1сесоюзная wtekthq-texh^hechar

 

О П И С А Н И Е 372263

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Соннвпнстическнх

Республик

Зависимое от авт. свидетельства №

Заявлено 12.I I I.1971 (№ 1633619/31-16) с присоединением заявки №

Приоритет

Опубликовано 01.!!!.1973. Бюллетень № 13

Дата опубликования описания 14Х1.1973

М. Кл. С 121с 7/00

Комитет по лелем изобретений и открмтий при Спеете Министров

СССР

УДК 616-022.6:616.988.23 (088.8) ВСЕСОЮЗНЛЯ

ВПКДО-ЕХБЯЧЕ . КАЯ!.-,1, - тт! -.Q т =".,о

Авторы изобретения

Г. И, Фокина, 3. Ф. Зубова и Ю. 3. Гендон

Заявитель

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИГЕНА ВИРУСА ПОЛИОМИЕЛИТА

ДЛЯ РЕАКЦИИ СВЯЗЫВАНИЯ КОМПЛЕМЕНТА

Изобретение относится к производству вирусных препаратов.

Известны способы получения антигена вируса полиомиелита для реакции связывания комплемента путем выращивания вируса на культуре ткани обезьян с последующей его инактивацией гидроксиламином и лиофилизацией. Однако указанные способы не обеспечивают получения вируссодержащих суспензий с высокими титрами в производственных условиях.

Целью изобретения является получение вируссодержащих суспензий с высокими титрами. Эта цель достигается тем, что в качестве субстрата для выращивания вируса, например, штамма Бруненд тип 1, штамма MEF типа 2, штамма Сокетт тип 3, используют культуру клеток миндалины обезьяны.

Вирус полиомиелита вносят в культуру клеток в дозе 0,1 — 1,0 БОЕ на клетку и инкубируют в течение 24 — 48 час при 36 — 37 С.

Для .получения антигена вируса полиомиелита для реакции связывания комплемента в соответствии с изобретением клетки МИО (перевиваемая линия клеток миндалин ы обезьян) выращивают при 37 С с использованием питательной среды 199 с 10% сыворотки крупного рогатого скота и 0,02 ед. инсулина до образования полного монослоя. Перед заражением вирусом культуральную среду удаляют и инфицируют клетки вирусом полиомиелита (например, тип 1 штамм Бруненд, тип 2 штамм

MEF, тип 3 штамм Сокетт) из расчета 0,1 — 1,0

БОЕ на клетку. После 1 часа адсорбции при

5 комнатной температуре в матрицы добавляют поддерживающую среду (среда Игла, содержащая 2% нормальной крысиной сыворотки и

0,3% глюкозы, по 100 лтл в 1 л матрац). Инфицированные культуры инкубируют при 36—

10 37 С в течение 24 — 48 час до дегенерации не менее 90% клеток. Затем клетки отделяют от стекла и центрифугируют вируссодержащую жидкость в течение 20 лин при 2000 об/миль

Осадок клеток ресуспендируют в О,1 объема

15 надосадочной жидкости и подвергают трехкратному замораживанию при минус 20 С и оттаиванию в холодной воде. Полученный препарат осветляют центрифугированпем (25 мин, 3000 об/л1ин) и добавляют к надоса20 дочной жидкости антибиотики (по 200 ед/мл пенициллина и стрептомицина). Для инактивации к 5,5 частям антигена добавляют 1 часть

6,5 М раствора солянокислого гидроксиламина рН 9,0 при инактивации вирусов типа 1 и 3 и

25 рН 7,5 при инактивации вируса типа 2. После инкубирования в течение 48 час при комнатной температуре инактивированный антиген диализуют против фосфатного буферного раствора (на 100 мл антигена 10 л буферного рас30 твора), осветляют центрпфугированпем 372263

Составитель В. Таратута

Текред 3. Тараненко

Корректоры: В. Петрова и Л. Луковцева

Редактор T. Каранова

Заказ 1608712 Изд. Кз 334 Тираж 467 Подписное

ЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР

Москва, 7К-35, Раушская наб., д. 4/5

Типография, пр. Сапунова, 2 (20 мин при 3000 об!мин) и разливают в ампулы типа БЦЖ по 2 мл, после чего подвергают лиофильному высушиванию.

Предмет изобретения

1. Способ получения антигена вируса полиомиелита для реакции связывания комплемента путем выращивания вируса на культуре ткани обезьян с последующей его инактивацией и лиофилизацией, отличающийся тем, что, с целью получения вируссодержащих суспензий с высокими титрами, в качестве субстрата для выращивания вируса, например штамм

Бруненд типа 1, штамм MEF тип 2, Сокетт тип 3 используют культуру клеток миндалины обезьяны

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что вирус полиомиелита вносят в культуру клеток в дозе 0,1 — 1,0 БОЕ на клетку и инкубируют

10 в течение 24 — 48 час при 36 — 37 С.