Способ определения внутриклеточной локализации

Авторы патента:

G01N1/44 - Исследование или анализ материалов путем определения их химических или физических свойств (разделение материалов вообще B01D,B01J,B03,B07; аппараты, полностью охватываемые каким-либо подклассом, см. в соответствующем подклассе, например B01L; измерение или испытание с помощью ферментов или микроорганизмов C12M,C12Q; исследование грунта основания на стройплощадке E02D 1/00;мониторинговые или диагностические устройства для оборудования для обработки выхлопных газов F01N 11/00; определение изменений влажности при компенсационных измерениях других переменных величин или для коррекции показаний приборов при изменении влажности, см. G01D или соответствующий подкласс, относящийся к измеряемой величине; испытание

G01N1/38 - Исследование или анализ материалов путем определения их химических или физических свойств (разделение материалов вообще B01D,B01J,B03,B07; аппараты, полностью охватываемые каким-либо подклассом, см. в соответствующем подклассе, например B01L; измерение или испытание с помощью ферментов или микроорганизмов C12M,C12Q; исследование грунта основания на стройплощадке E02D 1/00;мониторинговые или диагностические устройства для оборудования для обработки выхлопных газов F01N 11/00; определение изменений влажности при компенсационных измерениях других переменных величин или для коррекции показаний приборов при изменении влажности, см. G01D или соответствующий подкласс, относящийся к измеряемой величине; испытание

33I,226

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДНИЛЬСТВУ

Союа Советских

Социалистических

Республик

Зависимое от авт. свидетельства №вЂ”

Заявлено 26.Х.1970 (№ 1492693i31-16) с присоединением заявки №вЂ”

Приоритет

М. Кл. G 01п 1/28 мотаитвт по делавт иаобретений и открытий при Совете Министров

СССР

Опубликовано 07Л111.1972. Бюллетень Л 9

Дата опубликования описания 14.IV.1972

1е

+8 ...,.вЂ”;. (ОЯМ); !

Автор изобретения

Д. Ф. Глузман

Киевский научно-исследовательский институт экспериментальной и клинической онкологии

Заявитель

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВНУТРИКЛЕТОЧНОЙ ЛОКАЛИЗАЦИИ

ЭКЗОНУКЛЕАЗ

Предмет изобретения

Изобретение относится к области гистохимии, в частности к способам определения внутриклеточной локализации неспецифических экзонуклеаз.

Экзонуклеаза (фосфодиэстраза 1) осуществляет гидролиз поли-, олиго-, динуклеотидов и динуклеозидофосфатов, вызывая разрыв фосфодиэфирной связи и последовательное отщепление нуклеозид-5-монофосфатов с конца цепи со свооодной 3-гидроксильной группой.

Известен способ определения внутриклеточной локализации экзонуклеазы путем фиксации исследуемого объекта в парах формалина, промывки в дистиллированной воде и инкубации в среде, содержащей субстрат, буфер, раствор нитрата свинца и дистиллированную воду.

Однако известный способ недостаточно точен и не дает специфичности индикации.

В предложенном способе в отличие от известного в качестве субстрата в инкубационную среду вносят никотинамидадениндинуклеотид.

Пример. Для определения внутриклеточной локализации экзонуклеазы (фосфоднэстеразы 1) свежеприготовленные и высушенные на воздухе мазки крови и костного мозга крыс фиксируют в парах 100 с -ного нейтрального формалина в течение 3 мик и помещают в инкубационную смесь, содержащую 5 мг нико2 тпнамидадениндинуклеотида, 0,05 мг змеиного яда, 10 мл (0,2 моль) трис-солянокислого буфера (рН 7,5), 0,125 мл (0,4 моль) раствора нитрата свинца и дистиллированную воду

5 (до 25 мл).

Мазки инкубируют в термостате при 37 С в течение 3 час, промывают дистиллированной водой и погружают на 2 мик в разведенный сульфид аммония. После промывания мазки

10 сушат н микроскопируют. Б процессе обработки мазков внутриклеточная экзонуклеаза (фосфодиэстераза 1) вызывает гидролиз никотинамидадениндинуклеотида, содержащегося R инкубационной смеси. Образующийся при

15 этом аденозин-5-монофосфат специфически расщепляется нуклеотидазой, являющейся действующим началом диализированного и лиофилизированного змеиного яда, и остатки фосфорной кислоты связываются ионами свин20 ца. Полученные соединения затем переводятся в сульфид свинца, который обнаруживается при микроскоппровании. Места его отложения отражают локализацию активности экзонуклеазы (фосфодиэстеразы 1).

Способ определения внутриклеточной локализации экзонуклеаз, например фосфодиэстезо разы 1, путем фиксации исследуемого объекта

3.31276

Составитель 3. Вальковская

Текред 3. Тараненко

Корректор Е. Зимина

Редактор Д. Пинчук

Заказ 9!3, 8 Изд. № 347 Тираж 448 Подписное

ЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР

Москва, 7К-35, Раушская наб., д. 4/5

Типография, пр. Сапунова, 2 в парах формалина, промывки в дистиллированной воде, инкубации объекта в среде, содержащей субстрат исследуемого фермента, отличающийся тем, что, с целью повышения специфичности индикации и точности локализации фермента, в качестве субстрата в инкубационную среду вносят никотчнамидадениндинуклеотид.