Республик (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 09.01.76 (21) 2312116/23-04 с присоединением заявки № (23) Приоритет (43) Опубликовано 30.05.78. Бюллетень ¹ 20 (45) Дата опубликования описания 07.06.78 (51) М. Кл а С 07Н 19/04

Государственный комитет

Совета ййинистров СССР ао делам изобретений

: и открытий (53) УДК 547.857.1 455 (088.8) (72) Авторы изобретения P. И. Ефимова, С. Н. Загребельный, В. Ф. Зарытова, Д. Г. Кнорре, А. С. Левина, Э. Г. Лубенец, С. А. Позднякович, А. Г. Хмельницкий, С. М. Яснецкая, М. П. Ковалева и В. С. Гузик (71) Заявители Новосибирский государственный университет, Новосибирский институт органической химии Сибирского отделения АН СССР, Специальное конструкторско-технологическое бюро биологически активных веществ и Кемеровский научно-исследовательский институт химической промышленности (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ НУКЛЕОЗИД-5 -ДИ- ИЛИ

ТРИФОСФАТОВ

Изобретение относится к синтезу биологически активных веществ, а именно к усовершенствованному способу получения нуклеозид-5 -ди- и -трифосфатов, и может быть использовано при получении рибо- и дезоксирибонуклеозид-5 -ди- и -трифосфатов, необходимых для синтеза нуклеиновых кислот in vitro при иепользовании ферментативных систем и создании новых медпрепаратов.

Известны способы получения нуклеозид-5 ди- и -трифосфатов, основанные на превращении нуклеозид-5 -монофосфатов с использованием дициклогексилкарбодиимида (ДЦК) в более реакционноспособные нуклеозид-5 -фосфамиды, которые затем обрабатывают солями орто- или пирофосфорной кислоты. Целевой продукт получают через нуклеозид-5 -фосфоморфолиды. Как возможный вариант предполагаются нуклеозид-5 -фосфоанилиды, -пиперидиды, -имидазолиды и некоторые другие нуклеозид-5 -фосфамиды. После выделения из реакционной смеси нуклеозид-5 -фосфамиды обрабатывают солью орто- или пирофосфорной кислоты в диметилсульфоксиде (диэтилсульфоксиде) . Целевой продукт выделяют анионообменной хроматографией (1).

Однако такие способы сложны, нетехнологичны и требуют особых условий проведения процесса, так как включают работу с ДЦК, который является сильным аллергеном.

Прототипом изобретения является способ получения нуклеозид-5 -ди- или -трифосфатов, заключающийся в обработке пуклеозид-5 -монофосфата раствором ДЦК в трет-бутаноле при температуре не менее 100 С. Полученный

10 продукт отделяют от реакционной смеси и очищают осаждением, а затем нуклеозид-5 фосфамид взаимодействует с трибутиламмонийной солью орто- или пирофосфорной кислоты в среде сухого диметилсульфоксида, 15 смесь хроматографируют на анионообменной смоле с последующим выделением целевого продукта из элюатов (2).

Однако в этом способе используют ДЦК, который является сильным аллергеном; его

20 применение требует соблюдения особых условий производства, специально оборудованных помещений, спецодежды. Первая стадия известного способа проходит при температуре не менее 100 С. Кроме того, на стадии полу25 чения промежуточного продукта последний отделяют из реакционной смеси и дополнп608805 тельно очищают осаждением перед фосфорцлированием, что удлиняет процесс и значительно усложняет его технологию.

С целью упрощения процесса предлагается способ получения нуклеозид-5 -ди- или -трифосфатов, в котором ацилированный нуклеозид-5 -монофосфат в абсолютном пиридине последовательно обрабатывают полистиролсульфохлоридом и амином с последующим снятием ацильной защиты. При этом обычно используют полистиролсульфохлорид, предварительно набухший в пиридине в течение 3вЂ”

6 ч. Полученный нуклеозид-5 -фосфамид обрабатывают солью орто- илн пирофосфорной кислоты в среде органического растворителя при 35 вЂ” 40 С.

В качестве органического растворителя обычно используют абсолютный диметилформамид.

Полистиролсульфохлорид получают из сополимера стирола с дивинилбензолом (4О/о дивинилбензола, 0,6 /о изооктана).

Пример 1. Синтез уридин-5 -дифосфата.

1 г (1,6 ммоль; нуклеотидное содержание

78% ) 2,3-0-ацетилуридин-5 -монофосфата и

6 r полистиролсульфохлорида, предварительно набухшего в течение 5 ч при комнатной температуре в 80 мл абсолютного пиридина, встряхивают 14 ч при комнатной температуре. Полистиролсульфохлорид отделяют фильтрованием, промывают 50 мл абсолютного пиридина (5+10 мл), а маточный раствор добавляют в 20 мл очищенного пиперидина. Через 20 мин смесь упаривают до масла, которое упаривают последовательно с абсолютным пиридином (ЗХ15 мл) и с абсолютным бензолом (5) 15 мл). Полученный стекловидный остаток вводят в реакцию с трибутиламмонийной солью ортофосфорной кислоты (8 ммоль) в 16 мл абсолютного диметилформамида, смесь термостатируют при 37 С

18 ч, затем обрабатывают 20 мл 5 /о-ного водного раствора аммиака для снятия ацетильной защиты. Через 1,5 ч аммиак удаляют упариванием на ротационном испарителе и смесь хроматографируют на анионообменной смоле, ДЭАЭ-молселекте-А-25 в линейном градиенте концентраций бикарбоната аммония (О вЂ” 0,5 моля). Фракции основного пика объединяют, концентрируют, бикарбонат аммония удаляют упариванием с водой. Полученный остаток растворяют в 50 мл воды, лиофилизуют и получают 0,55 r (75О/О) уридин-5 дифосфата, нуклеотидное содержание 98 (1,2 ммоль) .

УФ-спектр: макс 261 р Хмин 230 vp, Продукт хроматографически однородный.

По данным бумажной хроматографии (БХ) в системе этанол вЂ” 1 М раствор ацетата аммония (5: 2) одно пятно Rg 0,15.

Пример 2. Синтез уридин-5 -дифосфата.

Аналогично примеру 1, но применяя вместо пиперидина 20 мл очищенного морфолина, из 1 r (нуклеотидное содержание 78О/о, 1,6 ммоль) 2,3 -0-ацетилуридин-5 -монофос5

З0

4 фата получают 0,53 r (70 ) уридин-5 -дифосфата с нуклеотидным содержанием 92 /о. По данным БХ продукт хроматографически однородный.

Пример 3. Синтез тимидин-5 -трифосфата.

Аналогично примеру 1, но применяя вместо

2,3 -0-ацетилуридин-5 -монофосфата 3 -0-ацетилтимидин-5 -монофосфат, а вместо трибутиламмонийной соли ортофосфорной кислоты используя ту же соль пирофосфорной кислоты, из 1 г 3 -0-ацетилтимидин-5 -монофосфата (нуклеотидное содержание 89О/о, 2,0 ммоль) получают 0,86 г (66 О/О ) тимидин-5 -трифосфата с нуклеотидным содержанием 93О/О.

УФ-спектр: Аман, 267 нр.

По данным БХ в системе изомасляная кислота вЂ” концентрированный аммиак вЂ” вода (66: 1: 3) продукт содержит одно пятно с

К 0,15, соответствующее тимидин-5 -трифосфату и следы тимидин-5 -дифосфата (R< 0,25).

В предложенном способе синтез нуклеозид5 -ди- или -трифосфатов проводят без ДЦК, что значительно упрощает процесс и увеличивает его безопасность, так как ДЦК обладает сильно выраженными аллергенными свойствами, особенно опасны его пары и растворы.

При получении целевых продуктов по предлагаемому способу отпадает необходимость выделения из реакционной смеси и дополнительной очистки промежуточного соединения, что значительно упрощает процесс, делает его более технологичным. Снижается также температура проведения процесса на стадии образования промежуточного нуклеозид-5 -фосфамида до комнатной.

Таким образом целевой способ значительно сокращает количество операций в процессе синтеза нуклеозид-5 -ди- или -трифосфатов.

Формула изобретения

1. Способ получения нуклеозид-5 -ди- или

-трифосфатов, включающий получение нуклеозид-5 -фосфамида, обработку его солью орто- или пирофосфорной кислоты в среде органического растворителя, отличающийся тем, что, с целью упрощения процесса, промежуточный нуклеозид-5 -фосфамид получают путем последовательного взаимодействия ацилированного нуклеозид-5 -монофосфата в среде абсолютного пиридина с полистиролсульфохлоридом и амином с последующим снятием а циль ной з а щиты.

2. Способ по п. 1, отлич ающийся тем, что используют полистиролсульфохлорид, предварительно набухший в пиридине в течение 3 вЂ” 6 ч.

3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что обработку нуклеозид-5 -фосфамида проводят в среде абсолютного диметилформамида при 35 вЂ” 40 .

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Патент США Ха 3534017, кл. 260 вЂ” 211.5, опублик. 13.10.70.

608805

Составитель Е. Николаева

Редактор В, Мирзаджанова. Техред A. Камышникова Корректор T. Добровольская

Заказ 688/12 Изд. Хз 428 Тираж 568

НПО Государственного комитета Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, ОК-35, Раушская наб., д. 4)5

Подписное

Типография, пр. Сапунова, 2

2. Moffat J. G. and Khorana Н. G. Synthesis

and Some reactionts of nucleotide-5 -phospho6

zomorpholidates. вЂ” «J. Amer. Chem. Soc.», 1961, 83, с. 649.

Способ получения нуклеозид-5-диили тирфосфатов

Способ денатурации дезоксирибонукл ей новых кислот и нуклеотидов // 398607

Производные индолопирролокарбазола, способы их получения и соединение // 2117671

Изобретение относится к производным индолопирролокарбазола общей формулы в которой R1 и R2 - каждый независимо H, низший алкил, низший алкенил, фенил, фенилалкил, пиридил или имидазолинил, причем каждая из групп низшего алкила, низшего алкенила, фенила, фенилалкила имеет необязательно от 1 до 5 заместителей, выбранных из карбокси, карбамоила, циано и гидроксигруппы; или группа -Y - R2, где Y - карбонил, тиокарбонил или сульфонил, и R3 - H, низший алкил, трифторметил, фенил, низшая алкокси, гидразино, амино, фениламино, карбамоил или пиридильная группа, причем низшая алкильная или фенильная группа имеют необязательно 1 - 4 заместителей таких, как гидроксигруппа, смежные гидроксигруппы, защищенные алкиленовой группой, карбокси или цианогруппа или R1 и R2 взятые вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют пиперазинильную или пирролидинильную группу, возможно, гидроксилзамещенную низшую алкильную группу, G - пентозная или гексозная группа, X1 и X2 независимо H или галоген, OH, низшая алкокси- или бензилоксигруппа

3'-замещенные производные нуклеозида, способ их получения (варианты), лекарственное средство, способ лечения и профилактики // 2130029

Изобретение относится к 3'-замещенному производному нуклеозида, представленному общей формулой (1), где Б представляет собой основание нуклеиновой кислоты, которое может иметь заместитель, Z представляет собой низшую алкинильную или низшую алкенильную группу, которые могут быть замещены группой, представленной общей формулой (2), в которой Ra, Rb и Rc одинаковы и представляют собой низшую алкильную или фенильную группу, R1 и R2, по отдельности, представляют собой атом водорода или бензоил и R3 представляет собой атом водорода, остаток моно- или полифосфорной кислоты или бензойной кислоты, при условии, что сахарная составляющая является рибозой, или его фармацевтически приемлемой соли

Производные 5,6-дихлорбензимидазола, способ их получения, фармацевтический состав и способ лечения и профилактики вирусных инфекций // 2145963

Изобретение относится к производным бензимидазола и их использованию в терапии, в частности, для лечения или профилактики вирусных инфекций, таких как вызываемые вирусами герпеса

Производные индола, лекарственное средство, их содержащее, способ их получения (варианты) // 2225396

Изобретение относится к ингибиторам тирозинкиназ типа бис-индолилсодержащих соединений формулы I где Z означает группу общей формулы II где A, B, X, Z, R1-R10 имеют значения, указанные в формуле изобретения, а также к способу их получения и лекарственному средству на основе этих соединений

Бициклические аналоги нуклеозидов, нуклеотидов и олигонуклеотидов // 2243231

Изобретение относится к LNA-модифицированному олигонуклеотиду, включающему по крайней мере один нуклеозидный аналог (LNA) общей формулы I, где X - -О-; В - нуклеотидное основание; Р - место присоединения межнуклеозидного “мостика” или 5’-концевая группа, которую выбирают из гидроксила, монофосфата, дифосфата и трифосфата; R3 или R3* - межнуклеозидный мостик 3’-концевая группа; и R2* и R4* - бирадикал, выбираемый из -(CR*R*)r-O-(CR*R*)s-, -(CR*R*) r-S-(CR*R*)s-, -(CR*R*)r-N(R*)-(CR*R*) s-, при этом каждый из R1*, R2 , R3*, R3, R5* и R5 , не участвующих в образовании бирадикала или межнуклеозидного “мостика”, обозначает водород, галоген, гидрокси, меркапто, амино, азидо; или R2 и R3 - бирадикал -(CR*R*) r-O-(CR*R*)S-, при этом R2* выбирают из водорода, гидрокси и необязательно замещенной С 1-6алкокси группы, a R1*, R4*, R 5 и R5* - водород; где каждый из r и s равен 0 - 4, при условии, что сумма r+s равна 1 - 4, а каждый R* представляет собой водород или C1-6алкил; или его основной соли или кислотно-аддитивной соли

Новый способ ингибирования роста вирусов и/или вирулицидный способ и новый аналог пиразиннуклеотида или пиразиннуклеозида // 2292894

Циклические биоизостеры производных пуриновой системы и их применение в терапии // 2374248

Изобретение относится к циклическим биоизостерам производных пуриновой системы, имеющих общую структурную формулу, приведенную ниже, где R1=-Н, -NH2, -Br, -Cl, -ОН, -СООН; А=-N- при В=-N=, Z=-СН-; А=-СН= при В=-N=Z=-СН-; А=-СН= при В=-N=, Z=-N=; А=-СН= при В=-СН=, Z=-СН=; А=-СН= при В=-СН=, Z=-N=, за исключением соединений, в которых А=-СН= при В=-СН=, Z=-СН=, R=Li, Na или К и R'=-NH2 в 5-ом положении бензо[d]-3Н-пиридазин-1,4-дионового ядра, и его фармакологически приемлемым солям, обладающим нормализующим действием на внутриклеточные процессы

Тетрациклические антибиотические производные антрахинона с высокой активностью, способ их получения и их применение // 2455307

Изобретение относится к тетрациклическим антибиотическим производным антрахинона с противораковой активностью

Способ получения пиридиновых нуклеозидов // 2036199

Изобретение относится к пиримидиновым нуклеозидам, используемым в медицине, в частности, для лечения и профилактики вирусных заболеваний герпеса

Соединения и фармацевтические композиции для лечения вирусных инфекций // 2466729