Способ определения массы дрожжевых клеток в единице объема суспензий

 

Союз Советских

Социалистических

Республик

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОЬФУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (11) 492807 (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 19. 02. 73 (21) f885628/28-I3 (51) М. Кл, g 01e 33/I6

С I2K I/ÎÎ с присоединением заявки

Государственный коиитет

Совета Министров СССР но делам изобретений и отирытий (23) Приоритет (53) УДК 663.I4(088.8) (43) Опубликовано 25.И.75, Бюллетень № 43 (45) Дата опубликования описания )G f2, (72) Автор изобретения

Я.Д.Грановский (71) Заявитель

Московский дрожжевой завод (54) СПОСОБ ОПРЕДсЛИПИ МАССЫ ДРЭ2ЖЕВ1Й 1ПЕТО1(В ЕДИНИЦЕ ОББИЛ

СУСПЕНЗИИ

1 1 ™2 ™g

Изобретение относится к микробио- логической промышленности и может быть использовано для контроля любых микроорганизмов, культивируемых в растворе питательной среды, например культуры дрожжей, применяемой в хлебопечении.

Известен способ определения массы дрожжевых клеток в единице объема суспензии, предусматривающий разделение суспензии на твердую (дрожжевую) и жидкую фракции, добавление к твердой фракции раствора с последующим математическим расчетом массы дрожжевых клеток.

Однако известный способ неточен, так как определяют массу клеток вместе с массой внеклеточной влаги.

С целью повышения точности определения перед разделением суспензии на фракции определяют плотность исходной

1 суспензии, а после ее разделения - жид- кую фракцию удаляют и определяют ее плотность, а к твердой добавляют такое же количество раствора известной плотности, перемешивают, центрифугируют, вновь добавляют к твердой фракции тот

1О же раствор известной плотности, «ереМешивают и определяют плотность полученной суспензии дрожжевой массы по соотношению

15 указанных плотностей (суспензий и растворов) .

Способ осуществляют следующим обраdoÌ

Суспензию дрожжевых клеток берут из, дрожжерастительного аппарата, принимая, что масса анализируемого объема суспензии (МГ) представляет собой сумму масс дрожже11 (М2) и культурельной жидкости (M3) 4С 7807

45 или 6< )Π— гол + Рея, (с) где /, ф, — соответствующие объемы;

Ф /Э,9 — nJIGI ности.

Суспензию разделяют центрифугированием, например с помощью пробирочной центрифуги, на твердую (дрожжевую) и Iо жидкую франции, а перед разделением определнюл плолносль (0 ) исходной суспензии.

После разделения из пробирок отбирают культуральную жидкость и определяют ее плотность (/(° ).

В пробирки для замещения культу20 ральной жидкости добавляют до первоначального объема (до метки) раствор известной плотности, перемешивают и вновь центрифугируют. После разделения фугат сливают, в пробирки вновь добавляют тот же раствор известной плотности, содержимое перемешивают и повторно отбирают пробу и определяют плотность суспензии /: у

Затем определяют массу дрожжевых клеток путем математического расчета, который осуществляют по соотношению указанных плотностей (суспензий и 40 растворов) по формуле:

И

- аоо ал.=ахилл) о где Π— плотность размещающего раст/5 вора (разбавителя).

Способ осуществляют в течение гг045 мин. при одной и той же температуре, предпочтительно 20 С, которую поддеро живают с отклонением на величину не

55 более + О,I С.

Пример I. На контроль берут пробу суспензии, содержащей I00 r дрожжей в литре в расчете на прессованные дрожжи с влажностью 75%. Плотности о11ределяют при 20 С, при этом /

I,0I236 г/см, Я = Е,ООгг96 г/см .

В качестве разбавителя используют вол 3 допроводную воду с Я - = 0,99843 г/см .

После замещения плотность суспензии -г = I,006I8 г/см .

По формуле (3) подсчитывают конценсрацию биомассы дроиией (— и — )

М

Анализ погрешностей показывает, что при ошибках противоположного знака в определении Я и Я на 0,0000I г/см

3 абсолгютная погрешность в подсчете концентрации равна, примерно, 3 г/л.

Для уменьшения погрешностей анализируемую (исходную) суспензию сгущают несколько раз за счет ее жидкой фазы.

Кратность сгущения (К) равна: к=, (гг) где tlj — объем суспензии после сгущения.

При этом в К раз увеличивается концентрация биомассы, так как

И, М, (5) 11 К 6

Суспензию сгущают в пробирках центрифугированием одновременно с процессом замещения, при этом на пробирки наносят две отметки: одну (верхнюю) для первоначального объема, другую (нижнюю) — для объема в К раз меньшего.

При сгущении способ осуществляют следук)щам образом.

Суспензию заливают в пробирки до верхней отметки и центри(1)угируют, после разделения половину пробирок снимают (через одну) и отбирают из них культуральную жидкость до нижней отметки. Затем оставшуюся жидкость перемешивают с осажденными дрожжами, получая сгущенную суспензию, которую отбирают и определяют ее плотность „ г

Из оставшихся в центрифуге пробирок удаляют культуральную жидкость и определяют ее плотность Я, à ВМосТо нее до нижней отметки добавляют разбавитель.

Затем содержимое перемешивают и центрифугируют, после чего отделенную жидкую фазу сливают и в пробирки вновь до нижней отметки добавляют разбави492807 I

11редмет изобретения

= <00

1О

30

Составитель А,БрЯЕНИКОНа

Редактор А,МОРОЗОВЕ Техред КоРРектоР $,11О ННа

Заказ 2, . с, Изд. ¹ gg(5 Тираж Г!одписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам. изобретений и открытий

Москва, >К-Зб Рауьвская наб., д. 4/5

ППП „Патент" Москва, Г-39, Бережковская наб., 24 тель, перемешивают и отбирают для определения плотности „/Оу концентрацию биомассы в сгущенной суспензии подсчитывают по формуле, аналогичной формуле (5): (Г/д), (6)

Н р и м е р 2. Суспензию, анализируемую в примере I, сгущают в 2 раза, при sToM Я = I,0I976 r/см, a /., I,UI395 г/см, плотности культуральной жидкости и разбавителя те же, что и в примере I, при этом — = I22 6 г/л

Мр, р Э Ф вЂ” = 6I 3 г/л.

I%

Ф

Установлено, что, чем больше кратность сгущения, тем точнее окончательный результат контроля концентрации.

Необходимо отметить, что все оггерации спосооа могут быть автоматизировапы, сгущение и разделение суспензии возможно осуществлять под вакуум",ом, а подсчет концентрации биомассы после автоматического контроля — с помощью счетного устройства.

Способ определения массы дрожжевых клеток в единице объема суспензии, предусматривающий разделение суспензии на твердую (дрожжевую) и жидкую фракции, отличающийся тем, что, с целью повышения точности определения, перед разделением суспензии на фракции определяют плотность исходной суспензии, а после ее разделения — жидкую фракцию, дали,от и определи у ео плотность, к твердой добавляют такое же количество раствора известной плотности, перемешивают, центрифугируют, вновь добавляют к твердой фракции тот же раствор известной плотности, перемешивают и определяют плотность полученной суспензии, а затем осуществляют определение массы дрожжевых клеток путем математического расчета по соотношению указанных плотностей (растворов и суспензий).