Способ получения однозональной противодифтерийной сыворотки

 

О и и С" Н -Й

ИЗОБРЕТЕНИ

400327

Со1оз Советских

Социалистических

Республик

Зависимое от авт. свидетельства №

Заявлено 20Х111.1971 (№ 1696889!31-1 с присоединением заявки №

Приоритет

Опубликовано 01.Х.1973. Бюллетень ¹

Дата опубликования описания 18.1.1974

М. Кл. А 61k 23/02

Гасударственный комитет

Савета Министрав СССР аа делам изабретений и аткрытий

УДК 616.931-085.373 (088.8) Авторы изобретения

М. В. Далин, Л. В. Чарышкина и Т. С. Котова

Заявитель Московский научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И. И. Мечникова

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ОДНОЗОНАЛ ЬНОЙ

ПРОТИВОДИФТЕРИЙНОЙ СЬ1ВОРОТКИ

Изобретение относится к области медицины, точнее и спосооам получения дифтериииых сывороток:

Известен способ получения однозональной проЫводифтер11йной сыворотки путем сорбционного уда IcHHH из нее антител коринсбактериальпой природы при помощи фильтрата культуры коринсбактерий, выросших на срсчс с избытком железа.

Цель изобретения — повышснис специфичности прспарата.

Это достигастся тем, что адсорбцпю проводят на антигснах коринебактериальной природы, переведенных в нерастворимое состояние фиксацией их на амннопроизводном целлюлозы.

П р и и е р. Дифтсрийные бактерии штамма

РЖ 8 варианта Массачузетс выращивают глубинно в алюминиевом реакторе на среде по типу Лингуда, к которой для ингибирования продукции дифтерийного гистотокспи а добавляют 11,25 у/.11л железа. Последнее готовят в виде раствора FeSO., в цитратс натрия (44 г FeSO< на 400 мл 40%-ного раствора цитрата натрия), стерилизуют в автоклавс и добавляют в питательную среду в реактор перед засевом маточной культуры. Через

30 — Зб час культивирования фильтрат культуры отделяют на сепараторе от микробной массы и «онцснтрируют ультрафильтрацией в 100 раз. В концсптратс нс должно быть специфического антпгсна, опредсляемого реакцией флокуляцпи по Рамону. При контрольной фильтрации через гель сефадекса

Г-200 в составе этого ультрафпльтрата должно быть две фракции, первая пз которых выходит с колонки в свободном обьсмс, а вторая задерживается гелем ссфадекса Г-200.

Фракция гпстотоксина, которая обычно элюир) ется с г<1кОЙ ко lонкп в промс?к тке мсжд) двумя указанными фракциями на границе свободного об1сма, в таком ультрафн IbTpBTc должна отсутствовать. Концентрированный ультрафпльтрат прп пммуHo-диффузионном

1 анализе нс должен формировать полос прсципитацпп с моноспсцпфнчсской сывороткой к дпфтернйном гнстотоксинм.

В цснтрпфужныс стаканчики смкостьк1

30 ?ял залпва1от по 10,0 л1л суспензия пммуносорбснта и 1.0 .11.1 сыворотки, разведенной в отношении 1: 5=-1: 8. Смесь шуте;шруют в тсчснпс 45 л1нн прп комнатной температуре, после чего стаканы переносят в центрифугу и центрнфугпруют при 3000 оо;,сятн в течение 15 — 20 .1шн. 11адосадок отделяют и концентрируют прп помощи ультрафпльтрацпп чсрсз фарфоровые свечи, покрытыс 8 /о -!Ihlì раствором трпацстплцсллюлозы в ледяной уксусной кислоте. Осадок иммуносорбснта

3р промывают 1% -ным раствором хлористого

400327

Предмет изооретения

Составитель С. Щенева

Редактор Л. Ксенофонтова Техред 3. Тараненко Корректор О. Тюрина

Заказ 3688 8 Изд. ¹ 2008 Тираж 467 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Типография, пр. Сапунова, 2 натрия, отделяют промывные воды на центрифуге, концентрируют их также, как и адсорбированную сыворотку, и добавляют к последней. При необходимости процсдуру повторяют несколько раз с использованием свежих порций иммуносорбснта. Иммуносорбент получают на основе аминоанизолцеллюлозы известным способом.

Конечный препарат противодифтерийной сыворотки после адсорбции и концентрации ультрафильтрацией проверяют в тесте двойной диффузии, используя в качестве реагента дифтерийный гистотоксин с чистотой не ниже

2700 1.7/иг, нативный дифтерийный токсин с титром нс ниже 150 1.7/,ил и препарат антигенов коринсбактериальной природы, приготовленный путем культивирования дифтерийных бактерий на среде с избытком железа.

В указанном тесте однозональная противодифтерийная сыворотка нс должна формировать полос прсципитации с последним антигсном, а с первыми двумя должна образовать одну четкую полосу. Допускается, однако, образование дополнительной полосы преципитата со вторым тест-антигсном при условии, что она идентична полосе, формируемой сывороткой с высокоочигценным дифтерийным гистотоксином.

Способ получения однозоHàëüной противодифтерийной сыворотки путем сорбционного удаления из нее антител к антигенам коринебактериальной природы, отличающийся тем, что, с целью увеличения специфичности препарата, адсорбцию проводят на антигенах коринебактериальной природы, переведенных в нерастворимое состояние фиксацией их на

20 аминопроизводном целлюлозы.