Патент ссср 411129

 

41И29

Союз Советских

Социалистических

Республик

Зависимое от авт. свидетельства №

Заявлено 26.1.1972 (№ 1742303/31-16) с присоединением заявки №

Приоритет

Опуоликовано 15.1.1974. Бюллетень ¹ 2

Дата опубликования описания 1.VII.1974

М. Кл. С 121 1, 06

Гасударственный намнтет

Совета Министров СССР ао делам изобретений и открытий

УДК 576.8.093.33(088.8) Авторы изобретения Е. А, Крушинская, И. Л. Маргулис, 3. Д. Михлнн и Т. В. Носальчук

Заявитель

Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии

ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ВЫРАЩИВАНИЯ

КОКЛЮШНЫХ МИ КРОБОВ

Изобретение относится к области микробиологии.

Известна питательная среда для выращивания коклюшных микробов, содержащая хлористый натрий, хлористый калий, хлористый кальций, хлористый магний, фосфорнокислый калий двузамещенцый, углекислый натрий, крахмал, сернокислое железо, сернокислую медь, агар-агар, ферментативный казеиновый гидролизат, активированныи уголь, цистин, дистиллированную воду. Однако указанная среда обладает недостаточно высоким качеством.

Цель изобретения — повышение интенсивности роста коклюшных микробов. Для этого в состав среды вводят препарат высушенной культуральной жидкости, полученной при термофнльном метановом брожении меласснозерновой ацетоно-бутиловой барды, и содержание ингредиентов в 1 л среды составляет: препарата сухой культуральной жидкости

0,2 — 0,4%, хлористого натрия 0,45 — 0,55%, хлористого калия 0,015 — 0,025%, хлористого кальция 0,00015 — 0,0002, хлористого магния

0,002 — 0,0025%, фосфорнокпслого калия двузамещенпого 0,02 — 0,03%, углекислого натрия

0,035 — 0,04%, крахмала 0,08 — 0,15%, сернокислого железа 0,8 — 1,2 мл 1%-ного раствора, сернокислой меди 0,3 — 0,6 мл 1%-ного раствора, агар-агара 1,8 — 2,0%, активированного угля 0,5 — 0,7%, цистнна 0,0025 — 0,0035%, ферментативного казеинового гидролнзата в количестве, обеспечивающем содержание аминного азота в среде 20 — 150 мг"/о.

В качестве источника роста предложен препарат КМБ-12, представляющий собой высуше|шую культуральную жидкость, полученную в процессе термофильного метанового брожения мелассно-зерновой ацетоно-бутнловой оар10 ды, являющейся препаратом, насыщенным большим количеством белков, аминокислот, витаминов. Препарат КМБ-12 содержит сырые протеины 28 — 37% и белок 17 — 22%, где содержатся незаменимые аминокислоты (аргп15 шш, валин, гнстидип, изолейцпн, лизин, лейшш, метиопин, треонин, фенилалаппн), заменимые аминокислоты (алании, аспарагпновая, глютампповая, пролнн, тпрозин, серии, цпстпн), а такгке следующие витамины в мг на

20 1 кг сухого вещества: В, 15, Ве 50, В6 45, 13„

100, РР 90, фолиевая 70, пантотеновая 125, биотпц 0,07 и холиноподобные вещества

50 г/кг.

II р и м е р. Содержание ингредиентов па 1 л

25 предлагаемой питательной среды составляет: сухой препарат КМБ-12 0,2 — 0,4% хлористый натрий хлористый калпй 0 02% хлористый кальций 0,0002%

30 хлористый магний 0,0025%

411129

0,025 О/О

0,04 О/О

0,1 /, 1 мл

0,5 мл

2 О/О

10

Предмет изобретения

Щенева

Составитель С.

Корректор Н. Торкииа

Редактор Т. !Орчикова

Текред Г. Васильева

Заказ 1213/5 Изд. № 1237 Тираж 456 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

Москва, >К-35, Раушская наб., д. 4/5

Сапунова, 2

Типография, пр. фосфорно-кислый калий (двузамещенньш) углекислый натрий крахмал сернокислое железо 1О/О р-р сернокислая медь 1 /О р-р агар-агар

1рермептативный казеиновый гидро",èçàò в количестве в зависимости от того, с каким содержанием аминного азота нужно приготовить среду ак1ивировапны11 уголь цистин дистиллированная водQ

0,50/О

0,003% до необходимого объема рН среды 7,3 — 7,4

Готовят пптазельную среду с,педующим образом.

Необходимое количество сухого препарата

1(1ЧБ-12 разводят в части дистиллированной воды и оставляют на 15 мин для набухания.

Затем добавляют 2 /О агар-агара и снова оставляют на 15 мин. 1 смеси препарата и агарагара добавляют 0,5 /О активировапного угля и полученную смесь из трех ингредиентов автоклавируют в течение 1 час при 100 С. В соответствии с нужным содер>канием аминного азота в среде (20, 50, 100 или 150 мго/О) разводят казеиновый гидролизат дистиллированной водой, добавляют соли в количествах, указанных в составе среды. Далее для приготовления среды используют растворимый крахмал 0,1О/О, который предварительно растворяют в части дистиллированной воды, а затем добавляют и раствору солей и казеинового гидролизата. Казеиповы11 гидролизат перед добавлениел1 солей и других ингредиентов должен иметь рН 7,0 — 7,1. Цистип или добавляют в среду, или готовят в виде раствора, стерилизуют отдельно и добаьляют I среде перед разливкой в чашки Петри. Завершающим этапом приготовления среды является соединение двух частей — автоклавпрова иной и смеси солей, казеинового гидролизата и

45 крахмала. После этого среду разливают во флаконы или матрацы и стерилизуют при

110 С в течение 30 мин.

Предлагаемая питательная среда обусловливает увеличение микробной массы коклюшного микроба в 400 †5 раз по сравнению с посевной дозой и при этом выход микробной массы составляет 90 †1 л одномиллиардной суспензии в 1 л среды, что имеет решающее значение в исследованиях, связанных с изучением аптигена и для вакцинного производства.

1. Питательная среда для выращивания коклюшных микробов, включающая хлористый натрий, xJlopHcTblll калий, хлористый кальций, хлористый магний, фосфорнокислый калий двузамещенный, углекислый натрий, крахмал, сернокислое железо, сернокислую медь, агарагар, ферментативный казеиновый гидролизат, активированный уголь, цистин, дистиллированную воду, отличающаяся тем, что, с целью повышения интенсивности роста коклюшных микробов, она содержит препарат высушенной культуральной жидкости, полученной при термофильном метановом брожении мелассно-зерновой ацетоно-бутиловой барды.

2. Питательная среда по и. 1 о т л и ч а ющ а я ся тем, что содер>кание ингредиентов в

1 л среды составляет: препарата сухой культуральной жидкости, полученной при термофильном метановом брожении мелассно-зерновой ацетопо-бутиловой барды 0,2 — 0,4 /О, хлористого натрия 0,45 — 0,55 О/О, хлористого калия 0,015 — 0,025О/О, хлористого кальция

0,00015 — 0,0002 /О, хлористого магния 0,002—

G,0025, фосфорнокислого калия двузамещенного 0,02 — 0,03О/О, углекислого натрия 0,035—

0,04 11О, крахмала 0,08 — 0,15О/О, сернокислого железа 0,8 — 1,2 мл 1О/О-ного раствора, сернокислой меди 0,3 — 0,6 мл 1 /О-ного раствора, агар-агара 1,8 — 2,0О/О, активированного угля

0,5 — 0,7 /О, цистина 0,0025 — 0,0035 /О, ферментативного казеинового гидролизата в количестве, обеспечивающем содержание аминного азота в среде 20 — 150 мг /О.