Способ лечения гнойно-хирургических инфекций

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИ ИТЕДЬСТВУ

Союз Советскнк

Соцналнстнческнк

Республнк (n) 745524 (61) Дополнительное к авт. свид-ву— (22) Заявлено 160678 (21) 2630660/28-13 с присоединением заявки ¹â€” (S1)М. Кл.

A 61 К 39/12

Государственный комитет

СССР но делам изобретений и открытий (23) Приоритет г

Опубликовано 070780. Бюллетень ¹ 2Б (53) УДК 616-08 (088. 8) Дата опубликоваиияописания 10.07.80 (72) Авторы изобретения

Л. Д. Перемитина, Э. A. Берилло и A. Г. Хволес

Государственный научно-исследовательский институт стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им. Л. A. Тарасевича (71) Заявитель (54) СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ГНОЙНО-ХИРУРГИЧЕСКИХ ИНФЕКЦИЙ

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для лечения больных раневыми инфекциями.

Известен способ лечения гнойнохирургических инфекций с помощью бактериофага (1).

Однако известный способ лечения длителен (60,7 дней), а положительные реэультатй лечения лишь в 65% случаев.

Целью изобретения является сокращение сроков лечения.

Эта цель достигается тем, что используют монофаг с литической активностью, усиленной 2-3-х кратным пасси рованием на питательных средах, и адаптированный к микрофлоре больного.

Пример. От больных с абсцессами, флегмонами, маститами, карбункулами, остеомиелитами и др. хирургическими заболеваниями выделяют возбудителей из содержимого раны с помощью ватно-марлевого тампона. Среди испытуеьых фагов (стафилофаг, стрептофаг, колифаг, синегнойный и протейиые фаги) отбирают наиболее активные клоны и затем литическая активность отобранных монофагов усиливается"путем пассажей на выделенных от даМного больного возбудителях с применением твердых и жидких питательных сред.

Для этого исследуемую культуру бактерий, предварительно выделенную иэ раны при посеве ее содержимого с тампона, засевают в пробирку с мясо-пептонным бульоном. Эту культуру инкубируют 3-4 ч до концентрации микробных клеток, равной 1 млрд. микробных клеток в 1 мл стандарта. Затем бульонную культуру после инкубации засевают на мясо-пептонный агар в чашке Петри.

Стекло дна чашки расчерчивают на клетки, количество которых соответствует. количеству фагов, имеющихся в наборе, а затем чашки подсушивают в термостате с открытой крышкой 20-30 мин.

Далее пастеровской пипеткой или петлей наносят различные фаги (стафилофаг, стрептофаг, колифаг, синегнойный или протейный фаги) B зависимости от вида культуры на поверхности питательного агара в чашке Петри, засеянного испытуемой культурой. После подсыхания капель фагов 10-20 мин чашку переворачивают крышкой вниз и инкубируют не менее 5-6 ч при 37 С

0 до появления зон просветления в местах нанесения фагов. После инкубации

745524 производят отбор Фага из наиболее четко ныраженных зон лизиса на поверхности газона испытуемой культуры

Для последующего получения соответствующих фаголизатов используют метод агароных слоев по Грациа. В этом случае применяют 1,2%-ный мясо-пептон ный агар, на поверхности которого разливают 0,7%-ный предварительйо растопленный и охлажденный до 45-48 мясо-пептонный агар с предварительно внесенной в него тщательно перемешанной смесью 0,1 мл бульонной культуры и 0,5 мл специфического для данной культуры фага. После застывания верх него слоя агара чашку Петри, перевернутую крышкой вниз инкубируют при

37ОC причем для оценки результата опыта обращают внимание либо йа об-разование зон лизиса на поверхности агара, либо на отсутствие- роста культуры в этом же arape. После 1820 ч инкубации последоватИ ьно снимают и переносят в стерильный Флакон

" -errivan8 "верхний слой агара, а затем смыв с поверхности нижнего" слоя "агара в объеме 5 мл мясо-пептонного бульона. Полученную смесь агара в стерильном Флаконе периодически встряхивают в течение 30 мин. Эту смесь затем центрифугируют 30 мин при

3000 об/мин. Надосадочную жидкость переносят в стерильный флакон. 3атем Фаголизат очищают от бактериальных клеток. Для этого производят Фильтрацию фаголизата при помощи вакуум ного насоса через бактериальные свечи (лучше всего использовать свечи

Шамберлена) .

Бактериальные свечи предварительно стерилизуют вместе с приемником н автоклаве текучим паром.

С целью усиленйя литической активности монофагов проводят не менее 2=

3 пассажей на плотной питательной

"среде в чашках Петри, засеянййх ис- пытуемой культурой с вновь полученным монофагом по указанному способу.

Кроме твердых питательных сред можно использовать и жидкие питательные среды. 8 этом случае в 4,5 Мл мясо пептонного бульона вносят 0,5 мл то- . го или иного фага (стафилофаг, стрептофаг, колифаг,. синегнойный и протейный фаги) и 0,1 мл выделенной от больного бульонной культуры, инкубированный до 3-4 ч в.термостате. Эту смесь выдерживают при 37 С и сравнивают со степенью мутности контрольного бульона, заражейногО иСПытУемыми бактериями без добавления в него фага. В результате сравнения опытной и контрольной пробирок устанавливают наличие лиэиса культур. Подобный процесс повторяют 2-3 раза и тем са мым пассируют фаг в жидкой питатель-, ной среде, повышая его литическую активность путем пассажей на выделенных от данного больного возбудйте/ лях. Полученные адаптированные монофаги после усиления литической ак; тивности проверяют на стерильность и активность. Титронание фага проводят с целью определения количества зре5 лых фаговых частиц в единице объема (титр фага) . Для этого используют либо плотные питательные среды, либо жидкие питательные среды. НайболЕе распространенным и точным является метод агаровых слоев, предложенный

Грациа. Этот метод основан на допущении, что каждая частица вируса да:ет потомство, определяемое визуально . по наличию на газоне чувствительной культуры бактерий зон лизиса, полуf5 чивших название негативных колоний. благодаря данному методу устанавливают колйчество фагоных частиц, способных образовывать негативные колонии.

При титрованйй методом агаровых слоев

3) следует параллельно засевать не менее двух чашек фагом из одного и того же разведения. Титр фага определяют путем подсчета числа негативных колоний на параллельных чашках. Титр мо 5 .нофагов (их активность по Аппельману) обычно соответствует для стафилококков 10, для стрептококков 10 для протея 10 4, для синегнойных палочек 10 ", для энтеропатогенных кишечных палочек 10 6 .

Предлагаемый способ лечения предусматривает применение препаратов монофага либо местно в виде орошения, примочек или тампонирования, либо парэнтерально (подкожно или внутримышечно). В первом случае сначала промывают рану перекисью нодорода и высушивают раненую поверхность, а затем удаляют пинцетом из раны рыхлую некротическую ткань. Края раны

40 при этом обрабатывают настойкой йода, после чего смоченным монофагом в количестве 7-8 мл тампоном рыхло тампонируют рану. При абсцессах монофаги применяются местно после вскрытия и дрегирования гнойника путем смачивания тампонов, нводимых в рану, или путем промывания монофагом гной-. ной полости. В другом случае, например при карбункулах, эти препа5О раты можно вводить непосредственно в очаг под основанием инфильтрата путем обкалМвания.. Продолжительность лечения адаптированными монофагами зависит от тяжести заболевания, специфики возбудителя и своевременности

55 лечения. При раненых инфекциях средней тяжести курс лечения монофагами не превыаает 2-3 недель.

Предлагаеьый способ лечения приводит к более быстрому течению ращ невого процесса. Как показали клинические испытания, все больные (30 чел.), леченные с примененйем монофагов, провели в клийике 1123 койкодня, что на одного больного составляет 30,7 дней, а такое же количест 745524

Формула изобретения

Составитель С. Малютина

Редактор С. Тараненко Техред Л. Теслюк Корректор М. Шароши

Заказ 4048/3 Тираж 673 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП Патент, r. Ужгород, ул. Проектная, 4 во Ъольных, леченных с применением производственных фагов (полифагов), находились в стационаре 1823 койкодня, что составляет экономию в

700 койко-дней при госпитализации укаэанного количества больных хирургическими инфекциями (30 чел.). Кроме того, у больных, леченных монофагами, гладкое заживление раны после наложения ранних вторичных швов наступало у 10-ти чел, а в другой группе больных, леченных, такого результата удалось добиться лишь у двух больных. Иэ группы больных, леченных адаптированными монофа« гами, лишь двое выписано на амбулаторное лечение с незажившими ранами, в то время как в группе больных, леченных полифагами, таких больных оказалось ll. Способ лечения монофагами прост и дает возможность быстрого приготовления специфического антибактериального препарата. Все это позволяет широко испольэовать предла гаечный способ лечения в условиях многих хирургических стационаров °

Способ лечения гнойно-хирургических инфекций с помощью бактериофага, отличающийся тем, что, с целью сокращения сроков лечения, используют монофаг с литической активностью, усиленной 2-3-х кратным пассированием на, питательных средах, и адаптированный к микрофлоре. больного.

Источники инфопмацни, принятые во внимание при экспертизе

1. Казанский медицинский журнал, 1972, 9 2, с. 25-27.