Способ первичного посева биоматериала, выделенного из полости рта пациентов с муковисцидозом при стоматологическом обследовании

Изобретение относится к медицине, а именно к микробиологии и стоматологии. Осуществляют посев на поверхность двух чашек с 5% кровяным агаром с дефибринированной бараньей кровью, двух чашек с универсальной хромогенной средой, по одной чашке с селективной средой для Burkholderia cepacia (OFPBL-агар) с бацитрацином и полимиксина сульфатом, Veilonella-агаром, агаром для анаэробов, Clostridium-агаром, агаром для лактобактерий, агаром для бифидобактерий производится посев биоматериала из ротовой полости пациентов с муковисцидозом, взятого при стоматологическом обследовании, с использованием техники посева «штрихом». На поверхность чашек с агаром Сабуро с хлорамфениколом производится посев гомогенизированного материала методом бляшек с последующей инкубацией при 28°С до 14 суток с ежедневными просмотрами посевов. Затем по одной засеянной чашке с 5% кровяным агаром с дефибринированной бараньей кровью и с универсальной хромогенной средой инкубируются в термостате при температуре 37°С в течение 24-48 часов с ежедневным просмотром посевов. При этом чашки с селективной средой для Burkholderia cepacia (OFPBL-агар) с бацитрацином и полимиксина сульфатом инкубируются в аэробных условиях 24-48 часов при температуре 37°С, далее инкубируются до 14 суток при температуре 28°С с ежедневным просмотром посевов; по одной засеянной чашке с 5% кровяным агаром с дефибринированной бараньей кровью и с универсальной хромогенной средой, а также чашки с Veilonella-агаром, агаром для анаэробов, Clostridium-агаром, агаром для лактобактерий, агаром для бифидобактерий инкубируются в анаэробных условиях 120 часов при температуре 37°С с просмотром после окончания срока инкубирования. Изобретение может быть использовано для первичного посева биоматериала, выделенного из полости рта пациентов с муковисцидозом при стоматологическом обследовании. Целью изобретения является получение точных качественных и количественных характеристик микробиоценоза полости рта пациентов с муковисцидозом. 2 пр.

 

Область техники, к которой относится изобретение

Изобретение относится к медицине, а именно к микробиологии и стоматологии, и может быть использовано для первичного посева биоматериала, выделенного из полости рта пациентов с муковисцидозом при стоматологическом обследовании.

Уровень техники

Известны способы первичного посева биоматериала, выделенного из дыхательных путей пациентов с муковисцидозом с использованием различных комбинаций наборов питательных сред: кровяного агара, шоколадного агара, универсальной хромогенной среды, селективной среды для Burkholderia cepacia (OFPBL-агар) с бацитрацином и полимиксина сульфатом, среды Сабуро; Мак-Конки, маннитолового солевого агара, селективной среды для Burkholderia cepacia, шоколадного агара, дезоксирибонуклеазной среды; с использованием агара Сабуро, маннитолового солевого агара, селективной среды для Burkholderia cepacia, шоколадного агара, среды Левенштейна-Йенсена; с использованием кровяного агара, шоколадного агара, агара Эндо, желточно-солевого агара, агара Сабуро, цетримидного агара и селективной среды BCSA для Burkholderia cepacia.

Известен способ первичного посева биоматериала с использованием кровяного агара, шоколадного агара, агара Эндо, желточно-солевого агара, агара Сабуро, цетримидного агара и селективной среды BCSA для Burkholderia cepacia. Суть способа заключается в первичном посеве биоматериала на чашки Петри с вышеуказанными средами с последующей инкубацией при 28-37°C. [Национальный консенсус «Муковисцидоз: определение, диагностические критерии, терапия», Москва, 2016 год].

Недостатками данного метода является отсутствие сред для культивирования анаэробов. Кроме того, часть сред являются дублирующими друг друга по ростовым свойствам искомых микроорганизмов.

Известен способ первичного посева биоматериала, выделенного с дыхательных путей пациентов с муковисцидозом с использованием 5 питательных сред: агара Мак-Конки, маннитолового солевого агара, селективной среды для Burkholderia cepacia, шоколадного агара, дезоксирибонуклеазной среды. Суть метода заключается в первичном посеве биоматериала на чашки Петри с вышеуказанными средами с последующей инкубацией при 35-37°C. [Lisa Saiman, Jane Seigel. Infection Control Recommendations for Patients With Cystic Fibrosis: Microbiology, Control Practices to Prevent Patien-to-Patient Transmission. The Official Journal of the Society for Healthcare Epidemiology of America. May 2003, Vol. 24, №5].

Недостатками данного способа являются отсутствие в предлагаемой схеме питательных сред для культивирования грибов и анаэробов, что ограничивает возможности их выделения из биоматериала.

Известен способ первичного посева биоматериала, выделенного из дыхательных путей пациентов с муковисцидозом с использованием 5 питательных сред: агара Сабуро, маннитолового солевого агара, селективной среды для Burkholderia cepacia, шоколадного агара, среды Левенштейна-Йенсена. Суть метода заключается в первичном посеве биоматериала на чашки Петри с вышеуказанными средами с последующей инкубацией при 28-37°C [Laboratory Standarts for Processing Microbiological Samples from People with cystic fibrosis. First edition. September 2010].

Недостатками указанного способа является отсутствие питательных сред для первичного выделения энтеробактерий и ряда других грамотрицательных палочек, а также гемолизирующих стрептококков и анаэробов.

За прототип принимается способ первичного посева биоматериала, выделенного с дыхательных путей пациентов с муковисцидозом с использованием 5 питательных сред: кровяного агара, шоколадного агара, универсальной хромогенной среды, селективной среды для Burkholderia cepacia (OFPBL-агар) с бацитрацином и полимиксина сульфатом, среды Сабуро. Суть метода заключается в посеве гомогенизированного материала из нижних дыхательных путей пациентов с муковисцидозом с использованием техники посева «штрихом» на поверхность чашек с 5% кровяным агаром с дефибринированной бараньей кровью, шоколадным агаром, универсальной хромогенной средой, селективной средой для Burkholderia cepacia (OFPBL-агар) с бацитрацином и полимиксина сульфатом. Затем засеянные чашки с 5% кровяным агаром с дефибринированной бараньей кровью, универсальной хромогенной средой инкубируются в термостате при температуре 37°С в течение 24-48 часов с ежедневным просмотром посевов. Чашки с шоколадным агаром инкубируются при 35°С в атмосфере 5-7% СО2 в течение 24-48 часов с ежедневным просмотром посевов. Засеянные чашки с селективной средой для Burkholderia cepacia (OFPBL-агар) с бацитрацином и полимиксина сульфатом инкубируются 24-48 часов при температуре 37°С, далее инкубируются до 14 суток при температуре 28°С с ежедневным просмотром посевов. На поверхность чашек с агаром Сабуро с хлорамфинеколом производится посев гомогенизированного материала методом бляшек с последующей инкубацией при 28°С до 14 суток с ежедневными просмотрами посевов [Патент РФ на изобретение №2668406, заявка 2017122657, 27.06.2017, опубл.: 28.09.2018, Бюл. №28]. Недостатками данного способа является отсутствие в предлагаемой схеме питательных сред для анаэробов, что ограничивает возможности их выделения из биоматериала, а также отсутствие сред для выделения специфичной для полости рта микрофлоры.

Раскрытие изобретения

Задачей изобретения является улучшение диагностики инфекционных стоматологических осложнений у пациентов с муковисцидозом путем получения в первичном посеве отделяемого из полости рта от пациентов с муковисцидозом максимального количества клинически значимых микроорганизмов. Технический результат изобретения заключается в том, что заявленный способ посева с использованием предлагаемого набора питательных сред позволяет одномоментно выделить при первичном посеве микроорганизмы, имеющие клиническое значение при муковисцидозе: бактерии родов Pseudomonas, Burkholderia, Acinetobacter, Stenotrophomonas, Achromobacter, Chryseobacterium, Brevundimonas, Inquilinus, Kingella, Staphylococcus, Mycobacterium, энтеробактерии и грибы, а также микроорганизмы, имеющие клиническое значение в развитии стоматологических заболеваний, в частности кариеса и заболеваний пародонта, такие как Capnocytophaga spp., Eikenella spp., Veilonella spp., Actinomyces spp., Aggregatibacter spp, Streptococcus spp., Porphyromonas spp. большинство из которых является облигатными анаэробами.

Это достигается тем, что в отличие от известных способов первичного посева биоматериала, выделенного с дыхательных путей пациентов с муковисцидозом используется набор из 9 питательных сред, включающий: 5% кровяной агар с дефибринированной бараньей кровью [Atlas, Ronald M., 1946 -. Handbook of microbiological media. - Taylor & Francis, 2010-01-01], универсальную хромогенную среду [1. Pezzlo M (1998), Clinical Microbiology Reviews 1:268-280; 2. Wilkie M.E., Almond M.K., Marsh F.P. (1992),British Medical Journal 305:1137-1141; 3. Friedman M.P. et al. (1991), Journal of Clinical Microbiology, 29:2385-2389; 4. Murray P., Traynor P. Hopson D., (1992), Journal of Clinical Microbiology 30:1600-1601; 5. Soriano F., Ponte C., (1992), Journal of Clinical Microbiology 30:3033-3034; 6. Merlino et al. (1995) Abstr. Austr. Microbiol. 16(4):17-3.], селективную среду для Burkholderia cepacia (OFPBL-агар) содержащую бацитрацин и полимиксина сульфат [Регистрационное удостоверение на медицинское изделие ФСЗ 2012/12473], Veilonella-агар [Регистрационное удостоверение на медицинское изделие ФСЗ 2009/03709], агар для анаэробов [Регистрационное удостоверение на медицинское изделие ФСЗ 2009/03707], Clostridium-агар [Регистрационное удостоверение на медицинское изделие ФСЗ 2009/03707], агар для лактобактерий [Регистрационное удостоверение на медицинское изделие ФСЗ 2009/03709], агар для бифидобактерий [Регистрационное удостоверение на медицинское изделие ФСЗ 2009/03707], а также агар Сабуро с хлорамфениколом.

Осуществление изобретения

Сущность предложенного метода заключается в следующем: на поверхность двух чашек с 5% кровяным агаром с дефибринированной бараньей кровью, двух чашек с универсальной хромогенной средой, по одной чашке с селективной средой для Burkholderia cepacia (OFPBL-агар) с бацитрацином и полимиксина сульфатом, Veilonella-агаром, агаром для анаэробов, Clostridium-агаром, агаром для лактобактерий, агаром для бифидобактерий производится посев биоматериала из ротовой полости пациентов с муковисцидозом, взятого при стоматологическом обследовании, с использованием техники посева «штрихом»; на поверхность чашек с агаром Сабуро с хлорамфениколом производится посев гомогенизированного материала методом бляшек с последующей инкубацией при 28°С до 14 суток с ежедневными просмотрами посевов; затем по одной засеянной чашке с 5% кровяным агаром с дефибринированной бараньей кровью и с универсальной хромогенной средой инкубируются в термостате при температуре 37°С в течение 24-48 часов с ежедневным просмотром посевов; чашки с селективной средой для Burkholderia cepacia (OFPBL-агар) с бацитрацином и полимиксина сульфатом инкубируются в аэробных условиях 24-48 часов при температуре 37°С, далее инкубируются до 14 суток при температуре 28°С с ежедневным просмотром посевов; по одной засеянной чашке с 5% кровяным агаром с дефибринированной бараньей кровью и с универсальной хромогенной средой, а также чашки с Veilonella-агаром, агаром для анаэробов, Clostridium-агаром, агаром для лактобактерий, агаром для бифидобактерий инкубируются в анаэробных условиях 120 часов при температуре 37°С с просмотром после окончания срока инкубирования.

Предлагаемый способ позволяет получать точные качественные и количественные характеристики состояния микробиоценоза полости рта пациентов с муковисцидозом для улучшения диагностики инфекционных осложнений у данной группы больных.

Это может быть необходимо для проведения регулярного микробиологического мониторинга пациентов с муковисцидозом, а также для статистических исследований в рамках ведения ежегодного единого Регистра больных муковисцидозом в Российской Федерации [проект Регистр больных муковисцидозом Российской Федерации одобрен Комитетов по Этике ФГБНУ «МГНЦ» 20 декабря 2012 года].

В предложенном способе первичного посева биоматериала, выделенного из полости рта пациентов с муковисцидозом при стоматологическом обследовании предусмотрены следующие отличия: использование питательных сред для культивирования анаэробных микроорганизмов - Veilonella-агара, агара для анаэробов, Clostridium-агара, агара для лактобактерий, агара для бифидобактерий с применением культивирования в анаэробных условиях позволяет выявлять и дифференцировать парадонтопатогенные и кариесогенные виды бактерий, а использование универсальной хромогенной среды, 5% кровяного агара с дефибринированной бараньей кровью и селективной среды для культивирования Burkholderia cepacia (OFPBL-агар) с бацитрацином и полимиксина сульфатом в дополнение к вышеуказанных средам позволяет выявлять в посеве возбудителей, специфичных для муковисцидоза, таких как Pseudomonas spp., Achromobacter spp., Burkholderia spp., Chryseobacterium spp. и некоторых других редко встречающихся неферментирующих грамотрицательных бактерий.

Осуществление предлагаемого способа можно продемонстрировать на следующих примерах:

Пример 1.

Пациент Ф., 12 лет. Диагноз: муковисцидоз, смешанная форма, тяжелое течение. В лабораторию поступил материал, полученный при стоматологическом исследовании - отделяемое десневой борозды. Произведен первичный посев двумя способами: способом, описанном в прототипе, а также предлагаемым нами способом.

Были получены следующие результаты:

Способ посева, указанный в прототипе Предлагаемый нами способ
КУЛЬТИВИРОВАНИЕ В АЭРОБНЫХ УСЛОВИЯХ
5% кровяной агар с дефибринированной бараньей кровью
Escherichia coli 104
Streptococcus oralis 104
Streptococcus mitis 104
Escherichia coli 104
Streptococcus oralis 104
Streptococcus mitis 104
Селективная среда для Burkholderia cepacia (OFPBL-агар) с бацитрацином и полимиксина сульфатом
Роста нет Роста нет
Универсальная хромогенная среда
Escherichia coli 104
Streptococcus oralis 104
Streptococcus mitis 104
Escherichia coli 104
Streptococcus oralis 104
Streptococcus mitis 104
Шоколадный агар
Escherichia coli 104
Streptococcus oralis 104
Streptococcus mitis 104
Агар Сабуро с хлорамфинеколом
Роста нет Роста нет
КУЛЬТИВИРОВАНИЕ В АНАЭРОБНЫХ УСЛОВИЯХ
5% кровяной агар с дефибринированной бараньей кровью
Escherichia coli 104
Streptococcus anginosus 104
Streptococcus oralis 104
Streptococcus mitis 104
Универсальная хромогенная среда
Escherichia coli 104
Streptococcus anginosus 104
Streptococcus oralis 104
Streptococcus mitis 104
Veilonella-агар
Veilonella parvula 104
Агар для анаэробов
Capnocytophaga ochracea 104
Eikenella corrodens 104
Streptococcus anginosus 104
Streptococcus oralis 104
Streptococcus mitis 104
Clostridium-агар
Escherichia coli 104
Streptococcus anginosus 104
Capnocytophaga ochracea 104
Агар для лактобактерий
Streptococcus gordonii 104
Eikenella corrodens 104
Lactobacillus salivarius 104
Агар для бифидобактерий
Veilonella parvula 104
Eikenella corrodens 104

Таким образом, благодаря применению предлагаемого нами способа был получен рост 9 микроорганизмов на питательных средах, в то время как при использовании способа, указанного в прототипе, был получен рост 3 культур. При использовании предлагаемого нами способа посев был получен рост клинически значимой анаэробной парадонтопатогенной флоры - Veilonella parvula, Capnocytophaga ochracea, Eikenella corrodens, Streptococcus gordonii, Streptococcus anginosus, что было бы невозможно получить при использовании только перечня питательных сред, указанного в прототипе, ввиду метаболических особенностей, указанных микроорганизмов. Возможность своевременного выявления данных бактерий, и, как следствие, назначение терапии может способствовать снижению числа бактериально-ассоциированных стоматологических осложнений у пациентов с муковисцидозом.

Пример 2:

Пациент А., 16 лет, Диагноз: муковисцидоз, смешанная форма, тяжелое течение. В лабораторию поступил материал, полученный при стоматологическом исследовании - отделяемое протока правой околоушной слюной железы. Произведен первичный посев двумя способами: способом, описанном в прототипе, а также предлагаемым нами способом.

Были получены следующие результаты:

Способ посева, указанный в прототипе Предлагаемый нами способ
КУЛЬТИВИРОВАНИЕ В АЭРОБНЫХ УСЛОВИЯХ
5% кровяной агар с дефибринированной бараньей кровью
Rothia mucilaginosa 103
Streptococcus salivarius 103
Streptococcus pasasanguinis 103
Rothia mucilaginosa 103
Streptococcus salivarius 103
Streptococcus pasasanguinis 103
Селективная среда для Burkholderia cepacia (OFPBL-агар) с бацитрацином и полимиксина сульфатом
Burkholderia cenocepacia 103 Burkholderia cenocepacia 103
Универсальная хромогенная среда
Rothia mucilaginosa 103
Streptococcus salivarius 103
Streptococcus pasasanguinis 103
Rothia mucilaginosa 103
Streptococcus salivarius 103
Streptococcus pasasanguinis 103
Шоколадный агар
Rothia mucilaginosa 103
Streptococcus salivarius 103
Streptococcus pasasanguinis 103
Агар Сабуро с хлорамфинеколом
Candida albicans 103 Candida albicans 103
КУЛЬТИВИРОВАНИЕ В АНАЭРОБНЫХ УСЛОВИЯХ
5% кровяной агар с дефибринированной бараньей кровью
Streptococcus intermedius 103
Streptococcus gordonii 103
Streptococcus salivarius 103
Streptococcus pasasanguinis 103
Универсальная хромогенная среда
Streptococcus intermedius 103
Streptococcus gordonii 103
Streptococcus salivarius 103
Streptococcus pasasanguinis 103
Veilonella-агар
Veilonella atypica 103
Агар для анаэробов
Actinomyces odontolyticus 103
Clostridium-агар
Streptococcus intermedius 103
Streptococcus gordonii 103
Aggregatibacter aphorophilis 103
Агар для лактобактерий
Actinomyces odontolyticus 103
Lactobacillus salivarius 103
Агар для бифидобактерий
Actinomyces odontolyticus 103
Aggregatibacter aphorophilis 103

Таким образом, благодаря предлагаемому нами способу, был получен рост 11 микроорганизмов на питательных средах, в то время как при использовании способа, указанного в прототипе, был получен рост 5 культур. Среди выделенных с использованием предлагаемого нами способа посева бактерий были представители парадонтопатогенной флоры - Actinomyces odontolyticus, Aggregatibacter aphorophilis, Streptococcus intermedius, Streptococcus gordonii, Veilonella atypica. Из приведенного перечня возбудителей при посеве с использованием только перечня сред из способа, указанного в прототипе, невозможно получение роста указанных микроорганизмов ввиду их метаболических особенностей.

Таким образом, использование предлагаемого нами способа позволяет получать более широкий диапазон возбудителей при первичном посеве, как среди имеющих значение в развитии бактериальных осложнений при муковисцидозе, так специфических возбудителей стоматологических инфекций.

Способ первичного посева биоматериала, выделенного из полости рта пациентов с муковисцидозом при стоматологическом обследовании, отличающийся тем, что на поверхность двух чашек с 5% кровяным агаром с дефибринированной бараньей кровью, двух чашек с универсальной хромогенной средой, по одной чашке с селективной средой для Burkholderia cepacia (OFPBL-агар) с бацитрацином и полимиксина сульфатом, Veilonella-агаром, агаром для анаэробов, Clostridium-агаром, агаром для лактобактерий, агаром для бифидобактерий производится посев биоматериала из ротовой полости пациентов с муковисцидозом, взятого при стоматологическом обследовании, с использованием техники посева «штрихом»; на поверхность чашек с агаром Сабуро с хлорамфениколом производится посев гомогенизированного материала методом бляшек с последующей инкубацией при 28°С до 14 суток с ежедневными просмотрами посевов; затем по одной засеянной чашке с 5% кровяным агаром с дефибринированной бараньей кровью и с универсальной хромогенной средой инкубируются в термостате при температуре 37°С в течение 24-48 часов с ежедневным просмотром посевов; чашки с селективной средой для Burkholderia cepacia (OFPBL-агар) с бацитрацином и полимиксина сульфатом инкубируются в аэробных условиях 24-48 часов при температуре 37°С, далее инкубируются до 14 суток при температуре 28°С с ежедневным просмотром посевов; по одной засеянной чашке с 5% кровяным агаром с дефибринированной бараньей кровью и с универсальной хромогенной средой, а также чашки с Veilonella-агаром, агаром для анаэробов, Clostridium-агаром, агаром для лактобактерий, агаром для бифидобактерий инкубируются в анаэробных условиях 120 часов при температуре 37°С с просмотром после окончания срока инкубирования.



 

Похожие патенты:

Предполагаемое изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой питательную среду, которая может быть использована в лабораторной практике для определения патогенных свойств вибрионов в тесте Канагава при диагностике пищевых токсикоинфекций, раневых инфекций и септицимий бактериальной природы.

Предложенная группа изобретений относится к области медицины, в частности к лабораторной диагностике. Предложены способ и набор реагентов для оценки прогрессирования хронического пародонтита.

Изобретение относится к выявлению присутствия продуцирующих карбапенемазу Enterobacteriales, Pseudomonas и Acinetobacter в биологическом образце. Предложен способ выявления присутствия продуцирующих карбапенемазу Enterobacteriales, Pseudomonas и Acinetobacter в биологическом образце, включающий обеспечение образца, в котором предполагается присутствие продуцирующих карбапенемазу Enterobacteriales, Pseudomonas или Acinetobacter, реагирование указанного образца с раствором (7R)-7-[(z)-2-(2-аминотиазол-4-ил)-(Z)-2(метоксиимино)ацетамид]-3-(2,4-динитростирил)-3-цефем-4-карбоновой кислоты) или ее соли.

Изобретение относится к биотехнологии, в частности микробиологической, дрожжевой и спиртовой промышленности, и предназначено для оперативного определения динамики прироста, количества и состояние биомассы живых бактерий в культуральной жидкости в процессе ферментации. Техническим результатом изобретения является возможность в процессе культивирования биомассы бактерий в биореакторе, для оптимизации технологического процесса, оперативно определять состояние и количество живой биомассы бактерий, а также ее прирост на разных стадиях ферментации.

Группа изобретений относится к области биотехнологии. Предложен способ, состоящий в том, что в культуральный матрас через боковую поверхность направляют горизонтальный луч лазера.

Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано с целью оптимизации питательных сред для селективного культивирования дрожжевого гриба вида Malassezia furfur (M.furfur). Предложена питательная среда, разработанная на основе среды по прописи Диксона, используемой для выделения грибов рода Malassezia, с добавлением компонента (флуконазола), ингибирующего рост дрожжевых грибов рода Candida: питательная среда содержит, мас.

Заявленное изобретение относится к способу определения интегральной антибиотикорезистентности микроорганизмов после воздействия условий космического полета, включающему расчет показателей антибиотикорезистентности АР по формуле АР=С×Д×П×(М+К), где К – Конъюгация, М – Мобилизация, Д - Детерминанты в трансконъюгантах, П - Приоритетность колонизации, С - Относительная концентрация, с последующим определением интегральной величины антибиотикорезистентности микроорганизмов всех выделенных культур путем раздельного суммирования величин антибиотикорезистентности каждой из культур до и после условий космического полета, а оценку влияния внешних условий на интегральную антибиотикорезистентность (ИАР) микроорганизмов производят путем сравнения полученных интегральных величин антибиотикорезистентности микрорганизмов до и после воздействия условий космического полета, и при снижении или повышении этого интегрального показателя после воздействия условий космического полета выносят суждение соответственно об уменьшении или увеличении интегральной антибиотикорезистентности микроорганизмов.

Изобретение относится к идентификации микроорганизмов. Предложен способ определения наличия или отсутствия микроорганизма в матрице пищевых продуктов.

Изобретение относится к идентификации микроорганизмов. Предложен способ определения наличия или отсутствия микроорганизма в матрице пищевых продуктов.

Предложен набор рекомбинантных флуоресцентных штаммов бактерий вида Yersinia pestis античного биовара основного подвида и алтайского биовара центральноазиатского подвида для индикации возбудителя чумы в экспериментальных образцах. Рекомбинантные флуоресцентные штаммы бактерий Yersinia pestis античного биовара основного подвида представляют собой штамм Y.
Наверх