Способ получения терефталевой кислоты
23ссазвмтио и зо
4Фблм о т я, !.
ОП И WÈ! (ii1 419509
ИЗОБРЕТЕНИЯ
Союз Советских
Социалистических
Республик (б1) Зависимое от авт. свидетельства (22) Заявлено 26.05.71 (21) 1663271i23-4 (51) М. Кл. С 07с 63 26
С 12d 1,i02
С Г1РИCОСД1ПIСIIIIС11 3211ВКИ
Гасударственный комитет
Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий (32) Ириоригст
Опубликовано 15.03.74. Б!Оллстснь М 10
Дата опубликования описания 22.08.74 (53) УДК 547.584.07 (088.8) (72) Лвторы изобретения
Е. Л. Головлев, Л. А. Головлева, Г. К. Скрябин, В. Н. Кулаков, Л. В. Андреев, 3. И. Финкел<иитейн и В. И. Крупянко
Институт биохимии и физиологии микроорганизмов АН СССР (i1) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕг1ИЯ ТЕРЕФТАЛГВОЙ КИСЛОТЫ
Изобретение относится к способам получения тсрсфталсвой кислоты микробиоло; tl lcским путем.
Известен способ получения терсфталсвой кислОты Окисленисъ! 12-1<силола: >кесткис и нередко при окислеlillll образуются побочные продукты. С целью упрощения процесса предложен способ получения тсрсфталсвой кислота! путе.:. микробиологической трансформации н-кс11лола с помощью активной культуры из рода Xio cardia, которая проводит пря 1ос окисление и-ксилола в тсрсфталсвую кислоту. Характсристика штамма brocard;:а .:рос(с.— 1 Л. Культуральиыс свойства. На обычных питательных средах (мясо-IIcIIToIIIII.Ii I агар, сусло-агар, к!Ииср11л!.иая среда с глюкозой) даст колонии розово-oip tcioro цвета, гладкие, блестящие, вьшуклыс. Морфологические свойства. Размер клеток при росте на мясо-иситоином бульоне у 24-часовой культуры 0,15 1 р,8— — 10 р. Клетки иалочковидныс, слегка искривленные, с неровными контурами, ангуляриыс формы ярко выражены, ветвление редкое, но отчетливое. На 2 — 3 сутки культура рас адается на кокковидиые фрагменты диаметром 0,5- 1,0 1!. Физиолого-биохимические свойства. Лэроб растет при температуре 15 — 37 С, оптимум около 28 С, в диапазоне рН 5 — 9. ОО IagacT 21<типiloll 1<2 яляЗИОИ активностью. Твин — 40 гидролизмст. Жслатину нс разжижает, крахмал, клстчатку, казеип:ic. п!дро IIIçócò, иитраты рсдуци10 руст. Ассимилирует б 3 кислотообразоваиия следующие углеводы: гл1окозу, галактозу, ксилозм, Я130бииозм, сахарозм, к!ал1>тозу, трсгалозу, лактозу, раффииозу, машшт, сорбит. 15 Ассимилирует глицерин, этанол, ацетат, пропионат. бутират. сукцинат, цитрат, н-алканы: с ноиаиа пo гептадскаи, олефин, додецен-1, изопарафии, сквалан. )-1с accllмилируст пальмитат, бснзоат, сали20 илат, it!!I, îòèIIaò. фсиол, пирокатсхии, рсзорцин, нафталин, мстил-иирид1шы. 13 качестве источников азота усваивает нитриты, иитраты, аммонийныс соли, мочсвииу, аспарапш. Иситои, гидролизат казсина. На 25 среде без источника азота нс растет. Ио своим морфологичсским и физиолого0 Иохи;1 и чсе 1:.и l l! p1131121<2 1! Кул 1.Т1:p а Ол И31<а К виду Xocardia
30 несколько,1сльчс, растет при 37, фенол не 4I9509 Предмет изобретения Составитель Г. Лавриненко Редактор Л. Емельянова Техред 3. Тараненко Корректор Н. Учакина Заказ 1863 10 Изд. М 1386 Тира)к 506 Подписное ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5 Тншогр l(1)Ilail, lip. Сапунова, 2 использует, трансформирует и-ксилол в соокислительных условиях до терефталевой кислоты. Данную культуру выращивают на средах, содержащих источники углерода (углеводороды). азота и минеральные соли. Процесс осуществ,ляется при атмосферном давлении, при -,емпературе 28 — 30 . Окисление идет строго специфически и без образования побочных продуктов. Пример 1. Культуру Nocardia sp. шт. 1 А поддерживают на сусло-агаре, выращивают в течение двух суток и суспензию выросшей культуры засевают в конические колбы на 800 мл с жидкой средой Л, разлитой по 160 мл. Состав среды (г/л): КН,ХОз 2,0 КН Р04 0,1 К НРО4 1,0 Мд304 7I-40 0,5 NaC1 0,1 Вода дистиллированная до 1 л, гексадекан добавляется дробно 3 дня в количестве 10 г/л. Через 24 час после инокулирования в среду вносят 0,6 г п-ксилола, через сутки еще 0,6 г и через сутки еще раз 0,6 г и-ксилола. Процесс трансфоркиации прослехкивают с помощью хроматографии. Окисление прекращают на пятые сутки. Для выделения терефталевой кислоты культуральную жидкость, освобожденную от клеток, подкисляют соляной кислотой, упаривают досуха в вакууме на роторном испарителе. Сухой остаток промывают смесью эфира и холодного метанола для удаления парафина и других эфиро- и спирторас5 творимых веществ и метилируют диазометаном в смеси эфир: метанол (1: 1). Образовавшийся метиловый эфир терефталевой кислоты экстрагируют эфиром и гидролизуют кипячением в 1 н. растворе КаОН. Гидролизат под10 кисляют концентрированной соляной кислотой до кислой реакции на бумагу конго. Выделившуюся терефталевую кислоту отсасывают на воронке Бюхнера и сублимируют. Терефталевая кислота была идентифициро15 вана как непосредственно в культуральной жидкости, так и после ее выделения. Идентификацию проводили методом газовой хрома. тографии, а также тонкослойной хроматографией на силикагеле и окиси алюминия. 20 УФ-спектры выделенной кислоты и чистого продажного препарата были полностью идентичны (4вах- 240 — 241 mp в растворителе: аммиак — изопропиловый спирт 6: 1, 4вах 242— 243 mp в диоксане) . Спосоо получения терефталсвой кислоты окислением п-ксилола, отличающийся 30 тем, что с целью упрощения процесса, окисление ведут с помощью микроорганизмов рода Хосагйа.
