Способ выявления холерных вибрионов

 

Ои исднИЕ „„»4496

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

Союз Советских

Социалнстииеских

Реслублик

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свид-ву— (22) Заявлеио05.05.74 (21) 2025836/13 с присоединением заявки №вЂ” (23) Приоритет— (51) M. Кл."С 12 К 1/00

Гасударственный комитет

Совета Министров СССР по делам изооретеннй и открытий (43) Опубликовано25 09 76 Бюллетень № 35 (Ы) УДК 5768

-093 (088.8) (45) Дата опубликования описания 08.06,77

С. Х. Урустенов, М. A. Шашаев, N. А. Тюлембаев и Б. И. Бекетов (72) Авторы изобретения

Среднеазиатский научнэ--исследовательский прэтивэч-„.-мный институт (71) Заявитель (54) СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ ХОЛЕРНЫХ ВИБРИОНОВ

Изобретение относится к медицине и предназначено для ферментной диагностики микробов.

Известен способ выявления холерных вибрионов, заключающийся в посеве исследуемого образца на жидкие среды с последующим пересевом всех культур на плотную среду и дальнейшим изучением свойств выделенных культур.

Однако данный способ не обеспечивает малого объема выполняемых работ и быстроты получения ответа.

С целью сокращения объема выполняемых работ и ускорения ответа в предлагаемом способе пересеву на твердую среду и дальнейшему исследованию подвергают лишь образцы, давшие положительную реакцию на оксидазу в жидкой среде.

Способ выявления холерных вибрионов осуществляют следующим образом.

Во вторую пептонную воду после инкуо бации в течение 6-9 час при 37 С добавляют 2-4 капли на 1 мл среды 0,04-0,05%-ного свежеприготовленного водного раствора диметилпарафенилендиамина

2 (дигидрэхлэрида) с pH — 3,0 через 1-10 MHH появляется четкое рэзэвэ-малиновое коль— по.

После пересева из первой среды накопления (засеянной исследуемым материалом на холеру) вэ вторую среду накопления (1%-ная вторая пентонная вода), последнюю инкубируют при 37 C в течение 6-9 час.

Затем во втэрую среду накопления добавляют из расчета 2-4 капли на 1 мл среды

0,04-0,05%-ногэ свежепригэтэвленнэго водного раствора диметилпарафенилендиамина (дигидрохлорида) с рН-3,0. При наличии вибрионов на поверхности второй среды накопления через 1-10 мин после добавления реактива появляется четкое разово-малиновое кольцо (положительная проба на оксидазу). Для дальнейшего бактериологического исследования на холеру берут только пробы с положительным результатом на оксидазу.

Пример. Указанным способом определен фермент оксидазы у 223 штаммов холерных вибрионов (10 классического и

2э 213 Эль-Тор биотипа) 68 штаммов неаг51<496

Составитель В. Остапчук

Техред А. Богдан Корректор Н. Ковалева

Редактор Т. Девятко

Заказ 7 32/69 Тираж 575 Подписное

ПНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент, r. Ужгород, ул. Проектная, 4 глютинирующихся вибрионов и 199 штаммов бактерий кишечной группы (возбудителя дизентерии, брюшного тифа, паратифа А,В, салмонеллеза, псевдотуберкулеза и кишечная папочка), засеянных в 1%-ную пелтон- 5 ную воду (рН-7,8) через 6-9 и 24 час о инкубирования в термостате при 37 С.

Во всех сроках наблюдения положительную реакцию на оксидазу дают все штаммы холерных, не агглютинирующихся вибрионов 10 а бактерии кишечной группы дают отрицательный результат.

На выявление фермента оксидазы не влияет бактерий рода Echerichia 5akvnonePfg, и в

Сй оЬас1е (в дозах 10 -10 ) при их совместном выращивании с холерными и неагглютинирующимися вибрионами (в дозах 10—

И

-10 )..

В первую 1%-ную пептонную воду (1сре-д> да накопления) засеяны испражнения, Е.Cori и штамм вибриона в дозах, соответственно 10 -10 микробных клеток. В этой в серии опытов использованы 6 штаммов холерного вибриона обеих биотипов и 2 штам- р ма неагглютинируюшихся "0" холерной сывороткой вибрионов (НАГ). Через 6 час сделан пересев во вторую среду накопления и через 7 час отмечали положительную реакцию на оксидазу во всех пробирках за ЭО исключением пробирок, где засеяны лишь

Е. СО Р i испражнения.

Положительная реакция на оксидазу отмечена (в посевах на 1%-ную пептонную воду) у различных штаммов вибрионов в зависимости от посевной дозы в сроки 6-9 час. Четкая положительная реакция на оксидазу отмечалась при концентрации вибрионов в 1 мл 10 клеток.

Контакт в течение 9-24 час диметилпарафенилендиамина в 1%-ной пептонной воде со штаммами холерных и НАГ-вибрионов не приводил к изменению высеваемости, морфологии, подвижности, агглютинабильности, биохимических и серологических свойств у вибрионов.

Формула изобретения

Способ выявления холерных вибрионов в исследуемом материале путем посева на жидкие среды с последующим пересевом на плотную среду и дальнейшим изучением свойств выделенных культур, о т л и ч а юшийся тем, что, с целью упрошения и ускорения способа, пересеву на твердую среду и дальнейшему исследованию подвергают лишь образцы, давшие положительную реакцию на оксидазу в жидкой среде.