Способ выделения escher1chia coli и bakterium citrobacter из молока и молочных продуктов

 

28367 6

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Соаз Советских

Социалистических

Республик

Зависимое от авт. свидетельства ¹

Кл 421 5/10

3 аявлено 09.Х.1969 (№ 1369900/28-13) с присоединением заявки Юь

Приорите i

Опубликовано 06.Х.1970. Бюллетень № 31

Дата опубликования описания 26.1.1971

МПК G 01n 33/04

УДК 637.127.6 (088.8) Номитет по делам изобретений и открытий

;.ои Совете Министров

СССР

Автор изобретения

Заявитель

В. М. Карташова

Всесоюзный научно-исследовательский институт ветеринарной санитарии

СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ ESCHERICHIA COLI И BAKTERIUM

CITROBACTER ИЗ МОЛОКА И МОЛОЧНЪ1Х ПРОДУКТОВ

Изобретение относится к области микробиологических исследований, а именно к способам выделений Escherichia coli u Bacterium

citrobacter из молока, молочных продуктов, смывов с доильной аппаратуры и молочной посуды.

Известный способ для определения колитптра молока и молочных продуктов, применяемый в настоящее время, заключается в следующем. Посев исследуемых проб на среду

Кесслера (выращивание 24 час), последующий пересев со среды Кесслера на среду Эндо—

24 час, затем высев подозрительных по цвету и форме колоний на мясо-пептонный бульон (МПБ) — 3 час, с МПБ в случае чистой культуры (после микроскопии) — высев на бульон с лактозой и индикатором Андрадэ и .в пробирки со средой Симмонса или Козера

24 час.

В случае роста на МПБ неоднородной культуры, что часто бывает при «двойных», но монолитных внешне колониях на среде Эндо, результат исследования задерживается еще на одни сутки для выделения грамм-отрицательных палочек.

Однако известный способ имеет ряд существенных недостатков, заключающихся, вопервых, в том, что для индикации Escheria coli требуется минимум 3 — 4 суток. Длительность такого способа несовместима с исследованиями молока и молочных продуктов, которые являются скоропортящимися. Во-вторых, трудоемкость способа. заключающаяся в многоэтапности с большим количеством питательных сред (пять), мешает широкому использованию его в практических и научно-производственных лабораториях. И, в-третьих, при этом способе не возможно дифференцировать Escherichia coli от Bacterium citrobacter

10 в случае их одновременного роста на МПБ.

По предлагаемому способу выращивание посевного материала осуществляют на питательной среде, состоящей нз пептона, лактозы, 15 поваренной соли, алкиларилсульфоната, бромкрезолпурпура, метиленовой сини и дистиллированной воды, предпочтительно в течение 4—

20 час при температуре 42,5 — 43,5 С, а идентификацию посевов ведут по изменению цвета

20 среды в ярко-зеленую окраску (положительная реакция).

Для дифференциации Eschericha coli от Bacterium citrobacter из посевов с положительной реакцией осуществляют высев штрихом на

25 секторе чашек Петри со средой Симмонса с последующим выращиванием культур при температуре 37 С.

Все это способствует ускорению и удеше,лению, а также повышению чувствительности

30 способа.

283676

Составитель М. Андреева

Редактор Е. С. Братчикова

Корректор T. А. Джаманкулова

Заказ 3649 15 Тираж 480 Подписное

ЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР

Москва, Ж-35 Раушская наб., д. 4!5

Типография, пр. Сапунова, 2

Предлагаемый способ заключается в следующем.

Исследуемые пробы разводят стерильной водой 1: 10 и выше, после чего высевают на элективную и дефференцирующую среду, состоящую пз пептона, лактозы, поваренной соли, алкиларилсульфоната, бромкрезолпурпура, метиленовой сини и дистиллированной воды.

Пробирки с посевами ставят в термостат при 42,5 — 43,5 С на 4 — 20 час в зависимосги от бактериального загрязнения исследуемых проб. При наличии Escherichia coli от 100 ìëí. до 10 тыс. бактерий в 1 нл рост наблюдается через 4 — 8 час. На среде растут и изменяют цвет только бактерии Escherichia coli u Bacteпшп citrobacter.

У ч е т р е а к ц и и. Если .в засеянных пробирках цвет среды не изменился, то это свидетельствует оо отсутствии Escherichia coli и Bacterium citrobacter. Изменение цвета среды в ярко-зеленый говорит о наличии Escherichia coli u Bacterium citrobacter или одной из них.

При необходимости дифференциации Escherichia coli or Bacterium citrobacter из пробирок с измененным цветом производят посев на среду Симмонса, которую накануне разливают тонким слоем в чашки Петри и подсушивают.

Каждую чашку делят не более чем на четыре сектора. Пробирки с посевами, предназначенными для высева, перемешивают вращением между ладонями и высевают платиновой петлей (петлю освобождают от излишней средыкапли встряхиванием) штрихом строго по сектору. Чашки с посевами инкубируют 18

20 час при 37 С. При росте Bacterium citrobacter среда из оливково-зеленой становится ярко-синей.Escherichia coli на среде Симмонса не растут.

При смешанной культуре (т. е. в пробирке одновременно растут Bacterium citrobacter u

Escherichia со11) на секторе наблюдаются редкие колонии (не сплошной рост по штриху) с изменением цвета среды также в ярко-синий (это говорит о наличии Bacterium citrobacter) и обязательно на этом же секторе участки без роста и изменения цвета среды (это говорит

5 о наличии Escherichia cali). Таким образом, предлагаемый способ является быстрым, дешевым, он прост в выполнении и высокочувствителен, так как позволяет сократить сроки исследования с 3 — 4 суток до 18 — 48 час в

10 зависимости от количества бактерий Escherichia coli u Bacterium citrobacter в исследуемых пробах и и обнаруживать их до 1 микробной клетки в 1 г продукта.

Предмет изобретения

1. Способ выделения Escherichia cali и Bacterium citrobacter из молока и молочных продуктов, предусматривающий разведение исследуемой пробы, посев и выращивание на пи20 тательной среде посевного материала при термостатировании с последующей идентификацией посевов, отли тющий ся тем, что, с целью ускорения и удешевления способа, а также повышения его чувствительности, .выращива25 ние посевного материала осуществляют на питательной среде, состоящей из пептона, лактозы, поваренной соли, алкиларилсульфоната, бромкрезолпурпура, метиленовой сини и дистиллированной воды, а идентификацию посе30 вов ведут по изменению цвета среды в яркозеленую окраску (положительная, реакция) .

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что, с целью дифференциации Escherichia coli от

Bacterium citroaacter, из посевов с по.пожи35 тельной реакцией осуществляют высев штри«ом на секторы чашек Петри со средой Симмонса с последующим выращиванием культур при температуре 37 С.

3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что

40 в процессе выращивания посевного материала температуру поддерживают равной 42,5

43,5 С, а выращивание осуществляют в течение 4 — 20 час.