Способ диагностики вирусного гепатита в

 

jiIj 594965

ОПИСАН И Е

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

СОюз СОВвтскик

Социалистическик

Республик (б1) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 20.12.76 (21) 2431458/28-13 с присоединением заявки №вЂ” (23) Приоритет (43) Опубликовано 28.02.78. Бюллетень ¹ 8 (45) Дата опубликования описания 23.03.78 (51) Ч. Кл. - А 61В 10/00

Государственный комитет

Совета Министров СССР (53) УДК 616.36-002 (088.8) по делам изобретений и открытий (72) Авторы изобретения

А. Ф. Блюгер, Х. М. Векслер, И. М. Ремез и М. К. Цыганов

Рижский в едицинский институт (71) Заявитель

Изобретение относится к области медицины и касается диагностики вирусного гепатита В.

Известен способ диагностики гепатита В путем определения в макрофагах дер»aëüíîãо слоя кожи НВ-антигена с помощью антисыворотки к этому антигену, меченной флюоресцеином (1).

Недостатком способа является необходимость получения специфической антисыворотки к HB-антигену, меченной флюоресцеином, которая очень дефицитна.

У больного бс1эут 5 мл Вс;!озной крови, смешивают с 0,3 мл гепар1гна и выделяют фракvi!10 одноядерных клеток путем цснтрпфугироH2IlIlsI H Vp2,1IleH7 e iI )OTH0CTH Веро! раф11!72 IlpH

400 Ci в течение 40 мнч. Взвесь одноядерных клеток дважды омывают в 2 — 3 мл трис-буфера (рН 7.,2 — 7,4) центрпфугпрованнсм при

400 6. 1, осадку отмытых клсток добавляют раствор среды 199 с таким расчетом, чтобы

jo кoHe»»a» кон центра ц!151 Одllояде171!ых клеток составила 10" клсток в 1,0 мл раствора. Из полученной взвеси пробы по 0,05 мл вносят в

2-е пробирки.

К одной пз проб дооавляют 0,05 мл очищен1,-, ного препарата НВ-антнгена — опытная проба.

К другой пробе добавляют 0,05 мл 0,85%-ного раствора ХаС! — контрольная прооа. Оос пробы ннкубпруют 30 .пгн прп 37 С. ИнкубпроН a H H vl x1 l1 с . 1е с 11 м 11 3 2 H 0.7 H si lo T Q I3e 1 2 м е Р ы Го20 ряева, отстаивают В камерах 60 мпн прн 37 C и подсчитывают общее число одноядерных клСТОк (ltбд В OIIHITe, Л I ; — В I

0,85%-ным раствором ХЗС1, и пинцетом удаляют покровныс cTCI ëà. Камеры раздель:lo ополаскива1от 0,850/2-1.ûI! раствором ХаС1. для !его llх В i;ej)Тliка, 1ьном по.iОЖС11!ill ОСТОрожlio Опуска!От в jlac Iвор Il сразу Вынпз1310т.

ОП0.1<1ск11ван17С к11мс17 П170водяТ В двух Мсч1ЗО зурках (Ilo 200 мл).

Известен также способ диагностики вирусного гепатита В путем смешения исследуемой крови с антикоагулянтом, приготовления двух проб, в одну из которых добавляют НВ-антиген, в другую — физиологический раствор, с последующей инкубацией и морфологической оценкой повреждения клеток крови (2).

Однако такой способ недостаточно чувствителен.

С целью повышения чувствительности по предлагаемому способу после обработки антикоагулянтом выделяют одноядерные клетки и после инкубации определяют общее число одноядерных клеток и процентное содержание в них адгезивных клеток и при уменьшении процента адгезивных клеток по сравнению с контролем более 4% диагносцируют гепатит В.

Способ осуществляют следующим образом. (54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ВИРУСНОГО ГЕПАТИТА В

594965

А = — 100з; = =37

М 102

Формула изобретения

Ак = 46; М, = 120;

А ., 46 IOOY, М 120

= 38!:;,.

М 76

А,=31; М, =84;

А — А .100о, 31 100N

М 84

= 37,4

При Ак — Ао —— 4 /о у больного гепатит В.

3) А,=17; М,=84;

А 1 . 100о 17 100 О

М 84

А, =32; Мк = 102; диагносцируют Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

: 22о,;

Составитель С. Малютина

Техрсд Л. Гладкова

Корректор 3. тарасова

Редактор H. Хубларова

Подписное

Изд,ь 252 T: ра;к 708

НПО Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий! 13035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Заказ 41,5

Типография, пр. Сапунова, 2

Затем на камеры накладывают покровные стекла и оставляют на 60 мин в горизонтальном положении при комнатной температуре (18 — 20"C). Далее подсчитывают число А-клеток («адгернс»), прилипших к стенкам камер в опытной и контрольной пробах (А, и Ак), и вычисляют процент числа А-клеток от общего числа одноядерных клеток (Мо и Мк) раздельно в опытной и контрольной пробах.

Примеры расчета:

1) А, = 32; М, = 106;

М 106

При Ак — Ао —— 7 /о у больного диагносцируют гепатит В.

2) А,=22; М,=76;

При А,< — Ав — — 2 /о у больного с неясной кли5 никой заоолевания отсутствует гепатит В, Предлагаемый способ является высокочувствитсльным и позволяет в 96%-тах поставить правильный диагноз у больных при поражениях печени неясной этиологии; способ техни10 чески несложен и нетрудоемок.

Способ диагностики вирусного гепатита В

15 путем смешения исследуемой крови с антикоагулянтом, приготовления двух проб, в одну из которых добавляют НВ-антиген, в другую — физиологический раствор, с последующей инкубацией и морфологической оценкой

20 повреждения клеток крови, отличающийся тем, что, с целью повышения чувствительности способа, после обработки антикоагулянтом выделяют одноядерные клетки и после инкубации определяют оощее число однояде рных

25 клеток и процентное содержание в них адгезивных клеток и при уменьшении процента адгезивных клеток по сравнению с контролем более 4% диагносцируют гепатит В.

1. Авторское свидетельство СССР No 513687, кл. А 61В 10/00, 1975.

35 2, Авторское свидетельство СССР K 438418, кл. А 61К 23/00, 1974.