Штамм n 1707 "армения-98" вируса ящура типа a для изготовления диагностических и вакцинных препаратов

 

Изобретение предназначено для изготовления диагностических и вакцинных препаратов. Производственный штамм 1707 "Армения-98" получен путем многократных последовательных пассажей на чувствительных гетеро- и гомологичных культурах клеток. Штамм депонирован в Коллекции микроорганизмов ВГНКИ под регистрационным 1707 "Армения-98-ДЕП". Штамм 1707 "Армения-98" отличается как от производственных, так и от ранее выделенных эпизоотических штаммов вируса ящура типа А. Вирус штамма 1707 "Армения-98" репродуцируется в чувствительных культурах клеток. В течение 20-24 ч инкубирования накапливается до 7,0 - 8,0 lg ТТЦ₅₀/мл. При массированном заражении вызывает ЦПД через 4 ч. Сохраняет исходные характеристики при пассировании в культурах клеток в течение 10 пассажей. Новый производственный штамм вируса ящура типа А обладает высокой биологической, антигенной и иммуногенной активностью и пригоден для изготовления средств специфической профилактики и диагностики ящура типа А, гомологичных эпизоотическому вирусу, циркулирующему в странах Закавказья и Ближнего Востока. 2 ил., 8 табл.

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии и может быть использовано при изготовлении средств для специфической профилактики и диагностики ящура типа A.

Ящур - это острое контагиозное вирусное заболевание парнокопытных животных, проявляющееся лихорадкой, везикулярными (афтозными) поражениями слизистой оболочки ротовой полости, бесшерстных участков кожи головы, вымени, венчика, межкопытной щели и сопровождающееся нарушением движения. Для него характерна тенденция к широкому распространению и эпизоотическому течению. Болезнь сопровождается большими потерями молока, мяса и других видов животноводческой продукции, затрудняет коммерческие операции и хозяйственную деятельность. Многолетний опыт показывает, что наличие эндемичного ящура снижает доходы в молочном и мясном животноводстве на 30-40%.

Вирус ящура относится к роду афтовирусов, семейству пикорнавирусов. Он включает 7 иммунологических типов и большое количество подтипов.

Хорошо известной особенностью возбудителя ящура является антигенная изменчивость штаммов в пределах одного серотипа, происходящая в различные временные промежутки, на разных территориях, зависящая от видового состава восприимчивого поголовья, его иммунного статуса и множества других факторов. Считается, что основной причиной антигенной изменчивости является изменение аминокислотной последовательности в полипептидах вирусных белков, составляющих капсид вириона. Практически такие антигенные изменения могут выражаться от незначительных отличий между штаммами, улавливаемых только с помощью тонких методов молекулярного анализа, до появления совершенно отличающихся штаммов, требующих использования новых средств для серологической диагностики и специфической профилактики болезни, вызываемой этими штаммами.

Известны штаммы вируса ящура типа A, использовавшиеся в качестве производственных на территории СССР в течение последних 35 лет. К ним относятся следующие штаммы: A₇ N 103, выделенный в 1962 г. в Куйбышевской области; A_т N 2, выделенный в 1965 г. в Таджикской ССР; A N 717/73, выделенный в Ставропольском крае в 1973 г.

Указанные штаммы использовались для получения диагностикумов и противоящурных вакцин, применявшихся в различных регионах страны. Однако после ликвидации ящура, вызываемого близкими в антигенном отношении штаммами вируса, они были сняты с производства и в настоящее время поддерживаются лишь в музее штаммов ВНИИ защиты животных [1, 2, 3, 4, 5].

Наиболее близким предлагаемому изобретению по совокупности существенных признаков является штамм N 550 вируса ящура A₂₂, выделенный в 1964 году в Азербайджане и используемый в Российской Федерации в качестве производственного при изготовлении средств специфической профилактики и диагностики, применяемых на всей территории России и в странах-членах СНГ [6].

Штамм N 550 вируса ящура A₂₂ имеет следующие характеристики, представленные в таблице 1.

Недостатки данного штамма состоят в его низкой биологической, антигенной и иммуногенной активности.

Об этом свидетельствует тот факт, что в 1998 году в Республике Армения были отмечены очаги заболевания ящуром типа A крупного рогатого скота, иммунизированного бивалентной вакциной AO, в состав которой входит антиген из производственного штамма A₂₂ N 550. Однако вакцина не обеспечила удовлетворительной защиты иммунизированных животных. Лабораторными исследованиями во ВНИИЗЖ афтозного материала, выделенного от больных животных, был установлен вирус ящура типа A, имеющий антигенные отличия от штамма A₂₂ N 550 в реакции связывания комплемента и реакции серонейтрализации вируса. Это свидетельствовало о несоответствии используемых средств специфической профилактики и диагностики ящура типа A, используемых Россией и странами СНГ, эпизоотическому вирусу, циркулирующему в 1998 году в странах Закавказья и Ближнего Востока (Турция, Иран).

В задачу создания настоящего изобретения входило получение нового производственного штамма вируса ящура типа A, обладающего высокой биологической, антигенной и иммуногенной активностью в нативном виде и после инактивации и обеспечивающего изготовление диагностических и вакцинных препаратов, гомологичных эпизоотическому вирусу, появившемуся в странах Закавказья и Ближнего Востока.

Технический результат от использования предлагаемого изобретения заключается в получении нового производственного штамма вируса ящура типа А, обладающего высокой биологической, антигенной и иммуногенной активностью и пригодного для изготовления средств специфической профилактики и диагностики ящура типа А, гомологичных эпизоотическому вирусу, циркулирующему в странах Закавказья и Ближнего Востока.

Указанный технической результат достигнут получением штамма N 1707 "Армения-98" вируса ящура типа A. Штамм A N 1707 "Армения-98" является новым, ранее неизвестным. Исходный вирус для получения штамма A N 1707 "Армения-98" выделен 01.08.98 г. от больных коров в хозяйстве Охчик Амассийского района Республики Армения. Производственный штамма A N 1707 "Армения-98" получен путем многократных последовательных пассажей на чувствительных гетеро- и гомологичных культурах клеток.

Полученный штамм депонирован в Коллекции микроорганизмов Всероссийского научно-исследовательского института контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов Министерства сельского хозяйства и продовольствия Российский Федерации (ВГНКИ) 12.11.98 г. под регистрационным номером 1707 "Армения-98-ДЕП".

По сравнению с прототипом штамм A N 1707 "Армения-98" обладает более высокой биологической, антигенной и иммуногенной активностью в нативном виде и после инактивации. Экспериментально подтверждена его возможность использования для приготовления диагностических препаратов и инактивированной вакцины. Штамм N 1707 "Армения-98" вируса ящура типа A обеспечивает получение диагностических препаратов, позволяющих серологическую диагностику изолятов вируса ящура типа A, вызывающего вспышки заболевания в последние годы в странах Закавказья и Ближнего Востока, и противоящурной инактивированной вакцины, создающей защиту восприимчивых животных против указанного возбудителя заболевания.

Сущность изобретения пояснена на графических материалах, где на: фиг. 1 представлена аминокислотная последовательность белка VP₁ штамма N 1707 "Армения-98" вируса ящура типа A (^* - аминокислота не определена); фиг. 2 изображена дендрограмма, отражающая структурное сходство участка гена VP₁ штамма 1707 "Армения-98" вируса ящура типа A с аналогичными фрагментами геномов других штаммов вируса ящура типа A.

Штамм A N 1707 "Армения-98" вируса ящура характеризуется следующими признаками и свойствами.

Морфологические свойства Штамм A N 1707 "Армения-98" относится к семейству Picornaviridae, роду Aphtovirus, серотипу A и обладает морфологическими признаками, характерными для возбудителя ящура: форма вириона икосаэдрическая, размер 23-25 нм. Вирион состоит из молекулы РНК, заключенной в белковую оболочку. Белковая оболочка состоит из 32 капсомеров, расположенных в кубической симметрии.

Антигенные свойства По своим антигенным свойствам штамм A N 1707 "Армения-98" относится к серотипу A. Вирус стабильно нейтрализуется гомологичной антисывороткой. Вирус не проявляет гемагглютинирующей активности. У переболевших животных в сыворотке крови образуются антитела, выявляемые в РДП, ИФА, PH. При вакцинации КРС вакциной из инактивированного вируса индуцирует образование специфических антител, выявляемых в ИФА, РДП, PH. При гипериммунизации морских свинок концентрированным инактивированным вирусом индуцирует образование вирусспецифических антител, выявляемых в РСК в разведении 1: 256 и в ИФА в разведении 1: 6000.

При определении антигенного соответствия штамма A N 1707 "Армения-98" с производственными штаммами и полевыми изолятами вируса ящура типа A, выделенными на протяжении 1962-1998 гг. на территории стран СНГ и ряда других государств мира, было проведено сравнительное исследование первичной структуры гена и белка VP1. Сравнительный анализ установленных структур штамма A N 1707 "Армения-98" и эпизоотических изолятов, выделенных в последние годы в Турции и Иране (A-Иран-96, A-Турция-97, A-Турция-98) показал, что оба изолята A-Армения-98 идентичны между собой и отличаются от изолятов A-Турция-97, A-Турция-98 и A-Иран-96 по трем, четырем и семи нуклеотидным основаниям соответственно. Замена в 156 кодоне является значимой и приводит к изменению треонина на аланин (фиг. 1).

Филогенетические взаимоотношения исследованных изолятов с ранее изученными штаммами, выделенными в разных странах мира за три последних десятилетия, указаны на дендрограмме (фиг.2). Установлено, что исследованные изоляты существенно отличаются от всех выделенных ранее изолятов, в том числе и от вируса подтипа A₂₂, куда относится используемый в настоящее время для производства средств диагностики и специфической профилактики производственный штамма A₂₂ N 550.

Антигенное родство вируса ящура A N 1707 "Армения-98" с соответствующими производственными и ранее выделенными штаммами на территории Турции и Ирана изучено в РСК. Полученные результаты представлены в таблице 2.

Как свидетельствуют данные, представленные в таблице 2, вирус A N 1707 "Армения-98" отличается как от производственных, так и от ранее выделенных эпизоотических штаммов.

Аналогичное изучение антигенного родства выделенного штамма было проведено в реакции нейтрализации, где в качестве иммунных использовались сыворотки реконвалесцентов КРС на вирусы штаммов A N 1707 "Армения-98", A-Иран-87 и A₂₂ N 550.

Результаты этих исследований представлены в таблице 3.

Приведенные в таблице 3 данные подтверждают антигенное отличие выделенного штамма от производственного штамма A₂₂ N 550 и эпизоотического штамма, выделенного в Иране в 1987 году.

Биотехнологические характеристики Штамм A N 1707 "Армения-98" проявляет высокую биологическую, антигенную и иммуногенную активность как в нативном виде, так и после инактивации. Штамм предназначен для использования в качестве сырья для получения диагностических сывороток и антигенных препаратов, а также изготовления инактивированной противоящурной вакцины. Вирус штамма A N 1707 репродуцируется в монослойных культурах первично-трипсинизированной культуры клеток почки свиньи (СП), перевиваемых культурах клеток почки сибирского горного козерога (ПСГК-30), IB-RS-2, ВНК-21 и в течение 20-24 часов инкубирования накапливается до 7,0-8,0 lg ТЦД₅₀/мл. При массированном заражении вызывает ЦПД через 4 часа.

После 3-4 пассажей инкубирования накапливается до 6,0-8,0 lg ТЦД₅₀/мл. Сохраняет исходные характеристики при пассировании в чувствительных биологических системах в течение 10 пассажей.

Хемо- и генотаксономическая характеристика Штамм A N 1707 "Армения-98" является РНК-содержащим вирусом с мол.массой 7 · 10⁶Д.

Нуклеиновая кислота представлена одноцепочечной линейной молекулой мол. массой 2,8 · 10⁸ МД. Вирион имеет белковую оболочку, состоящую из четырех основных белков VP1, VP2, VP3 и VP4. Липопротеидная оболочка отсутствует.

Основным антигенным белком является VP1. В вирионе содержится приблизительно 31,5% РНК и 68,5% белка. Вирионная РНК является инфекционной и участвует в образовании белков-предшественников в инфицированных клетках. Предшественники в свою очередь расщепляются с образованием более стабильных структурных и неструктурных полипептидов вируса. Из 6 неструктурных полипептидов, накапливающихся в инфицированных клетках, один (V_pб6a) является РНК-зависимой РНК-полимеразой, участвующей в репликации РНК новых вирионов.

Проведено определение первичной структуры участка генома вируса с помощью ПЦР и сиквенса. Результаты исследований представлены на фиг.1 и 2. Сравнительный анализ показал, что штамм отличается от штамма A-Турция-98, A-Турция-97 и A-Иран-96 по трем, четырем и семи нуклеотидным основаниям соответственно.

Установлено, что армянский изолят вируса ящура имеет наибольшую степень гомологии первичной структуры гена и белка VP1 с изолятами A-Турция-98. Две замены (в 67 и 174 кодонах) из трех, отличающих вирус ящура A-Армения-98 и A-Турция-98, являются молчащими, тогда как замена в 156 кодоне является значимой и приводит к изменению треонина на аланин. Исследуемый изолят существенно (18% различий) отличается от производственного штамма A₂₂ N 550 и других вариантов и штаммов вируса ящура A₅, A₁₀, A₁₂, A₂₄, A N 1640 Узбекистан-91 и др.

Физические свойства Масса вириона - 8,4 · 10^-18 г. Коэффициент седиментации -146S в градиенте сахарозы. Плавучая плотность - 1,45 г/мл.

Устойчивость к внешним факторам Вирус штамма A N 1707 "Армения-98" устойчив к эфиру, хлороформу, фреону, ацетону и др. органическим растворителям и детергентам. Наиболее стабилен при pH 7,0- 7,6. Сдвиги pH как в кислую, так и в щелочную сторону ведут к инактивации вируса. Чувствителен к формальдегиду, УФ-облучению, γ -облучению, высоким температурам.

Дополнительные признаки и свойства Иммуногенная активность - иммуногенен в составе инактивированной вакцины.

Реактогенность - реактогенными свойствами не обладает.

Патогенность - патогенен для парнокопытных животных, новорожденных мышат, морских свинок.

Вирулентность - вирулентен для естественно-восприимчивых животных при контактном, аэрозольном и парентеральном заражении.

Стабильность - сохраняет исходные биологические свойства при пассировании в чувствительных биологических системах в течение 10 пассажей.

Исходя из полученных данных, можно утверждать, что штамм A N 1707 "Армения-98" по антигенному и иммунологическому спектрам является оригинальным, в таксономическом отношении новым, ранее неизвестным вариантом вируса ящура типа A.

Для снижения его эпизоотической опасности необходимо обеспечить своевременную лабораторную диагностику и вакцинопрофилактику вновь возникающих очагов болезни, для чего необходимы высокоактивные и специфичные антительные и антигенные диагностикумы и вакцина, полученные с использованием данного штамма в качестве производственного.

По мнению заявителя, предлагаемый штамм соответствует условиям патентоспособности "новизна" и "изобретательский уровень".

Сущность предлагаемого изобретения пояснена примерами его исполнения.

Пример 1
Получение штамма
Штамм вируса ящура A N 1707 "Армения-98" был изолирован из полевого материала, поступившего во ВНИИЗЖ в виде эпителия афт от КРС, подозреваемого в заболевании ящуром, при проведении лабораторной диагностики этого заболевания и дифференциации его от других везикулярных болезней. При изоляции вируса использован комплекс биологических, вирусологических и биохимических методов, предусмотренных [7].

Биологические и вирусологические методы включали интрадермолингвальную инокуляцию материала полевого изолята КРС (1 пассаж) и последующую адаптацию вируса, выделенного от заболевшего животного, к культурам первично-трипсинизированных и перевиваемых линий клеток. Были использованы культуры клеток СП, ПСГК-30, IB- RS-2 и ВНК-21. Первичные и перевиваемые культуры клеток для постановки биопробы выращивали на соответствующих питательных средах во флаконах емкостью 50-100 мл, отмывали от ростовой среды и заражали 10% суспензией афтозного материала (множественность заражения составляла 1-10 ТЦД₅₀ на клетку), приготовленной в растворе Хенкса с 0,5% ГЛА и антибиотиками по стандартной рецептуре. Для удаления микрофлоры и балластных клеточных компонентов суспензию обрабатывали хлороформом в отношении 1:10. После 30-минутного инкубирования при 37^oC во флаконы вносили по 5-10 мл поддерживающей среды и инкубировали при 37^oC до появления ЦПД вируса. При наличии ЦПД (округление клеток, повышение их оптической плотности, дегенерация и отделение клеток от стекла) флаконы подвергали замораживанию-оттаиванию, очистке клеточной взвеси хлороформом и центрифугированию при 3000g в течение 15 мин. Полученный вируссодержащий материал использовали для последующих пассажей и исследования в РСК на наличие вирусного антигена, при этом использовали набор коммерческих типоспецифических сывороток и сыворотки, хранящиеся в музее штаммов ВНИИЗЖ.

Результаты адаптации вируса к различным клеточным культурам представлены в таблице 4.

Данные, приведенные в таблице 4, свидетельствуют о хорошей адаптационной активности штамма A N 1707 к использованным клеточным культурам.

Изолированный с помощью перечисленных методов вирус был исследован в РСК с набором диагностикумов на все типы вируса ящура, везикулярного стоматита, везикулярной экзантемы и везикулярной болезни свиней с целью идентификации типовой принадлежности и контроля на чистоту. Результаты типирования вируса в РСК представлены в таблице 5.

Приведенные в таблице 5 результаты свидетельствуют о том, что выделенный вирус относится к типу A, однако с гипериммунной сывороткой из производственного штамма A₂₂ N 550 в РСК дает отрицательный результат.

Пример 2
Получение и испытание гипериммунной сыворотки на морских свинках
Для гипериммунизации морских свинок используют антиген из вируса ящура, штамм A N 1707 "Армения-98", репродуцированного в суспензионной культуре клеток ВНК-21. Вируссодержащую суспензию очищают от балластных примесей добавлением 0,05% полигуанидина. Очищенный вирус концентрируют в 100 раз добавлением 10% полиэтиленгликоля (ПЭГ) м.м. 6000 и инактивируют аминоэтилэтиленимином (АЭЭИ) в концентрации 0,01- 0,05% pH 7,8-8,0.

Инактивированный концентрат антигена в смеси с равным объемом масляного адъюванта вводят морским свинкам в объеме 1,0 мл внутримышечно. Через 21 день иммунизацию повторяют и через 10 дней животных обескровливают. Индивидуальные пробы сыворотки крови проверяют на типовую специфичность и активность в РСК согласно [7].

После этого готовят серию путем смешивания типоспецифичных индивидуальных проб одинаковой активности. Штаммовую специфичность серийного препарата определяют в одно- и двусторонних реакциях с гомо- и гетерологичными антигенами.

После консервирования азидом натрия (1: 5000) и выдерживания при +4^oC в течение 30 дней полученную сыворотку фасуют в ампулы по 1,0 мл.

Способом, описанным в примере 2, было приготовлено 2 серии гипериммунной сыворотки, характеристики которых представлены в таблице 6.

Данные таблицы 6 свидетельствуют, что способом, описанным в примере 2, получены диагностические сыворотки, по специфической активности отвечающие требованиям [7].

Пример 3
Получение и испытание диагностического антигена
Для получения антигена для иммунохимических реакций используют вирус ящура, штамм A N 1707 "Армения-98", адаптированный к культуре клеток перевиваемых линий ПСГК-30 и ВНК- 21. Для адаптации используют вируссодержащий материал в виде 10% суспензии афт КРС. Адаптацию проводят в течение 5 последовательных пассажей. Полученную матричную расплодку вируса используют для наработки вирусного сырья. Заражение клеточных культур и сбор вирусного материала проводят по общепринятой методике. Полученную вируссодержащую жидкость концентрируют в 100 раз добавлением 8-10% ПЭГ. Полученный концентрат инактивируют прогреванием при 56^oC в течение 40 минут, фасуют в ампулы и высушивают методом сублимации под вакуумом.

Указанным способом было приготовлено 2 серии диагностического антигена, характеристики которых приведены в таблице 7.

Результаты исследований, приведенные в таблице 7, свидетельствуют, что способом, описанным в примере 3, получены диагностические антигены, специфическая активность которых соответствует требованиям [7].

Пример 4
Приготовление и испытание инактивированной адсорбат-вакцины
Инактивированную адсорбат-вакцину против ящура типа А готовят из вируса штамма N 1707 "Армения-98", выращенного в суспензионной культуре клеток ВНК-21. Полученный вирус подвергают инактивации АЭЭИ в концентрации 0,025-0,05% при 36-37^oC в течение 12-24 часов и pH 7,2-7,6. По окончании инактивации в суспензию добавляют полигексаметиленгуанидин до концентрации 0,005-0,007% для флокуляции балластных примесей и инактивации возможных контаминантов. Суспензию охлаждают до 4-8^oC. После этого проводят седиментацию флокулированных белков и их удаление. Полученный антиген подвергают контролю на авирулентность, содержание вирусспецифического белка и 146S + 75S компонентов вируса, стерильность. Необходимую концентрацию 146S + 75S компонентов в прививной дозе адсорбированной вакцины получают путем концентрирования антигена гелем гидрата окиси алюминия (ГОА).

Для этого в охлажденную суспензию антигена добавляют расчетный объем геля ГОА 3% концентрации. После седиментации ГОА сливают расчетный объем надосадочной жидкости или измеряют объем оставшейся суспензии. Конечная концентрация ГОА должна быть в пределах 1,62 ± 0,488 P < 0,01 мг/мл n=10, а концентрация 146S + 75S компонентов вируса ящура по меньшей мере 6,0 мкг/мл. Затем добавляют 10% раствор сапонина до конечной концентрации 0,075%. Полученную вакцину расфасовывают в стеклянные флаконы и подвергают контролю на стерильность по [8] . Авирулентность и безвредность вакцины проверяют на 5 головах КРС, вводя вакцину сначала под слизистую языка в дозе 2,0 мл, а затем подкожно в дозе 10 мл. Наблюдение за клиническим состоянием животных ведут 10 суток. Авирулентную, безвредную и стерильную вакцину проверяют на иммуногенную активность на КРС или на морских свинках.

Полученная адсорбат-вакцина против ящура типа A имеет оптимальный компонентный состав, мкг/мл:
Авирулентный и очищенный, антигенный материал из иммуногенных (146S + 75S) компонентов вируса ящура штамма A N 1707 "Армения-98" - ≥6,0
Гель ГОА - 1132,0-2108,0
Сапонин - ≥ 750
Поддерживающая среда - Остальное
Иммуногенная активность одной из производственных серий адсорбат-вакцины из вируса ящура A N 1707 "Армения-98" была проверена на КРС. Ее ИмД₂₂ была равна 0,15 мл, т.е. в одном мл вакцины содержалось 6,67 ИмД₅₀.

Для сравнения производственная серия адсорбат-вакцины из вируса ящура A₂₂ N 550 имела ИмД₅₀ КРС, равную 0,22± 0,012 мл P < 0,001, т.е. в одном мл вакцина содержала 4,55 ИмД₅₀. Объем прививной дозы вакцины должен содержать не менее 7 ИмД₅₀.

Пример 5
Приготовление и испытание инактивированной эмульсионной вакцины
Вирус ящура типа А штамма N 1707 "Армения-98" выращивают, инактивируют, очищают от балластных примесей и возможных контаминантов, подвергают контролю на авирулентность, содержание вирусспецифического белка, иммуногенных компонентов (146S + 75S) и стерильность так, как описано в примере 4. Необходимую концентрацию 146S + 75S компонентов в прививной дозе эмульсионной вакцины получают путем концентрирования антигена проточной ультрафильтрацией или полиэтиленгликолем.

Для этого используют ультрафильтры БТУ 0,5-2. Фильтрование ведут под давлением 1,5 атм. Полученный концентрат антигена хранят при 4-6^oC до момента использования в вакцине. Эмульсионную вакцину получают путем диспергирования на коллоидных мельницах концентрата антигена и масляного адъюванта в соотношении 3:7-1:1 соответственно.

В результате получают инактивированную эмульсионную вакцину против ящура типа А, которая представляет собой молокоподобную жидкость, не растворимую в воде. Вакцина имеет жидкую консистенцию, легко рассасывается с места введения, не вызывает образования абсцессов, не вызывает общей реакции в виде подъема температуры и обладает выраженной иммуногенностью для свиней в дозе 1 мл через 1-21 день после вакцинации, для КРС в дозе 5 мл через 3-21 день после вакцинации и для овец в дозе 1 мл через 3-21 день после введения. Вакцину вводят свиньям внутримышечно, а КРС и овцам - подкожно. В прививном объеме должно содержаться не менее 2 мкг 146S + 75S компонентов.

Полученная эмульсионная вакцина против ящура типа А имеет оптимальный компонентный состав, мкг/мл:
Авирулентный и очищенный антигенный материал из иммуногенных (146S + 75S) компонентов вируса ящура штамма А N 1707 "Армения-98" - ≥ 2,0
Масляный адъювант - 500000 - 700000
Поддерживающая среда - Остальное
Иммуногенная активность эмульсионной вакцины проверена на свиньях массой 35-50 кг. Результаты исследований представлены в таблице 8.

В прививном объеме 1 мл вакцины содержится 7,1 ИмД₅₀ для свиней.

Таким образом, приведенная выше информация свидетельствует о выполнении при использовании предлагаемого изобретения следующей совокупности условий:
- штамм N 1707 "Армения-98" вируса ящура типа A, воплощающий предлагаемое изобретение, предназначен для использования в сельском хозяйстве, а именно в ветеринарной вирусологии и биотехнологии;
- для предлагаемого изобретения в том виде, как оно охарактеризовано в независимом пункте формулы изобретения, подтверждена возможность его осуществления с помощью описанных в заявке или известных до даты приоритета средств и методов;
- штамм N 1707 "Армения-98" вируса ящура типа A, полученный в соответствии с предлагаемым изобретением, обладает высокой специфической, иммуногенной и антигенной активностью и пригоден для изготовления диагностикумов и инактивированной вакцины.

Следовательно, предлагаемое изобретение соответствует условию патентоспособности "промышленная применимость".

Источники информации
1. Дарда П.И. и др. Антигенные свойства вируса ящура штамма A₂₂(A_и). Ветеринария. - 1966, 1, 20-22.

2. Bojko A. A. Declaration sur l'apparition en URSS d'un type virus aphteux different des souches de type A anterieurement etudies dans le Pays. BOIE, 1965, 64, 2, 1075-1077.

3. Pepep X. Ящур. Пер. с нем. Г.А.Сурковой/под ред. и с предисл. канд. вет.наук П.В.Малярца.-М.; Колос, 1971, 432 с.

4. Бурдов А. Н., Дудников А.И., Малярец П.В. и др. Ящур/ Под ред. А.Н. Бурдова. - М.; Агропромиздат, 1990, 320 с.

5. Сюрин В. Н. и др. Вирусные болезни животных. -М.; ВНИТИБП, 1998, 532-548.

6. Инструкция по изготовлению и контролю вакцины моновалентной эмульсионной против ящура типа А, типа О, типа С, типа Азия-1 (из вируса, выращенного в клетках ВНК-21). Утверждена ГУВ Госкомиссии СМ СССР по продовольствию и закупкам 24.01.91.

7. Методические указания по выделению и идентификации штаммов вируса ящура ГОСТ 25384-82 М.; Колос, 1974.

8. ГОСТ 28085-89.

Формула изобретения

Штамм вируса Aphtae epizooticae, сем.Picornaviridae, род Aphtovirus, тип А, коллекция ВГНКИ N 1707 "Армения-98-ДЕП", для изготовления диагностических и вакцинных препаратов.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3, Рисунок 4, Рисунок 5, Рисунок 6, Рисунок 7, Рисунок 8, Рисунок 9, Рисунок 10

MM4A Досрочное прекращение действия патента Российской Федерации на изобретение из-за неуплаты в установленный срок пошлины за поддержание патента в силе

Дата прекращения действия патента: 16.03.2004

Извещение опубликовано: 20.12.2004        БИ: 35/2004