Способ дифференциальной диагностики образования слизистой оболочки щеки по содержанию биомаркеров в ротовой жидкости пациента

Изобретение относится к области медицины, а именно к дифференциальной диагностике образования слизистой оболочки щеки, и может быть использовано в дифференциальной диагностике воспалительных заболеваний и злокачественных новообразований органов полости рта в условиях стоматологических, онкологических и хирургических лечебных заведений. Способ включает забор ротовой жидкости у пациента и выполнение метода иммуноферментного анализа на плашке на основе моноклональных антител с последующим анализом результатов исследований, в качестве биомаркеров выбирают матриксную металлопротеиназу 2 / matrix metalloproteinase 2 (ММП 2 / ММР 2) и матриксную металлопротеиназу 8 / matrix metalloproteinase 8 (ММП 8 / ММР 8) и определяют их количественное содержание в ротовой жидкости пациента. За количественное содержание биомаркера в ротовой жидкости матриксной металлопротеиназы 2 / matrix metalloproteinase 2 (ММП 2 / ММР 2) группы клинического контроля принимают уровень 2,32-3,38 нг/мл, а матриксной металлопротеиназы 8 / matrix metalloproteinase 8 (ММП 8 / ММР 8) группы клинического контроля принимают уровень 61,86-91,40 нг/мл. Если определяют содержание в ротовой жидкости матриксной металлопротеиназы 2 / matrix metalloproteinase 2 (ММП 2 / ММР 2) в количестве 121,26-191,54 нг/мл и матриксной металлопротеиназы 8 / matrix metalloproteinase 8 (ММП 8 / ММР 8) в количестве 33,78-60,58 нг/мл, то диагностируют воспаление слизистой оболочки щеки. Если определяют содержание в ротовой жидкости пациента матриксной металлопротеиназы 2 / matrix metalloproteinase 2 (ММП 2 / ММР 2) в количестве 4,98-9,28 нг/мл и матриксной металлопротеиназы 8 / matrix metalloproteinase 8 (ММП 8 / ММР 8) в количестве 1063,96-1600,48 нг/мл, то диагностируют плоскоклеточный рак слизистой оболочки щеки при определении стоматологического здоровья, затем по полученным результатам определения содержания биомаркеров в ротовой жидкости пациента прогнозируют тактику лечения пациента. Изобретение обеспечивает достижение значительного повышения диагностической точности дифференциальной диагностики воспаления и плоскоклеточного рака слизистой оболочки щеки в день обращения пациента, значительное повышение чувствительности дифференциальной экспресс-диагностики, достижение высокой вероятности выявления процессов воспаления и плоскоклеточного рака в организме пациента, как на ранних стадиях заболевания, так и на более поздних, а также значительное упрощение подготовки пациента в определенных временных рамках для забора и хранения диагностического материала. 2 з.п. ф-лы, 2 пр.

 

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу дифференциальной диагностики образования слизистой оболочки щеки по содержанию биомаркеров в ротовой жидкости пациента и может быть использовано в дифференциальной диагностике воспалительных заболеваний и злокачественных новообразований органов полости рта в условиях стоматологических, онкологических и хирургических лечебных заведений.

Известен способ прогнозирования и диагностики плоскоклеточного рака головы и шеи по содержанию матриксных металлопротеиназ и их тканевых ингибиторов в плазме крови пациента, включающий исследования плазмы венозной крови, при этом сыворотку крови забирали стандартным способом у больных плоскоклеточным раком головы и шеи после постановки диагноза до начала лечебных процедур. Сыворотку хранили при температуре -50°С не более 10 месяцев и размораживали не более 1 раза для иммуноферментного определения содержания матриксных металлопротеиназ и их тканевых ингибиторов с использованием наборов для твердофазного иммуноферментного анализа на ИФА-анализаторе (см. Клишо Е.В., Матриксные металлопротеиназы и их тканевые ингибиторы при плоскоклеточном раке головы и шеи, автореферат диссертации д.м.н., Томск, 2011 г., с. 43).

Однако известный способ при своем использовании имеет следующие недостатки:

- обладает недостаточной точностью дифференциальной диагностикой образований слизистой оболочки щеки в день обращения пациента,

обладает недостаточной чувствительностью дифференциальной диагностики воспаления и плоскоклеточного рака слизистой оболочки щеки,

- недостаточность вероятности выявления процессов воспаления и плоскоклеточного рака слизистой оболочки полости рта в организме пациента, как на ранних стадиях заболевания, так и на более поздних,

- сложность подготовки пациента в определенных временных рамках для забора и хранения диагностического материала,

- возможность инфицирования «через кровь» во время забора диагностического материала,

- сложность забора диагностического материала у лиц с плохим венозным наполнением (в том числе у пожилых людей и у детей).

Задачей изобретения является создание способа дифференциальной диагностики образования слизистой оболочки щеки по содержанию биомаркеров в ротовой жидкости пациента.

Техническим результатом является достижение значительного повышения диагностической точности дифференциальной экспресс-диагностики воспаления и плоскоклеточного рака слизистой оболочки щеки в день обращения пациента, значительное повышение чувствительности дифференциальной диагностики воспаления и плоскоклеточного рака слизистой оболочки щеки, достижение высокой вероятности выявления процесса воспаления и плоскоклеточного рака слизистой оболочки щеки в организме пациента, как на ранних стадиях заболевания, так и на более поздних, значительное упрощение подготовки пациента к определенным временным рамкам для забора и хранения диагностического материала, отсутствие инфицирования «через кровь» во время забора диагностического материала, а также возможность забора диагностического материала у лиц с плохим венозным наполнением (в том числе у пожилых людей и у детей).

Технический результат достигается тем, что предложен способ дифференциальной диагностики образования слизистой оболочки щеки по содержанию биомаркеров в ротовой жидкости пациента, включающий исследования ротовой жидкости пациента, выполнение забора ротовой жидкости у пациента производится до или не ранее чем через 30 минут после приема пищи пациентом, центрифугирование ротовой жидкости пациента при 3000 об/мин в течение 15 минут с охлаждением до плюс 5°С, разбавление ротовой жидкости физиологическим раствором в соотношении 1:100 и повторное центрифугирование при 3000 об/мин в течение 15 минут с охлаждением до плюс 5°С, размещение готового для исследования материала ротовой жидкости пациента в кювету и выполнение метода иммуноферментного анализа на плашке на основе моноклональных антител с последующим анализом результатов исследований, при этом ротовую жидкость забирают у пациента для дифференциальной диагностики образования слизистой оболочки щеки по содержанию биомаркеров в ротовой жидкости пациента, в качестве биомаркера при экспресс определении образования слизистой оболочки щеки по количеству содержания биомаркеров в ротовой жидкости выбирают матриксную металлопротеиназу 2 / matrix metalloproteinase 2 (ММП 2 / ММР 2) и матриксную металлопротеиназу 8 / matrix metalloproteinase 8 (ММП 8 / ММР 8) и определяют их количественное содержание в ротовой жидкости пациента, при этом за количественное содержание биомаркера в ротовой жидкости матриксной металлопротеиназы 2 / matrix metalloproteinase 2 (ММП 2 / ММР 2) группы клинического контроля принимают уровень 2,32-3,38 нг/мл, а матриксной металлопротеиназы 8 / matrix metalloproteinase 8 (ММП 8 / ММР 8) группы клинического контроля принимают уровень 61,86-91,40 нг/мл, при этом, если определяют содержание в ротовой жидкости матриксной металлопротеиназы 2 / matrix metalloproteinase 2 (ММП 2 / ММР 2) в количестве 121,26-191,54 нг/мл и матриксной металлопротеиназы 8 / matrix metalloproteinase 8 (ММП 8 / ММР 8) в количестве 33,78-60,58 нг/мл, то диагностируют воспаление слизистой оболочки щеки, при этом если определяют содержание в ротовой жидкости пациента матриксной металлопротеиназы 2 / matrix metalloproteinase 2 (ММП 2 / ММР 2) в количестве 4,98-9,28 нг/мл и матриксной металлопротеиназы 8 / matrix metalloproteinase 8 (ММП 8 / ММР 8) в количестве 1063,96-1600,48 нг/мл, то диагностируют плоскоклеточный рак слизистой оболочки щеки при определении стоматологического здоровья, затем по полученным результатам определения содержания биомаркеров в ротовой жидкости пациента прогнозируют тактику лечения пациента. При этом при необходимости долговременного хранения ротовой жидкости пациента перед выполнением анализа ее центрифугируют при 3000 об/мин в течение 15 минут с охлаждением до плюс 5°С, забирают супернатант в количестве 300 мкл, помещают в пробирку «SaliCaps» и сразу замораживают в морозильной камере при температуре минус 80°С. При этом в процессе до выполнения или после окончания консервативного лечения образования слизистой оболочки щеки, в том числе стоматологического лечения, пациенту дополнительно осуществляют контрольные определения содержания биомаркеров в ротовой жидкости пациента, по результатам которых судят об эффективности выбранного лечения пациента.

Способ осуществляют следующим образом. Ротовую жидкость забирают у пациента для дифференциальной экспресс-диагностики образования слизистой оболочки щеки. Выполняют забор ротовой жидкости пациента до или не ранее чем через 30 минут после приема пищи пациентом. Ротовую жидкость пациента центрифугируют при 3000 об/мин в течение 15 минут с охлаждением до плюс 5°С, разбавляют ротовую жидкость физиологическим раствором в соотношении 1:100 и повторно центрифугируют при 3000 об/мин в течение 15 минут с охлаждением до плюс 5°С. Готовый для исследования материал ротовой жидкости пациента размещают в кювету и выполняют метод иммуноферментного анализа на плашке на основе моноклональных антител. При этом при необходимости долговременного хранения ротовой жидкости пациента перед выполнением анализа ее центрифугируют при 3000 об/мин в течение 15 минут с охлаждением до плюс 5°С, забирают супернатант в количестве 300 мкл, помещают в пробирку «SaliCaps» и сразу замораживают в морозильной камере при температуре минус 80°С.

В качестве биомаркера для дифференциальной экспресс-диагностики образования слизистой оболочки щеки по количеству содержания биомаркеров в ротовой жидкости выбирают матриксную металлопротеиназу 2 / matrix metalloproteinase 2 (ММП 2 / ММР 2) и матриксную металлопротеиназу 8 / matrix metalloproteinase 8 (ММП 8 / ММР 8) и определяют их количественное содержание в ротовой жидкости пациента. При этом за количественное содержание биомаркера в ротовой жидкости матриксной металлопротеиназы 2 / matrix metalloproteinase 2 (ММП 2 / ММР 2) группы клинического контроля принимают уровень 2,32-3,38 нг/мл, а матриксной металлопротеиназы 8 / matrix metalloproteinase 8 (ММП 8 / ММР 8) группы клинического контроля принимают уровень 61,86-91,40 нг/мл.

Если определяют содержание в ротовой жидкости матриксной металлопротеиназы 2 / matrix metalloproteinase 2 (ММП 2 / ММР 2) в количестве 121,26-191,54 нг/мл и матриксной металлопротеиназы 8 / matrix metalloproteinase 8 (ММП 8 / ММР 8) в количестве 33,78-60,58 нг/мл, то диагностируют воспаление слизистой оболочки щеки.

Если определяют содержание в ротовой жидкости пациента матриксной металлопротеиназы 2 / matrix metalloproteinase 2 (ММП 2 / ММР 2) в количестве 4,98-9,28 нг/мл и матриксной металлопротеиназы 8 / matrix metalloproteinase 8 (ММП 8 / ММР 8) в количестве 1063,96-1600,48 нг/мл, то диагностируют плоскоклеточный рак слизистой оболочки щеки.

Затем по полученным результатам определения содержания биомаркеров в ротовой жидкости пациента прогнозируют тактику лечения пациента.

При этом в процессе до выполнения или после окончания консервативного лечения образования слизистой оболочки щеки, в том числе стоматологического лечения, пациенту дополнительно осуществляют контрольные определения содержания биомаркеров в ротовой жидкости пациента, по результатам которых судят об эффективности выбранного лечения пациента.

Среди существенных признаков, характеризующих предложенный способ дифференциальной экспресс-диагностики образования слизистой оболочки щеки по содержанию биомаркеров в ротовой жидкости пациента, отличительными являются:

- отсутствие выполнения забора венозной крови у пациента для экспресс исследований новообразований слизистой оболочки щеки,

- выбор в качестве биомаркера для дифференциальной экспресс-диагностики слизистой оболочки щеки по количеству содержания биомаркеров в ротовой жидкости матриксной металлопротеиназы 2 / matrix metalloproteinase 2 (ММП 2 / ММР 2) и определение его количественного содержания в ротовой жидкости пациента,

- диагностирование при определении содержания в ротовой жидкости пациента матриксной металлопротеиназы 2 / matrix metalloproteinase 2 (ММП 2 / ММР 2) группы клинического контроля принимают уровень 2,32-3,38 нг/мл отсутствие образования слизистой оболочки щеки у пациента,

- диагностирование при определении содержания в ротовой жидкости пациента матриксной металлопротеиназы 2 / matrix metalloproteinase 2 (ММП 2 / ММР 2) в количестве 121,26-191,54 нг/мл воспаление слизистой оболочки щеки пациента,

- диагностирование при определении содержания в ротовой жидкости пациента матриксной металлопротеиназы 2 / matrix metalloproteinase 2 (ММП 2 / ММР 2) в количестве 4,98-9,28 нг/мл плоскоклеточного рака слизистой оболочки щеки пациента,

- выбор в качестве биомаркера для дифференциальной экспресс-диагностики слизистой оболочки щеки по количеству содержания биомаркеров в ротовой жидкости матриксной металлопротеиназы 8 / matrix metalloproteinase 8 (ММП 8 / ММР 8) и определение его количественного содержания в ротовой жидкости пациента,

- диагностирование при определении содержания в ротовой жидкости пациента матриксной металлопротеиназы 8 / matrix metalloproteinase 8 (ММП 8 / ММР 8) в количестве 61,86-91,40 нг/мл отсутствие образования слизистой оболочки щеки у пациента,

- диагностирование при определении содержания в ротовой жидкости пациента матриксной металлопротеиназы 8 / matrix metalloproteinase 8 (ММП 8 / ММР 8) в количестве 33,78-60,58 нг/мл воспаление слизистой оболочки щеки пациента,

- диагностирование при определении содержания в ротовой жидкости пациента матриксной металлопротеиназы 8 / matrix metalloproteinase 8 (ММП 8 / ММР 8) в количестве 1063,96-1600,48 нг/мл плоскоклеточного рака слизистой оболочки щеки пациента,

- прогнозирование по полученным результатам определения содержания биомаркеров в ротовой жидкости пациента тактики его лечения,

- выполнение при необходимости долговременного хранения ротовой жидкости пациента перед выполнением анализа ее центрифугирования при 3000 об/мин в течение 15 минут с охлаждением до плюс 5°С, забора супернатанта в количестве 300 мкл, помещения в пробирку «SaliCaps» и немедленной заморозки в морозильной камере при температуре минус 80°С,

- дополнительное осуществление в процессе до выполнения или после окончания консервативного лечения образования слизистой оболочки щеки, в том числе стоматологического лечения, пациенту дополнительно осуществляют контрольные определения содержания биомаркеров в ротовой жидкости пациента, по результатам которых судят об эффективности выбранного лечения пациента.

Экспериментальные исследования предложенного способа дифференциальной диагностики образования слизистой оболочки щеки по содержанию биомаркеров в ротовой жидкости пациента в клинических условиях показали его высокую эффективность. Способ дифференциальной диагностики образования слизистой оболочки щеки по содержанию биомаркеров в ротовой жидкости пациента при своем использовании обеспечивает достижение значительного повышения точности дифференциальной экспресс-диагностики образования слизистой оболочки щеки в день обращения пациента, значительное повышение чувствительности дифференциальной диагностики воспаления и плоскоклеточного рака слизистой оболочки щеки, достижение высокой вероятности выявления процесса воспаления и плоскоклеточного рака слизистой оболочки щеки в организме пациента, как на ранних стадиях заболевания, так и на более поздних, значительное упрощение подготовки пациента в определенных временных рамках для забора и хранения диагностического материала, отсутствие инфицирования «через кровь» во время забора диагностического материала, а также возможность забора диагностического материала у лиц с плохим венозным наполнением (в том числе у пожилых людей и у детей). Кроме того, предложенный способ дифференциальной диагностики образования слизистой оболочки щеки по содержанию биомаркеров в ротовой жидкости пациента при практическом использовании значительное повышение качества жизни пациентов.

Реализация предложенного способа дифференциальной диагностики образования слизистой оболочки щеки по содержанию биомаркеров в ротовой жидкости пациента иллюстрируется следующими клиническими примерами.

Пример 1. Пациент Г., 64 года, поступил в отделение с предположительным диагнозом: «образование слизистой оболочки щеки слева».

Ротовую жидкость забирали у пациента для дифференциальной диагностики образования слизистой оболочки щеки. Выполняли забор ротовой жидкости у пациента до или не ранее чем через 30 минут после приема пищи пациентом, центрифугирование ротовой жидкости пациента при 3000 об/мин в течение 15 минут с охлаждением до плюс 5°С, разбавление ротовой жидкости физиологическим раствором в соотношении 1:100 и повторное центрифугирование при 3000 об/мин в течение 15 минут с охлаждением до плюс 5°С, размещение готового для исследования материала ротовой жидкости пациента в кювету и выполнение метода иммуноферментного анализа на плашке на основе моноклональных антител с последующим анализом результатов исследований.

В качестве биомаркера для дифференциальной экспресс-диагностики образования слизистой оболочки щеки по количеству содержания биомаркеров в ротовой жидкости выбирали матриксную металлопротеиназу 2 / matrix metalloproteinase 2 (ММП 2 / ММР 2) и матриксную металлопротеиназу 8 / matrix metalloproteinase 8 (ММП 8 / ММР 8) и определяли их количественное содержание в ротовой жидкости пациента.

В результате выполненного анализа установили содержание в ротовой жидкости пациента матриксную металлопротеиназу 2 / matrix metalloproteinase 2 (ММП 2 / ММР 2) в количестве 152,24 нг/мл и матриксную металлопротеиназу 8 / matrix metalloproteinase 8 (ММП 8 / ММР 8) в количестве 46,74 нг/мл.

На основании полученных результатов диагностировали воспаление слизистой оболочки щеки слева. Клинический диагноз также подтверждали клиническим обследованием полости рта пациента. В связи с полученными данными пациенту было назначено консервативное лечение слизистой оболочки щеки слева.

Пример 2. Пациентка С., 52 года, поступила в отделение с предположительным диагнозом: «образование слизистой оболочки щеки справа».

Ротовую жидкость забирали у пациентки для дифференциальной диагностики образования слизистой оболочки щеки. Выполняли забор ротовой жидкости у пациентки до или не ранее чем через 30 минут после приема пищи пациенткой, центрифугировали ротовую жидкость пациентки при 3000 об/мин в течение 15 минут с охлаждением до плюс 5°С, разбавлением ротовой жидкости физиологическим раствором в соотношении 1:100 и повторное центрифугирование при 3000 об/мин в течение 15 минут с охлаждением до плюс 5°С, размещение готового для исследования материала ротовой жидкости пациентки в кювету и выполнение метода иммуноферментного анализа на плашке на основе моноклональных антител с последующим анализом результатов исследований.

В качестве биомаркера для дифференциальной экспресс-диагностики образования слизистой оболочки щеки по количеству содержания биомаркеров в ротовой жидкости выбирали матриксную металлопротеиназу 2 / matrix metalloproteinase 2 (ММП 2 / ММР 2) и матриксную металлопротеиназу 8 / matrix metalloproteinase 8 (ММП 8 / ММР 8) и определяли их количественное содержание в ротовой жидкости пациентки.

В результате выполненного анализа установили содержание в ротовой жидкости пациентки матриксную металлопротеиназу 2 / matrix metalloproteinase 2 (ММП 2 / ММР 2) в количестве 6,74 нг/мл и матриксную металлопротеиназу 8 / matrix metalloproteinase 8 (ММП 8 / ММР 8) в количестве 1224,32 нг/мл.

На основании полученных результатов диагностировали рак слизистой оболочки щеки справа. Клинический диагноз также подтверждали морфологической верификацией биопсийного материала опухоли и/или лимфатического узла при необходимости. В связи с полученными данными пациентке было назначено комбинированное лечение: предоперационная лучевая терапия на опухоль и пути регионарного метастазирования на 1-м этапе, лимфодиссекция шеи на стороне поражения с резекцией слизистой оболочки щеки справа на 2-м этапе.

Установленные клинические диагнозы впоследствии подтвердились результатами выполненной морфологической верификации предварительно взятого у всех пациентов биопсийного материала из очага поражения.

При этом в процессе до выполнения или после окончания консервативного лечения образования слизистой оболочки щеки, в том числе стоматологического лечения, пациенту дополнительно осуществляют контрольные определения содержания биомаркеров в ротовой жидкости пациента, по результатам которых судят об эффективности выбранного лечения пациента.

1. Способ дифференциальной экспресс-диагностики образования слизистой оболочки щеки по содержанию биомаркеров в ротовой жидкости пациента, включающий исследования ротовой жидкости пациента, при этом выполнение забора ротовой жидкости у пациента производится до или не ранее чем через 30 минут после приема пищи пациентом, центрифугирование ротовой жидкости пациента при 3000 об/мин в течение 15 минут с охлаждением до плюс 5°С, разбавление ротовой жидкости физиологическим раствором в соотношении 1:100 и повторное центрифугирование при 3000 об/мин в течение 15 минут с охлаждением до плюс 5°С, размещение готового для исследования материала ротовой жидкости пациента в кювету и выполнение метода иммуноферментного анализа на плашке на основе моноклональных антител с последующим анализом результатов исследований, отличающийся тем, что ротовую жидкость забирают у пациента для исследований образования слизистой оболочки щеки, в качестве биомаркеров выбирают матриксную металлопротеиназу 2 / matrix metalloproteinase 2 (ММП 2 / ММР 2) и матриксную металлопротеиназу 8 / matrix metalloproteinase 8 (ММП 8 / ММР 8) и определяют их количественное содержание в ротовой жидкости пациента, при этом за количественное содержание биомаркера в ротовой жидкости матриксной металлопротеиназы 2 / matrix metalloproteinase 2 (ММП 2 / ММР 2) группы клинического контроля принимают уровень 2,32-3,38 нг/мл, а матриксной металлопротеиназы 8 / matrix metalloproteinase 8 (ММП 8 / ММР 8) группы клинического контроля принимают уровень 61,86-91,40 нг/мл, при этом, если определяют содержание в ротовой жидкости матриксной металлопротеиназы 2 / matrix metalloproteinase 2 (ММП 2 / ММР 2) в количестве 121,26-191,54 нг/мл и матриксной металлопротеиназы 8 / matrix metalloproteinase 8 (ММП 8 / ММР 8) в количестве 33,78-60,58 нг/мл, то диагностируют воспаление слизистой оболочки щеки, при этом если определяют содержание в ротовой жидкости пациента матриксной металлопротеиназы 2 / matrix metalloproteinase 2 (ММП 2 / ММР 2) в количестве 4,98-9,28 нг./мл. и матриксной металлопротеиназы 8 / matrix metalloproteinase 8 (ММП 8 / ММР 8) в количестве 1063,96-1600,48 нг/мл, то диагностируют плоскоклеточный рак слизистой оболочки щеки при определении стоматологического здоровья, затем по полученным результатам определения содержания биомаркеров в ротовой жидкости пациента прогнозируют тактику лечения пациента.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что при необходимости долговременного хранения ротовой жидкости пациента перед выполнением анализа ее центрифугируют при 3000 об/мин в течение 15 минут с охлаждением до плюс 5°С, забирают супернатант в количестве 300 мкл, помещают в пробирку «SaliCaps» и сразу замораживают в морозильной камере при температуре минус 80°С.

3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что в процессе до выполнения или после окончания консервативного лечения образования слизистой оболочки щеки, в том числе стоматологического лечения, пациенту дополнительно осуществляют контрольные определения содержания биомаркеров в ротовой жидкости пациента, по результатам которых судят об эффективности выбранного лечения пациента.