Способ определения лимонной кислоты в крови
ОПИСА ИЕ
ИЗОБРЕТЕН ИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
Сове Соввтвкил
Социвлиотичвскик
Рворублик
Зависимое от авт. свидетельства ¹
Заявлено 20.111.1969 (№ 1313847/31-16) с присоединением заявки Мо
Приоритет
Опубликовано 04.11.1971. Бюллетень ¹ 7
Дата опубликования описания ЗО.III.1971
МПК G Oln 21/02
G 01n 33/16 коиитвт ло долее иэоорвтеиий и открытий лри Соввтв Министров
СССР
УДК 612 115 3(088 8) Авторы изобретения
К. Ф. Шольц и М. И. Николаева-Ромберг
Ордена Ленина институт биохимии им. А. П Баха
Заявитель
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЛИМОННОЙ КИСЛОТЫ В КРОВИ
Изобретение относится к биохимии.
Известный способ определения лимонной кислоты в крови с использованием реакции лимонной кислоты с пиридином в уксусном ангидриде, недостаточно чувствителен, а при использовании для концентрирования растворов экстракции и лиофилизации весьма трудоемок.
Целью изобретения является повышение чувствительности способа и упрощение методики его проведения.
Для достижения этой цели проводят флуорометрическое определение продукта реакции лимонной кислоты с пиридином в уксусном ангидриде при возбуждении флуоресценции в области 420 лтмк и флуоресценции при 455 ммк.
В процессе определения 0,3 л1л крови смешивают с 1,0 мл 0,1 М оксалата аммония, добавляют 0,2 лл 15%-ной метафосфорной кислоты и центрифугируют при 4000 об, лин в течение " лшн. Полученный экстракт используют для анализа. В три толстостенные пробирки помещают 0,5 мл 2%-ной метафосфорной кислоты, 0,5 лл стандартного раствора цитрата (0,03мМ) в 2%-ной метафосфорной кислотеп
0,5 лл экстракта крови. Затем в пробирки вносят по 4 ял перегнанного уксусного ангидрида, прогревают 10 мин на водяной бане при 60 С и охлаждают в воде со льдом в течение 5 мин.
К охлажденным растворам добавляют по 1 л л чсрегнанного сухого пиридина, перемешивают, снова охлаждают до 0 — 2 С и флуорометрируют при возбуждении синим фильтром (УФС) и флуоресценции прп 455 л лк и постоянной температуре. Затем растворы выдерживают в водяной бане прп 60 С в течение 40 лин, охлаждают в воде со льдом и производят замеры флуоресценции при температуре О+-0,2 C.
Определение количества нитрата производят по формуле
ЛФ,. — ЛФ„ где ЛФо — разность интенсивностей флуоресценции до и после нагревания пробы с пнридином при наличии в пробе только метафосфорной кислоты (эта величина, как правило, равна нулю);
ЛФ,; — разность интенсивностей флуоресценцпп в контрольной пробе с
0,03 мМ раствора цптрата;
ЛФ„ — разность интенсивностей флуоресценцпп до и после нагревания с пирпдпном в псследуемои пробе.
Ошибка определения составляет рнмерно
4%, чувствительность метода прн использовании прибора ЭФ-3 около 0,02 л кг лл.
Предмет изобретения
Способ определения лимонной кислоты в
30 крови с использованием реакции лимонной
295065
Составитель В. А. Таратута
Редактор Т. Н. Каранова Техред Л. Я. Левина
Корректоры: М. Коробова и А. Абрамова
Заказ 729/6 Изд. № 311 Тираж 473 Подписное
ЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР
Москва, 7К-35, Раушская наб., д. 4/5
Типография, пр. Сапунова, 2 кислоты с пиридином в уксусном ангидриде, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности способа и упрощения его, проводят флуорометрическое определение продукта реакции лимонной кислоты с пиридином в уксусном ангидриде при возбуждении флуоресценции в области 420 и 455 лмк.
