Способ получения физиологически активных

 

($ r о к;, yë -.; g ( г,с;- е н;

ОП ИСАНИ Е

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

Союз Советских

Социалистических

Реслублик

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Зависимое от авт. свидетельства №вЂ”

Заявлено 19.1.1972 (№ 1739525/30-15) М. Кл. А 61k 17!00 с присоединением заявки ¹â€”

Государственный комитет

Совета Министров СССР оо делам иэооретений и открытий

Приоритет—

Опубликовано 28.VIII.1973. Бюллетень ¹ 35

Дата опубликования описания 4.XII.1973

УДК 615 7 739(088 8) Автор изобретения

В. Г. Сараев

Заявитель

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ФИЗИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ

ВЕЩЕСТВ

Изобретение относится к способам получения биологических стимуляторов роста животных.

Известны способы получения политканевых препаратов из ткаией жс;вотных в асептичесиих условиях.

Отличителыной î"îáåííîñòüþ данного спо соба является то, что используют ткань молодых жи вотных, предварительно подвергнутых длительному голодаооию с псследующим глубоким замораживанием. Зто позволяет получать более эффективные препараты, которые оказывают ст имулирующее действие на живой организм.

Способ осуществляют следующим образом.

Отбирают здоровых, среднего веса, .например, 7 — 8-суточных цыплят, помещают в клетки и подвергают полному голоданию (при наличии воды) 70 †1 час при температуре воздуха 20 — 25 С. За это время цыплята те ряют в весе 20 — 31 . Периодически, через каждые 6 — 10 час, начиная с 70 — 72 час и до

120 час голода сия, отбирают самых слабых цыплят и помещают на твердую углекислоту для глубокого замораживания.

Последовательно каждую замороженную партию немного оттаивают, у,цыплят обрезают крылья, ноги, головы и снимают кожу вместе с перьями. Обработку тпроизводят в стерильных условиях прп температуре воздуха не выше 10 С.

С тушки цыпленка срезают псперечнополосатую мышечную ткань, сразу же помещают на твердую углекислоту и хранят до тех пор, пока будет собрана ткань со всей партии цыплят. Замороженную ткань измельчают ножницами, на мясорубке и на гомогенизаторе при 8000 об!.яин желательно до состояния мелкого замс роженного порошка, который

1:сбольцтнмп порциями помещают в гомогенизатор с охлаждением, заливают 8 — 10 ооъемами холодной 0,1 Л соля ной кислоты и экстра гнруют,прн 8000 оо!.яин 8 — 10 вин с перерывом для охлаждения температуры в стаканах.

Зкстракт отделяют центрифугировапием при 5400 — 5700 ой! яин 20 — 30 мин, а затем фильтруют под вакуумом через 2 — 3 слоя бумажного обеззоленного фильтра.

Осадок, вторично экстрагируют в гомогенизаторе с 5 — 6 объемами холодной 0,1 Л соляной кислоты, центрифугируют и фильтруют.

Для более полной экстракции операцию можНо повторить еще раз. Полученный осадок выбрасывают.

В экстракте устана вливают рН 3,1 — 3,35 с помощью едкого кали, перемешивают и оставляют на холоде на 10 — 12 час.

Затем устанавливают рН 5,25, перемешивают и оставляют на холоде в течение 5—

395081

Удаление;соли

10 час, центрифугнруют при 5200 — 5700 об/лии

15 — 25 яин и фильтруют под вакуумо м. В экс тракте .проверяют рН 5,25 и помещают на . :o;.oä-экстракт I.

Полученный осадок заливают 3 — 4 объемами холодной 0,1 Л соляной кислоты и экстраг нруюr в гомогенизаторе при 8000 об/чин

7 — 9 я:ин, Устанавтивают рН 3,2 — 3,5, оста вляют на 10 — 12 час на холоде, затем устава вливают рН на 5,2 — 5,3,,выдерживают на холоде, центрифугируют, фильтруют. Получают экстракт II с рН 5,2 — 5,3.

Осадок заливают небольшим объемо I холодного уксуснокислого калия с рН 5,2 — 5,3 (рН устана вливают уксусной кислотой) и экстрагируют 7 — 9 лин. Экстракцию проводят на холоде небольшими порциями. Раствор с солью рН 5,2 — 5,,3 помещают в холодильник на 10 — 15 час, затем центрифупируют при

5200 — 5700 об/мин 25 — 30 яин., фильтруют под вакуумом экспракт II I.

Осадок заливают небольшим объемо;I хо полной бидистиллированной воды с рН

5,2 — 5,3 экстрагируют на мешалке, выдерживают на холоде несколько часов, центрифугируют . и фильтруют экстракт IXч. Осадок выбрасывают.

Экстракт 1 и II сливают вместе, экстракт

III u IV сливают iB другую емкость.

Высушивание производят лиофильным спосооом до лухообразного порошка.

Сухой порошок из экстракта III u IV взвешивают, заливают конценпр ированным холодным этиловым спиртом из расчета 1200—

1500 ял спирта на 20 — 22 г сухого порошка, эистрагируют на мешалке и,помещают,в холодильник до появления, плотного осадка.

Осадок отделяют путем фильтрования под вакуумом и смешивают с сухим порошком из экстракта 1 и II.

Объединенный осадок растворяют .в небольшом объеме холодной бидистилл ированной воды и при энергичном перемешивании в этот раствор вводят холодный концентрированный химически ч истый ацетон до содержания его в ра створе 78%. Помещают в холодильник до оседания плотного осадка, центрифупируют и фильтруют. Раствор больше не нужен. Осадок заливают концентрированным ацетоном, отделяют и подсушивают в вакуумкамере при комнатной температуре, Заливают небольшим количеством холод ного серного эфира и экспра гируют на мешалке, отстаивают, осадок отделяют и сушат при комнатной температуре, Сухой осадок растирают в мелкий порошок, заливают холодным 60 О/о -ным ацетоном с рН:3,0 (рН устанавливают соляной кислотой), экстрапируют и отстаивают осадок, Затем промывают новыми порциями

5 !

О

60О/о-ного ацетона с рН 3,0, отстаивают н фильтруют. Осадок выбрасывают.

Экстракты 111 и IV сливают, измеряют объем объединенного фильтрата, вычисляют содержание B,Håì ацетона и воды и BHGBB вводят холодный концентр ированный ацетон с рН 3,0 до содержания его,в растворе 78 /о.

Выпавший осадок отфильтровывают и операцию повторяют еще 2 — 3 раза. Осадок выбрасывают.

Все фильт раты объединяют вместе, помещают в вакуумный испа ритель и при температуре 30 — 35 удаляют ацетон.

Выдел ение а кти вн ых веществ

Раствор, содержащий орга ничесиие веще ства, охлаждают едким калием, устанавливают рН 5,8 — 5,9, выпавший осадок удаляют фильтрацией. В раствор при помешивании вводят 25О/о-.ный аммиак в избытке до рН раствора 10,8 — 11,0, при этом образуется белый осадок активных веществ, его помещают

IHB холод, затем фильтруют под вакуумом, Осадок физиологически активных веществ вместе с фильпром растворяют в,небольшом объеме 0,1 Л соляной кислоты, упа ривают при температуре не выше 35 — 40 С на /4 своего объема, затем добавляют небольшое Ko;Iичество воды и .выпаривают насухо. Порошок должен быть абсолютно сухим, только при этом условии он сохраняет свою активность при хранении. Выход сухого порошка активных веществ из мыше. ной ткани приблизительно 0,14 /о от веса сырой ткани.

Упаковка m хранение

Высушенный порошок в сухом помещении растирают в ступке, засыпают в предв@р ительно вымытые, простарилизованные и вы сушенные ампулы, объемом 1 ял и запаивают. Хранят в испарителе холодильника без доступа света. Активность препарата не менее года.

Описанным способом могут быть получены физиолагичесии активные вещества, представляющие:из себя нуклеотидпептиды из других тканей и органов животных других видов.

Полученные физиологически активные вещества испытывались на увеличение привеса животных. Испытания показали, что действие препарата за висит от дозы, веса и возраста животного. С увеличением веса и возраста действие препарата увелич и вается. Мин имальная дей|ствующая доза, наименьшая для животных перед полным преиращением ими роста, увеличивается по мере старения живот ного и гораздо значительнее с уменьшением веса и возраста животных. Минимальная дейсгвующая доза дает наибольший эффект в наиболее короткий срок, с увеличением дозы продолжительность действия препарата увеличивается, а величины дополнительного при роста за тот же срок уменьшаются. Напр и395081

Предмет изобретения

Составитель P. Махнюк

Техред Е. Борисова

Корректор В. Жолудева

Редактор Д. Пинчук

Заказ 689/2271 Изд. № 940 Тираж 467 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

Москва, Я-35, Раушская наб., д. 4/5

Тип. Харьк. фнл. пред. «Патент» мер, оптимальные дозы и репарата д- я петухов весом 1400 — 1700 г = 0,029 ..г, кг, весом

1900 — 2000 г = 0,024 мгlкг (,возраст 116 — 270 суток) и 0,08 мгlкг для петухов весом 2300—

2700 г (возраст 2 года 7 мес.). Эти дозы вызывают за 11 суток опыта соответственно 32,8; -8,9; 91,7% дополнительного прироста.

Порошок физиологически активных веществ, разведенный в физиологическом растворе при рН 4,5 — 4,8, вводят животным внутримышечно.

Спосоо получения физиологически активных вегцеств, включающий получение и из5 мельчение ткани, экстра гированпе, центрифугирование, высушивание, отличающийся тем, что, с целью повышения их эффективности, используют ткань молодых животных, предва рительно подвергнутых длительному голоданию с последующим глубоким замораживанием.