Способ приготовления гистологическогопрепарата

 

О П И С А Н И Е (»)834436

ИЗОВРЕТЕН ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалистических

Ресттублик (6I) Дополнительное к авт. свид-ву —. (22) Заявлено 27.04.79 (21) 2765015/28-13 с присоединением заявки №вЂ” (23) Приоритет— (-1) Кл з

Ci 01 N 1/28

А 61 В 5/00.Гесударстнеииый кнмитет

ho делам иэебретеиий

N 0TNPblTHH

Опубликовано 30.05.81. Бюллетень № 20

Дата опубликования описания 05.06.81 (53) УДК 615.475 (088.8) (72) Автор изобретения

И. А. Ефимов. с

F г ( (7!) Заявитель (54) СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ГИСТОЛОГИЧЕСКОГО

ПРЕПАРАТА

Изобретение относится к технике подготовки биологических препаратов, в частности, тканей и органов животных для гистохимического, иммунохимического и морфологического исследования под микроскопом и может быть использовано в медицине, биологии.

Известен способ приготовления гистологического препарата путем заключения биологического материала в заливочную среду ().

Однако известный способ не обеспечивает сохранности структуры.

Цель изобретения — обеспечение сохранности структуры.

Эта цель достигается тем, что приготавливают гистологический препарат путем заключения биологического материала в заливочную среду, при этом биологический мате,риал обрабатывают смесью состава, вес.%:

Полиэтиленгликоль тн.в 1000 — 1500 95 — 97

Целлоиди н 3 — 5 при температуре 37 в течение 22 — 24 ч, а затем смесью состава, вес.%:

Полиэтиленгликоль м.в 2000 — 4000 78 — 83

Целлоидин 7 — 10

Силикагель Л 5/40 мк 10 — 12 при комнатной температуре в течение 22—

24 ч.

Пример 1. Кусочки печени крысы размером 3 мм фиксируют в жидкости Карнуа в течение 2 ч. Фиксированный объект для обезвоживания переносят в 70%-ный этанол на 20 мин, после чего его переносят на 30 мин в 75%-ный пол иэтиленгли коль с м.в. 300, а затем на 2 ч в 100%-ный полиэтиленгликоль с тем же молекулярным весом. Обезвоживание проводят при комнатной температуре, причем 100%-ный полиэтиленгликоль в течение 2 ч сменяется дважды. Критерием обезвоживания служит опускание исследуемого объекта на дно стаканчика..

После обезвоживания объект переносят в пропитывающую среду следующего состава: полиэтиленгликоль с м.в. 1000 †9, целлои30 дин 3%-ный на 24 ч при 37 (в термостате), причем критерием пропитывания объекта является опускание его на дно сосуда.

Затем объект ополаскивают в заливочной . среде с м.в. 1500, опускают на дно часово834436

Составитель С. Малютина

Редактор Е. Лушникова Техред A. Бойкас Корректор О. Билак

Заказ 4002/62 Тираж 907 Подписное

ВНИИ ПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж вЂ” 35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП «Патент», г. Ужгород, ул. Проектная, 4 го стекла с заливочной средой следующего состава: полиэтиленгликоль с м.в. 1500 с концентрацией 78 /pq целлоидин 7о/р силикагель Л 5/40 мк 10о/о. Получают срезы

3 — 6 микрон.

При применении целлоидина с меньшей концентрацией, чем 7 /о, приводит к тому, что не образуется пленка на срезах, предохраняющая их от разрушения.

Пример 2. Условия те же, что и в примере 1, но пропитывание объекта проводят

10 средои следующего состава: полиэтиленгликоль с м.в. 1000 96 /p, целлоидин 4 /p.

Затем объект заливают средой следующего состава: полиэтиленгликоль с м.в. 2000 80о/о целлоидин 8 /p, силикагель Л 5/40 мк

11о/о. Использование полиэтиленгликоля с м.в. 2000 позволяет получать серийные срезы от 1 до 3 микрон при комнатной температуре (т — 201.

Пример 3. Условия те же, что и в примере 1, но пропитывание объекта проводят средой следующего состава: полиэтиленгликоль с м.в. 1000 97 /,, целлоидин 5%.

При дальнейшем увеличении концентрации целлоидина затрудняется пропитка объекта.

Затем объект заливают средой следующего состава: полиэтиленгликоль с м.в. 4000

83%, целлоидин 10о/p, силикагель

Л 5/40 мк 12 /о. Повышение концентрации целлоидина отрицательно действует на пол чение ровных серийных срезов

1 рименение заливочной среды, включающей полиэтиленгликоль с м.в. 4000, позволяет получать серийные срезы толщиной

1 — 3 микрона в жаркое время года при

1 25 — 28 С.

В отличие от ранее применявшихся способов расправления полученных срезов предлагаемым способом, нагревательные столиЗ5 ки не применяют. При хорошо наточенном микротомном ноже лента с серийными срезами получается достаточно ровной. Срезы переносят на предметное стекло. пипеткой у края ленть1 со срезами наносят 1 — 2 капли 40 буфера, гипертонического раствора или дистиллированной воды в зависимости от исследования. Предметное стекло со срезами держат под небольшим углом и капля раствора или дистиллированной воды сбегает по срезам, расправляя их. Эта процедура расправления срезов связана с растворением полиэтиленгликоля. Вокруг срезов остается тонкая прозрачная пленка целлоидина,-который практически не мешает исследованию объекта под микроскопом и сохраняет эти срезы. При необходимости эту пленку можно растворить смесью спирта с эфиром перед заключением препарата в бальзам.

Полученные срезы с биологическим объектом можно использовать как для морфологического, так и для цито-гистохимического исследования большой группы химических соединений: белков, нуклеиновых кислот, ферментов и др.

Процесс обработки биологического материала, расправление полученных срезов, вплоть до окраски гистологических срезов, исключает действие агрессивных веществ на исследователя.

Предложенный способ позволяет получать серийные срезы различной толщины (от 25 до 1 микрона) как с фиксированных, так и нефиксированных, с трудно и легко оежущихся объектов, а также получать гистологические препараты с практйчески не нарушенной структурой клеток и тканей.

Формула изобретекия

Способ приготовления гистологического препарата путем заключения биологического материала в заливочную среду, отличаюи4ийся тем, что, с целью обеспечения сохранности структуры, биологический материал обрабатывают смесью состава, вес.о/p.

Полиэтиленгликоль м.в. 1000 — 1500 95 — 97

Целлоидин 3 — 5 при 37 С в течение 22 — 24 ч, а затем смесью состава, вес. /о

Целлоиди н 7 — 10

Силикагель л 5/40 мк 10 — l2

Полиэтиленгликоль м.в. 2000 — 4000 Остальное при комнатной температуре в течение 22—

24 ч.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Лилли Р. Патогистологическая практика и практическая гистохимия. М., 1969, с. 65 — 81.