Способ получения поливалентной агглютинирующей о-сыворотки для микробиологического контроля пивоваренного производства

 

Союз Советских

Социалистических

Республик

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ABTOPCNOhAY СВИДЕтИЛЬСтВЬ

<>789116 (61) Дополнительное к авт. свид-ву— (22) Заявлено 100778 (21) 2643067/28-13 с присоединением заявки м 2654119/13 (23) Приоритет—

Опубликовано 23.1280. Бюллетень 89 47

Дата опубликования описания 2 3.12.80

A 61 К 39/40

ГосударствеииыН комитет

СССР по делаи изобретеиий и открытий (53) УДК 615 . 373. 34 (088. 8) (72) Автор изобретения

A . .А. Березовский

/, Харьковский филиал Всесоюзного научно-исследовательского института пиво-безалкогольной промышленности (71) Заявитель (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПОЛИВАЛЕНТНОЙ АГГЛИТИНИРУ!ОЩЕЙ

О-СЫВОРОТКИ ДЛЯ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО КОНТРОЛЯ

ПИВОВАРЕННОГО ПРОИЗВОДСТВА

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано при микробиологическом контроле пивоваренного производства.

Предложенный способ новый и в научно-технической и патентной литературе не описан.

Целью изобретения является получение поливалентной агглютинирующей О-сыворотки для микробиологического контроля пивоваренного производства, в частности для идентификации молочно-кислых и уксусно-кислых бактерий.

Эта цель достигается тем,что животных-.продуцентов иммунизируют возрастающими дозами полиантигенного препарата, полученного путем смешения в равных соотнощениях О-антигенов, выделенных иэ различных серологических групп одного вида бактерий, предварительно обработанных кипячением в течение 2,0-2,5 ч, при этом иммунизацию ведут двумя циклами по четыре инъекции с интервалом между циклами 12-14 дней, а между инъекциями 5-6 дней, причем первую инъекцию проводят подкожно, а все последующие — внутривенно.

Кроме того, с целью получения полиантигенной О-сыворотки для идентификации молочно-кислых бактерий, продуценты иммунизируют полианти5 генным препаратом, содержащим 0-антигены молочно-кислых бактерий серологических групп B,С,Д и Е.

A c целью получения полиантигенной О-сыворотки для идентификации

10 уксусно-кислых бактерий, продуценты иммунизируют полиантигенным препаратом, содержащим О-антигены, выделенные иэ Acetobacter aceti, Acetobacter suboxydans, Acetobacter meso—

xydaus.

Пример. Для получения О-антигенов культуры молочно-кислых бактерий серологических групп В,С,Д,Е выращивают на твердой питательной среде. Используют среду следующего состава, г/л: дрожжевой автолизат

50,0 мл, г -.юкоза 20,0, пептон 10,0ег, КН Р04 2, О, аммоний лимоннокислый

2,0; М950д, 7Н О ° 0,2, Мп504 4Н О "

25 .0,05; агар 20,0; неохмеленное солодовое сусло плотностью 6-8 остальное. е

Через 48 ч инкубирования при 30 С в культуры смывают с агара и отмывают

2- 3 раз а от пит ат ель ной среды 0, 85 Ъ

789116 раствором NaC1, доводят микробные суспенэии до концентрации 3-4 млрд микробных тел в 1 мп и кипятят 2

2,5 ч на водяной бане при 100 С.

Перед иммунизацией животных 0-антигены молочнокислых бактерий сероло. гических групп В,С,Д,Е смешивают в равных соотношениях по количеству микробных тел. Таким образом получают полиантигенный препарат.

Для получения сыворотки берут следующие штаммы молочнокислых бактерий. Lactobacillus case, var casei 8KM-1144; L.case, var. rhamnosus

BKM S-574; L. plantarum 8KM 8-578;

brevis ВКМ 8-572.

Схема иммунизации следуюшая.

I цикл. Инъекция полиантигена подко>кно-доза 2 млрд.микр. тел, внутривенно — доза микр.тел 500 млн:

1 млрд., 2 млрд. !! цикл. Инъекция полиантигена внутривенно — доза, млрд. микр.тел:

2,3,4,6.

Интервал между инъекциями в цикле 5 дней,а между циклами 12 — 14 дней

На седьмые-восьмые сутки после последней инъекции животных обескровливают и отделяют сыворотку крови. Для этого кровь, собранную в стерильные пробки, ставят на 30-40 мин в термостат при 37 С, а затем в холодильник (при 4 С) на 3-4 ч. После полного отделения сыворотки от сгустка крови ее отсасывают пастеровской пипеткой.

Для лучшего хранения сыворотку фильтруют через бактериальный фильтр Зейтца или консервируют мертиолятом 1:100000.

Сыворотку проверяют на наличие титра антител ко всем антигенам, входящим в состав полиантигена °

Титр антител к каждому 0-антигену, входящему в состав полиантигена, должен быть не менее 1:2048.

Поливалентную сыворотку применяют для идентификации молочно-кислых бактерий в исследуемых образ— цах с помощью реакции .агглютинации на стекле. Перед идентификацией бактерий сыворотку разводят 1:5 стерильным 0,85% раствором NaCl.

Для постановки реакции агглютинации берут обезжиренные предметные стекла и на поверхность стекла наносят

2 капли сыворотки и каплю физиологического раствора (0,853 р-ра NaC1).

В каплю физиологического раствора (контроль антигена) и в одну иэ капель поливалентной агглютирующей

0-сыворотки вносят исследуемую бактериальную суспенэию (антиген) . Ko второй капле (контроль сыворотки) культуру не добавляют. Внесенную суспенэию тщательно перемешивают, чтобы капля жидкости сделалась равномерно мутной. Реакция протекает при комнатной температуре, но лучше протекает при подогреве до 37 С.

Результат учитывают с помощью лупы или микроскопа через 5-10 мин. При положительной реакции в капле с сывороткой отмечается скручивание бактерий в виде зернышек или хлопьев хорошо видимых при покачивании стекла. Жидкость в контроле антигена должна быть равномерно мутной, а в контроле сыворотки прозрачной. Поло- жительная реакция агглютинации сви детельствует о присутствии в исследуемых образцах молочно-кислых бактерий серологических групп В,С, Д,Е.

Полиантигенную 0-сыворотку для идентификации уксусно-кислых бактерий получают так же, как в примере.

Для иммунизации используют полиантигенный препарат, содержащий 0-антигены выделенные из Асеtobacter асеti;

20 Acetobacter suboxydants, Acetobacter

mesoxydans.

Полученная сыворотка содержит антитела, которые способны образовывать специфические соединения с мик25 роорганизмами А.aceti, A.suboxydans

u A. mesОxydaпs. у полученной сыворотки проверяют наличие титра антител, ко всем антигенам, входящим в состав полиантигена. Титр антител к каждому 0 †антигену, входящему в состав полиантигена, должен быть не менее 1:1024.

Идентификацию уксуснокислых бактерий проводят так же, как и в примере.

Результаты проверки чувствительности и специфичности поливалентной агглютинирующей 0-сыворотки для микробиологического контроля пивоваренного производства показывают, что

4Q 0-сывороткой можно быстро и легко идентифицировать различные молочнокислые и уксуснокислые бактериивредители пивоваренного производства.

Предлагаемый способ обеспечивает получение высокоактивной поливалентной сыворотки с помощью которой предприятия пивоваренной и других отраслей пищевой промышленности смогут быстро (в течение 20-30 мин) выяв5О .лять молочнокислые и уксуснокислые бактерии-вредители на различных стадиях производства, что даст возможность своевременно принимать необходимые меры для устранения возможности распространения инфекции, которая может привести к порче большого количества пива.

Формула изобретения

1. Способ получения поливалентной агглютинирующей 0-сыворотки для микробиологического контроля пивоваренного производства, з а к л ю ч а юшийся в том, что животных — про789116

Составитель С.Малютина

Редактор С.Патрушева Техред М.Рейвес

Корректор М.Демчик

Заказ 8920/3 Тираж 673

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035,Москва,Ж-35,Раушская наб.,д.4/5

Подписное

Филиал ППП "Патент",г.ужгород,ул.Проектная,4 дуцентов иммунизируют возрастающими дозами полиантигенного препарата, полученного путем смещения в равных соотношениях О-антигенов, выделенных из различных серологических групп одного вида бактерий, предварительно обработанных кипячением в течение

2,0-2,5 ч, при этом иммунизацию . ведут двумя циклами по четыре инъекции с интервалом между циклами 12-14 дней, а между инъекциями 5-6 дней, причем первую инъекцию проводят подкожно, а последующие — внутривенно.

2. Способ по и. 1, о т л и ч аю шийся тем, что, с целью помучения полиантигенной 0-сыворотки для идентификации молочно-кислых бактерий, продуценты иммунизируют полиантигенным препаратом, содержащим

0-антигены молочно-кислых бактерий серологических групп В,С,Д и Е.

3. Способ по п.1, о т л и ч а— ю шийся тем, что, с целью получения полиантигенной О-сыворотки для идентификации уксусно-кислых бактерий, продуценты кммунизируют полиантигенным препаратом, содержащим

О-антигены, выделенные из Acetobacter aceti, Acetobacter suboxydaus, Acetobacter mesoxydaus.