Способ получения эритроцитарного диагностикума для индикации токсина возбудителя дифтерии

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН Ия

К АВТОех СКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

GoII.a Советских

Соииалистически»

Ресоусли» 71 ) ф

6 @ 3

Зависимое от авт. свидетельства № ——

Заявлено 24.V,1971 (№ 1663082/31-16) М. 1хл. А 611< 237 02 с присоеди1нен ием заявки №-—

Комитет оо делам „1p нор итет—

Опубликовано 12.ill.1973. Бюллетень № 14 изооретений и открытий ори Совете Министров

СССР

УДК 615.373.34 (088.8) Дата опубликования опиcания 2Л1111.1073

Авторы изобретения

А. В. Мисенжников и И. И, Райхер

ПеP55cKH ll н1lgtIHo-исслеДовlттельск ни и нститУт I1il KI5HH H chIIIQP010«

Заявитель

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЗРИТРОЦИТАРНОГО ДИАГНОСТИКУМА

ДЛЯ ИНДИКАЦИИ ТОКСИНА ВОЗБУДИТЕЛЯ ДИФТЕРИИ

Изобретение относится к области получения иммуноглобулиновых эритроцитарных диагностикумов, используемых с целью индикации патогенных микроорганизмов и их токсинов.

Известен способ получения жидко1о эри.гроц11тарнога диапностикума для индикации токсична возбудителя дифтерии, в состав которого в качестве гемосеноитина входит противодифтерийная сыворотка. Однако применение противодифтерийной сыьоротки не гарантируст от получения неспецифических результатов вследстBHc содержа ни11 в указанной сывсхротке антител к oнтигенам бактериальной клетки.

1хроме того, в процессе xpallcl!ия жидкого эритроцитариого диагносгикума возможна элюlIèII гемосенситина с поверхности эритроцитов, срок годности препарата незначителен и необходима жест«яч регламентацня условий его транспортировки.

С 1ель«7 устрянечп1я указанных недостатков э!7:1г1 !717цнты сснсионлиэируют ферментироваиным янт:IT(7!ic1!!,o»! н диагностикум лиофильно зы"., п1н п11 н7т.

11:р:.I м е р. Для приготовления диагносгикух1я и 500,11л 6%-ной взвеси формали н из1иропянн1>1х тянпз11рованцых эритроцитов ба рана дооавляют равный объем дифтерийното аитиTI7«cина, получе1пнн.о путем ферментолиэа и 1ммуносорб7ции (кгтнцентрацил белка в рабочем растворе аптнтоксина должна составлять

2.11г %, рН 6,4). Смесь выдерживают в течеllllc

30 лшн. на водяной бане, прн +37 С, после чего сенсибилизироьаниые эритроциты осажд;1ют центрифугиров Ilièåì..II яждь1 17тмыв11117т

5 деснтикРагным объемом 0.4 "7о-ного РаствоРа инактивироваиной нормял1,1н1й ло1ня..IIIII(71I сыворотки н ресуспендируют в 470 11.1 наполннтеля следующего состава (% ): сахароза—

20, мясо-пептонный оульон — 20, нормальная !

0 In111apцная сыворотка -- 2, нейтральный форм ял,гн — 0,2.

Ирпг17товле«ны1! дн11гнт7ст 1«ум в виде

07", 7-ной взвеси сенсибнлнзпровя нных эрвт!роц:ггов в нано»II! Teле разл гвают !717 1 .ил н ям15 пулы, замораживают прп 46 С, п17;1вергакп лпофильному высушивяннк7 в те1енне 30 — 35 час в аппарате КС-30 и гермстпзпруют ампуtbl путем запаивания нод вакуумом. Для постановки реакции непрямой гемагг! IoTIIIlawIII

20 (РнГА) используют полистнроловые панели с лунками. Исследуемым материало»1 служат бульонные культуры дифтерийных бактерий.

Во все лупки (кроме первой) горизонтального ряда панели наливают по 0,5 .11л формалинизн217 рова н1«ого 1!7нзи17лог1исского раствора (0,85 17 о раствора хлористого натрия с 0,3% формалина). В первую и BTotpvlo лучики наливают но

0,5 11л исследуемой бульонной культуры; нз второй лунки после перемегнивяния перент1с11т

30 0,5 .11л в трет1но и т. д. Ih последней лунки

372999

Составитель Т. Головина

Корректор A. Васильева

Редактор К. Шаиаурова Техред Е. Борисова

:>аква 2523 Изд. № 1297 Тираж 467 .. Подписное

ЦН ИИ ПИ Комитета по делам изсбретений и открытий ори Споете Министров СССР

Москва, Ж-35, Рауптская наб., д. 4/5

Обл. тип. Костромского управления издательств, полиграфии и книжной торговли

0,5 мл конечного разведения материала выбрасывают. Вскрывают ампулу с сухим эритроцитарным диагностикумом, содержимое ампулы регидратируют в 2 мл физиологического ipacт вора и добавляют по 0,1 мл в каждую лунку с раз ведениями исследуемого материала. Панель вспрях ивают и оставляют на 2 — 3 час при комнатной температуре, после чего учитывают результаты реакции по общепринятой методике.

Титром токсина в исследуемом мхате риале считают максимальное разведение послед него, положительно реагирующее с эритроцита рным диа гностикумом.

Контролем служит постановка РнГА с Нспользова ние м в кагчестве исследуемого материала неи нфициро ванной питательной среды.

Предмет изобретенная

Способ получения эритроцHiT3lpIHoпо диагностикума для индикациями токоина возбудителя дифтерии путем сенсибилизац ии эритроцитов гемосенситином, отличающийся тем, что, с

10 целью повыШення специфичности, чувствительности и стабильности препарата, эритроциты сенсибилизируют ферментированным а нпитоксином и д|иапностикум лиофильно высушивают.