II) представляет собой метил, более предпочтительно оба -R¹ и R^1a формулы (II) представляют собой -метил.

Предпочтительно, -R² и R^2a формулы (II) независимо выбраны из группы, состоящей из H, метила и этила. Более предпочтительно, по меньшей мере один из -R² и R^2a формулы (II) представляет собой -H. Даже более предпочтительно оба -R² и R^2a формулы (II) представляют собой -H.

Предпочтительно, -R³ и R^3a формулы (II) независимо выбраны из группы, состоящей из H, метила, этила, пропила и бутила.

В одном предпочтительном варианте выполнения настоящего изобретения по меньшей мере один из -R³ и -R^3a формулы (II) представляет собой метил, более предпочтительно -R³ формулы (II) представляет собой метил и R^3a формулы (II) представляет собой -H.

В другом предпочтительном варианте выполнения настоящего изобретения -R³ и -R^3a формулы (II) оба представляют собой -H.

Предпочтительно, -D соединена с -L¹- через атом азота посредством образования амидной связи.

В одном предпочтительном варианте выполнения настоящего изобретения составляющая -L¹- имеет формулу (IIa-i):

(IIa-i),

где

где пунктирная линия обозначает присоединение к атому азота составляющей D, которая представляет собой PTH составляющую, путем образования амидной связи;

-R¹, -R^1a, -R², -R^2a, -R³, -R^3a, -R⁷, -R^7a и -X²- имеют значения, как определено в формуле (II); и

где -L¹- замещена -L²-Z или L²-Z’, и где -L¹- необязательно дополнительно замещена, при условии, что водород, отмеченный звездочкой в формуле (IIa-i) не замещен -L²-Z или -L²-Z’ или заместителем.

Понятно, что в случае, когда один из -R³, -R^3a формулы (IIa-i) или оба отличны от -H, они соединены с N, к которому они присоединены через sp³-гибридизованный атом углерода.

Предпочтительно -L¹- формулы (IIa-i) замещена одной составляющей -L²-Z или -L²-Z’.

Предпочтительно составляющая -L¹- формулы (IIa-i) дополнительно не замещена.

Предпочтительно, -R¹ и R^1a формулы (IIa-i) независимо выбраны из группы, состоящей из H, метила и этила. Более предпочтительно, по меньшей мере один из -R¹ и -R^1a формулы (IIa-i) представляет собой -H. Даже более предпочтительно оба -R¹ и -R^1a формулы (IIa-i) представляют собой -H.

Предпочтительно, -R⁷ формулы (IIa-i) представляет собой -NR¹⁰-(C=O)-R¹¹.

Предпочтительно, -R^7a формулы (II-i) выбран из H, метила и этила. Наиболее предпочтительно -R^7a формулы (II-i) представляет собой -H.

Предпочтительно, -R¹⁰ формулы (IIa-i) выбран из H, метила и этила. Наиболее предпочтительно -R¹⁰ формулы (IIa-i) представляет собой метил.

Предпочтительно, -R¹¹ формулы (IIa-i) выбран из H, метила и этила. Наиболее предпочтительно -R¹¹ формулы (IIa-i) представляет собой -H.

Предпочтительно, -R¹¹ формулы (IIa-i) замещен -L²-Z или L²-Z’.

Предпочтительно, -X²- формулы (IIa-i) представляет собой -C(R⁸R^8a)-.

Предпочтительно -R⁸ и -R^8a формулы (IIa-i) независимо выбраны из группы, состоящей из H, метила и этила. Более предпочтительно по меньшей мере один из -R⁸ и -R^8a формулы (IIa-i) представляет собой -H. Даже более предпочтительно оба -R⁸ и -R^8a формулы (IIa-i) представляют собой -H.

Предпочтительно, -R² и -R^2a формулы (IIa-i) независимо выбраны из группы, состоящей из H, метила и этила. Более предпочтительно, по меньшей мере один из -R² и -R^2a формулы (IIa-i) представляет собой -H. Даже более предпочтительно оба -R² и -R^2a формулы (IIa-i) представляют собой -H.

Предпочтительно, -R³ и -R^3a формулы (IIa-i) независимо выбраны из группы, состоящей из H, метила, этила, пропила и бутила. Даже более предпочтительно по меньшей мере один из -R³ и -R^3a формулы (IIa-i) представляет собой метил.

Предпочтительно, -R³ формулы (IIa-i) представляет собой -H, и -R^3a формулы (IIa-i) представляет собой метил.

Более предпочтительно составляющая -L¹- имеет формулу (IIa-ii):

(IIa-ii),

где пунктирная линия обозначает присоединение к атому азота составляющей D, которая представляет собой PTH составляющую, путем образования амидной связи;

-R², -R^2a, -R¹⁰, -R¹¹ и -X²- имеют значения, как определено в формуле (II); и

где -L¹- замещена -L²-Z или L²-Z’ и где -L¹- необязательно дополнительно замещена, при условии, что водород, отмеченный звездочкой в формуле (IIa-ii) не замещен -L²-Z или -L²-Z’ или заместителем.

Понятно, что в случае, когда один из -R³, -R^3a формулы (IIa-ii) или оба отличны от -H, они соединены с N, к которому они присоединены через sp³-гибридизованный атом углерода.

Предпочтительно -L¹- формулы (IIa-ii) замещена одной составляющей -L²-Z или -L²-Z’.

Предпочтительно составляющая -L¹- формулы (IIa-ii) дополнительно не замещена.

Предпочтительно, -X²- формулы (IIa-ii) представляет собой -C(R⁸R^8a)-.

Предпочтительно -R⁸ и -R^8a формулы (IIa-ii) независимо выбраны из группы, состоящей из H, метила и этила. Более предпочтительно по меньшей мере один из -R⁸ и R^8a формулы (IIa-ii) представляет собой -H. Даже более предпочтительно оба -R⁸ и R^8a формулы (IIa-ii) представляют собой -H.

Предпочтительно, -R³ и R^3a формулы (IIa-ii) независимо выбраны из группы, состоящей из H, метила, этила, пропила и бутила. Даже более предпочтительно по меньшей мере один из -R³ и R^3a формулы (IIa-ii) представляет собой метил.

Предпочтительно, -R³ формулы (IIa-ii) представляет собой -H, и R^3a формулы (IIa-ii) представляет собой метил.

Предпочтительно, -R¹⁰ формулы (IIa-ii) выбран из H, метила и этила. Наиболее предпочтительно -R¹⁰ формулы (IIa-ii) представляет собой метил.

Предпочтительно, -R¹¹ формулы (IIa-ii) выбран из H, метила и этила. Наиболее предпочтительно -R¹¹ формулы (IIa-ii) представляет собой -H.

Предпочтительно, -R¹¹ формулы (IIa-ii) замещен -L²-Z или L²-Z’.

В еще более предпочтительном варианте выполнения настоящего изобретения составляющая -L¹- имеет формулу (IIa-ii’):

(IIa-ii’),

где

где пунктирная линия обозначает присоединение к атому азота составляющей D, которая представляет собой PTH составляющую, путем образования амидной связи;

пунктирная линия, отмеченная звездочкой, означает присоединение к -L²-;

-R³, -R^3a, -R¹⁰ и X²- имеют значения, как определено в формуле (II); и

где -L¹- необязательно дополнительно замещена, при условии, что водород, отмеченный звездочкой в формуле (IIa-ii’) не замещен заместителем.

Понятно, что в случае, когда один из -R³, -R^3a формулы (IIa-ii’) или оба отличны от -H, они соединены с N, к которому они присоединены через sp³-гибридизованный атом углерода.

Предпочтительно составляющая -L¹- формулы (IIa-ii’) дополнительно не замещена.

Предпочтительно, -X²- формулы (IIa-ii’) представляет собой -C(R⁸R^8a)-.

Предпочтительно -R⁸ и R^8a формулы (IIa-ii’) независимо выбраны из группы, состоящей из H, метила и этила. Более предпочтительно по меньшей мере один из -R⁸ и R^8a формулы (IIa-ii’) представляет собой -H. Даже более предпочтительно оба -R⁸ и R^8a формулы (IIa-ii’) представляют собой -H.

Предпочтительно, -R³ и R^3a формулы (IIa-ii’) независимо выбраны из группы, состоящей из H, метила, этила, пропила и бутила. Даже более предпочтительно по меньшей мере один из -R³ и R^3a формулы (IIa-ii’) представляет собой метил.

Предпочтительно, -R³ формулы (IIa-ii’) представляет собой -H, и R^3a формулы (IIa-ii’) представляет собой метил.

Предпочтительно, -R¹⁰ формулы (IIa-ii’) выбран из H, метила и этила. Наиболее предпочтительно -R¹⁰ формулы (IIa-ii’) представляет собой метил.

Даже более предпочтительно составляющая -L¹- имеет формулу (IIa-iii):

(IIa-iii),

где пунктирная линия обозначает присоединение к атому азота составляющей D, которая представляет собой PTH составляющую, путем образования амидной связи; и

где -L¹- замещена -L²-Z или -L²-Z’, и где -L¹- необязательно дополнительно замещена, при условии, что водород, отмеченный звездочкой в формуле (IIa-iii) не замещен -L²-Z или -L²-Z’ или заместителем.

Понятно, что в случае, когда один из -R³, -R^3a формулы (IIa-iii) или оба отличны от -H, они соединены с N, к которому они присоединены через sp³-гибридизованный атом углерода.

Предпочтительно -L¹- формулы (IIa-iii) замещена одной составляющей -L²-Z или -L²-Z’.

Предпочтительно составляющая -L¹- формулы (IIa-iii) дополнительно не замещена.

Наиболее предпочтительно составляющая -L¹- имеет формулу (IIa-iii’):

(IIa-iii’),

где

где пунктирная линия обозначает присоединение к атому азота составляющей D, которая представляет собой PTH составляющую, путем образования амидной связи;

пунктирная линия, отмеченная звездочкой, означает присоединение к -L²-;

-R², -R^2a, -R³, -R^3a и X²- имеют значения, как определено в формуле (II); и

где -L¹- необязательно дополнительно замещена, при условии, что водород, отмеченный звездочкой в формуле (IIa-iii’) не замещен заместителем.

Понятно, что в случае, когда один из -R³, -R^3a формулы (IIa-iii’) или оба отличны от -H, они соединены с N, к которому они присоединены через sp³-гибридизованный атом углерода.

Предпочтительно составляющая -L¹- формулы (IIa-iii’) дополнительно не замещена.

В другом предпочтительном варианте выполнения настоящего изобретения составляющая -L¹- имеет формулу (IIb-i)

(IIb-i),

где

где пунктирная линия обозначает присоединение к атому азота составляющей D, которая представляет собой PTH составляющую, путем образования амидной связи;

-R¹, -R^1a, -R², -R^2a, -R³, -R^3a, -R⁴ и X²- имеют значения, как определено в формуле (II); и

где -L¹- замещена -L²-Z или -L²-Z’, и где -L¹- необязательно дополнительно замещена, при условии, что водород, отмеченный звездочкой в формуле (IIb-i) не замещен -L²-Z или -L²-Z’ или заместителем.

Понятно, что в случае, когда один из -R³, -R^3a формулы (IIb-i) или оба отличны от -H, они соединены с N, к которому они присоединены через sp³-гибридизованный атом углерода.

Предпочтительно -L¹- формулы (IIb-i) замещена одной составляющей -L²-Z или -L²-Z’.

Предпочтительно составляющая -L¹- формулы (IIb-i) дополнительно не замещена.

Предпочтительно, -R¹ и R^1a формулы (IIb-i) независимо выбраны из группы, состоящей из H, метила и этила. Более предпочтительно, по меньшей мере один из -R¹ и R^1a формулы (IIb-i) представляет собой метил. Даже более предпочтительно оба -R¹ и R^1a формулы (IIb-i) представляют собой -метил.

Предпочтительно, -R⁴ формулы (IIb-i) выбран из группы, состоящей из H, метила и этила. Более предпочтительно, -R⁴ формулы (IIb-i) представляет собой -H.

Предпочтительно, -X²- формулы (IIb-i) представляет собой -C(R⁸R^8a)-.

Предпочтительно -R⁸ и R^8a формулы (IIb-i) независимо выбраны из группы, состоящей из H, метила и этила. Более предпочтительно по меньшей мере один из -R⁸ и R^8a формулы (IIb-i) представляет собой -H. Даже более предпочтительно оба -R⁸ и R^8a формулы (IIb-i) представляют собой -H.

Предпочтительно, -R² и R^2a формулы (IIb-i) независимо выбраны из группы, состоящей из H, метила и этила. Более предпочтительно, по меньшей мере один из -R² и R^2a формулы (IIb-i) представляет собой -H. Даже более предпочтительно оба -R² и R^2a формулы (IIb-i) представляют собой -H.

Предпочтительно, -R³ и R^3a формулы (IIb-i) независимо выбраны из группы, состоящей из H, метила, этила, пропила и бутила. Даже более предпочтительно по меньшей мере один из -R³ и R^3a формулы (IIb-i) представляет собой -H. Даже более предпочтительно оба -R³ и R^3a формулы (IIb-i) представляют собой -H.

Более предпочтительно составляющая -L¹- имеет формулу (IIb-ii):

(IIb-ii),

где пунктирная линия обозначает присоединение к атому азота составляющей D, которая представляет собой PTH составляющую, путем образования амидной связи;

-R², -R^2a, -R³, -R^3a и X²- имеют значения, как определено в формуле (II); и

где -L¹- замещена -L²-Z или -L²-Z’, и где -L¹- необязательно дополнительно замещена, при условии, что водород, отмеченный звездочкой в формуле (IIb-ii) не замещен -L²-Z или -L²-Z’ или заместителем.

Понятно, что в случае, когда один из -R³, -R^3a формулы (IIb-ii) или оба отличны от -H, они соединены с N, к которому они присоединены через sp³-гибридизованный атом углерода.

Предпочтительно -L¹- формулы (IIb-ii) замещена одной составляющей -L²-Z или -L²-Z’.

Предпочтительно составляющая -L¹- формулы (IIb-ii) дополнительно не замещена.

Предпочтительно, -X²- формулы (IIb-ii) представляет собой -C(R⁸R^8a)-.

Предпочтительно -R⁸ и R^8a формулы (IIb-ii) независимо выбраны из группы, состоящей из H, метила и этила. Более предпочтительно по меньшей мере один из -R⁸ и R^8a формулы (IIb-ii) представляет собой -H. Даже более предпочтительно оба -R⁸ и R^8a формулы (IIb-ii) представляют собой -H.

Предпочтительно, -R² и R^2a формулы (IIb-ii) независимо выбраны из группы, состоящей из H, метила и этила. Более предпочтительно, по меньшей мере один из -R² и R^2a формулы (IIb-ii) представляет собой -H. Даже более предпочтительно оба -R² и R^2a формулы (IIb-ii) представляют собой -H.

Предпочтительно, -R³ и R^3a формулы (IIb-ii) независимо выбраны из группы, состоящей из H, метила, этила, пропила и бутила. Даже более предпочтительно по меньшей мере один из -R³ и R^3a формулы (IIb-ii) представляет собой -H. Даже более предпочтительно оба -R³ и R^3a формулы (IIb-ii) представляют собой -H.

Даже более предпочтительно составляющая -L¹- имеет формулу (IIb-ii’):

(IIb-ii’),

где

где пунктирная линия обозначает присоединение к атому азота составляющей D, которая представляет собой PTH составляющую, путем образования амидной связи;

-R², -R^2a, -R³, -R^3a и X²- имеют значения, как определено в формуле (II); и

где -L¹- замещена -L²-Z или L²-Z’, и где -L¹- необязательно дополнительно замещена, при условии, что водород, отмеченный звездочкой в формуле (IIb-ii’) не замещен -L²-Z или -L²-Z’ или заместителем.

Понятно, что в случае, если -R^3a формулы (IIb-ii’) отличен от -H, он соединен с N, к которому он присоединен через sp³-гибридизованный атом углерода.

Предпочтительно составляющая -L¹- формулы (IIb-ii’) дополнительно не замещена.

Предпочтительно, -X²- формулы (IIb-ii’) представляет собой -C(R⁸R^8a)-.

Предпочтительно -R⁸ и -R^8a формулы (IIb-ii’) независимо выбраны из группы, состоящей из -H, метила и этила. Более предпочтительно по меньшей мере один из -R⁸ и -R^8a формулы (IIb-ii’) представляет собой -H. Даже более предпочтительно оба -R⁸ и -R^8a формулы (IIb-ii’) представляют собой -H.

Предпочтительно, -R² и -R^2a формулы (IIb-ii’) независимо выбраны из группы, состоящей из -H, метила и этила. Более предпочтительно, по меньшей мере один из -R² и -R^2a формулы (IIb-ii’) представляет собой -H. Даже более предпочтительно оба -R² и -R^2a формулы (IIb-ii’) представляют собой H.

Предпочтительно, -R^3a формулы (IIb-ii’) выбран из группы, состоящей из -H, метила, этила, пропила и бутила. В одном варианте выполнения настоящего изобретения -R^3a формулы (IIb-ii’) представляет собой -H.

Даже более предпочтительно составляющая -L¹- имеет формулу (IIb-iii):

(IIb-iii),

где

где пунктирная линия обозначает присоединение к атому азота составляющей D, которая представляет собой PTH составляющую, путем образования амидной связи; и

где -L¹- замещена -L²-Z или L²-Z’, и где -L¹- необязательно дополнительно замещена, при условии, что водород, отмеченный звездочкой в формуле (IIb-iii) не замещен -L²-Z или L²-Z’ или заместителем.

Понятно, что в случае, когда один из -R³, -R^3a формулы (IIb-iii) или оба отличны от -H, они соединены с N, к которому они присоединены через sp³-гибридизованный атом углерода.

Предпочтительно -L¹- формулы (IIb-iii) замещена одной составляющей -L²-Z или L²-Z’.

Предпочтительно составляющая -L¹- формулы (IIb-iii) дополнительно не замещена.

Наиболее предпочтительно составляющая -L¹- имеет формулу (IIb-iii’):

(IIb-iii’),

где

где пунктирная линия обозначает присоединение к атому азота составляющей D, которая представляет собой PTH составляющую, путем образования амидной связи;

пунктирная линия, отмеченная звездочкой, обозначает присоединение к -L²-; и

где -L¹- необязательно дополнительно замещена, при условии, что атом водорода, отмеченный звездочкой, в формуле (IIb-iii’) не замещен -L²-Z или -L²-Z’ или заместителем.

Понятно, что азот, соседний с пунктирной линией, отмеченной звездочкой, в формуле (IIb-iii’) присоединен к -L²- через sp³-гибридизованный атом углерода.

Предпочтительно составляющая -L¹- формулы (IIb-iii’) дополнительно не замещена.

Другая предпочтительная составляющая-L¹- раскрывается в WO2016/020373A1. Соответственно, в другом предпочтительном варианте выполнения настоящего изобретения составляющая -L¹- имеет формулу (III):

(III),

где

пунктирная линия показывает присоединение к первичному или вторичному амину или гидроксилу составляющей D путем образования амидной или сложноэфирной связи, соответственно;

-R¹, -R^1a, -R², -R^2a, -R³ и R^3a независимо друг от друга выбирают из группы, состоящей из -H, -C(R⁸R^8aR^8b), -C(=O)R⁸, -C≡N, -C(=NR⁸)R^8a, -CR⁸(=CR^8aR^8b), -C≡CR⁸ и T;

-R⁴, -R⁵ и R^5a независимо друг от друга выбирают из группы, состоящей из -H, -C(R⁹R^9aR^9b) и T;

a1 и a2 независимо друг от друга представляют собой 0 или 1;

каждый -R⁶, -R^6a, -R⁷, -R^7a, -R⁸, -R^8a, -R^8b, -R⁹, -R^9a, -R^9b независимо друг от друга выбирают из группы, состоящей из -H, галогена, -CN, -COOR¹⁰, -OR¹⁰, -C(O)R¹⁰, -C(O)N(R¹⁰R^10a), -S(O)₂N(R¹⁰R^10a), -S(O)N(R¹⁰R^10a), -S(O)₂R¹⁰, -S(O)R¹⁰, -N(R¹⁰)S(O)₂N(R^10aR^10b), -SR¹⁰, -N(R¹⁰R^10a), -NO₂, -OC(O)R¹⁰, -N(R¹⁰)C(O)R^10a, -N(R¹⁰)S(O)₂R^10a, -N(R¹⁰)S(O)R^10a, -N(R¹⁰)C(O)OR^10a, -N(R¹⁰)C(O)N(R^10aR^10b), -OC(O)N(R¹⁰R^10a), -T, C_1-20 алкила, C_2-20 алкенила и C_2-20 алкинила; где -T, C_1-20 алкил, C_2-20 алкенил и C_2-20 алкинил необязательно замещены одним или более заместителями -R¹¹, которые являются одинаковыми или различными, и где C_1-20 алкил, C_2-20 алкенил и C_2-20 алкинил необязательно прерваны одной или более группами, выбранными из группы, состоящей из -T-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(R¹²)-, -S(O)₂N(R¹²)-, -S(O)N(R¹²)-, -S(O)₂-, -S(O)-, -N(R¹²)S(O)₂N(R^12a)-, -S-, -N(R¹²)-, -OC(OR¹²)(R^12a)-, -N(R¹²)C(O)N(R^12a)- и -OC(O)N(R¹²)-;

каждый -R¹⁰, -R^10a, -R^10b независимо выбирают из группы, состоящей из -H, -T, C_1-20 алкила, C_2-20 алкенила и C_2-20 алкинила; где -T, C_1-20 алкил, C_2-20 алкенил и C_2-20 алкинил необязательно замещены одним или более заместителями -R¹¹, которые являются одинаковыми или различными, и где C_1-20 алкил, C_2-20 алкенил и C_2-20 алкинил необязательно прерваны одной или более группами, выбранными из группы, состоящей из -T-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(R¹²)-, -S(O)₂N(R¹²)-, -S(O)N(R¹²)-, -S(O)₂-, -S(O)-, -N(R¹²)S(O)₂N(R^12a)-, -S-, -N(R¹²)-, -OC(OR¹²)(R^12a)-, -N(R¹²)C(O)N(R^12a)- и -OC(O)N(R¹²)-;

каждый T независимо друг от друга выбирают из группы, состоящей из фенила, нафтила, инденила, инданила, тетралинила, C_3-10 циклоалкила, 3-10-ти членного гетероциклила и 8-11-ти членного гетеробициклила; где каждый T независимо необязательно замещен одним или более заместителями -R¹¹, которые являются одинаковыми или различными;

каждый -R¹¹ независимо друг от друга выбирают из галогена, -CN, оксо (=O), -COOR¹³, -OR¹³, -C(O)R¹³, -C(O)N(R¹³R^13a), -S(O)₂N(R¹³R^13a), -S(O)N(R¹³R^13a), -S(O)₂R¹³, -S(O)R¹³, -N(R¹³)S(O)₂N(R^13aR^13b), -SR¹³, -N(R¹³R^13a), -NO₂, -OC(O)R¹³, -N(R¹³)C(O)R^13a, -N(R¹³)S(O)₂R^13a, -N(R¹³)S(O)R^13a, -N(R¹³)C(O)OR^13a, -N(R¹³)C(O)N(R^13aR^13b), -OC(O)N(R¹³R^13a) и C_1-6 алкила; где C_1-6 алкил необязательно замещен одним или более заместителями галоген, которые являются одинаковыми или различными;

каждый -R¹², -R^12a, -R¹³, -R^13a, -R^13b независимо выбирают из группы, состоящей из -H и C_1-6 алкила; где C_1-6 алкил необязательно замещен одним или более заместителями галоген, которые являются одинаковыми или различными;

необязательно, одна или более из пар -R¹/-R^1a, -R²/-R^2a, -R³/-R^3a, -R⁶/-R^6a, -R⁷/-R^7a соединяются вместе с атомом, к которому они присоединены, с образованием C_3-10 циклоалкила или 3-10-ти членного гетероциклила;

необязательно, одна или более из пар -R¹/-R², -R¹/-R³, -R¹/-R⁴, -R¹/-R⁵, -R¹/-R⁶, -R¹/-R⁷, -R²/-R³, -R²/-R⁴, -R²/-R⁵, -R²/-R⁶, -R²/-R⁷, -R³/-R⁴, -R³/-R⁵, -R³/-R⁶, -R³/-R⁷, -R⁴/-R⁵, -R⁴/-R⁶, -R⁴/-R⁷, -R⁵/-R⁶, -R⁵/-R⁷, -R⁶/-R⁷ соединяются вместе с атомами, к которым они присоединены, с образованием кольца A;

A выбирают из группы, состоящей из фенила; нафтила; инденила; инданила; тетралинила; C_3-10 циклоалкила; 3-10-ти членного гетероциклила; и 8-11-ти членного гетеробициклила;

где -L¹- имеет в качестве заместителя -L²-Z или L²-Z’, и где -L¹- необязательно дополнительно замещена;

где

-L²- представляет собой простую химическую связь или спейсер;

-Z представляет собой растворимый в воде носитель; и

-Z’ представляет собой нерастворимый в воде носитель.

Необязательные другие заместители составляющей -L¹- формулы (III) предпочтительно являются такими, как описано выше.

Предпочтительно -L¹- формулы (III) имеет в качестве заместителя одну составляющую -L²-Z или L²-Z’.

В одном варианте выполнения настоящего изобретения -L¹- формулы (III) дополнительно не замещена.

Дополнительные предпочтительные варианты выполнения для -L¹- раскрываются в EP1536334B1, WO2009/009712A1, WO2008/034122A1, WO2009/143412A2, WO2011/082368A2 и US8618124B2, которые включены в настоящую заявку посредством ссылки в полном объеме.

Дополнительные предпочтительные варианты выполнения для -L¹- раскрываются в US8946405B2 и US8754190B2, которые включены в настоящую заявку посредством ссылки в полном объеме. Соответственно, предпочтительная составляющая -L¹- имеет формулу (IV):

(IV),

где

пунктирная линия показывает присоединение к -D, которая представляет собой PTH составляющую, и где присоединение осуществляется через функциональную группу составляющей -D, выбранную из группы, состоящей из -OH, -SH и NH₂;

m равно 0 или 1;

по меньшей мере один или оба из -R¹ и R² выбирается/независимо друг от друга выбирают из группы, состоящей из -CN, -NO₂, необязательно замещенного арила, необязательно замещенного гетероарила, необязательно замещенного алкенила, необязательно замещенного алкинила, -C(O)R³, -S(O)R³, -S(O)₂R³ и -SR⁴,

один и только один из -R¹ и R² выбирают из группы, состоящей из -H, необязательно замещенного алкила, необязательно замещенного арилалкила и необязательно замещенного гетероарилалкила;

-R³ выбирают из группы, состоящей из -H, необязательно замещенного алкила, необязательно замещенного арила, необязательно замещенного арилалкила, необязательно замещенного гетероарила, необязательно замещенного гетероарилалкила, -OR⁹ и N(R⁹)₂;

-R⁴ выбирают из группы, состоящей из необязательно замещенного алкила, необязательно замещенного арила, необязательно замещенного арилалкила, необязательно замещенного гетероарила и необязательно замещенного гетероарилалкила;

каждый -R⁵ независимо выбирают из группы, состоящей из -H, необязательно замещенного алкила, необязательно замещенного алкенилалкила, необязательно замещенного алкинилалкила, необязательно замещенного арила, необязательно замещенного арилалкила, необязательно замещенного гетероарила и необязательно замещенного гетероарилалкила;

-R⁹ выбирают из группы, состоящей из -H и необязательно замещенного алкила;

-Y- отсутствует, и –X- представляет собой -O- или S-; или

-Y- представляет собой -N(Q)CH₂-, и X- представляет собой -O-;

Q выбирают из группы, состоящей из необязательно замещенного алкила, необязательно замещенного арила, необязательно замещенного арилалкила, необязательно замещенного гетероарила и необязательно замещенного гетероарилалкила;

необязательно, -R¹ и R² могут соединяться с образованием 3-8-членного кольца; и

необязательно, оба -R⁹ вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют гетероциклическое кольцо;

где -L¹- имеет в качестве заместителя -L²-Z или L²-Z’, и где -L¹- необязательно дополнительно замещена;

где

-L²- представляет собой простую химическую связь или спейсер;

-Z представляет собой растворимый в воде носитель; и

-Z’ представляет собой нерастворимый в воде носитель.

Только в контексте формулы (IV) применяемые термины имеют следующие значения:

Термин “алкил”, как применяется в настоящей заявке, включает линейные, разветвленные или циклические насыщенные углеводородные группы, имеющие от 1 до 8 атомов углерода, или в некоторых вариантах выполнения настоящего изобретения от 1 до 6 или от 1 до 4 атомов углерода.

Термин “алкокси” включает алкильные группы, связанные с кислородом, включая метокси, этокси, изопропокси, циклопропокси, циклобутокси и подобное.

Термин “алкенил” включает неароматические ненасыщенные углеводороды с двойными связями углерод-углерод.

Термин “алкинил” включает неароматические ненасыщенные углеводороды с тройными связями углерод-углерод.

Термин “арил” включает ароматические углеводородные группы, имеющие от 6 до 18 атомов углерода, предпочтительно от 6 до 10 атомов углерода, включая группы, такие как фенил, нафтил и антраценил. Термин “гетероарил” включает ароматические кольца, содержащие от 3 до 15 атомов углерода, содержащие по меньшей мере один N, O или S атом, предпочтительно от 3 до 7 атомов углерода, содержащие по меньшей мере один N, O или S атом, включая группы, такие как пирролил, пиридил, пиримидинил, имидазолил, оксазолил, изооксазолил, тиазолил, изотиазолил, хинолил, индолил, инденил и подобное.

В некоторых случаях, алкенильные, алкинильные, арильные или гетероарильные составляющие могут быть соединены с оставшейся частью молекулы через алкиленовую связь. При этих обстоятельствах заместитель будет называться алкенилалкил, алкинилалкил, арилалкил или гетероарилалкил, что указывает на то, что алкиленовая составляющая находится между алкенилом, алкинилом, арилом или гетероарилом и молекулой, с которой связан алкенил, алкинил, арил или гетероарил.

Термин “галоген” включает бром, фтор, хлор и иод.

Термин “гетероциклическое кольцо” относится к 4 - 8-членному ароматическому или неароматическому кольцу, содержащему от 3 до 7 атомов углерода и по меньшей мере один N, O, или S атом. Примерами являются пиперидинил, пиперазинил, тетрагидропиранил, пирролидин и тетрагидрофуранил, а также примерные группы, приведенные вые для термина “гетероарил”.

Когда кольцевая система необязательно замещена, подходящие заместители выбирают из группы, состоящей из алкила, алкенила, алкинила или дополнительного кольца, где каждый необязательно дополнительно замещен. Необязательные заместители в любой группе, включая вышеуказанные, включают гало, нитро, циано, OR, -SR, -NR₂, -OCOR, -NRCOR, -COOR, -CONR₂, -SOR, -SO₂R, -SONR₂, -SO₂NR₂, где каждый R независимо представляет собой алкил, алкенил, алкинил, арил или гетероарил, или две R группы, взятые вместе с атомами, к которым они присоединены, образуют кольцо.

Предпочтительно -L¹- формулы (IV) имеет в качестве заместителя одну составляющую -L²-Z или L²-Z’.

Дополнительный предпочтительный вариант -L¹- раскрывается в WO2013/036857A1, который включен в настоящую заявку в полном объеме посредством ссылки. Соответственно, предпочтительная составляющая -L¹- имеет формулу (V):

(V),

где

пунктирная линия показывает присоединение к -D, которая представляет собой

PTH составляющую, и где присоединение осуществляется через аминную функциональную группу составляющей -D;

-R¹ выбирают из группы, состоящей из необязательно замещенного C₁-C₆ линейного, разветвленного, или циклического алкила; необязательно замещенного арила; необязательно замещенного гетероарила; алкокси; и NR⁵₂;

-R² выбирают из группы, состоящей из -H; необязательно замещенного C₁-C₆ алкила; необязательно замещенного арила; и необязательно замещенного гетероарила;

-R³ выбирают из группы, состоящей из -H; необязательно замещенного C₁-C₆ алкила; необязательно замещенного арила; и необязательно замещенного гетероарила;

-R⁴ выбирают из группы, состоящей из -H; необязательно замещенного C₁-C₆ алкила; необязательно замещенного арила; и необязательно замещенного гетероарила;

каждый -R⁵ независимо друг от друга выбирают из группы, состоящей из -H; необязательно замещенного C₁-C₆ алкила; необязательно замещенного арила; и необязательно замещенного гетероарила; или взятые вместе два -R⁵ могут представлять собой циклоалкил или циклогетероалкил;

где -L¹- имеет в качестве заместителя -L²-Z или L²-Z’, и где -L¹- необязательно дополнительно замещена;

где

-L²- представляет собой простую химическую связь или спейсер;

-Z представляет собой растворимый в воде носитель; и

-Z’ представляет собой нерастворимый в воде носитель.

Только в контексте формулы (V) применяемые термины имеют следующие значения:

“Алкил”, “алкенил” и “алкинил” включают линейные, разветвленные или циклические углеводородные группы, имеющие от 1 до 8 атомов углерода или 1-6 атомов углерода или 1-4 атомов углерода, где алкилом является насыщенный углеводород, алкенил включает одну или более двойных связей углерод-углерод, и алкинил включает одну или более тройных связей углерод-углерод. Если иного не указано, они содержат 1-6 атомов углерода.

“Арил” включает ароматические углеводородные группы, имеющие от 6 до 18 атомов углерода, предпочтительно 6-10 атомов углерода, включая группы, такие как фенил, нафтил и антрацен. “Гетероарил” включает ароматические кольца, содержащие 3-15 атомов углерода, содержащие по меньшей мере один N, O или S атом, предпочтительно 3-7 атомов углерода, содержащие по меньшей мере один N, O или S атом, включая группы, такие как пирролил, пиридил, пиримидинил, имидазолил, оксазолил, изооксазолил, тиазолил, изотиазолил, хинолил, индолил, инденил и подобное.

Термин “замещенный” означает алкильную, алкенильную, алкинильную, арильную или гетероарильную группу, включающую одну или более групп заместителей вместо одного или более атомов водорода. Заместители могут в общем быть выбраны из галогена, включая F, Cl, Br и I; низшего алкила, включая линейный, разветвленный и циклический; низшего галоалкила, включая фторалкил, хлоралкил, бромалкил и иодалкил; ОН; низшего алкокси, включая линейные, разветвленные и циклические; SH; низшего алкилтио, включая линейный, разветвленный и циклический; амино, алкиламино, диалкиламино, силила, включая алкилсилил, алкоксисилил и арилсилил; нитро; циано; карбонила; карбоновой кислоты, сложного эфира карбоновой кислоты, карбоксильного амида, аминокарбонила; аминоацила; карбамата; мочевины; тиокарбамата; тиомочевины; кетона; сульфона; сульфонамида; арила, включая фенил, нафтил и антраценил; гетероарила, включая 5-ти членные гетероарилы, включая пиррол, имидазол, фуран, тиофен, оксазол, тиазол, изоксазол, изотиазол, тиадиазол, триазол, оксадиазол и тетразол, 6-ти членные гетероарилы, включая пиридин, пиримидин, пиразин, и конденсированные гетероарилы, включая бензофуран, бензотиофен, бензоксазол, бензимидазол, индол, бензотиазол, бензизоксазол и бензизотиазол.

Предпочтительно -L¹- формулы (V) имеет в качестве заместителя одну составляющую -L²-Z или L²-Z’.

Другой предпочтительный вариант -L¹- раскрывается в US7585837B2, который включен в настоящую заявку в полном объеме посредством ссылки. Соответственно, предпочтительная составляющая -L¹- имеет формулу (VI):

где

пунктирная линия показывает присоединение к -D, которая представляет собой PTH составляющую, и где присоединение осуществляется через аминную функциональную группу составляющей -D;

R¹ и R² независимо выбирают из группы, состоящей из водорода, алкила, алкокси, алкоксиалкила, арила, алкарила, аралкила, галогена, нитро, -SO₃Н, -SO₂NHR⁵, амино, аммония, карбоксила, PO₃H₂ и OPO₃H₂;

R³, R⁴ и R⁵ независимо выбирают из группы, состоящей из водорода, алкила и арила;

где -L¹- имеет в качестве заместителя -L²-Z или L²-Z’, и где -L¹- необязательно дополнительно замещена;

где

-L²- представляет собой простую химическую связь или спейсер;

-Z представляет собой растворимый в воде носитель; и

-Z’ представляет собой нерастворимый в воде носитель.

Подходящими заместителями для формулы (VI) являются составляющие алкил (как например C_1-6 алкил), алкенил (как например C_2-6 алкенил), алкинил (как например C_2-6 алкинил), арил (как например фенил), гетероалкил, гетероалкенил, гетероалкинил, гетероарил (как например ароматический 4 - 7 членный гетероцикл) или галоген.

Только в контексте формулы (VI) применяемые термины имеют следующие значения:

Термины “алкил”, “алкокси”, “алкоксиалкил”, “арил”, “алкарил” и “аралкил” означают алкильные радикалы, содержащие 1-8, предпочтительно 1-4 атомов углерода, например, метил, этил, пропил, изопропил и бутил, и арильные радикалы, содержащие 6-10 атомов углерода, например, фенил и нафтил. Термин “галоген” включает бром, фтор, хлор и иод.

Предпочтительно -L¹- формулы (VI) имеет в качестве заместителя одну составляющую -L²-Z или L²-Z’.

Другой предпочтительный вариант -L¹- раскрывается в WO2002/089789A1, который включен в настоящую заявку в полном объеме посредством ссылки. Соответственно, предпочтительная составляющая -L¹- имеет формулу (VII):

где

пунктирная линия показывает присоединение к -D, которая представляет собой PTH составляющую, и где присоединение осуществляется через аминную функциональную группу составляющей -D;

L₁ представляет собой бифункциональную связывающую группу,

Y₁ и Y₂ независимо представляют собой O, S или NR⁷;

R², R³, R⁴, R⁵, R⁶ и R⁷ независимо выбирают из группы, состоящей из водорода, C_1-6 алкилов, C_3-12 разветвленных алкилов, C_3-8 циклоалкилов, C_1-6 замещенных алкилов, C_3-8 замещенных циклоалкилов, арилов, замещенных арилов, аралкилов, C_1-6 гетероалкилов, замещенных C_1-6 гетероалкилов, C_1-6 алкокси, фенокси и C_1-6 гетероалкокси;

Ar представляет собой составляющую, которая при включении в формулу (VII), образует мультизамещенный ароматический углеводород или мульти-замещенную гетероциклическую группу;

X представляет собой химическую связь или составляющую, которая активно переносится в клетку-мишень, гидрофобную составляющую или их комбинацию,

y равно 0 или 1;

где -L¹- имеет в качестве заместителя -L²-Z или L²-Z’, и где -L¹- необязательно дополнительно замещена;

где

-L²- представляет собой простую химическую связь или спейсер;

-Z представляет собой растворимый в воде носитель; и

-Z’ представляет собой нерастворимый в воде носитель.

Только в контексте формулы (VII) применяемые термины имеют следующие значения:

Термин “алкил”, как следует понимать, включает, например, неразветвленные, разветвленные, замещенные C_1-12 алкилы, включая алкокси, C_3-8 циклоалкилы или замещенные циклоалкилы, и т.д.

Термин “замещение”, как следует понимать, включает добавление или замещение одного или более атомов, содержащихся в функциональной группе, или соединения с одним или более отличными атомами.

Замещенные алкилы включают карбоксиалкилы, аминоалкилы, диалкиламины, гидроксиалкилы и меркаптоалкилы; замещенные циклоалкилы включают составляющие, как например 4-хлорциклогексил; арилы включают составляющие, как например нафтил; замещенные арилы включают составляющие, как например 3-бром-фенил; аралкилы включают составляющие, как например толуил; гетероалкилы включают составляющие, как например этилтиофен; замещенный гетероалкилы включают составляющие, как например 3-метокситиофен; алкокси включает составляющие, как например метокси; и фенокси включает составляющие, как например 3-нитрофенокси. гало-, как необходимо понимать, включает фтор, хлор, иод и бром.

Предпочтительно -L¹- формулы (VII) имеет в качестве заместителя одну составляющую -L²-Z или L²-Z’.

В другом предпочтительном варианте выполнения настоящего изобретения -L¹- содержит подструктуру формулы (VIII)

(VIII),

где

пунктирная линия, отмеченная звездочкой, обозначает присоединение к атому азота составляющей- D, которая представляет собой PTH составляющую, путем образования амидной связи;

непомеченные пунктирные линии показывают присоединение к оставшейся части -L¹-; и

где -L¹- имеет в качестве заместителя -L²-Z или L²-Z’, и где -L¹- необязательно дополнительно замещена;

где

-L²- представляет собой простую химическую связь или спейсер;

-Z представляет собой растворимый в воде носитель; и

-Z’ представляет собой нерастворимый в воде носитель.

Предпочтительно -L¹- формулы (VIII) имеет в качестве заместителя одну составляющую -L²-Z или L²-Z’.

В одном варианте выполнения настоящего изобретения -L¹- формулы (VIII) дополнительно не замещена.

В другом предпочтительном варианте выполнения настоящего изобретения -L¹- содержит подструктуру формулы (IX)

(IX),

где

пунктирная линия, отмеченная звездочкой, обозначает присоединение к атому азота составляющей- D, которая представляет собой PTH составляющую, путем образования карбаматной связи;

непомеченные пунктирные линии показывают присоединение к оставшейся части -L¹-; и

где -L¹- имеет в качестве заместителя -L²-Z или L²-Z’, и где -L¹- необязательно дополнительно замещена;

где

-L²- представляет собой простую химическую связь или спейсер;

-Z представляет собой растворимый в воде носитель; и

-Z’ представляет собой нерастворимый в воде носитель.

Предпочтительно -L¹- формулы (IX) имеет в качестве заместителя одну составляющую -L²-Z или L²-Z’.

В одном варианте выполнения настоящего изобретения -L¹- формулы (IX) дополнительно не замещена.

В пролекарствах для применения согласно настоящему изобретению -L²- представляет собой химическую вязь или спейсерную составляющую.

В одном варианте выполнения настоящего изобретения -L²- представляет собой химическую вязь.

В другом варианте выполнения настоящего изобретения -L²- представляет собой спейсерную составляющую.

Когда -L²- отлична от простой химической связи, -L²- предпочтительно выбрана из группы, состоящей из -T-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(R^y1)-, -S(O)₂N(R^y1)-, -S(O)N(R^y1)-, -S(O)₂-, -S(O)-, -N(R^y1)S(O)₂N(R^y1a)-, -S-, -N(R^y1)-, -OC(OR^y1)(R^y1a)-, -N(R^y1)C(O)N(R^y1a)-, -OC(O)N(R^y1)-, C_1-50 алкила, C_2-50 алкенила и C_2-50 алкинил; где -T-, C_1-50 алкил, C_2-50 алкенил и C_2-50 алкинил необязательно замещены одним или более -R^y2, которые являются одинаковыми или различными, и где C_1-50 алкил, C_2-50 алкенил и C_2-50 алкинил необязательно прерываются одной или более группами, выбранными из группы, состоящей из -T-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(R^y3)-, -S(O)₂N(R^y3)-, -S(O)N(R^y3)-, -S(O)₂-, -S(O)-, -N(R^y3)S(O)₂N(R^y3a)-, -S-, -N(R^y3)-, -OC(OR^y3)(R^y3a)-, -N(R^y3)C(O)N(R^y3a)-, и OC(O)N(R^y3)-;

-R^y1 и R^y1a независимо друг от друга выбраны из группы, состоящей из H, -T, C_1-50 алкила, C_2-50 алкенила и C_2-50 алкинила; где -T, C_1-50 алкил, C_2-50 алкенил и C_2-50 алкинил необязательно замещены одним или более -R^y2, которые являются одинаковыми или различными, и где C_1-50 алкил, C_2-50 алкенил и C_2-50 алкинил необязательно прерываются одной или более группами, выбранными из группы, состоящей из -T-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(R^y4)-, -S(O)₂N(R^y4)-, -S(O)N(R^y4)-, -S(O)₂-, -S(O)-, -N(R^y4)S(O)₂N(R^y4a)-, -S-, -N(R^y4)-, -OC(OR^y4)(R^y4a)-, -N(R^y4)C(O)N(R^y4a)-, и OC(O)N(R^y4)-;

каждый T независимо выбран из группы, состоящей из фенила, нафтила, инденила, инданила, тетралинила, C_3-10 циклоалкила, 3-10-ти членного гетероциклила, 8-11-ти членного гетеробициклила, 8-30-ти членного карбополициклила, и 8-30-ти членного гетерополициклила; где каждый T независимо необязательно замещен одним или более -R^y2, которые являются одинаковыми или различными;

каждый -R^y2 независимо выбран из группы, состоящей из галогена, -CN, оксо (=O), -COOR^y5, -OR^y5, -C(O)R^y5, -C(O)N(R^y5R^y5a), -S(O)₂N(R^y5R^y5a), -S(O)N(R^y5R^y5a), -S(O)₂R^y5, -S(O)R^y5, -N(R^y5)S(O)₂N(R^y5aR^y5b), -SR^y5, -N(R^y5R^y5a), -NO₂, -OC(O)R^y5, -N(R^y5)C(O)R^y5a, -N(R^y5)S(O)₂R^y5a, -N(R^y5)S(O)R^y5a, -N(R^y5)C(O)OR^y5a, -N(R^y5)C(O)N(R^y5aR^y5b), -OC(O)N(R^y5R^y5a), и C_1-6 алкила; где C_1-6 алкил необязательно замещен одним или более галогенами, которые являются одинаковыми или различными; и

каждый -R^y3, -R^y3a, -R^y4, -R^y4a, -R^y5, -R^y5a и R^y5b независимо выбран из группы, состоящей из - H, и C _1-6 алкила, где C_1-6 алкил необязательно замещен одним или более галогенами, которые являются одинаковыми или различными.

Когда -L²- отлична от простой химической связи, -L²- даже более предпочтительно выбрана из -T-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(R^y1)-, -S(O)₂N(R^y1)-, -S(O)N(R^y1)-, -S(O)₂-, -S(O)-, -N(R^y1)S(O)₂N(R^y1a)-, -S-, -N(R^y1)-, -OC(OR^y1)(R^y1a)-, -N(R^y1)C(O)N(R^y1a)-, -OC(O)N(R^y1)-, C_1-50 алкила, C_2-50 алкенила и C_2-50 алкинила; где -T-, C_1-20 алкил, C_2-20 алкенил, и C_2-20 алкинил необязательно замещены одним или более -R^y2, которые являются одинаковыми или различными, и где C_1-20 алкил, C_2-20 алкенил и C_2-20 алкинил необязательно прерываются одной или более группами, выбранными из группы, состоящей из -T-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(R^y3)-, -S(O)₂N(R^y3)-, -S(O)N(R^y3)-, -S(O)₂-, -S(O)-, -N(R^y3)S(O)₂N(R^y3a)-, -S-, -N(R^y3)-, -OC(OR^y3)(R^y3a)-, -N(R^y3)C(O)N(R^y3a)-, и OC(O)N(R^y3)-;

-R^y1 и R^y1a независимо друг от друга выбраны из группы, состоящей из H, -T, C_1-10 алкила, C_2-10 алкенила и C_2-10 алкинила; где -T, C_1-10 алкил, C_2-10 алкенил и C_2-10 алкинил необязательно замещены одним или более -R^y2, которые являются одинаковыми или различными, и где C_1-10 алкил, C_2-10 алкенил и C_2-10 алкинил необязательно прерываются одной или более группами, выбранными из группы, состоящей из -T-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(R^y4)-, -S(O)₂N(R^y4)-, -S(O)N(R^y4)-, -S(O)₂-, -S(O)-, -N(R^y4)S(O)₂N(R^y4a)-, -S-, -N(R^y4)-, -OC(OR^y4)(R^y4a)-, -N(R^y4)C(O)N(R^y4a)-, и OC(O)N(R^y4)-;

каждый T независимо выбран из группы, состоящей из фенила, нафтила, инденила, инданила, тетралинила, C_3-10 циклоалкила, 3-10-ти членного гетероциклила, 8-11-ти членного гетеробициклила, 8-30-ти членного карбополициклила, и 8-30-ти членного гетерополициклила; где каждый T независимо необязательно замещен одним или более -R^y2, которые являются одинаковыми или различными;

-R^y2 выбран из группы, состоящей из галогена, -CN, оксо (=O), -COOR^y5, -OR^y5, -C(O)R^y5, -C(O)N(R^y5R^y5a), -S(O)₂N(R^y5R^y5a), -S(O)N(R^y5R^y5a), -S(O)₂R^y5, -S(O)R^y5, -N(R^y5)S(O)₂N(R^y5aR^y5b), -SR^y5, -N(R^y5R^y5a), -NO₂, -OC(O)R^y5, -N(R^y5)C(O)R^y5a, -N(R^y5)S(O)₂R^y5a, -N(R^y5)S(O)R^y5a, -N(R^y5)C(O)OR^y5a, -N(R^y5)C(O)N(R^y5aR^y5b), -OC(O)N(R^y5R^y5a), и C_1-6 алкила; где C_1-6 алкил необязательно замещен одним или более галогенами, которые являются одинаковыми или различными; и

каждый -R^y3, -R^y3a, -R^y4, -R^y4a, -R^y5, -R^y5a и R^y5b независимо от каждого другого выбран из группы, состоящей из H, и C_1-6 алкила; где C_1-6 алкил необязательно замещен одним или более галогенами, которые являются одинаковыми или различными.

Когда -L²- отлична от простой химической связи, -L²- даже более предпочтительно выбрана из группы, состоящей из -T-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(R^y1)-, -S(O)₂N(R^y1)-, -S(O)N(R^y1)-, -S(O)₂-, -S(O)-, -N(R^y1)S(O)₂N(R^y1a)-, -S-, -N(R^y1)-, -OC(OR^y1)(R^y1a)-, -N(R^y1)C(O)N(R^y1a)-, -OC(O)N(R^y1)-, C_1-50 алкила, C_2-50 алкенила и C_2-50 алкинила; где -T-, C_1-50 алкил, C_2-50 алкенил и C_2-50 алкинил необязательно замещены одним или более -R^y2, которые являются одинаковыми или различными, и где C_1-50 алкил, C_2-50 алкенил и C_2-50 алкинил необязательно прерываются одной или более группами, выбранными из группы, состоящей из -T-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(R^y3)-, -S(O)₂N(R^y3)-, -S(O)N(R^y3)-, -S(O)₂-, -S(O)-, -N(R^y3)S(O)₂N(R^y3a)-, -S-, -N(R^y3)-, -OC(OR^y3)(R^y3a)-, -N(R^y3)C(O)N(R^y3a)-, и OC(O)N(R^y3)-;

-R^y1 и R^y1a независимо выбраны из группы, состоящей из H, -T, C_1-10 алкила, C_2-10 алкенила и C_2-10 алкинила;

каждый T независимо выбран из группы, состоящей из фенила, нафтила, инденила, инданила, тетралинила, C_3-10 циклоалкила, 3-10-ти членного гетероциклила, 8-11-ти членного гетеробициклила, 8-30-ти членного карбополициклила, и 8-30-ти членного гетерополициклила;

каждый -R^y2 независимо выбран из группы, состоящей из галогена и C_1-6 алкила; и

каждый -R^y3, -R^y3a, -R^y4, -R^y4a, -R^y5, -R^y5a и R^y5b независимо от каждого другого выбран из группы, состоящей из H, и C_1-6 алкила; где C_1-6 алкил необязательно замещен одним или более галогенами, которые являются одинаковыми или различными.

Даже более предпочтительно, -L²- представляет собой C_1-20 алкильную цепь, которая необязательно прерывается одной или более группами, независимо выбранными из -O-, -T- и -C(O)N(R^y1)-; и где C_1-20 алкильная цепь необязательно замещена одной или более группами, независимо выбранными из -OH, -T и C(O)N(R^y6R^y6a); где -R^y1, -R^y6, -R^y6a независимо выбраны из группы, состоящей из H и C_1-4 алкила, и где T выбран из группы, состоящей из фенила, нафтила, инденила, инданила, тетралинила, C_3-10 циклоалкила, 3-10-ти членного гетероциклила, 8-11-ти членного гетеробициклила, 8-30-ти членного карбополициклила, и 8-30-ти членного гетерополициклила.

Предпочтительно, -L²- имеет молекулярную массу в интервале от 14 г/моль до 750 г/моль.

Предпочтительно, -L²- содержит составляющую, выбранную из

,, ,, ,, , , , , , , , , , , , , ,

, , и ;

где

пунктирная линия обозначает присоединение к остальной части -L²-, -L¹-, -Z и/или -Z', соответственно; и

-R и R^a независимо друг от друга выбраны из группы, состоящей из H, метила, этила, пропила, бутила, пентила и гексила.

В одном предпочтительном варианте выполнения настоящего изобретения- L²- имеет длину цепи от 1 до 20 атомов.

Как применяется в настоящей заявке термин “длина цепи” в отношении составляющей -L²- относится к числу атомов -L²-, присутствующих в самом коротком соединении между -L¹- и Z.

Предпочтительно, -L²- имеет формулу (i)

(i),

где

пунктирная линия, отмеченная звездочкой, означает присоединение к -L¹-;

неотмеченная пунктирная линия обозначает присоединение к -Z или Z';

n выбран из группы, состоящей из 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 и 18; и

где составляющая формулы (i) необязательно дополнительно замещена.

Предпочтительно, n формулы (i) выбран из группы, состоящей из 3, 4, 5, 6, 7, 8, и 9. Даже более предпочтительно n формулы (i) равно 4, 5, 6, или 7. В одном варианте выполнения настоящего изобретения n формулы (i) равно 4. В другом варианте выполнения настоящего изобретения n формулы (i) равно 5. В другом варианте выполнения настоящего изобретения n формулы (i) равно 6.

В другом предпочтительном варианте выполнения настоящего изобретения составляющая -L¹-L²- выбрана из группы, состоящей из(IIca-i),

(IIca-ii) и

(IIca-iii);

где

неотмеченная пунктирная линия обозначает присоединение к атому азота составляющей D, которая представляет собой PTH составляющую, путем образования амидной связи; и

пунктирная линия, отмеченная звездочкой, означает присоединение к -Z или -Z’.

В одном предпочтительном варианте выполнения настоящего изобретения составляющая -L¹-L²- выбрана из группы, состоящей из

(IIcb-i),

(IIcb-ii) и

(IIcb-iii);

неотмеченная пунктирная линия обозначает присоединение к атому азота составляющей D, которая представляет собой PTH составляющую, путем образования амидной связи; и

пунктирная линия, отмеченная звездочкой, означает присоединение к -Z или -Z’.

В предпочтительном варианте выполнения настоящего изобретения составляющая -L¹-L²- имеет формулу (IIca-ii).

Предпочтительно, PTH соединение контролируемого высвобождения согласно настоящему изобретению имеет формулу (Ia) с x=1.

Носитель -Z содержит C_8-24 алкил или полимер. Предпочтительно, -Z содержит полимер, предпочтительно полимер, выбранный из группы, состоящей из 2-метакрилоил-оксиэтила фосфоилхолинов, поли(акриловых кислот), поли(акрилатов), поли(акриламидов), поли(алкилокси) полимеров, поли(амидов), поли(амидоаминов), поли(аминокислот), поли(ангидридов), поли(аспартамидов), поли(масляных кислот), поли(гликолевых кислот), полибутилентерефталатов, поли(капролактонов), поли(карбонатов), поли(цианоакрилатов), поли(диметилакриламидов), поли(сложных эфиров), поли(этиленов), поли(этиленгликолей), поли(этиленоксидов), поли(этилфосфатов), поли(этилоксазолинов), поли(гликолевых кислот), поли(гидроксиэтилакрилатов), поли(гидроксиэтил-оксазолинов), поли(гидроксиметакрилатов), поли(гидроксипропилметакриламидов), поли(гидроксипропил метакрилатов), поли(гидроксипропилоксазолинов), поли(иминокарбонатов), поли(молочных кислот), поли(сополимеров молочных и гликолевых кислот), поли(метакриламидов), поли(метакрилатов), поли(метилоксазолинов), поли(органофосфазенов), поли(ортосложных эфиров), поли(оксазолинов), поли(пропиленгликолей), поли(силоксанов), поли(уретанов), поли(виниловых спиртов), поли(виниламинов), поли(винилметиловых простых эфиров), поли(винилпирролидонов), силиконов, целлюлоз, карбометилцеллюлоз, гидроксипропил метилцеллюлоз, хитинов, хитозанов, декстранов, декстринов, желатинов, гиалуроновых кислот и производных, функционализированных гиалуроновых кислот, маннанов, пектинов, рамногалактуронанов, крахмалов, гидроксиалкил крахмалов, гидроксиэтил крахмалов и других полимеров на основе углеводов, ксиланов и их сополимеров.

Предпочтительно, -Z имеет молекулярную массу в интервале от 5 до 200 кДа. Даже более предпочтительно, -Z имеет молекулярную массу в интервале от 8 до 100 кДа, даже более предпочтительно в интервале от 10 до 80 кДа, даже более предпочтительно от 12 до 60, даже более предпочтительно от 15 до 40, и наиболее предпочтительно -Z имеет молекулярную массу около 20 кДа. В другом в равной степени предпочтительном варианте выполнения настоящего изобретения -Z имеет молекулярную массу около 40 кДа.

В одном варианте выполнения настоящего изобретения такой растворимый в воде носитель -Z содержит белок. Предпочтительные белки выбирают из группы, состоящей из карбоксил-концевого полипептида хорионического гонадотропина, как описано в US 2012/0035101 A1, которые включены в настоящую заявку посредством ссылки; альбумина; XTEN, как описано в WO 2011123813 A2, которая включена в настоящую заявку посредством ссылки; последовательностей пролиновых/аланиновых случайных спиралей, как описано в WO 2011/144756 A1, который включен в настоящую заявку посредством ссылки; последовательностей пролина/аланина/серина, как описано в WO 2008/155134 A1 и WO 2013/024049 A1, которые включены в настоящую заявку посредством ссылками; с Fc слитых белков.

В одном варианте выполнения настоящего изобретения -Z представляет собой полисаркозин.

В другом предпочтительном варианте выполнения настоящего изобретения -Z содержит поли(N-метилглицин).

В особенно предпочтительном варианте выполнения настоящего изобретения -Z содержит составляющую белка со структурой случайной спирали.

В одном предпочтительном варианте выполнения настоящего изобретения -Z содержит одну составляющую белка со структурой случайной спирали.

В другом предпочтительном варианте выполнения настоящего изобретения -Z содержит две составляющие белка со структурой случайной спирали.

В другом предпочтительном варианте выполнения настоящего изобретения -Z содержит три составляющие белка со структурой случайной спирали.

В другом предпочтительном варианте выполнения настоящего изобретения -Z содержит четыре составляющие белка со структурой случайной спирали.

В другом предпочтительном варианте выполнения настоящего изобретения -Z содержит пять составляющих белка со структурой случайной спирали.

В другом предпочтительном варианте выполнения настоящего изобретения -Z содержит шесть составляющих белка со структурой случайной спирали.

В другом предпочтительном варианте выполнения настоящего изобретения -Z содержит семь составляющих белка со структурой случайной спирали.

В другом предпочтительном варианте выполнения настоящего изобретения -Z содержит восемь составляющих белка со структурой случайной спирали.

Предпочтительно составляющая белка со структурой случайной спирали содержит по меньшей мере 25 аминокислотных остатков и самое большее 2000 аминокислот.Даже более предпочтительно составляющая белка со структурой случайной спирали содержит по меньшей мере 30 аминокислотных остатков и самое большее 1500 аминокислотных остатков. Даже более предпочтительно составляющая белка со структурой случайной спирали содержит по меньшей мере 50 аминокислотных остатков и самое большее 500 аминокислотных остатков.

В предпочтительном варианте выполнения настоящего изобретения, -Z содержит составляющую белка со структурой случайной спирали, где по меньшей мере 80%, предпочтительно по меньшей мере 85%, даже более предпочтительно по меньшей мере 90%, даже более предпочтительно по меньшей мере 95%, даже более предпочтительно по меньшей мере 98% и наиболее предпочтительно по меньшей мере 99% от общего числа аминокислот, образующих указанную составляющую белка со структурой случайной спирали, выбраны из аланина и пролина. Даже более предпочтительно, по меньшей мере 10%, но менее 75%, предпочтительно менее 65%, от общего числа аминокислотных остатков составляющей белка со структурой случайной спирали представляют собой пролиновые остатки. Предпочтительно, составляющая белка со структурой случайной спирали является такой, как описано в WO 2011/144756 A1, которая включена в настоящую заявку в полном объеме посредством ссылки. Даже более предпочтительно Z содержит по меньшей мере одну составляющую, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:5, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:7, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:11, SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:13, SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:15, SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:17, SEQ ID NO:51 и SEQ ID NO:61, как раскрывается в WO2011/144756, которая включена в настоящую заявку посредством ссылки. Составляющая, содержащая такой белок со структурой случайной спирали, содержащая аланин и пролин, которые упоминаются как “PA” или “PA составляющая”.

Соответственно, -Z содержит PA составляющую.

В равной мере предпочтительном варианте выполнения настоящего изобретения, -Z содержит составляющая белка со структурой случайной спирали, в которой по меньшей мере 80%, предпочтительно по меньшей мере 85%, даже более предпочтительно по меньшей мере 90%, даже более предпочтительно по меньшей мере 95%, даже более предпочтительно по меньшей мере 98% и наиболее предпочтительно по меньшей мере 99% от общего числа аминокислот, образующих указанную составляющую белка со структурой случайной спирали, выбраны из аланина, серина и пролина. Даже более предпочтительно, по меньшей мере 4%, но менее 40% от общего числа аминокислотных остатков составляющей белка со структурой случайной спирали представляют собой пролиновые остатки. Предпочтительно, составляющая белка со структурой случайной спирали описана в WO 2008/155134 A1, которая включена в настоящую заявку в полном объеме посредством ссылки. Даже более предпочтительно Z содержит по меньшей мере одну составляющую, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:2, SEQ ID NO:4, SEQ ID NO:6, SEQ ID NO:8, SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:12, SEQ ID NO:14, SEQ ID NO:16, SEQ ID NO:18, SEQ ID NO:20, SEQ ID NO:22, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:26, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:30, SEQ ID NO:32, SEQ ID NO:34, SEQ ID NO:36, SEQ ID NO:40, SEQ ID NO:42, SEQ ID NO:44, SEQ ID NO:46, SEQ ID NO:50, SEQ ID NO:52, SEQ ID NO:54 и SEQ ID NO:56, как описано в WO 2008/155134 A1, которая включена в настоящую заявку посредством ссылки. Составляющая, содержащая белок со структурой случайной спирали, содержащий аланин, серин и пролин, упоминаются как “PAS” или “PAS составляющая”.

Соответственно, -Z содержит PAS составляющую.

В равной мере предпочтительном варианте выполнения настоящего изобретения, -Z содержит составляющую белка со структурой случайной спирали, в которой по меньшей мере 80%, предпочтительно по меньшей мере 85%, даже более предпочтительно по меньшей мере 90%, даже более предпочтительно по меньшей мере 95%, даже более предпочтительно по меньшей мере 98% и наиболее предпочтительно по меньшей мере 99% от общего числа аминокислот, образующих указанную составляющую белка со структурой обратной спирали, выбраны аланина, глицина и пролина. Составляющая, содержащая белок со структурой случайной спирали, содержащий аланин, глицин и пролин, упоминается как “PAG” или “PAG составляющая”.

Соответственно, -Z содержит PAG составляющую.

В равной мере предпочтительном варианте выполнения настоящего изобретения, -Z содержит составляющая белка со структурой случайной спирали, в которой по меньшей мере 80%, предпочтительно по меньшей мере 85%, даже более предпочтительно по меньшей мере 90%, даже более предпочтительно по меньшей мере 95%, даже более предпочтительно по меньшей мере 98% и наиболее предпочтительно по меньшей мере 99% от общего числа аминокислот, образующих указанную составляющую белка со структурой обратной спирали, выбирают из пролина и глицина. Составляющая, содержащая белок со структурой случайной спирали, содержащий пролин и глицин, упоминается как “PG” или “PG составляющая”.

Предпочтительно, такая PG составляющая содержит составляющую формулы (a-0)

[(Gly)_p-Pro-(Gly)_q]_r (a-0);

где

p выбран из группы, состоящей из 0, 1, 2, 3, 4 и 5;

q выбран из группы, состоящей из 0, 1, 2, 3, 4 и 5;

r представляет собой целое число в интервале и включительно от 10 до 1000;

при условии, что по меньшей мере один из p и q равен по меньшей мере 1;

Предпочтительно, p формулы (a-0) выбран из группы, состоящей из 1, 2 и 3.

Предпочтительно, q формулы (a-0) выбран из 0, 1 и 2.

Даже более предпочтительно PG составляющая содержит последовательность SEQ ID:NO 122: GGPGGPGPGGPGGPGPGGPG

Даже более предпочтительно, PG составляющая содержит последовательность SEQ ID:NO 97 формулы (a-0-a)

(GGPGGPGPGGPGGPGPGGPG)_v (a-0-a),

где

v представляет собой целое число в интервале и включительно от 1 до 50.

Понятно, что последовательность формулы (a-0-a) содержит v повторений последовательности SEQ ID NO:122.

Соответственно, -Z содержит PG составляющую.

В равной мере предпочтительном варианте выполнения настоящего изобретения, -Z содержит составляющая белка со структурой случайной спирали, в которой по меньшей мере 80%, предпочтительно по меньшей мере 85%, даже более предпочтительно по меньшей мере 90%, даже более предпочтительно по меньшей мере 95%, даже более предпочтительно по меньшей мере 98% и наиболее предпочтительно по меньшей мере 99% от общего числа аминокислот, образующих указанный белок со структурой обратной спирали, выбраны из аланина, глицина, серина, треонина, глутамата и пролина. Предпочтительно, составляющая белка со структурой случайной спирали является такой, как описано в WO 2010/091122 A1, который включен в настоящую заявку посредством ссылки. Даже более предпочтительно -Z содержит по меньшей мере одну составляющую, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:182, SEQ ID NO:183, SEQ ID NO:184; SEQ ID NO:185, SEQ ID NO:186, SEQ ID NO:187, SEQ ID NO:188, SEQ ID NO:189, SEQ ID NO:190, SEQ ID NO:191, SEQ ID NO:192, SEQ ID NO:193, SEQ ID NO:194, SEQ ID NO:195, SEQ ID NO:196, SEQ ID NO:197, SEQ ID NO:198, SEQ ID NO:199, SEQ ID NO:200, SEQ ID NO:201, SEQ ID NO:202, SEQ ID NO:203, SEQ ID NO:204, SEQ ID NO:205, SEQ ID NO:206, SEQ ID NO:207, SEQ ID NO:208, SEQ ID NO:209, SEQ ID NO:210, SEQ ID NO:211, SEQ ID NO:212, SEQ ID NO:213, SEQ ID NO:214, SEQ ID NO:215, SEQ ID NO:216, SEQ ID NO:217, SEQ ID NO:218, SEQ ID NO:219, SEQ ID NO:220, SEQ ID NO:221, SEQ ID NO:759, SEQ ID NO:760, SEQ ID NO:761, SEQ ID NO:762, SEQ ID NO:763, SEQ ID NO:764, SEQ ID NO:765, SEQ ID NO:766, SEQ ID NO:767, SEQ ID NO:768, SEQ ID NO:769, SEQ ID NO:770, SEQ ID NO:771, SEQ ID NO:772, SEQ ID NO:773, SEQ ID NO:774, SEQ ID NO:775, SEQ ID NO:776, SEQ ID NO:777, SEQ ID NO:778, SEQ ID NO:779, SEQ ID NO:1715, SEQ ID NO:1716, SEQ ID NO:1718, SEQ ID NO:1719, SEQ ID NO:1720, SEQ ID NO:1721 и SEQ ID NO:1722, как описано в WO2010/091122A1, которая включена в настоящую заявку посредством ссылки. Составляющая, содержащая белок со структурой случайной спирали, содержащий аланин, глицин, серин, треонин, глутамат и пролин, упоминается как “XTEN” или “XTEN составляющая” наряду с ее обозначением в WO 2010/091122 A1.

Соответственно, -Z содержит XTEN составляющую.

В другом предпочтительном варианте выполнения настоящего изобретения, Z содержит производное жирной кислоты. Предпочтительными производными жирной кислоты являются описанные в WO 2005/027978 A2 и WO 2014/060512 A1, которые включены в настоящую заявку посредством ссылки.

В другом предпочтительном варианте выполнения настоящего изобретения Z представляет собой полимер на основе гиалуроновой кислоты.

В одном варианте выполнения настоящего изобретения Z представляет собой носитель, как раскрывается в WO 2012/02047 A1, который включен в настоящую заявку посредством ссылки.

В другом варианте выполнения настоящего изобретения Z представляет собой носитель, как раскрывается в WO 2013/024048 A1, который включен в настоящую заявку посредством ссылки.

В другом предпочтительном варианте выполнения настоящего изобретения -Z представляет собой полимер на основе ПЭГ, такой как линейный, разветвленный или полимер на основе ПЭГ с множеством ветвей.

В одном варианте выполнения настоящего изобретения -Z представляет собой линейный полимер на основе ПЭГ.

В другом варианте выполнения настоящего изобретения -Z представляет собой полимер на основе ПЭГ с множеством ветвей. Предпочтительно, -Z представляет собой полимер на основе ПЭГ с множеством ветвей, имеющий по меньшей мере 4 ветви на основе ПЭГ.

Предпочтительно, такой полимер на основе ПЭГ с множеством ветвей -Z соединен с множеством составляющих- L²-L¹-D, где каждая составляющая -L²-L¹-D предпочтительно соединена с концом ветви, предпочтительно с концом ветви. Предпочтительно такой полимер на основе ПЭГ с множеством ветвей -Z соединен с 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 или 16 составляющими -L²-L¹-D. Даже более предпочтительно такой полимер на основе ПЭГ с множеством ветвей -Z соединен с 2, 3, 4, 6 или 8 составляющими -L²-L¹- D. Даже более предпочтительно такой полимер на основе ПЭГ с множеством ветвей -Z соединен с 2, 4 или 6 составляющими -L²-L¹-D, даже более предпочтительно такой полимер на основе ПЭГ с множеством ветвей -Z соединен с 4 или 6 составляющими -L²-L¹-D, и наиболее предпочтительно такой полимер на основе ПЭГ с множеством ветвей -Z соединена с 4 составляющими -L²-L¹-D.

Предпочтительно таким полимером Z на основе ПЭГ с множеством ветвей является ПЭГ производное с множеством ветвей, как например подробно описано для продуктов, перечисленных в JenKem Technology, USA (доступно по ссылке http://www.jenkemusa.com/Pages/PEGProducts на 18 декабря 2014), как например ПЭГ производная с 4-мя ветвями, в частности ПЭГ производная с 4-мя ветвями, содержащая ядро из пентаэритрита, ПЭГ производная с восемью ветвями, содержащая ядро из гексаглицерина, и ПЭГ производная с восемью ветвями, содержащая ядро из трипентаэритрита. Более предпочтительно, растворимый в воде носителем -Z на основе ПЭГ содержит составляющую, выбранную из:

ПЭГ-амин с 4-мя ветвями, содержащий ядро из пентаэритрита:

с n в интервале от 20 до 500;

ПЭГ-амин с восемью ветвями, содержащий ядро из гексаглицерина:

с n в интервале от 20 до 500; и

R=структура ядра из гексаглицерина или трипентаэритрита; и

ПЭГ-амин с шестью ветвями, содержащий ядро из сорбита или дипентаэритрита:

с n в интервале от 20 до 500; и

R=содержащий ядро из сорбита или дипентаэритрита;

и где пунктирные линии обозначают присоединение к остальной части PTH пролекарства.

В предпочтительном варианте выполнения настоящего изобретения -Z представляет собой разветвленный полимер на основе ПЭГ. В одном варианте выполнения настоящего изобретения -Z представляет собой разветвленный полимер на основе ПЭГ, имеющий одну, две, три, четыре, пять или шесть точек разветвления. Предпочтительно, -Z представляет собой разветвленный полимер на основе ПЭГ, имеющий одну, две или три точки разветвления. В одном варианте выполнения настоящего изобретения -Z представляет собой разветвленный полимер на основе ПЭГ, имеющий одну точку разветвления. В другом варианте выполнения настоящего изобретения -Z представляет собой разветвленный полимер на основе ПЭГ, имеющий две точки разветвления. В другом варианте выполнения настоящего изобретения -Z представляет собой разветвленный полимер на основе ПЭГ, имеющий три точки разветвления.

Точку разветвления предпочтительно выбирают из группы, состоящей из -N<, -CH<и>C<.

Предпочтительно, такая разветвленная составляющая -Z имеет молекулярную массу, равную по меньшей мере 10 кДа.

В одном варианте выполнения настоящего изобретения такая разветвленная составляющая -Z имеет молекулярную массу в интервале и включая 10 кДа - 500 кДа, более предпочтительно в интервале и включая 10 кДа - 250 кДа, даже более предпочтительно в интервале и включая 10 кДа - 150 кДа, даже более предпочтительно в интервале и включая 12 кДа - 100 кДа и наиболее предпочтительно в интервале и включая 15 кДа - 80 кДа.

Предпочтительно, такая разветвленная составляющая -Z имеет молекулярную массу в интервале и включая 10 кДа - 80 кДа. В одном варианте выполнения настоящего изобретения молекулярная масса равна около 10 кДа. В другом варианте выполнения настоящего изобретения молекулярная масса такой разветвленной составляющей -Z равна около 20 кДа. В другом варианте выполнения настоящего изобретения молекулярная масса такой разветвленной составляющей -Z равна около 30 кДа. В другом варианте выполнения настоящего изобретения молекулярная масса такой разветвленной составляющей -Z равна около 40 кДа. В другом варианте выполнения настоящего изобретения молекулярная масса такой разветвленной составляющей -Z равна около 50 кДа. В другом варианте выполнения настоящего изобретения молекулярная масса такой разветвленной составляющей -Z равна около 60 кДа. В другом варианте выполнения настоящего изобретения молекулярная масса такой разветвленной составляющей -Z равна около 70 кДа. В другом варианте выполнения настоящего изобретения молекулярная масса такой разветвленной составляющей -Z равна около 80 кДа. Наиболее предпочтительно, такая разветвленная составляющая -Z имеет молекулярную массу, равную около 40 кДа.

Предпочтительно, -Z или Z' содержит составляющую

.

В равно предпочтительном варианте выполнения настоящего изобретения- Z содержит амидную связь.

Предпочтительно -Z содержит составляющую формулы (a)

(a),

где

пунктирная линия показывает присоединение к -L²- или к оставшейся части -Z;

BP^a представляет собой точку разветвления, выбранную из группы, состоящей из -N<, -CR<и>C<;

-R выбирают из группы, состоящей из -H и C_1-6 алкила;

a равно 0, если BP^a представляет собой -N<или CR<, и n равно 1, если BP^a представляет собой>C<;

-S^a-, -S^a’-, -S^a’’- и S^a’’’- независимо друг от друга представляют собой химическую связь или выбирают из группы, состоящей из C_1-50 алкила, C_2-50 алкенила и C_2-50 алкинила; где C_1-50 алкил, C_2-50 алкенил и C_2-50 алкинил необязательно замещены одним или более заместителями -R¹, которые являются одинаковыми или различными, и где C_1-50 алкил, C_2-50 алкенил и C_2-50 алкинил необязательно прерваны одной или более группами, выбранными из группы, состоящей из -T-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(R²)-, -S(O)₂N(R²)-, -S(O)N(R²)-, -S(O)₂-, -S(O)-, -N(R²)S(O)₂N(R^2a)-, -S-, -N(R²)-, -OC(OR²)(R^2a)-, -N(R²)C(O)N(R^2a)- и -OC(O)N(R²)-;

каждый -T- независимо выбирают из группы, состоящей из фенила, нафтила, инденила, инданила, тетралинила, C_3-10 циклоалкила, 3-10-ти членного гетероциклила, 8-11-ти членного гетеробициклила, 8-30-членного карбополициклила и 8-30-членного гетерополициклила; где каждый -T- независимо необязательно замещен одним или более заместителями -R¹, которые являются одинаковыми или различными;

каждый -R¹ независимо выбирают из группы, состоящей из галогена, -CN, оксо (=O), -COOR³, -OR³, -C(O)R³, -C(O)N(R³R^3a), -S(O)₂N(R³R^3a), -S(O)N(R³R^3a), -S(O)₂R³, -S(O)R³, -N(R³)S(O)₂N(R^3aR^3b), -SR³, -N(R³R^3a), -NO₂, -OC(O)R³, -N(R³)C(O)R^3a, -N(R³)S(O)₂R^3a, -N(R³)S(O)R^3a, -N(R³)C(O)OR^3a, -N(R³)C(O)N(R^3aR^3b), -OC(O)N(R³R^3a) и C_1-6 алкила; где C_1-6 алкил необязательно замещен одним или более заместителями галоген, которые являются одинаковыми или различными;

каждый -R², -R^2a, -R³, -R^3a и R^3b независимо выбирают из группы, состоящей из -H и C_1-6 алкила, где C_1-6 алкил необязательно замещен одним или более заместителями галоген, которые являются одинаковыми или различными; и

-P^a’, -P^a’’ и P^a’’’ независимо представляют собой полимерную составляющую.

В одном варианте выполнения настоящего изобретения BP^a формулы (a) представляет собой -N<.

В другом варианте выполнения настоящего изобретения BP^a формулы (a) представляет собой>C<.

В предпочтительном варианте выполнения настоящего изобретения BP^a формулы (a) представляет собой -CR<. Предпочтительно, -R представляет собой -H. Соответственно, a формулы (a) равно 0.

В одном варианте выполнения настоящего изобретения -S^a- формулы (a) представляет собой химическую вязь.

В другом варианте выполнения настоящего изобретения -S^a- формулы (a) выбрана из группы, состоящей из C_1-10 алкила, C_2-10 алкенила и C_2-10 алкинила, где C_1-10 алкил, C_2-10 алкенил и C_2-10 алкинил необязательно прерываются одной или более химическими группами, выбранными из группы, состоящей из -T-, -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(R⁴)-, -S(O)₂N(R⁴)-, -S(O)N(R⁴)-, -S(O)₂-, -S(O)-, -N(R⁴)S(O)₂N(R^4a)-, -S-, -N(R⁴)-, -OC(OR⁴)(R^4a)-, -N(R⁴)C(O)N(R^4a)-, и OC(O)N(R⁴)-; где -T- представляет собой 3-10-ти членный гетероциклил; и R⁴ и R^4a независимо выбраны из группы, состоящей из H, метила, этила, пропила и бутила.

Предпочтительно -S^a- формулы (a) выбран из группы, состоящей из C_1-10 алкила, который прерывается одной или более химическими группами, выбранными из группы, состоящей из -T-, -C(O)N(R⁴)- и O-.

В одном варианте выполнения настоящего изобретения -S^a’- формулы (a) представляет собой химическую вязь.

В другом варианте выполнения настоящего изобретения -S^a’- формулы (a) выбрана из группы, состоящей из C_1-10 алкила, C_2-10 алкенила и C_2-10 алкинила, где C_1-10 алкил, C_2-10 алкенил и C_2-10 алкинил необязательно прерываются одной или более химическими группами, выбранными из группы, состоящей из -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(R⁴)-, -S(O)₂N(R⁴)-, -S(O)N(R⁴)-, -S(O)₂-, -S(O)-, -N(R⁴)S(O)₂N(R^4a)-, -S-, -N(R⁴)-, -OC(OR⁴)(R^4a)-, -N(R⁴)C(O)N(R^4a)-, и OC(O)N(R⁴)-; где -R⁴ и R^4a независимо выбраны из группы, состоящей из H, метила, этила, пропила и бутила. Предпочтительно -S^a’- формулы (a) выбран из группы, состоящей из метила, этила, пропила, бутила, которые необязательно прерываются одной или более химическими группами, выбранными из группы, состоящей из -O-, -C(O)- и C(O)N(R⁴)-.

В одном варианте выполнения настоящего изобретения -S^a’’- формулы (a) представляет собой химическую вязь.

В другом варианте выполнения настоящего изобретения -S^a’’- формулы (a) выбран из группы, состоящей из C_1-10 алкила, C_2-10 алкенила и C_2-10 алкинила, где C_1-10 алкил, C_2-10 алкенил и C_2-10 алкинил необязательно прерываются одной или более химическими группами, выбранными из группы, состоящей из -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(R⁴)-, -S(O)₂N(R⁴)-, -S(O)N(R⁴)-,-S(O)₂-, -S(O)-, -N(R⁴)S(O)₂N(R^4a)-, -S-, -N(R⁴)-, -OC(OR⁴)(R^4a)-, -N(R⁴)C(O)N(R^4a)-, и OC(O)N(R⁴)-; где -R⁴ и R^4a независимо выбраны из группы, состоящей из H, метила, этила, пропила и бутила. Предпочтительно -S^a’’- формулы (a) выбран из группы, состоящей из метила, этила, пропила, бутила, которые необязательно прерываются одной или более химическими группами, выбранными из группы, состоящей из -O-, -C(O)- и C(O)N(R⁴)-.

В одном варианте выполнения настоящего изобретения -S^a’’’- формулы (a) представляет собой химическую вязь.

В другом варианте выполнения настоящего изобретения -S^a’’’- формулы (a) выбран из группы, состоящей из C_1-10 алкила, C_2-10 алкенила и C_2-10 алкинила, где C_1-10 алкил, C_2-10 алкенил и C_2-10 алкинил необязательно прерываются одной или более химическими группами, выбранными из группы, состоящей из -C(O)O-, -O-, -C(O)-, -C(O)N(R⁴)-, -S(O)₂N(R⁴)-, -S(O)N(R⁴)-,-S(O)₂-, -S(O)-, -N(R⁴)S(O)₂N(R^4a)-, -S-, -N(R⁴)-, -OC(OR⁴)(R^4a)-, -N(R⁴)C(O)N(R^4a)-, и OC(O)N(R⁴)-; где -R⁴ и R^4a независимо выбраны из группы, состоящей из H, метила, этила, пропила и бутила. Предпочтительно -S^a’’’- формулы (a) выбран из группы, состоящей из метила, этила, пропила, бутила, которые необязательно прерываются одной или более химическими группами, выбранными из группы, состоящей из -O-, -C(O)- и C(O)N(R⁴)-.

Предпочтительно, -P^a’, -P^a’’ и P^a’’’ формулы (a) независимо содержат полимер, выбранный из группы, состоящей из 2-метакрилоил-оксиэтилфосфоилхолинов, поли(акриловых кислот), поли(акрилатов), поли(акриламидов), поли(алкилокси) полимеров, поли(амидов), поли(амидоаминов), поли(аминокислот), поли(ангидридов), поли(аспартамидов), поли(масляных кислот), поли(гликолевых кислот), полибутилентерефталатов, поли(капролактонов), поли(карбонатов), поли(цианоакрилатов), поли(диметилакриламидов), поли(сложных эфиров), поли(этиленов), поли(этиленгликолей), поли(этиленоксидов), поли(этилфосфатов), поли(этилоксазолинов), поли(гликолевых кислот), поли(гидроксиэтилакрилатов), поли(гидроксиэтил-оксазолинов), поли(гидроксиметакрилатов), поли(гидроксипропилметакриламидов), поли(гидроксипропил метакрилатов), поли(гидроксипропилоксазолинов), поли(иминокарбонатов), поли(молочных кислот), поли(сополимеров молочных и гликолевых кислот), поли(метакриламидов), поли(метакрилатов), поли(метилоксазолинов), поли(органофосфазенов), поли(ортосложных эфиров), поли(оксазолинов), поли(пропиленгликолей), поли(силоксанов), поли(уретанов), поли(виниловых спиртов), поли(виниламинов), поли(винилметиловых простых эфиров), поли(винилпирролидонов), силиконов, целлюлоз, карбометил целлюлоз, гидроксипропил метилцеллюлоз, хитинов, хитозанов, декстранов, декстринов, желатинов, гиалуроновых кислот и производных, функционализированных гиалуроновых кислот, маннанов, пектинов, рамногалактуронанов, крахмалов, гидроксиалкил крахмалов, гидроксиэтил крахмалов и других полимеров на основе углеводов, ксиланов и их сополимеров.

Более предпочтительно, -P^a’, -P^a’’ и P^a’’’ формулы (a) независимо содержат составляющую на основе ПЭГ. Даже более предпочтительно, -P^a’, -P^a’’ и P^a’’’ формулы (a) независимо содержат составляющую на основе ПЭГ, содержащую по меньшей мере 20% ПЭГ, даже более предпочтительно по меньшей мере 30%, даже более предпочтительно по меньшей мере 40% ПЭГ, даже более предпочтительно по меньшей мере 50% ПЭГ, даже более предпочтительно по меньшей мере 60% ПЭГ, даже более предпочтительно по меньшей мере 70% ПЭГ, даже более предпочтительно по меньшей мере 80% ПЭГ и наиболее предпочтительно по меньшей мере 90% ПЭГ.

Предпочтительно, -P^a’, -P^a’’ и P^a’’’ формулы (a) независимо имеют молекулярную массу в интервале и включая 5 кДа - 50 кДа, более предпочтительно имеют молекулярную массу в интервале и включая 5 кДа - 40 кДа, даже более предпочтительно в интервале и включая 7.5 кДа - 35 кДа, даже более предпочтительно в интервале от и 7.5 - 30 кДа, даже более предпочтительно в интервале и включая 10 - 30 кДа.

В одном варианте выполнения настоящего изобретения -P^a’, -P^a’’ и P^a’’’ формулы (a) имеют молекулярную массу, равную около 5 кДа.

В другом варианте выполнения настоящего изобретения -P^a’, -P^a’’ и P^a’’’ формулы (a) имеют молекулярную массу, равную около 7.5 кДа.

В другом варианте выполнения настоящего изобретения -P^a’, -P^a’’ и P^a’’’ формулы (a) имеют молекулярную массу, равную около 10 кДа.

В другом варианте выполнения настоящего изобретения -P^a’, -P^a’’ и P^a’’’ формулы (a) имеют молекулярную массу, равную около 12.5 кДа.

В другом варианте выполнения настоящего изобретения -P^a’, -P^a’’ и P^a’’’ формулы (a) имеют молекулярную массу, равную около 15 кДа.

В другом варианте выполнения настоящего изобретения -P^a’, -P^a’’ и P^a’’’ формулы (a) имеют молекулярную массу, равную около 20 кДа.

В одном варианте выполнения настоящего изобретения -Z содержит одну составляющую формулы (a).

В другом варианте выполнения настоящего изобретения -Z содержит две составляющие формулы (a).

В другом варианте выполнения настоящего изобретения -Z содержит три составляющие формулы (a).

Предпочтительно, -Z представляет собой составляющую формулы (a).

Более предпочтительно, -Z содержит составляющую формулы (b)

(b),

где

пунктирная линия показывает присоединение к -L²- или к оставшейся части -Z; и

m и p независимо друг от друга представляют собой целое число в интервале и включительно от 150 до 1000; предпочтительно целое число в интервале и включительно от 150 до 500; более предпочтительно целое число в интервале и включительно от 200 до 500; и наиболее предпочтительно целое число в интервале и включительно от 400 до 500.

Предпочтительно, m и p формулы (b) представляют собой одно и то же целое число.

Наиболее предпочтительно m и p формулы (b) равны около 450.

Предпочтительно, -Z представляет собой составляющую формулы (b).

Носитель -Z’ представляет собой не растворимый в воде полимер, даже более предпочтительно гидрогель. Предпочтительно, такой гидрогель содержит полимер, выбранный из группы, состоящей из 2-метакрилоил-оксиэтил фосфоилхолинов, поли(акриловых кислот), поли(акрилатов), поли(акриламидов), поли(алкилокси) полимеров, поли(амидов), поли(амидоаминов), поли(аминокислот), поли(ангидридов), поли(аспартамидов), поли(масляных кислот), поли(гликолевых кислот), полибутилентерефталатов, поли(капролактонов), поли(карбонатов), поли(цианоакрилатов), поли(диметилакриламидов), поли(сложных эфиров), поли(этиленов), поли(этиленгликолей), поли(этиленоксидов), поли(этилфосфатов), поли(этилоксазолинов), поли(гликолевых кислот), поли(гидроксиэтилакрилатов), поли(гидроксиэтил-оксазолинов), поли(гидроксиметакрилатов), поли(гидроксипропилметакриламидов), поли(гидроксипропил метакрилатов), поли(гидроксипропилоксазолинов), поли(иминокарбонатов), поли(молочных кислот), поли(сополимеров молочных и гликолевых кислот), поли(метакриламидов), поли(метакрилатов), поли(метилоксазолинов), поли(органофосфазенов), поли(ортосложных эфиров), поли(оксазолинов), поли(пропиленгликолей), поли(силоксанов), поли(уретанов), поли(виниловых спиртов), поли(виниламинов), поли(винилметиловых простых эфиров), поли(винилпирролидонов), силиконов, целлюлоз, карбометил целлюлоз, гидроксипропил метилцеллюлоз, хитинов, хитозанов, декстранов, декстринов, желатинов, гиалуроновых кислот и производных, функционализированных гиалуроновых кислот, маннанов, пектинов, рамногалактуронанов, крахмалов, гидроксиалкил крахмалов, гидроксиэтил крахмалов и других полимеров на основе углеводов, ксиланов и их сополимеров.

Если носитель -Z’ представляет собой гидрогель, это предпочтительно гидрогель, содержащий ПЭГ или гиалуроновую кислоту. Наиболее предпочтительно такой гидрогель содержит ПЭГ.

Даже более предпочтительно, носитель -Z’ представляет собой гидрогель, как раскрывается в WO 2006/003014 A2, WO 2011/012715 A1 или WO 2014/056926 A1, которые включены в настоящую заявку посредством ссылки в полном объеме.

В другом варианте выполнения настоящего изобретения -Z' представляет собой полимерную сеть, образованную посредством физической агрегации полимерных цепей, причем физическая агрегация предпочтительно вызвана водородными связями, кристаллизацией, спирализацией или комплексообразованием. В одном варианте выполнения настоящего изобретения такая полимерная сеть представляет собой термогелевый полимер.

Если PTH соединение контролируемого высвобождения для применения согласно настоящему изобретению представляет собой пролекарство, его общая масса предпочтительно составляет по меньшей мере 10 кДа, как например по меньшей мере 12 кДа, как например по меньшей мере 15 кДа, как например по меньшей мере 20 кДа или как например по меньшей мере 30 кДа. Если PTH соединение контролируемого высвобождения представляет собой растворимое в воде пролекарство, его общая масса предпочтительно составляет самое большее 250 кДа, как например самое большее 200 кДа, 180 кДа, 150 кДа или 100 кДа. Понятно, что никакой значимый верхний предел молекулярной массы не может быть обеспечен в случае, если PTH соединение контролируемого высвобождения является нерастворимым в воде.

В одном предпочтительном варианте выполнения настоящего изобретения PTH соединение контролируемого высвобождения имеет формулу (IIe-i):

(IIe-i),

где

неотмеченная пунктирная линия обозначает присоединение к атому азота составляющей -D, которая представляет собой PTH составляющую, посредством образования амидной связи; и

пунктирная линия, отмеченная звездочкой, обозначает присоединение к составляющей

где

m и p независимо представляют собой целое число в интервале и включая 400 - 500.

Предпочтительно, -D присоединена к PTH пролекарству формулы (IIe-i) через N-концевую аминовую функциональную группу составляющей PTH.

В другом предпочтительном варианте выполнения настоящего изобретения пролекарство PTH согласно настоящему изобретению имеет формулу (IIf-i):

(IIf-i),

где

неотмеченная пунктирная линия обозначает присоединение к атому азота составляющей -D, которая представляет собой PTH составляющую, посредством образования амидной связи; и

пунктирная линия, отмеченная звездочкой, обозначает присоединение к составляющей

где

m и p независимо представляют собой целое число в интервале и включая 400 - 500.

Предпочтительно, -D присоединена к PTH пролекарству формулы (IIf-i) через N-концевую аминовую функциональную группу составляющей PTH.

В предпочтительном варианте выполнения настоящего изобретения остаточная активность PTH пролекарства составляет менее 10%, более предпочтительно менее 1%, даже более предпочтительно менее 0.1%, даже более предпочтительно менее 0.01%, даже более предпочтительно менее 0.001% и наиболее предпочтительно менее 0.0001%.

Как применяется в настоящей заявке термин “остаточная активность” относится к активности, проявляемой пролекарством PTH, где PTH составляющая связана с носителем, относительно активности, проявляемой соответствующим свободным PTH. В этом контексте термин «активность» относится к связыванию с доменом активации рецептора PTH/PTHrP1, приводящий к активации аденилатциклазы с образованием cAMP, фосфолипазы C с образованием внутриклеточного кальция или остеобластной экспрессии RANKL (которая связывается с RANK (активатор рецептора ядерного фактора kB) на остеокластах. Понятно, что измерение остаточной активности PTH пролекарства для применения согласно настоящему изобретению требует времени, в ходе которого определенное количество PTH может быть высвобождено из пролекарства PTH, и что такой высвобожденный PTH может исказить результаты, измеренные для пролекарства PTH. Таким образом, на практике принято проводить испытание остаточной активности пролекарства с конъюгатом, в котором лекарственная составляющая, в данном случае PTH, является необратимой, т.е. стабильно связанной с носителем, который насколько это возможно, напоминает структуру пролекарства PTH, для которого должна быть измерена остаточная активность.

Предпочтительно, фармацевтическая композиция, содержащая по меньшей мере одно PTH контролируемого высвобождения для применения согласно настоящему изобретению имеет значение pH в интервале и включая pH 3 - pH 8. Более предпочтительно, фармацевтическая композиция имеет значение pH в интервале и включая pH 4 - pH 6. Наиболее предпочтительно, фармацевтическая композиция имеет значение pH в интервале и включая pH 4 - pH 5.

В одном варианте выполнения настоящего изобретения фармацевтическая композиция, содержащая по меньшей мере одно PTH контролируемого высвобождения для применения согласно настоящему изобретению представляет собой жидкую композицию или композицию в форме суспензии. Понятно, что фармацевтическая композиция представляет собой композицию в форме суспензии, если PTH соединение контролируемого высвобождения для применения согласно настоящему изобретению является нерастворимым в воде.

В другом варианте выполнения настоящего изобретения фармацевтическая композиция, содержащая по меньшей мере одно PTH контролируемого высвобождения для применения согласно настоящему изобретению представляет собой сухую композицию, которую восстанавливают перед введением пациенту.

Такая жидкая фармацевтическая композиция, фармацевтическая композиция в виде суспензии, сухая или восстановленная фармацевтическая композиция содержит по меньшей мере один эксципиент. Эксципиенты, применяемые в парентеральных композициях, могут быть разделены на категории следующим образом, например, буферные средства, модификаторы изотоничности, консерванты, стабилизаторы, антиадсорбционные средства, средства защиты от окисления, загустители/вещества, увеличивающие вязкость, или другие вспомогательные средства. Однако, в некоторых случаях, один эксципиент может иметь двойные или тройные функции. Предпочтительно, по меньшей мере один эксципиент, содержащийся в фармацевтической композиции для применения согласно настоящему изобретению выбирают из группы, состоящей из следующего:

(i) Буферные средства: физиологически допустимые буферы для поддержания значения pH в желаемом диапазоне, такие как фосфат натрия, бикарбонат, сукцинат, гистидин, цитрат и ацетат, сульфат, нитрат, хлорид, пируват; нейтролизаторы кислот, такие как Mg(OH)₂ или ZnCO₃ также могут применяться;

(ii) Модификаторы изотоничности: чтобы минимизировать боль, которая может стать результатом повреждения клеток в ходе разности осмотического давления при инъекции веществ замедленного всасывания; глицерин и хлорид натрия являются примерами; эффективные концентрации могут быть определены осмометрией, применяя допускаемую осмотическую концентрацию раствора, равную 285-315 мОсмоль/кг для сыворотки;

(iii) Консерванты и/или противомикробные средства: мультидозные парентеральные композиции требуют добавления консервантов при достаточной концентрации, чтобы минимизировать риск заражения пациента при инъекции, и соответствующие регулирующие требования должны быть установлены; типичные консерванты включают м-крезол, фенол, метилпарабен, этилпарабен, пропилпарабен, бутилпарабен, хлорбутанол, бензиловый спирт, фенилртути нитрат, тимерозол, сорбиновую кислоту, сорбат калия, бензойную кислоту, хлоркрезол, и бензалкония хлорид;

(iv) Стабилизаторы: Стабилизация достигается за счет усиления стабилизирующих белок сил, дестабилизации денатурированного состояния или прямого связывания эксципиентов с белком; стабилизаторами могут быть аминокислоты, такие как аланин, аргинин, аспарагиновая кислота, глицин, гистидин, лизин, пролин, сахара, такие как глюкоза, сахароза, трегалоза, полиолы, такие как глицерин, маннит, сорбит, соли, такие как фосфат калия, сульфат натрия, хелатирующие средства, такие как EDTA, гексафосфат, лиганды, такие как ионы двухвалентного металла (цинк, кальций и т.д.), другие соли или органические молекулы, такие как фенольные производные; кроме того, могут быть использованы олигомеры или полимеры, такие как циклодекстрины, декстран, дендримеры, ПЭГ или ПВП или протамин или HSA;

(v) Антиадсорбционные средства: В основном ионные или неионные поверхностно-активные вещества или другие белки или растворимые полимеры применяются для покрытия или конкурентным образом адсорбируются на внутренней поверхности контейнера композиции. Например, полоксамер (Pluronic F-68), ПЭГ додециловый простой эфир (Brij 35), полисорбат 20 и 80, декстран, полиэтиленгликоль, ПЭГ-полигистидин, BSA и HSA и желатины; выбранная концентрация и тип эксципиента зависит от эффекта, которого следует избегать, но обычно монослой поверхностно-активного вещества образуется на границе раздела фаз чуть выше значения CMC;

(vi) Средства защиты от окисления: антиоксиданты, такие как аскорбиновая кислота, эктоин, метионин, глутатион, монотиоглицерин, морин, полиэтиленимин (PEI), пропилгаллат и витамин Е; хелатирующие агенты, такие как лимонная кислота, EDTA, гексафосфат и тиогликолевая кислота, также могут применяться;

(vii) Загустители или вещества, увеличивающие вязкость: в случае суспензии замедляют осаждение частиц во флаконе и шприце и используются для облегчения смешивания и ресуспендирования частиц и для облегчения введения суспензии (т.е. с малой силой на шприцевом поршне); подходящими загустителями или усилителями вязкости являются, например, карбомерные загустители, такие как Carbopol 940, Carbopol Ultrez 10, производные целлюлозы, такие как гидроксипропилметилцеллюлоза (гипромеллоза, HPMC) или диэтиламиноэтилцеллюлоза (DEAE или DEAE-C), коллоидный силикат магния (Veegum) или силикат натрия, гидроксиапатитный гель, трикальцийфосфатный гель, ксантаны, каррагинаны, такие как камедь Satia UTC 30, алифатические поли(гидроксикислоты), как например поли(D, L- или L-молочная кислота) (PLA) и поли(гликолевая кислота) (PGA) и их сополимеры (PLGA), терполимеры D, L-лактида, гликолида и капролактона, полоксамеры, гидрофильные поли(оксиэтиленовые) блоки и гидрофобные поли(оксипропиленовые) блоки для создания триблока поли(оксиэтилен)-поли(оксипропилен)-поли(оксиэтилен) (например, Pluronic®), сополимер простого полиэфира и сложного полиэфира, как например сополимер терефталат полиэтиленгликоля/терефталат полибутилена, сахарозы ацетат изобутират (SAIB), декстран или его производные, комбинации декстранов и ПЭГ, полидиметилсилоксан, коллаген, хитозан, поливиниловый спирт (PVA) и производные, полиалкилимиды, поли(акриламид-со-диаллилдиметиламмоний (DADMA)), поливинилпирролидон (ПВП), глюкозаминогликаны (GAG), такие как дерматан сульфат, хондроитин сульфат, кератан сульфат, гепарин, гепаран сульфат, гиалуронан, ABA триблок- или AB блок-сополимеры, состоящие из гидрофобных А-блоков, как например, полилактид (PLA) или поли(лактид-со-гликолид) (PLGA) и гидрофильные B-блоки, как например полиэтилтенгликоль (ПЭГ) или поливинилпирролидон; такие блок-сополимеры, как и вышеупомянутые полоксамеры, могут проявлять обратимое термическое гелеобразование (состояние жидкости при комнатной температуре для облегчения введения и состояние геля выше температуры перехода золь-гель при температуре тела после инъекции);

(viii) Лиофилизирующий или диффундирующий агент: модифицирует проницаемость соединительной ткани посредством гидролиза компонентов внеклеточного матрикса во интерстициальном пространстве, таких как, но без ограничения к этому, гиалуроновая кислота, полисахарид, обнаруженные в межклеточном пространстве соединительной ткани; лиофилизирующий агент, такой как, но без ограничения к этому, гиалуронидаза, временно снижает вязкость внеклеточной матрицы и способствует диффузии инъецированных лекарственных средств; и

(ix) Другие вспомогательные средства: такие как смачивающие средства, модификаторы вязкости, антибиотики, гиалуронидаза; кислоты и основания, такие как соляная кислота и гидроксид натрия являются вспомогательными средствами, необходимыми для установления значения pH в ходе получения.

Другим объектом настоящего изобретения является способ лечения, контроля, замедления или профилактики у пациента-млекопитающего, одного или более состояний, которые можно лечить, контролировать, замедлять или предупреждать с помощью PTH, включающий стадию введения фармацевтической композиции, содержащей по меньшей мере одно соединение PTH контролируемого высвобождения или его фармацевтически приемлемую соль, гидрат или сольват, не более часто, чем один раз каждые 24 часа с дозой соединения РТН контролируемого высвобождения, которая соответствует не более 70% молярной эквивалентной дозе PTH 1-84, вводимой при такой же частоте дозирования, необходимой для поддержания уровня кальция в сыворотке крови в пределах нормальных уровней в течение 24 часов.

Предпочтительно, пациентом млекопитающим является пациент-человек.

Предпочтительные варианты выполнения, например, соединения PTH контролируемого высвобождения, частоты введения, то есть времени между двумя инъекциями, способа введения и дозировки, являются такими, как описано выше

Предпочтительно, состояние, которое можно лечить, контролировать, замедлять или предупреждать с помощью PTH, выбрано из группы, состоящей из гипопаратиреоидизма, гиперфосфатаземии, остеопороза, заживления трещин, размягчения костей, размягчения костей и остеопороза у пациентов с гипофосфатазией, стероид-индуцированного остеопороза, мужского остеопороза, артрита, остеoартрита, синдрома ломких костей, фиброзной дисплазии, ревматоидного артрита, болезни Паджета, гуморальной гиперкальцемии, связанной со злокачественным новообразованием, остеопении, заболевания пародонта, перелома костей, алопеции, вызванной химиотерапией алопеции и тромбоцитопении. Более предпочтительно, состояние, которое можно лечить, контролировать, замедлять или предупреждать с помощью PTH, выбрано из группы, состоящей из гипопаратиреоидизма, гиперфосфатаземии, заживления трещин, артрита, остеoартрита, ревматоидного артрита, остеопении, заболевания пародонта, перелома костей, алопеции, вызванной химиотерапией алопеции и тромбоцитопении.

Наиболее предпочтительно указанным состоянием является гипопаратиреоидизм.

Примеры

Вещества и Способы

PTH(1-34) с защищенной боковой цепью (SEQ ID NO:51) на TCP смоле, имеющей защитную Boc группу на N-конце и боковой цепью Lys26 с защитной ivDde группой (синтезирован согласно Fmoc-стратегии) получили у поставщиков стандартного пептидного синтеза.

PTH(1-34) с защищенной боковой цепью на TCP смоле, имеющей защитную Fmoc группу на N-конце (синтезирован согласно Fmoc-стратегии) получили у поставщиков стандартного пептидного синтеза.

ПЭГ 2x20 кДа - малеимид, Sunbright GL2-400MA приобрели у NOF Europe N.V., Grobbendonk, Belgium. S-Тритил-6-меркаптогексановую кислоту приобрели у Polypeptide, Strasbourg, France. HATU получили у Merck Biosciences GmbH, Schwalbach/Ts, Germany. Fmoc-N-Me-Asp(OBn)-OH получили у Peptide International Inc., Louisville, KY, USA. Fmoc-Aib-OH приобрели у Iris Biotech GmbH, Marktredwitz, Germany. Все другие химические вещества и реагенты приобрели у Sigma Aldrich GmbH, Taufkirchen, Germany, если другой производитель не указан.

Соединение 11a (примеры 11-15) синтезировали согласно методике, описанной в примере WO29095479A2, пример 1.

Шприцы, оборудованные полиэтиленовой фриттой (MultiSynTech GmbH, Witten, Germany) применяли в качестве реакционных сосудов или на стадии промывки пептидных смол.

Общая методика удаления ivDde защитной группы у PTH с защищенной боковой цепью на смоле: смола предварительно разбухла в DMF в течение 30 мин, и растворитель удалили. Группу ivDde удаляли путем инкубации смолы с DMF/гидразин гидратом 4/1 (об./об., 2,5 мл/г смолы) в течение 8 х 15 мин. Для каждого этапа использовали свежий раствор DMF/гидразин гидрата. Наконец, смолу промыли DMF (10 х), DCM (10 х) и высушили в вакууме.

Общая методика удаления защитной группы Fmoc у защищенного PTH на смоле: смола предварительно набухала в ДМФ в течение 30 мин и растворитель удаляли. Группу Fmoc удаляли путем инкубации смолы с DMF/пиперидином/DBU 96/2/2 (об./об./об., 2,5 мл/г смолы) в течение 3 x 10 мин. Для каждой стадии использовали свежий раствор DMF/пиперидин/DBU. Наконец, смолу промывали DMF (10 х), DCM (10 х) и высушили в вакууме.

Очистка посредством ОФ-ВЭЖХ:

Для препаративной ОФ-ВЭЖХ применяли управляющее устройство Waters 600 и детектор 2487 Dual Absorbance, оборудованные следующими колонками: Waters XBridge^TM BEH300 Prep C18 5 мкм, 150 x 10 мм, скорость потока 6 мл/мин, или Waters XBridge^TM BEH300 Prep C18 10 мкм, 150 x 30 мм, скорость потока 40 мл/мин. Применяли линейные градиенты системы растворителей A (вода, содержащая 0.1% TFA об./об. или 0.01% конц. HCl об./об.) и системы растворителей B (ацетонитрил, содержащий 0.1% TFA об./об. или 0.01% конц. HCl об./об.). ВЭЖХ-фракции, содержащие продукт, объединяли и лиофилизировали, если иного не указано.

Флэш-хроматография

Очистки посредством флэш-хроматографии осуществляли на системе Isolera One от Biotage AB, Sweden, применяя картриджи с силикагелем Biotage KP-Sil и н-гептан и этилацетат в качестве элюентов. Продукты обнаруживали при 254 нм.

Ионообменная хроматография:

Ионообменную хроматографию (IEX) осуществили с использованием системы AERTAbasic Amersham Bioscience AEKTAbasic, оборудованной катионообменной колонкой MacroCap SP (Amersham Bioscience/GE Healthcare). В качестве подвижных фаз использовали 17 мМ уксусную кислоту с pH 4,5 (растворитель А) и 17 мМ уксусной кислоты, 1 М NaCl, рН 4,5 (растворитель В).

Эксклюзионная хроматография размеров:

Эксклюзионную хроматографию размеров (SEC) проводили с использованием системы Amersham Bioscience AEKTAbasic, оснащенной обессоливающей колонкой HiPrep 26/10 (Amersham Bioscience/GE Healthcare). 0.1% (об./об.) уксусную кислоту применяли в качестве подвижной фазы.

Аналитические методы

Аналитическую сверхвысокоэффективную LC (UPLC)-MS проводили на системе Waters Acquity, оборудованной колонкой Waters BEH300 C18 (размер частиц 2,1 x 50 мм, размер частиц 1,7 мкм, поток: 0,25 мл/мин, растворитель A: вода, содержащая 0,04% TFA (об. /об.), Растворитель В: ацетонитрил, содержащий 0,05% TFA (об./об.)), соединенной с масс-спектрометром LTQ Orbitrap Discovery от Thermo Scientific или соединенной с Waters Microsass ZQ.

Количественные измерения сывороточного кальция (sCa), кальция в моче и сывороточного фосфора (sP) были выполнены на модульном биохимическом приборе Roche-Hitachi P800.

Пример 1

Синтез линкерного реагента 1f

Линкерный реагент 1f синтезировали согласно следующей схеме:

В раствор N-метил-N-Boc-этилендиамина (2 г, 11.48 ммоль) и NaCNBH₃ (819 мг, 12.63 ммоль) в MeOH (20 мл) добавили 2,4,6-триметоксибензальдегид (2.08 г, 10.61 ммоль) частями. Смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 90 мин, подкислили 3 M HCl (4 мл) и перемешивали еще 15 мин. Реакционную смесь добавили в насыщенный NaHCO₃ (200 мл) и экстрагировали 5 x с помощью DCM. Объединенные органические фазы высушили над Na₂SO_4, и растворители выпарили в вакууме. Полученный N-метил-N-Boc-N’-Tmob-этилендиамин 1a высушили под высоким вакуумом и применяли на следующей стадии без дальнейшей стадии.

Выход: 3.76 г (11.48 ммоль, 89% чистота, 1a: дважды Tmob защищенный продукт=8:1)

MS: m/z 355.22=[M+H]⁺, (вычисленная моноизотопная масса=354.21).

К раствору 1a (2 г, 5.65 ммоль) в CH₂Cl₂ (24 мл) COMU (4.84 г, 11.3 ммоль), N-Fmoc-N-Me-Asp(OBn)-OH (2.08 г, 4.52 ммоль) и 2,4,6-коллидин (2.65 мл, 20.34 ммоль) добавили. Реакционную смесь перемешивали в течение 3 ч при комнатной температуре, разбавили с помощью CH₂Cl₂ (250 мл) и промыли 3 x с помощью 0.1 M H₂SO₄ (100 мл) и 3 x с помощью соляного раствора (100 мл). Водные фазы повторно экстрагировали с помощью CH₂Cl₂ (100 мл). Объединенные органические фазы высушили над Na₂SO₄, отфильтровали, и остаток концентрировали до объема 24 мл. Соединение 1b очистили, применяя флэш-хроматографию.

Выход: 5.31 г (148%, 6.66 ммоль)

MS: m/z 796.38=[M+H]⁺, (вычисленная моноизотопная масса=795.37).

К раствору 1b (5.31 г, макс.4.52 ммоль, обозначается как N-Fmoc-N-Me-Asp(OBn)-OH) в THF (60 мл) DBU (1.8 мл, 3% об./об.) добавили. Раствор перемешивали в течение 12 мин при комнатной температуре, разбавили с помощью DCM (400 мл) и промыли 3 x с помощью 0.1 M H₂SO₄ (150 мл) и 3 x с помощью соляного раствора (150 мл). Водные фазы повторно экстрагировали с помощью DCM (100 мл). Объединенные органические фазы высушили над Na₂SO₄ и отфильтровали. Соединение 1c выделили при выпаривании растворителя и применяли на следующей стадии без дальнейшей очистки.

MS: m/z 574.31=[M+H]⁺, (вычисленная моноизотопная масса=573.30).

Соединение 1c (5.31 г, 4.52 ммоль, неочищенное) растворили в ацетонитриле (26 мл) и COMU (3.87 г, 9.04 ммоль), 6-тритилмеркаптокапроновую кислоту (2.12 г, 5.42 ммоль) и 2,4,6-коллидин (2.35 мл, 18.08 ммоль) добавили. Реакционную смесь перемешивали в течение 4 ч при комнатной температуре, разбавили с помощью DCM (400 мл) и промыли 3 x с помощью 0.1 M H₂SO₄ (100 мл) и 3 x с помощью соляного раствора (100 мл). Водные фазы повторно экстрагировали с помощью DCM (100 мл). Объединенные органические фазы высушили над Na₂SO₄, отфильтровали и 1d выделили при выпаривании растворителя. Продукт 1d очистили, применяя флэш-хроматографию.

Выход: 2.63 г (62%, 94% чистота)

MS: m/z 856.41=[M+H]⁺, (вычисленная моноизотопная масса=855.41).

К раствору 1d (2.63 г, 2.78 ммоль) в i-PrOH (33 мл) и H₂O (11 мл) добавили LiOH (267 мг, 11.12 ммоль), и реакционную смесь перемешивали в течение 70 мин при комнатной температуре. Смесь разбавили с помощью DCM (200 мл) и промыли 3 x с помощью 0.1 M H₂SO₄ (50 мл) и 3 x с помощью соляного раствора (50 мл). Водные фазы повторно экстрагировали с помощью DCM (100 мл). Объединенные органические фазы высушили над Na₂SO₄, отфильтровали, и соединение 1e выделили при выпаривании растворителя. Соединение 1e очистили, применяя флэш-хроматографию.

Выход: 2.1 г (88%)

MS: m/z 878.4=[M+Na]⁺, (вычисленная моноизотопная масса=837.40).

К раствору 1e (170 мг, 0.198 ммоль) в безводном DCM (4 мл) добавили DCC (123 мг, 0.59 ммоль) и каталитическое количество DMAP. Через 5 мин N-гидрокси-сукцинимид (114 мг, 0.99 ммоль) добавили, и реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч. Реакционную смесь отфильтровали, растворитель удалили в вакууме, и остаток растворили в 90% ацетонитриле плюс 0.1% TFA (3.4 мл). Неочищенную смесь очистили посредством ОФ-ВЭЖХ. Фракции продукта нейтрализовали с помощью 0.5 M pH 7.4 фосфатного буфера и концентрировали. Оставшуюся водную фазу экстрагировали с помощью DCM, и 1f выделили при выпаривании растворителя.

Выход: 154 мг (81%)

MS: m/z 953.4=[M+H]⁺, (вычисленная моноизотопная масса=952.43).

Пример 2

Синтез линкерного реагента 2g

4-метокситрифенилметил хлорид (3.00 г, 9.71 ммоль) растворили в DCM (20 мл) и добавили по каплям при перемешивании в раствор этилендиамин 2a (6.5 мл, 97.3 ммоль) в DCM (20 мл). Реакционную смесь перемешивали в течение 2 ч при комнатной температуре, после чего его разбавили диэтиловым простым эфиром (300 мл), промыли 3 x соляным раствором/0.1 M NaOH 30/1 (об./об.) и один раз соляным раствором. Органическую фазу высушили над Na₂SO_4, и соединение 2b выделили при выпаривании растворителя.

Выход: 3.18 г (98%)

Mmt-защищенное промежуточное соединение 2b (3.18 г, 9.56 ммоль) растворили в DCM (30 мл). 6-(Тритилтио)-гексановую кислоту (4.48 г, 11.5 ммоль), PyBOP (5.67 г, 10.9 ммоль) и DIPEA (5.0 мл, 28.6 ммоль) добавили, и смесь перемешивали в течение 30 минут при комнатной температуре. Раствор разбавили простым диэтиловым эфиром (250 мл), промыли 3 x соляным раствором/0.1 M NaOH 30/1 (об./об.) и один раз соляным раствором. Органическую фазу высушили над Na₂SO_4, и растворитель удалили в вакууме. 2c очистили, применяя флэш-хроматографию.

Выход: 5.69 г (85%)

MS: m/z 705.4=[M+H]⁺, (вычисленная моноизотопная масса=704.34).

Соединение 2c (3.19 г, 4.53 ммоль) растворили в безводном THF (50 мл), 1 M BH₃·THF раствор в THF (8.5 мл, 8.5 ммоль) добавили, и смесь перемешивали в течение 16 ч при комнатной температуре. Еще 1 M BH₃·THF раствор в THF (14 мл, 14.0 ммоль) добавили, и смесь перемешивали в течение еще 16 ч при комнатной температуре. Метанол (8.5 мл) и N,N´-диметил-этилендиамин (3.00 мл, 27.9 ммоль) добавили, и смесь нагревали с обратным холодильников в течение 3 ч. Смеси позволили охладиться, и этилацетат (300 мл) добавили. Раствор промыли 2 x водным Na₂CO₃ и 2 x водным NaHCO₃. Органическую фазу высушили над Na₂SO_4, и растворитель удалили в вакууме с получением соединения 2d.

Выход: 3.22 г (103%)

MS: m/z 691.4=[M+H]⁺, (вычисленная моноизотопная масса=690.36).

Ди-трет-бутил дикарбонат (2.32 г, 10.6 ммоль) и DIPEA (3.09 мл, 17.7 ммоль) растворили в DCM (5 мл) и добавили в раствор 2d (2.45 г, 3.55 ммоль) в DCM (5 мл). Смесь перемешивали в течение 30 минут при комнатной температуре. Раствор концентрировали в вакууме и очистили с применением флэш-хроматографии с получением продукта 2e.

Выход: 2.09 г (74%)

MS: m/z 791.4=[M+H]⁺, (вычисленная моноизотопная масса=790.42).

Соединение 2e (5.01 г, 6.34 ммоль) растворили в ацетонитриле (80 мл). 0.4 M водную HCl (80 мл), а затем ацетонитрил (20 мл) добавили, и смесь перемешивали в течение 1 ч при комнатной температуре. Значение pH довели до pH 5.5 посредством добавления водного 5 M NaOH. Органический растворитель удалили в вакууме, и оставшийся водный раствор экстрагировали 4 x с помощью DCM. Объединенные органические фазы высушили над Na₂SO_4, и растворитель удалили в вакууме с получением продукта 2f.

Выход: 4.77 г (95%)

MS: m/z 519.3=[M+H]⁺, (вычисленная моноизотопная масса=518.30).

Соединение 2f (5.27 г, 6.65 ммоль) растворили в DCM (30 мл) и добавили в раствор п-нитрофенил флорформиата (2.01 г, 9.98 ммоль) в DCM (25 мл). 2,4,6-триметилпиридин (4.38 мл, 33.3 ммоль) добавили, и раствор перемешивали в течение 45 минут при комнатной температуре. Раствор концентрировали в вакууме и очистили с применением флэш-хроматографии с получением продукта 2g.

Выход: 4.04 г (89%)

MS: m/z 706.32=[M+Na]⁺, (вычисленная моноизотопная масса=683.30).

Пример 3

Синтез перманентного конъюгата S1 PTH(1-34) 3

PTH(1-34) с защищенной боковой цепью на TCP смоле, имеющей защитную Fmoc группу на N-конце подвергли удалению Fmoc защитной группы согласно методике, приведенной в части Вещества и способы. Раствор 6-тритилмеркаптогексановой кислоты (62.5 мг, 160 мкмоль), PyBOP (80.1 мг, 154 мкмоль) и DIPEA (53 мкл, 306 мкмоль) в DMF (2 мл) добавили к 0.21 г (51 мкмоль) смолы. Суспензию встряхивали в течение 80 минут при комнатной температуре. Смолу промыли 10 x с DMF, 10 x с DCM и высушили в вакууме. Отщепление пептида от смолы и удаление защитных групп достигали посредством добавления 10 мл расщепляющего коктейля 100/3/3/2/1 (об./мас./об./об./об.) TFA/DTT/TES/вода/тиоанизол и встряхивания суспензии в течение 1 ч при комнатной температуре. Неочищенное соединение 3 осадили в предварительно охлажденном простом диэтиловом эфире (-18°C). Осадок растворили в ACN/вода и очистили посредством ОФ-ВЭЖХ. Фракции продукта лиофилизировали.

Выход: 36 мг (14%), 3*8 TFA

MS: m/z 1062.31=[M+4H]⁴⁺, (вычисленная моноизотопная масса для [M+4H]⁴⁺=1062.30).

Пример 4

Синтез перманентного конъюгата K26 PTH(1-34) 4

PTH(1-34) с защищенной боковой цепью на TCP смоле, имеющей защитную Boc группу на N-конце и боковой цепью Lys26 с защитной ivDde группой подвергли удалению ivDde защитной группы согласно методике, приведенной в части Вещества и способы. Раствор 6-тритилмеркаптогексановой кислоты (107 мг, 273 мкмоль), PyBOP (141 мг, 273 мкмоль) и DIPEA (95 мкл, 545 мкмоль) в DMF (3 мл) добавили к 0.80 г (90.9 мкмоль) смолы. Суспензию встряхивали в течение 1 ч при комнатной температуре. Смолу промыли 10 x с DMF, 10 x с DCM и высушили в вакууме. Отщепление пептида от смолы и удаление защитных групп достигали посредством добавления 6 мл расщепляющего коктейля 100/3/3/2/1 (об./мас./об./об./об.) TFA/DTT/TES/вода/тиоанизол и встряхивания суспензии в течение 1 ч при комнатной температуре. Неочищенное соединение 4 осадили в предварительно охлажденном простом диэтиловом эфире (-18°C). Осадок растворили в ACN/вода и очистили посредством ОФ-ВЭЖХ. Фракции продукта лиофилизировали.

Выход: 40 мг (8%), 4*8 TFA

MS: m/z 1062.30=[M+4H]⁴⁺, (вычисленная моноизотопная масса для [M+4H]⁴⁺=1062.30).

Пример 5

Синтез временного конъюгата S1 PTH(1-34)

PTH(1-34) с защищенной боковой цепью на TCP смоле, имеющей защитную Fmoc группу на N-конце подвергли удалению Fmoc защитной группы согласно методике, приведенной в части Вещества и способы. Раствор Fmoc-Aib-OH (79 мг, 244 мкмоль), PyBOP (127 мг, 244 мкмоль) и DIPEA (64 мкл, 365 мкмоль) в DMF (1.5 мл) добавили к 0.60 г (61 мкмоль) смолы. Суспензию встряхивали в течение 16 ч при комнатной температуре. Смолу промыли 10 x с DMF и подвергли удалению Fmoc защитной группы, как описано выше. Раствор соединеия 2g (167 мг, 244 мкмоль) и DIPEA (64 мкл, 365 мкмоль) в DMF (1.5 мл) добавили к смоле. Суспензию встряхивали в течение 24 ч при комнатной температуре. Смолу промыли 10 x с DMF, 10 x с DCM и высушили в вакууме. Отщепление пептида от смолы и удаление защитных групп достигали посредством добавления 7 мл расщепляющего коктейля 100/3/3/2/1 (об./мас./об./об./об.) TFA/DTT/TES/вода/тиоанизол и встряхивания суспензии в течение 1 ч при комнатной температуре. Неочищенное соединение 5 осадили в предварительно охлажденном простом диэтиловом эфире (-18°C). Осадок растворили в ACN/вода и очистили посредством ОФ-ВЭЖХ. Фракции продукта лиофилизировали.

Выход: 78 мг (24%), 5*9 TFA

MS: m/z 1101.59=[M+4H]⁴⁺, (вычисленная моноизотопная масса для [M+4H]⁴⁺=1101.57).

Пример 6

Синтез временного конъюгата S1 PTH(1-34) 6

PTH(1-34) с защищенной боковой цепью на TCP смоле, имеющей защитную Fmoc группу на N-конце подвергли удалению Fmoc защитной группы согласно методике, приведенной в части Вещества и способы. Раствор Fmoc-Ala-OH (32 мг, 102 мкмоль), PyBOP (53 мг, 102 мкмоль) и DIPEA (27 мкл, 152 мкмоль) в DMF (3 мл) добавили к 0.25 г (25 мкмоль) смолы. Суспензию встряхивали в течение 1 ч при комнатной температуре. Смолу промыли 10 x с DMF, 10 x с DCM и высушили в вакууме. Удаление защитной группы Fmoc осуществили, как описано выше. Раствор соединения 2g (69 мг, 102 мкмоль) и DIPEA (27 мкл, 152 мкмоль) в DMF (3 мл) добавили к смоле. Суспензию встряхивали в течение 1.5 ч при комнатной температуре. Смолу промыли 10 x с DMF, 10 x с DCM и высушили в вакууме. Отщепление пептида от смолы и удаление защитных групп достигали посредством добавления 3 мл расщепляющего коктейля 100/3/3/2/1 (об./мас./об./об./об.) TFA/DTT/TES/вода/тиоанизол и встряхивания суспензии в течение 1 ч при комнатной температуре. Неочищенное соединение 6 осадили в предварительно охлажденном простом диэтиловом эфире (-18°C). Осадок растворили в ACN/вода и очистили посредством ОФ-ВЭЖХ. Фракции продукта лиофилизировали.

Выход: 25 мг (18%), 6*9 TFA

MS: m/z 1098.75=[M+4H]⁴⁺, (вычисленная моноизотопная масса для [M+4H]⁴⁺=1098.07).

Пример 7

Синтез временного конъюгата S1 PTH(1-34) 7

PTH(1-34) с защищенной боковой цепью на TCP смоле, имеющей защитную Fmoc группу на N-конце подвергли удалению Fmoc защитной группы согласно методике, приведенной в части Вещества и способы. Раствор Fmoc-Ser(Trt)-OH (117 мг, 205 мкмоль), PyBOP (108 мг, 207 мкмоль) и DIPEA (53 мкл, 305 мкмоль) в DMF (2 мл) добавили к 0.50 г (51 мкмоль) смолы. Суспензию встряхивали в течение 1 ч при комнатной температуре. Смолу промыли 10 x с DMF, 10 x с DCM и высушили в вакууме. Удаление защитной группы Fmoc осуществили, как описано выше. Раствор 2g (144 мг, 211 мкмоль) и DIPEA (53 мкл, 305 мкмоль) в DMF (1.8 мл) добавили к смоле. Суспензию встряхивали в течение 7 ч при комнатной температуре. Смолу промыли 10 x с DMF, 10 x с DCM и высушили в вакууме. Отщепление пептида от смолы и удаление защитных групп достигали посредством добавления 6 мл расщепляющего коктейля 100/3/3/2/1 (об./мас./об./об./об.) TFA/DTT/TES/вода/тиоанизол и встряхивания суспензии в течение 1 ч при комнатной температуре. Неочищенное соединение 7 осадили в предварительно охлажденном простом диэтиловом эфире (-18°C). Осадок растворили в ACN/вода и очистили посредством ОФ-ВЭЖХ. Фракции продукта лиофилизировали.

Выход: 54 мг (20%), 7*9 TFA

MS: m/z 1102.08=[M+4H]⁴⁺, (вычисленная моноизотопная масса для [M+4H]⁴⁺=1102.07).

Пример 8

Синтез временного конъюгата S1 PTH(1-34) 8

PTH(1-34) с защищенной боковой цепью на TCP смоле, имеющей защитную Fmoc группу на N-конце подвергли удалению Fmoc защитной группы согласно методике, приведенной в части Вещества и способы. Раствор Fmoc-Leu-OH (36 мг, 102 мкмоль), PyBOP (53 мг, 102 мкмоль) и DIPEA (27 мкл, 152 мкмоль) в DMF (3 мл) добавили к 0.25 г (25 мкмоль) смолы. Суспензию встряхивали в течение 1 ч при комнатной температуре. Смолу промыли 10 x с DMF, 10 x с DCM и высушили в вакууме. Удаление защитной группы Fmoc осуществили, как описано выше. Раствор соединения 2g (69 мг, 102 мкмоль) и DIPEA (27 мкл, 152 мкмоль) в DMF (3 мл) добавили к смоле. Суспензию встряхивали в течение 1.5 ч при комнатной температуре. Смолу промыли 10 x с DMF, 10 x с DCM и высушили в вакууме. Отщепление пептида от смолы и удаление защитных групп достигали посредством добавления 3 мл расщепляющего коктейля 100/3/3/2/1 (об./мас./об./об./об.) TFA/DTT/TES/вода/тиоанизол и встряхивания суспензии в течение 1 ч при комнатной температуре. Неочищенное соединение 8 осадили в предварительно охлажденном простом диэтиловом эфире (-18°C). Осадок растворили в ACN/вода и очистили посредством ОФ-ВЭЖХ. Фракции продукта лиофилизировали.

Выход: 31 мг (22%), 8*9 TFA

MS: m/z 1109.32=[M+4H]⁴⁺, (вычисленная моноизотопная масса для [M+4H]⁴⁺=1108.58).

Пример 9

Синтез временного конъюгата S1 PTH(1-34) 9

PTH(1-34) с защищенной боковой цепью на TCP смоле, имеющей защитную Fmoc группу на N-конце подвергли удалению Fmoc защитной группы согласно методике, приведенной в части Вещества и способы. Раствор соединения 1e (182 мг, 213 мкмоль), PyBOP (111 мг, 213 мкмоль) и DIPEA (93 мкл, 532 мкмоль) в DMF (5 мл) добавили к 2.00 г (107 мкмоль) смолы. Суспензию встряхивали в течение 16 ч при комнатной температуре. Смолу промыли 10 x с DMF, 10 x с DCM и высушили в вакууме. Отщепление пептида от смолы и удаление защитных групп достигали посредством добавления 20 мл расщепляющего коктейля 100/3/3/2/1 (об./мас./об./об./об.) TFA/DTT/TES/вода/тиоанизол и встряхивания суспензии в течение 1 ч при комнатной температуре. Неочищенное соединение 9 осадили в предварительно охлажденном простом диэтиловом эфире (-18°C). Осадок растворили в ACN/вода и очистили посредством ОФ-ВЭЖХ. Фракции продукта лиофилизировали.

Выход: 47 мг (8%), 9*9 TFA

MS: m/z 1108.58=[M+4H]⁴⁺, (вычисленная моноизотопная масса для [M+4H]⁴⁺=1108.57).

Пример 10

Синтез временного конъюгата K26 PTH(1-34) 10

PTH(1-34) с защищенной боковой цепью на TCP смоле, имеющей защитную Boc группу на N-конце и боковой цепью Lys26 с защитной ivDde группой подвергли удалению ivDde защитной группы согласно методике, приведенной в части Вещества и способы. Раствор соединения 1f (867 мг, 910 мкмоль) и DIPEA (0.24 мл, 1.36 ммоль) в DMF (5 мл) добавили к 1.91 г (227 мкмоль) смолы. Суспензию встряхивали в течение 1 ч при комнатной температуре. Смолу промыли 10 x с DMF, 10 x с DCM и высушили в вакууме. Отщепление пептида от смолы и удаление защитных групп достигали посредством добавления 20 мл расщепляющего коктейля 100/3/3/2/1 (об./мас./об./об./об.) TFA/DTT/TES/вода/тиоанизол и встряхивания суспензии в течение 1 ч при комнатной температуре. Неочищенное соединение 10 осадили в предварительно охлажденном простом диэтиловом эфире (-18°C). Осадок растворили в ACN/вода и очистили посредством ОФ-ВЭЖХ. Фракции продукта лиофилизировали.

Выход: 92 мг (7%), 10*9 TFA

MS: m/z 1108.58=[M+4H]⁴⁺, (вычисленная моноизотопная масса для [M+4H]⁴⁺=1108.57).

Пример 11

Синтез низкомолекулярного временного конъюгата S1 ПЭГ 11b

0.15 мл 0.5 M NaH₂PO₄ буфера (pH 7.4) добавили к 0.5 мл 20 мг/мл раствора тиола 5 (10 мг, 1.84 мкмоль) в 1/1 (об./об.) ацетонитрила/воды, содержащей 0.1% TFA (об./об.). Раствор инкубировали при комнатной температуре в течение 10 минут, после чего 238 мкл 10 мг/мл раствора малеимида 11a (2.4 мг, 2.21 мкмоль) в 1/1 (об./об.) ацетонитрил/вода, содержащая 0.1% TFA (об./об.), добавили. Раствор инкубировали в течение 20 минут при комнатной температуре. 10 мкл TFA добавили, и смесь очистили посредством ОФ-ВЭЖХ. Фракции продукта лиофилизировали с получением соединения 11b.

Выход: 3.1 мг (26%), 11b*9 TFA

MS: m/z 1097.00=[M+4H]⁴⁺, (вычисленная моноизотопная масса для [M+5H]⁵⁺=1096.99).

Пример 12

Синтез низкомолекулярного временного конъюгата S1 ПЭГ 12

Конъюгат 12 синтезировали, как описано для 11b посредством применения тиола 6 (10 мг, 1.85 мкмоль) и малеимида 11a (2.4 мг, 2.21 мкмоль).

Выход: 10 мг (83%), 12*9 TFA

MS: m/z 1094.20=[M+4H]⁴⁺, (вычисленная моноизотопная масса для [M+4H]⁴⁺=1094.19).

Пример 13

Синтез низкомолекулярного временного конъюгата S1 ПЭГ 13

Конъюгат 13 синтезировали, как описано для 11b посредством применения тиола 7 (10 мг, 1.84 мкмоль) и малеимида 11a (2.4 мг, 2.21 мкмоль).

Выход: 8 мг (67%), 13*9 TFA

MS: m/z 1097.40=[M+5H]⁵⁺, (вычисленная моноизотопная масса для [M+5H]⁵⁺=1097.39).

Пример 14

Синтез низкомолекулярного временного конъюгата S1 ПЭГ 14

Конъюгат 14 синтезировали, как описано для 11b посредством применения тиола 8 (10 мг, 1.83 мкмоль) и малеимида 11a (2.4 мг, 2.21 мкмоль).

Выход: 4 мг (33%), 14*9 TFA

MS: m/z 1378.01=[M+4H]⁴⁺, (вычисленная моноизотопная масса для [M+4H]⁴⁺=1378.00).

Пример 15

Синтез низкомолекулярного временного конъюгата K26 ПЭГ 15

Конъюгат 15 синтезировали, как описано для 11b посредством применения тиола 10 (5.2 мг, 0.95 мкмоль) и малеимида 11a (1.23 мг, 1.14 мкмоль).

Выход: 2.1 мг (33%), 15*9 TFA

MS: m/z 1102.60=[M+5H]⁵⁺, (вычисленная моноизотопная масса для [M+5H]⁵⁺=1102.59).

Пример 16

Синтез перманентного конъюгата 2x20 кДа S1 ПЭГ 16

772 мкл раствора, содержащего тиол 3 (19.4 мг/мл, 15 мг, 3.54 мкмоль) и 2.5 мг/мл Boc-L-Met в 1/1 (об./об.) ацетонитрил/вода, содержащая 0.1% TFA (об./об.), добавили к 1.87 мл раствора, содержащего ПЭГ 2x20 кДа - малеимид (Sunbright GL2-400MA, 187 мг, 4.32 мкмоль) и 2.5 мг/мл Boc-L-Met в воде, содержащей 0.1% TFA (об./об.). 0.5 M NaH₂PO₄ буфера (0.66 мл, pH 7.0) добавили, и смесь перемешивали в течение 30 минут при комнатной температуре. 10 мкл 270 мг/мл раствора 2-меркаптоэтанола в воде добавили. Смесь перемешивали в течение 5 минут при комнатной температуре и 0.33 мл 1 M HCl добавили. Конъюгат 16 очистили посредством IEX с последующей ОФ-ВЭЖХ, применяя линейный градиент системы растворителей A (вода, содержащая 0.1% AcOH об./об.) и системы растворителей B (ацетонитрил, содержащий 0.1% AcOH об./об.). Фракции, содержащие раствор, лиофилизировали.

Выход: 97 мг (2.01 мкмоль, 57%) конъюгата 16*8 AcOH

Пример 17

Синтез перманентного конъюгата 2x20 кДа K26 ПЭГ 17

Конъюгат 17 получили как описано для 16 посредством реакции тиола 4 (15 мг, 3.53 мкмоль) и ПЭГ 2x20 кДа - малеимида (Sunbright GL2-400MA, 187 мг, 4.32 мкмоль).

Выход: 80 мг (1.79 мкмоль, 51%) конъюгата 17*8 AcOH

Пример 18

Синтез временного конъюгата 2x20 кДа S1 ПЭГ 18

Конъюгат 18 получили как описано для 16 посредством реакции тиола 5 (37 мг, 8.40 мкмоль) и ПЭГ 2x20 кДа - малеимида (Sunbright GL2-400MA, 445 мг, 9.24 мкмоль). Реакцию погасили посредством добавления 50 мкл TFA без добавления 2-меркаптоэтанола. Конъюгат 18 очистили посредством IEX с последующей SEC для обессоливания. Фракции, содержащие раствор, лиофилизировали.

Выход: 161 мг (3.33 мкмоль, 40%) конъюгата 18*9 AcOH

Пример 19

Синтез временного конъюгата 2x20 кДа S1 ПЭГ 19

Конъюгат 19 получили как описано для 16 посредством реакции тиола 7 (27 мг, 6.14 мкмоль) и ПЭГ 2x20 кДа - малеимида (Sunbright GL2-400MA, 325 мг, 7.50 мкмоль).

Выход: 249 мг (5.16 мкмоль, 84%) конъюгата 19*9 AcOH

Пример 20

Синтез временного конъюгата 2x20 кДа S1 ПЭГ 20

Конъюгат 20 получили как описано для 16 посредством реакции тиола 9 (38 мг, 8.59 мкмоль) и ПЭГ 2x20 кДа - малеимида (Sunbright GL2-400MA, 455 мг, 9.45 мкмоль). Реакцию погасили посредством добавления 50 мкл TFA без добавления 2-меркаптоэтанола. Конъюгат 20 очистили посредством IEX с последующей SEC для обессоливания. Фракции, содержащие раствор, лиофилизировали.

Выход: 194 мг (4.01 мкмоль, 47%) конъюгата 20*9 AcOH

Пример 21

Синтез временного конъюгата 2x20 кДа K26 ПЭГ 21

Конъюгат 21 получили как описано для 16 посредством реакции тиола 10 (34 мг, 7.58 мкмоль) и ПЭГ 2x20 кДа - малеимида (Sunbright GL2-400MA, 401 мг, 9.26 мкмоль).

Выход: 256 мг (5.30 мкмоль, 70%) конъюгат 21*9 AcOH

Пример 22

Фармакодинамические действия на тиреопаратиреоидэктомированных (TPTx) крысах в ходе 28-дневного исследования с ежедневными подкожными инъекциями конъюгата 18 или PTH(1-84)

Это исследование было проведено для того, чтобы проверить и сравнить влияние ежедневной подкожной инъекции соединения 18 и PTH (1-84), текущего стандарта безопасности, на животной модели заболевания, релевантной для исследования лечения гипопаратиреоидизма (НР). Крысы, подвергшиеся тиропаратиреоидэктомии (TPTx) тупой диссекцией, не могут вырабатывать гормон паращитовидной железы, PTH, главный регулятор гомеостаза кальция. Следовательно, у крыс TPTx развивается гипокальциемия и гиперфосфатаземия, характерные для HP. 17-недельным самкам крыс SD TPTx (n=9 / группа) вводили подкожно в течение 28 дней дозу соединения 18 (5 мкг PTH экв/кг/день, 1,2 нмоль/кг/день, в 10 мМ янтарной кислоте, 46 г/л маннита, pH 4,0), PTH (1-84) (70 мкг PTH экв/кг/день, 7,3 нмоль/кг/день, в 10 мМ цитрате, маннит 39,0 г/л, рН 5,0) или среду. Дополнительно, одна группа ложнооперированных крыс (n=9) представляющих собой нормальнофизиологический фоновый контроль, также получала среду. Уровень сывороточного кальция (sCa) и фосфора (sP) у животных измерялся до и после в введения дозы в день 1, 6, 12 и 27. Кроме того, измерялись маркеры ремоделирования кости (P1NP и CTx), и качество кости оценивалось посредством ex vivo pQCT.

Результаты: средний sCa у крыс TPTx, предварительно дозированных на день 1, составлял 8,3 мг/дл по сравнению с 10,9 мг/дл у контрольных ложнооперированных крыс.Значения sP составляли 8,7 мг/дл и 5,9 мг/дл, соответственно. Соединение 18 вводилось ежедневно при 1,2 нмоль/кг, повышая sCa до почти нормальных уровней при снижении sP в течение нескольких дней введения. На день 12 (день 5 в стабильном состоянии с соединением 18) sCa стабилизировался на нормальном уровне (10,7 мг/дл) у этой группы животных (соотношение соединение 18/ложнооперированный контроль=1,01) в отличие от гипокальцемического уровня (8,1 мг/дл), измеренного у крыс, получающих лечение PTH (1-84) (соотношение PTH (1-84)/ложнооперированный контроль=0,76). Кроме того, 24-Hасовое выведение Ca в моче на день 12 было сопоставимо между животными, обработанными соединением 18, и ложнооперированным контролем. Минеральная плотность костной массы (BMD) и содержание минералов в костях (BMC) были увеличены в TPTx контролях, как наблюдается у пациентов с HP. Обработка с соединением 18 уменьшала BMD, BMC и область параллельно с увеличением CTx по сравнению с ложнооперированными и обработанными средой TPTx животными. Значительное увеличение трабекулярной BMD наблюдалось у животных, которым вводили PTH(1-84) по сравнению с обеими контрольными группами.

Был сделан вывод о том, что соединение 18 при дозе, даже менее 20% от молярного эквивалента протестированной здесь дозы PTH(1-84), способно поддерживать sCa на уровне, сравнимом с уровнем sCa у ложнооперированных контрольных животных (здесь представляет собой нормальный уровень) в течение 24 часов. Напротив, PTH(1-84) в дозе 7,3 нмоль/кг/день не приводило к увеличению sCa по сравнению с уровнями крыс TPTx, которым инъецировали среду. Тем не менее, минимальное снижение sP наблюдалось у животных, которым вводили дозы PTH (1-84), подтверждая воздействие и реакцию на PTH(1-84) у крыс.После 28-дневного лечения соединением 18 трабекулярная и кортикальная BMD в позвонках находились в нормальном диапазоне, тогда как анаболический эффект наблюдался для PTH(1-84) в отношении трабекулярной и кортикальной костей в позвонках.

Аббревиатуры:

ACN ацетонитрил

AcOH уксусная кислота

Aib 2-аминоизомасляная кислота

BMD минеральная плотность костей

Bn бензил

Boc трет-бутилоксикарбонил

COMU (1-циано-2-этокси-2-оксоэтилиденаминоокси)диметиламино-морфолино-карбения гексафторфосфат

cAMP циклический аденозин монофосфат

д день

DBU 1,3-диазабицикло[5.4.0]ундецен

DCC N,N’-дициклогексилкарбодиимид

DCM дихлорметан

DIPEA N,N-диизопропилэтиламин

DMAP диметиламино-пиридин

DMF N,N-диметилформамид

DMSO диметилсульфоксид

DTT дитиотреитол

EDTA этилендиаминтетрауксусная кислота

экв стехиометрический эквивалент

ESI-MS масс-спектрометрия с ионизацией электрораспылением

Et этил

Fmoc 9-флуоренилметилоксикарбонил

Glu-C эндопротеиназа Glu-C

h час

HATU O-(7-азабензотриазол-1-yl)-N,N,N′,N′-тетраметилурония гексафторфосфат

HP гипопаратиреоидизм

HPLC высокоэффективная жидкостная хроматография

ivDde 4,4-диметил-2,6-диоксоциклогекс-1-илиден)-3-метилбутил

LC жидкостная хроматография

LTQ линейная квадрупольная ловушка

Lys-C эндопротеиназа Lys-C

LLOQ нижняя граница количественного показателя

Mal 3-малеимидопропил

Me метил

MeOH метанол

мин минуты

Mmt монометокситритил

MS масс-спектор / масс-спектрометрия

m/z соотношение массы и заряда

OtBu трет-бутилокси

ПЭГ поли(этиленгликоль)

pH potentia Hydrogenii

PK фармакокинетика

Pr пропил

PTH паратироидный гормон

PyBOP бензотриазол-1-ил-окситрипирролидинофосфония гексафторфосфат

Q-TOF квадрупольный времяпролетный

ОФ-ВЭЖХ обращено-фазовая высокоэффективная жидкостная хроматография

rt комнатная температура

sCa сывороточный кальций

SIM мониторинг избранных ионов

SEC эксклюзионная хроматография размеров

sc подкожно

sP сыворотный фосфат

t_1/2 период полувысвобождения

TCP тритилхлоридполистирол

TES триэтилсилан

TFA трифторуксусная кислота

THF тетрагидрофуран

Tmob 2,4,6-триметоксибензил

TPTx тиропаратиреоидэктомия

Trt трифенилметил, тритил

ULOQ верхний предел количественного показателя

UPLC сверхвысокоэффективная жидкостная хроматография

UV ультрафиолет

ZQ одноквадрупольный

--->

Перечень последовательностей

<110>Ascendis Pharma A/S

<120>РЕЖИМ ДОЗИРОВАНИЯ СОЕДИНЕНИЯ PTH КОНТРОЛИРУЕМОГО ВЫСВОБОЖДЕНИЯ

<130>CPX70582PC

<160>122

<170>PatentIn version 3.5

<210>1

<211>84

<212>PRT

<213>Homo sapiens

<400>1

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro Arg Asp Ala Gly Ser

35 40 45

Gln Arg Pro Arg Lys Lys Glu Asp Asn Val Leu Val Glu Ser His Glu

50 55 60

Lys Ser Leu Gly Glu Ala Asp Lys Ala Asp Val Asn Val Leu Thr Lys

65 70 75 80

Ala Lys Ser Gln

<210>2

<211>83

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>человеческая PTH 1-83

<400>2

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro Arg Asp Ala Gly Ser

35 40 45

Gln Arg Pro Arg Lys Lys Glu Asp Asn Val Leu Val Glu Ser His Glu

50 55 60

Lys Ser Leu Gly Glu Ala Asp Lys Ala Asp Val Asn Val Leu Thr Lys

65 70 75 80

Ala Lys Ser

<210>3

<211>82

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>человеческая PTH 1-82

<400>3

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro Arg Asp Ala Gly Ser

35 40 45

Gln Arg Pro Arg Lys Lys Glu Asp Asn Val Leu Val Glu Ser His Glu

50 55 60

Lys Ser Leu Gly Glu Ala Asp Lys Ala Asp Val Asn Val Leu Thr Lys

65 70 75 80

Ala Lys

<210>4

<211>81

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>человеческая PTH 1-81

<400>4

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro Arg Asp Ala Gly Ser

35 40 45

Gln Arg Pro Arg Lys Lys Glu Asp Asn Val Leu Val Glu Ser His Glu

50 55 60

Lys Ser Leu Gly Glu Ala Asp Lys Ala Asp Val Asn Val Leu Thr Lys

65 70 75 80

Ala

<210>5

<211>80

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>человеческая PTH 1-80

<400>5

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro Arg Asp Ala Gly Ser

35 40 45

Gln Arg Pro Arg Lys Lys Glu Asp Asn Val Leu Val Glu Ser His Glu

50 55 60

Lys Ser Leu Gly Glu Ala Asp Lys Ala Asp Val Asn Val Leu Thr Lys

65 70 75 80

<210>6

<211>79

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>человеческая PTH 1-79

<400>6

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro Arg Asp Ala Gly Ser

35 40 45

Gln Arg Pro Arg Lys Lys Glu Asp Asn Val Leu Val Glu Ser His Glu

50 55 60

Lys Ser Leu Gly Glu Ala Asp Lys Ala Asp Val Asn Val Leu Thr

65 70 75

<210>7

<211>78

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>человеческая PTH 1-78

<400>7

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro Arg Asp Ala Gly Ser

35 40 45

Gln Arg Pro Arg Lys Lys Glu Asp Asn Val Leu Val Glu Ser His Glu

50 55 60

Lys Ser Leu Gly Glu Ala Asp Lys Ala Asp Val Asn Val Leu

65 70 75

<210>8

<211>77

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>человеческая PTH 1-77

<400>8

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro Arg Asp Ala Gly Ser

35 40 45

Gln Arg Pro Arg Lys Lys Glu Asp Asn Val Leu Val Glu Ser His Glu

50 55 60

Lys Ser Leu Gly Glu Ala Asp Lys Ala Asp Val Asn Val

65 70 75

<210>9

<211>76

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>человеческая PTH 1-76

<400>9

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro Arg Asp Ala Gly Ser

35 40 45

Gln Arg Pro Arg Lys Lys Glu Asp Asn Val Leu Val Glu Ser His Glu

50 55 60

Lys Ser Leu Gly Glu Ala Asp Lys Ala Asp Val Asn

65 70 75

<210>10

<211>75

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>человеческая PTH 1-75

<400>10

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro Arg Asp Ala Gly Ser

35 40 45

Gln Arg Pro Arg Lys Lys Glu Asp Asn Val Leu Val Glu Ser His Glu

50 55 60

Lys Ser Leu Gly Glu Ala Asp Lys Ala Asp Val

65 70 75

<210>11

<211>74

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>человеческая PTH 1-74

<400>11

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro Arg Asp Ala Gly Ser

35 40 45

Gln Arg Pro Arg Lys Lys Glu Asp Asn Val Leu Val Glu Ser His Glu

50 55 60

Lys Ser Leu Gly Glu Ala Asp Lys Ala Asp

65 70

<210>12

<211>73

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>человеческая PTH 1-73

<400>12

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro Arg Asp Ala Gly Ser

35 40 45

Gln Arg Pro Arg Lys Lys Glu Asp Asn Val Leu Val Glu Ser His Glu

50 55 60

Lys Ser Leu Gly Glu Ala Asp Lys Ala

65 70

<210>13

<211>72

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>человеческая PTH 1-72

<400>13

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro Arg Asp Ala Gly Ser

35 40 45

Gln Arg Pro Arg Lys Lys Glu Asp Asn Val Leu Val Glu Ser His Glu

50 55 60

Lys Ser Leu Gly Glu Ala Asp Lys

65 70

<210>14

<211>71

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>человеческая PTH 1-71

<400>14

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro Arg Asp Ala Gly Ser

35 40 45

Gln Arg Pro Arg Lys Lys Glu Asp Asn Val Leu Val Glu Ser His Glu

50 55 60

Lys Ser Leu Gly Glu Ala Asp

65 70

<210>15

<211>70

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>человеческая PTH 1-70

<400>15

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro Arg Asp Ala Gly Ser

35 40 45

Gln Arg Pro Arg Lys Lys Glu Asp Asn Val Leu Val Glu Ser His Glu

50 55 60

Lys Ser Leu Gly Glu Ala

65 70

<210>16

<211>69

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>человеческая PTH 1-69

<400>16

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro Arg Asp Ala Gly Ser

35 40 45

Gln Arg Pro Arg Lys Lys Glu Asp Asn Val Leu Val Glu Ser His Glu

50 55 60

Lys Ser Leu Gly Glu

65

<210>17

<211>68

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>человеческая PTH 1-68

<400>17

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro Arg Asp Ala Gly Ser

35 40 45

Gln Arg Pro Arg Lys Lys Glu Asp Asn Val Leu Val Glu Ser His Glu

50 55 60

Lys Ser Leu Gly

65

<210>18

<211>67

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>человеческая PTH 1-67

<400>18

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro Arg Asp Ala Gly Ser

35 40 45

Gln Arg Pro Arg Lys Lys Glu Asp Asn Val Leu Val Glu Ser His Glu

50 55 60

Lys Ser Leu

65

<210>19

<211>66

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>человеческая PTH 1-66

<400>19

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro Arg Asp Ala Gly Ser

35 40 45

Gln Arg Pro Arg Lys Lys Glu Asp Asn Val Leu Val Glu Ser His Glu

50 55 60

Lys Ser

65

<210>20

<211>65

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>человеческая PTH 1-65

<400>20

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro Arg Asp Ala Gly Ser

35 40 45

Gln Arg Pro Arg Lys Lys Glu Asp Asn Val Leu Val Glu Ser His Glu

50 55 60

Lys

65

<210>21

<211>64

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>человеческая PTH 1-64

<400>21

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro Arg Asp Ala Gly Ser

35 40 45

Gln Arg Pro Arg Lys Lys Glu Asp Asn Val Leu Val Glu Ser His Glu

50 55 60

<210>22

<211>63

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>человеческая PTH 1-63

<400>22

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro Arg Asp Ala Gly Ser

35 40 45

Gln Arg Pro Arg Lys Lys Glu Asp Asn Val Leu Val Glu Ser His

50 55 60

<210>23

<211>62

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>человеческая PTH 1-62

<400>23

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro Arg Asp Ala Gly Ser

35 40 45

Gln Arg Pro Arg Lys Lys Glu Asp Asn Val Leu Val Glu Ser

50 55 60

<210>24

<211>61

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>человеческая PTH 1-61

<400>24

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro Arg Asp Ala Gly Ser

35 40 45

Gln Arg Pro Arg Lys Lys Glu Asp Asn Val Leu Val Glu

50 55 60

<210>25

<211>60

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>человеческая PTH 1-60

<400>25

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro Arg Asp Ala Gly Ser

35 40 45

Gln Arg Pro Arg Lys Lys Glu Asp Asn Val Leu Val

50 55 60

<210>26

<211>59

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>человеческая PTH 1-59

<400>26

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro Arg Asp Ala Gly Ser

35 40 45

Gln Arg Pro Arg Lys Lys Glu Asp Asn Val Leu

50 55

<210>27

<211>58

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>человеческая PTH 1-58

<400>27

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro Arg Asp Ala Gly Ser

35 40 45

Gln Arg Pro Arg Lys Lys Glu Asp Asn Val

50 55

<210>28

<211>57

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>человеческая PTH 1-57

<400>28

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro Arg Asp Ala Gly Ser

35 40 45

Gln Arg Pro Arg Lys Lys Glu Asp Asn

50 55

<210>29

<211>56

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>человеческая PTH 1-56

<400>29

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro Arg Asp Ala Gly Ser

35 40 45

Gln Arg Pro Arg Lys Lys Glu Asp

50 55

<210>30

<211>55

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>человеческая PTH 1-55

<400>30

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro Arg Asp Ala Gly Ser

35 40 45

Gln Arg Pro Arg Lys Lys Glu

50 55

<210>31

<211>54

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>человеческая PTH 1-54

<400>31

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro Arg Asp Ala Gly Ser

35 40 45

Gln Arg Pro Arg Lys Lys

50

<210>32

<211>53

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>человеческая PTH 1-53

<400>32

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro Arg Asp Ala Gly Ser

35 40 45

Gln Arg Pro Arg Lys

50

<210>33

<211>52

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>человеческая PTH 1-52

<400>33

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro Arg Asp Ala Gly Ser

35 40 45

Gln Arg Pro Arg

50

<210>34

<211>51

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>человеческая PTH 1-51

<400>34

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro Arg Asp Ala Gly Ser

35 40 45

Gln Arg Pro

50

<210>35

<211>50

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>человеческая PTH 1-50

<400>35

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro Arg Asp Ala Gly Ser

35 40 45

Gln Arg

50

<210>36

<211>49

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>человеческая PTH 1-49

<400>36

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro Arg Asp Ala Gly Ser

35 40 45

Gln

<210>37

<211>48

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>человеческая PTH 1-48

<400>37

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro Arg Asp Ala Gly Ser

35 40 45

<210>38

<211>47

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>человеческая PTH 1-47

<400>38

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro Arg Asp Ala Gly

35 40 45

<210>39

<211>46

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>человеческая PTH 1-46

<400>39

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro Arg Asp Ala

35 40 45

<210>40

<211>45

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>человеческая PTH 1-45

<400>40

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro Arg Asp

35 40 45

<210>41

<211>44

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>человеческая PTH 1-44

<400>41

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro Arg

35 40

<210>42

<211>43

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>человеческая PTH 1-43

<400>42

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro

35 40

<210>43

<211>42

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>человеческая PTH 1-42

<400>43

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala

35 40

<210>44

<211>41

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>человеческая PTH-41

<400>44

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu

35 40

<210>45

<211>40

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>человеческая PTH 1-40

<400>45

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro

35 40

<210>46

<211>39

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>человеческая PTH 1-39

<400>46

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala

35

<210>47

<211>38

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>человеческая PTH 1-38

<400>47

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu Gly

35

<210>48

<211>37

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>человеческая PTH 1-37

<400>48

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu

35

<210>49

<211>36

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>человеческая PTH 1-36

<400>49

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala

35

<210>50

<211>35

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>человеческая PTH 1-35

<400>50

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val

35

<210>51

<211>34

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>человеческая PTH 1-34

<400>51

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe

<210>52

<211>33

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>человеческая PTH 1-33

<400>52

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn

<210>53

<211>32

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>человеческая PTH 1-32

<400>53

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

<210>54

<211>31

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>человеческая PTH 1-31

<400>54

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val

20 25 30

<210>55

<211>30

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>человеческая PTH 1-30

<400>55

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp

20 25 30

<210>56

<211>29

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>человеческая PTH 1-29

<400>56

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln

20 25

<210>57

<211>28

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>человеческая PTH 1-28

<400>57

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu

20 25

<210>58

<211>27

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>человеческая PTH 1-27

<400>58

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys

20 25

<210>59

<211>26

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>человеческая PTH 1-26

<400>59

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys

20 25

<210>60

<211>25

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>человеческая PTH 1-25

<400>60

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg

20 25

<210>61

<211>84

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>амидированная человеческая PTH 1-84

<220>

<221>MOD_RES

<222>(84)..(84)

<223>амидирование

<400>61

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro Arg Asp Ala Gly Ser

35 40 45

Gln Arg Pro Arg Lys Lys Glu Asp Asn Val Leu Val Glu Ser His Glu

50 55 60

Lys Ser Leu Gly Glu Ala Asp Lys Ala Asp Val Asn Val Leu Thr Lys

65 70 75 80

Ala Lys Ser Gln

<210>62

<211>83

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>амидированная человеческая PTH 1-83

<220>

<221>MOD_RES

<222>(83)..(83)

<223>амидирование

<400>62

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro Arg Asp Ala Gly Ser

35 40 45

Gln Arg Pro Arg Lys Lys Glu Asp Asn Val Leu Val Glu Ser His Glu

50 55 60

Lys Ser Leu Gly Glu Ala Asp Lys Ala Asp Val Asn Val Leu Thr Lys

65 70 75 80

Ala Lys Ser

<210>63

<211>82

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>амидированная человеческая PTH 1-82

<220>

<221>MOD_RES

<222>(82)..(82)

<223>амидирование

<400>63

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro Arg Asp Ala Gly Ser

35 40 45

Gln Arg Pro Arg Lys Lys Glu Asp Asn Val Leu Val Glu Ser His Glu

50 55 60

Lys Ser Leu Gly Glu Ala Asp Lys Ala Asp Val Asn Val Leu Thr Lys

65 70 75 80

Ala Lys

<210>64

<211>81

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>амидированная человеческая PTH 1-81

<220>

<221>MOD_RES

<222>(81)..(81)

<223>амидирование

<400>64

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro Arg Asp Ala Gly Ser

35 40 45

Gln Arg Pro Arg Lys Lys Glu Asp Asn Val Leu Val Glu Ser His Glu

50 55 60

Lys Ser Leu Gly Glu Ala Asp Lys Ala Asp Val Asn Val Leu Thr Lys

65 70 75 80

Ala

<210>65

<211>80

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>амидированная человеческая PTH 1-80

<220>

<221>MOD_RES

<222>(80)..(80)

<223>амидирование

<400>65

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro Arg Asp Ala Gly Ser

35 40 45

Gln Arg Pro Arg Lys Lys Glu Asp Asn Val Leu Val Glu Ser His Glu

50 55 60

Lys Ser Leu Gly Glu Ala Asp Lys Ala Asp Val Asn Val Leu Thr Lys

65 70 75 80

<210>66

<211>79

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>амидированная человеческая PTH 1-79

<220>

<221>MOD_RES

<222>(79)..(79)

<223>амидирование

<400>66

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro Arg Asp Ala Gly Ser

35 40 45

Gln Arg Pro Arg Lys Lys Glu Asp Asn Val Leu Val Glu Ser His Glu

50 55 60

Lys Ser Leu Gly Glu Ala Asp Lys Ala Asp Val Asn Val Leu Thr

65 70 75

<210>67

<211>78

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>амидированная человеческая PTH 1-78

<220>

<221>MOD_RES

<222>(78)..(78)

<223>амидирование

<400>67

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro Arg Asp Ala Gly Ser

35 40 45

Gln Arg Pro Arg Lys Lys Glu Asp Asn Val Leu Val Glu Ser His Glu

50 55 60

Lys Ser Leu Gly Glu Ala Asp Lys Ala Asp Val Asn Val Leu

65 70 75

<210>68

<211>77

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>амидированная человеческая PTH 1-77

<220>

<221>MOD_RES

<222>(77)..(77)

<223>амидирование

<400>68

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro Arg Asp Ala Gly Ser

35 40 45

Gln Arg Pro Arg Lys Lys Glu Asp Asn Val Leu Val Glu Ser His Glu

50 55 60

Lys Ser Leu Gly Glu Ala Asp Lys Ala Asp Val Asn Val

65 70 75

<210>69

<211>76

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>амидированная человеческая PTH 1-76

<220>

<221>MOD_RES

<222>(76)..(76)

<223>амидирование

<400>69

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro Arg Asp Ala Gly Ser

35 40 45

Gln Arg Pro Arg Lys Lys Glu Asp Asn Val Leu Val Glu Ser His Glu

50 55 60

Lys Ser Leu Gly Glu Ala Asp Lys Ala Asp Val Asn

65 70 75

<210>70

<211>75

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>амидированная человеческая PTH 1-75

<220>

<221>MOD_RES

<222>(75)..(75)

<223>амидирование

<400>70

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro Arg Asp Ala Gly Ser

35 40 45

Gln Arg Pro Arg Lys Lys Glu Asp Asn Val Leu Val Glu Ser His Glu

50 55 60

Lys Ser Leu Gly Glu Ala Asp Lys Ala Asp Val

65 70 75

<210>71

<211>74

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>амидированная человеческая PTH 1-74

<220>

<221>MOD_RES

<222>(74)..(74)

<223>амидирование

<400>71

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro Arg Asp Ala Gly Ser

35 40 45

Gln Arg Pro Arg Lys Lys Glu Asp Asn Val Leu Val Glu Ser His Glu

50 55 60

Lys Ser Leu Gly Glu Ala Asp Lys Ala Asp

65 70

<210>72

<211>73

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>амидированная человеческая PTH 1-73

<220>

<221>MOD_RES

<222>(73)..(73)

<223>амидирование

<400>72

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro Arg Asp Ala Gly Ser

35 40 45

Gln Arg Pro Arg Lys Lys Glu Asp Asn Val Leu Val Glu Ser His Glu

50 55 60

Lys Ser Leu Gly Glu Ala Asp Lys Ala

65 70

<210>73

<211>72

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>амидированная человеческая PTH 1-72

<220>

<221>MOD_RES

<222>(72)..(72)

<223>амидирование

<400>73

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro Arg Asp Ala Gly Ser

35 40 45

Gln Arg Pro Arg Lys Lys Glu Asp Asn Val Leu Val Glu Ser His Glu

50 55 60

Lys Ser Leu Gly Glu Ala Asp Lys

65 70

<210>74

<211>71

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>амидированная человеческая PTH 1-71

<220>

<221>MOD_RES

<222>(71)..(71)

<223>амидирование

<400>74

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro Arg Asp Ala Gly Ser

35 40 45

Gln Arg Pro Arg Lys Lys Glu Asp Asn Val Leu Val Glu Ser His Glu

50 55 60

Lys Ser Leu Gly Glu Ala Asp

65 70

<210>75

<211>70

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>амидированная человеческая PTH 1-70

<220>

<221>MOD_RES

<222>(70)..(70)

<223>амидирование

<400>75

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro Arg Asp Ala Gly Ser

35 40 45

Gln Arg Pro Arg Lys Lys Glu Asp Asn Val Leu Val Glu Ser His Glu

50 55 60

Lys Ser Leu Gly Glu Ala

65 70

<210>76

<211>69

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>амидированная человеческая PTH 1-69

<220>

<221>MOD_RES

<222>(69)..(69)

<223>амидирование

<400>76

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro Arg Asp Ala Gly Ser

35 40 45

Gln Arg Pro Arg Lys Lys Glu Asp Asn Val Leu Val Glu Ser His Glu

50 55 60

Lys Ser Leu Gly Glu

65

<210>77

<211>68

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>амидированная человеческая PTH 1-68

<220>

<221>MOD_RES

<222>(68)..(68)

<223>амидирование

<400>77

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro Arg Asp Ala Gly Ser

35 40 45

Gln Arg Pro Arg Lys Lys Glu Asp Asn Val Leu Val Glu Ser His Glu

50 55 60

Lys Ser Leu Gly

65

<210>78

<211>67

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>амидированная человеческая PTH 1-67

<220>

<221>MOD_RES

<222>(67)..(67)

<223>амидирование

<400>78

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro Arg Asp Ala Gly Ser

35 40 45

Gln Arg Pro Arg Lys Lys Glu Asp Asn Val Leu Val Glu Ser His Glu

50 55 60

Lys Ser Leu

65

<210>79

<211>66

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>амидированная человеческая PTH 1-66

<220>

<221>MOD_RES

<222>(66)..(66)

<223>амидирование

<400>79

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro Arg Asp Ala Gly Ser

35 40 45

Gln Arg Pro Arg Lys Lys Glu Asp Asn Val Leu Val Glu Ser His Glu

50 55 60

Lys Ser

65

<210>80

<211>65

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>амидированная человеческая PTH 1-65

<220>

<221>MOD_RES

<222>(65)..(65)

<223>амидирование

<400>80

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro Arg Asp Ala Gly Ser

35 40 45

Gln Arg Pro Arg Lys Lys Glu Asp Asn Val Leu Val Glu Ser His Glu

50 55 60

Lys

65

<210>81

<211>64

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>амидированная человеческая PTH 1-64

<220>

<221>MOD_RES

<222>(64)..(64)

<223>амидирование

<400>81

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro Arg Asp Ala Gly Ser

35 40 45

Gln Arg Pro Arg Lys Lys Glu Asp Asn Val Leu Val Glu Ser His Glu

50 55 60

<210>82

<211>63

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>амидированная человеческая PTH 1-63

<220>

<221>MOD_RES

<222>(63)..(63)

<223>амидирование

<400>82

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro Arg Asp Ala Gly Ser

35 40 45

Gln Arg Pro Arg Lys Lys Glu Asp Asn Val Leu Val Glu Ser His

50 55 60

<210>83

<211>62

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>амидированная человеческая PTH 1-62

<220>

<221>MOD_RES

<222>(62)..(62)

<223>амидирование

<400>83

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro Arg Asp Ala Gly Ser

35 40 45

Gln Arg Pro Arg Lys Lys Glu Asp Asn Val Leu Val Glu Ser

50 55 60

<210>84

<211>61

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>амидированная человеческая PTH 1-61

<220>

<221>MOD_RES

<222>(61)..(61)

<223>амидирование

<400>84

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro Arg Asp Ala Gly Ser

35 40 45

Gln Arg Pro Arg Lys Lys Glu Asp Asn Val Leu Val Glu

50 55 60

<210>85

<211>60

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>амидированная человеческая PTH 1-60

<220>

<221>MOD_RES

<222>(60)..(60)

<223>ацетилирование

<400>85

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro Arg Asp Ala Gly Ser

35 40 45

Gln Arg Pro Arg Lys Lys Glu Asp Asn Val Leu Val

50 55 60

<210>86

<211>59

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>амидированная человеческая PTH 1-59

<220>

<221>MOD_RES

<222>(59)..(59)

<223>амидирование

<400>86

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro Arg Asp Ala Gly Ser

35 40 45

Gln Arg Pro Arg Lys Lys Glu Asp Asn Val Leu

50 55

<210>87

<211>58

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>амидированная человеческая PTH 1-58

<220>

<221>MOD_RES

<222>(58)..(58)

<223>амидирование

<400>87

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro Arg Asp Ala Gly Ser

35 40 45

Gln Arg Pro Arg Lys Lys Glu Asp Asn Val

50 55

<210>88

<211>57

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>амидированная человеческая PTH 1-57

<220>

<221>MOD_RES

<222>(57)..(57)

<223>амидирование

<400>88

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro Arg Asp Ala Gly Ser

35 40 45

Gln Arg Pro Arg Lys Lys Glu Asp Asn

50 55

<210>89

<211>56

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>амидированная человеческая PTH 1-56

<220>

<221>MOD_RES

<222>(56)..(56)

<223>амидирование

<400>89

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro Arg Asp Ala Gly Ser

35 40 45

Gln Arg Pro Arg Lys Lys Glu Asp

50 55

<210>90

<211>55

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>амидированная человеческая PTH 1-55

<220>

<221>MOD_RES

<222>(55)..(55)

<223>амидирование

<400>90

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro Arg Asp Ala Gly Ser

35 40 45

Gln Arg Pro Arg Lys Lys Glu

50 55

<210>91

<211>54

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>амидированная человеческая PTH 1-54

<220>

<221>MOD_RES

<222>(54)..(54)

<223>амидирование

<400>91

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro Arg Asp Ala Gly Ser

35 40 45

Gln Arg Pro Arg Lys Lys

50

<210>92

<211>53

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>амидированная человеческая PTH 1-53

<220>

<221>MOD_RES

<222>(53)..(53)

<223>амидирование

<400>92

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro Arg Asp Ala Gly Ser

35 40 45

Gln Arg Pro Arg Lys

50

<210>93

<211>52

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>амидированная человеческая PTH 1-52

<220>

<221>MOD_RES

<222>(52)..(52)

<223>амидирование

<400>93

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro Arg Asp Ala Gly Ser

35 40 45

Gln Arg Pro Arg

50

<210>94

<211>51

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>амидированная человеческая PTH 1-51

<220>

<221>MOD_RES

<222>(51)..(51)

<223>амидирование

<400>94

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro Arg Asp Ala Gly Ser

35 40 45

Gln Arg Pro

50

<210>95

<211>50

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>амидированная человеческая PTH 1-50

<220>

<221>MOD_RES

<222>(50)..(50)

<223>амидирование

<400>95

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro Arg Asp Ala Gly Ser

35 40 45

Gln Arg

50

<210>96

<211>49

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>амидированная человеческая PTH 1-49

<220>

<221>MOD_RES

<222>(49)..(49)

<223>амидирование

<400>96

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro Arg Asp Ala Gly Ser

35 40 45

Gln

<210>97

<211>48

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>амидированная человеческая PTH 1-48

<220>

<221>MOD_RES

<222>(48)..(48)

<223>амидирование

<400>97

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro Arg Asp Ala Gly Ser

35 40 45

<210>98

<211>47

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>амидированная человеческая PTH 1-47

<220>

<221>MOD_RES

<222>(47)..(47)

<223>амидирование

<400>98

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro Arg Asp Ala Gly

35 40 45

<210>99

<211>46

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>амидированная человеческая PTH 1-46

<220>

<221>MOD_RES

<222>(46)..(46)

<223>амидирование

<400>99

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro Arg Asp Ala

35 40 45

<210>100

<211>45

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>амидированная человеческая PTH 1-45

<220>

<221>MOD_RES

<222>(45)..(45)

<223>амидирование

<400>100

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro Arg Asp

35 40 45

<210>101

<211>44

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>амидированная человеческая PTH 1-44

<220>

<221>MOD_RES

<222>(44)..(44)

<223>амидирование

<400>101

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro Arg

35 40

<210>102

<211>43

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>амидированная человеческая PTH 1-43

<220>

<221>MOD_RES

<222>(43)..(43)

<223>амидирование

<400>102

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala Pro

35 40

<210>103

<211>42

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>амидированная человеческая PTH 1-42

<220>

<221>MOD_RES

<222>(42)..(42)

<223>амидирование

<400>103

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu Ala

35 40

<210>104

<211>41

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>амидированная человеческая PTH 1-41

<220>

<221>MOD_RES

<222>(41)..(41)

<223>амидирование

<400>104

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro Leu

35 40

<210>105

<211>40

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>амидированная человеческая PTH 1-40

<220>

<221>MOD_RES

<222>(40)..(40)

<223>амидирование

<400>105

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala Pro

35 40

<210>106

<211>39

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>амидированная человеческая PTH 1-39

<220>

<221>MOD_RES

<222>(39)..(39)

<223>амидирование

<400>106

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu Gly Ala

35

<210>107

<211>38

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>амидированная человеческая PTH 1-38

<220>

<221>MOD_RES

<222>(38)..(38)

<223>амидирование

<400>107

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu Gly

35

<210>108

<211>37

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>амидированная человеческая PTH 1-37

<220>

<221>MOD_RES

<222>(37)..(37)

<223>амидирование

<400>108

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala Leu

35

<210>109

<211>36

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>амидированная человеческая PTH 1-36

<220>

<221>MOD_RES

<222>(36)..(36)

<223>амидирование

<400>109

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val Ala

35

<210>110

<211>35

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>амидированная человеческая PTH 1-35

<220>

<221>MOD_RES

<222>(35)..(35)

<223>амидирование

<400>110

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe Val

35

<210>111

<211>34

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>амидированная человеческая PTH 1-34

<220>

<221>MOD_RES

<222>(34)..(34)

<223>амидирование

<400>111

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn Phe

<210>112

<211>33

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>амидированная человеческая PTH 1-33

<220>

<221>MOD_RES

<222>(33)..(33)

<223>амидирование

<400>112

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

Asn

<210>113

<211>32

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>амидированная человеческая PTH 1-32

<220>

<221>MOD_RES

<222>(32)..(32)

<223>амидирование

<400>113

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val His

20 25 30

<210>114

<211>31

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>амидированная человеческая PTH 1-31

<220>

<221>MOD_RES

<222>(31)..(31)

<223>амидирование

<400>114

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp Val

20 25 30

<210>115

<211>30

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>амидированная человеческая PTH 1-30

<220>

<221>MOD_RES

<222>(30)..(30)

<223>амидирование

<400>115

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln Asp

20 25 30

<210>116

<211>29

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>амидированная человеческая PTH 1-29

<220>

<221>MOD_RES

<222>(29)..(29)

<223>амидирование

<400>116

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu Gln

20 25

<210>117

<211>28

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>амидированная человеческая PTH 1-28

<220>

<221>MOD_RES

<222>(28)..(28)

<223>амидирование

<400>117

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys Leu

20 25

<210>118

<211>27

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>амидированная человеческая PTH 1-27

<220>

<221>MOD_RES

<222>(27)..(27)

<223>амидирование

<400>118

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys Lys

20 25

<210>119

<211>26

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>амидированная человеческая PTH 1-26

<220>

<221>MOD_RES

<222>(26)..(26)

<223>амидирование

<400>119

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg Lys

20 25

<210>120

<211>25

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>амидированная человеческая PTH 1-25

<220>

<221>MOD_RES

<222>(25)..(25)

<223>амидирование

<400>120

Ser Val Ser Glu Ile Gln Leu Met His Asn Leu Gly Lys His Leu Asn

1 5 10 15

Ser Met Glu Arg Val Glu Trp Leu Arg

20 25

<210>121

<211>141

<212>PRT

<213>Homo sapiens

<400>121

Ala Val Ser Glu His Gln Leu Leu His Asp Lys Gly Lys Ser Ile Gln

1 5 10 15

Asp Leu Arg Arg Arg Phe Phe Leu His His Leu Ile Ala Glu Ile His

20 25 30

Thr Ala Glu Ile Arg Ala Thr Ser Glu Val Ser Pro Asn Ser Lys Pro

35 40 45

Ser Pro Asn Thr Lys Asn His Pro Val Arg Phe Gly Ser Asp Asp Glu

50 55 60

Gly Arg Tyr Leu Thr Gln Glu Thr Asn Lys Val Glu Thr Tyr Lys Glu

65 70 75 80

Gln Pro Leu Lys Thr Pro Gly Lys Lys Lys Lys Gly Lys Pro Gly Lys

85 90 95

Arg Lys Glu Gln Glu Lys Lys Lys Arg Arg Thr Arg Ser Ala Trp Leu

100 105 110

Asp Ser Gly Val Thr Gly Ser Gly Leu Glu Gly Asp His Leu Ser Asp

115 120 125

Thr Ser Thr Thr Ser Leu Glu Leu Asp Ser Arg Arg His

130 135 140

<210>122

<211>20

<212>PRT

<213>искусственная последовательность

<220>

<223>искусственная случайная спираль

<400>122

Gly Gly Pro Gly Gly Pro Gly Pro Gly Gly Pro Gly Gly Pro Gly Pro

1 5 10 15

Gly Gly Pro Gly

20

<---

1. Способ лечения гипопаратиреоидизма у пациента-млекопитающего, включающий стадию введения фармацевтической композиции, содержащей по меньшей мере одно соединение РТН контролируемого высвобождения, не более часто, чем один раз каждые 24 часа с дозой соединения РТН контролируемого высвобождения, которая соответствует не более чем 40% молярной эквивалентной дозе РТН 1-84 SEQ ID NO: 1, вводимой подкожно при той же частоте дозирования, необходимой для поддержания альбумин-отрегулированного уровня сывороточного кальция выше 8.5 мг/дл и ниже 10.5 мг/дл за 24-часовой период, и где растворимое в воде соединение РТН контролируемого высвобождения представляет собой соединение формулы (IIf-i):

где неотмеченная пунктирная линия обозначает присоединение к атому азота РТН составляющей, имеющей последовательность SEQ ID NO: 51, путем образования амидной связи; и

пунктирная линия, отмеченная звездочкой, означает присоединение составляющей:

где

m и p независимо друг от друга представляют собой целое число в интервале и включительно от 400 до 500.

2. Способ по п. 1, где фармацевтическая композиция вводится один раз каждые 24 часа.

3. Способ по п. 1, где фармацевтическая композиция вводится один раз каждые 48 часов.

4. Способ по п. 1, где фармацевтическая композиция вводится один раз каждую неделю.

5. Способ по п. 1, где доза соединения РТН контролируемого высвобождения соответствует не более чем 30% от молярной эквивалентной дозы РТН 1-84.

6. Способ по п. 1, где фармацевтическая композиция вводится посредством шприца-ручки.

7. Способ по п. 1, где фармацевтическая композиция имеет значение рН в интервале и включая рН 3 - рН 8.

8. Способ по п. 1, где пациентом-млекопитающим является пациент-человек.

9. Способ по п. 1, где m и р равны около 450.