Диметил 7-метил-2-(пирролидин-1-ил)-4-фенилпирроло[2,1-ƒ][1,2,4]триазин-5,6-дикарбоксилат и диметил 7-метил-2-(4-r1-фенил)-4-(4-r2-фенил)пирроло[2,1-ƒ][1,2,4]триазин-5,6-дикарбоксилаты, обладающие противовирусной активностью

Изобретение относится к области биологически активных соединений, обладающих противовирусным действием в отношении штамма вируса гриппа A/Puerto Rico/8/34 (H1N1) и представляющих собой диметил 7-метил-2-(пирролидин-1-ил)-4-фенилпирроло[2,1-ƒ][1,2,4]триазин-5,6-дикарбоксилат формулы (7)

и диметил 7-метил-2-(4-R¹-фенил)-4-(4-R²-фенил) пирроло[2,1-ƒ][1,2,4]триазин-5,6-дикарбоксилаты формулы (8)

,

где R¹ - Me и R² - Me; или R¹ - Cl и R² - Me; или R¹ - Н и R² - Cl. Техническим результатом является создание новых химических соединений азолоазиниевого ряда - диметил 7-метил-2-(пирролидин-1-ил)-4-фенилпирроло[2,1-ƒ][1,2,4]триазин-5,6-дикарбоксилата формулы (7) и диметил 7-метил-2-(4-R¹-фенил)-4-(4-R²-фенил)пирроло[2,1-ƒ][1,2,4]триазин-5,6-дикарбоксилатов формулы (8), обладающих выраженным противовирусным действием в отношении штамма вируса гриппа A/Puerto Rico/8/34 (H1N1). 2 н.п. ф-лы, 6 пр., 2 ил.

 

Изобретение относится к области биологически активных соединений, представляющих собой диметил 7-метил-2-(пирролидин-1-ил)-4-фенилпирроло[2,1-ƒ][1,2,4]триазин-5,6-дикарбоксилат и диметил 7-метил-2-(4-R¹-фенил)-4-(4-R²-фенил) пирроло[2,1-ƒ][1,2,4]триазин-5,6-дикарбоксилаты, обладающие противовирусным действием в отношении штамма вируса гриппа A/Puerto Rico/8/34 (H1N1).

Изобретение может найти применение в медицине и ветеринарии.

Грипп - острая высококонтактная респираторная вирусная инфекция, вызываемая вирусами гриппа типа А, В и С (семейство Orthomyxoviridae, род Influenzavirus). Данная инфекция имеет склонность к эпидемическому распространению и поражает все возрастные группы населения в различных географических условиях. Вирус типа А встречается чаще других и является причиной основных пандемий. Ежегодно регистрируется большое количество случаев тяжелого/ осложненного течения гриппа, а также летальных исходов, что связано с высокой заболеваемостью и вовлечением в эпидемический процесс лиц из групп риска неблагоприятного течения болезни [1].

Грипп и ОРВИ остаются практически неконтролируемыми заболеваниями из-за высокой антигенной вариабельности циркулирующих вирусов гриппа и гетерогенности возбудителей ОРВИ. Примером тому является возбудитель вируса гриппа A/H1N1, получивший название «свиной грипп» и циркулировавший в эпидемический сезон 2009-2010 гг. Пандемия гриппа A/H1N1/2009 выявила достаточно серьезные проблемы в лечении этой инфекции, а именно: отсутствие необходимого количества средств противовирусной терапии и ограничение возможности использования препаратов вследствие резистентности.

Существует три основные группы противогриппозных препаратов, обладающих доказанной клинической эффективностью и одобренных ВОЗ: блокаторы М₂-каналов - амантадин и ремантадин, ингибиторы вирусной нейраминидазы - осельтамивир (тамифлю) и занамивир (реленза) и ингибитор эндонуклеазной активности полимеразного комплекса вируса гриппа - балоксавира марбоксил (Ксофлюза).

Противовирусный эффект амантадина и ремантадина реализуется блокированием ионных М₂-каналов вируса гриппа А, что нарушает способность вируса проникать в клетку-мишень и высвобождать вирусный рибонуклеопротеид (не происходит лизис оболочки вируса). Таким образом, ингибируется важная стадия репликации вирусов - высвобождение вирусного генома. К недостаткам препаратов этой группы относятся узкий спектр действия (препараты активны против вирусов гриппа типа А, но не эффективны в отношении вирусов гриппа типа В), сравнительно высокая токсичность и быстрое формирование резистентности.

Мишенью препаратов второй группы является нейраминидаза - один из ключевых ферментов, участвующих в репликации вирусов. Они связываются с гидрофобным «карманом» активного центра нейраминидазы (сиалидазы) вирусов гриппа А и В и блокируют удаление остатков сиаловой кислоты с поверхности инфицированных клеток. В результате ингибирования нейраминидазы нарушается способность вирусов проникать в здоровые клетки, тормозится выход вирионов из инфицированных клеток и уменьшается их устойчивость к инактивирующему действию секрета дыхательных путей. Кроме того, ингибиторы нейраминидазы уменьшают выработку провоспалительных цитокинов, препятствуя тем самым развитию местной воспалительной реакции и ослабляя клинические проявления вирусной инфекции. К недостаткам препаратов второй группы следует отнести наличие многочисленных побочных эффектов (аллергические реакции, осложнения со стороны ЖКТ и неврологические расстройства) [2].

Балоксавира марбоксил блокирует вирусный фермент эндонуклеазу, осуществляющий процесс отщепления праймера от клеточных мРНК. Такая блокировка препятствует транскрипции вирусного генома и продукции вирусных белков. При анализе вирусов, выделенных от пациентов, получавших балоксавир, было обнаружено, что часть из них несет аминокислотную замену, приводящую к снижению чувствительности вируса к препарату в несколько десятков раз.

Учитывая длительность применения препаратов, относящихся к блокаторам М₂-белка и ингибиторам нейраминидазы, в клинической практике на протяжении 20-40 лет, а также появление новых мутаций вирусов, разработка эффективных препаратов для лечения и профилактики гриппа является одной из приоритетных задач современной медицинской химии и вирусологии.

В научной литературе описано противовирусное действие нуклеозидов пирроло [2,1-ƒ][1,2,4]триазинов в отношении различных РНК-вирусов: гепатита С, вируса Эбола, парагриппа, кори, эндемического паротита, иммунодефицита человека и норовируса [3].

Ремдесивир (GS-5734) (I), структурным фрагментом которого является пирроло[2,1-ƒ][1,2,4]триазин, разработанный компанией Gilead Sciences (Фостер-Сити, Калифорния, США) для борьбы с эпидемией болезни, вызванной вирусом Эбола в Западной Африке в середине 2010-х годов, продемонстрировал также активность в отношении вируса геморрагической лихорадки Марбург (MARV), SARS-coV и MERS-coV) [4, 5].

С-нуклеозид пирроло[2,1-ƒ][1,2,4]триазина II проявил ингибирующую активность против респираторно-синцитиального вируса (RSV) и соответствующую селективность по отношению к митохондриальным РНК- и ДНК-полимеразам [6].

В патенте компании Gilead Sciences описан нуклеотид пирроло[2,1-ƒ][1,2,4]триазина III для лечения инфекций, вызванных вирусом парагриппа семейства Paramyxoviridae [7].

Сущность изобретения

Техническим результатом данного изобретения является создание новых химических соединений азолоазиниевого ряда - диметил 7-метил-2-(пирролидин-1-ил)-4-фенилпирроло[2,1-ƒ][1,2,4]триазин-5,6-дикарбоксилата 7 и диметил 7-метил-2-(4-R¹-фенил)-4-(4-R²-фенил)пирроло[2,1-ƒ][1,2,4]триазин-5,6-дикарбоксилатов 8а-в, обладающих выраженным противовирусным действием в отношении штамма вируса гриппа A/Puerto Rico/8/34 (H1N1). Данные соединения могут быть использованы для создания отечественных лекарственных противовирусных препаратов.

Соединения 7 и 8а-в, способы их получения и физико-химические характеристики в литературе не описаны.

Сущность изобретения поясняется следующими материалами:

На Фиг. 1 представлена химическая схема синтеза заявляемых соединений 7, 8а-в.

На Фиг. 2 представлена таблица, в которой приведены данные о цитотоксичности и противовирусной активности соединений 7, 8а-в, ремантадина и рибавирина в отношении вируса гриппа A/Puerto Rico/8/34 (H1N1) в культуре клеток.

Способ получения диметил 7-метил-2-(пирролидин-1-ил)-4-фенилпирроло[2,1-ƒ][1,2,4]триазин-5,6-дикарбоксилата (7) и диметил 7-метил-2-(4-R¹-фенил)-4-(4-R²-фенил)пирроло[2,1-ƒ][1,2,4]триазин-5,6-дикарбоксилатов (8а-в).

Заявляемые соединения - диметил 7-метил-2-(пирролидин-1-ил)-4-фенилпирроло[2,1-ƒ][1,2,4]триазин-5,6-дикарбоксилат (7) и диметил 7-метил-2-(4-R¹-фенил)-4-(4-R²-фенил)пирроло[2,1-ƒ][1,2,4]триазин-5,6-дикарбоксилаты (8а-в), получены в две стадии. Синтез исходных соединений - 3,5-дизамещенных 1,2,4-триазинов (1 и 2) осуществлен по модифицированным методикам, описанным в литературе [8, 9].

Соответствующие 1,2,4-триазины 1,2а-в обрабатывают реагентом Меервейна (триэтилоксонием тетрафторборатом) и получают соответствующие N(1)-этил-1,2,4-триазиниевые соли 3, 4а-в. Далее из N(1)-этил-1,2,4-триазиниевых катионов 3, 4а-в под действием триэтиламина в среде абсолютного диоксана генерируют in situ илиды 5, 6а-в, которые вступают в реакцию 1,3-диполярного циклоприсоединения с диметилацетилендикарбоксилатом с образованием целевых соединений - пирроло[2,1-ƒ][1,2,4]триазинов 7 и 8а-в (Фигура 1).

Характеристики новых соединений приведены в примерах конкретного выполнения. Строение полученных соединений подтверждено ЯМР ¹Н спектрами, масс-спектрами и элементным анализом. Температуры плавления соединений определены на приборе Stuart SMP3 (Barloworld Scientific).

Спектры ЯМР ¹Н в ДМСО-d₆ и CDCl₃ зарегистрированы на приборе «Bruker DRX-400», в качестве внутреннего стандарта использовался Me₄Si. Химические сдвиги (δ) приведены в миллионных долях (м.д.), константы спин-спинового взаимодействия (J) - в Герцах.

Масс-спектры зарегистрированы на спектрометре «Varian МАТ-311А». Условия съемки: ускоряющее напряжение 3 кВ, энергия ионизирующих электронов 70 эВ, прямой ввод образца в источник.

Элементный анализ выполнен на автоматическом CHNS-O анализаторе РЕ 2400 серия II (Perkin Elmer).

Пример 1. Синтез диметил 7-метил-2-(пирролидин-1-ил)-4-фенилпирроло[2,1-ƒ][1,2,4]триазин-5,6-дикарбоксилата (7).

Стадия 1. Получение 1-этил-3-(пирролидин-1-ил)-5-фенил-1,2,4-триазиния тетрафторбората (3).

К раствору 1,3 г (6,63 ммоль) тетрафторбората триэтилоксония в 7,0 мл абсолютного дихлорэтана добавляют 1,0 г (4,42 ммоль) 3-(пирролидин-1-ил)-5-фенил-1,2,4-триазина (1). Реакционную массу перемешивают при комнатной температуре 3 ч, выпавший осадок отфильтровывают и перекристаллизовывают из абсолютного этанола. Получают 1-этил-3-(пирролидин-1-ил)-5-фенил-1,2,4-триазиния тетрафторборат (3) (1,15 г, 64%).

Стадия 2. Получение диметил 7-метил-2-(пирролидин-1-ил)-4-фенилпирроло[2,1-ƒ] [1,2,4]триазин-5,6-дикарбоксилата (7).

К суспензии, содержащей 806 мг (2,36 ммоль) 1-этил-3-(пирролидин-1-ил)-5-фенил-1,2,4-триазиния тетрафторбората (3) в 4 мл абсолютного диоксана и 402 мг (2,83 ммоль) диметилацетилендикарбоксилата, по каплям добавляют 250 мг (2,47 ммоль) триэтиламина. Реакционную массу выдерживают 2 суток при комнатной температуре.

Выпавший осадок отфильтровывают и перекристаллизовывают из водного этанола. Получают кристаллы желтого цвета диметил 7-метил-2-(пирролидин-1-ил)-4-фенилпирроло[2,1-ƒ][1,2,4]триазин-5,6-дикарбоксилата (7) (409 мг; 44%). Т пл. 126- 127°С.

Найдено, %: С 64,01; Н 5,73; N 14,17. Вычислено, % для C₂₁H₂₂N₄O₄ (М 394,43): С 63,95; Н 5,62; N, 14,20.

Спектр ЯМР ¹Н (ДМСО-d₆/CCl₄): 1.99 (уш.с, 4Н, (СН₂)₂); 2,65 (с, 3 Н, Me); 3.29 (с, 3Н, CO₂Me); 3.58 (уш.с, 4Н, N(CH₂)₂); 3.77 (с, 3Н, CO₂Me); 7.48-7.58 (м, 5Н, Ph).

Масс-спектр, m/z (%): 395 [М+1]⁺ (24), 394 [М]⁺ (100), 366 (15), 363 (10), 362 (9), 307 (10), 275 (24), 165 (13), 70 (52).

Пример 2. Синтез диметил 7-метил-2,4-ди(4-метилфенил)-[2,1-ƒ][1,2,4]триазин-5,6-дикарбоксилата (8а).

Стадия 1. Получение 1-этил-3,5-ди(4-метилфенил)-1,2,4-триазиния тетрафторбората (4а).

К раствору 1,3 г (6,89 ммоль) тетрафторбората триэтилоксония в 20,0 мл абсолютного дихлорэтана добавляют 1,2 г (4,60 ммоль) 3,5-ди(4-метилфенил)-1,2,4-триазина (2а). Реакционную массу перемешивают при комнатной температуре 4 ч, выпавший осадок отфильтровывают и перекристаллизовывают из абсолютного этанола. Получают 1-этил-3,5-ди(4-метилфенил)-1,2,4-триазиния тетрафторборат (4а) (1,21 г; 70%).

Стадия 2. Получение диметил 7-метил-2,4-ди(4-метилфенил)-пирроло[2,1-ƒ][1,2,4] триазин-5,6-дикарбоксилата (8а).

К суспензии, содержащей 1,2 г (3,18 ммоль) 1-этил-3,5-ди(4-метилфенил)-1,2,4-триазиния тетрафторбората (4а) в 5 мл абсолютного диоксана и 0,54 г (3,82 ммоль) диметилацетилендикарбоксилата, по каплям добавляют 0,35 г (3,50 ммоль) триэтиламина. Реакционную массу выдерживают 4 суток при комнатной температуре. Выпавший осадок отфильтровывают и перекристаллизовывают из этанола. Получают кристаллы желтого цвета диметил 7-метил-2,4-ди(4-метилфенил)-пирроло[2,1-ƒ][1,2,4]триазин-5,6-дикарбоксилата (8а) (247 мг, 18%). Т пл. 185-187°С.

Найдено, %: С 70,05; Н 5,47; N 9,64. Вычислено, % для C₂₅H₂₃N₃O₄ (М 429,48): С 69,92; Н 5,40; N 9,78.

Спектр ЯМР ¹Н (CDCl₃): 2.43 (с, 3Н, 4-Ме-С₆Н₄); 2.46 (с, 3Н, 4-Me-С₆Н₄); 2.91 (с, 3Н, Me); 3.48 (с, 3Н, CO₂Me); 3.90 (с, 3Н, CO₂Me); 7.29 (д, 2Н, 4-Ме-C₆H₄, J=8.0 Гц); 7.33 (д, 2Н, 4-Ме-C₆H₄, J=8.0 Гц); 7.69 (д, 2Н, 4-Ме-C₆H₄, J=8.0 Гц); 8.35 (д, 2Н, 4-Ме-C₆H₄, J=8.0 Гц).

Масс-спектр, m/z (%): 430 [M+l]⁺ (28), 429 [М]⁺ (100), 398 (12), 397 (18), 382 (10), 366 (28), 365 (15), 310 (18), 215 (24).

Пример 3. Синтез диметил 7-метил-4-(4-метилфенил)-2-(4-хлорфенил)-[2,1-ƒ][1,2,4]триазин-5,6-дикарбоксилата (8б).

Стадия 1. Получение 1-этил-5-(4-метилфенил)-3-(4-хлорфенил)-1,2,4-триазиния тетрафторбората (4б).

К раствору 1,52 г (7,99 ммоль) тетрафторбората триэтилоксония в 20,0 мл абсолютного дихлорэтана добавляют 1,5 г (5,32 ммоль) 5-(4-метилфенил)-3-(4-хлорфенил)-1,2,4-триазина (2б). Реакционную массу перемешивают при комнатной температуре 2 ч, выпавший осадок отфильтровывают и перекристаллизовывают из абсолютного этанола. Получают 1-этил-5-(4-метилфенил)-3-(4-хлорфенил)-1,2,4-триазиния тетрафторборат (4б) (1,61 г; 76%).

Стадия 2. Получение диметил 7-метил-4-(4-метилфенил)-2-(4-хлорфенил)-[2,1-ƒ][1,2,4]триазин-5,6-дикарбоксилата (8б).

К суспензии, содержащей 0,9 г (2,26 ммоль) 1-этил-5-(4-метилфенил)-3-(4-хлорфенил)-1,2,4-триазиния тетрафторбората (4б) в 4 мл абсолютного диоксана и 0,39 г (2,72 ммоль) диметилацетилендикарбоксилата, по каплям добавляют 0,25 г (2,49 ммоль) триэтиламина. Реакционную массу выдерживают 4 суток при комнатной температуре. Выпавший осадок отфильтровывают и перекристаллизовывают из этанола. Получают кристаллы желтого цвета диметил 7-метил-4-(4-метилфенил)-2-(4-хлорфенил)-[2,1-ƒ][1,2,4]триазин-5,6-дикарбоксилата (8б) (338 мг; 33%). Т пл.=167-168°С.

Найдено, %: С 64,11; Н 4,53; N 9.14. Вычислено, % для C₂₄H₂₀ClN₃O₄ (М 449,90): С 64,07; Н 4,48; N 9,34.

Спектр ЯМР ¹Н (CDCl₃): 2.46 (с, 3Н, 4-Me-С₆Н₄); 2.91 (с, 3Н, Me); 3.49 (с, 3Н, CO₂Me); 3.91 (с, 3Н, CO₂Me); 7.34 (д, 2Н, 4-Ме-C₆H₄, J=8.0 Гц); 7.46 (д, 2Н, 4-Cl-C₆H₄, J=8.8 Гц); 7.69 (д, 2Н, 4-Ме-C₆H₄, J=8.0 Гц); 8.41 (д, 2Н, 4-Cl-C₆H₄, J=8.8 Гц).

Масс-спектр, m/z (%): 451 [М+2]⁺ (38), 450 (28), 449 [М]⁺(100), 418 (14), 417 (22), 386 (32), 385 (21), 330 (16), 225 (17).

Пример 4. Синтез диметил 7-метил-2-фенил-4-(4-хлорфенил)-[2,1-ƒ][1,2,4]триазин-5,6-дикарбоксилата (8в).

Стадия 1. Получение 1-этил-3-фенил-5-(4-хлорфенил)-1,2,4-триазиния тетрафторбората (4в).

К раствору 1,4 г (7,28 ммоль) тетрафторбората триэтилоксония в 15,0 мл абсолютного дихлорэтана добавляют 1,5 г (5,60 ммоль) 3-фенил-5-(4-хлорфенил)-1,2,4-триазина (2в). Реакционную массу перемешивают при комнатной температуре 2 ч, выпавший осадок отфильтровывают и перекристаллизовывают из абсолютного этанола. Получают 1-этил-3-фенил-5-(4-хлорфенил)-1,2,4-триазиния тетрафторборат (4в) (1,35 г; 63%).

Стадия 2. Получение диметил 7-метил-2-фенил-4-(4-хлорфенил)-[2,1-ƒ][1,2,4]триазин-5,6-дикарбоксилата (8в).

К суспензии, содержащей 0,81 г (2,11 ммоль) 1-этил-3-фенил-5-(4-хлорфенил)-1,2,4-триазиния тетрафторбората (4в) в 4 мл абсолютного диоксана и 0,36 г (2,53 ммоль) диметилацетилендикарбоксилата, по каплям добавляют 0,24 г (2,32 ммоль) триэтиламина. Реакционную массу выдерживают 2 суток при комнатной температуре. Выпавший осадок отфильтровывают и перекристаллизовывают из этанола. Получают кристаллы желтого цвета диметил 7-метил-2-фенил-4-(4-хлорфенил)-[2,1-ƒ][1,2,4]триазин-5,6-дикарбоксилата (8в) (202 мг; 22%). Т пл. 140-142°С.

Найдено, %: С 63,42; Н 4,23; N 9,57. Вычислено, % для C₂₃H₁₈ClN₃O₄ (М 435,87): С 63,38; Н 4,16; N9,64.

Спектр ЯМР ¹Н (DMSO-d₆/CCl₄): 2.86 (с, 3Н, Me); 3.48 (с, 3Н, CO₂Me); 3.85 (с, 3Н, CO₂Me); 7.48-7.51 (м, 3Н, Ph); 7.59 (д, 2Н, 4-Cl-C₆H₄, J=8.4 Гц); 7.72 (д, 2Н, 4-Cl-C₆H₄, J=8.4 Гц); 8.35-8.39 (м, 2Н, Ph).

Масс-спектр, m/z (%): 438 (9), 436 (27), 435 (100), 405 (28), 404 (31), 403 (68), 372 (19), 316 (25), 218 (16), 186(16).

Оценка противовирусного действия диметил 7-метил-2-(пирролидин-1-ил)-4-фенилпирроло[2,1-ƒ][1,2,4]триазин-5,6-дикарбоксилата (7) и диметил 7-метил-2-(4-R¹-фенил)-4-(4-R²-фенил)пирроло[2,1-ƒ][1,2,4]триазин-5,6-дикарбоксилатов (8а-в)

Токсичность и противовирусная активность соединений были изучены на культуре клеток в отношении вируса гриппа A/Puerto Rico/8/34 (H1N1). В результате тестирования были рассчитаны 50% цитотоксическая доза (СС₅₀), 50% эффективная доза (IC₅₀) и индекс селективности (SI). В качестве препаратов сравнения использованы известные противовирусные препараты различного механизма действия - ремантадин и рибавирин.

Пример 5. Изучение токсичности заявляемых соединений

Токсичность заявляемых соединений была изучена в отношении клеток MDCK (клетки почки собаки). Клетки MDCK сеяли в 96-луночные планшеты и культивировали при 36°С в среде MEM с добавлением 10% сыворотки крупного рогатого скота в атмосфере 5% CO₂ до состояния монослоя. Из исследуемых соединений готовили маточные растворы концентрации 10 мг/мл в диметилсульфоксиде, после чего готовили серию трехкратных разведений в среде MEM от 300 до 3,7 мкг/мл. Растворенные соединения вносили в лунки планшетов и инкубировали 3 суток при 36°С. По истечении этого срока клетки промывали 2 раза по 5 минут фосфатно-солевым буфером, и количество живых клеток оценивали при помощи микротетразолиевого теста (МТТ). С этой целью в лунки планшетов добавляли по 100 мкл раствора (5 мг/мл) 3-(4,5-диметилтиазолил-2)-2,5-дифенилтетразолия бромида (ICN Biochemicals Inc., Aurora, Ohio) на физиологическом растворе. Клетки инкубировали при 36°С в атмосфере 5% CO₂ в течение 2 часов и промывали 5 минут фосфатно-солевым буфером. Осадок растворяли в 100 мкл на лунку ДМСО, после чего оптическую плотность в лунках планшетов измеряли на многофункциональном ридере Thermo Multiskan FC (Thermo Fisher Scientific, USA) при длине волны 540 нм. По результатам теста для каждого соединения определяли 50% цитотоксическую концентрацию (СС₅₀), т.е. концентрацию соединения, вызывающую гибель 50% клеток в культуре. Результаты приведены в Фигуре 2. Полученные данные свидетельствуют об относительно низкой цитотоксичности заявленных соединений.

Пример 6. Изучение противовирусной активности заявляемых соединений

Оценку противовирусной активности соединений проводили при помощи теста на снижение степени цитопатического действия. В опытах использовали вирус гриппа A/Puerto Rico/8/34 (H1N1). Изучаемые вещества в диапазоне концентраций 300-3,7 мкг/мл вносили к клеткам в лунках планшета, инкубировали в течение 1 ч, затем клетки заражали вирусом в дозе 0,01 TCID₅₀ на клетку. Клетки инкубировали в течение 72 ч, после чего проводили анализ выживаемости клеток при помощи МТТ-теста, как описано выше. На основании полученных данных для каждого соединения рассчитывали 50% ингибирующую концентрацию (IC₅₀), т.е. концентрацию, которая на 50% снижала степень вирусной деструкции клеток, и индекс селективности SI - отношение 50% цитотоксической концентрации СС₅₀ к 50% ингибирующей концентрацию IC₅₀.

В результате исследования ингибирования репродукции вируса гриппа A/Puerto Rico/8/34 (H1N1) для заявляемых соединений 7 и 8а-в были получены индексы селективности, в ряде случаев превышающие показатели препаратов сравнения - ремантадина и рибавирина в аналогичных условиях (Фигура 2). Полученные данные свидетельствуют о высокой вирусингибирующей активности заявленных соединений.

Список литературы

1. Цветков В.В., Голобоков Г.С.Ингибиторы нейраминидазы - золотой стандарт противовирусной терапии гриппа типа А. Медицинский совет. 2017, №4, 25-29.

2. Зарубаев В.В., Анфимов П.М., Штро А.А., Гаршинина А.В., Мелешкина И.А., Карпинская Л.А., Козелецкая К.Н., Киселев О.И. Разработка новых препаратов против вируса гриппа на основе синтетических и природных соединений. Вопросы вирусологии. 2012, 57(6), 30-36.

3. Ott G.R., Favor D.A. Pyrrolotriazines: From C-nucleoside stokinases and back again, the remark able journey of a versatilenitrogenheterocycle. Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 2017, 27 (18), 4238-4246. DOI: 10.1016/j.bmcl.2017.07.073

4. Kouznetsov V.V. COVID-19 treatment: Much research and testing, but far, few magic bullets against SARS-CoV-2 coronavirus. European Journal of Medicinal Chemistry. 2020, 203, 112647. DOI: 10.1016/j.ejmech.2020.112647

5. Li Q., Groaz E., Rocha-Pereira J., Neyts J., Herdewijn P. Anti-norovirus activity of C7-modified 4-amino-pyrrolo[2,1-ƒ][1,2,4]triazine C-nucleosides. European Journal of Medicinal Chemistry. 2020, 195, 112198. DOI: 10.1016/j.ejmech.2020.112198

6. Clarke M.O., Mackman R., Byun D., Hui H., Barauskas O., Birkus G., Chun B.-K., Doerffler E., Feng J., Karki K., Lee G., Perron M., Siegel D., Swaminathan S., Lee W. Discovery of β-d-2'-deoxy-2'-α-fluoro-4'-α-cyano-5-aza-7,9-dideaza adenosine as a potent nucleoside inhibitor of respiratory syncytial virus with excellent selectivity over mitochondrial RNA and DNA polymerases. J Med. Chem. Lett. 2015, 25, 2484-2487. DOI: 10.1016/j.bmcl.2015.04.073

7. Mackman R.L., Parrish J.P., Ray A.S., Theodore D.A. Methods and compounds for treating paramyxoviridae virus infections. 2012; PCT Int. Appl. WO 2012012776.

8. Lalezari I., Shafiee A., Yalpani M. Selective synthesis of 5- or 6-phenyl-3-alkylarnino-as-triazines. Journal of Heterocyclic Chemistry, 1971, 8, 689-691. DOI: 10.1002/jhet.5570080430

9. Tang D., Wang J., Wu P., Guo X., Li J.-H., Yang S., Chen B.-H. Synthesis of 1,2,4-triazine derivatives via [4+2] domino annulation reactions in one pot. RSC Advances, 2016, 6 (15), 12514-12518. DOI: 10.1039/c5ra26638f

1. Диметил 7-метил-2-(пирролидин-1-ил)-4-фенилпирроло[2,1-ƒ][1,2,4]триазин-5,6-дикарбоксилат формулы (7)

,

обладающий противовирусным действием в отношении штамма вируса гриппа A/Puerto Rico/8/34 (H1N1).

2. Диметил 7-метил-2-(4-R¹-фенил)-4-(4-R²-фенил)пирроло[2,1-ƒ][1,2,4]триазин-5,6-дикарбоксилаты общей формулы (8)

,

где R¹ - Me и R² - Me; или R¹ - Cl и R² - Me; или R¹ - Н и R² - Cl,

обладающие противовирусным действием в отношении штамма вируса гриппа A/Puerto Rico/8/34 (H1N1).