Способ диагностики бруцеллеза с использованием роз-бенгал пробы с мышечной тканью животных, положительно реагирующих на бруцеллез

Авторы патента:

G01N33/53 - иммунологический анализ, анализ биоспецифического связывания, материалы для этого (препараты для терапевтических целей, содержащие антигены или антитела,A61K; гептены вообще, см. соответствующие рубрики в классе C07; пептиды, например протеины, вообще C07K)

G01N33/12 - мяса, рыбы

Владельцы патента RU 2792090:

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Саратовский государственный университет генетики, биотехнологии и инженерии имени Н.И. Вавилова" (RU)

Изобретение относится к ветеринарии и биотехнологии. Предложен способ использования экспресс-метода для выявления специфической контаминации, вызванной возбудителем бруцеллеза, заключающийся в нанесении на небольшие срезы мяса коров, больных бруцеллезом и предварительно не привитых вакцинами против бруцеллеза, одной капли роз-бенгал теста, зажатием его в компрессориуме, выдерживанием его 2, 5 и 10 мин и последующим учетом агглютинации. Изобретение обеспечивает расширение арсенала способов мониторинга благополучия по бруцеллезу при проведении ветеринарно-санитарной экспертизы продукции скотоводства. 3 ил.

Изобретение относится к ветеринарии, а именно к диагностике бруцеллеза.

Прототипом изобретения является способ диагностики бруцеллеза в молоке коров с использованием Роз-бенгал пробы с добавлением калия фосфорнокислого двухзамещенного трехводного на физиологическом растворе [8].

Способ диагностики бруцеллеза в молоке коров заключается в том, что в диагностическую пластинку с луночками вносят 0,05-0,06 мл свежего или консервированного формалином молока, в которую затем добавляют 0,015 мл 8-9%-ного раствора калия фосфорнокислого двухзамещенного трехводного на физиологическом растворе. После тщательного перемешивания компонентов реакции пластины покачивают в течение 4-5 минут. При положительном результате наблюдается аггютинация. Оценку результатов реакции проводят по общепринятой схеме. Контролем служит заведомо отрицательная и положительная проба молока на бруцеллез.

Еще одним прототипом изобретения является способ диагностики бруцеллеза с использованием Роз-бенгал пробы в мясе коров убитых через 1-1,5 месяца после двукратного введения (инфицирования) бруцелл из вакцинного штамма В. abortus 82 [7]. От туш убойных животных в области головы, шеи, грудинной и задней части, а также от сердца отбирали кусочки мышц и фарш из них для лабораторного анализа. Контролем служили продукты неинфицированных животных [1]. Из отобранных мышц мяса делали срезы в продольном направлении (как при исследовании на трихинеллез) величиной с пшеничное зерно, помещали их на стекло компрессориума и раздавливали с помощью покровного стекла, наносили по одной небольшой капле роз-бенгал теста, накрывали верхним стеклом компрессориума и раздавливали с помощью верхнего стекла и винтов до максимального отделения жидкости. Через 3-7 минут при комнатной температуре смесь жидкости вокруг кусочка исследовали с помощью трихинеллоскопа или микроскопа. Учет реакции мышечной жидкости и роз-бенгал теста повторяли с отжатой мясной жидкостью разных групп мышц. Результат считали положительным при наличии выраженной агглютинации, сомнительным при помутнении жидкости, отрицательным - если в смеси никаких изменений не выявляли.

Недостатком прототипов изобретения является то обстоятельство, что Роз-бенгал тест проводили с мясом коров убитых через 1-1,5 месяца после двукратного введения (инфицирования) бруцелл из вакцинного штамма В. abortus 82. Соответственно в нашей работе проведены исследования на положительно реагирующих на бруцеллез коровах, что реально дает преимущество данному эксперименту.

Технической задачей изобретения является экспресс диагностика бруцеллеза крупного рогатого скота с использованием роз-бенгал пробы с мышечной тканью животных положительно реагирующих на бруцеллез для обнаружения продукции, полученной от больных бруцеллезом животных, при ветеринарно-санитарной экспертизе на рынках и других предприятиях, где производится убой животных.

Поставленная задача решается способом нанесения на небольшие срезы мяса коров, одной капли роз-бенгал теста, зажатием его в компрессориуме, выдерживанием в течение 2, 5 и 10 минут и последующим учетом реакции агглютинации.

Сущность изобретения заключается в следующем: из образцов мяса положительно реагирующих на бруцеллез коров производили срезы мышц в продольном направлении размером с пшеничное зерно (горошину) с использованием ножниц, помещали их на стекло комприссориума. Затем на поверхность каждого среза наносили по одной капле роз-бенгал теста, раздавливали путем накрывания верхнего стекла и закручивали гайками комприссориума с целью отделения жидкости. Затем жидкость с использованием пипеток помещали в лунки, на планшет, учитывали реакцию через 2, 5 и 10 минут. При этом сравнивали с контрольной сывороткой негативной для серологических реакций. Результат считали положительным - при выраженной агглютинации, сомнительным - при помутнении жидкости, отрицательным - при отсутствии изменений в жидкости.

Спустя 2 минуты во всех образцах (кусочки печени, мышцы диафрагмы, мышцы шеи) приготовленных из туш мяса с положительным результатом на бруцеллез, происходила агглютинация. Наблюдением за продуктами реакции установлено повышение интенсивности образования комочков в течение 10 минут.

В контрольных образцах жидкость оставалась прозрачной без примеси комочков на протяжении всего опыта. В этой связи, нами был сделан вывод о том, что данный метод с использованием роз-бенгал теста позволяет подтвердить поставленный диагноз на бруцеллез, и может быть рекомендован для ускоренной оценки и выявления, продукции полученной от инфицированных животных. Спустя трое суток после охлаждения исследуемых туш, результаты иммунологического тестирования роз-бенгал пробой с мышечными тканями были также положительными, однако, отмечено снижение интенсивности специфического взаимодействия и образования агглютининов.

Таким образом, данный метод позволяет проводить мониторинг благополучия по бруцеллезу и снижает вероятность попадания мяса от больных животных в торговую сеть и, следовательно, риск заражения бруцеллезом людей. Рекомендуем использовать данный метод на рынках, ярмарках, таможенных терминалах при проведении ветеринарно-санитарной экспертизы для повышения биологической безопасности и получения качественной продукции скотоводства [2, 3, 4, 5, 6].

Существенными признаками является то, что:

1. использовать роз-бенгал пробу с мышечной тканью можно в качестве экспресс-метода для специфической скрининговой индикации;

2. для проведения роз-бенгал теста можно использовать небольшие кусочки различных групп мышц: головы, шеи, грудинной и задней части туши, а также сердца.

На фигуре 1 изображено появление хлопьев в виде агглютинации на дне лунки в исследуемых образцах печени, мышц диафрагмы, мышц шеи.

На фигуре 2 в области нижней челюсти головы коровы изображена буква «б», которая обозначает, что голова получена от животного, положительно реагирующего на бруцеллез серологическими методами исследования.

На фигуре 3 изображено взятие мышц с различных частей туши коровы на исследование методом роз-бенгал пробы.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ:

1. Меры личной безопасности работников, осуществляющих убой больных бруцеллезом животных / С.Ю. Веселовский, В.А. Агольцов Т.М. Гиро, Р.И. Ахмиров // 21-ая Международная научно-практическая конференция, посвященная памяти Василия Матвеевича Горбатова «Инновационно-технологическое развитие пищевой промышленности - тенденции, стратегии, вызовы» Москва, - 2018. - С. 47 - 48.

2. Практическое пособие по мониторингу бруцеллеза, туберкулеза, паратуберкулеза и лейкоза крупного рогатого скота: организационно-хозяйственные, ветеринарно-санитарные и зоогигиенические аспекты профилактики и ликвидации этих инфекций / под ред. академика РАН М.И. Гулюкина / Агентство творческих технологий. - Москва, 2014. - 74 с.

3. Предупреждение эпидемической проекции зоонозов в условиях регионального продовольственного рынка / А.В. Пашкин, В.В. Сочнев, А.В. Усенков и др. // Главные эпизоотологические параметры популяции животных. Сборник научных трудов ФГБОУ ВПО НГСХА, представленных на 2-й сессии Международной научно-практической конференции. Под редакцией В.В. Сочнева - 2015. - С. 146-154.

4. Сайлаубаев, С.Ж. Эффективные в условиях Казахстана противобруцеллезные мероприятия у крупного рогатого скота [Текст] / С.Ж. Сайлаубаев, В.И. Воробьев, А.С. Димова [и др.] // Методические рекомендации - Усть-Каменогорск, 2016. - 19 с.

5. Сенченко, Б.С. Ветеринарно-санитарная экспертиза продуктов животного и растительного происхождения. Серия «Технология пищевых производств»- Ростов-на-Дону: Издательский центр «МарТ», 2001. - 704 с.

6. Сенченко, Б.С.Руководство по ветеринарно-санитарной экспертизе продуктов животного и растительного происхождения. / Б.С. Сенченко, А.Н. Трошин, A.M. Кавунник // Краснодар: Изд-во КГАУ. - 1998. - Т. 1. - 672 с.

7. Серегин, И.К. Экспресс-метод выявления мяса животных, больных бруцеллезом, на рынках и продовольственных ярмарках / И.К. Серегин, М.В. Туганова, С.Н. Золотухин // Ветеринария сельскохозяйственных животных - 2014. - №9. - С. 42-50.

8. Способ диагностики бруцеллеза SU 1697827 патент. Опубликовано: 1994.03.15 Патентообладатели: Государственный комитет по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР.

Способ использования экспресс-метода для выявления специфической контаминации, вызванной возбудителем бруцеллеза, заключающийся в нанесении на небольшие срезы мяса коров, больных бруцеллезом и предварительно не привитых вакцинами против бруцеллеза, одной капли роз-бенгал теста, зажатием его в компрессориуме, выдерживанием его 2, 5 и 10 мин и последующим учетом агглютинации.

Изобретение относится к области ветеринарной экспертизы, а именно к методу исследования молока овец и коз на бруцеллез. Способ экспресс-диагностики бруцеллеза в овечьем и козьем молоке включает постановку кольцевой реакции, предусматривающей использование серологических пробирок Флоринского для контрольных проб в дозе 2 мл молока от заведомо здорового животного и испытываемых проб смеси молока от здорового животного в количестве 2 мл с позитивной бруцеллезной сывороткой, помещение их в термостат или водяную баню при температуре 37-38°С, выдерживание при комнатной температуре и визуальный учет результатов реакции, причем предварительно, сырое молоко проверяют на кислотность, если кислотность козьего молока соответствует 14°Т, а кислотность овечьего молока - 25±1°Т, то проводят постановку кольцевой реакции.

Способ выравнивания параметров каналов регистрации многоканального нанопроводного детектора // 2791439

Изобретение относится к электронной технике, а более конкретно к области «Измерение электрических и магнитных величин». Устройство состоит из многоканального нанобиосенсора, каждый канал которого состоит из нанопроводного полевого транзистора, преобразователя ток-напряжение, сумматора 1, умножителя, суматора 2, АЦП, ЦАП, микропроцессора и ПЭВМ.

Способ прогнозирования возможного рецидива аденокарциномы поджелудочной железы после ее резекции или воздействия методами локальной деструкции на примере радиочастотной абляции // 2790982

В настоящем изобретении представлен способ прогнозирования возможного локального рецидива протоковой аденокарциномы поджелудочной железы после ее резекции, в том числе при использовании методов локальной деструкции, путем заселения бесклеточного эндогенно продуцированного внеклеточного матрикса опухолевыми клетками.

Способ прогнозирования активности заболевания у пациентов с ревматоидным артритом // 2790525

Изобретение относится к ревматологии, а именно к способу прогнозирования активности заболевания у пациентов с ревматоидным артритом (РА). Для этого исследуют уровень чемерина в сыворотке крови.

Способ оценки риска неблагоприятного исхода острого инфаркта миокарда у больных сахарным диабетом 2 типа // 2790520

Изобретение относится к медицине, а именно к эндокринологии и кардиологии, и может быть использовано для оценки риска неблагоприятного исхода острого инфаркта миокарда у больных сахарным диабетом 2 типа. Проводят клиническое обследование пациента, определение факторов иммунного ответа: С-реактивного белка, интерлейкинов-6, -10, фактора некроза опухоли-α.

Способ ранней диагностики онкологического заболевания // 2790290

Изобретение относится к области молекулярной биологии. Описан способ ранней диагностики онкологического заболевания на основе нанопроводной биосенсорной детекции с применением нанопроводного чипа (НП-чипа).

Способ прогнозирования энтеральной недостаточности при перитоните // 2790193

Изобретение относится к области медицины, ветеринарии и биологии и касается прогнозирования энтеральной недостаточности при перитоните. Осуществляют забор образца ткани кишечника и его иммуноморфологическое окрашивание, для этого образец фиксируют, заливают в парафин, изготавливают срезы, проводят их депарафинизацию и демаскирование антигенов.

Способ неинвазивного определения уровней продукции активных форм кислорода адипоцитами эпикардиальной жировой ткани у пациентов с ишемической болезнью сердца и коронарным атеросклерозом // 2789592

Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии, и описывает способ неинвазивного определения уровней продукции активных форм кислорода адипоцитами эпикардиальной жировой ткани (ЭЖТ) у пациентов с ишемической болезнью сердца и коронарным атеросклерозом. Способ характеризуется тем, что у пациента производится забор крови и определяются содержание в сыворотке крови адипонектина и значения постпрандиальных уровней глюкозы и инсулина, после чего рассчитывается уровень продукции активных форм кислорода адипоцитами ЭЖТ (АФК ЭЖТ) с использованием модели множественной линейной регрессии.

Способ высокочувствительного конкурентного иммунохроматографического анализа // 2789545

Изобретение относится к аналитической биохимии и пищевой биотехнологии, в частности к способу конкурентного иммунохроматографического анализа, в основе которого лежит сочетание двух иммунных взаимодействий антител, меченных окрашенной меткой. По данному изобретению вместо нанесенного на мембрану антигенного препарата предполагается использование связанного с белком структурного аналога антигена, способного связываться с антителами, но с худшей аффинностью, чем сам антиген.

Способ прогнозирования репродуктивных потерь в виде неразвивающейся беременности и самопроизвольного выкидыша у женщин с угрожающим ранним выкидышем // 2789258

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и гинекологии. В периферической венозной крови беременных женщин с угрожающим ранним выкидышем в сроке 5 - 12 недель до начала сохраняющей терапии определяют содержание CD163+ клеток в гейте альтернативно активированных моноцитов CD14+CD16++ и при его значении равном 15,6% или более прогнозируют репродуктивные потери в виде неразвивающейся беременности и самопроизвольного выкидыша в сроке до 22 недель беременности.

Способ быстрой оценки качества замороженных субпродуктов // 2787191

Изобретение относится к пищевой промышленности. Способ оценки качества замороженных субпродуктов характеризуется тем, что анализируемую пробу массой 1-2 г помещают в стеклянный пробоноситель, размещенный на нижней крышке ячейки детектирования электронного носа на основе двух стабилизированных сенсоров, на один из которых нанесена предварительно фаза карбоксилированных многослойных углеродных нанотрубок массой 2-3 мкг из толуольной суспензии, на другой нанесена смешенная фаза карбоксилированных многослойных углеродных нанотрубок и нитрата оксида циркония в соотношении 1:1 общей массой 4-6 мкг из толуольной суспензии, запускают программное обеспечение прибора и закрывают нижнюю крышку ячейки с пробой, проводят измерение в течение 60-80 секунд, при этом фиксируют в программном обеспечении прибора максимальные частоты колебаний сенсоров над пробой, качество пробы оценивают по параметру k, рассчитываемому как отношение величин максимальных сигналов двух сенсоров k = ΔFmax(1)/ΔFmax(2), где ΔFmax(1) – максимальная частота колебаний над первым сенсором, Гц, ΔFmax(2) – максимальная частота колебаний над вторым сенсором, Гц, при этом проба соответствует качеству, если k = (0,45 0,05), сомнительного качества, если k = (0,35 0,04), и не соответствует качеству вследствие порчи или болезни животного на момент убоя, если k = (0,25 0,05).