Способ определения полиморфизма генетических маркеров молочной продуктивности крупного рогатого скота

Изобретение относится к биотехнологии и молекулярной генетике и может быть использовано в селекции крупного рогатого скота молочного направления продуктивности. Генетический потенциал крупного рогатого скота оценивают путем ДНК-тестирования (ПЦР-ПДРФ метод) генотипов животных по маркерам генов пролактина (PRL), соматотропина (GH), диацилглицерол О-ацилтрансферазы (DGAT1) и каппа-казеина (CSN3). Способ позволяет проводить отбор перспективных телок, коров и быков-производителей для племенных целей и подбор родительских пар для совершенствования молочных пород. 2 табл., 3 пр.

 

Изобретение относится к сельскохозяйственной биотехнологии и молекулярной генетике и может быть использовано в селекции крупного рогатого скота молочного направления продуктивности, в частности, как способ определения генетического потенциала крупного рогатого скота по уровню удоя, массовой доли жира и белка в молоке с целью отбора телок, коров быков-производителей для племенных целей и подбора родительских пар в селекционной работе по совершенствованию молочных пород.

Известен способ отбора телок с желательным уровнем удоя, содержанием белка и жира в молоке будущих лактации по родословным, общему развитию и экстерьеру, отбора быков-производителей - по показателям молочной продуктивности дочерей. Однако эти традиционные методы отбора животных малоэффективны, связаны с большими временными затратами и материальными издержками.

Развитие молекулярно-генетических методов анализа, основанных на полимеразной цепной реакции ПЦР, сделало возможным создать новые маркерные системы, обеспечивающие определение генотипов животных непосредственно на уровне генетического материала клетки, на уровне ДНК, независимо от пола и возраста, сократить время анализа и повысить его точность.

Существуют методы оценки генетического потенциала коров, которые основаны, как правило, на использовании одного генетического маркера. Например, жирномолочность оценивают по гену DGAT1 [1].

Генетический потенциал белковомолочности крупного рогатого скота определяют с помощью анализа полиморфизма гена каппа-казеина [2].

При оценке генетических возможностей коров относительно уровня удоя используют анализ полиморфизма генов пролактина [3], рецептора гормона роста GHR [4], гена белка STAT5A [5], однако такой подход является устаревшим и затратным.

Более перспективны способы оценки генетического потенциала коров по показателям молочной продуктивности, учитывающие совместное влияние двух или нескольких генов, участвующих в формировании признака молочной продуктивности.

В качестве прототипа выбран способ определения генетического потенциала крупного рогатого скота по качеству молока. Генетический потенциал крупного рогатого скота оценивают путем ДНК-тестирования ПЦР-ПДРФ метод генотипов животных по RsaI-маркеру гена пролактина и AluI-маркеру гена гормона роста и выявлении сопряженных генотипов по локусам пролактина и соматотропина - гормона роста, определяющих повышенное или пониженное содержание жира и белка в молоке, согласно разработанному перечню генотипов [6].

Задача изобретения - создание способа характеризующегося повышенной эффективностью определения генетического потенциала по параметрам молочной продуктивности крупного рогатого скота для выявления перспективных животных, до начала оценки животного по лактации в молочном скотоводстве и племенной работе, значительно сокращающего временные и экономические затраты.

Сущность изобретения - способ использования тест-систем, основанных на HindIII-изменчивости гена каппа казеина, EaeI-изменчивости гена диацилглицерол О-ацилтрансферазы, AluI изменчивости гена соматотропина и RsaI - изменчивости гена пролактина, для выявления генотипов, ассоциированных с параметрами молочной продуктивности и определения генетического потенциала крупного рогатого скота по уровню удоя, содержания жира и белка в молоке, которые могут широко использованы при селекции молочных пород.

Использование в предлагаемом способе генов каппа-казеина, диацилглицерол О-ацилтрансферазы, пролактина и соматотропина, участвующих в формировании молочной продуктивности, более эффективно по сравнению с прототипом отражает генетический потенциал молочной продуктивности крупного рогатого скота.

HindIII - рестрикционный полиморфизм гена каппа-казеина обусловлен заменой А-С возникающей в 13100 нуклеотиде гена аллель А - IDGenBank AY380228 в 13105 нуклеотиде гена аллель В - IDGenBank AY3 80229, что обусловлено сайтом рестрикции при наличии такого полиморфизма. EaeI - рестрикционный полиморфизм гена диацилглицерол О-ацилтрансферазы обусловлен заменой GC-AA возникающей в 115, 116 нуклеотиде гена аллель К - IDGenBank JQ 897353 в 115,116 нуклеотиде гена аллель А - IDGenBank JQ897351, что обусловлено сайтом рестрикции при наличии такого полиморфизма. AluI - рестрикционный полиморфизм гена соматотропина гормона роста обусловлен заменой C-G возникающей в 46 нуклеотиде гена аллель L - IDGenBank МТ108894 в 46 нуклеотиде гена аллель V - IDGenBank МТ108895, что обусловлено сайтом рестрикции при наличии такого полиморфизма. RsaI рестрикционный полиморфизм гена пролактина обусловлен заменой A-G возникающей в 473 нуклеотиде гена аллель А - IDGenBank ХМ027524256 в 447 нуклеотиде гена аллель В - IDGenBank ВС 148124, что обусловлено сайтом рестрикции при наличии такого полиморфизма. Такой нуклеотидный полиморфизм характеризуется заменой соответствующих аминокислот, что и проявляется в различиях значений молочной продуктивности коров.

Способ основан на ПЦР анализируемых генов с последующим рестрикционным анализом продуктов амплификации, метод ПЦР-ПДРФ и включает в себя выделение ДНК, амплификацию генов пролактина, соматотропина, диацилглицерол О-ацилтрансферазы и каппа-казеина с использованием специфичных праймеров, рестрикционный анализ полученных ампликонов RsaI-, AluI-, EaeI- и HindIII-эндонуклеазами, соответственно, установление генотипов по каждому гену:

- продукты рестрикции ампликона гена пролактина молекулярной массой 61 и 98 п.н. свидетельствуют о наличии аллельного варианта ВВ рестриктаза RsaI определила сайт рестрикции и расщепила все имеющиеся ампликоны, продукты рестрикции ампликона гена пролактина молекулярной массой 61 и 98 п.н. в совокупности с исходным ампликонов молекулярной массой 159 п.н. свидетельствуют о наличии аллельного варианта АВ рестриктаза RsaI определила сайт рестрикции и расщепила часть ампликонов, где есть сайт рестрикции, ампликоны с нуклеотидной заменой характеризовались отсутствием сайта рестрикции и остались в исходном состоянии, наличие после рестрикции лишь фрагмента ДНК молекулярной массой 159 п.н. свидетельствуют о наличии аллельного варианта АА ампликоны с нуклеотидной заменой характеризовались отсутствием сайта рестрикции и остались в исходном состоянии;

- продукты рестрикции ампликона гена каппа-казеина молекулярной массой 62 и 69 п.н. свидетельствуют о наличии аллельного варианта ВВ рестриктаза Hindlll определила сайт рестрикции и расщепила все имеющиеся ампликоны, продукты рестрикции ампликона гена пролактина молекулярной массой 62 и 69 п.н. в совокупности с исходным ампликонов молекулярной массой 131 п.н. свидетельствуют о наличии аллельного варианта АВ рестриктаза HindIII определила сайт рестрикции и расщепила часть ампликонов, где есть сайт рестрикции, ампликоны с нуклеотидной заменой характеризовались отсутствием сайта рестрикции и остались в исходном состоянии, наличие после рестрикции лишь фрагмента ДНК молекулярной массой 131 п.н. свидетельствуют о наличии аллельного варианта АА ампликоны с нуклеотидной заменой характеризовались отсутствием сайта рестрикции и остались в исходном состоянии;

- продукты рестрикции ампликона гена диацилглицерол О-ацилтрансферазы молекулярной массой 84 и 163 п.н. свидетельствуют о наличии аллельного варианта КК рестриктаза EaeI определила сайт рестрикции и расщепила все имеющиеся ампликоны, продукты рестрикции ампликона гена пролактина молекулярной массой 84 и 163 п.н. в совокупности с исходным ампликонов молекулярной массой 247 п.н. свидетельствуют о наличии аллельного варианта АК рестриктаза EaeI определила сайт рестрикции и расщепила часть ампликонов, где есть сайт рестрикции, ампликоны с нуклеотидной заменой характеризовались отсутствием сайта рестрикции и остались в исходном состоянии, наличие после рестрикции лишь фрагмента ДНК молекулярной массой 247 п.н. свидетельствуют о наличии аллельного варианта АА ампликоны с нуклеотидной заменой характеризовались отсутствием сайта рестрикции и остались в исходном состоянии;

продукты рестрикции ампликона гена соматотропина молекулярной массой 39 и 142 п.н. свидетельствуют о наличии аллельного варианта LL рестриктаза AluI определила сайт рестрикции и расщепила все имеющиеся ампликоны, продукты рестрикции ампликона гена пролактина молекулярной массой 39 и 142 п.н. в совокупности с исходным ампликонов молекулярной массой 181 п.н. свидетельствуют о наличии аллельного варианта LV рестриктаза AluI определила сайт рестрикции и расщепила часть ампликонов, где есть сайт рестрикции, ампликоны с нуклеотидной заменой характеризовались отсутствием сайта рестрикции и остались в исходном состоянии, наличие после рестрикции лишь фрагмента ДНК молекулярной массой 181 п.н. свидетельствуют о наличии аллельного варианта VV ампликоны с нуклеотидной заменой характеризовались отсутствием сайта рестрикции и остались в исходном состоянии.

При анализе продуктивных качеств крупного рогатого скота учитываются следующие показатели:

- генотип АА гена пролактина указывает на высокий потенциал по количеству получаемого молока, генотип ВВ гена пролактина указывает на высокий потенциал белковомолочности и жирномолочности, генотип АВ характеризует средний потенциал молочной продуктивности;

- генотип LL гена соматотропина указывает на высокий потенциал по количеству получаемого молока, генотип VV гена соматотропина указывает на высокий потенциал жирномолочности, генотип LV гена соматотропина характеризует средний потенциал молочной продуктивности;

- генотип КК гена диацилглицерол О-ацилтрансферазы указывает на высокий потенциал жирномолочности, генотип АА гена диацилглицерол О-ацилтрансферазы указывает на высокий потенциал уровня удоя, но низкий потенциал жирномолочности, генотип АК характеризует средний потенциал молочной продуктивности;

- генотип АА гена каппа-казеина указывает на низкий потенциал белковомолочности, генотип ВВ гена каппа-казеина указывает на высокий потенциал белковомолочности, генотип АВ характеризует средний потенциал молочной продуктивности.

Способ осуществляют следующим образом.

1. Выделяют ДНК из образцов крови 200 мкл животного с применением набора реагентов «ДНК сорб-В» (ЦНИИ Эпидемиологии, Москва) или любым другим стандартным методом. Возможно использование иных образцов, содержащих ДНК.

2. Амплификацию выполняют, используя реакционную смесь для следующего состава на одну пробу: деионизированная вода 11 мкл; 10-кратный ПЦР-буфер 2,5 мкл; смесь нуклеозид трифосфатов 2,5 мМ 2,5 мкл; раствор MgCl₂ 25 мМ 2,5 мкл; праймеры 10 пкМ по 0,5 мкл; Taq ДНК-полимераза (5Е/мкл) 0,5 мкл (специфичные праймеры для гена PRL: FPPRL 5'- GCTTGATTCTTGGGTTGCTGC -3' и RPPRL 5'-CAAATATCATCTCCATGCCTTCCA -3'; для гена GH: FPGH 5'-AAGGACCTGGAGGAAGGCATC -3' и RPGH 5'-TCTCCGTCTTATGCAGGTCCTTC -3'; для гена DGAT1: FPDGAT 5'-TGCCACTTGCCTCGGGACC -3' и RPDGAT 5'- CACAGGGTGGGGGCGAA -3'; для гена CSN3: FPCAS 5'- CATTGCTAGTGGTGAGCCTACAAGTA -3' и RPCAS 5'- CAGTTGAAGTAACTTGGACTGTGTTGAT -3'); ДНК исследуемого образца 5 мкл. Общий объем реакционной смеси составляет 25 мкл. Программа для амплификации должна быть следующей: 1. 95°С 5 мин 1 цикл; 2. 94°С 30 с, отжиг праймеров 30 с. (56,6°С для гена PRL, 55,9°С для гена GH, 57,2°С для гена DGAT1, 55,9°С для гена CSN3), 72°С 30 с. 42 цикла; 3. 72°С 10 мин 1 цикл.

Праймеры для специфической амплификации представлены в таблице 1.

Размер полученных фрагментов определяют методом электрофореза в 3% агарозном геле.

3. Проводят рестрикцию амплифицированного фрагмента гена PRL эндонуклеазой рестрикции RsaI, гена GH эндонуклеазой рестрикции AluI, гена DGAT1 эндонуклеазой рестрикции EaeI, гена CSN3 эндонуклеазой рестрикции Hindlll, в стандартных условиях.

4. Размер полученных рестрикционных фрагментов определяют методом электрофореза в 3%-ном агарозном геле, либо в 12%-ном полиакриламидном геле.

5. Определяют генотипы по каждому гену (согласно табл.2)

6. Сравнивают выявленные у животных генотипы с генотипами, определяющими молочную продуктивность, согласно данным приведенным выше описание способа.

7. Принимают решение о целесообразности использования животного с данным генотипом в молочном производстве и селекционной работе.

Пример 1. Данным способом был проведен анализ одного образца от теленка двухнедельного возраста черно-пестрой породы. Определены генотипы животного по отдельным локусам (пролактина (PRL), соматотропина (GH), диацилглицерол О-ацилтрансферазы (DGAT1) и каппа-казеина (CSN3)), сформировано заключение о дальнейшем использовании теленка.

Выделили ДНК из образца крови 200 мкл животного с применением набора реагентов «ДНК сорб-В» (ЦНИИ Эпидемиологии, Москва).

Выполнили амплификацию, используя реакционную смесь для следующего состава на одну пробу: деионизированная вода 11 мкл; 10-кратный ПЦР-буфер 2,5 мкл; смесь нуклеозид трифосфатов 2,5 мМ 2,5 мкл; раствор MgCl₂ 25 мМ 2,5 мкл; праймеры 10 пкМ по 0,5 мкл; Taq ДНК-полимераза (5Е/мкл) 0,5 мкл; ДНК исследуемого образца 5 мкл. Общий объем реакционной смеси составляет 25 мкл. Программа для амплификации была следующей: 1. 95°С 5 мин 1 цикл; 2. 94°С 30 с, отжиг праймеров 30 с. (56,6°С для гена PRL, 55,9°С для гена GH, 57,2°С для гена DGAT1, 55,9°С для гена CSN3), 72°С 30 с. 42 цикла; 3. 72°С 10 мин 1 цикл.

По результатам электрофореза в 3% агарозном геле установили наличие следующих ампликонов: ген пролактина около 160 п.н.; ген соматотропина около 180 п.н.; ген диацилглицерол О-ацилтрансферазы около 250 п.н.; ген каппа-казеина около 130 п.н.

Провели рестрикцию амплифицированного фрагмента гена PRL эндонуклеазой рестрикции RsaI, гена GH эндонуклеазой рестрикции AluI, гена DGAT1 эндонуклеазой рестрикции EaeI, гена CSN3 эндонуклеазой рестрикции Hindlll, в стандартных условиях.

Размеры полученных рестрикционных фрагментов определили методом электрофореза в 12%-ном полиакриламидном геле, которые составляли:

- рестрикции ампликона гена пролактина эндонуклеазой RsaI характеризовалась паттернами молекулярной массой 61 и 98 п.н.;

- рестрикции ампликона гена соматотропина эндонуклеазой AluI характеризовалась паттернами молекулярной массой 39, 142 и 181 п.н.;

- рестрикции ампликона гена диацилглицерол О-ацилтрансферазы эндонуклеазой рестрикции EaeI характеризовалась паттерном молекулярной массой 247 п.н.;

рестрикции ампликона гена каппа-казеина эндонуклеазой рестрикции Hindlll характеризовалась паттерном молекулярной массой 131 п.н.

Следовательно, генотип исследуемого животного составило по гену пролактина ВВ, по гену соматотропина VL, по гену диацилглицерол О-ацилтрансферазы АА и по гену каппа-казеина АА, что является признаком не высокой молочной продуктивности, рекомендуется данное животное содержать только для дальнейшего откорма и реализации на мясо.

Пример 2. Данным способом был проведен анализ одного образца от теленка месячного возраста черно-пестрой породы. Определены генотипы животного по отдельным локусам (пролактина (PRL), соматотропина (GH), диацилглицерол О-ацилтрансферазы (DGAT1) и каппа-казеина (CSN3)), сформировано заключение о дальнейшем использовании теленка.

Выделили ДНК из образца крови 200 мкл животного с применением набора реагентов «ДНК сорб-В» (ЦНИИ Эпидемиологии, Москва).

Выполнили амплификацию, используя реакционную смесь для следующего состава на одну пробу: деионизированная вода 11 мкл; 10-кратный ПЦР-буфер 2,5 мкл; смесь нуклеозид трифосфатов 2,5 мМ 2,5 мкл; раствор MgCl₂ 25 мМ 2,5 мкл; праймеры 10 пкМ по 0,5 мкл; Taq ДНК-полимераза (5Е/мкл) 0,5 мкл; ДНК исследуемого образца 5 мкл. Общий объем реакционной смеси составляет 25 мкл. Программа для амплификации была следующей: 1. 95°С 5 мин 1 цикл; 2. 94°С 30 с, отжиг праймеров 30 с. (56,6°С для гена PRL, 55,9°С для гена GH, 57,2°С для гена DGAT1, 55,9°С для гена CSN3), 72°С 30 с. 42 цикла; 3. 72°С 10 мин 1 цикл.

По результатам электрофореза в 3% агарозном геле установили наличие следующих ампликонов: ген пролактина около 160 п.н.; ген соматотропина около 180 п.н.; ген диацилглицерол О-ацилтрансферазы около 250 п.н.; ген каппа-казеина около 130 п.н.

Провели рестрикцию амплифицированного фрагмента гена PRL эндонуклеазой рестрикции RsaI, гена GH эндонуклеазой рестрикции AluI, гена DGAT1 эндонуклеазой рестрикции EaeI, гена CSN3 эндонуклеазой рестрикции Hindlll, в стандартных условиях.

Размеры полученных рестрикционных фрагментов определили методом электрофореза в 12%-ном полиакриламидном геле, которые составляли:

- рестрикции ампликона гена пролактина эндонуклеазой RsaI характеризовалась паттерном молекулярной массой 159 п.н.;

- рестрикции ампликона гена соматотропина эндонуклеазой AluI характеризовалась паттернами молекулярной массой 39 и 142 п.н.;

- рестрикции ампликона гена диацилглицерол О-ацилтрансферазы эндонуклеазой рестрикции EaeI характеризовалась паттернами молекулярной массой 84 и 163 п.н.;

рестрикции ампликона гена каппа-казеина эндонуклеазой рестрикции Hindlll характеризовалась паттернами молекулярной массой 62 и 69 п.н.

Следовательно, генотип исследуемого животного составило по гену пролактина АА, по гену соматотропина LL, по гену диацилглицерол О-ацилтрансферазы КК и по гену каппа-казеина ВВ, что является признаком хорошей молочной продуктивности, рекомендуется данное животное разводить для повышения качества молока, и получения потомства с высоким потенциалом по белковомолочности и жирномолочности.

Пример 3. Данным способом был проведен анализ одного образца семенного материала, применяемого для осеменения коров. Определены генотипы животного по отдельным локусам (пролактина (PRL), соматотропина (GH), диацилглицерол О-ацилтрансферазы (DGAT1) и каппа-казеина (CSN3)), сформировано заключение о дальнейшем использовании семенного материала.

Выделили ДНК из образца с применением набора реагентов «ДНК сорб-В» (ЦНИИ Эпидемиологии, Москва).

Выполнили амплификацию, используя реакционную смесь для следующего состава (на одну пробу): деионизированная вода 11 мкл; 10-кратный ПЦР-буфер 2,5 мкл; смесь нуклеозид трифосфатов 2,5 мМ 2,5 мкл; раствор MgCl₂ 25 мМ 2,5 мкл; праймеры 10 пкМ по 0,5 мкл; Taq ДНК-полимераза (5Е/мкл) 0,5 мкл; ДНК исследуемого образца 5 мкл. Общий объем реакционной смеси составляет 25 мкл. Программа для амплификации была следующей: 1. 95°С 5 мин 1 цикл; 2. 94°С 30 с, отжиг праймеров 30 с. (56,6°С для гена PRL, 55,9°С для гена GH, 57,2°С для гена DGAT1, 55,9°С для гена CSN3), 72°С 30 с. 42 цикла; 3. 72°С 10 мин 1 цикл.

По результатам электрофореза в 3% агарозном геле установили наличие следующих ампликонов: ген пролактина около 160 п.н.; ген соматотропина около 180 п.н.; ген диацилглицерол О-ацилтрансферазы около 250 п.н.; ген каппа-казеина около 130 п.н.

Провели рестрикцию амплифицированного фрагмента гена PRL эндонуклеазой рестрикции RsaI, гена GH эндонуклеазой рестрикции AluI, гена DGAT1 эндонуклеазой рестрикции EaeI, гена CSN3 эндонуклеазой рестрикции Hindlll, в стандартных условиях.

Размеры полученных рестрикционных фрагментов определили методом электрофореза в 12%-ном полиакриламидном геле, которые составляли:

- рестрикции ампликона гена пролактина эндонуклеазой RsaI характеризовалась паттернами молекулярной массой 61, 98 и 159 п.н.;

- рестрикции ампликона гена соматотропина эндонуклеазой AluI характеризовалась паттернами молекулярной массой 39 и 142 п.н.;

- рестрикции ампликона гена диацилглицерол О-ацилтрансферазы эндонуклеазой рестрикции EaeI характеризовалась паттерном молекулярной массой 247 п.н.;

рестрикции ампликона гена каппа-казеина эндонуклеазой рестрикции Hindlll характеризовалась паттернами молекулярной массой 62, 69 и 131 п.н.

Следовательно, генотип исследуемого животного составило по гену пролактина АВ, по гену соматотропина LL, по гену диацилглицерол О-ацилтрансферазы АА и по гену каппа-казеина АВ, что является признаком средней молочной продуктивности по удою, массовой доли белка и рекомендуется данный семенной материал заменить на материал с высоким потенциалом молочной продуктивности, и осеменять коров обновленным семенным материалом (желательный аллель по гену PRL В, по гену GH V, по гену DGAT1 К и по гену CSN3 В).

В результате практических исследований, направленных на апробацию разработанного способа определения полиморфизма генетических маркеров молочной продуктивности крупного рогатого скота, нами был получен обеспечиваемый предложенным способом технический результат, выраженный в специфичности разработанных праймеров по генам CSN3, DGAT1, PRL, GH и эффективной идентификации искомых генотипов.

Следовательно, они пригодны для использования в селекционно-племенной работе с молочным скотом в качестве генетических маркеров.

Список использованной литературы

1. R U2668829 С2, 2.10.2018 Усольцев К.В. и др. Способ проведения аллель-специфичной ПЦР для генотипирования крупного рогатого скота по аллельным вариантам АА, КК и АК гена фермента диацетил-глицерин О-ацетилтрансферазы для определения наследуемости жирномолочности.

2. Мартина Милухова, Михал Габор, Юрай Цандрак, Анна Траковицка, Кристина Цандракова. Ассоциация HindIII-полиморфизма гена каппа-казеина с выходом молока, жира и белка у голштинской породы крупного рогатого скота. АктаБиохим Пол. 2018; 65(3): 403-407; Сулимова Г.Э., Абани Азари М., Ростамзаде Ж., Мохаммад Абани М.Р., Лазебный О.Э. Аллельный полиморфизм гена каппа-казеина (CSN3) у российских пород крупного рогатого скота и его информативность как генетического маркера. Генетика. 2007 г., январь; 43(1): 88-95.

3. Удина И.Г., Туркова CO., Костюченко М.В., Лебедева Л.А., Сулимова Г.Е. Полиморфизм гена пролактина крупного рогатого скота: микросателлиты, PSR-RFLP. Генетика. 2001 апрель; 37(4): 511-516.

4. Кобаноглу О., Кул Э., Гуркан Э.К., Абачи С.Х., Чанкая С. Определение ассоциации полиморфизмов генов GHR/AluI с признаками молочной продуктивности у голштинского и джерсейского скота, выращиваемого в Турции. Арх Аним Порода. 2021 23 сентября; 64(2): 417-424.

5. Хэ С, Чу М.С, Цяо Л., Хэ Дж.Н., Ван П.К., Фэн Т., Ди Р., Цао Г.Л., Фанг Л., Ан Ю.Ф. Полиморфизмы гена STAT5A и их связь с признаками молочной продуктивности у коров голштинской породы. МолБиолРесп.2012 март; 39(3): 2901-2907.

6. RU 2317704 C1, 06.06.2006, Сулимова Галина Ефимовна и др. Способ определения генетического потенциала крупного рогатого скота по качеству молока.

Способ определения полиморфизма генетических маркеров молочной продуктивности крупного рогатого скота генов пролактина, соматотропина, каппа-казеина и диацилглицерол О-ацилтрансферазы, основанный на использовании ПЦР-ПДРФ метода, включающий в себя выделение ДНК, амплификацию с использованием специфичных праймеров, рестрикционный анализ полученных ампликонов с установлением генотипов отдельно по каждому гену, отличающийся тем, что в качестве праймеров используют праймеры, специфичные для фрагмента генов крупного рогатого скота: гена каппа-казеина FPCAS 5'-CATTGCTAGTGGTGAGCCTACAAGTA-3' и RPCAS 5'-CAGTTGAAGTAACTTGGACTGTGTTGAT-3', гена диацилглицерол О-ацилтрансферазы FPDGAT 5'-TGCCACTTGCCTCGGGACC-3' и RPDGAT 5'-CACAGGGTGGGGGCGAA-3', гена пролактина FPPRL 5'-GCTTGATTCTTGGGTTGCTGC-3' и RPPRL 5'-CAAATATCATCTCCATGCCTICCA-3', соматотропина FPGH 5'-AAGGACCTGGAGGAAGGCATC-3' и RPGH 5'-TCTCCGTCTTATGCAGGTCCTTC-3', анализ полученных ампликонов проводят HindIII-, EaeI-, RsaI- и AluI-рестриктазами соответственно, следовательно, данные праймеры пригодны для использования в селекционно-племенной работе с молочным скотом в качестве генетических маркеров.