Способ обработки мышечной ткани для диагностики нервно- мышечных заболеваний

 

О П И С А К И Е,бац()1д

ИЗЬБРЕТЕ Н ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалистичесиик

Республни

{61) Дополнительное к авт.свид-ву (22) Заявлено 31.03.78 (21) 2597390/28-13 с присоединением заявки ¹ (28) Приоритет (51) М. Кл.

А 61 В 10/00

Гееудвретвеииый комитет

СССР

10 делам изобретений н открытий

Опубликовано 07.03.81 Бюллетень ¹ 9

Дата опубликования описания 09.03.81 (58) УДК 616-079..4 (088.8) (72) Авторы изобретения

А. П, Хохлов и В. К . Малаховский (71) Заявитель

Первый московский ордена Ленина н ордена Трудового Красного

Знамени медицинский институт им. И. М. Сеченова (54) СПОСОБ ОБРАБОТКИ МЫШЕЧНОЙ ТКАНИ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ

ФОРМ НЕРВНΠ— МЫШЕЧНЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ

Изобретение относится к области медицины, а именно к неврологии.

Известен способ обработки мышечной ткани для диагностики форм нервно-мьпиечных заболеваний, включающий гомогениэацию образца в буфере и центрифугирование 1.Ц.

Однако известный способ не позволяет одновременно диагностировать отдельные формы первичных и вторичных миопатий.

Целью изобретения является одновременная диагностика отдельных форм первичных и вто-1О ричных миопатий.

Эта цель достигается тем, что центрифугат диалиэуют, вводят меченый циклический аденозинмонофосфат в концентрации 0;3 — 20,0 М,I5 инкубируют при температуре 0 — 2 С, фильтруют через мембранные фильтры, погружают в раствор сцннтиллятора.

Пример 1. Больной М. Предварительный диагноз при поступлении — миопатия Эрба. Диагноз установлен на основании электрофизиологических, генетических, морфологических и биохимических исследований.

Методом игольчатой биопсии получают 10мг мышечной ткани. Ткань немедленно на холоду: гомогенизируют в буфере, содержащем 10 мм трис-HCI, 1 м ДЭДТА рН 7,4. Полученный гомогенат центрифугируют на холоду при 45 тыс. об/мин. Супернатант помещают на диалиэ против 50-кратного обьема буфера гомогениэации на 12 — 14 ч при 0 С. Затем

50 мкл диализата (50 — 100 мкг белка) вносят в раствор буфера гомогениэации, содержащего 150 мкл Н цАМФ различной концентрации (от 20 10 до 0,3 ° 10 М). Растворы готовят методом серийных разведений. Пробы инкубируют 2 ч при 0 С, затем фильтруют через мембранные фильтры " Сынпор" с диаметром пор 0,4 мк. Константу диссоциации

Кд комплекса циклического аденозинмонофосфата цАМФ вЂ” протеинкиназа вычисляют по методу Лайнувера-Берка.

Величина Кд оказалась 1,02 ° 10 М, т.е. входит в диапазон величин, характерных для вторичной миопатии. В процессе клинического наблюдения диагноз спинальной амиотрофии был подтвержден.

689013 4 патий, исключает травмирующие больного про цедуры, т.к. требует минимального количества мышечной ткани для анализа (5 — 10 мг); позвеляет сократить и существенно упростить объем и время исследования.

Формула изобретения

Составитель С, Малютина

Редактор М. Кузнецова Техред Л. ПекаРь Корректор М. Демчик

Заказ 567/7

Тираж 687 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретена.", и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП "Патент", r. Ужгород, ул. Проектная, 4

Пример 2. Больной С. Поступил в стационар с предположительным диагнозом миопатия Дюшена.

Используя предлагаемый способ, установилн Кд комплекса цАМФ вЂ” протеинкиназа, которая оказалась равной 6,2 ° 10 а М, что соответствует диапазону величин, характерных для мнопатии Дюшена. В дальнейшем поставленный диагноз был подтвержден.

Пример 3. Больной М. При поступлении в стационар на основании комплекса клинических биохимических, морфологических и электрофизиологических методов исследования был установлен диагноз миопатияЭрба.

Кд, определенная предлагаемым способом, оказалась равной 0,34 10 М, что характер но для миопатнн Эрба. Поставленный на основании предложенного способа диагноз полностью коррелировал с предварительно установленным в процессе клинического обследования больного.

Предлагаемый способ позволяет повысить точность распознавания различных форм миоСпособ обработки мышечной ткани для

1о диагностики форм нервно-мышечных заболеваний, включающий гомогенизацию образца в буфере и центрифугирование, о т л и ч а юшийся тем, что, с целью одновременной диагностики отдельных форм первичных и вторичных миопатий, центрифугат диалиэуют, вводят меченый циклический аденоэинмонофосфат в концентрации 0,3 — 20,0 М, инкубируют при температуре 0 — 2 С, фильтруют через мембранные фильтры, погружают в раствор сцинтиллятора.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Вестник АН СССР,N 7, 1973, с. 38.