Способ определения тканевой несов-местимости донора и реципиента

 

ii) 828087

ОП ИСАН И Е

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалистических

Республик (61) Дополнительное к авт. свил-ву— (22) Заявлено 19.06.79 (21) 2784380. 28-13 с присоединением заявки Ле— (23) Приоритет— (43) Опубликовано 07.05.81. Бюлл"zen» Хо 17 (45) Дата опубликования описания 07.05.81.,Ч 1,б

G 01 N 3352

Государственный комитет (53) УДК 612.6.02 (088.8) оо делам изобретений и открытий (72) Авторы изобретевии P Л Розенталь, И. М. Ильинский и Т F.. Тикоьсироаа (71) Заявитель

Рижский медицинский институт (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТКАНЕВОИ

НЕСОВМЕСТИМОСТИ ДОНОРА И РЕЦИПИЕНТА

Изобретение относится к медицине, а именно к способам определения тканевой несовместимости донора и реципиента при пересадке органов.

В настоящее время в клинике при лечении хронической почечной недостаточности широко проводят пересадку почки. Однако в ряде случаев пересадка почки бывает неудачной из-за тканевой несовместимости донора и реципиента, проявлением которой является развитие реакции отторжения.

Известен способ определения тканевой несовместимости донора и реципиента, сопровождающийся реакцией сверхострого отторжения трансплантанта путем постановки лимфоцитотоксической реакции (1).

Способ заключается в том, что чистую взвесь лимфоцитов донора емешивают с сывороткой реципиенга и инкубируют в течение 30 мин в термостате при 37= С, затем добавляют кроличий комплемент и опять проводят инкуоацию при тех же условиях, прибавляют раствор трипановото синего и после 15 мин выдерживания при

37 С и 30 мин при комнатной температуре микроскопируют. При наличии поврежденных лимфоцитов (окрашенных трипановым синим), констатируют присутствие в сыворотке предполагаемого реципиента анти2 тел-лимфоцитоксинов и делают вывод о несовместимости пары донор — реципиент.

Недостатком этого способа является то, что в ряде случаев даже при отрицательной лимфоцитотоксической реакции развивается сверхострое отторжение трансплантата.

Целью изобретения является повыше1р ние точности способа.

Поставленная цель достигается тем, что в способе определения тканевой несовместимости донора и реципиента сыворотку крови реципиента наносят на срезы почки 15 донора, инкубируют их во влажной камере при 20 — 22 С в течение 25 — 30 мин, далее на препарат наносят люминесцирующую сыворотку против глобулинов человека, проводят повторную инкубацию, затем об2р рабатывают ацетоном и при наличии специфического люминесцентного свечения определяют тканевую несовместимость донора и реципиента.

Способ осуществляют следующим обра25 зом, Нефиксированный кусочек донорской почки замораживают углекиелотой или жидким азотом и приготавливают срез толщиной 4 — 10 мкм. Расправляют его на предметном стекле и фиксируют в ацетоне

Зр в течение 10 мин. Срез быстро подсуши828087

"0

35

4;>

5Э

Тираж 915

Изд, № 296

Заказ 3140

Подписное

Загорская типография Упрполиграфиздата 1oco6лисполко>са

»1110т 1111»03;!ухе, наllосят 11а нс ГО 11CHIIBKтивирo»;IIIIIyin сыворотчсу предполагаемо1 о реципиента и инкубируloT»o HëBæHoé камере прп 20 22 С» течение 25 — 30 мин.

Сливают со среза сыворотку, иромываIoT 0I0 в течение 5 IIIH в больших объема:

»оды, подсушивают, IIB!Ioc51T Iio ;èliåcöHðóющую сыворотку против глооулино» человека и инкуоируют во влажной камере при 20--22 С в течение 25 — 30 мин. Сливан>т со среза сыворотку, промывают в течение 5 3IIII!» больпшх объемах воды, обрабатывают в те Ici»lc иесколькиi секунд ацетоном.

ПодсуlllcIIII»III, срез после обработки ацетоном исследуют в падающем синем свете люмипесцентного микроскопа.

Способ иллн>стрирустся следуницими примерами.

Пример 1. Больной !1. И. П,, 1948 года рождения, история болезни ¹ 5038, поступил во 2-е отделение 6 марта 1978 г. для переса 1ки почки в связи с x1)OIIH÷åpêîé почечной недостаточностью, развившейся в результате крош!чсского гломерулонеф1) HT1l, (> и)с) !111 1 978 г. 61 I, III 111)оизведс на пс-!

>есадна трупной почки. Лимс1)01!итотоксичс ска l рс акция была отрицательной. При с>бработке с!)езо» до1»орской по lie!i пс предлагаех!о>1у способу было выявлено спсци-!

1) и|!с )сос евсцс IIIII б)1! зал! ных !P) II> >Bн а„

llllлляро» 1сг!уб>оч)сов, что указывало на Нрпригодность данной донорской почки рсциГ1, 11, !. 1 1313!1.!ась свсрхост1>а>! реакция отторжения почечного аллотрансплантата. его функция полностью отсутствовала. 14 июня 1978 г. нас3упил11 смерть больного.

Пример 2. Больной K. В. Л., 1950 гоIB рождения, история ¹ 7197 лечился во

2-м отделении по поводу «ропической почечной недостаточноети в связи с хроническим пиелонефритом. Было проведено 174 се ьнса экстракорпорального гемодиализа.

В апреле 1977 г. была произведена первая пересадка почечного аллотрансплантата.

В июне 1977 г. было произведено удаление псрвого почечного аллотрансплантата в связи с острой реакцией отторжения.

11 мая 1978 г. была произведена вторая пересадка по 1счного аллотрансплантата, Предлагаемым способом было выявлено паличис предсуществующих антител по спсцифичсскому свсчсншо базальных мембран капилляров донорекой почки. Однако лимфоцитотоксическая реакция была отрицательной. Функция второго почечного аллотрансплантата отсутствовала из-"-а сверхострой реакции отторжения.

Клиническая апробация, проведенная па 20 контрлатсральных донорских почках, показала, что предлагаемый способ поз4 воляет с высокой достоверност1по и в короткий срок констатировать у предполагаемых реципиентов наличие или отсутствие предсуществующих антител, способных вызвать реакцию сверхострого отторжения исследованных донорских почек:

--- у 15 реципиентов из 20 сыворотка крови Ilc содержала предсуществующих антител к антигенам донорских почек: отсутствовало специф ическое свечение в опытных криостатных срезах контрлатсральных донорских почек, и поелс пересадки у этих больных нс наблюдалось реакции свсрхострого отторжечия трансплантатов; — у трех реципиентов из 20 имелись предсуществующис антитела, выяьленные лимфоцитотоксичсской реакцией и предла гасмым люминесцентным иммуноморфологическим способом, реципиентам не была произведена пересадка почек от этих доноров; — у двух реципиентов из 20 лимфоцитотоксичсская рсакция была отрицательная, а предлагаемым люминесцентным иммуноморфологическим способом было установлено наличие предсуществующих антител» сыворотке крови к антигенам контрлатсральных донорских почек. У этих

30 двух реципиентов развилась реакция сверхострого отторжения почечных аллотрансплантатов.

Предлагаемый способ позволяет повысить точность прогнозирования развития реакции еверхострого отторжения при пересадке почечного аллотрансплантата.

Формула изобретения

Способ определения тканевой нссовместимости донора и реципиента при пересадке почки путем проведения реакции между тканями реципиента и донора с последующим микроскопированием, о т л и ч аю щи йс я тем, что, с целью повышения точности способа, сыворотку крови реципиента наносят на срезы почки донора, инкубируют их во влажной камере при

20- — 22 С в течение 25 — 30 мин, далее на препарат HBHopRT люминесцирующую сыворотку против глобулинов человека, проводят повторную инкубацию, затем обрабатывают ацетоном и при наличии специфического люминесцентного свечения определяют тканевую несовместимость донора и рсниписнта.

Источники информапии, принятые во внимание при экепертизе

1. Зарецкая Ю. М. и др. Иммунологичсскис аспекты аллотрансплантации. M., 1974, с. 156 — 194.