Способ консервирования лейкоцитов

 

Союз Советскик

Социалистические

Республик

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ ()!)825081 (61) Дополнительное к авт. свид-ву— (51) М.К . (22) Заявлено 07.02.79 (21) 2750275/28-13

А 61 К 35/14 с присоединением заявки №вЂ” (23) Приоритет—

Гееудерстеенные кемнтет (53) УДК 615.45 (088.8) Опубликовано 30.04.81. Бюллетень № 16

Дата опубликования описания 05.05.81 м,еелем нэееретени» и еткрытнм

Н. С. Пушкарь, Г. С. Лобынцева, Е. И.

И. А. Вотякова и Б. А. Скорня (72) Авторы изобретения

/ ." 1.: ! .. :: ":,: ;,. )

Институт проблем криобиологии и криом дицитты" "-:,....

АН Украинской CCP б (71) Заявитель (54) СПОСОБ КОНСЕРВИРОВАНИЯ ЛЕЛКОЦИТОВ

Изобретение относится к медицине, а именно гематологии.

Известен способ консервирования лейкоцитов путем замораживания в присутствии полиэтиленоксида

Однако известный способ не обеспечи5 вает высокои жизнеспособности лейкоцитов.

Цель изобретения — повышение жизнеспособности лейкоцитов.

Указанная цель достигается тем, что консервируют лейкоциты путем замораживания 1О в присутствии полиэтиленоксида, лейкоциты смешивают с 4,5 — 5,0%-ным полиэтиленоксидом, обрабатывают ультразвуком частбтой

800 — 900 кГц и мощностью 0,2 — 0,4 Вт/см в течение 50 — 70 с и выдерживают с криопротектором в течение 7 — 11 мин.

Способ осуществляют следующим образом.

К подготовленной лейкомассе добавляют

4,5 5%-ный криопротектор ПЭΠ— 400 и затем обрабатывают ультразвуком частотой

800 — 900 кГц мощностью 0,2 — 0,4 Вт/см в течение 50 — 70 с при 20 — 22 С. После этого осуществляют эквилибрацию с криопротектором в течение 7 — 11 мин.

Обработанную таким образом лейкомассу разливают в контейнеры и замораживают до — 196 С по двухэтапной программе: на 1 этапе со скоростью 1 — 2 С/мин от + 20 С до температуры первичной кристаллизации с последующей выдержкой на плато в течение 5 — 7 мин, а на 2 этапе — от точки кристаллизации до — 196 С погружением в жидкий азот.

Отогревают на водяной бане при 40 — 42 С.

Пример. Подготовленную лейкомассу разделяют на три части. Первую порцию оставляют нативной, ко второй приливают

4,6%-ный криопротектор ПЭО-400, а к третьей добавляют 4,6%-ный ПЭО-400, а затем обрабатывают ультразвуком частотой

800 кГц, мощностью 0,4 Вт/см в течение

65 с при 22 С. Эквилибрация с криопротектором во 2 и 3 порциях составляет 8 мин.

Обработанную таким образом лейкомассу разливают в металлические контейнеры объемом 50 мл и полиэтиленовые ампулы по 1 — 1,5 мл и замораживают по двухэтапной программе: на 1 этапе — со скоростью 2 С/мин от 20 С до температуры первичной кристаллизации с последующей выдержкой на плато в течение 5 мим, на

825081

Формула изобретения

Составитель С. Малютина

Техред A. Бойкас Корректор Г. Решетник

Тираж 687 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж вЂ” 35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП <<Патент», г. Ужгорбд, ул. Проектная, 4

Редактор Л. Филь

Заказ 2384 39

2 этапе — от точки кристаллизации до — !96 с погружением в жидкий азот. Материал хранят в жидком азоте в течение

10 суток, отогревают на водяной бане при

42 С.

Для определения жизнеспособности и функциональной активности клеток лейкоцитов до замораживания, а также после хранения их при низкой температуре (— 196 С) используют следующие методы: подсчет ядросодержащих клеток в камере

Горяева; супровитальное окрашивание

1в/о-ным водным раствором эозина по Шреку; подсчет лейкограмм, качественная оценка мазков; исследование электрокинетических свойств клеток после консервации; изучение фагоцитарной активности нейтрофилов; исследование миграционной активности лейкоцитов; исследование дыхательной функции лейкоцитов на распирометре автоматизированном универсальном.

Клетки, обработанные ультразвуком, сохраняют миграционную активность и способность к фагоцитозу на уровне контрольных образцов. Потребление кислорода после низкотеыпературного консервирования составляет 25 — 3,9 (контроль †нативн клетки

27,1+4,9), после замораживания с 4,6 /о-ным

ПЭО-400 14,0+ 2,6. Процент жизнеспособных клеток составляет 93,7+2,3 (контроль — клетки с ПЭО-400 без озвучивания

79,8 — 4,6) .

При анализе лейкограмм отмечают сохранение всех клеточных форм лейкоконцентрата.

Предлагаемый способ позволяет повысить качество размороженного материала и количество сохранившихся клеток после низкотемпературного консервирования на 13,9о/о

10 и может быть использован для повышения эффективности низкотемпературного консервирования ядросодержащих клеток крови с меньшей концентрацией криопротектора.

Способ консервирования лейкоцитов путем замораживания в присутствии полиэтиленоксида, отличающийся тем, что, с целью повы20 шения жизнеспособности целевого продукта, лейкоциты смешивают с 4,5 — 5,0 /ополиэтиленкосидом, обрабатывают ультразвуком частотой 800 — 900 кГц и мощностью 0,2—

0,4 Вт/см в течение 50 — 70 с. и выдерживают с криопротектором в течение ? — 11 мин.