Способ консервирования митохондрий

Авторы патента:

G01N33/48 - биологических материалов, например крови, мочи (G01N 33/02-G01N 33/14,G01N 33/26,G01N 33/44,G01N 33/46 имеют преимущество; определение всхожести семян A01C 1/02); приборы для подсчета и измерения клеток крови (гемоцитометры) (подсчет клеток крови, распределенных по поверхности, путем сканирования этой поверхности G06M 11/02)

ОП ИСАНИЕ1„., ИЗОБРЕТЕНИЯ., Союз Советских

Социалистических

Республик

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

l (61) Дополнительное к авт, свид-ву (22) Заявлено 22.06,73 (21) l 137286 13 с присоединением заявки )чь

/51) У;. i - С 01 ll„1/2б

Государственный комитет

Совета Министров СССР по делам иэооретений и открытий (23) Приоритет (43) Опубликовано 25. 09, 76 Бк>ллетень N 35 (45} Дата опубликования описания 10.06.77 > Д, (51 >.2: 576.31

1088.Х ) (72) Авторы изобретения

А. М. Белоус и В. В. Лемешко (1) аявител Институт проблем криогенной биологии и медицины АН украинской СОР (54) СПОСОБ КОНСЕРВИРОВАНИЯ 1 !И О;(ОНДРИЙ

Изобретение относится к области биологии.

Известен способ консервирования митохондрий путем помещения суспензии митохондрий в замораживающую среду в присутствии криопротектора.

Однако этот способ обеспечивает недостаточно высокий уровень функциональной активности митохондриий.

Пелью изобретения является улучшение сохранности функциональной активности митохондрий.

Это достигается тем, что замораживание ведут в присутствии полиэтиленоксида вЂ” 400 вначале со скоростью 1 вЂ” 1,5 град/мин до 77 К и оттаивают со о скоростью 300-400 град/мин.

Способ осуществляют следующим образом.

Свежую печень измельчают ножницами в холодной среде выделения. Навеску измельченной печени заливают девятикратным объемом среды выделения и гомогенизируют в стеклянно вЂ” тефлоновом гомогенизаторе в течение 30 вЂ” 40 сек. омогенат центрифугируют при 600 g в течение 10 мин, супернатант вЂ” при 6000 д в течение 15 мин. Осадок митохондрий суспендируют в 2 мл среды вьщеления (из расчета на 4 вЂ” 5 г печени) . Затем в суспензию добавляют по каплям 2 мл 2",(вЂ” ного раствора полиэтиленоксида вЂ” 400 (ПЭО вЂ” 400), приготовленного на среде выделения, и оставлякп стоять на льду до час. По истечении этого срока мл суспензия, налитой в стеклянную ампулу, замораживают медленно в парах азота с температурой

-25 Г со средней скоростью 1 вЂ” 1,5 град/мин. Температуру суспензии регистрируя>т с lloMQLoblo термопары и самопишущего потенциомсгра. В момен> завершения кристаллчзации основной массы свободной воды суспснзии образец погружая.т в жидкий азот. В таком виде су«пснзпк1 можно хранить необходимое время.

Г)чогревание суспснзии митохонп1>ий осущсст-о вляют в вочяпой бане с тсмпсратурои 3 i С. со скоростью 200 вЂ” 300 грал/мин.

Сразу жс после оттаивания ампулу с митохондриями ставят Hd лед. Функциональное состояние митохондрий оценивают в 1 мл cpe,!û инкубации (0,25 М

2р сахароза, 20 мл КГL, 10 мм KH2 PO+. 20 мм трис--НГ1 .рН 7,4) добавлением в нее 0,1 мл суспензии. Дыхание измеряют полярографпчески.

После режима замораживания и быстрого 070гревания митохондрии печени крысы сохраняя>т высокий уровень функциональной активности.

529390

Составитель С. Малютина

Тскрсд И. Ковач

Корректор Л. Боринская

Редактор А. Бер

Закаэ 5345/110

Ти Раж 10э9 Подписное

llllHHl lH Государственного комитета Совета Министров ГССР по делам иэобрстений и открытий

I 13035. Москва, Ж- 35. Раушская наб.. д.4/=.

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная. 4

Формула изобретения

Способ консервирования митохондрий путем помещения суспензии митохондрий в замораживающую среду в присутствии криопротектора, о т л ича ю щи и с я тем, что, с цельюулучшения сохранности функциональной активности митохондрий, замораживание ведут в присутствии полиэтиленоксида вЂ” 400 вначале со скоростью 1 вЂ” 1,5 град/мин о до 77 К и оттаивают со скоростью

300 вЂ” 400 град/мин.

Способ распознавания подозреваемого на рак цитологического материала // 521886

Способ приготовления препаратов в биологических макромолекул для электронной микроскопии // 519610

Способ получения постоянных цитохимических препаратов микроорганизмовэукариот // 515964

Способ определения активности сыворотки жеребых кобыл (сжк) // 506418

Способ изготовления гистохимических препаратов // 502280

Способ приготовления тонких срезов тканей // 502277

Способ исследования мочи при патологических состояниях и неблагоприятных воздействиях // 491096

Способ диагностики воспалительного процесса // 480954

Способ диагностики ревматического процесса у беременных и родильниц // 480952

Способ контроля состояния сельскохозяйственных и пищевых веществ или лекарственного препарата и устройство для его осуществления // 2100805

Способ определения в пробе цельной крови распределения вероятностей в популяции эритроцитов их подмножеств и устройство для его осуществления // 2100807

Способ определения гетероциклических нитросоединений в биологическом материале // 2100808

Способ выявления лимфоидных узелков в тотальных анатомических препаратах // 2101699

Изобретение относится к медицине, а именно к анатомии, топографической анатомии, патологической анатомии и может быть использовано для изучения лимфоидных узелков в тотальных анатомических препаратах макромикроскопическом поле видения в норме, в возрастном аспекте, в эксперименте и патологии

Способ ионного парамагнитного резонанса на нервном волокне // 2101700

Изобретение относится к медицине, в частности к способам неинвазивной диагностики функционирования биологических мембран и соответствующей оценке метаболических процессов в организме на клеточном уровне

Способ прогноза хронического рецидивирующего течения заболевания у лиц, перенесших первичную рожу // 2101701

Изобретение относится к медицине, а именно инфекционным болезням и дерматологии, и может найти применение как в стационарных, так и поликлинических условиях

Способ определения реактивного лизиса клеток // 2101702

Изобретение относится к медицине, а именно к медицинской биохимии, и может быть использовано для определения реактивного лизиса клеток в содержащей комплемент биологической жидкости в клинической практике и в научных исследованиях

Способ определения наличия активности воспалительного процесса при ревматоидном артрите // 2101703

Изобретение относится к медицине и предназначено для оценки активности воспалительного процесса при ревматоидном артрите путем биохимического исследования сыворотки крови

Способ дифференциальной диагностики миокардита и миокардитического кардиосклероза // 2102749

Устройство для локального подведения биологически активных веществ // 2102750