Способ диагностики дизентерии

 

ОП ИСАНИ Е

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ »>833211

Союз Советскнн

Соцналнстнческнн

Республнк (61) Дополнительное к авт. свид-ву— (22) Заявлено 21.11.79 (21) 2841599/28-13 с присоединением заявки №вЂ” (23) Приоритет— (5 l ) М. Кл э

А 61 В 10/00

Гееудеретеенный кемнтет

CCCI де делам изобретений и атнрытнй

Опубликовано 30.05.81. Бюллетень № 20

Дата опубликования описания 06.06.8! (53) УДК 616-07 (088.8) гмлзхРьЫ

Ю. А. Белая, В. Г. Петрухин, К. В. Бунин и О. Ф. Белщ;;:!1сз1Т1 0

1 пхничкя.,я (72) Авторы изобретения

Научно-иссле !овательский ордена Трудового Красного намну, институт эпидемиологии и микробиологии им. Почетного

Н. Ф. Гамалеи АМН СССР и Первый Московский ордена Ленина и ордена Трудового Красного Знамени медицинский институт им. !" 1. N!. Сеченова (7! ) Заявнтелн (54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ДИЗЕНТЕРИИ

Изобретение относится к медицине, а именно клинической иммунологии.

Известен способ диагностики дизентерии путем проведения реакции между исследуемой сывороткой крови и эритроцитарным диагностикумом с последующим определением титров антител (1) и (2) .

Однако известный способ не обеспечи. вает высокой точности.

Цель изобретения — повышение точности способа.

Указанная цель достигается. тем, что !и способ диагностики дизентерии осуществляют путем проведения реакции между исследуемой сывороткой крови и эритроцитарным диагностикумом с последующим определением титров антител, в качестве эритро-, цитарного диагностикума используют эритроциты, сенсибилизированные К-антигеном шигелл Зонне и при титре К-антител выше

1:160 диагносцируют дизентерию.

Поверхностный К-антиген Зонне получают путем препаративного ультрацентрифугирования из антигена Баувена указанных бактерий таким образом.

Убитые. и высушенные ацетоном бактерии Зонне (80 — 90% R-форм бактерий в no-

2 пуляции) экстрагируют 1 н. триъноруксусной кислотой по принятой методике. Антиген Баувена, разведенный в физиологическом растворе, подвергают ультра центрифугированию при 300000ф в течение 4 ч. г1адосадочную жидкость лиофильно высуши вают. Выход К-антигена составляет около . 10 /о. При иммуноэлектрофоретическом изучении К-антигена он образует одну линию преципитации с сывороткой против живых бактерий Зонне и не реагирует с О-антисывороткой (120 С, 2 ч) этих бактерий. Препарат представляет собой полисахарид (более 80%) с небольшим содержанием (в виде следов) липидов и протеина. Этим антигеном сенсибилизируют формалинизированные эритроциты и таким образом получают эритроцитарный диагностикум Зонне.

Для получения эритроцитарного диагностикума 1 мл 5%-ной взвеси формалинизированных обычным способом бараньих эритроцитов прибавляют к 9 мл забуференного физиологического раствора (ЗФР) с рН 6,4 и 1 мл раствора (0,1 мг/мл) К-антигена в 0,9%-ном растворе Nay!. Смесь инкубиру. ют 30 мин при 37 С в термостате, затем эритроциты трижды отмывают ЗФР с рН 7,2

833211

Составитель С. Малютина

Техред А. Бойкас Корректор Ю. Макаренко

Тираж 687 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

I!3035, Москва, Ж вЂ” 35, Раушская наб., д. 4/5

Филиал ППП «Патент», г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Редактор Л. Филь

Заказ 3843/2 при. центрифугировании. Осадок нагруженных эритроцитов ресуспендируют в 5 мл

ЗФР с рН 7,2, и эту смесь используют для постановки РНГА.

Пример. Больной А находится в стационаре с предположительным диагнозом дизентерия. Реакцию проводят следующи м образом.

На полистироловые пластины с углублениями (или плашки иэ аппарата Токачи) наносят 2 ряда по 1 — 2 капли серийных двукратных разведений сыворотки крови больного (титрование можно производить петлями в аппарате Токачи). Затем к каждому разведению сыворотки первого ряда добавляют по 1 — 2 капли эритроцитарного

К-диагностикума Зоние, второго ряда эритроцитарного (коммерческого) диагностикума Флекснера. Пластины осторожно встряхивают и помещают в термостат при

37 С на 1 ч, перемешивая через 30 мин.

Учет результатов. проводят через f — 2 ч после инкубации и через 18 ч выдержки пластин во влажной камере. Реакцию оценивают по 4-крестовой системе (+ + + +, + + +, + +, +, — ) . За титр антител принимают максимальное разведение испытуемой сыворотки, дающее четкую агглютинацию эритроцлтов на ++.

Контролями .служат несенсибилизированные формалинизированные эритроциты с

ЗФР рН 7,2; несенсибилизированные формалинизированные, эритроциты с Сывороткой крови больного в первых 3-4 разведениях; сенсибилизированные К-антигеном

Зонне формалинизированные эритроциты с ЗФР рН 7,2 и эритроциты, сенсибилизированные о-антигеиом Флекснера 2а, с ЗФР рН 7,2.

Испытание сыворотки крови больного А при использовании эритроцитарного К-диагностикума Зонне позволило в течение 3 ч выявить антитела к поверхностному К-антигену шигелл Зонне в титре 1:1280. При использовании коммерческого диагностикума

Зонне антитела в сыворотке крови данного больного выявлены в титре 1:80, к эритроцитарному диагностикуму Флекснера — в титре 1:40.

Предлагаемый. способ определения Кантител позволяет показать их высокий уровень в сыворотке крови больного при от-сутствии специфических антител к шигеллам

Флекснера;

Предлагаемый способ позволяет быстро и точно в течение 3 ч индентифицировать

° дизентерийную инфекцию и определить вид

15 возбудителя, вызвашего данное заболевание. Метод высокочувствителен, специфичен, информативен.

Формула изобретения

Способ диагностики дизентерии путем проведения реакции между исследуемой сывороткой крови и эритроцитарным диагностикумом с последующим определением титров антител, отличающийся тем, что, с целью повышения точности способа, в качестве х5 ЭрИтрОцИтарНОГО дИаГНОСтИКуМа ИСПОЛЬзуют эритроциты, сенсибилизированные

К-антигеном шигелл Зонне, и при титре Кантител выше 1:160 диагносцируют дизентерию. фО

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Методические указания по клинике, диагностике и лечению взрослых больных дизентерией. М., 1978.

2, Сумароков А. А. и др. Оценка диагно35 стической эффективности антигенных препаратов из шигелл Зонне. ЖМЭИ, 1977, М 11, с..79 — 86.