Способ выявления свободного цитоплазматического катионного белка лейкоцитов в микроскопических препаратах

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН И

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз СоввтскихСвциалистическик

Республик (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 31.07.73 (21) 1956266/13 с присоединением заявки № (23) Приоритет

Опубликовано 30.03.77. Бюллетень № 12

Дата опубликования описания 28.04.77

N 1/30

Государственный комитет

Совета Министров СССР по делам изобретений и аткрытнй

18.53 (72) Авторы изобретения

E. А. Венглинская, Б. И. Рукавцов и М. Г. Шубич (71) Заявитслп

Кубанский государственный медицинский институт им. Красной Армии и Кубанский государственный университет (54) СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ СВОБОДНОГО

ЦИТОПЛАЗМАТИЧЕСКОГО КАТИОННОГО БЕЛКА

ЛЕЙКОЦИТОВ В МИКРОСКОПИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТАХ

Изобретение относится к области медицины и может найти применение в цитологии, патологической физиологии, иммунологии и диагностике.

Известен способ выявления свободного цитоплазматического катионного белка лейкоцитов в микроскопических препаратах путем взятия крови, приготовления мазка, фиксации, промывания, окрашивания с использованием диахромного красителя, повторного промывания, микроскопирования в обычном микроскопе и количественного определения методом адсорбционной цитофотометрии.

Однако такой способ является трудоемким, длительным по времени и не обеспечивает высокой точности анализа.

С целью повышения точности и уменьшения времени анализа по предлагаемому способу окрашивание проводят примулином при рН

8,0 — 8,2, фиксируют раствором сульфосалициловой кислоты, промывают в боратном буфере, микроскопируют с помощью люминесцентного микроскопа, а количественное определение проводят с помощью цитофлуориметра.

Способ осуществляют следующим образом.

У человека или лабораторного животного берут порцию крови и приготовляют мазок, который высушивают на воздухе, а затем фиксируют 30 — 60 сек в 5%-ном растворе сульфосалициловой кислоты. Фиксированные препараты промывают дистиллированной водой и высушивают. Затем препараты окрашивают в течение 30 мин в 0,1%-ном растворе анионного флуорохрома примулина (примулиновый желтый) в 0,05 М боратном буфере с рН 8,2. Фиксацию, промывку и окрашивание проводят при комнатной температуре. Окрашенные препараты промывают в трех сменах этого же буфера (по 1 — 2 мин в каждой

10 смене) и микроскопируют в люминесцентном микроскопе с иммерсионным объективом, возбуждая люминесценцию сине-фиолетовым светом.

Гранулы катионного белка в цитоплазме нейтрофильных лейкоцитов человека и псевдоэозинофильных лейкоцитов кролика люминесцируют желто-зеленым светом, а остальная цитоплазма и ядра не люминесцируют. Эритроциты слабо люминесцируют тускло-зеленым светом.

Для количественной оценки содержания катионного белка в лейкоцитах препараты микроскопируют в люминесцентном микроскопе, снабженном флуорометрической насадкой или в цитофлуорометрической установке любого типа.

Величину фотометрической диафрагмы подбирают таким образом, чтобы обеспечить за30 полнение зондируемого участка изображением

552538

Формула изобретения

Составитель С. Малютина

Техред А, Овчинникова

Корректоры: Л. Орлова и И. Позняковская

Редактор Н. Хубларова

Заказ 773/7 Изд, Мз 343 Тираж 1054 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Типография, пр. Сапунова, 2 лейкоцита. Установив изображение лейкоцита в области фотометрической диафрагмы, снимают показания гальванометра (в условных ед.). Подобным образом фотометрируют 100 клеток, после чего вычисляют среднее арифметическое интенсивности флуоресценции (в условных ед.) на одну клетку. Так как при этом получают информацию о количестве катионного белка в условных единицах, полученные данные сравнивают с данными исследования крови контрольной пробы.

Предлагаемый способ позволяет быстро определить содержание цитоплазматического катионного белка в лейкоцитах, что является важным показателем функционального состояния этих клеток.

Способ выявления свободного цитонлазматического катионного белка лейкоцитов в микроскопических препаратах путем взятия крови, приготовления мазка, фиксации, промывания, окрашивания, повторного промывания и микроскопирования, отличающийся тем, что, с целью повышения точности и уменьшения времени анализа, окрашивание проводят примулином при рН 8,0 — 8,2, фиксируют раствором сульфосалициловой кислоты, промывают в боратном буфере, микроскопируют с помощью люминесцентного микроскопа, а количественное определение проводят с помощью цитофлуориметра.